專利名稱：一種從銀杏葉中提取銀杏內(nèi)酯的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于天然有機(jī)化學(xué)領(lǐng)域，涉及一種銀杏內(nèi)酯的純化方法，特別是涉及一種利用微波逆流提取-大孔樹脂吸附技術(shù)富集純化銀杏葉中銀杏內(nèi)酯的方法。
背景技術(shù)：
銀杏葉長3 12cm，寬5 15cm，葉基楔形葉柄長2 8cm。該品多皺折，完整呈扇形，上緣呈現(xiàn)不規(guī)則的波狀彎曲，有的中間凹入，深者葉長達(dá)4/5厘米。具有二叉狀平行葉脈，細(xì)而密，光滑無毛，極其易從縱向撕裂。銀杏葉是一種具有很高藥用價值的植物，銀杏樹是中國古老的樹種之一，它是神奇的醫(yī)療之樹，2億5千多年前侏羅紀(jì)恐龍掌控地球時，銀杏是最繁盛的植物之一。地球生命歷經(jīng)千億年的變動，尤其是第四世紀(jì)冰川覆蓋之后，只有銀杏仍保持它最原始的面貌，在生物演化學(xué)史上被稱為“活化石”。其葉、果實(shí)、種子都有比較高的藥用價值，其藥理作用不斷被認(rèn)識，臨床應(yīng)用范圍逐步擴(kuò)大。銀杏內(nèi)酯目前被認(rèn)為是最有臨床應(yīng)用前景的天然PAF受體拮抗劑，其拮抗作用活性與化學(xué)結(jié)構(gòu)密切相關(guān)。當(dāng)內(nèi)酯結(jié)構(gòu)中R3為羥基或羥基數(shù)目增多時，對PAF的拮抗活性減弱，而當(dāng)R2為羥基且R3為H時，則活性顯著增強(qiáng)，其中以銀杏內(nèi)酯B對PAF產(chǎn)生的操拮抗作用最強(qiáng)，迄今對銀杏內(nèi)酯B的藥理作用研究也最為集中。目前國內(nèi)提取銀杏內(nèi)酯大多是運(yùn)用溶劑萃取，其萃取時間長，提取率相對低，而運(yùn)用微波逆流提取可以大大縮短提取時間，提高提取率，在運(yùn)用大孔樹脂吸附技術(shù)可以有效的分離銀杏葉中銀杏內(nèi)酯，使其含量達(dá)到50%以上。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在 于克服常規(guī)技術(shù)提取率相對較低、提取純度低等缺點(diǎn)，提供一種利用微波逆流提取大孔樹脂吸附技術(shù)富集純化銀杏葉中銀杏內(nèi)酯的方法。為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用的技術(shù)方案是一種利用微波逆流提取-大孔樹脂吸附技術(shù)富集純化銀杏葉中銀杏內(nèi)酯的方法，其步驟如下(I)將干銀杏葉粉碎后，加入乙醇混合，進(jìn)行微波逆流提取，正向進(jìn)料、反向進(jìn)水，物料與水的流動為逆向連續(xù)動態(tài)流動。微波功率在600 800W，萃取時間為80min IOOmin ;萃取溫度為60 80°C，萃取三次，過濾，合并濾液，得到提取液；(2)將經(jīng)步驟(I)處理的銀杏葉提取液過濾，得銀杏過濾液并減壓濃縮得銀杏內(nèi)酷初提物；(3)將所獲初提物用純水?dāng)嚢杈鶆?，離心分離，靜置，抽濾，得銀杏內(nèi)酯粗提物；(4)將所得銀杏內(nèi)酯粗提物用大孔吸附樹脂進(jìn)行吸附；(5)用不同濃度的乙醇對大孔吸附樹脂進(jìn)行洗脫，用薄層色譜法跟蹤檢測，收集銀杏內(nèi)酯各階段洗脫液；(6)將銀杏內(nèi)酯各階段洗脫液上200 300目聚酰胺柱層析，并以乙醇、乙醚以不同體積比例進(jìn)行洗脫，薄層色譜法跟蹤檢測，收集銀杏內(nèi)酯各階段洗脫液；(7)將所收集的銀杏內(nèi)酯洗脫液進(jìn)行真空濃縮，噴霧干燥，得粉狀固體，并粉碎過篩，得銀杏內(nèi)酯，其含量在50%以上。所述的步驟(I)中，干銀杏葉粉碎后過60 80目篩在進(jìn)行微波逆流提取。所述的步驟(I)中，加入乙醇的體積為銀杏葉粉碎體積的10 12倍。所述的步驟(I)中，加入乙醇的濃度為70% 90%。在所述的步驟(3)中，加入純水的量按體積計算為初取物的8 10倍。所述的步驟(4)中所用的大孔吸附樹脂為天津南開大學(xué)所產(chǎn)生的D101、DA201、724、HP-20型樹脂中的一種，吸附為靜態(tài)吸附或動態(tài)吸附。所述的步驟(5)中所述的洗脫液為10 90%的乙醇進(jìn)行洗脫。所述的步驟(6)中所 采取的乙醇與乙醚的體積為I 5 I。所述的步驟(7)中粉碎過篩的目數(shù)為80目。本發(fā)明采用微波逆流提取，具有加熱均勻、過程易于控制，無需干燥等預(yù)處理，簡化了工藝，減少了投資，大大提高了萃取效率；選用大孔樹脂吸附技術(shù)和柱層析分離純化銀杏內(nèi)酯，對銀杏內(nèi)酯的吸附選擇性良好，吸附快解析也快，吸附容量較大，提取方便快捷，分離效果明顯，提取純度高，可以得到含量50%以上的銀杏內(nèi)酯終產(chǎn)品，克服了常規(guī)提取率相對較低、提取純度低的缺點(diǎn)。
具體實(shí)施例方式實(shí)施案例1:一種利用微波逆流提取-大孔樹脂吸附技術(shù)富集純化銀杏葉中銀杏內(nèi)酯的方法，其步驟如下(I)將200g干銀杏葉粉碎后，加入濃度為70%的乙醇溶液混合，料液比為1: 10，進(jìn)行微波逆流提取，正向進(jìn)料、反向進(jìn)水，物料與水的流動為逆向連續(xù)動態(tài)流動。微波功率在600W，萃取時間為80min ;萃取溫度為60°C，萃取三次，過濾，合并濾液，得到提取液；(2)將經(jīng)步驟(I)處理的銀杏葉提取液過濾，得銀杏過濾液并減壓濃縮，回收乙醇，得銀杏內(nèi)酯初提物；(3)將所獲初提物加入8倍的純水?dāng)嚢杈鶆?，離心分離，靜置，抽濾，得銀杏內(nèi)酯粗提物；(4)將所得銀杏內(nèi)酯粗提物用DlOl型大孔吸附樹脂進(jìn)行吸附；(5)用 10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%不同濃度的乙醇對大孔吸附樹脂進(jìn)行洗脫，用薄層色譜法跟蹤檢測，收集銀杏內(nèi)酯各階段洗脫液；(6)將銀杏內(nèi)酯各階段洗脫液上200 300目聚酰胺柱層析，并以乙醇、乙醚以1: 1、2 : 1、3 1、4 1、5 I不同體積比例進(jìn)行洗脫，薄層色譜法跟蹤檢測，收集銀杏內(nèi)酯各階段洗脫液；(7)將所收集的銀杏內(nèi)酯洗脫液進(jìn)行真空濃縮，噴霧干燥，得粉狀固體，并粉碎過80目篩，得銀杏內(nèi)酯，其含量在51.3%。實(shí)施案例2 :—種利用微波逆流提取-大孔樹脂吸附技術(shù)富集純化跟杏葉中銀杏內(nèi)酯的方法，其步驟如下(I)將200g干銀杏葉粉碎后，加入濃度為80%的乙醇溶液混合，料液比為1: 11，進(jìn)行微波逆流提取，正向進(jìn)料、反向進(jìn)水，物料與水的流動為逆向連續(xù)動態(tài)流動。微波功率在700W，萃取時間為90min ;萃取溫度為70°C，萃取三次，過濾，合并濾液，得到提取液；(2)將經(jīng)步驟(I)處理的銀杏葉提取液過濾，得銀杏過濾液并減壓濃縮，回收乙醇，得銀杏內(nèi)酯初提物；(3)將所獲初提物加入9倍的純水?dāng)嚢杈鶆颍x心分離，靜置，抽濾，得銀杏內(nèi)酯粗提物；(4)將所得銀杏內(nèi)酯粗提物用DA201型大孔吸附樹脂進(jìn)行吸附；(5)用 10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%不同濃度的乙醇對大孔吸附樹脂進(jìn)行洗脫，用薄層色譜法跟蹤檢測，收集銀杏內(nèi)酯各階段洗脫液；(6)將銀杏內(nèi)酯各階段洗脫液上200 300目聚酰胺柱層析，并以乙醇、乙醚以1: 1、2 : 1、3 1、4 1、5 I不同體積比例進(jìn)行洗脫，薄層色譜法跟蹤檢測，收集銀杏內(nèi)酯各階段洗脫液； (7)將所收集的銀杏內(nèi)酯洗脫液進(jìn)行真空濃縮，噴霧干燥，得粉狀固體，并粉碎過80目篩，得銀杏內(nèi)酯，其含量在52.2%。實(shí)施案例3 :—種利用微波逆流提取-大孔樹脂吸附技術(shù)富集純化銀杏葉中銀杏內(nèi)酯的方法，其步驟如下(I)將200g干銀杏葉粉碎后，加入濃度為90%的乙醇溶液混合，料液比為1: 12，進(jìn)行微波逆流提取，正向進(jìn)料、反向進(jìn)水，物料與水的流動為逆向連續(xù)動態(tài)流動。微波功率在800W，萃取時間為IOOmin ;萃取溫度為80°C，萃取三次，過濾，合并濾液，得到提取液；(2)將經(jīng)步驟(I)處理的銀杏葉提取液過濾，得銀杏過濾液并減壓濃縮，回收乙醇，得銀杏內(nèi)酯初提物；(3)將所獲初提物加入10倍的純水?dāng)嚢杈鶆?，離心分離，靜置，抽濾，得銀杏內(nèi)酯粗提物；(4)將所得銀杏內(nèi)酯粗提物用724型大孔吸附樹脂進(jìn)行吸附；(5)用 10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%不同濃度的乙醇對大孔吸附樹酯進(jìn)行洗脫，用薄層色譜法跟蹤檢測，收集銀杏內(nèi)酯各階段洗脫液；(6)將銀杏內(nèi)酯各階段洗脫液上200 300目聚酰胺柱層析，并以乙醇、乙醚以1: 1、2 : 1、3 1、4 1、5 I不同體積比例進(jìn)行洗脫，薄層色譜法跟蹤檢測，收集銀杏內(nèi)酯各階段洗脫液；(7)將所收集的銀杏內(nèi)酯洗脫液進(jìn)行真空濃縮，噴霧干燥，得粉狀固體，并粉碎過80目篩，得銀杏內(nèi)酯，其含量在53.5%。
權(quán)利要求
1.一種利用微波逆流提取-大孔樹脂吸附技術(shù)富集純化銀杏葉中銀杏內(nèi)酯的方法，其步驟如下 (1)將干銀杏葉粉碎后，加入乙醇混合，進(jìn)行微波逆流提取，正向進(jìn)料、反向進(jìn)水，物料與水的流動為逆向連續(xù)動態(tài)流動。微波功率在600 800W，萃取時間為80min IOOmin ；萃取溫度為60 80°C，萃取三次，過濾，合并濾液，得到提取液； (2)將經(jīng)步驟(I)處理的銀杏葉提取液過濾，得銀杏過濾液并減壓濃縮得銀杏內(nèi)酯初提物； (3)將所獲初提物用純水?dāng)嚢杈鶆?，離心分離，靜置，抽濾，得銀杏內(nèi)酯粗提物； (4)將所得銀杏內(nèi)酯粗提物用大孔吸附樹脂進(jìn)行吸附； (5)用不同濃度的乙醇對大孔吸附樹脂進(jìn)行洗脫，用薄層色譜法跟蹤檢測，收集銀杏內(nèi)酯各階段洗脫液； (6)將銀杏內(nèi)酯各階段洗脫液上200 300目聚酰胺柱層析，并以乙醇、乙醚以不同體積比例進(jìn)行洗脫，薄層色譜法跟蹤檢測，收集銀杏內(nèi)酯各階段洗脫液； (7)將所收集的銀杏內(nèi)酯洗脫液進(jìn)行真空濃縮，噴霧干燥，得粉狀固體，并粉碎過篩，得銀杏內(nèi)酯，其含量在50 %以上。
所述的步驟(4)中所用的大孔吸附樹脂為天津南開大學(xué)所產(chǎn)生的D101、DA201、724、HP-20型樹脂中的一種，吸附為靜態(tài)吸附或動態(tài)吸附。
所述的步驟(5)中所述的洗脫液為10 90%的乙醇進(jìn)行洗脫。
所述的步驟(7)中粉碎過篩的目數(shù)為80目。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的利用微波逆流提取-大孔樹脂吸附技術(shù)富集純化銀杏葉中銀杏內(nèi)酯的方法，其特質(zhì)是所述的步驟(I)中，銀杏葉粉碎后過60 80目篩。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的利用微波逆流提取-大孔樹脂吸附技術(shù)富集純化銀杏葉中銀杏內(nèi)酯的方法，其特征是所述的步驟(I)中，加入乙醇的體積為銀杏葉粉碎體積的10 12倍。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的利用微波逆流提取-大孔樹脂吸附技術(shù)富集純化銀杏葉中銀杏內(nèi)酯的方法，其特征是；所述的步驟(I)中，加入乙醇的濃度為70% 90%。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的利用微波逆流提取-大孔樹脂吸附技術(shù)富集純化銀杏葉中銀杏內(nèi)酯的方法，其特征是在所述的步驟(3)中，加入純水的量按體積計算為初取物的8 10倍。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的利用微波逆流提取-大孔樹脂吸附技術(shù)富集純化銀杏葉中銀杏內(nèi)酯的方法，其特征是所述的步驟(6)中，所采用乙醇、乙醚的體積比為I 5 I。
全文摘要
本發(fā)明屬于天然有機(jī)化學(xué)領(lǐng)域，采用微波逆流提取技術(shù)，無需干燥等預(yù)處理，具有加熱均勻、過程易于控制，簡化了工藝，減少了投資，大大提高了萃取效率；利用大孔樹脂吸附技術(shù)分離純化銀杏內(nèi)酯，對銀杏內(nèi)酯的吸附選擇性良好，吸附快、解析也快，吸附容量較大，提取方便快捷，生產(chǎn)成本低廉，分離效果明顯，提取純度高，得到含量50％以上的銀杏內(nèi)酯終產(chǎn)品，克服了常規(guī)提取率相對較低、提取純度低的缺點(diǎn)。
文檔編號C07D493/22GK103044441SQ20121059560
公開日2013年4月17日 申請日期2012年12月13日 優(yōu)先權(quán)日2012年12月13日
發(fā)明者祁佩時, 焦龍, 姚德坤, 萬莉, 張亞紅, 姚德利 申請人:大興安嶺林格貝有機(jī)食品有限責(zé)任公司