專利名稱：：囊性纖維化跨膜電導(dǎo)調(diào)節(jié)劑的調(diào)控劑的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及嚢性纖維化跨膜電導(dǎo)調(diào)節(jié)劑(CFTR)的調(diào)控劑、其組合物和有關(guān)方法。本發(fā)明也涉及使用這類調(diào)控劑治療CFTR介導(dǎo)的疾病的方法。
背景技術(shù)：
：ABC轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白是一族膜轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白，調(diào)節(jié)多種藥理成分、潛在毒性藥物和異生素以及陰離子的轉(zhuǎn)運(yùn)。ABC轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白是同源性膜蛋白，它們結(jié)合和利用細(xì)胞三磷酸腺苷(ATP)供它們的特異性活性。這些轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白中有些被發(fā)現(xiàn)是多藥耐受性蛋白(象MDR1-P糖蛋白或多藥耐受性蛋白MRP1)，為惡性癌細(xì)胞防御化學(xué)治療劑。迄今已經(jīng)鑒別了48種ABC轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白，基于它們的序列同一性和功能分為7個(gè)家族。ABC轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白在體內(nèi)起多種重要的生理作用，并且提供對(duì)有害環(huán)境化合物的防御，因?yàn)槿绱?，它們代表重要的潛在藥物靶，用于治療與該轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白缺陷有關(guān)的疾病，防止藥物從靶細(xì)胞中轉(zhuǎn)運(yùn)出去，并干預(yù)其他其中ABC轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白活性的調(diào)控可能是有益的疾病。普遍與疾病有關(guān)的一族ABC轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白的成員是cAMP/ATP-介導(dǎo)的陰離子通道CFTR。CFTP在多種細(xì)胞類型中被表達(dá)，包括吸收性和分泌性上皮細(xì)胞，在那里它調(diào)節(jié)陰離子的跨膜流動(dòng)以及其他離子通道和蛋白質(zhì)的活性。在上皮細(xì)胞中，CFTP的正常功能發(fā)揮是維持電解質(zhì)在體內(nèi)各處轉(zhuǎn)運(yùn)的關(guān)鍵，包括呼吸和消化組織。CFTP由大約1480個(gè)氨基酸組成，它們編碼由跨膜結(jié)構(gòu)域的串聯(lián)重復(fù)要素所構(gòu)成的蛋白質(zhì)，各自含有六個(gè)跨膜螺旋和一個(gè)核苷酸結(jié)合結(jié)構(gòu)域。兩個(gè)跨膜結(jié)構(gòu)域通過大型極性調(diào)節(jié)性(R)-結(jié)構(gòu)域連接，具有多個(gè)調(diào)節(jié)通道活性和細(xì)胞運(yùn)輸?shù)牧姿峄稽c(diǎn)。編碼CFTR的基因已被鑒別和測(cè)序(參見Gregory,R.J.等人(1990)Nature347:382-386;Rich,D.P.等人(1990)Nature347:358-362;Riordan，J.R.等人(1989)Science245:1066-1073)。這種基因的缺陷引起CFTR突變，導(dǎo)致囊性纖維化，這是人類最常見的致命性遺傳疾病。嚢性纖維化影響大約兩千五百分之一的美國(guó)新生兒。在全部美國(guó)人口中，多達(dá)一千萬人攜帶有缺陷基因的單一副本，沒有明顯的疾病效應(yīng)。相反，帶有兩個(gè)嚢性纖維化相關(guān)基因副本的個(gè)體患有嚢性纖維化的衰弱與致命性效應(yīng)，包括慢性肺疾病。在嚢性纖維化患者中，在呼吸道上皮中被內(nèi)源性表達(dá)的CFTR的突變引起頂端陰離子分泌減少，導(dǎo)致離子和體液轉(zhuǎn)運(yùn)的失衡。所致陰離子轉(zhuǎn)運(yùn)疾病對(duì)肺中粘液蓄積增強(qiáng)和伴隨微生物感染有貢獻(xiàn)，最終導(dǎo)致嚢性纖維化患者死亡。除了呼吸疾病以外，嚢性纖維化患者通?；加形改c問題和胰腺機(jī)能不全，如果不加治療則導(dǎo)致死亡。另外，大多數(shù)嚢性纖維化男性是不育的，嚢性纖維化女性的生育力降低。與兩個(gè)嚢性纖維化相關(guān)基因副本的嚴(yán)重效應(yīng)相反，帶有單一嚢性纖維化相關(guān)基因副本的個(gè)體表現(xiàn)出對(duì)霍亂和腹瀉所致脫水的抗性增加一_這也許解釋了人群內(nèi)相對(duì)高頻率的嚢性纖維化基因的原因。嚢性纖維化染色體CFTR基因的序列分析已經(jīng)揭示了多種致病性突變(Cutting,G.R.等人(1990)Nature346:366-369;Dean，M.等人(1990)Cell61:863:870;和Kerem，B-S.等人(1989)Science245:1073-1080;Kerem，B-S等人(1990)Proc.Natl.Acad.Sci.USA87:8447-8451)。迄今已經(jīng)鑒別了IOOO種以上致病性嚢性纖維化基因突變(http:〃www.genet,sickkids.on.ca/cftr/)。最常見的突變是CFTR氨基酸序列508位苯丙氨酸的缺失，普遍被稱為AF508-CFTR。這種突變發(fā)生在大約70%的嚢性纖維化病例中，與嚴(yán)重的疾病有關(guān)。△F508-CFTR中508殘基的缺失阻止初生蛋白正確地折疊。這導(dǎo)致該突變蛋白不能退出內(nèi)質(zhì)網(wǎng)("ER")并運(yùn)輸至質(zhì)膜。其結(jié)果是，膜中通道數(shù)量遠(yuǎn)遠(yuǎn)少于表達(dá)野生型CFTR的細(xì)胞中所觀察到的。除了運(yùn)輸受損以外，突變還導(dǎo)致有缺陷的通道門控。總之，膜中通道數(shù)量減少和有缺陷的門控引起跨越上皮的陰離子轉(zhuǎn)運(yùn)減少，引起有缺陷的離子和體液轉(zhuǎn)運(yùn)(Quinton，P.M.(1990)，F(xiàn)ASEBJ.4:2709-2727)。不過，研究已經(jīng)顯示，膜中AF508-CFTR的數(shù)量減少是功能性的，盡管少于野生型CFTR(Dalemans等人(1991)，NatureLond.354:526-528;Denning等人，見上；Pasyk和Foskett(1995)，J,Cell.Biochem.270:12347-50)。除了AF508-CFTR以外，其他導(dǎo)致有缺陷的運(yùn)輸、合成和/或通道門控的致病性CFTR突變可能被增量或減量調(diào)節(jié)，以改變陰離子分泌和修改疾病進(jìn)展和/或嚴(yán)重性。盡管CFTR除了陰離子以外還轉(zhuǎn)運(yùn)多種分子，不過顯然這種角色(陰離子的轉(zhuǎn)運(yùn))代表了跨越上皮轉(zhuǎn)運(yùn)離子和水的重要機(jī)理中的一種要素。其他要素包括上皮Na+通道、ENaC、Na72Cl7K+共同轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白、Na+-K+-ATP酶泵和基底外側(cè)膜r通道，它們負(fù)責(zé)攝取氯化物進(jìn)入細(xì)胞。這些要素一起工作，經(jīng)由它們?cè)诩?xì)胞內(nèi)的選擇性表達(dá)和定位實(shí)現(xiàn)跨越上皮的定向轉(zhuǎn)運(yùn)。借助存在于頂端膜上的ENaC與CFTR和在細(xì)胞基底外側(cè)表面上表達(dá)的Na+-K+-ATP酶泵與Cr通道的協(xié)調(diào)活性，發(fā)生氯化物的吸收。氯化物從腔側(cè)的次級(jí)主動(dòng)轉(zhuǎn)運(yùn)引起細(xì)胞內(nèi)氯化物的蓄積，然后可以被動(dòng)地經(jīng)由C匸通道離開細(xì)胞，導(dǎo)致向量轉(zhuǎn)運(yùn)。Na72Cl—/K+共同轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白、Na+-K+-ATP酶泵和基底外側(cè)膜K+通道在基底外側(cè)表面上的排列和腔側(cè)上的CFTR協(xié)調(diào)氯化物經(jīng)由腔側(cè)上CFTR的分泌。因?yàn)樗赡軓牟恢鲃?dòng)轉(zhuǎn)運(yùn)自己，它跨越上皮的流動(dòng)依賴于由鈉和氯的大量流動(dòng)所生成的微小跨上皮滲透梯度。除了嚢性纖維化以外，CFTR活性的調(diào)控也可以有益于其他不直接由CFTR突變所導(dǎo)致的疾病，例如分泌性疾病和其他由CFTR介導(dǎo)的蛋白質(zhì)折疊疾病。這些疾病包括但不限于慢性阻塞性肺疾病(COPD)、干眼病和斯耶格倫氏綜合征。COPD是以氣流受限為特征的，它是進(jìn)行性的，不是完全可逆的。氣流受限是由于粘液分泌過多、肺氣腫和細(xì)支氣管炎。突變或野生型CFTR的活化劑提供COPD常見的粘液分泌過多和粘液纖毛廓清率減低的潛在治療。具體而言，增加跨越CFTR的陰離子分泌可以有利于體液轉(zhuǎn)運(yùn)進(jìn)入氣道表面液體，以水化粘液，優(yōu)化纖毛周圍的體液粘度。這將引起粘液纖毛廓清率增強(qiáng)和與COPD有關(guān)的癥狀減少。干眼病是以淚水產(chǎn)生降低和異常淚膜脂質(zhì)、蛋白質(zhì)與粘蛋白行為為特征的。干眼有很多原因，其中一些包括年齡、Lasik眼手術(shù)、關(guān)節(jié)炎、藥物治療、化學(xué)/熱灼傷、變態(tài)反應(yīng)和疾病，例如嚢性纖維化和斯耶格倫氏綜合征。增加經(jīng)由CFTR的陰離子分泌將增強(qiáng)體液從角膜內(nèi)皮細(xì)胞和眼周圍分泌腺體的轉(zhuǎn)運(yùn)，以增加角膜的水化作用。這將有助于緩解與干眼病有關(guān)的癥狀。斯耶格倫氏綜合征是一種自身免疫疾病，其中免疫系統(tǒng)攻擊體內(nèi)各處產(chǎn)生水分的腺體，包括眼、口、皮膚、呼吸組織、肝、陰道和腸。癥狀包括眼、口和陰道干燥以及肺疾病。該疾病也與類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、系統(tǒng)性狼瘡、系統(tǒng)性硬化和多肌炎/皮膚肌炎有關(guān)。有缺陷的蛋白質(zhì)運(yùn)輸據(jù)信會(huì)導(dǎo)致該疾病，治療選擇是有限的。CFTR活性調(diào)控劑可以水化各種受疾病影響的器官，幫助改善有關(guān)癥狀。正如上文所討論的，據(jù)信AF508-CFTR中508殘基的缺失阻止初生蛋白正確地折疊，導(dǎo)致這種突變蛋白不能退出ER和運(yùn)輸至質(zhì)膜。其結(jié)果是，存在于質(zhì)膜的成熟蛋白數(shù)量不足，上皮組織內(nèi)氯化物的轉(zhuǎn)運(yùn)顯著減少。事實(shí)上，這種ABC轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白被ER機(jī)構(gòu)有缺陷的ER加工的細(xì)胞現(xiàn)象已被顯示不僅是嚢性纖維化疾病的基礎(chǔ)，而且是廣泛的其他孤立性與遺傳性疾病的基礎(chǔ)。ER機(jī)構(gòu)可能發(fā)生故障的兩種方式要么是與蛋白質(zhì)的ER輸出的偶聯(lián)喪失，引起降解，要么是這些有缺陷/誤折疊的蛋白質(zhì)的ER蓄積[AridorM，等人，NatureMed.，i(7)，pp745-751(1999);Shastry,B.S，，等人，Neurochem.International:化pp1-7(2003);Rutishauser，J.，等人，SwissMedWkly，巡pp211-222(2002);Morello，JP等人，TIPS,H，pp.466-469(2000);BrossP.，等人，HumanMut.，H，pp.186-198(1999)〗。與前一類ER故障有關(guān)的疾病有囊性纖維化(由誤折疊的AFS08-CFTR引起，正如上文所討論的)、遺傳性肺氣腫(由al-抗胰蛋白酶非Piz變體引起)、遺傳性血色素沉著、凝血-纖維蛋白溶解缺陷(例如C蛋白缺陷)、1型遺傳性血管水腫、脂質(zhì)加工缺陷(例如家族性高膽固醇血)、l型乳糜微粒血、P-脂蛋白血、溶酶體貯存疾病(例如I-細(xì)胞疾病/假性赫爾勒氏病)、粘多糖病(由溶酶體加工酶引起)、桑德霍夫病/泰-薩二氏病(由P-己糖胺酶引起)、克-納二氏病II型(由UDP-葡糖醛酸基-唾液酸(sialyc)-轉(zhuǎn)移酶引起)、多內(nèi)分泌病/高胰鳥素血、糖尿病(由胰鳥素受體引起)、拉倫侏儒(由生長(zhǎng)激素受體引起)、髓過氧化物酶缺陷、原發(fā)性甲狀旁腺機(jī)能減退(由前促甲狀旁腺激素引起)、黑素瘤(由酪氨酸酶引起)。與后一類ER故障有關(guān)的疾病有聚糖病(glycanosis)CDG1型、遺傳性肺氣胂(由ctl-抗胰蛋白酶PiZ變體引起)、先天性甲狀腺機(jī)能亢進(jìn)、成骨不全(由I、II、IV型前膠原引起)、遺傳性低纖維蛋白原血(由纖維蛋白原引起)、ACT缺陷(由al-抗凝乳蛋白酶引起)、尿崩癥(DI)、后葉激素運(yùn)載蛋白性DI(由后葉加壓素/V2-受體引起)、腎原性DI(由水通道蛋白II引起)、夏-馬-圖三氏綜合征(由外周髓磷脂蛋白22引起)、佩-梅二氏病、神經(jīng)變性疾病(例如阿爾茨海默氏病(由PAPP和早老蛋白引起)、帕金森氏病、肌萎縮性側(cè)索硬化、進(jìn)行性核上性麻痹、皮克氏病)、若干聚谷氨酰胺神經(jīng)病學(xué)障礙(例如亨廷頓氏病、I型脊髓小腦性共濟(jì)失調(diào)、脊髄與延髄肌肉萎縮、齒狀紅核蒼白球丘腦下核萎縮和肌強(qiáng)直性營(yíng)養(yǎng)不良)以及海綿狀腦病(例如遺傳性克-雅二氏病(由朊病毒蛋白加工缺陷引起)、法布里氏病(由溶酶體a-半乳糖苷酶A引起)、斯-施二氏綜合征(由Prp加工缺陷引起))、慢性阻塞性肺疾病(C0PD)、干眼病和斯耶格倫氏綜合征。除了CFTR活性的增量調(diào)節(jié)以外，減少CFTR分泌陰離子也可以有益于分泌性腹瀉的治療，其中作為促分泌性活化的氯化物轉(zhuǎn)運(yùn)的結(jié)果，上皮水轉(zhuǎn)運(yùn)戲劇性地增加。該機(jī)理牽涉cAMP的升高和CFTR的刺激。盡管腹瀉有大量原因，不過由過量氯化物轉(zhuǎn)運(yùn)所致腹瀉性疾病的主要后果是共同的，包括脫水、酸中毒、生長(zhǎng)減退和死亡。急性與慢性腹瀉在世界很多地區(qū)代表了主要的醫(yī)學(xué)問題。腹瀉在不到五歲的兒童中既是營(yíng)養(yǎng)不良的顯著因素，又是死亡的主導(dǎo)原因(5，000，000例死亡/年)。分泌性腹瀉也是獲得性免疫缺陷綜合征(AIDS)和慢性炎性腸疾病(IBD)患者中的危險(xiǎn)病癥。每年從工業(yè)化國(guó)家到發(fā)展中國(guó)家旅行的人中有一千六百萬人患上腹瀉，腹瀉病例的嚴(yán)重性和數(shù)量因旅行的國(guó)家和地區(qū)而異。牲畜和寵物、例如牛、豬、馬、綿羊、山羊、貓和狗的腹瀉也稱為家畜腹瀉病，是這些動(dòng)物死亡的主要原因。腹瀉可以由任何重大轉(zhuǎn)變所致，例如斷奶或身體運(yùn)動(dòng)，以及響應(yīng)于多種細(xì)菌或病毒感染，一般發(fā)生在動(dòng)物壽命的前幾個(gè)小時(shí)內(nèi)。最常見的致腹瀉性細(xì)菌是腸毒原性大腸桿菌(ETEC)，具有K99毛發(fā)抗原。腹瀉的常見病毒原因包括輪狀病毒和冠形病毒。其他感染性成分包括隱孢子蟲、蘭伯氏賈第蟲和沙門氏菌等等。輪狀病毒感染的癥狀包括水樣便的排泄、脫水和虛弱。冠形病毒導(dǎo)致更嚴(yán)重的新生動(dòng)物疾病，具有比輪狀病毒感染更高的死亡率。不過經(jīng)常是年幼動(dòng)物可能同時(shí)感染有一種以上病毒或者病毒與細(xì)菌微生物的組合。這戲劇性地增加疾病的嚴(yán)重性。因此，需要CFTR活性的調(diào)控劑及其組合物，它們能夠用于在哺乳動(dòng)物細(xì)胞膜中調(diào)控CFTR的活性。需要使用這類CFTR活性調(diào)控劑治療CFTR-介導(dǎo)疾病的方法。需要在來自體內(nèi)的哺乳動(dòng)物細(xì)胞膜中調(diào)控CFTR活性的方法。
發(fā)明內(nèi)容現(xiàn)已發(fā)現(xiàn)，本發(fā)明化合物及其藥學(xué)上可接受的組合物可用作CFTR活性的調(diào)控劑。這些化合物具有式I或式II:<formula>formulaseeoriginaldocumentpage19</formula>或其藥學(xué)上可接受的鹽，其中RX、環(huán)A、RAA、RBB、Z和q如下所述。這些化合物和藥學(xué)上可接受的組合物可用于治療多種疾病、疾患或病癥或者減輕其嚴(yán)重性，包括但不限于嚢性纖維化、遺傳性肺氣腫、遺傳性血色素沉著、凝血-纖維蛋白溶解缺陷(例如C蛋白缺陷)、1型遺傳性血管水腫、脂質(zhì)加工缺陷(例如家族性高膽固醇血)、1型乳糜微粒血、p-脂蛋白血、溶酶體貯存疾病(例如I-細(xì)胞疾病/假性赫爾勒氏病)、粘多糖病、桑德霍夫病/泰-薩二氏病、克-納二氏病II型、多內(nèi)分泌病/高胰島素血、糖尿病、拉倫侏儒、髄過氧化物酶缺陷、原發(fā)性曱狀旁腺機(jī)能減退、黑素瘤、聚糖病CDG1型、遺傳性肺氣腫、先天性曱狀腺機(jī)能尤進(jìn)、成骨不全、遺傳性低纖維蛋白原血、ACT缺陷、尿崩癥(DI)、后葉激素運(yùn)載蛋白性DI、腎原性DI、夏-馬-圖三氏綜合征、佩-梅二氏病、神經(jīng)變性疾病(例如阿爾茨海默氏病、帕金森氏病、肌萎縮性側(cè)索硬化、進(jìn)行性核上性麻痹、皮克氏病)、若干聚谷氨酰胺神經(jīng)病學(xué)障礙(例如亨廷頓氏病、I型脊髓小腦性共濟(jì)失調(diào)、脊髄與延髓肌肉萎縮、齒狀紅核蒼白球丘腦下核萎縮和肌強(qiáng)直性營(yíng)養(yǎng)不良)以及海綿狀腦病(例如遺傳性克-雅二氏病、法布里氏病和斯-施二氏綜合征)、C0PD、干眼病和斯耶格倫氏病。發(fā)明詳細(xì)內(nèi)容/.本Jt'坊必合錄W—疾說坊本發(fā)明提供式I或式II化合物:或其藥學(xué)上可接受的鹽，其中每個(gè)RX獨(dú)立地是氬、囟代基、CF3、Cl-C4烷基或-0Cl-C4烷基;其條件是兩個(gè)RX不同時(shí)是氫；或者兩個(gè)RX—起構(gòu)成環(huán)(a):<formula>formulaseeoriginaldocumentpage21</formula>X是CH2、CF2、CH廣CH2或CF2-CF2;環(huán)A是3-7元單環(huán)的環(huán)烷基環(huán)；R"和RBB與氮原子一起構(gòu)成被OR'取代的吡咯烷基環(huán)；R，是氫或者Cl-C6脂族基，其中所述脂族基的至多兩個(gè)碳單元選擇性地和獨(dú)立地被-CO-、-CS-、-COCO-、-CONR-、-CONRNR-、-CO廣、-0C0-、-NRCO廣、-O-、-NRCONR-、-OCONR-、-NRNR，-NRNRCO-、-NRCO-、-S-、-SO，-SO廣、-NR-、-S02NR-，NRS0廣或-NRS02NR-代替；R是氫或者Cl-C6脂族基；Z是吸電子取代基；而q是0-3。本文應(yīng)當(dāng)適用下列定義，另有說明除外。本文所用的術(shù)語"CFTR"表示嚢性纖維化跨膜電導(dǎo)調(diào)節(jié)劑或具有其調(diào)節(jié)劑活性的突變體，包括但不限于AF508-CFTR和G551D-CFTR(例如參見http:〃麗.genet,sickkids.on.ca/cftr/關(guān)于CFTR突變)。本文所用的術(shù)語"調(diào)控"表示以可測(cè)量的量增加或降低。本文所用的術(shù)語"糾正"表示增加細(xì)胞膜中CFTR的數(shù)量。本文所用的術(shù)語"強(qiáng)化劑"表示增加細(xì)胞膜中CFTR門控活性的化合物。本文所用的術(shù)語"吸電子取代基"表示相對(duì)于氫而言是電負(fù)性的原子或基團(tuán)。例如參見"AdvancedOrganicChemistry:Reactions,Mechanisms,andStructure,"JerryMarch,4thEd.，JohnWiley&Sons(1992)，例如，pp.14-16，18-19等。示范性的這類取代基包括卣代基、CN、C00H、CF3等。出于本發(fā)明的目的，化學(xué)元素按照PeriodicTableoftheElements,CASversion,HandbookofChemistryandPhysics,75thEd鑒定。另外，有機(jī)化學(xué)的一般原理參見"OrganicChemistry",ThomasSorrell，UniversityScienceBooks,Sausalito:1999，和"March'sAdvancedOrganicChemistry",5thEd.，Ed.:Smith,M.B.和March,J.，JohnWiley&Sons,NewYork:2001，其完整內(nèi)容引用在此作為參考。除非另有指定，本文所用的術(shù)語"脂族基"或"脂族基團(tuán)"本身表示直鏈(即未分支)或支鏈的取代或未取代的烴鏈，它是完全飽和的或者含有一個(gè)或多個(gè)不飽和單元，或者表示單環(huán)烴或二環(huán)烴，它是完全飽和的或者含有一個(gè)或多個(gè)不飽和單元，但是不是芳族的(本文也稱之為"碳環(huán)"、"環(huán)脂族基"或"環(huán)烷基")，它具有單一的與分子其余部分連接的點(diǎn)。除非另有說明，脂族基團(tuán)含有l(wèi)-20個(gè)脂族碳原子。在有些實(shí)施方式中，脂族基團(tuán)含有l(wèi)-10個(gè)脂族碳原子。在其他實(shí)施方式中，脂族基團(tuán)含有1-8個(gè)脂族碳原子。在其他實(shí)施方式中，脂族基團(tuán)含有l(wèi)-6個(gè)脂族碳原子，在其他實(shí)施方式中，脂族基團(tuán)含有1-4個(gè)脂族碳原子。在有些實(shí)施方式中，"環(huán)脂族基"(或者"碳環(huán)，，或"環(huán)烷基")表示單環(huán)C3-Cs烴或二環(huán)Cs-Cu烴，它是完全飽和的或者含有一個(gè)或多個(gè)不飽和單元，但不是芳族的，它具有單一的與分子其余部分連接的點(diǎn)，其中所述二環(huán)環(huán)系中任意單一的環(huán)是3-7元環(huán)。適合的脂族基團(tuán)包括但不限于直鏈或支鏈的取代或未取代的烷基、烯基、炔基及其雜合物，例如(環(huán)烷基)烷基、(環(huán)烯基)烷基或(環(huán)烷基)烯基。本文所用的術(shù)語"不飽和"意味著基團(tuán)具有一個(gè)或多個(gè)不飽和單元。除非在立體化學(xué)上指定，本文所描繪的結(jié)構(gòu)也意味著包括該結(jié)構(gòu)的所有異構(gòu)(例如對(duì)映異構(gòu)、非對(duì)映異構(gòu)和幾何異構(gòu)(或構(gòu)象異構(gòu)))形式；例如每個(gè)不對(duì)稱中心的R與S構(gòu)型，(Z)與(E)雙鍵異構(gòu)體，和(Z)與(E)構(gòu)象異構(gòu)體，包括含有相對(duì)于另一種對(duì)映體過量的一種對(duì)映體或者相對(duì)于另一種非對(duì)映體過量的一種非對(duì)映體的混合物。除非另有指定，這些化合物的單一立體化學(xué)異構(gòu)體以及對(duì)映異構(gòu)、非對(duì)映異構(gòu)和幾何異構(gòu)(或構(gòu)象異構(gòu))混合物都屬于本發(fā)明的范圍。除非另有規(guī)定，本發(fā)明化合物的所有互變異構(gòu)形式都屬于本發(fā)明的范圍。另外，除非另有規(guī)定，本文所描繪的結(jié)構(gòu)也意味著包括僅在一個(gè)或多個(gè)同位素富集原子的存在上有所不同的化合物。例如，除了氫被氘或氚代替或者碳被13c-或"c-富集的碳代替以外具有本發(fā)明結(jié)構(gòu)的化合物都屬于本發(fā)明的范圍。這類化合物例如可用作生物學(xué)測(cè)定法中的分析工具或探針。在一種實(shí)施方式中，每個(gè)r獨(dú)立地是氫、卣代基或CF3;其條件是兩個(gè)RX不同時(shí)是氬。在另一種實(shí)施方式中，一個(gè)RX是氫，另一個(gè)f是卣代基或CF"在另一種實(shí)施方式中，兩個(gè)RX都是囟代基。在一種實(shí)施方式中，兩個(gè)RX基團(tuán)一起構(gòu)成環(huán)(a)。在某些實(shí)施方式中，X是CH2。在其他實(shí)施方式中，X是C民?；蛘?，X是CH廣CH2。在某些其他實(shí)施方式中，X是CF廣CF2。在一種實(shí)施方式中，環(huán)A是環(huán)丙基、環(huán)戊基或環(huán)己基。在另一種實(shí)施方式中，環(huán)A是環(huán)丙基或環(huán)戊基。在某些實(shí)施方式中，環(huán)A是環(huán)丙基。在一種實(shí)施方式中，R是氫。或者，R是C1-C6烷基。示范性R包括甲基、乙基或丙基。在一種實(shí)施方式中，R，是氫?；蛘撸琑，是C1-C6烷基。示范性R，包括甲基、乙基、丙基或C(O)Me。在一種實(shí)施方式中，R"和Rbb—起枸成被0H取代基取代的吡咯烷基。在一種實(shí)施方式中，Z選自卣代基、CF3或二氟亞甲二氧基。在一種實(shí)施方式中，q是0?；蛘撸琿是l-2。在某些實(shí)施方式中，q是l?；蛘?，q是2。在另一種實(shí)施方式中，式I或式II化合物包含一個(gè)或多個(gè)、優(yōu)選全部下列特征兩個(gè)RX—起構(gòu)成環(huán)(a);X是CH2;環(huán)A是環(huán)丙基；R'是氫；q是1或2;而Z是卣代基、CF3或二氟亞曱二氧基。在另一種實(shí)施方式中，式I或式II化合物包含一個(gè)或多個(gè)、優(yōu)選全部下列特征兩個(gè)RX—起構(gòu)成環(huán)(a);X是CH2;R是氫；環(huán)A是環(huán)丙基；R'是氫；q是1或2;而Z是鹵代基、CF3或二氟亞甲二氧基。在另一種實(shí)施方式中，式I或式II化合物包含一個(gè)或多個(gè)、優(yōu)選全部下列特征兩個(gè)RX—起構(gòu)成環(huán)(a);環(huán)A是環(huán)丙基；R'是氫；q是l或2;而Z是卣代基、CF3或二氟亞甲二氧基。在另一種實(shí)施方式中，式I或式II化合物包含一個(gè)或多個(gè)、優(yōu)選全部下列特征兩個(gè)RX—起構(gòu)成環(huán)(a);X是CF2;R是氫；環(huán)A是環(huán)丙基；R'是氫；q是1或2;而Z是面代基、CF3或二氟亞甲二氧基。在式I化合物的一種實(shí)施方式中，R"和RBB與氮原子一起構(gòu)成下列環(huán)(i):<formula>formulaseeoriginaldocumentpage25</formula>在式II化合物的一種實(shí)施方式中，RAA和lT與氮原子一起構(gòu)成下列環(huán)(ii):<formula>formulaseeoriginaldocumentpage25</formula>在式I化合物的一種實(shí)施方式中，列環(huán)(iii):<formula>formulaseeoriginaldocumentpage25</formula>R"和ir與氮原子一起構(gòu)成下列環(huán)<formula>formulaseeoriginaldocumentpage25</formula>在式II化合物的一種實(shí)施方式中，R"和RBB與氮原子一起構(gòu)成下<formula>formulaseeoriginaldocumentpage25</formula>在替代的實(shí)施方式中，本發(fā)明提供具有式r或式n，的中間體:<formula>formulaseeoriginaldocumentpage25</formula>Rx、R、環(huán)A、Z和q是如上定義的；L是選自C(O)、S02的連接基團(tuán);p是0或1;而CA是適合的手性助劑。本文所用的術(shù)語"手性助劑"表示用于實(shí)現(xiàn)外消旋或非對(duì)映體混合物的化學(xué)拆分的不對(duì)稱分子或分子片段。這類手性助劑可以具備一個(gè)手性中心，例如甲基千基胺，或者若干手性中心，例如薄荷醇。手性助劑一旦嵌入原料，目的是使得所得非對(duì)映體混合物簡(jiǎn)便分離。例如參見J.Jacques等人，"^a"〃咖e",iace/37"esJ/2t/too/W/謝，，，pp.251-369，JohnWiley&Sons,NewYork(1981);E.L.Eliel&S.H.Wilen，"57ereocAe邁/s^r/o/"^r^3/7/cCo邁卿/7化"pp.868-870,JohnWiley&Sons(1994)。適合用于本發(fā)明的手性助劑連接于上述連接基團(tuán)L(也就是說p是1)或者直接連接于氧原子(也就是說P是0)的那些。示范性的這類手性助劑例如參見E.L.Eliel&S.H.Wilen，pp.337-340。在一種實(shí)施方式中，CA、L、p和連接于此的氧原子一起是(+)-10-樟腦磺酸酯、(1&4》-(-)-co-莰烷酸酯、(U2&5》-(-)-薄荷醇碳酸酯、(1&55)-(+)-薄荷醇碳酸酯、(1A，2及)-l-苯基-2-環(huán)丙基酯或(3W)-四氫呋喃-3-碳酸酯。本發(fā)明的示范性化合物如下表1所示。表l<formula>formulaseeoriginaldocumentpage27</formula><formula>formulaseeoriginaldocumentpage28</formula>在一種實(shí)施方式中，本發(fā)明提供生產(chǎn)式i或式ii化合物的方法<formula>formulaseeoriginaldocumentpage28</formula>包括在第一適合的條件下使式R-l化合物與式i-a化合物反應(yīng)生成所述式i化合物或者與式n-a化合物反應(yīng)生成所述式n化合物的<formula>formulaseeoriginaldocumentpage28</formula>其中每個(gè)RX獨(dú)立地是氫、卣代基、CF3其條件是兩個(gè)RX不同時(shí)是氫；或者兩個(gè)RX—起構(gòu)成環(huán)(a):(a);Cl-C4烷基或-OCl-C4烷基；X是CH2、CF2、CH廣CH2或CF2-CF2;環(huán)A是3-7元單環(huán)的環(huán)烷基環(huán)；R"和Rbb與氮原子一起構(gòu)成被0R，取代的吡咯烷基環(huán)；R'是氫或者C1-C6脂族基，其中所述脂族基的至多兩個(gè)碳單元選擇性地和獨(dú)立地被-CO-、-CS-、-C0C0-、-CONR-、-C0腦R-、-CO廣、-OCO-、-NRCO廣、-0-、-NRCONR-、-OCONR-、-NRNR，-NRNRCO-、-NRCO-、-S-、-SO,-SO廠、-NR-、-S02NR-，NRS02-或-NRS02NR-代替；R是氫或者C1-C6脂族基；Z是吸電子基團(tuán)；而(1是0-3;和LGi是第一適合的離去基團(tuán)。本文所用的術(shù)語"第一適合的條件"表示適合于發(fā)生式I-A化合物與式R-l化合物之間或者式II-A化合物與式R-l化合物之間的反應(yīng)的條件。這類適合的條件例如包括第一適合的溶劑、第一適合的溫度和適合的還原劑。本領(lǐng)域技術(shù)人員將熟知各種這類適合于發(fā)生式I-A化合物與式R-l化合物之間或者式II-A化合物與式R-l化合物之間的反應(yīng)的條件。在一種實(shí)施方式中，第一適合的溶劑是極性非質(zhì)子溶劑、極性質(zhì)子溶劑、非極性溶劑或其適合的組合。可用作第一適合的溶劑的示范性溶劑包括甲醇、乙醇、丙醇、異丙醇、叔丁醇、二氯曱烷、二氯乙烷、甲苯、四氫呋喃、二喁烷、二乙醚、二曱醚、乙腈、二甲基甲酰胺、DMAC或NMP。在一種實(shí)施方式中，第一適合的溫度是足以在第一適合的溶劑中發(fā)生式I-A化合物與式R-1化合物之間的反應(yīng)的溫度。在另一種實(shí)施方式中，第一適合的溫度是足以在第一適合的溶劑中發(fā)生式II-A化合物與式R-l化合物之間的反應(yīng)的溫度。示范性第一適合的溫度包括在約oic至約iiox:之間。在一種實(shí)施方式中，第一適合的溫度在約O"C至約25r之間。在一種實(shí)施方式中，適合的還原劑是能夠發(fā)生式I-A化合物與式R-l化合物之間的反應(yīng)的還原劑。在另一種實(shí)施方式中，適合的還原劑是能夠發(fā)生式II-A化合物與式R-1化合物之間的反應(yīng)的還原劑。本領(lǐng)域技術(shù)人員將熟知適合于該反應(yīng)的還原劑。適合于本發(fā)明的試劑包括金屬硼氫化物或者能夠催化氫化的試劑。示范性的這類適合的還原劑包括硼氫化鈉、氰基硼氬化鈉、硼氫化鋰、三乙酰氧基硼氬化鈉、硼氫化鈣、在適合的金屬催化劑、例如Pd/C存在下的氫。在另一種實(shí)施方式中，IA是第一適合的離去基團(tuán)，它能夠置換生成式I4b合物或式II化合物。參見"AdvancedOrganicChemistry:Reactions,Mechanisms,andStructure,"pp.339-357，JerryMarch4thEd.，JohnWiley&Sons(1992)。根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其中LG:選自烷基磺酸酯、芳基磺酸酯、囟化物、烷基羧酸酯。在一種實(shí)施方式中，式I-A化合物是從式I-B化合物生成的I-B'，其中[CA]是適合的手性助劑；所述方法包括在第二適合的條件下除去所述手性助劑的步驟。0011在替代的實(shí)施方式中，式II-A化合物是從式II-B化合物生成的II-B;其中[CA]是適合的手性助劑；所述方法包括在第二適合的條件下除去所述手性助劑的步驟。上述式II-B或式I-B化合物中"適合的手性助劑"是能夠連接于氨基的手性助劑。含有這樣一種連接有適合的手性助劑的氨基的化合物的異構(gòu)體混合物容易借助適合的分離手段分離為它的個(gè)別異構(gòu)體。例如參見J.Jacques等人，"jEfla/2〃o邁e/^，Wace邁"esbo/"/,,，，pp.251-369，JohnWiley&Sons,NewYork(1981);E.L.Eliel&S.H.Wilen，"5YereocAe/zz/sfiyo/*Orgs/n.cCo邁;,Wpp.868-870，JohnWiley&Sons(1994)。在一種實(shí)施方式中，所述適合的手性助劑是烷基次硫酸基。在另一種實(shí)施方式中，所述適合的第二條件包括適合的質(zhì)子酸和適合的第二溶劑。在一種實(shí)施方式中，所述適合的第二溶劑選自極性非質(zhì)子溶劑或質(zhì)子溶劑。示范性極性非質(zhì)子溶劑包括二喁烷、四氫呋喃、二乙醚、二氯甲烷等。示范性質(zhì)子溶劑包括甲醇、乙醇、異丙醇、叔丁醇等。在一種實(shí)施方式中，所述適合的第二溶劑是極性非質(zhì)子溶劑。在另一種實(shí)施方式中，所述式I-B化合物和式II-B化合物是如下生成的，分別使式i-c或式1I-C化合物與式R-2化合物在第三適合的條件下反應(yīng)<formula>formulaseeoriginaldocumentpage31</formula>其中R是氫或者C1-C6脂族基；W是氫或者第一適合的保護(hù)基團(tuán);[CA]是適合的手性助劑；而LG2是第二適合的離去基團(tuán)。在一種實(shí)施方式中，LG2選自卣化物、OC(O)(C1-C6烷基)、五氟苯氧基、Cl-C6烷氧基、0C02(C1-C6烷基)或羥基。在一種實(shí)施方式中，W是氫。在另一種實(shí)施方式中，所述第三適合的條件包括第三適合的偶聯(lián)劑和第三適合的溶劑。在另一種實(shí)施方式中，所述適合的偶聯(lián)劑選自DCC、DCI、HATU、TCPH或HBTU。在一種實(shí)施方式中，所述第三適合的溶劑選自二氯曱烷、二喁烷、乙腈、DMF、二氯乙烷或四氫呋喃。在另一種實(shí)施方式中，所述式I-C或式II-C化合物是從式R-3化合物的異構(gòu)體混合物生成的其中R、Z和q是如上定義的；PG,是第二適合的保護(hù)基團(tuán)；而[CA]是適合的手性助劑；所述方法包括兩個(gè)步驟，所述兩個(gè)步驟之一是利用適合的分離手段分離所述異構(gòu)體混合物，所述兩個(gè)步驟中的另一個(gè)是在第四適合的條件下轉(zhuǎn)化PGi為R1。在一種實(shí)施方式中，所述適合的分離手段包括適合的色譜手段。示范性的這類手段包括柱色譜或薄層色譜。在另一種實(shí)施方式中，所述適合的分離手段包括適合的結(jié)晶手段。在另一種實(shí)施方式中，所述第四適合的條件包括適合的去保護(hù)劑和第四適合的溶劑。示范性適合的去保護(hù)劑是三氟乙酸。在一種實(shí)施方式中，所述第四適合的溶劑是極性非質(zhì)子溶劑。示范性溶劑包括二氯甲烷、四氫呋喃、二噶烷、二乙醚等。在另一種實(shí)施方式中，所述式R-3化合物是從式R-4化合物和式R-5化合物生成的其中PGi是第二適合的保護(hù)基團(tuán)；M是適合的金屬陽離子；而[CA]是適合的手性助劑；所述方法包括在第五適合的條件下使所述式R-4化合物與所述式R-5化合物反應(yīng)的步驟。在一種實(shí)施方式中，所述M選自Li+、Na+或Mg—。在另一種實(shí)施方式中，所述PG!選自烷基氨基甲酸酯、三氟乙?；?、三烷基曱硅烷基或新戊?；??；蛘?，所述Pd是BOC或三甲基曱娃坑基。在一種實(shí)施方式中，所述第五適合的條件包括第五適合的溶劑和第五適合的溫度。在一種實(shí)施方式中，所述適合的溫度為約_78匸。在另一種實(shí)施方式中，所述第五適合的溶劑是四氫呋喃。在替代的實(shí)施方式中，所述式R-1化合物是在另一種實(shí)施方式中，所述式i或式n化合物選自表i?！兑黄輹?huì)4絲或者，所述式R-1化合物是:本發(fā)明化合物可以借助本領(lǐng)域已知的方法制備。下文闡述制備本發(fā)明化合物的示范性合成途徑。下列流程I-A闡述生產(chǎn)中間體A的過程流程I-A:a)50%NaOH，Y(CH》nY，BTEAC(千基三乙基氯化銨)；Y=適合的離去基團(tuán)。下列流程I-B闡述生產(chǎn)中間體B的過程。流程I-B:oa)Br2;b)硫脲，(Me)2NCH(0Me)2;c)HC1下列流程I-C闡述生產(chǎn)式I或式II化合物的過程:流程I-C:a)S0C12，DMF;b)1，4-二嚙烷，Et3N;c)NaBH4，MeOH;d)i)CH3S02C1，DCM，Et3N;ii)RAARBBNH;e)手性色鐠流程I-D闡述本發(fā)明的示范性化合物的合成。流程I-D:a)50%NaOH水溶液，1，2-氯溴乙烷，BTEACa)Br2;b)硫脲，(Me)2NCH(OMe)2;c)HC1<formula>formulaseeoriginaldocumentpage36</formula>2a)S0C12，DMF;b)1,4-二喁烷，Et3N;c)NaBH4，MeOH;d)i)CH3S02C1，DCM，Bt3N;ii)0)-吡咯烷醇;e)手性色譜下列流程II-A闡述另一種利用手性助劑制備本發(fā)明化合物的示范性過程。流程II-A:<formula>formulaseeoriginaldocumentpage37</formula><formula>formulaseeoriginaldocumentpage38</formula><formula>formulaseeoriginaldocumentpage39</formula>b)Ti(0Pr)4，二喁烷；b)(Boc)20，Et3N，DMAP，THF;c)n-BuLi，-78t:，THF;d)50%TFA，CH2C12。流程III，步驟B:a)S0Cl2，DMF，60匸；b)Et3N，CH2C12;c)HC1的二-惡烷溶液，下列流程III闡述另一種制備本發(fā)明化合物的過程。流程III，步驟A:NHBocBocHN'于(Z)qCH30H;d)NaBH4(LG=離去基團(tuán))。流程III，步驟C:<formula>formulaseeoriginaldocumentpage41</formula>a)S0C12，,，60。C;b)Et3N、CH2Ch;c)HC1的二嚙烷溶液、CH30H;d)NaBH4(LG=離去基團(tuán))。下文陳述其他制備本發(fā)明化合物的說明性實(shí)例。乂財(cái)、辨緣脊秀秀夢(mèng)J:T接愛時(shí)逸合參正如上文所討論的，本發(fā)明提供這樣的化合物，它們可用作CFTR的調(diào)控劑，因而可用于治療疾病、疾患或病癥，例如囊性纖維化、遺傳性肺氣胂、遺傳性血色素沉著、凝血-纖維蛋白溶解缺陷(例如C蛋白缺陷)、1型遺傳性血管水腫、脂質(zhì)加工缺陷(例如家族性高膽固醇血)、l型乳糜微粒血、P-脂蛋白血、溶酶體貯存疾病(例如I-細(xì)胞疾病/假性赫爾勒氏病)、粘多糖病、桑德霍夫病/泰-薩二氏病、克-納二氏病II型、多內(nèi)分泌病/高胰島素血、糖尿病、拉倫侏儒、髄過氧化物酶缺陷、原發(fā)性曱狀旁腺機(jī)能減退、黑素瘤、聚糖病CDG1型、遺傳性肺氣腫、先天性曱狀腺機(jī)能亢進(jìn)、成骨不全、遺傳性低纖維蛋白原血、ACT缺陷、尿崩癥(DI)、后葉激素運(yùn)載蛋白性DI、腎原性DI、夏-馬-圖三氏綜合征、佩-梅二氏病、神經(jīng)變性疾病(例如阿爾茨海默氏病、帕金森氏病、肌萎縮性側(cè)索硬化、進(jìn)行性核上性麻痹、皮克氏病)、若干聚谷氨酰胺神經(jīng)病學(xué)障礙(例如亨廷頓氏病、I型脊髄小腦性共濟(jì)失調(diào)、脊髓與延髄肌肉萎縮、齒狀紅核蒼白球丘腦下核萎縮和肌強(qiáng)直性營(yíng)養(yǎng)不良)以及海綿狀腦病(例如遺傳性克-雅二氏病(由朊病毒蛋白加工缺陷引起)、法布里氏病和斯-施二氏綜合征)。因此，在本發(fā)明的另一方面，提供藥學(xué)上可接受的組合物，其中這些組合物包含任意如本文所述的化合物，并且選擇性地包含藥學(xué)上可接受的載體、助劑或賦形劑。在某些實(shí)施方式中，這些組合物選擇性地進(jìn)一步包含一種或多種其他治療劑。也將被領(lǐng)會(huì)的是，某些本發(fā)明化合物能夠以游離形式存在供治療，或者在適當(dāng)情況下為其藥學(xué)上可接受的衍生物。按照本發(fā)明，藥學(xué)上可接受的衍生物包括但不限于藥學(xué)上可接受的鹽、酯、這類酯的鹽、或者任何其他加合物或衍生物，一旦對(duì)需要的患者給藥即能夠直接或間接提供如本文所述的化合物或者其代謝產(chǎn)物或殘余物。本文所用的術(shù)語"藥學(xué)上可接受的鹽"表示這樣的鹽，在合理的醫(yī)學(xué)判斷范圍內(nèi)，它們適合用于與人體和低等動(dòng)物組織接觸，沒有不適當(dāng)?shù)亩拘?、刺激性、變態(tài)反應(yīng)等，與合理的利益/風(fēng)險(xiǎn)比相稱。"藥學(xué)上可接受的鹽"表示本發(fā)明化合物的任意無毒性鹽或酯的鹽，一旦對(duì)接受者給藥，即能夠直接或間接提供本發(fā)明化合物或者其抑制活性代謝產(chǎn)物或殘余物。本文所用的術(shù)語"其抑制活性代謝產(chǎn)物或殘余物"意味著其代謝產(chǎn)物或殘余物也是ATP-結(jié)合彈夾轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白的抑制劑。藥學(xué)上可接受的鹽是本領(lǐng)域熟知的。例如，S.M.Berge等在/.戶Aar邁aceu〃ca/^/e/3ce-，1977，"，1-19中詳細(xì)描述了藥學(xué)上可接受的鹽，引用在此作為參考。本發(fā)明化合物的藥學(xué)上可接受的鹽包括從適合的無機(jī)與有機(jī)酸與堿衍生的那些。藥學(xué)上可接受的無毒性酸加成鹽的實(shí)例是與無機(jī)酸或有機(jī)酸生成的那些鹽，無機(jī)酸例如鹽酸、氫溴酸、磷酸、硫酸和高氯酸，有機(jī)酸例如乙酸、草酸、馬來酸、酒石酸、檸檬酸、琥珀酸或丙二酸，或者利用本領(lǐng)域所用的其他方法，例如離子交換形成的鹽。其他藥學(xué)上可接受的鹽包括己二酸鹽、藻酸鹽、抗壞血酸鹽、天冬氨酸鹽、苯磺酸鹽、苯曱酸鹽、硫酸氫鹽、硼酸鹽、丁酸鹽、樟腦酸鹽、樟腦磺酸鹽、檸檬酸鹽、環(huán)戊烷丙酸鹽、二葡糖酸鹽、十二烷基硫酸鹽、乙磺酸鹽、甲酸鹽、富馬酸鹽、葡庚酸鹽、甘油磷酸鹽、葡糖酸鹽、半硫酸鹽、庚酸鹽、己酸鹽、氬碘酸鹽、2-羥基乙磺酸鹽、乳糖醛酸鹽、乳酸鹽、月桂酸鹽、月桂基硫酸鹽、蘋果酸鹽、馬來酸鹽、丙二酸鹽、甲磺酸鹽、2-萘磺酸鹽、煙酸鹽、硝酸鹽、油酸鹽、草酸鹽、棕櫚酸鹽、樸酸鹽、果膠酸鹽、過硫酸鹽、3-苯基丙酸鹽、磷酸鹽、苦味酸鹽、新戊酸鹽、丙酸鹽、硬脂酸鹽、琥珀酸鹽、硫酸鹽、酒石酸鹽、硫氰酸鹽、對(duì)-甲苯磺酸鹽、十一烷酸鹽、戊酸鹽等。從適當(dāng)?shù)膲A衍生的鹽包括堿金屬、堿土金屬、銨和N+(Cw烷基)4鹽。本發(fā)明也涵蓋如本文所公開的化合物的任意堿性含氮基團(tuán)的季銨化作用。借助這類季銨化作用可以得到可溶于水或油或可分散在水或油中的產(chǎn)物。代表性堿金屬或堿土金屬鹽包括鈉、鋰、鉀、4丐、鎂等。當(dāng)適當(dāng)?shù)臅r(shí)候，其他藥學(xué)上可接受的鹽包括無毒的銨鹽、季銨鹽和胺陽離子鹽，利用抗衡離子生成，例如鹵化物、氫氧化物、羧酸鹽、硫酸鹽、磷酸鹽、硝酸鹽、低級(jí)烷基磺酸鹽和芳基磺酸鹽。如上所述，本發(fā)明的藥學(xué)上可接受的組合物另外包含藥學(xué)上可接受的載體、助劑或賦形劑，正如本發(fā)明中所述，它們包括適合于所需的特定劑型的任意和所有溶劑、稀釋劑或其他液體賦形劑、分散或懸浮助劑、表面活性劑、等滲劑、增稠或乳化劑、防腐劑、固體粘合劑、潤(rùn)滑劑等。Remington'sPharmaceuticalSciences,SixteenthEdition,E.W.Martin(MackPublishingCo.，Easton，Pa"1980)公開了用于配制藥學(xué)上可接受的組合物的各種載體和用于其制備的已知技術(shù)。除了任何與本發(fā)明化合物不相容的常規(guī)載體介質(zhì)以外，例如產(chǎn)生任何不可取的生物學(xué)效應(yīng)或者以有害方式相互作用于藥學(xué)上可接受的組合物的任何其他組分，它的使用涵蓋在本發(fā)明的范圍內(nèi)。能夠充當(dāng)藥學(xué)上可接受的栽體的材料的一些實(shí)例包括但不限于離子交換劑；氧化鋁；硬脂酸鋁；卵磷脂；血清蛋白質(zhì)，例如血清白蛋白；緩沖物質(zhì)，例如磷酸鹽；甘氨酸；山梨酸或山梨酸鉀；飽和植物脂肪酸的偏甘油酯混合物；水；鹽或電解質(zhì)，例如硫酸魚精蛋白、磷酸氬二鈉、磷酸氫鉀、氯化鈉、鋅鹽；膠體二氧化硅；三硅酸鎂；聚乙烯吡咯烷酮；聚丙烯酸酯；蠟類；聚乙烯-聚氧丙烯-嵌段聚合物；羊毛脂；糖類，例如乳糖、葡萄糖和蔗糖；淀粉，例如玉米淀粉和馬鈴薯淀粉；纖維素及其衍生物，例如羧曱基纖維素鈉、乙基纖維素和乙酸纖維素；粉碎的黃蓍膠；麥芽；明膠；滑石；賦形劑，例如可可脂和栓劑用蠟；油類，例如花生油、棉籽油、紅花油、芝麻油、橄欖油、玉米油和大豆油；二醇，例如丙二醇或聚乙二醇；酯類，例如油酸乙酯和月桂酸乙酯；瓊脂；緩沖劑，例如氫氧化鎂和氫氧化鋁；藻酸；無熱原的水；等滲鹽水；林格氏溶液；乙醇；磷酸鹽緩沖溶液；以及其他無毒的可相容的潤(rùn)滑劑，例如月桂基硫酸鈉和硬脂酸鎂；根據(jù)制劑人員的判斷，在組合物中也可以存在著色劑、釋放劑、包衣劑、甜味劑、調(diào)味劑和香料、防腐劑和抗氧化劑。^合參和藥夢(mèng)J:T接^時(shí)逸合浙的^途另一方面，本發(fā)明提供治療牽涉CFTR的病癥、疾病或疾患的方法。在某些實(shí)施方式中，本發(fā)明提供治療牽涉CFTR缺陷的病癥、疾病或疾患的方法，該方法包括對(duì)有此需要的受治療者、優(yōu)選哺乳動(dòng)物給予包含式(I)化合物的組合物。在某些實(shí)施方式中，本發(fā)明提供治療如下疾病的方法嚢性纖維化、遺傳性肺氣腫(由al-抗胰蛋白酶非Piz變體引起)、遺傳性血色素沉著、凝血-纖維蛋白溶解缺陷(例如C蛋白缺陷)、l型遺傳性血管水腫、脂質(zhì)加工缺陷(例如家族性高膽固醇血)、1型乳糜微粒血、p-脂蛋白血、溶酶體貯存疾病(例如I-細(xì)胞疾病/假性赫爾勒氏病)、粘多糖病(由溶酶體加工酶引起)、桑德霍夫病/泰-薩二氏病(由p-己糖胺酶引起)、克-納二氏病II型(由UDP-葡糖醛基-sialyc-轉(zhuǎn)移酶引起)、多內(nèi)分泌病/高胰島素血、糖尿病(由胰島素受體引起)、拉倫侏儒(由生長(zhǎng)激素受體引起)、髓過氧化物酶缺陷、原發(fā)性甲狀旁腺機(jī)能減退(由前促甲狀旁腺激素引起)、黑素瘤(由酪氨酸酶引起)。與后一類ER故障有關(guān)的疾病有聚糖病CDG1型、遺傳性肺氣腫(由al-抗胰蛋白酶PiZ變體引起)、先天性甲狀腺機(jī)能亢進(jìn)、成骨不全(由I、II、IV型前膠原引起)、遺傳性低纖維蛋白原血(由纖維蛋白原引起)、ACT缺陷(由ocl-抗凝乳蛋白酶引起)、尿崩癥(DI)、后葉激素運(yùn)載蛋白性DI(由后葉加壓素/V2-受體引起)、腎原性DI(由水通道蛋白II引起)、夏-馬-圖三氏綜合征(由外周髄磷脂蛋白22引起)、佩-梅二氏病、神經(jīng)變性疾病(例如阿爾茨海默氏病(由PAPP和早老蛋白引起)、帕金森氏病、肌萎縮性側(cè)索硬化、進(jìn)行性核上性麻痹、皮克氏病)、若干聚谷氨酰胺神經(jīng)病學(xué)障礙(例如亨廷頓氏病、I型脊髓小腦性共濟(jì)失調(diào)、脊髄與延髄肌肉萎縮、齒狀紅核蒼白球丘腦下核萎縮和肌強(qiáng)直性營(yíng)養(yǎng)不良)以及海綿狀腦病(例如遺傳性克-雅二氏病(由朊病毒蛋白加工缺陷引起)、法布里氏病(由溶酶體a-半乳糖苷酶A引起)、斯-施二氏綜合征)、慢性阻塞性肺疾病(C0PD)、干眼病和斯耶格倫氏綜合征，包括對(duì)所述哺乳動(dòng)物給予有效量的包含式(I)化合物或其上述優(yōu)選實(shí)施方式的組合物的步驟。按照替代的優(yōu)選實(shí)施方式，本發(fā)明提供治療嚢性纖維化的方法，包括對(duì)所述哺乳動(dòng)物給予有效量的包含式(I)化合物或其上述優(yōu)選實(shí)施方式的組合物的步驟。按照本發(fā)明，化合物或藥學(xué)上可接受的組合物的"有效量"是有效治療一種或多種如下疾病或者減輕其嚴(yán)重性的量嚢性纖維化、遺傳性肺氣腫(由al-抗胰蛋白酶非Piz變體引起)、遺傳性血色素沉著、凝血-纖維蛋白溶解缺陷(例如C蛋白缺陷)、l型遺傳性血管水腫、脂質(zhì)加工缺陷(例如家族性高膽固醇血)、1型乳糜微粒血、P-脂蛋白血、溶酶體f&存疾病(例如I-細(xì)胞疾病/假性赫爾勒氏病)、粘多糖病(由溶酶體加工酶引起)、桑德霍夫病/泰-薩二氏病(由P-己糖胺酶引起)、克-納二氏病II型(由UDP-葡糖醛基-sialyc-轉(zhuǎn)移酶引起)、多內(nèi)分泌病/高胰島素血、糖尿病(由胰島素受體引起)、拉倫侏儒(由生長(zhǎng)激素受體引起)、髄過氧化物酶缺陷、原發(fā)性甲狀旁腺機(jī)能減退(由前促曱狀旁腺激素引起)、黑素瘤(由酪氨酸酶引起)。與后一類ER故障有關(guān)的疾病有聚糖病CDG1型、遺傳性肺氣肺(由al-抗胰蛋白酶PiZ變體引起)、先天性曱狀腺機(jī)能亢進(jìn)、成骨不全(由I、II、IV型前膠原引起)、遺傳性低纖維蛋白原血(由纖維蛋白原引起)、ACT缺陷(由al-抗凝乳蛋白酶引起)、尿崩癥(DI)、后葉激素運(yùn)載蛋白性DI(由后葉加壓素/V2-受體引起)、腎原性DI(由水通道蛋白II引起)、夏-馬-圖三氏綜合征(由外周髄磷脂蛋白22引起)、佩-梅二氏病、神經(jīng)變性疾病(例如阿爾茨海默氏病(由PAPP和早老蛋白引起)、帕金森氏病、肌萎縮性側(cè)索硬化、進(jìn)行性核上性麻痹、皮克氏病)、若干聚谷氨酰胺神經(jīng)病學(xué)障礙(例如亨廷頓氏病、I型脊髄小腦性共濟(jì)失調(diào)、脊髄與延髓肌肉萎縮、齒狀紅核蒼白球丘腦下核萎縮和肌強(qiáng)直性營(yíng)養(yǎng)不良)以及海綿狀腦病(例如遺傳性克-雅二氏病(由朊病毒蛋白加工缺陷引起)、法布里氏病(由溶酶體a-半乳糖苷酶A引起)、斯-施二氏綜合征)、慢性阻塞性肺疾病(C0PD)、干眼病和斯耶格倫氏綜合征。按照本發(fā)明的方法，化合物和組合物可以使用就治療一種或多種如下疾病或者減輕其嚴(yán)重性而言有效的任意量和任意給藥途徑給藥囊性纖維化、遺傳性肺氣腫(由al-抗胰蛋白酶非Piz變體引起)、遺傳性血色素沉著、凝血-纖維蛋白溶解缺陷(例如C蛋白缺陷)、1型遺傳性血管水腫、脂質(zhì)加工缺陷(例如家族性高膽固醇血)、1型乳糜微粒血、p-脂蛋白血、溶酶體貯存疾病(例如I-細(xì)胞疾病/假性赫爾勒氏病)、粘多糖病(由溶酶體加工酶引起)、桑德霍夫病/泰-薩二氏病(由p-己糖胺酶引起)、克-納二氏病II型(由UDP-葡糖醛基-sialyc-轉(zhuǎn)移酶引起)、多內(nèi)分泌病/高胰島素血、糖尿病(由胰島素受體引起)、拉倫侏儒(由生長(zhǎng)激素受體引起)、髄過氧化物酶缺陷、原發(fā)性甲狀旁腺機(jī)能減退(由前促甲狀旁腺激素引起)、黑素瘤(由酪氨酸酶引起)。與后一類ER故障有關(guān)的疾病有聚糖病CDG1型、遺傳性肺氣腫(由al-抗胰蛋白酶PiZ變體引起)、先天性甲狀腺機(jī)能亢進(jìn)、成骨不全(由I、II、IV型前膠原引起)、遺傳性低纖維蛋白原血(由纖維蛋白原引起)、ACT缺陷(由al-抗凝乳蛋白酶引起)、尿崩癥(DI)、后葉激素運(yùn)載蛋白性DI(由后葉加壓素/V2-受體引起)、腎原性DI(由水通道蛋白II引起)、夏-馬-圖三氏綜合征(由外周髓磷脂蛋白22引起)、佩-梅二氏病、神經(jīng)變性疾病(例如阿爾茨海默氏病(由(3APP和早老蛋白引起)、帕金森氏病、肌萎縮性側(cè)索硬化、進(jìn)行性核上性麻辨、皮克氏病)、若干聚谷氨酰胺神經(jīng)病學(xué)障礙(例如亨廷頓氏病、I型脊髄小腦性共濟(jì)失調(diào)、脊髄與延髄肌肉萎縮、齒狀紅核蒼白球丘腦下核萎縮和肌強(qiáng)直性營(yíng)養(yǎng)不良)以及海綿狀腦病(例如遺傳性克-雅二氏病(由朊病毒蛋白加工缺陷引起)、法布里氏病(由溶酶體a-半乳糖苷酶A引起)、斯-施二氏綜合征)、慢性阻塞性肺疾病(C0PD)、干眼病和斯耶格倫氏綜合征。所需確切的量將因受治療者而異，取決于受治療者的種類、年齡與一般狀態(tài)、感染的嚴(yán)重性、特定藥物、其給藥的方式等。本發(fā)明化合物優(yōu)選地被配制成劑量單元形式，有易于給藥和劑量的一致性。本文所用的表達(dá)方式"劑量單元形式"表示物理上離散的藥物單元，對(duì)所治療的患者而言是適當(dāng)?shù)?。不過將被理解的是，本發(fā)明化合物和組合物的總每日用量將由主治醫(yī)師在合理的醫(yī)學(xué)判斷范圍內(nèi)決定。任意特定患者或生物體的具體有效劑量水平將依賴于多種因素，包括所治療的病癥和病癥的嚴(yán)重性；所采用的具體化合物的活性；所采用的具體組合物；患者的年齡、體重、一般健康狀況、性別和飲食；給藥的時(shí)間、給藥的途徑和所采用的具體化合物的排泄速率；治療的持續(xù)時(shí)間；與所釆用的具體化合物聯(lián)合或同時(shí)使用的藥物；和醫(yī)藥領(lǐng)域熟知的其他因素。本文所用的術(shù)語"患者"表示動(dòng)物，優(yōu)選哺乳動(dòng)物，最優(yōu)選人。本發(fā)明的藥學(xué)上可接受的組合物可以對(duì)人和其他動(dòng)物口服、直腸、腸胃外、腦池內(nèi)、陰道內(nèi)、腹膜內(nèi)、局部(以粉劑、軟骨劑或滴劑)、頰、以口用或鼻用噴霧劑等方式給藥，這依賴于所治療感染的嚴(yán)重性。在某些實(shí)施方式中，本發(fā)明化合物可以被口服或腸胃外給藥，劑量水平為每天約0.01mg/kg至約50mg/kg、優(yōu)選約lmg/kg至約25mg/kg受治療者體重，一天一次或多次，以獲得所需的治療效果?？诜o藥的液體劑型包括但不限于藥學(xué)上可接受的乳劑、微乳劑、溶液、懸液、糖漿劑和酏劑。除了活性化合物以外，液體劑型可以含有本領(lǐng)域常用的惰性稀釋劑，例如水或其他溶劑，增溶劑和乳化劑，例如乙醇、異丙醇、碳酸乙酯、乙酸乙酯、千醇、苯甲酸節(jié)基酯、丙二醇、1，3-丁二醇、二甲基甲酰胺、油(特別是棉籽油、花生油、玉米油、麥胚油、橄欖油、蓖麻油和芝麻油)、甘油、四氫糠醇、聚乙二醇和脫水山梨醇的脂肪酸酯，和它們的混合物。除了惰性稀釋劑以外，口服組合物還可以包括助劑，例如濕潤(rùn)劑、乳化與懸浮劑、甜味劑、矯味劑和香料。使用適合的分散或濕潤(rùn)劑和懸浮劑，可以按照已知技術(shù)配制可注射制劑，例如無菌可注射的水性或油性懸液。無菌可注射制劑也可以是在無毒的腸胃外可接受的稀釋劑或溶劑中的無菌可注射溶液、懸液或乳液，例如在1，3-丁二醇中的溶液?？梢圆捎玫目山邮艿脑泽w和溶劑有水、林格氏溶液、U.S.P.和等滲氯化鈉溶液。另外，常規(guī)上釆用無菌的不揮發(fā)油作為溶劑或懸浮介質(zhì)。為此，可以采用任何溫和的固定油，包括合成的單-或二-甘油酯。另外，在注射劑的制備中也可以使用脂肪酸，例如油酸?？勺⑸渲苿┛梢赃@樣進(jìn)行滅菌，例如通過細(xì)菌截留性濾器過濾，或者摻入無菌固體組合物形式的滅菌劑，可以在使用前將其溶解或分散在無菌的水或其他無菌可注射介質(zhì)中。為了延長(zhǎng)本發(fā)明化合物的作用，經(jīng)常需要延緩化合物在皮下或肌內(nèi)注射后的吸收。這可以利用水溶性差的結(jié)晶性或無定形物質(zhì)的液體懸液來實(shí)現(xiàn)?；衔锏奈账俾嗜Q于它的溶解速率，后者反過來又可能取決于晶體大小和晶型。作為替代選擇，將化合物溶解或懸浮在油類載體中，實(shí)現(xiàn)腸胃外給藥化合物形式的延遲吸收?？勺⑸涞膬?chǔ)庫形式是這樣制備的，在生物可降解的聚合物中，例如聚交酯-聚乙醇酸交酯，生成化合物的微囊包封基質(zhì)。根據(jù)化合物與聚合物的比例和所采用特定聚合物的屬性，可以控制化合物的釋放速率。其他生物可降解聚合物的實(shí)例包括聚(原酸酯)和聚(酸酐)。儲(chǔ)庫型可注射制劑也可以將化合物包合在與機(jī)體組織相容的脂質(zhì)體或微乳中來制備。'直腸或陰道給藥組合物優(yōu)選地是栓劑，它們可以這樣制備，將本發(fā)明化合物與適合的無刺激性賦形劑或載體混合，例如可可脂、聚乙二醇或栓劑用蠟，它們?cè)诃h(huán)境溫度下是固體，但是在體溫下是液體，因此在直腸或陰道腔中融化，釋放出活性化合物?？诜o藥的固體劑型包括膠嚢劑、片劑、丸劑、粉劑和顆粒劑。在這類固體劑型中，將活性化合物與至少一種惰性的藥學(xué)上可接受的賦形劑或載體混合，例如檸檬酸鈉或磷酸二鈣，和/或a)填充劑或增容劑，例如淀粉、乳糖、蔗糖、葡萄糖、甘露糖醇和硅酸，b)粘合劑，例如羧甲基纖維素、藻酸鹽、明膠、聚乙烯吡咯烷酮、蔗糖和阿拉伯膠，c)潤(rùn)濕劑，例如甘油，d)崩解劑，例如瓊脂、碳酸釣、馬鈴薯或木薯淀粉、藻酸、某些硅酸鹽和碳酸鈉，e)溶解遲延劑，例如石蠟，f)吸收促進(jìn)劑，例如季銨化合物，g)濕潤(rùn)劑，例如鯨蠟醇和甘油單硬脂酸酯，h)吸收劑，例如高嶺土和膨潤(rùn)土，和i)潤(rùn)滑劑，例如滑石、硬脂酸鉤、硬脂酸鎂、固體聚乙二醇、月桂基硫酸鈉及其混合物。在膠嚢劑、片劑和丸劑的情況下，該劑型還可以包含緩沖劑。也可以采用相似類型的固體組合物作為軟或硬的填充的明膠膠囊劑中的填充劑，膠嚢所用賦形劑例如乳糖或奶糖以及高分子聚乙二醇等。片劑、錠劑、膠嚢劑、丸劑和顆粒劑等固體劑型可以帶有包衣和外殼，例如腸溶衣和藥物配制領(lǐng)域熟知的其他包衣。它們可以選擇性地含有遮光劑，也可以是僅僅或優(yōu)先在腸道某一部分釋放活性成分的組合物，選擇性地為延遲的方式。可以使用的包埋組合物的實(shí)例包括聚合物質(zhì)和蠟類。也可以釆用相似類型的固體組合物作為軟與硬的填充的明膠膠囊劑中的填充劑，膠嚢所用賦形劑例如乳糖或奶糖以及高分子聚乙二醇等?；钚曰衔镆部梢允俏鞍獾男问?，其中含有一種或多種上述賦形劑。片劑、錠劑、膠嚢劑、丸劑和顆粒劑等固體劑型可以帶有包衣和外殼，例如腸溶衣、釋放控制性包衣和藥物配制領(lǐng)域熟知的其他包衣。在這類固體劑型中，可以將活性化合物與至少一種惰性稀釋劑混合，例如蔗糖、乳糖或淀粉。在正常情況下，這類劑型還可以包含除惰性稀釋劑以外的其他物質(zhì)，例如壓片潤(rùn)滑劑和其他壓片助劑，例如硬脂酸鎂和微晶纖維素。在膠嚢劑、片劑和丸劑的情況下，劑型還可以包含緩沖劑。它們可以選擇性地含有遮光劑，也可以是僅僅或優(yōu)先在腸道某一部分釋放活性成分的組合物，選擇性地為延遲的方式。可以使用的包埋組合物的實(shí)例包括聚合物質(zhì)和蠟類。本發(fā)明化合物的局部或透皮給藥劑型包括軟青劑、糊劑、霜?jiǎng)?、洗劑、凝膠劑、粉劑、溶液、噴霧劑、吸入劑或貼劑。將活性組分在無菌條件下與藥學(xué)上可接受的栽體和任何必需的防腐劑或緩沖劑混合，根據(jù)需要而定。眼科制劑、滴耳劑和滴眼劑也被涵蓋在本發(fā)明的范圍內(nèi)。另外，本發(fā)明涵蓋透皮貼劑的使用，它們具有控制化合物向機(jī)體遞送的附加優(yōu)點(diǎn)。這類劑型可以通過將化合物溶解或分散在恰當(dāng)?shù)慕橘|(zhì)中來制備。還可以使用吸收增強(qiáng)劑以增加化合物穿過皮膚的通中來控制速率。正如上文一般性描述的，本發(fā)明化合物可用作CFTR的調(diào)控劑。因而，不希望受任意特定理論所限，化合物和組合物特別可用于治療疾病、病癥或疾患或者減輕其嚴(yán)重性，其中在該疾病、病癥或疾患中牽涉CFTR活性過高或無活性。當(dāng)在特定疾病、病癥或疾患中牽涉時(shí)CFTR活性過高或無活性，該疾病、病癥或疾患也可以被稱為"CFTR-介導(dǎo)的疾病、病癥或疾患"。因此，在另一方面，本發(fā)明提供治療疾病、病癥或疾患或者減輕其嚴(yán)重性的方法，，其中在該疾病狀態(tài)中牽涉CFTR活性過高或無活性。在本發(fā)明中用作CFTR調(diào)控劑的化合物的活性可以按照本領(lǐng)域和本文實(shí)施例所一般描述的方法加以測(cè)定。也將被領(lǐng)會(huì)的是，本發(fā)明的化合物和藥學(xué)上可接受的組合物可以用在聯(lián)合療法中，也就是說，化合物和藥學(xué)上可接受的組合物可以在一種或多種其他所需治療劑或醫(yī)藥程序同時(shí)、之前或隨后給藥。用在聯(lián)合方案中的特定療法組合(治療劑或程序)將考慮所需治療劑和/或程序與所要達(dá)到的所需治療效果的可相容性。也將被領(lǐng)會(huì)的是，所用療法可以對(duì)同一病癥達(dá)到所需效果(例如，本發(fā)明化合物可以與另一種用于治療同一病癥的藥物同時(shí)給藥)，或者它們可以達(dá)到不同的效果(例如控制任何副作用)。正如本文所用的，在正常情況下給藥以治療或預(yù)防特定疾病或病癥的其他治療劑被稱為"就所治療的疾病或病癥而言是適當(dāng)?shù)?。其他治療劑在本發(fā)明組合物中的含量將不超過在包含該治療劑作為唯一活性成分的組合物中通常的給藥量。優(yōu)選地，其他治療劑在目前所公開的組合物中的量將是通常的包含該藥物作為唯一治療活性成分的組合物中的含量的約50°/。至100°/。。本發(fā)明化合物或其藥學(xué)上可接受的組合物也可以引入到涂覆可植入醫(yī)藥裝置的組合物中，例如假肢、人工瓣膜、脈管移植物、支架和導(dǎo)管。因此，本發(fā)明在另一方面包括涂覆可植入裝置的組合物，包含如上一般性描述和在本文大類與小類中所述的本發(fā)明化合物，和適合于涂覆所述可植入裝置的裁體。在另一方面，本發(fā)明包括涂有組合物的可植入裝置，所述組合物包含如上一般性描述和在本文大類與小類中所述的本發(fā)明化合物，和適合于涂覆所述可植入裝置的載體。適合的涂料和涂覆可植入裝置的一般制備方法描述在美國(guó)專利6,099,562、5，886，026和5，304，121中。涂料通常是生物可相容的聚合材料，例如水凝膠聚合物、聚曱基二硅氧烷、聚己內(nèi)酯、聚乙二醇、聚乳酸、乙烯-乙酸乙烯酯共聚物和它們的混合物。涂料可以選擇性地進(jìn)一步被適合的氟硅酮、多糖、聚乙二醇、磷脂或其組合的表層所覆蓋，以賦予組合物的控釋特征。本發(fā)明的另一方面涉及在生物樣品或患者中調(diào)控CFTR活性(例如體外或體內(nèi))，該方法包括對(duì)患者給予或者使所述生物樣品接觸式I化合物或包含所述化合物的組合物。本文所用的術(shù)語"生物樣品"非限制性地包括細(xì)胞培養(yǎng)物及其提取物；從哺乳動(dòng)物或其提取物獲得的活組織檢查材料；和血液、唾液、尿、糞便、精液、淚液或其他體液或其提取物。在生物樣品中調(diào)控CFTR活性、例如CFTR，可用于本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的多種目的。這類目的的實(shí)例包括但不限于生物與病理現(xiàn)象中的CFTR研究；和新的CFTR調(diào)控劑的對(duì)比評(píng)價(jià)。在另一種實(shí)施方式中，提供了體外或體內(nèi)調(diào)控陰離子通道活性的方法，包括使所述通道與式(I)化合物接觸的步驟。在優(yōu)選的實(shí)施方式中，該陰離子通道是氯化物通道或碳酸氫鹽通道。在其他優(yōu)選的實(shí)施方式中，該陰離子通道是氯化物通道。按照替代的實(shí)施方式，本發(fā)明提供增加細(xì)胞膜中功能性CFTR數(shù)量的方法，包括使所述細(xì)胞與式(I)化合物接觸的步驟。本文所用的術(shù)語"功能性ABC轉(zhuǎn)運(yùn)子"表示能夠發(fā)揮轉(zhuǎn)運(yùn)活性的CFTR。按照另一種優(yōu)選的實(shí)施方式，通過測(cè)量跨膜電位來測(cè)量CFTR的活性。測(cè)量生物樣品中跨膜電位的手段可以采用本領(lǐng)域已知的任意已知方法，例如光學(xué)膜電位測(cè)定法或其他電生理方法。光學(xué)膜電位測(cè)定法釆用如Gonzalez和Tsien所述的電壓-敏感性FRET傳感器(參見Gonzalez,J.E.andR.Y.Tsien(1995)"Voltagesensingbyfluorescenceresonanceenergytransferinsinglecells"BiophysJ69(4):1272-80，andGonzalez,J.E.andR.Y.Tsien(1997)"Improvedindicatorsofcellmembranepotentialthatusefluorescenceresonanceenergytransfer"ChemBiol4(4):269-77)與測(cè)量熒光變化的儀器的組合，例如電壓/離子探針讀數(shù)器(VIPR)(參見Gonzalez,J.E.，K.0ades，等人(1999)"Cell-basedassaysandinstrumentationforscreeningion—channeltargets"DrugDiscovToday4(9):43H39)。這些電壓敏感性測(cè)定法基于膜溶性、電壓敏感性染劑DiSBAC2(3)與熒光磷脂CC2-DMPE之間熒光共振能量轉(zhuǎn)移(FRET)的變化，所述熒光磷脂連接于質(zhì)膜的外部小葉，充當(dāng)FRET供體。膜電位OO的變化導(dǎo)致帶負(fù)電的DiSBAC2(3)跨越質(zhì)膜重新分布，從CC2-DMPE轉(zhuǎn)移的能量相應(yīng)地改變。熒光發(fā)射的變化可以利用VIPRII監(jiān)測(cè)，它是一種整合的液體處理器和熒光檢測(cè)器，被設(shè)計(jì)用來在96-或384-孔微量滴定平板中進(jìn)行細(xì)胞類篩選。另一方面，本發(fā)明提供藥盒，用于體外或體內(nèi)測(cè)量生物樣品中CFTR或其片段的活性，包含(i)包含式(I)化合物或任意上述實(shí)施方式的組合物；和(ii)關(guān)于如下內(nèi)容的指導(dǎo)a)使組合物與生物樣品接觸；和b)測(cè)量所述CFTR或其片段的活性。在一種實(shí)施方式中，藥盒進(jìn)一步包含關(guān)于如下內(nèi)容的指導(dǎo)a)使附加組合物與生物樣品接觸；b)在所述附加化合物的存在下測(cè)量所述CFTR或其片段的活性；和c)比較在附加化合物存在下的CFTR活性與在式(I)組合物存在下的CFTR密度。在優(yōu)選的實(shí)施方式中，藥盒用于測(cè)量CFTR的密度。為了可以更加充分地理解本文所述發(fā)明，提供下列實(shí)施例。應(yīng)當(dāng)理解，這些實(shí)施例僅供說明，不以任何方式被解釋為限制本發(fā)明。具體實(shí)施例方式實(shí)施例1:<formula>formulaseeoriginaldocumentpage53</formula>l-(苯并[d][1,3]二氧雜環(huán)戊烯-6-基)-N-(5-((力-(2-氯苯基)(0)-3-羥基吡咯烷-1-基)甲基)噢唑-2-基)環(huán)丙烷曱酰胺巡鹽酸鹽和l-(苯并[d][1，3]二氧雜環(huán)戊烯-6-基)-N-(5-((i)-(2-氯苯基)(0)-3-羥基吡咯烷-l-基)曱基)噻唑-2-基)環(huán)丙烷曱酰胺(l)鹽酸l-苯并[l，3]二氧雜環(huán)戊烯-5-基-環(huán)丙烷羧酸將苯并[l，3]二氧雜環(huán)戊烯-5-腈(5.10g31.7mmo1)、1-溴-2-氯-乙烷(9.OOOmL108.6mmo1)與千基三乙基氯化銨(BTEAC，0.181g0.795mmol)的混合物加熱至70€，然后緩慢加入50%(wt.M.)氫氧化鈉水溶液(26mL)。將反應(yīng)物在70X:下攪拌24小時(shí)，然后加熱至回流(1浴溫)達(dá)72小時(shí)。將深褐色/黑色反應(yīng)混合物用水(400mL)稀釋，用等體積的乙酸乙酯和二氯甲烷萃取兩次。將堿性水溶液用濃鹽酸酸化至pH小于一，過濾沉淀，用1M鹽酸洗滌。將固體產(chǎn)物溶于二氯甲烷(400mL)，用等體積的1M鹽酸洗滌兩次，用飽和氯化鈉水溶液洗滌一次。將有機(jī)溶液經(jīng)硫酸鈉干燥，蒸發(fā)至干，得到白色至輕微灰白色固體(5.23g，25.4mmo1，80.1%)。ESI-MS邊/z計(jì)算206.1,實(shí)測(cè)207.1(M+l)+。保留時(shí)間2.37分鐘。^醒R(400MHz,DMS0-d6)51.07-1.11(m，2H)，1.38-1.42(m，2H)，5.98(s，2H)，6.79(m，2H)，6.88(m，1H)，12.26(s，1H)。2-溴-1-(氯-苯基)-乙酮在0C下，將溴(3.8mL，65mmol)滴加到l-(2-氯-苯基)-乙酮(10g6Smmol)的乙酸(？5mL)溶液中。然后將混合物升溫至室溫，攪拌過夜。蒸發(fā)混合物至干，無需進(jìn)一步純化即可用于下一步。f-[5-(2-氯-苯甲酰基)-噻唑-2-基]-W屄二甲基-曱脒將硫脲(4.95g，65.0mmol)與二曱氧基甲基-二曱基-胺(23.2g，195mmo1)在曱醇(8OmL)中的混合物加熱至回流達(dá)30分鐘。使混合物冷卻后，加入三乙胺(19.8g，195mmol)和2-溴-l-(氯-苯基)-乙酮(來自上步的粗產(chǎn)物)的甲醇(50mL)溶液。將混合物加熱至回流達(dá)4小時(shí)。除去溶劑，殘余物直接用于下一工藝。(2-氨基-噻唑-5-基)-(2-氯-苯基)-曱酮將粗的F一[5一(2-氯-苯曱?；?-噢唑-2-基]-W^二甲基-曱脒溶于10WHC1(150mL)，加熱至70匸達(dá)4小時(shí)。過濾沉淀，用乙醚洗滌，然后懸浮在10y。碳酸鈉溶液(250mL)中。將懸液攪拌l小時(shí)，過濾沉淀，用乙醚洗滌，風(fēng)干，得到(2-氨基-噻唑-5-基)-(2-氯-苯基)-甲酮，為褐色固體(8.5g，36mmo1，55%從l-(2-氯-苯基)-乙酮計(jì))。^NMR(400MHz，DMS0_d6)57.27(s，1H)，7.41-7.58(m，4H)，8.37(s，2H).ESI-MS邁A計(jì)算238.0，實(shí)測(cè)239.3(M+l)+'1-苯并[1，3]二氧雜環(huán)戊烯-5-基-環(huán)丙烷羧酸[5-(2-氯-苯甲?；?-漆唑-2-基]-酰胺在氮下，將l-苯并[l，3]二氧雜環(huán)戊烯-5-基-環(huán)丙烷羧酸(1.29g，6.28mmol)置于經(jīng)過烘箱干燥的燒瓶中。加入亞硫酰氯(3mL)和"^"二甲基曱酰胺(0.3mL)，將溶液攪拌2小時(shí)。在真空下除去過量亞硫酰氯，將所得固體懸浮在含有三乙胺(l.77mL，12.6mmol)的30mL無水1，4-二嗜,烷中。向該懸液緩慢加入懸浮在10mL無水l，4-二喁烷中的(2-氨基-噻唑-5-基)-(2-氯-苯基)-甲酮(1.50g，6.28鵬o1)。將所得懸液攪拌20分鐘。過濾混合物，然后蒸發(fā)濾液至干。將粗產(chǎn)物溶于50mL二氯曱烷，用50mL1NHC1、飽和碳酸氫鈉水溶液和飽和氯化鈉水溶液洗滌三次。有機(jī)層然后經(jīng)硫酸鈉干燥，蒸發(fā)至干，得到產(chǎn)物，為米色固體(1.51g，3.54mmo1，56.4%)。^NMR(400MHz，DMSO-d6)51.20-1.24(m，2H)，1.54-1.57(m，2H)，6.01(s，2H)，6.88(d，/=1.3Hz，2H)，6.98(s，1H)，7.48-7.52(m，1H)，7.56-7.60(m，3H)，7.77(s，1H)，11.98(s，1H)ESI-MS歷/z計(jì)算426.0，實(shí)測(cè)427.3(M+l)+;保留時(shí)間3.46分鐘。1-(苯并[d[1，3]二氧雜環(huán)戊烯-6-基)-N-(5-((2-氯苯基)(羥基)甲基)噢唑-2-基)環(huán)丙烷甲酰胺將1-苯并[1，3]二氧雜環(huán)戊烯-5-基-環(huán)丙烷羧酸[5-(2-氯-苯曱?；?-噻唑-2-基]-酰胺(1.0g，2,3mmol)懸浮在150mL無水甲醇中。緩慢加入硼氫化鈉(l.3g，35mmo1)，將所得淡黃色溶液在室溫下攪拌1小時(shí)。將粗產(chǎn)物蒸發(fā)至干，然后溶于少量乙酸乙酯。將有機(jī)層用等體積的1N鹽酸、飽和碳酸氫鈉水溶液和飽和氯化鈉水溶液洗滌三次。有機(jī)層然后經(jīng)硫酸鈉干燥，過濾，蒸發(fā)至干，得到產(chǎn)物，為米色固體(0.64g，1.5mmol,63%)。^NMR(400MHz,DMS0-d6)51.10-1.14(m，2H)，1.41-1.45(m，2H)，6.00(s，2H)，6.14(s，1H)，6.86(d,/=1.0Hz，2H)，6.95(t，/=1.0Hz，1H)，7.14(d,/=0.6Hz，1H)，7.29-7.34(m，1H)，7.38-7.43(m，2H)，7.71(d,/=7.5Hz，1H),10.93(s,1H)ESI-MS邁A計(jì)算428.1，實(shí)測(cè)429.5(M+l)+保留時(shí)間3.17分鐘。l-(苯并M[l，3]二氧雜環(huán)戊烯-5-基)-^(5-((2-氯苯基)(0)-3-羥基吡咯烷-l-基)甲基)蓉唑-2-基)環(huán)丙烷甲酰胺<formula>formulaseeoriginaldocumentpage57</formula>將1-苯并[1，3]二氧雜環(huán)戊烯-5-基-環(huán)丙烷羧酸[5-[(2-氯-苯基)-羥基-甲基]-噻唑-2-基]-酰胺(0.500g，1.17mmol)置于含有三乙胺(984pL，7.02咖ol)的10mL無水二氯甲烷中。將混合物冷卻至O匸，加入甲磺酰氯(364jiL，4.68mmo1)，隨后立即加入(A)-吡咯烷-3-醇(945pL，11.7mmo1),將溶液在室溫下攪拌10分鐘。將粗產(chǎn)物用等體積的飽和碳酸氫鈉水溶液繼之以飽和氯化鈉水溶液洗滌三次。有才;u層然后經(jīng)硫酸鈉干燥，蒸發(fā)至干。粗混合物經(jīng)過柱色鐠純化(20-90%乙酸乙酯的己烷溶液，硅膠)，得到產(chǎn)物，為白色固體(194.2mg，0.390mol，33.3%)。^纖(400MHz，DMSO-山)51.09-1.15(m，2H)，1.41-1.44(m，2H)，1.54-1.63(m，1H)，1.93-2.77(m，5H)，4.20(s，1H)，4.72-4.77(m，1H)，4.96(d,/=7.0Hz，1H)，6.00(s，2H)，6.85(d，/=0.9Hz，2H)，6.95(s，1H)，7.24-7.29(m，1H)，7.37-7.43(m，3H)，7.76-7.80(m，1H)，11.03(s，1H)。ESI-MS邁/z計(jì)算497.1，實(shí)測(cè)498.1(M+l)+;保留時(shí)間2.36分鐘。l-(苯并[d[1，3]二氧雜環(huán)戊烯-5-基)-薩(5-((2-氯苯基)(0)-3-羥基吡咯烷-l-基)甲基)噻唑-2-基)環(huán)丙烷甲酰胺鹽酸鹽<formula>formulaseeoriginaldocumentpage57</formula>將HC1的乙醚溶液(O.1556mL，0.3112mmo1，1M)緩慢加入到經(jīng)過攪拌的l-(苯并[d[1，3]二氧雜環(huán)戊烯-5-基)-戶(5-((2-氯苯基)(0)-3-羥基吡咯烷-1-基)甲基)噻唑-2-基)環(huán)丙烷曱酰胺(0.1550g，0.3112mmo1)的100mL無水二氯甲烷溶液中。將溶液蒸發(fā)至干，得到純產(chǎn)物(O.1654g，0.3095，99.45%)。ESI-MS邁/z計(jì)算497.1，實(shí)測(cè)498.1(M+l)+;保留時(shí)間5.74分鐘。l-(苯并[1,3]二氧雜環(huán)戊烯-6-基)-薩(5-((5)-(2-氯苯基)(0)-3-羥基吡咯烷-l-基)甲基)瘞唑-2-基)環(huán)丙烷甲酰胺(1)鹽酸鹽和l-(苯并[d[1，3]二氧雜環(huán)戊烯-6-基)-^(5-(W)-(2-氯苯基)(0)-3-羥基吡咯烷-1-基)曱基)噻唑-2-基)環(huán)丙烷曱酰胺(2)鹽酸鹽利用來自ChiralTechnologies的ChiralpakAS-H4.6mmx250mm柱分離如上制備的l-(苯并[d[1，3]二氧雜環(huán)戊烯-6-基)-N-(5-((2-氯苯基)(0)-3-羥基吡咯烷-l-基)甲基)噻唑-2-基)環(huán)丙烷甲酰胺鹽酸鹽。將20-25nL的2mg/mL1-(苯并[d][1，3]二氧雜環(huán)戊烯-6-基)-^(5-((2-氯苯基)(M)-3-羥基吡咯烷-l-基)甲基)噻唑-2-基)環(huán)丙烷曱酰胺鹽酸鹽的曱醇溶液注射上ChiralpakAS-H柱，用10%的50/50(v/v)乙醇與甲醇在己烷中的混合物洗脫，流速l.SmL/min。在這些條件下第一洗脫產(chǎn)物的保留時(shí)間為8.2rnin(ChiralpakAS-H柱)。該產(chǎn)物在Chiralpak0J-H4.6mmx250mm柱上的保留時(shí)間為14.5min(25%的50/50(v/v)乙醇與甲醇在己烷中的混合物，流速1.OmL/min.)。使用ChiralpakAS-H柱，第二產(chǎn)物洗脫于9.6min。該第二產(chǎn)物在ChiralpakOJ-H4.6mmx250mm柱上的保留時(shí)間為10.9min(25%的50/50(v/v)乙醇與甲醇在己烷中的混合物，流速1.OmL/min.)。實(shí)施例2(力-l-((2-(1-(苯并[d[1，3]二氧雜環(huán)戊烯-6-基)環(huán)丙烷曱酰氨基)噻唑-5-基)(2-氯苯基)曱基)吡咯烷-3-基(l《2i，55)-2-異丙基-5-甲基環(huán)己基碳酸酯將l-(苯并M[1,3]二氧雜環(huán)戊烯-5-基)-f(5-((2-氯苯基)((W)-3-羥基吡咯烷-l-基)甲基)噻唑-2-基)環(huán)丙烷甲酰胺(3.OOg，6.02mmo1)懸浮在含有^^二甲基吡啶-4-胺(2.20g，18.Ommol)的200mL無水二氯甲烷中。向懸液緩慢加入(l《2A55)-2-異丙基-5-甲基環(huán)己基氯甲酸酯(l.91mL，9.00mmo1)，將所得混合物加熱至回流達(dá)16小時(shí)。使所得淡黃色溶液冷卻至室溫，用20mL曱醇稀釋，然后蒸發(fā)至干。利用0-5%甲醇的二氯曱烷溶液梯度在330g硅膠上分離粗反應(yīng)混合物，得到純產(chǎn)物，為淡黃色固體(2.0087g，2.9529mmo1，49.1%)。ESI-MS邁A計(jì)算679.3，實(shí)測(cè)680.5(M+l)+;保留時(shí)間3.88分鐘。0)-l-((i)—(2-(1-(苯并M[1，3]二氧雜環(huán)戊烯-6-基)環(huán)丙烷甲酰氨基)噻唑-5-基)(2-氯苯基)甲基)吡咯烷-3-基(1&2A5i)-2-異丙基-5-甲基環(huán)己基碳酸酯和0)+(0)一(2-(1-(苯并[d[1，3]二氧雜環(huán)戊烯-6-基)環(huán)丙烷甲酰氨基)噻唑-5-基)(2-氟苯基)甲基)吡咯烷-3-基(1&2及，55)-2-異丙基-5-甲基環(huán)己基碳酸酯<formula>formulaseeoriginaldocumentpage60</formula>利用來自ChiralTechnologies的ChiralpakAD21mmx250mm柱分離如上制備的0)-l-(2-(l-(苯并[1，3]二氧雜環(huán)戊烯-6-基)環(huán)丙烷甲酰氨基)噢唑-5-基)(2-氯苯基)甲基)吡咯烷-3-基(1&2A55)-2-異丙基-5-甲基環(huán)己基碳酸酯。將lmL的30mg/mL如上制備的化合物的異丙醇溶液注射上ChiralpakAD柱，用7.5%異丙醇在庚烷中的混合物洗脫，流速15mL/min。第一洗脫產(chǎn)物((必-1-((5)-(2-(1-(苯并[^1[1，3]二氧雜環(huán)戊烯-6-基)環(huán)丙烷曱酰氨基)噻唑-5-基)(2-氯苯基)甲基)吡咯烷-3-基(1&55)-2-異丙基-5-甲基環(huán)己基碳酸酯)的保留時(shí)間為14.4min.(ChiralpakAD柱);'HNMR(400MHz，CD30D)50.79(d，/=7.0Hz，3H)，0.85-1.84(m,18H)，1.86-2.04(m，3H)，2.23-2.34(m，1H)，2.43-2.51(m，1H)，2.62-2.69(m，1H)，2.73-2.78(m，2H)，4.45-4.54(m，1H)，5.04-5.08(m，1H)，5.12(s，1H)，5.99(s，2H)，6.82(d，/-8.5Hz，1H)，6.93-6.97(m，2H)，7.25(t，/=6.8Hz，1H)，7.32(s，1H)，7.34-7.40(m,2H)，7.85(dd，/-8.1，1.6Hz，1H)。ESI-MS邊/z計(jì)算679.3，實(shí)測(cè)680.5(M+l)+;保留時(shí)間3.91分鐘。第二洗脫產(chǎn)物(W)-l-(W)-(2-(1-(苯并[d[1,3]二氧雜環(huán)戊烯-6-基)環(huán)丙烷曱酰氨基)噻唑-5-基)(2-氯苯基)曱基)吡咯烷-3-基(l&2i，5i)-2-異丙基-5-甲基環(huán)己基碳酸酯)的保留時(shí)間為28.6min(ChiralpakAD柱)。ESI-MS邊A計(jì)算值679.3，實(shí)測(cè)值680.5(M+l)+;保留時(shí)間3.86分鐘。l-(苯并[^3[1,3]二氧雜環(huán)戊烯-6-基)-^(5-((5)-(2-氯苯基)(0)-3-羥基吡咯烷-l-基)甲基)瘞唑-2-基)環(huán)丙烷甲酰胺(l)鹽酸鹽和l-(苯并[d[1，3]二氧雜環(huán)戊烯-6-基)-^(5-(0)-(2-氯苯基)(0)-3-羥基吡咯烷-l-基)甲基)漆唑-2-基)環(huán)丙烷甲酰胺(2)鹽酸鹽在含有(O.9153g，16.31咖ol)氫氧化鉀的182mL甲醇中，將來自前步的第一洗脫產(chǎn)物(1.20g，1.76mmol)在室溫下攪拌4天。然后冷卻溶液至0。C，向反應(yīng)混合物緩慢加入16.31mL1NHC1。將所得溶液蒸發(fā)至幾乎干燥，然后在100mL二氯甲烷與100mL飽和碳酸氫鈉水溶液中分配。分離各層，將有機(jī)層用等體積的飽和碳酸氯鈉水溶液洗滌兩次，繼之以飽和氯化鈉水溶液洗滌三次。有機(jī)層然后經(jīng)無水硫酸鈉干燥，濃縮，在120g硅膠上純化，利用20-100%乙酸乙酯的己烷溶液梯度洗脫40分鐘，得到純產(chǎn)物l,為白色固體(O.70g，1.4mmo1)。然后將該產(chǎn)物溶于少量二氯甲烷，向該溶液加入1.4mL1MHC1的乙醚溶液。蒸發(fā)溶液至干，得到HC1鹽，為白色固體(O.7818g，1.463mmo1，83.1%)。ESI-MS邁/z計(jì)算497.1，實(shí)測(cè)498.3(M+l)+;保留時(shí)間2.36分鐘。該產(chǎn)物的保留時(shí)間在ChiralpakOJ-H4.6mmx250mm柱上為14.5min(25%的50/50(v/v)乙醇與甲醇在己烷中的混合物，流速l.OmL/min)。力NMR(400MHz，DMSO-ds)5(游離堿)1.07-1.15(m，2H)，1.40-1.44(m，2H)，1.51-1.65(m，1H)，1.95-2.08(m，1H),2.32-2.58(m，4H)，4.10-4.31(m，1H)，4.76(d，7-4.3Hz，1H)，4.95(s，1H)，6.00(s，2H)，6.85(s，2H)，6.95(d，/=0.9Hz，1H),7.26(t，/=7.6Hz，1H)，7.34-7.44(m，3H)，7.78(d，7.7Hz，1H)，11.02(s，1H)。在含有(9.5mg，0.17mmol)氫氧化鉀的15mL甲醇中，將來自前步的第二洗脫產(chǎn)物(0.1018g，0.1497mmol)在室溫下攪拌3天。加入另一份氫氧化鉀(64.8mg，1.15mmo1)，將溶液攪拌另外3天。然后將溶液冷卻至0'C，向反應(yīng)混合物緩慢加入1.319mL1NHC1。將所得溶液蒸發(fā)至幾乎干燥，然后在10mL二氯甲烷與10mL飽和氯化鈉水溶液之間分配。有機(jī)層然后經(jīng)無水硫酸鈉干燥，濃縮，在12g硅膠上純化，利用20-100%乙酸乙酯的己烷溶液梯度洗脫40分鐘。然后用含有2.5%三乙胺的乙酸乙酯沖洗柱子。合并純的級(jí)分，蒸發(fā)至干，得到純產(chǎn)物2，為白色固體(15.7mg，0.0315mmo1)。然后將該產(chǎn)物溶于少量二氯甲烷，向該溶液加入0.(J315mL1MHC1。蒸發(fā)溶液至干，得到HC1鹽，為白色固體(16.8g，0.0315畫1，21.0%)。ESI-MS邁/z計(jì)算497.1，實(shí)測(cè)498.3(M+l)+;保留時(shí)間2.42分鐘。在ChiralpakOJ-H4.6mmx250mm柱上的保留時(shí)間為10.9分鐘(25%的50/50(v/v)乙醇與曱醇在己烷中的混合物，流速1.OmL/min.)。(2-氯亞千基)-l，1-二甲基乙基亞磺酰胺向經(jīng)過攪拌的無水二噶烷(500mL)加入2-氯苯甲醛(34.8g，247.5咖o1)，將溶液在水浴中冷卻至0X:。向醛溶液加入0)-2-甲基丙烷亞磺酰胺(30.0g，247.5mmol)的無水二嗜，烷(100mL)溶液。然后向該溶液緩慢加入Ti(OPr),(105.5g，371.3咖o1)，同時(shí)在OX:下攪拌。使反應(yīng)混合物升溫至251C，在25C下攪拌18h，用NaHCOr淬滅，然后通過短C鹽管過濾，用EtOAc洗脫。從水層中分離有機(jī)層，經(jīng)Na2S04千燥，濃縮。粗產(chǎn)物經(jīng)過柱色鐠純化(0-25%EtOAc/己烷)，得到0)-^(2-氟亞芐基)-1，1-二曱基乙基亞磺酰胺，為黃色液體(45.lg，75%)。'H-醒R,MHz，CDC13)59.05(s，1H)，8.06(dd，J=7.9，1.1Hz，1H)，7.47-7.41(m，2H)，7.37-7.33(m，1H)，1.28(s，9H)。HPLC保留時(shí)間3.45min，10—99%CH3CN，5min流出；ESI-MS244.3m/z(MH+)。叔丁基噻唑-2-基氨基甲酸酉l向2-氨基噻唑(20.Og，199.7咖ol)與(Boc)20(48.Og，219.7mmo1)的無水THF(100mL)溶液加入DMAP(20mg)和Et3N(36.OmL，260.Ommol)。將反應(yīng)混合物在25。C下攪拌18h，用CH2Cl2稀釋，用0.1NHC1(X1)、鹽水(Xl)和H20(Xl)洗滌。從水層中分離有機(jī)層，經(jīng)Na2S04干燥，濃縮。粗產(chǎn)物經(jīng)過柱色語純化(0-40°/EtOAc/己烷)，得到叔丁基噻唑-2-基氨基甲酸酯，為白色固體(20.7g，72%)。屮-麗R(400MHz，CDC13)511.44(s，1H)，7.38(d，J=3.6Hz，1H)，6.89(d，J=3.6Hz，1H)，1.58(s，9H)。HPLC保留時(shí)間2.61min，10-99%CH3CN,5min流出;ESI-MS145.1m/z(MH+)。0)-F(1-((2-叔丁氧基羰基氨基)噻唑-5-基)-1-(2-氯苯基)-甲基)-l，1-二曱基乙基亞磺酰胺將叔丁基噻唑-2-基氨基甲酸酯(15.Og，75.O,ol)的無水THF(175mL)溶液攪拌和冷卻至-78X:。向該溶液緩慢加入i"BuLi(2.5M己烷溶液60.OmL，150.Ommol)。一旦/"BuLi的加入完成，使混合物升溫至-40X:,在-40iC下維持lh，然后冷卻至-78X:。經(jīng)由套管向上述溶液緩慢加入預(yù)先冷卻至-78X:的(必-N-(2-氯亞芐基)-1，1-二甲基乙基亞磺酰胺(IO.Og,41.O,ol)的無水THF(175mL)溶液。將反應(yīng)物在-78lC下保持0.5h，升溫至室溫，在室溫下攪拌2h。然后用NH4C1水溶液淬滅反應(yīng)，用EtOAc萃取粗產(chǎn)物(X3)。合并有機(jī)層，經(jīng)Na2S04干燥，濃縮。粗產(chǎn)物經(jīng)過柱色i普純化(0-80%EtOAc/己烷)，得到0)-^(l-((2-叔丁氧基羰基氨基)噻唑-5-基)-l-(2-氯苯基)-曱基)-l，1-二曱基乙基亞磺酰胺的非對(duì)映體混合物，為黃色固體(15.lg，<formula>formulaseeoriginaldocumentpage63</formula>83%),直接用于下一步。0)-AK5)-l-(2-氨基噻唑-5-基)-l-(2-氯苯基)甲基)-l，1-二甲基乙基亞磺酰胺和W)0)-1-(2-氨基噻唑-5-基)-1-(2-氯苯基)曱基)-l，l-二甲基乙基亞磺酰胺o向0)-薩(1-((2-叔丁氧基羰基氨基)噻唑-5-基)-l-(2-氯苯基)-甲基)-l，l-二曱基乙基亞磺酰胺(7.0g，15.8mmol)的CH2C12(28mL)溶液加入三氟乙酸(28mL)。將反應(yīng)物在室溫下攪拌3.5h。在真空下除去三氟乙酸和CH2C12。將粗產(chǎn)物重新溶于CH2C12，用NaHC03水溶液(20mLX2)和水(20mLXl)洗滌，經(jīng)Na2S0,干燥，濃縮。粗產(chǎn)物經(jīng)過柱色譜純化(0-5%EtOH/EtOAc)，得到W)-N-(5)一l-(2-氨基噻唑-5-基)-l-(2-氯苯基)甲基)-l，l-二甲基乙基亞磺酰胺和(i)-N-0)-1-(2-氨基噻唑-5-基)-1-(2-氯苯基)甲基)-1，1-二甲基乙基亞磺酰胺。<formula>formulaseeoriginaldocumentpage64</formula>0)-f(5)-1-(2-氨基噻唑-5-基)-1-(2-氯苯基)甲基)-1，1-二甲基乙基亞磺酰胺黃色固體，4.3g(79%)。力-醒R(400MHz，CDC13〕57.53(dd，J-7.6,1.8Hz，1H)，7.38(dd，J=7.7，1.5Hz，1H)，7.32(td，J=7.5，1.6Hz，1H)，7.27(td，J=7.5，1.8Hz，1H)，6.84(d，J=0.7Hz，1H)，6.17(s,2H)，6.07(d，J=4.5Hz，1H)，4.17(d，J-4.6Hz，1H)，1.26(s，9H)。HPLC保留時(shí)間2.11min，10-99%CH3CN，5min流出；ESI-MS344.0m/z(MH+)。W)-^~0)-l-(2-氨基噻唑-5-基)-1-(2-氯苯基)曱基)-1，1-二甲基乙基亞磺酰胺黃色固體，596mg，(11%)。HPLC保留時(shí)間2.35min，10-99%CH3CN,5min流出；ESI-MS344.0m/z(MH+)。GS)-;M5-(O)-叔丁基亞磺酰氨基(2-氯苯基)甲基)噻唑-2-基)-1-(苯并[d][1，3]二氧雜環(huán)戊烯-5-基)環(huán)丙烷甲酰胺乂《向l-(苯并[d][1，3]二氧雜環(huán)戊烯-5-基)環(huán)丙烷羧酸(2.16g，10.5咖ol)緩慢加入SOCl2(2.3mL，31.5mmo1)繼之以DMF(3滴)。將反應(yīng)混合物在60'C下加熱0.5h。在真空下除去過量SOCh。然后將酰氯(IO.5mmol)溶于無水CH2Cl2(16mL)，緩慢加入到冷的(溫度~0匸)0)-滬(5)-l-(2-氨基噻唑-5-基)+(2-氯苯基)甲基)-1，1-二甲基乙基亞磺酰胺(3.6g，10.5mmol)與Et3N(7.33mL，52.6mmol)的無水CH2C12(16mL)溶液中。將反應(yīng)混合物在25C下攪拌18h,用012(:12稀釋，用INHC1(50mLX2)、NaHC03(50邁LX1)和鹽水(50mLX1)洗滌。從水層中分離有機(jī)層，經(jīng)Na2S0,干燥，濃縮。粗產(chǎn)物經(jīng)過柱色鐠純化(0-80%Et0Ac/己烷)，得到(5)-A^(5-(W)-叔丁基亞磺酰氨基—(2-氯苯基)曱基)噻唑-2-基)-1-(苯并[d][1，3]二氧雜環(huán)戊烯-5-基)環(huán)丙烷甲酰胺，為黃色固體(4.7g,84%)。力-NMR(400MHz，CDC13)58.52(s，1H)，7.60(dd，J=7.7，1.7Hz，1H)，7.35(dd，J=7.8，1.4Hz，1H)，7.32(dd，J=7.5，1.4Hz，1H)，7.29(d，J=0.7Hz，1H)，7.23(dd，J=7.6，1.7Hz，1H)，6.89(dd，J=7.9，1.8Hz，1H)，6.86(d，J=1.6Hz，1H)，6.81(d，J=7.9Hz，6.21(d，J-4.0Hz，1H)，6.01(s，2H)，3.93(d，J-4.0Hz，lH)，1.75-1.66(m，2H)，1.27(s，9H)，1.22(t，J=3.3Hz，2H)HPLC保留時(shí)間3.52min，10-99°/。CH3CN，5min流出；ESI-MS532.0m/z(MH+)。(5)-廬(5-(氨基(2-氯苯基)曱基)噻唑-2-基)-1-(苯并[d][1，3]二氧雜環(huán)戊烯-5-基)環(huán)丙烷甲酰胺向(5)-薩(5-(0)-叔丁基亞磺酰氨基-(2-氯苯基)曱基)噻唑-2-基)-l-(苯并[d][1，3]二氧雜環(huán)戊烯-5-基)環(huán)丙烷-酰胺(11.25g，21.19mmol)的MeOH(100mL)溶液加入4MHC1的二嚙烷溶液(32mL，128mmo1)。將反應(yīng)混合物在25"C下攪拌1.5h，蒸發(fā)至干。將粗產(chǎn)物溶于CH2C12。將有機(jī)層用NaHCO3水溶液(50mLX2)、鹽水(50mLXl)洗滌，經(jīng)Na2S04干燥，濃縮。粗產(chǎn)物經(jīng)過柱色鐠純化(0-2.5%Et3N-EtOAc),得到(5)(5-(氨基(2-氯苯基)甲基)噻唑-2-基)-l-(苯并[d][1，3]二氧雜環(huán)戊烯-5-基)環(huán)丙烷甲酰胺(6.5g，72%，>99%ee)。'H-NMR(400MHz，CDC13)58.51(s，1H)，7.60(dd，J=7.7，1.7Hz，1H)，7.33(dd，J-7.9，1.3Hz，1H)，7.29-7.25(m，1H)，7.20(td，J=7.6，1.7Hz，1H)，7.16(d，J=1.0Hz，1H)，6.89(td，J-7.8，1.7Hz，2H)，6.80(d，J=7.9Hz，1H)，6.01(s,2H)，5.79(s，1H)，1.86(bs，2H)，1.72-1.69(m，2H)，1,22-1.19(m，2H)HPLC保留時(shí)間2.66min，10-99%CH3CN，5min流出；ESI-MS428.1m/z(MH+)。l-(苯并[d][1，3]二氧雜環(huán)戊烯-5-基)-^(5-((5)-(2-氯苯基)(0)-3-二甲基-叔丁基甲硅烷基羥基吡咯烷-l-基)甲基)瘞唑-2-基)環(huán)丙烷甲酰胺向(5)-,(5-(氨基(2-氯苯基)甲基)漆唑-2-基)-l-(苯并[d][1，3]二氧雜環(huán)戊烯-5-基)環(huán)丙烷甲酰胺(214mg，0.5mmol)的MeOH(2.5mL)溶液加入W)-4-氯-3-二甲基-叔丁基羥基丁醛(142mg，0.6mmo1)。將反應(yīng)混合物在25t:下攪拌5mU，然后加入NaBH4(28mg，0.75mmo1)。繼續(xù)在25X:下攪拌lh。將反應(yīng)物用H20稀釋，用EtOAc萃取.合并有機(jī)層，用鹽水洗滌，經(jīng)MgS04干燥。除去溶劑后，殘余物經(jīng)過柱色譜純化(10-20%Et0Ac-己烷)，得到l-(苯并[d][1，3]二氧雜環(huán)戊烯-5-基)-滬(5-(OS)-(2-氯苯基)(W)-3-二曱基-叔丁基甲硅烷基羥基吡咯烷-l-基)甲基)噻唑-2-基)環(huán)丙烷甲酰胺(162mg，53%)。^一NMR(400MHz,CDC13)58.45(s，1H)，7.81(dd,J=8.1，1.6Hz，1H)，7.28(s，1H)，7.25-7.22(m，2H)，7.13-7.09(m，1H)，6.85(td，J=7.7，1.7Hz，2H)，6.77(d，J=7.9Hz，1H)，5.98(s，2H)，5.05(s，1H)，4.36-4.31(m，1H)，2.81(dd，J=9.8，6.2Hz，1H),2.57-2.46(m，2H)，2.37(dd，J=9.8，4.5Hz，1H)，2.08-1.99(m，1H)，1.73-1.62(m，3H)，1.17(t，J=3.9Hz，2H)，0.85(s，9H)，—0.01(d，J=6.9Hz，6H)。HPLC保留時(shí)間3.51min，10-99%CH3CN，5min流出；ESI-MS612.41m/z(MH+)。l-(苯并[d][1,3]二氧雜環(huán)戊烯-5-基)-^(5-((5)-(2-氯苯基)(O)-羥基吡咯烷-l-基)曱基)噻唑-2-基)環(huán)丙烷甲酰胺(1)將l-(苯并[d][1,3]二氧雜環(huán)戊烯-5-基)-AK5-((5)-(2-氯苯基)(0)-3-二甲基-叔丁基甲硅烷基羥基吡咯烷-l-基)曱基)噢唑-2-基)環(huán)丙烷甲酰胺(61mg，O.lmmol)與TBAF(1MTHF溶液，0.6mL，0.6mmol)的混合物在25"C下攪拌3h。將反應(yīng)物用1120稀釋，用EtOAc萃取。合并有機(jī)層，用鹽水洗滌，經(jīng)MgS04干燥。除去溶劑后，殘余物經(jīng)過柱色鐠純化(10-20%EtOAc-己烷)，得到l-(苯并[d][1，3]二氧雜環(huán)戊烯-5-基)-^(5-((5)-(2-氯苯基)(O)-羥基吡咯烷-l-基)曱基)蓬唑-2-基)環(huán)丙烷甲酰胺(l)(30mg,62%,>99%ee)。^-NMR(400MHz，DMS0-d6)511.00(s，1H)，7.79(dd，J=7.8,1.5Hz，1H)，7.43-7.37(m，3H)，7.26(td，J=7.6，1.4Hz，1H)，6.95(s，1H),6.86(d，J-0.7Hz,2H)，6.00(s，2H)，4.96(s，1H)，4.76(d，J=4.4Hz，1H)，4.20(ddd，J=6.6，3.4Hz,1H)，2.56-2.45(m，2H)，2.43-2.36(m，2H)，2.06-1.97(m，1H)，1.62-1.54(m，1H)，1.43(q，J=3.7Hz，2H)，1.14-1.09(m，2H)。HPLC保留時(shí)間2.85min，10-99%CH3CN，5min流出；ESI-MS498.0m/z(MH+)。0)-^(5-(0)-叔丁基亞磺酰氨基(2-氯苯基)甲基)噻唑-2-基)-1-(苯并[d][1，3]二氧雜環(huán)戊烯-5-基)環(huán)丙烷甲酰胺利用與(5)-^(5-(0)-叔丁基亞磺酰氨基(2-氯苯基)甲基)噻唑-2-基)-1-(苯并[d][1，3]二氧雜環(huán)戊烯-5-基)環(huán)丙烷甲酰胺相同的方案，從W)-薩(力-1-(2-氨基噻唑-5-基)-1-(2-氯苯基)甲基)-1，l-二甲基乙基亞磺酰胺和l-(苯并[d][1，3]二氧雜環(huán)戊烯-5-基)環(huán)丙烷羧酸制備0)-F(5-(0)-叔丁基亞磺酰氨基(2-氯苯基)甲基)噻唑-2-基)-l-(苯并[d][1，3]二氧雜環(huán)戊烯-5-基)環(huán)丙烷甲酰胺。^-麗R(400MHz，CDC13)58.55(s,1H)，7.62(dd，J=7.7，1.7Hz，1H)，7.37(d,J=0.7Hz，1H)，7.34(dd，J=7.8，1.4Hz，1H)，7.31-7.20(m，2H)，6.87(td，J-8.4，1.7Hz，2H)，6.81(d，J=7.9Hz，1H)，6.30(d，J=2.8Hz,1H)，6.01(s，2H)，3.74(d，J=2.8Hz，1H)，1.71-1.68(m，2H)，1.24(s，9H)，0.88(t，J=6.9Hz,2H)。HPLC保留時(shí)間3.59min，10-99%CH3CN，5min流出；ESI-MS532.1m/z(MH+)。W)-薩(5-(氨基(2-氯苯基)甲基)噻唑-2-基)-l-(苯并[d][1，3]二氧雜環(huán)戊烯-5-基)環(huán)丙烷甲酰胺利用與(5)-A^(5-(氨基(2-氯苯基)甲基)噻唑-2-基)-1-(苯并[d][1，3]二氧雜環(huán)戊烯-5-基)環(huán)丙烷甲酰胺所述相同的方案，從W)-^(5-(W)-叔丁基亞磺酰氨基(2-氯苯基)甲基)噻唑-2-AM基)-l-(苯并[d][1，3]二氧雜環(huán)戊烯-5-基)環(huán)丙烷甲酰胺制備0)-舲(5-(氨基(2-氯苯基)甲基)噻唑-2-基)-1-(苯并[d][1，3]二氧雜環(huán)戊烯-5-基)環(huán)丙烷甲酰胺。卞-NMR(權(quán)MHz，CDC13)58.47(s，1H)，7.60(dd，J=7.7,1.7Hz，1H)，7.33(dd，J-7，9，1.3Hz，1H)，7.27(td，J-7.4，1.5Hz，1H)，7.20(td，J=7.6，1.8Hz,1H)，7.16(d，J-1.0Hz，1H)，6.89(td，J-8.2，1.7Hz，2H)，6.81(d，J=7.9Hz，1H)，6.01(s，2H)，5.79(s，1H)，1.89(s，2H)，1.72-1.70(ffl，2H)，1.22-1.19(m，2H)。HPLC保留時(shí)間2.52min，10-99%CH3CN，5min流出；ESI-MS428.2m/z(MH+)。l-(苯并[d][1，3]二氧雜環(huán)戊烯-5-基)-滬(5-(W)-(2-氯苯基)(("-3-二甲基-^又丁基甲硅烷基羥基吡咯烷-l-基)甲基)蓉唑-2-基)環(huán)丙烷曱酰胺利用與l-(苯并[d][1，3]二氧雜環(huán)戊烯-5-基)-AK5-((5)-(2-氯苯基)(W)-3-二曱基-叔丁基甲硅烷基羥基吡咯烷-l-基)曱基)噻唑-2-基)環(huán)丙烷曱醜胺相同的方案，從W)-^(5-(氨基(2-氯苯基)曱基)噻唑-2-基)-l-(苯并[d][1，3]二氧雜環(huán)戊烯-5-基)環(huán)丙烷甲酰胺制備l-(苯并[d][1，3]二氧雜環(huán)戊烯-5-基)-戶(5-(W)-(2-氯苯基)((A)-3-二甲基-叔丁基甲硅烷基羥基吡咯烷-l-基)甲基)噻唑-2-基)環(huán)丙烷甲酰胺。1H-NMR(400MHz，CDCh)58.45(s，1H)，7.79(dd，J-8.1,1.5Hz，1H),7.28-7.23(m，3H)，7.14-7.10(m,1H)，6.85(td，J=8.1，1.7Hz，2H)，6.78(d，J-7.9Hz，1H)，5.99(s，2H)，5.08(s，1H)，4.36-4.31(m，1H)，2.94(dd，J=9.9，6.3Hz，1H)，2.65(td，J-8.4，3.9Hz，1H)，2.56(q，J-8.3Hz，1H)，2.16(dd，J-9.9，4.6Hz，1H)，2.06-1.97(m，1H)，1.73-1.62(m，3H)，1.20-1.15(m，2H)，0.84(s，9H)，-0.01(d，J=7.9Hz，6H)。HPLC寸呆留時(shí)間3.51min，10-99%CH3CN，5min流出；ESI-MS612.41m/z(MH+)。l-(苯并[d][1，3]二氧雜環(huán)戊烯-5-基)-舲(5-(0)-(2-氯苯基)'(W)-羥基吡咯烷-l-基)甲基)噻唑-2-基)環(huán)丙烷甲酰胺(2)利用與l-(苯并[d][1，3]二氧雜環(huán)戊烯-5-基)-薩(5-(CS)-(2-氯苯基)(W)-羥基吡咯烷-l-基)曱基)噻唑-2-基)環(huán)丙烷甲酰胺所述相同的方案，從l-(苯并[d][1，3]二氧雜環(huán)戊烯-5-基)-f(5-(0)-(2-氯苯基)(0)-3-二甲基-叔丁基甲硅烷基羥基吡咯烷-l-基)甲基)噻唑-2-基)環(huán)丙烷甲酰胺制備l-(苯并[d][1，3]二氧雜環(huán)戊烯-5-基)-舲(5-(W)-(2-氯苯基)(0)-羥基吡咯烷-l-基)甲基)噻唑-2-基)環(huán)丙烷甲酰胺。力-NMR(400MHz，DMS0-d6)511.01(s，1H)，7.79(dd，J=7.8，1.6Hz，1H)，7.45-7.39(m,3H)，7.30-7.26(m，1H)，6.97(s，1H)，6.87(d，J=0.9Hz，2H)，6.02(s，2H)，4.99(s，1H)，4.73(d，J=4.3Hz，1H)，4.24-4.18(m，1H)，2.72(dd，J=9.9，6.lHz，1H)，2.62(q，J=7.8Hz,1H)，2.37—2.32(m，1H)，2.22(dd,J-9.9,3.2Hz，1H)，2.04-1.96(m，1H)，1.64-1.57(m，1H)，1.44(q，J=3.8Hz，2H)，1.13(t，J=3.8Hz,2H)。HPLC保留時(shí)間2.56min，10-99%CH3CN，5min流出；ESI-MS498.3m/z(MH+).利用下列流程A、流程B和流程C所述方法制備如下引用的本發(fā)<formula>formulaseeoriginaldocumentpage71</formula>a)Ti(0Pr)4，二噃烷或THF;b)(Boc)力，E"N，DMAP，THF;c)n-BuLi，THF;d)50%TFA，CH2C12。流程B:<formula>formulaseeoriginaldocumentpage71</formula>a)S0C12，DMF，60t!;b)Et3N,CH2C12;c)HC1的二鳴烷溶液，CH3OH;d)NaBH4(LG-離去基團(tuán))。流程C:OHaa)S0C12，DMF，601C;b)Et3N，CH2C12;c)HC1的二噶烷溶液，CH3OH;d)NaBH4(LG-離去基團(tuán))。1-(苯并[d[1，3]二氧雜環(huán)戊烯-5-基)環(huán)丙烷羧酸將2-(苯并[1，3]二氧雜環(huán)戊烯-5-基)乙腈(5.10g，31.7mmo1)、l-溴-2-氯-乙烷(9.OOOmL108.6mrno1)與爺基三乙基氯化銨(BTEAC，0.181g，0.795mmol)的混合物加熱至70X:，然后緩慢加入50%(wt./wt.)氫氧化鈉水溶液(26mL)。將反應(yīng)物在70"C下攪拌88小時(shí)，然后加熱至回流(130匸浴溫)達(dá)24小時(shí)。將深褐色/黑色反應(yīng)混合物用水(400mL)稀釋，用等體積的乙酸乙酯和二氯甲烷萃取兩次。將堿性水溶液用濃鹽酸酸化至pH小于一，過濾沉淀，用1M鹽酸洗滌。將固體產(chǎn)物溶于二氯甲烷(400mL)，用等體積的1M鹽酸洗滌兩次，用飽和氯化鈉水溶液洗滌一次。將有機(jī)溶液經(jīng)硫酸鈉干燥，蒸發(fā)至干，得到白色至輕微灰白色固體(5.23g，80.1%)。'HNMR(400MHz，DMSO-d6)51.07-1.11(m，2H)，1.38-1.42(m，2H)，5.98(s，2H)，6.79(m，2H)，6.88(m，1H),12.26(s，1H);HPLC保留時(shí)間2.37min,10—99%CH3CN，5min流出;ESI-MS206,1m/z(MH+)。o曱基2，2-二氟苯并[d[1，3]二氧雜環(huán)戊烯-5-羧酸酯XX》將5-溴-2，2-二氟苯并[d[1，3]二氧雜環(huán)戊烯(11.8g，50.Ommol)與四(三苯膦)鈀(O)[5.78g，5.00mmol]在含有乙腈(30mL)和三乙胺(10mL)的甲醇(20mL)中的溶液在一氧化碳?xì)夥?55psi)和75。C(油浴溫度)下攪拌15h。冷卻反應(yīng)混合物，過濾，蒸發(fā)濾液至干。殘余物經(jīng)過硅膠柱色譜純化，得到甲基2，2-二氟苯并[rf][1，3]二氧雜環(huán)戊烯-5-羧酸酯(11.5g),直接用于下一步。(2，2-二氟苯并[d[1，3]二氧雜環(huán)戊烯-5-基)甲醇方法A:在01C下,將來自前步的甲基2，2-二氟苯并[d[1,3]二氧雜環(huán)戊烯-5-羧酸酯(ll.5g)溶于無水四氫呋喃(20mL)緩慢加入到氫化鋁鋰(4.10g，106mmol)的無水THF(100mL)懸液中。然后將混合物升溫至室溫，攪拌lh。將反應(yīng)混合物冷卻至0匸，用水(4.lg)繼之以氫氧化鈉(10%水溶液，4.lmL)處理。過濾所得漿液，用THF洗滌。合并濾液，蒸發(fā)至干，殘余物經(jīng)過硅膠柱色鐠純化，得到(2，2-二氟苯并[d[1，3]二氧雜環(huán)戊烯-5-基)甲醇，為無色的油(7.2g，76%兩步收率)。方法B:在OX:下，向2,2-二氟苯并[rf][1，3]二氧雜環(huán)戊烯-5-甲醛(125g，0.67mol)的無水THF(400mL)溶液逐份加入NaBH4(28g，0.74mol)。將混合物在OX:下攪拌lh，然后倒入500mL水中?；旌衔镉靡宜嵋阴ポ腿?200mLx3)。有機(jī)相經(jīng)Na2S04干燥，在真空中濃縮，得到(2，2-二氟苯并[d[1，3]二氧雜環(huán)戊烯-5-基)甲醇，為無色的油(120g，95%)。5-(氯甲基)-2，2-二氟苯并[d[1，3]二氧雜環(huán)戊烯將(2，2-二氟苯并[1，3]二氧雜環(huán)戊烯-5-基)甲醇(120g，0.64mol)在凈亞硫醜氯(500mL)中的溶液在25C下攪拌2h。在真空中蒸餾除去過量亞硫酰氯。使殘余物在飽和NaHC03(400mL)與二氯甲烷(200mL)之間分配。分離水層，用二氯曱烷萃取(300mLx3)。合并有機(jī)層，干燥，過濾，在真空中濃縮，得到5-(氯甲基)-2，2-二氟苯并二氧雜環(huán)戊烯(117.6g，89%)，直接用于下一步。2-(2，2-二氟苯并[d[1，3]二氧雜環(huán)戊烯-5-基)乙腈將5-(氯甲基)-2，2-二氟苯并[tf][1，3]二氧雜環(huán)戊烯(117.6g，來自上步的粗產(chǎn)物)與NaCN(84g，1.7mmol)在DMSO(800mL)中的混合物在25C下攪拌2h。將反應(yīng)混合物倒入水中，用EtOAc萃取(500mLx3)。合并有機(jī)層，用無水Na2S04干燥，在真空中濃縮，得到粗產(chǎn)物，經(jīng)過柱色鐠純化(P.E./EtOAc10:1)，得到2-(2，2-二氟苯并[d[1，3]二氧雜環(huán)戊烯-5-基)乙腈(77.8g，66%)。NMR(300MHz、CDCh)57.06-7.07(m，3H)，3.75(s，2H)。1-(2,2-二氟苯并[d[1，3]二氧雜環(huán)戊烯-5-基)環(huán)丙烷羧酸借助用于1-(苯并[cd[1，3]二氧雜環(huán)戊烯-5-基)環(huán)丙烷羧酸的工藝制備1-(2，2-二氟苯并[(/][1，3]二氧雜環(huán)戊烯-5-基)環(huán)丙烷羧酸，始于2-(2，2-二氟苯并[d[1，3]二氧雜環(huán)戊烯-5-基)乙腈。得到(86%)白色固體。^NMR(400MHz，CDC13)57.14-7.04(m，2H)，6.98-6.96(m，1H)，1.74-1.64(m，2H)，1.26-1.08(m，2H);ESI-MS邊/z計(jì)算242.04，實(shí)測(cè)241.58(M-l)。叔丁基噻唑-2-基氨基甲酸酯<formula>formulaseeoriginaldocumentpage75</formula>向氨基鑲唑(20.0g，199.7mmol)與(Boc)20(48.0g，219.7mmo1)的無水THF(100mL)溶液加入DMAP(20mg)和Et3N(36.0mL，260.Ommol)。將反應(yīng)混合物在室溫下攪拌18h,用DCM稀釋，用0.1NHC1、H20和鹽水洗滌。從水層中分離有機(jī)層，經(jīng)Na2S04干燥，濃縮。粗產(chǎn)物經(jīng)過柱色鐠純化(0-40。/。EtOAc/己烷)，得到叔丁基噻唑-2-基氨基甲酸酯，為白色固體(20.7g，72%)。力-NMR(400MHz,CDC13)511.44(s,1H)，7.38(d，J-3.6Hz，1H)，6.89(d，J=3.6Hz，1H)，1.58(s,9H);HPLC保留時(shí)間2.61min,10-99%CH3CN，5min流出；ESI-MS145.1m/z(MH+)。叔丁基4-甲基噻唑-2-基氨基甲酸酯<formula>formulaseeoriginaldocumentpage76</formula>向4-甲基漆唑-2-胺(25g,219mmol)與(Boc)20(53g,241mmo1)的無水THF(llOmL)溶液加入DMAP(250mg)和Et3N(39.6mL，285mmo1)。將反應(yīng)混合物在室溫下攪拌18h。然后將反應(yīng)物加熱至回流達(dá)5h，直至根據(jù)LC-MS檢測(cè)不再有原料存在。將反應(yīng)物冷卻至室溫，過濾除去沉淀。將濾液濃縮，然后溶于CH2Ch,用0.INHC1水溶液、&0和鹽水洗滌。有機(jī)層經(jīng)MgS04干燥，濃縮。將殘余物懸浮在己烷中，然后過濾，得到叔丁基4-甲基噻唑-2-基氨基甲酸酯，為奶油色固體(30.9g，66%)。力-麗R(400MHz,DMS0-《)511.30(s，1H)，6.68(d，/=1.0Hz，1H)，2.20(d，/-0.9Hz，3H)，1.47(s，9H);HPLC保留時(shí)間2.68min，10-99%CH3CN，5min流出；ESI-MS215.3m/z(MH+)。<formula>formulaseeoriginaldocumentpage76</formula>(R)-二甲基2-羥基琥珀酸酯<formula>formulaseeoriginaldocumentpage76</formula>向(R)-2-羥基琥珀酸(134g，lmol)的CH30H(500mL)溶液加入曱苯-4-磺酸(9.5g，0.05mol)。將混合物加熱至回流過夜。蒸發(fā)甲醇，然后向殘余物加入水(250mL)。將混合物用飽和NaHC03溶液堿化至pH7-8,用乙酸乙酯萃取。合并有機(jī)層，用鹽水洗滌，經(jīng)無水Na2S04干燥，在減壓下濃縮，得到(R)-二曱基2-羥基琥珀酸酯(140g，86%)。'HNMR(300MHz，CDC13)54.46(dd，/=6Hz，4.8Hz，1H)，3.74(s3H)，3.64(s，3H)，3.42(s，1H)，2.69-2.85(m,2H)。(IO-甲基3，4-二羥基丁酸酯在20'C下，歷經(jīng)30min向(R)-二甲基2-羥基琥珀酸酯(140g，0.86mol)的THF(1400mL)溶液滴加Me2S.BH3(86mL，IOM)。將混合物在20t:下攪拌30min。在IO'C下加入NaBH4U.63g，42.9畫1)，在IO匸下攪拌30min。將混合物升溫至室溫，攪拌lh。向混合物緩慢加入CH30H(200mL)，同時(shí)在冰水浴中冷卻。蒸發(fā)所得混合物，得到(R)-甲基3，4-二羥基丁酸酯(130g，粗產(chǎn)物)。(R)-甲基4-氯-3-羥基丁酸酯向(R)-甲基3，4-二羥基丁酸酯(125.1g，0.93mol)的CH2C12(1.8L)溶液加入PPh3(244.5g，0.93mol)，并且在冰水冷卻下緩慢加入NCS(124.2g，0.93mol)。將混合物在5。C下攪拌20min,然后在室溫下攪拌18h。蒸發(fā)溶劑后，殘余物經(jīng)過柱色譜純化(P.EXE.A20:1-5:1，梯度)，得到(R)-甲基4-氯-3-羥基丁酸酯(33g，26%三步收率)。^畫R(300MHz，CDC13)54.18-4.25(m，1H)，3.68(s，3H)，3.55-3.60(m，2H)，3.32-3.33(d，/-4.2Hz，1H)，2.52-2.68(m，2H)。(R)-甲基3-(叔丁基二甲基甲硅烷氧基)-4-氯丁酸酯將(R)-甲基4-氯-3-羥基丁酸酯(15g，98.7mmol)的CH2C12(240mL)溶液與叔丁基-氯-二甲基-硅烷(17.82g，118.2mmo1)、咪唑(33.6g，493.5mmol)和催化量DMAP(0.6g，4.92mmo1)在室溫N2下攪拌過夜。將反應(yīng)混合物倒入水(150mL)中，滴加冷的HC1水溶液(O.5M)酸化至pH6-7。水相用CH2Cl2萃取(3x60mL)。合并有機(jī)相，用飽和Na2C03溶液、鹽水洗滌，經(jīng)無水Na2S04干燥，濃縮，得到(R)-曱基3-(叔丁基二甲基甲硅烷氧基)-4-氯丁酸酯(30g，粗產(chǎn)物)。(R)-3-(叔丁基二曱基甲硅烷氧基)-4-氯丁醛在-78"C的N2氣氛下，向(R)-甲基3-(叔丁基二曱基甲硅烷氧基)-4-氯丁酸酯(27.9g，104.7mmol)的CH2Ch溶液滴加DIBAL-H(120mL，1M曱苯溶液，120mmo1)。將混合物在-78TC下攪拌4h。在-78'C下向反應(yīng)混合物緩慢加入CH30H(80mL)。然后使溫度逐漸升至室溫。過濾混合物，用CH2Clr洗涂濾餅。合并濾液，在減壓下濃縮，經(jīng)過柱色傳純化(PE)，得到(R)-3-(叔丁基二甲基甲硅烷氧基)-4-氯丁醛(13g，60%兩步收率)。力NMR(300MHz,CDC13)59.80(t，/=1.6Hz，1H)，4.35-4.42(m，1H)，3.53(dd，/-11.1Hz，4.8Hz，1H)，3.46(dd，/=12Hz，6.3Hz，1H)，2.63-2.82(m，2H)，0.87(s，9H)，0.12(s，3H)，0.08(s，3H)。(S)-3-(叔丁基二甲基曱硅烷氧基)-4-氯丁醛借助與(R)-3-(叔丁基二曱基甲硅烷氧基)-4-氯丁醛相同的途徑制備(S)-3-(叔丁基二甲基甲硅烷氧基)-4-氯丁醛，始于(S)-2-羥基琥賴酸。力麗R(400MHz,CDC13)59.72(dd，J=1.6，2.2Hz，1H)，4.33-4.28(m，1H)，3.46(dd，J=4.7，11.1Hz，1H)，3.39(dd，J=6.4，11.1Hz，1H)，2.68(dd,J=1.5，4.7Hz，1H)，2.62(dd，J-2.3，6.8Hz，1H)，0.79(s，9H)，0.04(s，3H)，0.01(s，3H)。(R)-N-(2-氯亞千基)-2-曱基丙烷-2-亞磺酰胺向經(jīng)過攪拌的無水二"惡烷(500mL)加入2-氯苯甲醛(34.8g，247.5mmol),將溶液在水浴中冷卻至0C。向醛溶液加入0)-2-甲基丙烷亞磺酰胺(30.0g，247.5mmol)的無水二嚙烷(100mL)溶液。然后向溶液緩慢加入Ti(0Pr)4(105.5g，371.3mmo1),同時(shí)在OX:下攪拌。使反應(yīng)混合物升溫至室溫，攪拌18h，然后用飽和NaHC03水溶液淬滅，通過短C鹽管過濾，用EtOAc洗脫。從水層中分離有機(jī)層，經(jīng)Na2S04干燥，濃縮。粗產(chǎn)物經(jīng)過柱色鐠純化(0-25%EtOAc/己烷)，得到(R)-N-(2-氯亞芐基)-2-甲基丙烷-2-亞磺酰胺，為黃色液體(45.lg，75%)。力-纖(權(quán)MHz，CDC13)59.05(s，1H)，8.06(dd，J-7.9，1.1Hz，1H),7.47-7.41(m,2H)，7.37-7.33(m，1H)，1.28(s，9H);HPLC保留時(shí)間3.45min，10-99%CH3CN，5min流出；ESI-MS244.3m/z(MH+)。(R)-N-(3,4-二氯亞千基)-2-甲基丙烷-2-亞磺酰胺借助用于(R)-N-(2-氯亞爺基)-2-甲基丙烷-2-亞磺酰胺的工藝制備(R)-N-(3,4-二氯亞爺基)-2-甲基丙烷-2-亞磺酰胺，始于3,4-二氯苯甲醛和0)-2-甲基丙烷亞磺酰胺。得到(93%)黃色的油，放置后結(jié)晶。力-NMR(400MHz,CDC13)S8.51(s，1H)，7.96(d，J=1.9Hz，1H)，7.66(dd，J-1.9,8.3Hz，1H)，7.57(d，J-8.3Hz，1H)，1.27(s，9H);HPLC保留時(shí)間3.72min，10-99%CH3CN，5min流出；ESI-MS278.1m/z(MH+)。(R)-N-(2-氯-4-氟亞節(jié)基)-2-甲基丙烷-2-亞磺酰胺借助用于(R)-N-(2-氯亞千基)-2-甲基丙烷-2-亞磺酰胺的工藝制備(R)-N-(2-氯-4-氟亞爺基)-2-甲基丙烷-2-亞磺酰胺，始于2-氯-4-氟苯甲醛和0)-2-甲基丙烷亞磺酰胺。得到(74W無色固體。^-NMR(綱MHz，CDC13)59.00(s，1H)，8,11(dd，J-8.8，6.2Hz，1H)，7.23(dd，J=8.4，2.5Hz，1H)，7.13-7.08(m，1H)，1.29(s，9H);HPLC保留時(shí)間3.46min，10-99%CH3CN，5min流出;ESI-MS262.1m/z(MH+)。(S)-N-(2-氯-4-氟亞節(jié)基)-2-曱基丙烷-2-亞磺酰胺借助用于GO-N-(2-氯亞千基)-2-甲基丙烷-2-亞磧酰胺的工藝制備(S)-N-(2-氯-4-氟亞千基)-2-甲基丙烷-2-亞磺酰胺，始于2-氯-4-氟苯甲醛和(5)-厶甲基丙烷亞磺酰胺。得到(78%)無色固體。力-函R(400MHz，CDCU59.00(s，1H)，8.11(dd，J=6.2，8.8Hz，1H)，7.23(dd，J=2.5，8.4Hz，1H)，7.13-7.08(m,1H)，1.29(s，9H);HPLC保留時(shí)間3.49min，10-99%CH3CN,5min流出;ESI-MS262.1m/z(MH+),(R)-N-(4-氯-2-氟亞節(jié)基)-2-甲基丙烷-2-亞磺酰胺借助用于(R)-N-(2-氯亞千基)-2-甲基丙烷-2-亞磺酰胺的工藝制備(R)-N-(4-氯-2-氟亞芐基)-2-甲基丙烷-2-亞磺酰胺，始于4-氯-2-氟苯甲醛和W)-2-曱基丙烷亞磺酰胺。得到(65%)無色固體。力-歴R(400MHz，CDC13)58.84(s，1H)，7.97—7.93(m，1H)，7.28-7.19(m，2H)，1.27(s，9H);HPLC保留時(shí)間3.53min，10—99%CH3CN，5min流出；ESI-MS262.0m/z(MH+)。(R)-叔丁基5-((2-氯-4-氟苯基)(1，1-二甲基乙基亞磺酰氨基)甲基)瘞唑-2-基氨基甲酸酯攪拌叔丁基噻唑-2-基氨基甲酸酯(2.0g，10.Ommol)的無水THF(25mL)溶液并冷卻至-78°c。向該溶液緩慢加入i-BuLi(2.5M己烷溶液:8.0mL，20.Ommol)。一旦/7-BuLi的加入完成，使混合物在-78。C下維持lh。經(jīng)由套管向上述溶液緩慢加入預(yù)先冷卻至-78。c的(R，E)-N-(2-氯-4-氟亞千基)-2-甲基丙烷-2-亞磺酰胺(1.4g，5.4,ol)的無水THF(25mL)溶液。將反應(yīng)物在-78。C下保持0.5h，升溫至室溫，用仰4(;1水溶液淬滅，用Et0Ac萃取(x3)。合并有機(jī)層，經(jīng)MgS04干燥，濃縮。粗產(chǎn)物經(jīng)過柱色鐠純化(0-80%EtOAc/己烷)，得到00-叔丁基5-((2-氯-4-氟苯基)(1，l-二甲基乙基亞磺酰氨基)甲基)噻唑，2-基氨基甲酸酯的非對(duì)映體混合物，為黃色固體(2.lg，84%)，無需進(jìn)一步純化即可使用。(S)-叔丁基5-((2-氯-4-氟苯基)(1，l-二甲基乙基亞磺酰氨基)甲基)噻唑-2-基氨基曱酸酯借助用于(R)-叔丁基5-((2-氯-4-氟苯基)(1，1-二甲基乙基亞磺酰氨基)甲基)噻唑-2-基氨基曱酸酯的工藝制備(S)-叔丁基5-((2-氯-4-氟苯基)(l，l-二甲基乙基亞磺酰氨基)甲基)噻唑-2-基氨基甲酸酯，始于叔丁基瘞唑-2-基氨基甲酸酯和(S)-N-(2-氯-4-氟亞節(jié)基)-2-曱基丙烷-2-亞磺酰胺。粗產(chǎn)物經(jīng)過柱色鐠純化，得到(S)-叔丁基5-((2-氯-4-氟苯基)(1，l-二甲基乙基亞磺酰氨基)甲基)噻唑-2-基氨基曱酸酯的非對(duì)映體混合物，為橙色-黃色固體(95%)，無需進(jìn)一步純化即可使用。(R)-叔丁基5-((4-氯-2-氟苯基)(1，1-二曱基乙基亞磺酰氨基)甲基)噻唑-2-基氨基甲酸酯借助用于(R)-叔丁基5-((2-氯-4-氟苯基)(l，l-二甲基乙基亞磺酰氨基)甲基)噻唑-2-基氨基甲酸酯的工藝制備(R)-叔丁基5-((4-氯-2-氟苯基)(1，1-二甲基乙基亞磺酰氨基)曱基)噻唑-2-基氨基甲酸酯，始于叔丁基噻唑-2-基氨基甲酸酯和(R)-N-(4-氯-2-氟亞爺基)-2-甲基丙烷-2-亞磺酰胺。粗產(chǎn)物經(jīng)過柱色譜純化，得到(R)-叔丁基5-((4-氯-2-氟苯基)(1，l-二甲基乙基亞磺酰氨基)曱基)噻唑-2-基氨基曱酸酯的非對(duì)映體混合物(78%)，無需進(jìn)一步純化即可使用。(R)-叔丁基5-((3，4-二氯苯基)(l，l-二甲基乙基亞磺酰氨基)甲基)噻唑-2-基氨基甲酸酯借助用于(R)-叔丁基5-((2-氯-4-氟苯基)(1，1-二甲基乙基亞磺酰氨基)甲基)噻唑-2-基氨基甲酸酯的工藝制備(R)-叔丁基5-((3，4-二氯苯基)U,1-二甲基乙基亞磺酰氨基)甲基)噻唑-2-基氨基曱酸酯，始于叔丁基瘞唑-2-基氨基曱酸酯和(R)-N-(3，4-二氯亞千基)-2-甲基丙烷-2-亞磺酰胺。粗產(chǎn)物經(jīng)過柱色鐠純化(用70%EtOAc/己烷洗脫過量叔丁基噻唑-2-基氨基甲酸酯，所需產(chǎn)物隨后用0-15%MeOH/EtOAc洗脫)，得到(R)-叔丁基5-((3，4-二氯苯基)(l，l-二曱基乙基亞磺酰氨基)甲基)噻唑-2-基氨基甲酸酯的非對(duì)映體混合物，為黃色固體(92%),無需進(jìn)一步純化即可使用。(R)-叔丁基5-((2-氯苯基)(l，l-二曱基乙基亞磺酰氨基)甲基)-4-甲基噻唑-2-基氨基甲酸酯借助用于(R)-叔丁基5-((2-氯-4-氟苯基)(1，1-二甲基乙基亞磺酰氨基)甲基)噻唑-2-基氨基甲酸酯的工藝制備(R)-叔丁基5-((2-氯苯基)(1，l-二甲基乙基亞磺酰氨基)曱基)-4-甲基噻唑-2-基氨基甲酸酯，始于叔丁基4-曱基噻唑-2-基氨基甲酸酯和(R)-N-(2-氯亞節(jié)基)-2-甲基丙烷-2-亞磺酰胺。使粗產(chǎn)物吸附于硅膠上，經(jīng)過柱色譜純化(20-80%EtOAc/己烷)，得到(R)-叔丁基5-((2-氯苯基)(1，1-二甲基乙基亞磺酰氨基)甲基)-4-甲基噻唑-2-基氨基甲酸酯的非對(duì)映體混合物，為奶油色固體(90%)，無需進(jìn)一步純化即可使用。(R)-N-((S)-(2-氨基噻唑-5-基)(2-氯-4-氟苯基)甲基)-2-甲基丙烷-2-亞磺酰胺向(R)-叔丁基5-((2-氯-4-氟苯基)(1，l-二甲基乙基亞磺酰氨基)甲基)噻唑-2-基氨基甲酸酯(1.6g，3.5mmol)的CH2C12(6mL)溶液加入TFA(6mL)。將反應(yīng)物在室溫下攪拌2h。在真空下除去TFA和CH2C12。將粗產(chǎn)物重新溶于CH2C12，用NaHC03水溶液洗滌，經(jīng)MgS(^干燥，濃縮。使粗產(chǎn)物從EtOAc中重結(jié)晶，得到(R)-N-((S)-(2-氨基噻唑-5-基)(2-氯-4-氟苯基)曱基)-2-曱基丙烷-2-亞磺酰胺，為無色固體(672mg，53%)。力醒R(400MHz,CDCU57.56(dd,J=8.7，5.9Hz，1H)，7.16(dd，J=8.4，2.6Hz，1H)，7.06(td，J-8.2，2.6Hz，1H)，6.89(d，J-0.8Hz，1H)，6.07(d，J=4.6Hz，1H)，5.22(d，J-2.9Hz，2H)，4.06(d，J=4.6Hz，1H)，1.28(s，9H);HPLC保留時(shí)間2.28min，10-99%CH3CN，5min流出；ESI-MS362.3m/z(MH+)。(S)-N-((R)-(2-氨基噻唑-5-基)(2-氯-4-氟苯基)甲基)-2-甲基丙烷-2-亞磺酰胺<formula>formulaseeoriginaldocumentpage85</formula>借助用于(R)-N-((S)-(2-氨基噻唑-5-基)(2-氯-4-氟苯基)甲基)-2-甲基丙烷-2-亞磺酰胺的工藝制備(S)-N-((R)—(2-氨基噻唑-5-基)(2-氯-4-氟苯基)甲基)-2-甲基丙烷-2-亞磺酰胺，始于(S)-叔丁基5-((4-氯-2-氟苯基)(1，1-二曱基乙基亞磺酰氨基)甲基)噻唑-2-基氨基曱酸酯。粗產(chǎn)物經(jīng)過柱色鐠純化(0-5y。EtOH/EtOAc)，得到所需產(chǎn)物(38%)。力-NMR(400MHz,CDC13)59.14(brs，2H)，7.54(dd，J=5.7，8.7Hz，1H)，7.21(dd，J=2.6，8.1Hz，1H)，7.13-7.08(m，1H)，6.73(d，J=0.6Hz，1H)，6.00(d，J=5.6Hz，1H)，4.67(d，J=5.7Hz，1H)，1.26(s，9H);HPLC保留時(shí)間2.23min，10-99%CH3CN，5min流出；ESI-MS362.3m/z(MH+)。(R)-N-((S)-(2-氨基噻唑-5-基)(4-氯-2-氟苯基)甲基)-2-甲基丙烷-2-亞碌酰胺借助用于(R)-N-((S)—(2-氨基噻唑-5-基)(2-氯-4-氟苯基)甲基)-2-甲基丙烷-2-亞磺酰胺的工藝制備(R)-N-((S)—(2-氨基噻唑-5-基)(4-氯-2-氟苯基)甲基)-2-曱基丙烷-2-亞磺酰胺，始于(R)-叔丁基5-((4-氯-2-氟苯基)(1，l-二曱基乙基亞磺酰氨基)甲基)噻唑-2-基氨基甲酸酯。粗產(chǎn)物經(jīng)過柱色譜純化(O-5%EtOH/EtOAc)，得到橙色固體(87%)。力-腿(400MHz,CDC13)58.62(brs，2H)，7.36(t，J=8.1Hz，1H)，7.21(dd，J=1.7，8.3Hz，1H)，7.16(dd，J=1.9，10.lHz，1H)，6.74(s，1H)，5.81(d,J=5.9Hz，1H)，4.18(d，J=5.9Hz，1H)，1.25(s，9H);HPLC保留時(shí)間2.29min，10-99%CH3CN，5min流出；ESI-MS362.3m/z(MH+)。l-(苯并[d[1，3]二氧雜環(huán)戊烯-5-基)-N-(5-((S)-(2-氯-4-氟苯基)((R)-1，1-二甲基乙基亞磺酰氨基)曱基)噻唑-2-基)環(huán)丙烷甲酰胺在-iox:下，向l-(苯并[rf][1，3]二氧雜環(huán)戊烯-5-基)環(huán)丙烷羧酸(618mg，3.0mmol)的無水CH2Cl2(6mL)溶液緩慢加入(C0C1)2(0.3mL3.4mmo1)，繼之以DMF(3滴)。將反應(yīng)混合物在-10^:下攪拌0.5h。在真空下除去過量(C0C1)2。然后將酰氯(IO.5mmol)溶于無水CH2C12(3mL)，緩慢加入到00-N-((S)-(2-氨基噻唑-5-基)(2-氯-4-氟苯基)甲基)-2-甲基丙烷-2-亞磺酰胺(648mg，1.8mmo1)與Et3N(1.8mL，6咖ol)的無水CH2Cl2(3mL)溶液中。將反應(yīng)混合物在室溫下攪拌lh，用CH2Cl2稀釋，用1NHC1、NaHC03和鹽水洗滌。從水層中分離有機(jī)層，經(jīng)MgS04干燥，濃縮。粗產(chǎn)物經(jīng)過柱色鐠純化(40-60%EtOAc/己烷)，得到l-(苯并[d][1，3]二氧雜環(huán)戊烯-5-基)-N-(5-((S)-(2-氯-4-氟苯基)((R)-1，1-二曱基乙基亞磺酰氨基)甲基)噻唑-2-基)環(huán)丙烷甲酰胺，為無色固體(680mg，69%)。力-麗R(400MHz，CDC13)58.60(s，1H)，7.60(dd，J-8.7，5.9Hz，1H),7.28(d，J=2.0Hz，1H)，7.13(dd，J-8.3，2.6Hz,1H)，7.05(td，J=8.2，2.6Hz，1H)，6.90(td，J-8.3，1.7Hz，2H)，6.83(d，J=7.9Hz，1H)，6.18(d，J-4.3Hz，1H)，6.04(s，2H)，3.90(d，J-4.3Hz，1H)，1.73(td，J-5.4，2.0Hz，2H),1.28(t，J=7.1Hz，2H)，1.29(s，9H)。HPIX保留時(shí)間3.65min，10—99%CH3CN，5min流出；ESI-MS550.5m/z(MH+)。N-(5-((S)-(2-氯-4-氟苯基)((R)-1，1-二甲基乙基亞磺酰氨基)曱基)噻唑-2-基)-1-(2，2-二氟苯并[f/][1，3]二氧雜環(huán)戊烯-5-基)環(huán)丙烷甲酰胺借助用于1-(苯并[d][1，3〗二氧雜環(huán)戊烯-5-基)-N-(5-((S)-(2-氯-4-氟苯基)((R)-1，l-二曱基乙基亞磺酰氨基)甲基)噻唑-2-基)環(huán)丙烷甲酰胺的工藝制備N-(5-((S)-(2-氯-4-氟苯基)((R)-1，1-二甲基乙基亞磺酰氨基)甲基)漆唑-2-基)-1-(2，2-二氟苯并[d][1，3]二氧雜環(huán)戊烯-5-基)環(huán)丙烷甲酰胺，始于l-(2，2-二氟苯并[d[1，3]二氧雜環(huán)戊烯-5-基)環(huán)丙烷羧酸和(R)-N-((S)-(2-氨基噻唑-5-基)(2-氯-4-氟苯基)甲基)-2-甲基丙烷-2-亞磺酰胺。收率(77W。力-NMR(400MHz，CDCU58.63(s，1H)，7.59(dd，J=8.7,5.9Hz，1H)，7.28(s，1H)，7.21-7.11(m，4H)，7.06(td，J=8.2，2.5Hz，1H)，6.18(d，J-4.2Hz，1H),3.92(d，J-4.3Hz，1H)，1.82-1.79(邁，2H)，1.32-1.25(m，11H);HPLC保留時(shí)間3.90min，10-99%CH3CN，5min流出；ESI-MS586.3m/z(MH+)。l-(苯并[d[1，3]二氧雜環(huán)戊烯-5-基)-N-(5-((R)-(2-氟-4-氟苯基)((S)-1，1-二甲基乙基亞磺酰氨基)甲基)噻唑-2-基)環(huán)丙烷甲酰胺借助用于1-(苯并M[1，3〗二氧雜環(huán)戊烯-5-基)-N-(5-((S)—(2-氯-4-氟苯基)((R)-l，l-二甲基乙基亞磺酰氨基)曱基)噻唑-2-基)環(huán)丙烷甲酰胺的工藝制備l-(苯并[c3[1,3]二氧雜環(huán)戊烯-5-基)-N-(5-(00-(2-氯-4-氟苯基)((S)-1，l-二甲基乙基亞磺酰氨基)甲基)噻唑-2-基)環(huán)丙烷曱酰胺，始于l-(苯并[d[1，3]二氧雜環(huán)戊烯-5-基)環(huán)丙烷羧酸和(S)-N-((R)—(2-氨基噻唑-5-基)(2-氯-4-氟苯基)甲基)-2-甲基丙烷-2-亞磺酰胺。收率(50W。'H-NMR(400MHz，DMS0-cO511.10(s，1H)，7.78(dd，J=6.3，8.8Hz，1H)，7.45(dd，J=2.6，8.8Hz，1H)，7.35(td，J-8.6，2.7Hz，1H)，7.03(s，1H)，6.95(s，1H)，6.86(s，2H)，6.45(d，J=6.7Hz，1H)，6.00(s，2H)，5.95(d，J=6.5Hz，1H)，1.46-1.43(m，2H)，1.25-1.24(m，2H)，1.14(s，9H);HPLC保留時(shí)間3.65min，10-99%CH3CN，5min流出；ESI-MS550.5m/z(MH+)。N-(5-((R)一(2-氯-4-氟苯基)((S)-1，1-二甲基乙基亞磺酰氨基)曱基)噻唑-2-基)-1-(2，2-二氟苯并[^1[1，3]二氧雜環(huán)戊烯-5-基)環(huán)丙烷甲酰胺借助用于1-(苯并[d][1，3]二氧雜環(huán)戊烯-5-基)-N-(5-((S)-(2-氯H-氟苯基)((R)-l，l-二甲基乙基亞磺酰氨基)甲基)噻唑-2-基)環(huán)丙烷甲酰胺的工藝制備N-(5-((R)—(2-氯-4-氟笨基)((S)-1，1-二<formula>formulaseeoriginaldocumentpage88</formula>甲基乙基亞磺酰氨基)甲基)噻唑-2-基)-1-(2，2-二氟苯并M[1，3]二氧雜環(huán)戊烯-5-基)環(huán)丙烷甲酰胺，始于l-(2，2-二氟苯并[d[1，3]二氧雜環(huán)戊烯-5-基)環(huán)丙烷羧酸和(S)-N-((R)—(2-氨基噻唑-5-基)(2-氯-4-氟苯基)甲基)-2-甲基丙烷-2-亞磺酰胺。收率(50%)。^-醒R(400MHz，DMS0-《)511.38(s，1H)，7.78(dd，J=6.2，8.8Hz，1H)，7.47-7.44(m，2H)，7.37-7.32(m，2H)，7.21(dd，J=1.6，8.3Hz,1H)，7.04(s，1H)，6.45(d，J=6.6Hz，1H)，5.95(d，J-6.5Hz，1H)，1.54-1.50(m，2H)，1.22-1.21(m，2H)，1.14(s，9H);HPLC保留時(shí)間3.90min，10-99%CH3CN，5min流出;ESI-MS586.3m/z(MH+)。l-(苯并[d[1，3]二氧雜環(huán)戊烯-5-基)-N-(5-((S)-(4-氯-2-氟苯基)((R)_1，1-二甲基乙基亞磺酰氨基)甲基)噻唑-2-基)環(huán)丙烷甲酰胺借助用于1-(苯并[d][1，3]二氧雜環(huán)戊烯-5-基)+(5-((S)-(2-氯-4-氟苯基)((R)-1，l-二甲基乙基亞磺酰氨基)甲基)噻唑-2-基)環(huán)丙烷甲酰胺的工藝制備l-(苯并[d[1，3]二氧雜環(huán)戊烯-5-基)-N-(5-((S)-(4-氯-2-氟苯基)((R)-l,l-二甲基乙基亞磺酰氨基)甲基)噻唑-2-基)環(huán)丙烷甲酰胺，始于1-(苯并[d[1，3]二氧雜環(huán)戊烯-5-基)環(huán)丙烷羧酸和(R)-N-((S)-(2-氨基噻唑-5-基)(4-氯-2-氟苯基)甲基)-2-甲基丙烷-2-亞磺酰胺。收率(64%)。力-醒R(400MHz，CDCh)58.56(s，1H)，7.43(t，J=8.1Hz，1H)，7.18(s，1H)，7.16(dd，J=1.5，8.3Hz，1H)，7.08(dd，J=2.0，10.0Hz，1H)，6.89(td，J-8.0，1.7Hz，2H)，6.81(d，J=7.9Hz，1H)，6.01-5.99(m，3H)，3.90(d，J-5.0Hz，1H)，1.73-1.70(m，2H)，1.28—1.23(m，11H);HPLC保留時(shí)間3.69min，10-99%CH3CN，5min流出;ESI-MS550.5m/z(MH+)。N-(5-((S)-(4-氯-2-氟苯基)((R)-1，1-二甲基乙基亞磺酰氨基)甲基)噻唑-2-基)-1-(2，2-二氟苯并[1，3]二氧雜環(huán)戊烯-5-基)環(huán)丙烷甲酰胺借助用于1-(苯并[d][1，3]二氧雜環(huán)戊烯-5-基)-N-(5-((S)-(2-氯-4-氟苯基)((R)-1，1-二曱基乙基亞磺酰氨基)甲基)噻唑-2-基)環(huán)丙烷曱酰胺的工藝制備N-(5-((S)-(4-氯-2-氟苯基)((R)-1，l-二曱基乙基亞磺酰氨基)甲基)噻唑-2-基)-l-(2，2-二氟苯并[d][1，3]二氧雜環(huán)戊烯-5-基)環(huán)丙烷甲酰胺，始于l-(2，2-二氟苯并[d[1，3]二氧雜環(huán)戊烯-5-基)環(huán)丙烷羧酸和(R)-N-((S)-(2-氨基噻唑-5-基)(4-氯-2-氟苯基)甲基)-2-甲基丙烷-2-亞磺酰胺。收率(53%)。力-NMR(400MHz，DMSO-《)511.37(s，1H)，7.66(t，J=8.3Hz，1H)，7.45-7.42(m，2H)，7.38(dd，J=2.0，8.4Hz，1H)，7.34(d，J=8.3Hz，1H)，7.21(dd，J=1.5，8.3Hz，1H)，7.11(s，1H)，6.33(d，J-6.7Hz,1H)，5.89(d，J-6.5Hz,1H)，1.55-1.52(m，2H)，1.24—1.22(m，2H)，1.13(d，J-9.5Hz，9H);HPLC保留時(shí)間3.93min，10-99%CH3CN，5min流出;ESI-MS586.5m/z(MH+)。(S)-N-(5-(氨基(2-氯-4-氟苯基)甲基)噻唑-2-基)-1-(苯并[1，3]二氧雜環(huán)戊烯-5-基)環(huán)丙烷甲酰胺向1-(苯并[oHl，3]二氧雜環(huán)戊烯-5-基)-N-(5-((S)-(2-氯-4-氟苯基)((R)-1，1-二曱基乙基亞磺酰氨基)甲基)噻唑-2-基)環(huán)丙烷甲酰胺(659mg，1.2mmol)的MeOH(5mL)溶液加入4MHC1的二嗜、烷溶液(1.8mL，7.2mmo1)。將反應(yīng)混合物在室溫下攪拌1.5h，蒸發(fā)至干。將粗產(chǎn)物溶于CH2Ch。將有機(jī)層用NaHCO3水溶液(50mLx2)、鹽水(50mLxl)洗滌，經(jīng)MgS04干燥，濃縮，得到(S)-N-(5-(氨基(2-氯-4-氟苯基)甲基)噻唑-2-基)-1-(苯并[1，3]二氧雜環(huán)戊烯-5-基)環(huán)丙烷曱酰胺，為無色固體，無需進(jìn)一步純化即可使用。111-醒R(400MHz，CDC13)58.48(brs，1H)，7.63(dd，J=6.1，8.7Hz，1H),7.18(s，1H)，7.08(dd，J=2.6，8.4Hz，1H)，6.99(td，J=8.3，2.6Hz，1H)，6.91-6.86(m，2H)，6.81(d，J-7.9Hz，1H)，6.01(s，2H)，5.78(s，1H)，3.80(s，2H)，1.74-1.67(m，2H)，1.30-1.22(m，2H);HPLC保留時(shí)間2.67min，10-99%CH3CN，5min流出；ESI-MS446.3m/z(MH+)。(S)-N-(5-(氨基(2-氯-4-氟苯基)甲基)噻唑-2-基)-1-(2，2-二氟苯并[d[1，3]二氧雜環(huán)戊烯-5-基)環(huán)丙烷甲酰胺借助用于(S)-N-(5-(氨基(2-氯-4-氟苯基)甲基)噻唑-2-基)-l-(苯并[d[1，3]二氧雜環(huán)戊烯-5-基)環(huán)丙烷甲酰胺的工藝制備(S)-N-(5-(氨基(2-氯-4-氟苯基)甲基)噻唑-2-基)-1-(2，2-二氟苯并[d[1,3]二氧雜環(huán)戊烯-5-基)環(huán)丙烷甲酰胺，始于N-(5-((S)-U-氯-4-氟苯基)((R)-l，l-二甲基乙基亞磺酰氨基)甲基)噻唑-2-基)-l-(2，2-二氟苯并[d[1，3]二氧雜環(huán)戊烯-5-基)環(huán)丙烷甲酰胺。粗產(chǎn)物無需進(jìn)一步純化即可使用。^-NMR(400MHz，CDC13)58.35(s，1H)，7.65(dd，J=6.1，8.7Hz，1H)，7.22-7.17(m，3H)，7.12-7.10(m，2H)，7.02(td,J-8.3，2.6Hz，1H)，5.80(s，1H)，3.83(s，2H)，1.83-1.77(m，2H)，1.28-1.25(m，2H);HPLC保留時(shí)間2.87min，10-99%CH3CN，5min流出；ESI-MS482.3m/z(MH+)。(R)-N-(5-(氨基(2-氯-4-氟苯基)甲基)噻唑-2-基)-1-(苯并[d[1，3]二氧雜環(huán)戊蟑-5-基)環(huán)丙烷曱酰胺借助用于(S)-N-(5-(氨基(2-氯-4-氟苯基)甲基)噻唑-2-基)-l-(苯并[tf][1，3]二氧雜環(huán)戊烯-5-基)環(huán)丙烷甲酰胺的工藝制備(R)-N-(5-(氨基(2-氯_4-氟苯基)甲基)噻唑-2-基)-l-(苯并[d[1，3]二氧雜環(huán)戊烯-5-基)環(huán)丙烷曱酰胺，始于l-(苯并[d[1，3]二氧雜環(huán)戊烯-5-基)-N-(5-((R)-(2-氯-4-氟苯基)((S)-1，1-二甲基乙基亞磺酰氨基)曱基)噻唑-2-基)環(huán)丙烷曱酰胺。粗產(chǎn)物經(jīng)過柱色鐠純化(0-2.5%Et3N/Et0Ac)，得到淡黃色固體(77%)。力-NMR(400MHz，DMSO-《)510.80(brs，1H)，7.80(dd，J-6.4，8.8Hz，1H)，7.38(dd，J-2.6，8,8Hz，1H)，7.27(td，J=8.5，2.7Hz，1H)，7.07(d，J-0.9Hz，1H)，6.95(s，1H)，6.86(d，J-0.9Hz，2H)，6.00(s，2H),5.53(s，1H)，1.44-1.41(m，2H)，1.13-1.10(m，2H);HPLC保留時(shí)間2.67min，10-99%CH3CN，5min流出；ESI-MS446.3邁/z(MH+)。(R)-N-(5-(氨基(2-氯-4-氟苯基)曱基)噻唑-2-基)-1-(2，2-二氟苯并[c0[1，3]二氧雜環(huán)戊烯-5-基)環(huán)丙烷甲酰胺借助用于(R)-N-(5-(氨基(2-氯-4-氟苯基)甲基)噻唑-2-基)-l-(苯并M[1，3二氧雜環(huán)戊烯-5-基)環(huán)丙烷曱酰胺的工藝制備(R)-N-(5-(氨基(2-氯-4-氟苯基)甲基)噻唑-2-基)-l-(2，2-二氟苯并[d[1，3]二氧雜環(huán)戊烯-5-基)環(huán)丙烷甲酰胺，始于N-(5-((R)-(2-氯-4-氟苯基)((S)-l，l-二甲基乙基亞磺酰氨基)甲基)噻唑-2-基)-l-(2，2-二氟苯并[d[1，3]二氧雜環(huán)戊烯-5-基)環(huán)丙烷甲酰胺(79%)。力-NMR(400MHz，副S0-《)57.80(dd，J-6.4，8.8Hz，1H)，7.43(d，J=1.7Hz,1H)，7.38(dd，J-2.6，8.8Hz，1H)，7.34(d，J=8.3Hz，1H)，7.27(td，J-8.5,2.6Hz，1H)，7.20(dd，J=1.8，8.3Hz，1H)，7.07(d，J=0.9Hz，1H)，5.53(s，1H)，1.52-1.49(m，2H)，1.21一1.19(m，2H);HPLC保留時(shí)間2.91min，10—99%CH3CN，5min流出；ESI-MS482m/z(MH+)。(S)-N-(5-(氨基(4-氯-2-氟苯基)甲基)噻唑-2-基)-l-(苯并[d[1，3]二氧雜環(huán)戊烯-5-基)環(huán)丙烷甲酰胺借助用于(R)-N-(5-(氨基(2-氯-4-氟苯基)甲基)噻唑-2-基)-l-(苯并[d[1，3]二氧雜環(huán)戊烯-5-基)環(huán)丙烷甲酰胺的工藝制備(S)(5-(氨基(4-氯-2-氟苯基)甲基)噻唑-2-基)-1-(苯并[d[1，3]二氧雜環(huán)戊烯-5-基)環(huán)丙烷甲酰胺，始于l-(苯并[d[1，3]二氧雜環(huán)戊烯-5-基)-N-(5-((S)-(4-氯-2-氟苯基)((R)-1，1-二甲基乙基亞磺酰氨基)甲基)噻唑-2-基)環(huán)丙烷甲酰胺(79沐)。'H畫R(400MHz，CDC13)58.48(s，1H)，7.47(t，J=8,2Hz，1H)，7.14-7.12(m，2H)，7.05(dd，J-2.0,10.1Hz，1H)，6.91-6.87(m，2H)，6.81(d，J-7.9Hz，1H)，6.01(s，2H)，5.61(s，1H)，1.86(s，2H)，1.71(dd，J=3.6，6.7Hz，2H)，1.22-1.19(m,2H);HPLC保留時(shí)間2.71min，10-99°/。CH3CN，5min流出；ESI-MS446.3m/z(MH+)。(S)-N-(5-(氨基(4-氯-2-氟苯基)甲基)噻唑-2-基)-l-(2，2-二氟苯并[d[1，3]二氧雜環(huán)戊烯-5-基)環(huán)丙烷甲酰胺<formula>formulaseeoriginaldocumentpage94</formula>借助用于(R)-N-(5-(氨基(2-氯-4-氟苯基)曱基)噻唑-2-基)-l-(苯并[d[1，3]二氧雜環(huán)戊烯-5-基)環(huán)丙烷曱酰胺的工藝制備(S)-N-(5-(氨基(4-氯-2-氟苯基)甲基)噻唑-2-基)-1-(2，2-二氟苯并M[1，3]二氧雜環(huán)戊烯-5-基)環(huán)丙烷甲酰胺，始于N-(5-((S)-(4-氯-2-氟苯基)((R)-1，1-二甲基乙基亞磺酰氨基)甲基)噻唑-2-基)-l-(2，2-二氟苯并[d[1，3]二氧雜環(huán)戊烯-5-基)環(huán)丙烷甲酰胺(88%)。力NMR(400MHz，DMS0-忒)511.20(brs，1H)，7.66(t，J=8.3Hz，1H),7.43(d，J=1.7Hz，1H)，7.39-7.30(m，3H)，7.20(dd，J-1.7,8.3Hz，1H)，7.09(s，1H)，5.45(s，1H)，1.52-1.49(m，2H)，1.22-1.20(m，2H);HPLC保留時(shí)間2.94min，10-99%CH3CN，5min流出;ESI-MS482.3m/z(MH+)。1-(苯并[d[1，3]二氧雜環(huán)戊烯-5-基)-N-(5-((S)-((R)-3-(叔丁基二甲基甲硅烷氧基)吡咯烷-1-基)(2-氯-4-氟苯基)甲基)噻唑-2-基)環(huán)丙烷甲酰胺<formula>formulaseeoriginaldocumentpage95</formula>向(S)-N-(5-(氨基(2-氯-4-氟苯基)曱基)噻唑-2-基)-l-(苯并[d[1，3]二氧雜環(huán)戊烯-5-基)環(huán)丙烷甲酰胺(1.2mmol)的MeOH(10mL)溶液加入(R)-3-(叔丁基二曱基甲硅烷氧基)-4-氯丁醛(341mg，1.4mmo1)。將反應(yīng)混合物在室溫下攪拌5min。然后加入NaBH4(68mg，1.8mmo1)，繼續(xù)在室溫下攪拌lh。將反應(yīng)物用H20稀釋，用EtOAc萃取。合并有機(jī)層，用鹽水洗滌，經(jīng)MgS04干燥。除去溶劑后，殘余物經(jīng)過柱色謙純化(10-20。/()EtOAc/己烷)，得到l-(苯并[d[1，3]二氧雜環(huán)戊烯-5-基)-N-(5-((S)-((R)-3-(叔丁基二甲基曱硅烷氧基)吡咯烷-l-基)(2-氯-4-氟苯基)甲基)噻唑-2-基)環(huán)丙烷甲酰胺(446mg，59%兩步收率)。^NMR(400MHz，CDC13)58.45(s，1H)，7.79(dd，J=8.6，6.3Hz，1H)，7.25(d，J=6.4Hz，1H)，7.01-6.94(m，2H)，6.85(td，J-8.3,1.7Hz，2H)，6.78(d，J=7.9Hz,1H)，5.99(s，2H)，4.99(s，1H)，4.35-4.30(m，1H)，2.77(dd，J-9.9，6.2Hz，1H)，2.51-2.48(m，2H)，2.36(dd，J-9.9，4.3Hz，1H)，2.06-2.01(m，1H)，1.71-1.65(m，3H)，1.18(t，J-3.0Hz，2H)，0.85(s，9H)，—0.01(d，J=7.3Hz,6H);HPLC保留時(shí)間3.59min，10-99%CH3CN，5min流出；ESI-MS630.6m/z(MH+)。N-(5-((S)-((R)-3-(叔丁基二甲基曱硅烷氧基)吡咯烷-l-基)(2-氯-4-氟苯基)甲基)噻唑-2-基)-1-(2，2-二氟苯并[d[1，3]二氧雜環(huán)戊烯-5-基)環(huán)丙烷甲酰胺<formula>formulaseeoriginaldocumentpage96</formula>借助用于l-(苯并M[l，3]二氧雜環(huán)戊烯-5-基)-N-(5-((S)-((R)-3-(叔丁基二甲基甲硅烷氧基)吡咯烷-l-基)(2-氯-4-氟苯基)曱基)噻唑-2-基)環(huán)丙烷曱酰胺的工藝制備N-(5-((S)-((R)-3-(叔丁基二曱基甲硅烷氧基)吡咯烷-l-基)(2-氯-4-氟苯基)甲基)噻唑-2-基)-1-(2，2-二氟苯并[1，3]二氧雜環(huán)戊烯-5-基)環(huán)丙烷甲酰胺，始于(S)-N-(5-(氨基(2-氯-4-氟苯基)甲基)噻唑-2-基)-1-(2，2-二氟苯并[d[1，3]二氧雜環(huán)戊烯-5-基)環(huán)丙垸曱酰胺和00-3-(叔丁基二甲基甲硅烷氧基)-4-氯丁醛(56%兩步收率)。^NMR(400MHz，CDC13)58.31(s,1H)，7.79(dd,J=8.6，6.3Hz，1H)，7.25(d，J=7.9Hz，1H)，7.13(td，J=8.4，1.6Hz，2H)，7.06(d，J-8.1Hz，1H)，7.01-6.95(m，2H)，4.99(s，1H)，4.35-4.30(m，1H)，2.76(dd，J=9.8,6.2Hz，1H)，2.50(t，J-6.9Hz，2H)，2.37(dd，J=10.0，4.2Hz，1H)，2.08-1.98(m，1H)，1.79-1.64(m，3H)，1.24-1.19(m，2H)，0.85(s，9H),-0.01(d，J=7.4Hz，6H);HPLC保留時(shí)間3.80min，10-99%CH3CN，5min流出；ESI-MS666.4m/z(MH+)'l-(苯并[d[1,3]二氧雜環(huán)戊烯-5-基)+(5-((R)-((R)-3-(叔丁基二曱基甲硅烷氧基)吡咯烷-l-基)(2-氯-4-氟苯基)甲基)噻唑-2-基)環(huán)丙烷甲酰胺OTBS借助用于l-(苯并[rf][1，3]二氧雜環(huán)戊烯-5-基)-N-(5-((S)-((R)-3-(叔丁基二曱基甲硅烷氧基)吡咯烷-l-基)(2-氯-4-氟苯基)甲基)漆唑-2-基)環(huán)丙烷甲酰胺的工藝制備l-(苯并[d[1,3]二氧雜環(huán)戊烯-5-基)-N-(5-((R)-((R)-3-(叔丁基二甲基甲硅烷氧基)吡咯烷-l-基)(2-氯-4-氟苯基)甲基)噻唑-2-基)環(huán)丙烷甲酰胺，始于(R)-N-(5-(氨基(2-氯-4-氟苯基)曱基)噻唑-2-基)-l-(苯并[d[1,3]二氧雜環(huán)戊烯-5-基)環(huán)丙烷甲酰胺和00-3-(叔丁基二甲基甲硅烷氧基)-4-氯丁醛(99%)。!謹(jǐn)R(400MHz，DMS0-《)511.01(s，1H)，7.77(dd，J=6.4，8.8Hz，1H)，7.38一7.36(m，2H)，7.29(td，J=8.5，2.7Hz，1H)，6.94(s，1H)，6.85(m，2H)，5.99(s，2H)，4.99(s，1H),4.38-4.34(m，1H)，2.83(dd，J-6.2，9.9Hz，1H)，2.58-2.54(m,1H)，2.46-2.42(m，1H)，2.14(dd，J=3.7，9.9Hz，1H)，2.05-1.99(m，1H)，1.68-1.57(m,1H)，1.43-1.40(m，2H)，1.12-1.10(m，2H)，0.82(s，9H)，-0.00(s，3H)，-0.02(s，3H);HPIX保留時(shí)間3.60min，10—99%CH3CN，5min流出；ESI-MS630.5m/z(MH+)。N-(5-((R)-((R)-3-(叔丁基二甲基甲硅烷氧基)吡咯烷-l-基)(2-氯-4-氟苯基)甲基)噻唑-2-基)-1-(2，2-二氟苯并[rf][1，3]二氧雜環(huán)戊烯-5-基)環(huán)丙烷甲酰胺OTBS借助用于1-(苯并[d[1，3]二氧雜環(huán)戊烯-5-基)-N-(5-((S)-((R)-3-(叔丁基二甲基甲硅烷氧基)吡咯烷-l-基)(2-氯-4-氟苯基)甲基)噻唑-2-基)環(huán)丙烷甲酰胺的工藝制備N-(5-((R)-((R)-3-(叔丁基二甲基甲硅烷氧基)吡咯烷-l-基)(2-氯-4-氟苯基)甲基)噻唑-2-基)-1-(2，2-二氟苯并[d[1，3]二氧雜環(huán)戊烯-5-基)環(huán)丙烷甲酰胺，始于(R)-N-(5-(氨基(2-氯-4-氟苯基)曱基)噻唑-2-基)-1-(2,2-二氟苯并M[1，3]二氧雜環(huán)戊烯-5-基)環(huán)丙烷曱酰胺和00-3-(叔丁基二甲基曱硅烷氧基)-4-氯丁醛(92%)。^醒R(400MHz，DMS0-《)511.32(s，1H)，7.77(dd，J=6.4,8.8Hz，1H)，7.43(d，J=1.4Hz，1H)，7.39-7.30(m，4H)，7.20(dd，J=1.5，8.3Hz，1H)，4.99(s，1H)，4.40-4.35(m，1H)，2.83(dd，J-6.1,9.9Hz，1H)，2.60-2.52(m，1H)，2.46-2.41(m，1H)，2.15(dd，J=3.7，9.9Hz，1H)，2.07-1.99(m，1H)，1.63-1.57(m，1H)，1.51-1.48(m，2H)，1.25-1.24(m，2H)，0.83(s，9H)，0.01(s，3H)，-0.02(s，3H);HPLC保留時(shí)間3.79min，10-99%CH3CN，5min流出;ESI-MS666.3m/z(MH+)。l-(苯并[d[1，3]二氧雜環(huán)戊烯-5-基)-N-(5-((S)-((R)-3-(叔丁基二甲基甲硅烷氧基)吡咯烷-l-基)(4-氯-2-氟苯基)曱基)噻唑-2-基)環(huán)丙烷曱酰胺PTBS借助用于l-(苯并[cd[1,3]二氧雜環(huán)戊烯-5-基)-N-(5-((S)-((R)-3-(叔丁基二甲基甲硅烷氧基)吡咯烷-l-基)(2-氯-4-氟苯基)甲基)噻唑-2-基)環(huán)丙烷甲酰胺的工藝制備l-(苯并[1，3]二氧雜環(huán)戊烯-5-基)-N-(5-((S)-((R)-3-(叔丁基二曱基曱硅烷氧基)吡咯烷-l-基)(4-氯-2-氟苯基)曱基)噻唑-2-基)環(huán)丙烷甲酰胺，始于(S)-N-(5-(氨基(4-氯-2-氟苯基)甲基)噻唑-2-基)-l-(苯并[d[1，3]二氧雜環(huán)戊烯-5-基)環(huán)丙烷甲酰胺和(R)-3-(叔丁基二甲基曱硅烷氧基)-4-氯丁醛(89W。力NMR(400MHz，CDC13)58.48(s，1H)，7.64(t，J=8.1Hz，1H)，7.22(s，1H)，7.11(dd，J=1.9，8.4Hz，1H)，6.99(dd，J=2.0，9.9Hz，1H)，6.90-6.85(m，2H)，6.80(d，J=7.9Hz，1H)，6.00(s，2H)，4.91(s，1H)，4.35-4.33(m，1H)，2.83(dd，J=6,2，9.8Hz，1H)，2.55-2.50(m，2H)，2.35(dd，J=4.4，9.8Hz，1H)，2.07-2.02(m，1H)，1.93-1.91(m,1H)，1.73-1.70(m，2H),1.22-1.20(m，2H)，0.86(s，9H)，0.01(s，3H)，0.00(s，3H);HPLC保留時(shí)間3.59min，10-99%CH3CN，5min流出；ESI-MS630.5m/z(MH+)。N-(5-((S)-((R)-3-(叔丁基二甲基甲硅烷氧基)吡咯烷-l-基)(4-氯-2-氟苯基)曱基)噻唑-2-基)-1-(2,2-二氟苯并[d[1,3]二氧雜環(huán)戊烯-5-基)環(huán)丙烷甲酰胺借助用于l-(苯并M[l，3]二氧雜環(huán)戊烯-5-基)-N-(5-((S)-((R)-3-(叔丁基二曱基甲硅烷氧基)吡咯烷-l-基)(2-氯-4-氟苯基)甲基)噻唑-2-基)環(huán)丙烷甲酰胺的工藝制備N-(5-((S)-((R)-3-(叔丁基二甲基甲硅烷氧基)吡咯烷-l-基)(4-氯-2-氟苯基)甲基)噻唑-2-基)-1-(2，2-二氟苯并[d[1，3]二氧雜環(huán)戊烯-5-基)環(huán)丙烷甲酰胺，始于(S)-N-(5-(氨基(4-氯-2-氟苯基)甲基)噻唑-2-基)-1-(2，2-二氟苯并[1，3]二氧雜環(huán)戊烯-5-基)環(huán)丙烷曱酰胺和(R)-3-(叔丁基二曱基甲硅烷氧基)-4-氯丁醛(90W。^NMR(400MHz，DMS0-《)511.33(s,1H)，7.63(t,J-8,2Hz，1H)，7.43-7.32(m，5H)，7.20(dd，J=1.5，8.3Hz，1H)，4.93(s，1H)，4.39-4.34(m，1H)，2.69(dd，J-6.1，9.8Hz，1H)，2.49-2.45(m，2H)，2.34(dd，J=3.9，9.9Hz，1H)，2.10-1.99(m，1H)，1.62-1.55(m，1H)，1.52-1.49(m，2H)，1.24-1.19(m，2H)，0.83(s，9H)，0.01(s，3H)，-0.01(s，3H);HPLC保留時(shí)間3.79min，10-99%CH3CN，5min流出；ESI-MS666.3m/z(MH+)。l-(苯并[d[1，3]二氧雜環(huán)戊烯-5-基)-N-(5-((S)—(2-氯-4-氟苯基)((R)-3-羥基吡咯烷-l-基)甲基)噻唑-2-基)環(huán)丙烷甲酰胺將l-(苯并[1，3]二氧雜環(huán)戊烯-5-基)-N-(5-((S)-((R)-3-(叔丁基二曱基曱硅烷氧基)吡咯烷-l-基)(2-氯-4-氟苯基)曱基)噻唑-2-基)環(huán)丙烷甲酰胺(365mg，0.58mmol)與TBAF(1MTHF溶液，2.3mL，2.3mmol)的混合物在室溫下攪拌過夜。將反應(yīng)物用1120稀釋，用EtOAc萃取。合并有機(jī)層，用鹽水洗滌，經(jīng)MgS04干燥。除去溶劑后，殘余物經(jīng)過柱色譜純化(20-50%EtOAc/己烷)，得到l-(苯并[cd[1，3]二氧雜環(huán)戊烯-5-基)-N-(5-((S)—(2-氯-4-氟苯基)((R)-3-羥基吡咯烷-l-基)甲基)噻唑-2-基)環(huán)丙烷甲酰胺(183邁g，61%，〉9Hde)。力-NMR(400MHz，58.41(s，1H)，7.72(t，J=7.1Hz，1H)，7.20(d，J=8.3Hz，2H)，6.95(t，J=7.2Hz，2H)，6.80(td，J=8.5，1.6Hz,2H)，6.73(d，J-7.9Hz，1H)，5.94(s，2H)，4.95(s，1H)，4.25(s，1H)，2.75(s，1H)，2.58-2.56(m，1H)，2.42(s，1H)，2.28-2.27(m，1H)，2.12-2.11(m，1H)，1.71-1.61(m，3H)，1.19-1.10(m，2H);HPLC保留時(shí)間2.68min，10-99%CH3CN，5min流出;ESI-MS516.2m/z(MH+)。N-(5-((S)-(2-氯-4-氟苯基)((R)-3-羥基吡咯烷-l-基)甲基)噻唑-2-基)-1-(2,2-二氟苯并[1，3]二氧雜環(huán)戊烯-5-基)環(huán)丙烷曱酰胺借助用于1-(苯并[1，3]二氧雜環(huán)戊烯-5-基)+(5-((S)-(2-氯-4-氟苯基)((R)-3-羥基吡咯烷-l-基)甲基)噻唑-2-基)環(huán)丙烷曱酰胺的工藝制備N-(5-((S)-(2-氯-4-氟苯基)((R)-3-羥基吡咯烷-l-基)曱基)噻唑-2-基)-l-(2，2-二氟苯并[d[1，3]二氧雜環(huán)戊烯-5-基)環(huán)丙烷甲酰胺，始于N-(5-((S)-((R)-3-(叔丁基二甲基甲硅烷氧基)吡咯烷-l-基)(2-氯-4-氟苯基)甲基)噻唑-2-基)-1-(2，2-二氟苯并[1，3]二氧雜環(huán)戊烯-5-基)環(huán)丙烷甲酰胺(77W。'HNMR(400MHz，DMS0-《)58.36(s,1H)，7.80(t，J-7.2Hz，1H)，7.30(d，J=10.6Hz，1H)，7.17(td，J-8.5，1.7Hz，2H)，7.11-7.01(m，4H)，5.05(s，1H)，4.35-4.33(m，1H)，2.84-2.83(m，1H)，2.67-2.64(m，1H)，2.50(dd，J=10.0，4.9Hz，1H)，2.38-2.34(m，1H)，2.20(dd，J=12.9，5.8Hz，1H)，1.87-1.76(m，3H)，1.30-1.23(m，2H);HPLC保留時(shí)間2.91min，10-99%CH3CN，5min流出；ESI-MS552.4m/z(MH+)。l-(苯并M[1，3]二氧雜環(huán)戊烯-5-基)-N-(5-((R)一(2-氯+氟苯基)(00-3-羥基吡咯烷-l-基)甲基)噻唑-2-基)環(huán)丙烷甲酰胺借助用于1-(苯并M[1，3〗二氧雜環(huán)戊烯-5-基)-N-(5-((S)-(2-氯-4-氟苯基)((R)-3-羥基吡咯烷-l-基)甲基)噻唑-2-基)環(huán)丙烷曱酰胺的工藝制備l-(苯并[d[1，3]二氧雜環(huán)戊烯-5-基)-N-(5-((R)-(2-氯-4-氟苯基)((R)-3-羥基吡咯烷-l-基)甲基)噻唑-2-基)環(huán)丙烷甲酰胺，始于1-(苯并[1,3]二氧雜環(huán)戊烯-5-基)-N-(5-((R)-((R)-3-(叔丁基二甲基曱硅烷氧基)吡咯烷-l-基)(2-氯-4-氟苯基)甲基)噻唑-2-基)環(huán)丙烷甲酰胺(61%,>99%de)。NMR(400MHz，DMS0-《)511.01(s，1H)，7.80(dd，J=6.4，8.8Hz，1H),7.39-7.36(m，2H)，7.30(td，J-8.5，2.6Hz，1H)，6.95(s,1H)，6.85(s，2H)，6.00(s，2H)，4.94(s，1H)，4.72(d，J=4.3Hz,1H)，4.19-4.18(m，1H)，2.70-2.66(m，1H)，2.60-2.56(m，1H)，2.34-2.30(m，1H)，2.20(dd,J=3.1，9.9Hz，1H)，2,00-1.95(m，1H)，1.60-1.57(m，1H)，1.44-1.41(m，2H)，1.14-1.08(m，2H);HPLC保留時(shí)間2.72min，10-99%CH3CN，5min流出；ESI-MS516.3m/z(MH+)。N-(5-((R)-(2-氯-4-氟苯基)((R)-3-羥基吡咯烷-l-基)曱基)噻唑-2-基)-l-(2，2-二氟苯并[d][1，3]二氧雜環(huán)戊烯-5-基)環(huán)丙烷甲酰胺借助用于1-(苯并[d[1,3]二氧雜環(huán)戊烯-5-基)-N-(5-((S)-(2-氯-4-氟苯基)((R)-3-羥基吡咯烷-1-基)甲基)噻唑-2-基)環(huán)丙烷甲酰胺的工藝制備N-(5-((R)-(2-氯-4-氟苯基)((R)-3-羥基吡咯烷-l-基)甲基)噻唑-2-基)+(2，2-二氟苯并[d[1，3]二氧雜環(huán)戊烯-5-基)環(huán)丙烷甲酰胺，始于N-(5-((R)-((R)-3-(叔丁基二曱基曱硅烷氧基)吡咯烷-l-基)(2-氯-4-氟苯基)甲基)噻唑-2-基)-l-(2，2-二氟苯并[d[1，3]二氧雜環(huán)戊烯-5-基)環(huán)丙烷甲酰胺(73%，>99%de)。力麗R(400MHz，DMS0-《)511.32(s，1H)，7.80(dd，J-6.4，8.8Hz，1H)，7.43(d，J-1.4Hz，1H)，7.39-7.28(m，4H)，7.20(dd，J=1.6，8.3Hz，1H)，4.94(s，1H)，4.72(d，J=4.3Hz，1H)，4.20-4.19(m，1H)，2.71-2.67(m，1H)，2.63-2.57(m，1H)，2.34-2.29(m，1H)，2.20(dd，J=3.2，9.8Hz，1H)，2.02-1.93(iq，1H)，1.62-1.54(m，1H)，1.54-1.48(m，2H)，1.23-1.17(m，2H);HPLC保留時(shí)間2,94min，10-99%CH3CN，5min流出;ESI-MS552.5m/z(MH+)。1-(苯并[d[1，3]二氧雜環(huán)戊烯-5-基)-N-(5-((S)一(4-氯-2-氟苯基)((R)-3-羥基吡咯烷-l-基)甲基)噻唑-2-基)環(huán)丙烷甲酰胺<formula>formulaseeoriginaldocumentpage104</formula>借助用于1-(苯并[cf][1，3]二氧雜環(huán)戊烯-5-基)-N-(5-((S)-(2-氯-4-氟苯基)((R)-3-羥基吡咯烷-l-基)甲基)噻唑-2-基)環(huán)丙烷甲酰胺的工藝制備l-(苯并[1，3]二氧雜環(huán)戊烯-5-基)-N-(5-((S)-(4-氯-2-氟苯基)((R)-3-羥基吡咯烷-l-基)甲基)噻唑-2-基)環(huán)丙烷甲酰胺，始于l-(苯并[d[1，3]二氧雜環(huán)戊烯-5-基)-N-(5-((S)-((R)-3-(叔丁基二甲基甲硅烷氧基)吡咯烷-l-基)(4-氯-2-氟苯基)曱基)噻唑-2-基)環(huán)丙烷甲酰胺(37%，>99%de)。^NMR(400MHz,CDC13)58.48(s，1H)，7.62(t，J=8.1Hz，1H)，7.22(s，1H)，7.13(dd，J=1.9，8.4Hz，1H)，7.01(dd，J=2.1，9.9Hz，1H)，6.90-6.85(m，2H)，6.81(d，J=7.9Hz，1H)，6.01(s，2H)，4.92(s，1H)，4.34-4.28(m，1H)，2.86-2.80(m，1H)，2.63(d，J=10.1Hz，1H)，2.50-2.46(m，1H)，2.34-2.23(m，1H)，2.21-2.12(m，1H)，1.80-1.70(m，4H)，1.24—1.18(m，2H);HPLC保留時(shí)間2.77min，10-99%CH3CN，5min流出；ESI-MS516.3m/z(MH+)。N-(5-((S)-(4-氯-2-氟苯基)((R)-3-羥基吡咯烷-l-基)甲基)噻唑-2-基)-1-(2，2-二氟苯并[d[1，3]二氧雜環(huán)戊烯-5-基)環(huán)丙烷甲酰胺<formula>formulaseeoriginaldocumentpage104</formula>借助用于1-(苯并[d[1，3]二氧雜環(huán)戊烯-5-基)-N-(5-((S)-(2-氯-4-氟苯基)((R)-3-羥基吡咯烷-l-基)甲基)噻唑-2-基)環(huán)丙烷曱酰胺的工藝制備N-(5-((S)-(4-氯-2-氟苯基)((R)-3-羥基吡咯烷-l-基)甲基)噻唑-2-基)-1-(2，2-二氟苯并[d[1，3]二氧雜環(huán)戊烯-5-基)環(huán)丙烷甲酰胺，始于N-(5-((S)-((R)-3-(叔丁基二曱基甲硅烷氧基)吡咯烷-l-基)(4-氯-2-氟苯基)曱基)噻唑-2-基)-1-(2，2-二氟苯并[cd[1，3]二氧雜環(huán)戊烯-5-基)環(huán)丙烷甲酰胺(78%，>99%de)。屮畫R(400MHz，DMS0-c/6)511.32(s，1H)，7.66(t，J-8.1Hz，1H)，7.43(d，J=1.5Hz，1H)，7.39-7.33(m，4H)，7.20(dd，J-1.6，8.3Hz，1H)，4.88(s，1H)，4.75(d，J=4.4Hz，1H)，4.21-4.16(m，1H)，2.57(dd，J-6.1，9.8Hz，1H)，2.51-2.44(m,1H)，2.41-2.33(m，2H)，2.04-1.95(m，1H)，1.60-1.45(m，3H)，1.24-1.15(m，2H);HPLC保留時(shí)間2.97min，10-99%CH3CN，5min流出；ESI-MS552.5m/z(MH+)。(R)-N-((R)-(2-氨基-4-甲基噻唑-5-基)(2-氯苯基)甲基)-2-曱基丙烷-2-亞磺酰胺和(R)-N-((S)—(2-氨基-4-甲基噻唑-5-基)(2-氯苯基)曱基)-2-曱基丙烷-2-亞磺酰胺<formula>formulaseeoriginaldocumentpage105</formula>向(R)-叔丁基5-((2-氯苯基)(l，l-二甲基乙基亞磺酰氨基)甲基)-4-甲基噻唑-2-基氨基甲酸酯(19.0g，41.6mmol)的CH2C12(83mL)溶液加入TFA(83mL)。將反應(yīng)物在室溫下攪拌lh。濃縮反應(yīng)物，然后在012(:12與飽和NaHC03水溶液之間分配。向水層加入1NNaOH溶液堿化至pH〉12，用CH2Ch萃取。合并有機(jī)層，經(jīng)MgS04干燥，濃縮。使粗產(chǎn)物吸附于硅膠，經(jīng)過柱色譜純化(70-100%EtOAc/己烷。Et0Ac含有2%歸H,攪拌以維持混合物)，得到(R)-N-(OO-(2-氨基-4-甲基漆唑-5-基)(2-氯苯基)甲基)-2-甲基丙烷-2-亞磺酰胺和(R)-N-((S)-(2-氨基-4-曱基噻唑-5-基)(2-氯苯基)甲基)-2-曱基丙烷-2-亞磺酰胺，為兩種非對(duì)映體的混合物(7.lg，47%)。第一洗脫產(chǎn)物(異構(gòu)體A)(白色固體，3.0g，20%,>99°/。de);!H畫R(400MHz，CDC13)57.60(dd，/=1.6，7.7Hz，1H)，7.38-7.22(m，3H)，6.15(d，/=2.5Hz，1H)，4.94(s，2H)，3.87(d，/=2.3Hz，1H)，2.34(s，3H)，1.27(s，9H);HPLC保留時(shí)間3.08min，10-99%CH3CN，15min流出；ESI-MS358.3m/z(MH+)。第二洗脫產(chǎn)物(異構(gòu)體B)(黃色蠟狀固體,5.0g，33°/.98%de);〗H腿(400MHz，CDC13)57.64(dd，J=7.7，1.7Hz，1H)，7.36(dd，J=7.8，1.4Hz，1H)，7.32-7.21(m，2H)，6.19(d，J=1.8Hz，1H)，4.86(s，2H)，3.65(d，J=1.2Hz，1H)，2.33(s，3H)，1.26(s，9H);HPLC保留時(shí)間3.77min，10—99%CH3CN，15min流出；ESI-MS358.3m/z(MH+)。(R)-N-((R)-(2-氨基噻唑-5-基)(3，4-二氯苯基)甲基)-2-甲基丙烷-2-亞磺酰胺和(R)-N-((S)-(2-氨基噻唑-5-基)(3，4-二氯苯基)甲基)-2-甲基丙烷-2-亞磧酰胺借助用于(R)-N-((R)-(2-氨基-4-甲基噻唑-5-基)(2-氯苯基)甲基)-2-甲基丙烷-2-亞磺酰胺和(R)-N-((S)—(2-氨基-4-甲基噻唑-5-基)(2-氯苯基)甲基)-2-曱基丙烷-2-亞磺酰胺的工藝制備(R)-N-(S)-1-(2-氨基噻唑-5-基)-1-(3，4-二氯苯基)甲基)-1，1-二甲基乙基亞磺酰胺和00-N-(R)-1-(2-氨基噻唑-5-基)-1-(3，4-二氯苯基)甲基)-l，l-二甲基乙基亞磺酰胺，始于(R)-叔丁基5-((3，4-二氯苯基)(1，l-二甲基乙基亞磺酰氨基)曱基)噻唑-2-基氨基甲酸酯。粗產(chǎn)物經(jīng)過柱色傳純化(5%Et0H/Et0Ac洗脫異構(gòu)體A，20%Et0H/Et0Ac洗脫異構(gòu)體B)。異構(gòu)體A(黃色固體，5.67g，35%,>99%de);^NMR<formula>formulaseeoriginaldocumentpage106</formula>(400MHz，CDC13)57.49(d，J-2.1Hz，1H)，7,44(d，J=8.3Hz，1H)，7.25(dd,J=2.2，8.5Hz，1H)，6.95(s，1H)，5.63(d，J-3.5Hz，1H)，5.03(s，2H)，3.84(d，J-3.5Hz，1H)，1.26(s，9H);HPLC保留時(shí)間2.37min，10-99%CH3CN，5min流出；ESI-MS378.Om/z(MH+)。異構(gòu)體B(黃色固體，3.64g，23°/。，96%de);^NMR(400MHz，CDC13)S7.50(d，J=2.1Hz，1H)，7.44(d，J-8.3Hz，1H)，7.25(dd，J-2.1，8.5Hz，1H)，6.88(d，J=0.5Hz，1H)，5.65(d，J=2.5Hz，1H)，5.02(s，2H)，3.88(d，J=2.3Hz，1H)，1.26(s，9H);HPLC保留時(shí)間2.50min，10-99%CH3CN，5min流出；ESI-MS378.2m/z(MH+)。l-(苯并[d[1，3]二氧雜環(huán)戊烯-5-基)-N-(5-((R)-(2-氯苯基)((R)-l,l-二甲基乙基亞磺酰氨基)曱基)-4-曱基噻唑-2-基)環(huán)丙烷甲酰胺和l-(苯并[cG[1，3]二氧雜環(huán)戊烯-5-基)-N-(5-((S)-(2-氯苯基)((R)-1，1-二曱基乙基亞磺酰氨基)甲基)-4-甲基噻唑-2-基)環(huán)丙烷甲酰胺CIHNCIHN向l-(苯并MU，3]二氧雜環(huán)戊烯-5-基)環(huán)丙烷羧酸(864mg，4.2咖ol)緩慢加入S0C12(916nL,12.6咖o1)繼之以簡(jiǎn)F(3滴)。將反應(yīng)混合物在60C下加熱0.5h。在真空下除去過量S0C12。然后將酰氯溶于無水CH2Ch(6mL)，緩慢加入到(R)-N-((2-氨基-4-甲基噻唑-5-基)(2-氯苯基)甲基)-2-甲基丙烷-2-亞磺酰胺(異構(gòu)體A)(1.35g，3.8mmol)與Et3N(2.92mL，21.Ommol)的無水CH2C12(18mL)溶液中。將反應(yīng)混合物在室溫下攪拌18h,用CH2Ch稀釋，用1NHC1溶液、飽和NaHC03水溶液和鹽水洗滌，有機(jī)層經(jīng)MgS04干燥，濃縮，得到l-(苯并[d[1，3]二氧雜環(huán)戊烯-5-基)-N-(5-((2-氯苯基)((R)-1，l-二甲基乙基亞磺酰氨基)曱基)-4-甲基噻唑-2-基)環(huán)丙烷甲醜胺(異構(gòu)體<formula>formulaseeoriginaldocumentpage107</formula>A),為橙色固體(1.54g，75%)，無需進(jìn)一步純化即可使用。HPLC保留時(shí)間3.59min，10-99%CH3CN，5min流出；ESI-MS546.5m/z(MH+)。借助用于異構(gòu)體A的工藝制備l-(苯并[d[1，3]二氧雜環(huán)戊烯-5-基)-N-(5-((2-氯苯基)((R)-l，l-二甲基乙基亞磺酰氨基)甲基)-4-甲基噻唑-2-基)環(huán)丙烷甲酰胺(異構(gòu)體B)，始于l-(苯并[d[1，3]二氧雜環(huán)戊烯-5-基)環(huán)丙烷羧酸和(R)-N-((2-氨基-4-曱基逸唑-5-基)(2-氯苯基)甲基)-2-甲基丙烷-2-亞磺酰胺(異構(gòu)體B)。使粗產(chǎn)物吸附于硅膠，經(jīng)過柱色鐠純化(25-60%EtOAc/己烷)，得到產(chǎn)物，為淺橙色固體(62%)。力腿(400MHz，CDCh)58.48(s，1H)，7.70(dd，J=7.8，1.6Hz，1H)，7.34-7.20(m，3H)，6.88-6.79(m，3H),6.26(d，J=1.9Hz，1H)，6.01(s，2H)，3.55(d，J-1.7Hz，1H)，2.40(s，3H)，1.68(m，2H)，1.28-1.18(m，11H);HPLC保留時(shí)間3.69min，10-99%CH3CN，5min流出；ESI-MS546.5m/z(MH+)。N-(5-((R)-(2-氯苯基)((R)-l，l-二甲基乙基亞磺酰氨基)甲基)-4-曱基噻唑-2-基)-1-(2，2-二氟苯并[d[1，3]二氧雜環(huán)戊烯-5-基)環(huán)丙烷曱酰胺和N-(5-((S)—(2-氯苯基)((R)-1，1-二甲基乙基亞磺酰氨基)曱基)-4-甲基噻唑-2-基)-1-(2，2-二氟苯并[d[1，3]二氧雜環(huán)戊烯-5-基)環(huán)丙烷甲酰胺借助用于1-(苯并[d[1，3]二氧雜環(huán)戊烯-5-基)-N-(5-((2-氯苯基)((R)-1，1-二曱基乙基亞磺酰氨基)甲基)-4-甲基噻唑-2-基)環(huán)丙烷曱酰胺(異構(gòu)體A)的工藝制備N-(5-((2-氯苯基)((R)-1，1-二甲基乙基亞磺酰氨基)甲基)-4-甲基噻唑-2-基)-1-(2，2-二氟苯并[rf][1，3〗二氧雜環(huán)戊烯-5-基)環(huán)丙烷甲酰胺(異構(gòu)體A),始于1-(2，2-二氟苯并[d[1，3]二氧雜環(huán)戊烯-5-基)環(huán)丙烷羧酸和(R)-N-((2-氨基-4-甲基噻唑-5-基)(2-氯苯基)甲基)-2-曱基丙烷-2-亞磺酰胺(異構(gòu)體A)。使粗產(chǎn)物吸附于硅膠，經(jīng)過柱色語純化(25-100y。EtOAc/己烷)，得到橙色固體(55%)。力NMR(400MHz，CDC13)58.36(s，1H)，7.67(dd，J=7.7，1.6Hz，1H)，7.35-7.21(m，3H)，7.17-7.07(m，3H)，6.21(d，J=2.5Hz，1H)，3.80(d，J=2.4Hz，1H)，2.41(s，3H)，1.80-1.70(m，2H),1.26-1.18(m，11H);HPLC保留時(shí)間3.81min，10-99%CH3CN，5min流出；ESI-MS582.3m/z(MH+)。借助用于1-(苯并[d[1，3]二氧雜環(huán)戊烯-5-基)-N-(5-((2-氯苯基)((R)-l，1-二曱基乙基亞磺酰氨基)甲基)-4-甲基噻唑-2-基)環(huán)丙烷曱酰胺(異構(gòu)體A)的工藝制備N-(5-((2-氯苯基)((R)-1，1-二甲基乙基亞磺酰氨基)甲基)-4-甲基噻唑-2-基)-l-(2，2-二氟苯并[d[1，3〗二氧雜環(huán)戊烯-5-基)環(huán)丙烷甲酰胺(異構(gòu)體B)，始于1-(2,2-二氟苯并[d[1，3]二氧雜環(huán)戊烯-5-基)環(huán)丙烷羧酸和(R)-N-((2-氨基"-甲基噻唑-5-基)(2-氯苯基)曱基)-2-甲基丙烷-2-亞磺酰胺(異構(gòu)體B)。使粗產(chǎn)物吸附于硅膠，經(jīng)過柱色鐠純化(30-80%EtOAc/己烷)，得到橙色固體(37%)力NMR(400MHz，CDC13)58.33(s，1H)，7.70(dd，J-7.8,1.7Hz，1H)，7.35-7.20(m，3H)，7.16-7.07(m，3H)，6.26(d，J=2.0Hz，1H),3.55(d，J=1.8Hz，1H)，2.39(s，3H)，1.79-1.71(m，2H)，1.28-1.21(m，11H);HPLC保留時(shí)間3.98min，10-99%CH3CN,5min流出；ESI-MS582.3m/z(MH+)。1-(苯并[1，3]二氧雜環(huán)戊烯-5-基)-N-(5-((R)-(3，4-二氯苯基)((R)-1，1-二甲基乙基亞磺酰氨基)甲基)噻唑-2-基)環(huán)丙烷甲酰胺和1-(苯并[d[1，3]二氧雜環(huán)戊烯-5-基)(5-((S)一(3，4-二氯苯基)((R)-1，1-二曱基乙基亞磺酰氛基)甲基)噻唑-2-基)環(huán)丙烷甲酰胺借助用于1-(苯并[d[1，3]二氧雜環(huán)戊烯-5-基)-N-(5-((2-氯苯基)((R)-l，l-二甲基乙基亞磺酰氨基)甲基)-4-曱基噢唑-2-基)環(huán)丙烷甲酰胺(異構(gòu)體A)的工藝制備l-(苯并[d[1，3]二氧雜環(huán)戊烯-5-基)(5-((3，4-二氯苯基)((R)-1，1-二甲基乙基亞磺酰氨基)曱基)噢唑-2-基)環(huán)丙烷甲酰胺(異構(gòu)體A)，始于1-(苯并[cd[1，3]二氧雜環(huán)戊烯-5-基)環(huán)丙烷羧酸、(C0C1)2和(R)-N-((2-氨基塞唑-5-基)(3，4-二氯苯基)甲基)-2-甲基丙烷-2-亞磺酰胺(異構(gòu)體A)。粗產(chǎn)物經(jīng)過柱色鐠純化(60-80%EtOAc/己烷)，得到黃色固體(2.70g，72%)。^畫R(400MHz,CDC13)58.57(s，1H)，7.49(d，J=2.1Hz，1H)，7.43(d，J=8.3Hz,1H)，7.28-7.26(m，2H)，6.90(dd，J=1.8，7.9Hz，1H)，6.87(d，J=1.6Hz，1H)，6.82(d，J=7.9Hz，1H)，6,02(s，2H)，5.74(d，J=3.1Hz，1H)，3.73(d，J-3.2Hz，1H)，1.73-1.71(m,2H)，1.28-1.21(m，11H);HPLC保留時(shí)間3.80min，10-99%CH3CN，5min流出；ESI-MS566.2m/z(MH+)。借助用于1-(苯并[d[1,3]二氧雜環(huán)戊烯-5-基)-N-(5-((2-氯苯基)((R)-l，l-二甲基乙基亞磺酰氨基)甲基)-4-甲基噻唑-2-基)環(huán)丙烷曱酰胺(異構(gòu)體A)的工藝制備l-(苯并[^1[1，3]二氧雜環(huán)戊烯-5-基)-N-(5-((3，4-二氯苯基)((R)-1，1-二甲基乙基亞磺酰氨基)甲基)漆唑-2-基)環(huán)丙烷甲酰胺(異構(gòu)體B),始于1-(苯并[dU，3]二氧雜環(huán)戊烯-5-基)環(huán)丙烷羧酸、(C0C1)2和(R)-N-((2-氨基噻唑-5-基)(3，4-二氯苯基)甲基)-2-曱基丙烷-2-亞磺酰胺(異構(gòu)體B)。粗產(chǎn)物經(jīng)過柱色鐠純化(60-100%EtOAc/己烷)，得到黃色固體(2.65g，71°/。)。！H麗R(400MHz,CDC13)58.59(s，1H)，7.52(d，J=2.1Hz，1H)，7.42(d，J=8.3Hz，1H)，7.29-7.26(m，2H)，6.90-6.86(m，2H)，6.81(d，J=7.9Hz，1H)，6.02(dd，J=1.4，1.9Hz，2H)，5.77(d，J=1.8Hz，1H)，3.72(d，J=1.9Hz，1H),1.72(dd，J=3.2，6.7Hz，2H)，1.28-1.22(m，11H);HPLC保留時(shí)間3.91min，10-99%CH3CN，5min流出;ESI-MS566.4m/z(MH+)。(R)-N-(5-(氨基(2-氯苯基)甲基)-4-甲基噻唑-2-基)-1-(苯并[d[1，3]二氧雜環(huán)戊烯-5-基)環(huán)丙烷甲酰胺和(S)-N-(5-(氨基(2-氯苯基)曱基)-4-曱基噻唑-2-基)-1-(苯并[cd[1，3]二氧雜環(huán)戊烯-5-基)環(huán)丙烷曱酰胺向l-(苯并[1,3]二氧雜環(huán)戊烯-5-基)-N-(5-((2-氯苯基)((R)-l，1-二甲基乙基亞磺酰氨基)曱基)-4-甲基噢唑-2-基)環(huán)丙烷甲酰胺(異構(gòu)體A)(1.47g，2,69mmol)的MeOH(13mL)溶液加入4MHC1的二p惡烷溶液(4mL，16mmo1)。將反應(yīng)混合物在室溫下攪拌3h,然后濃縮。將粗產(chǎn)物溶于CH2C12，用飽和NaHC03水溶液(x2)和鹽水洗滌，然后經(jīng)MgS04干燥，濃縮。使粗產(chǎn)物吸附于硅膠，經(jīng)過柱色譜純化(70-100%EtOAc/己烷)，得到N-(5-(氨基(2-氯苯基)甲基)-4-曱基逸唑-2-基)-1-(苯并[^][1，3]二氧雜環(huán)戊烯-5-基)環(huán)丙烷甲酰胺(異構(gòu)體A)，為橙色固體(540mg,45%)。'HNMR(400MHz，DMS0-^$)57.80(d，J-7.9Hz，1H)，7.40-7.36(m，2H)，7.27(m，1H)，6.94(s，1H)，6,85(m，2H)，6.00(s，2H)，5.56(s，1H)，2.19(s，3H)，1.40(m，2H)，1.10(m，2H);HPLC保留時(shí)間2.65min，10-99%CH3CN，5min流出;ESI-MS442.5m/z(MH+)。借助用于異構(gòu)體A的工藝制備N-(5-(氨基(2-氯苯基)曱基)-4-甲基噻唑-2-基)-1-(苯并[d[1，3]二氧雜環(huán)戊烯-5-基)環(huán)丙烷甲酰胺(異構(gòu)體B)，始于l-(苯并M[1，3]二氧雜環(huán)戊烯-5-基)-N-(5-((2-氯苯基)((R)-1，l-二曱基乙基亞磺酰氨基)曱基)-4-甲基噻唑-2-基)環(huán)丙烷曱酰胺(異構(gòu)體B)(90%)。^NMR(400MHz，DMS0-cT。57.80(d，J=7.8Hz，1H)，7.40-7.36(m，2H)，7.27(m，1H)，6.94(s，1H)，6.85(m，2H)，6.00(s，2H)，5.56(s，1H)，2.19(s，3H)，1.40(m，2H)，1.10(m，2H);HPLC保留時(shí)間2.69min，10-99%CH3CN，5min流出；ESI-MS442.3m/z(MH+)。(R)-N-(5-(氨基(2-氯苯基)曱基)-4-甲基噻唑-2-基)-1-(2，2-二氟苯并[d[1，3]二氧雜環(huán)戊烯-5-基)環(huán)丙烷甲酰胺和(S)-N-(5-(氨基(2-氯苯基)曱基)-4-曱基噻唑-2-基)-1-(2，2-二氟苯并[d[1，3]二氧雜環(huán)戊烯-5-基)環(huán)丙烷甲酰胺<formula>formulaseeoriginaldocumentpage112</formula>借助用于N-(5-(氨基(2-氯苯基)曱基)-4-甲基噻唑-2-基)-l-(苯并M[1，3]二氧雜環(huán)戊烯-5-基)環(huán)丙烷甲酰胺(異構(gòu)體A)的工藝制備N-(5-(氨基(2-氯苯基)甲基)-4-甲基噻唑-2-基)-1-(2，2-二氟苯并[d[1，3]二氧雜環(huán)戊烯-5-基)環(huán)丙烷甲酰胺(異構(gòu)體A)，始于N-(5-((2-氯苯基)((R)-1，1-二甲基乙基亞磺酰氨基)甲基)-4-甲基噻唑-2-基)-1-(2，2-二氟苯并[1，3二氧雜環(huán)戊烯-5-基)環(huán)丙烷甲酰胺(異構(gòu)體A)(83%)。'HNMR(400MHz，DMS0-t/(5)57.81(m，1H)，7.41-7.32(m，4H)，7.27(m，1H),7.18(dd，J=1.7，8.3Hz，1H)，5.57(s，1H)，2.20(s，3H)，1.48(m，2H)，1.17(m，2H);HPLC保'留時(shí)間2.84min，10-99%CH3CN,5min流出；ESI-MS478.1m/z(MH+)。借助用于N-(5-(氨基(2-氯苯基)甲基)-4-甲基噻唑-2-基)-l-(苯并[^l[1，3]二氧雜環(huán)戊烯-5-基)環(huán)丙烷曱酰胺(異構(gòu)體A)的工藝制備N-(5-(氨基(2-氯苯基)甲基)-4-曱基噻唑-2-基)-1-(2，2-二氟苯并[d[1，3]二氧雜環(huán)戊烯-5-基)環(huán)丙烷甲酰胺(異構(gòu)體B),始于N-(5-((2-氯苯基)((R)-1，1-二甲基乙基亞磺酰氨基)曱基)-4-曱基噻唑-2-基)-l-(2，2-二氟苯并[d[1，3]二氧雜環(huán)戊烯-5-基)環(huán)丙烷甲酰胺(異構(gòu)體B)(65%)。HNMR(400MHz，DMS0-f/。57.81(m，1H)，7.41-7.32(m，4H)，7.28(m，1H)，7.18(dd，J=1.7，8.3Hz，1H)，5.56(s，1H)，2.19(s，3H)，1.48(m，2H)，1.18(m，2H);HPLC保留時(shí)間2.84min，10-99%CH3CN，5min流出；ESI-MS478.1m/z(MH+)。(R)-N-(5-(氨基(3，4-二氯苯基)甲基)噻唑-2-基)-l-(苯并[d][1，3]二氧雜環(huán)戊烯-5-基)環(huán)丙烷甲酰胺和(S)-N-(5-(氨基(3，4-二氯苯基)曱基)噻唑-2-基)-1-(苯并[d][1，3]二氧雜環(huán)戊烯-5-基)環(huán)丙烷甲酰胺借助用于N-(5-(氨基(2-氯苯基)甲基)-4-甲基噻唑-2-基)-l-(苯并[d[1，3]二氧雜環(huán)戊烯-5-基)環(huán)丙烷甲酰胺(異構(gòu)體A)的工藝制備N-(5-(氨基(3,4-二氯苯基)甲基)噻唑-2-基)-1-(苯并[d[1，3]二氧雜環(huán)戊烯-5-基)環(huán)丙烷甲酰胺(異構(gòu)體A)，始于l-(苯并[d[1，3]二氧雜環(huán)戊烯-5-基)-N-(5-((3，4-二氯苯基)((R)-1，l-二曱基乙基亞磺酰氨基)甲基)噻唑-2-基)環(huán)丙烷甲酰胺(異構(gòu)體A)。粗產(chǎn)物經(jīng)過柱色鐠純化(0-20%MeOH/DCM)(98%)。力NMR(400MHz，DMS0-d6)510.8(bs,1H)，7.70(d,J=2.0Hz，1H),7.58(d,J=8.3Hz，1H)，7.40(dd，J=2.0，8.4Hz，1H)，7.16(d，J=0.8Hz，1H)，6.96(s，1H)，6,86(d，J=0.9Hz,2H)，6.01(s，2H)，5.29(s，1H)，1.44-1.42(m，2H)，1.13-1.10(m，2H);HPLC保留時(shí)間2.81min，10-99%CH3CN，5min流出；ESI-MS462.3<formula>formulaseeoriginaldocumentpage114</formula>借助用于(異構(gòu)體A)的工藝制備N-(5-(氨基(3，4-二氯苯基)曱基)噻唑-2-基)-l-(苯并[d[1，3]二氧雜環(huán)戊烯-5-基)環(huán)丙烷甲酰胺(異構(gòu)體B)，始于l-(苯并[d[1，3]二氧雜環(huán)戊烯-5-基)-N-(5-((3，4-二氯苯基)((R)-1，l-二甲基乙基亞磺酰氨基)甲基)噻唑-2-基)環(huán)丙烷曱酰胺(異構(gòu)體B)(定量收率)。屮醒R(400MHz，DMSO-d6)510.8(bs，1H)，7.70(d，J-2.0Hz，1H)，7.58(d,J=8.3Hz，1H)，7.40(dd，J=2.0，8.4Hz，1H),7.16(d，J-0.7Hz，1H)，6.96(s，1H)，6.86(d，J=0.9Hz，2H)，6.01(s，2H)，5.29(s，1H)，1.44-1.42(m，2H)，1.13-1.10(m，2H);HPLC保留時(shí)間2.81min，10-9HCH3CN，5min流出;ESI-MS462.1m/z(MH+)。1-(苯并[d[1，3]二氧雜環(huán)戊烯-5-基)-N-(5-((R)-((S)+(叔丁基二甲基曱硅烷氧基)吡咯烷-l-基)(2-氯苯基)甲基)-4-曱基噻唑-2-基)環(huán)丙烷甲酰胺和l-(苯并[d[1，3]二氧雜環(huán)戊烯-5-基)-N-(5-((S)-((S)-3-(叔丁基二曱基甲硅烷氧基)吡咯烷-l-基)(2-氯苯基)曱基)-4-甲基噻唑-2-基)環(huán)丙烷甲酰胺<formula>formulaseeoriginaldocumentpage114</formula>向N-(5-(氨基(2-氯苯基)曱基)-4-甲基噻唑-2-基)-l-(苯并[1，3]二氧雜環(huán)戊烯-5-基)環(huán)丙烷甲酰胺(異構(gòu)體A)(450mg，1.02咖ol)的Me0H(5mL)溶液加入(S)-3-(叔丁基二曱基甲硅烷氧基)-4-氯丁醛(289mg，1.22mmol)。將反應(yīng)混合物在室溫下攪拌20min，然后加入NaBH4(58mg，1.53mmo1)。繼續(xù)在室溫下攪拌3h。大約lh后在反應(yīng)溶液中開始生成沉淀/膠，因此加入MeOH(5mL)和CH2Cl2(2mL)以保持全部溶解。將反應(yīng)物用&0稀釋，用EtOAc萃取。合并有機(jī)層，用鹽水洗滌，經(jīng)MgSO,千燥，濃縮。使殘余物吸附于硅膠，經(jīng)過柱色譜純化(0-25。/。EtOAc/己烷)，得到l-(苯并[d[1，3]二氧雜環(huán)戊烯-5-基)-N-(5-(((S)-3-(叔丁基二甲基曱硅烷氧基)吡咯烷-l-基)(2-氯苯基)甲基)-4-曱基噻唑-2-基)環(huán)丙烷甲酰胺(異構(gòu)體A)，為淡黃色固體(470mg，74%)。^NMR(400MHz,CDC13)58.40(s，1H)，7.83(dd，J=8.1，1.6Hz，1H)，7.28-7.25(m，2H)，7.13(m，1H)，6.88-6.83(m，2H)，6.79(d，J=7.9Hz，1H)，6.00(s,2H)，5.08(s，1H)，4.33(m，1H)，2.94(dd，J=9.9，6.3Hz，1H),2.67(td，J=8.3，3.4Hz，1H)，2.53(q，J=8.4Hz，1H)，2.37(s，3H)，2.17(dd，J=9.9，4.7Hz，1H)，2.00(m，1H)，1.74-1.61(m,3H)，1.17(m，2H)，0.86(m，9H)，0.01(s，3H)，-0.01(s，3H);HPLC保留時(shí)間3.45min，10-99%CH3CN,5min流出；ESI-MS626.5m/z(MH+)。借助用于(異構(gòu)體A)的工藝制備l-(苯并[d[1，3]二氧雜環(huán)戊烯-5-基)-N-(5-(((S)-3-(叔丁基二甲基曱硅烷氧基)吡咯烷-l-基)(2-氯苯基)甲基)-4-甲基噻唑-2-基)環(huán)丙烷甲酰胺(異構(gòu)體B)，始于N-(5-(氨基(2-氯苯基)曱基)-4-甲基噻唑-2-基)-1-(苯并[1，3〗二氧雜環(huán)戊烯-5-基)環(huán)丙烷甲酰胺(異構(gòu)體B)和(S)-3-(叔丁基二甲基甲硅烷氧基)-4-氯丁醛(81%)。卞服R(400MHz，CDCh)58.41(s,1H)，7.86(dd，J=7,2,0.7Hz,1H)，7.27-7.24(m，2H)，7.12(m,1H)，6.88-6.84(m，2H)，6.79(d，J=7.9Hz，1H)，6.00(s，2H)，5.05(s，1H)，4.34(m，1H)，2.84(dd，J=9.7，6.3Hz，1H),2.56-2.46(m，2H)，2.37-2.32(m，4H)，2.03(m，1H)，1.74-1.62(m，3H)，1.18(m，2H)，0.86(m，9H)，0.02(s，3H)，0.00(s，3H);HPLC保留時(shí)間3.54min，10-99%CH3CN，5min流出；ESI-MS626.3m/z(MH+)。N-(5-((R)-((S)-3-(叔丁基二甲基甲硅烷氧基)吡咯烷-1-基)(2-氯苯基)甲基)-4-甲基噻唑-2-基)-1-(2，2-二氟苯并[d[1，3]二氧雜環(huán)戊烯-5-基)環(huán)丙烷甲酰胺和N-(5-((S)-((S)-3-(叔丁基二甲基甲硅烷氧基)吡咯烷-l-基)(2-氯苯基)曱基)-4-甲基噻唑-2-基)-1-(2，2-二氟苯并[d[1，3]二氧雜環(huán)戊烯-5-基)環(huán)丙烷甲酰胺借助用于1-(苯并[1,3]二氧雜環(huán)戊烯-5-基)-N-(5-(((S)-3-(叔丁基二甲基甲硅烷氧基)吡咯烷-l-基)(2-氯苯基)甲基)-4-曱基噻唑-2-基)環(huán)丙烷甲酰胺(異構(gòu)體A)的工藝制備N-(5-(((S)-3-(叔丁基二甲基曱硅烷氧基)吡咯烷-l-基)(2-氯苯基)曱基)-4-甲基噻唑-2-基)-1-(2，2-二氟苯并[d[1，3]二氧雜環(huán)戊烯-5-基)環(huán)丙烷甲酰胺(異構(gòu)體A)，始于N-(5-(氨基(2-氯苯基)甲基)-4-曱基噻唑-2-基)-1-(2,2-二氟苯并[d[1，3]二氧雜環(huán)戊烯-5-基)環(huán)丙烷甲酰胺(異構(gòu)體A)和(S)-3-(叔丁基二甲基甲硅烷氧基)-4-氯丁醛(73%)。NMR(400MHz，CDCh)58,25(s，1H)，7.83(dd，J=8.1，1.6Hz，1H)，7.28-7.25(m，2H)，7.16-7.11(m，3H)，7.06(d，J-8.1Hz，1H)，5.08(s，1H),4.33(m，1H)，2.94(dd，J=9.9，6.2Hz,1H)，2.66(td，J-8.3，3.7Hz，1H)，2.54(q,J-8.3Hz，1H)，2.36(s，3H)，2,18(dd,J=9.9，4.7Hz,1H)，2.02(m，1H)，1.75(m，2H)，1.65(m，1H)，1.20(m，2H)，0.86(m，9H)，0.01(s，3H)，-0.01(s，3H);HPLC保留時(shí)間3.69min，10-99%CH3CN，5min流出；ESI-MS662.1m/z(MH+),借助用于l-(苯并[d[1,3]二氧雜環(huán)戊烯-5-基)-N-(5-(((S)-3-(叔丁基二甲基甲硅烷氧基)吡咯烷-l-基)(2-氟苯基)甲基)-4-甲基噻唑-2-基)環(huán)丙烷曱酰胺(異構(gòu)體A)的工藝制備N-(5-(((S)-3-(叔丁基二甲基甲硅烷氧基)吡咯烷-l-基)(2-氯苯基)甲基)-4-甲基噻唑-2-基)-l-(2，2-二氟苯并[c][1，3]二氧雜環(huán)戊烯-5-基)環(huán)丙烷甲酰胺(異構(gòu)體B)，始于N-(5-(氨基(2-氯苯基)甲基)-4-甲基噻唑-2-基)-l-(2，2-二氟苯并[d[1，3]二氧雜環(huán)戊烯-5-基)環(huán)丙烷曱酰胺(異構(gòu)體B)和(S)-3-(叔丁基二甲基甲硅烷氧基)-4-氯丁醛(93%)。^NMR(400MHz，CDC13)58.26(s，1H),7.85(dd，J=8.1，1.7Hz，1H)，7.28-7.24(m，2H)，7.16-7.10(m，3H)，7.07(d，J=8.2Hz，1H)，5.05(s，1H)，4.34(m，1H)，2.83(dd，J=9.7，6.3Hz，1H)，2.55-2.47(m，2H)，2.36-2.33(m，4H)，2.04(m,1H)，1.79-1.63(m，3H)，1.21(m，2H)，0.86(m，9H)，0.02(s，3H)，0.00(s，3H);HPLC保留時(shí)間3.73min，10-99%CH3CN，5min流出;ESI-MS662.1m/z(MH+)。l-(苯并[d[1，3]二氧雜環(huán)戊烯-5-基)-N-(5-((RH(R)-3-(叔丁基二甲基甲硅烷氧基)吡咯烷-l-基)(3，4-二氯苯基)曱基)噻唑-2-基)環(huán)丙烷曱酰胺和l-(苯并[d[1，3]二氧雜環(huán)戊烯-5-基)-N-(5-((S)-((R)-3-(叔丁基二甲基曱硅烷氧基)吡咯烷-l-基)(3，4-二氯苯基)曱基)噢唑-2-基)環(huán)丙烷甲酰胺借助用于l-(苯并[d[1,3]二氧雜環(huán)戊烯-5-基)-N-(5-(((S)-3-(叔丁基二甲基甲硅烷氧基)吡咯烷-l-基)(2-氯苯基)曱基)-4-甲基噻唑-2-基)環(huán)丙烷甲酰胺(異構(gòu)體A)的工藝制備l-(苯并[tf][1，3]二氧雜環(huán)戊烯-5-基)-N-(5-(((R)-3-(叔丁基二甲基甲硅烷氧基)吡咯烷-l-基)(3，4-二氯苯基)曱基)噻唑-2-基)環(huán)丙烷曱酰胺(異構(gòu)體A)，始于N-(5-(氨基a4-二氯苯基)甲基)瘞唑-2-基)-l-(苯并[d[1，3]二氧雜環(huán)戊烯-5-基)環(huán)丙烷曱酰胺(異構(gòu)體A)和(R)-3-(叔丁基二曱基甲硅烷氧基)-4-氯丁醛(85%)。^醒R(400MHz,CDC13)58.47(s，1H)，7.51(d，J=2.0Hz，1H)，7.35(d，J-8.3Hz，1H)，7.30(dd，J-2.0，8.3Hz，1H)，7.19(s，1H)，6.90-6.85(m，2H)，6.80(d，J=7.9Hz，1H)，6.01(s，2H)，4.47(s，1H)，4.34(m，1H)，2.84(dd，J=6.2，9.8Hz，1H)，2.55一2.44(m，2H)，2.31(dd，J-4.4，9.9Hz，1H)，2.17(s，1H)，1.73-1.64(m，3H)，1.26-1.19(m，2H)，0.91(s，3H)，0.86(s,6H)，0.02(s，6H);HPLC保留時(shí)間3.66min，10-99%CH3CN，5min流出；ESI-MS646.5m/z(MH+)。借助用于l-(苯并[d[1,3]二氧雜環(huán)戊烯-5-基)-N-(5-(((S)-3-(叔丁基二甲基甲硅烷氧基)吡咯烷-l-基)(2-氯苯基)甲基)-4-甲基噻唑-2-基)環(huán)丙烷甲酰胺(異構(gòu)體A)的工藝制備l-(苯并[d[1，3]二氧雜環(huán)戊烯-5-基)-N-(5-(((R)-3-(叔丁基二甲基甲硅烷氧基)吡咯烷-l-基)(3，4-二氯苯基)曱基)噻唑-2-基)環(huán)丙烷甲酰胺(異構(gòu)體B)，始于N-(5-(氨基(3，4-二氯苯基)甲基)噻唑-2-基)-l-(苯并[d][1，3]二氧雜環(huán)戊烯-5-基)環(huán)丙烷曱酰胺(異構(gòu)體B)和00-3-(叔丁基二曱基曱硅烷氧基)-4-氯丁醛(70%)。^NMR(400MHz,CDC13)58.47(s，1H)，7.50(d，J=2.0Hz，1H)，7.36(d，J-8.3Hz，1H)，7.29(dd，J=2.0，8.3Hz，1H),7.19(s,1H)，6.90-6.85(m，2H)，6.80(d，J=7.9Hz，1H)，6.01(s，2H)，4.51(s，1H)，4.34(m，J=3.4，9.4Hz，1H)，2.88(dd，J=6.2，10.0Hz，1H)，2.67-2.62(m,1H)，2.53(dd，J=8.2，16.7Hz，1H)，2.17(dd，J=4.4，10.0Hz，1H)，2.07-1.78(m，1H)，1.75-1.63(m，3H)，1.22-1.18(m，2H)，0.86(d，J-2.5Hz，9H)，0.01(m,6H);HPLC保留時(shí)間3.67min，10-99%CH3CN，5min流出;ESI-MS646.4m/z(MH+)。l-(苯并[1，3]二氧雜環(huán)戊烯-5-基)-N-(5-((R)-(2-氯苯基)((S)-3-羥基吡咯烷-l-基)甲基)-4-甲基噻唑-2-基)環(huán)丙烷甲酰胺和l-(苯并[d[1,3]二氧雜環(huán)戊烯-5-基)-N-(5-((S)-(2-氯苯基)((S)-3-羥基吡咯烷-l-基)甲基)-4-甲基噻唑-2-基)環(huán)丙烷甲酰胺將1-(苯并[d[1，3]二氧雜環(huán)戊烯-5-基)-N-(5-(((S)-3-(叔丁基二曱基甲硅烷氧基)吡咯烷-l-基)(2-氯苯基)甲基)-4-甲基噻唑-2-基)環(huán)丙烷曱酰胺(異構(gòu)體A)(400mg，0.64mmol)與TBAF(1MTHF溶液，3.84mL，3.84mmol)的混合物在室溫下攪拌5h。使反應(yīng)物在H20與Et0Ac之間分配。合并有機(jī)層，用鹽水洗滌，經(jīng)MgS04干燥，濃縮。使殘余物吸附于硅膠，經(jīng)過柱色語純化(25-75%Et0Ac/己烷)，得到1-(苯并[d[1，3]二氧雜環(huán)戊烯-5-基)+(5-((2-氯苯基)((S)-3-羥基吡咯烷-l-基)甲基)-4-甲基噻唑-2-基)環(huán)丙烷甲酰胺(異構(gòu)體A),為淡黃色固體(245mg，75%，>99%de)。^NMR(400MHz,CDC13)58.41(s，1H)，7,85(dd,J-8.1，1.7Hz，1H)，7.29-7.26(m，2H)，7.14(m，1H)，6.88-6.84(m，2H)，6.79(d，J-7.9Hz，1H)，6.00(s，2H)，5.07(s，1H)，4.30(m，1H)，2.79(td，J=8.6，5.8Hz，1H)，2.63-2.56(m，2H)，2.36(s，3H)，2.29(td，J=9.0，5.9Hz，1H)，2.15(m，1H),1.85(d，J=7.9Hz，1H)，1.78-1.65(m，3H)，1.18(m，2H);HPLC保留時(shí)間2.70min，10-99%CH3CN，5邁in流出;ESI-MS512.5m/z(MH+)。借助用于(異構(gòu)體A)的工藝制備l-(苯并[d[1，3]二氧雜環(huán)戊烯-5-基)-N-(5-((2-氯苯基)((S)-3-羥基吡咯烷-l-基)甲基)+甲基噻唑-2-基)環(huán)丙烷曱酰胺(異構(gòu)體B)，始于l-(苯并[d[1，3]二氧雜環(huán)戊烯-5-基)-N-(5-(((S)-3-(叔丁基二曱基甲硅烷氧基)吡咯烷-l-基)(2-氯苯基)甲基)-4-甲基噻唑-2-基)環(huán)丙烷曱酰胺(異構(gòu)體B)(50%,>99%de)。'HNMR(400MHz，CDC13)58.44(s，1H)，7.84(dd，J-7.8，1.5Hz，1H)，7.29-7.25(m，2H)，7.14(td，J-7.6，1.7Hz，1H)，6.88-6.84(m，2H)，6.79(d，J=7.9Hz，1H)，6.00(s，2H)，5.07(s，1H)，4.29(m，1H)，2.83(td,J=8.6，5.0Hz，1H)，2.61(d，J-10.lHz，1H)，2.49(m，1H)，2.36-2.29(m，4H)，2.17(m，1H)，1.89(d，J-7.9Hz，1H)，1.76-1.66(m，3H)，1.19(m，2H);HPLC保留時(shí)間2.71min，10—99%CH3CN，5min流出;ESI-MS512.5m/z(MH+)。N-(5-((R)-(2-氯苯基)((S)-3-羥基吡咯烷-l-基)甲基)-4-甲基噻唑-2-基)-1-(2，2-二氟苯并[d[1，3]二氧雜環(huán)戊烯-5-基)環(huán)丙烷曱酰胺和N-(5-((S)-(2-氯苯基)((S)-3-羥基吡咯烷-l-基)甲基)-4-甲基噻唑一2—基)一卜(2，2-二氟苯并[d[i，3]二氧雜環(huán)戊烯-5-基)環(huán)丙烷甲酰胺OH、OH借助用于l-(苯并[cf][1，3]二氧雜環(huán)戊烯-5-基)-N-(5-((2-氯苯基)((S)-3-羥基吡咯烷-1-基)甲基)-4-甲基噻唑-2-基)環(huán)丙烷曱酰胺(異構(gòu)體A)的工藝制備N-(5-((2-氯苯基)((S)-3-羥基吡咯烷-1-基)甲基)-4-甲基噻唑-2-基)-1-(2，2-二氟苯并[1,3]二氧雜環(huán)戊烯-5-基)環(huán)丙烷甲酰胺(異構(gòu)體A)，始于N-(5-(((S)-3-(叔丁基二甲基甲硅烷氧基)吡咯烷-l-基)(2-氯苯基)甲基)-4-甲基噻唑-2-基)-1-(2，2-二氟苯并[cd[1，3]二氧雜環(huán)戊烯-5-基)環(huán)丙烷甲酰胺(異構(gòu)體A)(72%)。力NMR(400MHz，CDC13)58.28(s，1H)，7.84(dd，J-8.1，1.7Hz，1H)，7.30-7.26(m,2H)，7.17-7.12(m，3H)，7.07(d，J=8.2Hz，1H)，5.07(s，1H)，4.30(m，1H)，2.79(td，J-8.6，5.7Hz，1H)，2.62-2.55(m，2H)，2.35(s，3H)，2.28(td，J-9.0，5.9Hz，1H)，2.15(m，1H)，1.86(d，J-7.9Hz，1H)，1.80-1.71(m，3H)，1.21(m，2H);HPLC保留時(shí)間2.91min，10-99%CH3CN，5min流出；ESI-MS548.3m/z(MH+)。借助用于1-(苯并[d[1，3]二氧雜環(huán)戊烯-5-基)-N-(5-((2-氯苯基)((S)-3-羥基吡咯烷-l-基)甲基)-4-甲基噻唑-2-基)環(huán)丙烷甲酰胺(異構(gòu)體A)的工藝制備N-(5-((2-氯苯基)((S)-3-羥基吡咯烷-1-基)甲基)-4-甲基噻唑-2-基)-l-(2，2-二氟苯并[f/]Cl，3]二氧雜環(huán)戊烯-5-基)環(huán)丙烷甲酰胺(異構(gòu)體B)，始于N-(5-(((S)-3-(叔丁基二甲基甲硅烷氧基)吡咯烷-l-基)(2-氯苯基)甲基)-4-曱基噻唑-2-基)-1-(2，2-二氟苯并[d[1，3]二氧雜環(huán)戊烯-5-基)環(huán)丙烷曱酰胺(異構(gòu)體B)(85%)。力NMR(400MHz，CDC13)58.28(s，1H)，7.82(dd，J-7.7,1.5Hz，1H)，7.30—7.25(m，2H)，7.14(m，3H)，7.07(d，J=8.2Hz，1H)，5.07(s，1H)，4.29(m，1H)，2.83(td，J=8.7，5.1Hz，1H)，2.61(d，J=10.0Hz，1H)，2.50(dd，J-10.1，5.1Hz，1H)，2.36-2.29(m，4H)，2.17(m，1H)，1.88(d，J=7.8Hz，1H)，1.82-1.70(m，3H)，1.22(m，2H);HPLC保留時(shí)間2.94min，10-99%CH3CN，5min流出；ESI-MS548.3m/z(MH+)。l-(苯并[d[1，3]二氧雜環(huán)戊烯-5-基)-N-(5-((R)-(3，4-二氯苯基)((R)-3-羥基吡咯烷-l-基)曱基)噻唑-2-基)環(huán)丙烷曱酰胺和l-(苯并[d[1,3]二氧雜環(huán)戊烯-5-基)-N-(5-((S)-(3，4-二氯苯基)((R)-3-羥基吡咯烷-l-基)甲基)噻唑-2-基)環(huán)丙烷曱酰胺借助用于1-(苯并[d[1，3]二氧雜環(huán)戊烯-5-基)-N-(5-((2-氯苯基)((S)-3-幾基吡咯烷-l-基)甲基)-4-曱基噻唑-2-基)環(huán)丙烷甲酰胺(異構(gòu)體A)的工藝制備l-(苯并[^][l,3]二氧雜環(huán)戊烯-5-基)-N-(5-((3，4-二氯苯基)((R)-3-羥基吡咯烷-l-基)曱基)噻唑-2-基)環(huán)丙烷曱酰胺(異構(gòu)體A),始于1-(苯并[d[1，3]二氧雜環(huán)戊烯-5-基)-N-(5-(((R)-3-(叔丁基二甲基甲硅烷氧基)吡咯烷-l-基)(3，4-二氯苯基)甲基)噻唑-2-基)環(huán)丙烷甲酰胺(異構(gòu)體A)。粗產(chǎn)物經(jīng)過柱色譜純化(60-90%EtOAc/己烷)(74°/。，98。"e)。^畫R(400MHz,CDC13)58.49(s，1H)，7.50(d，J=2.0Hz，1H)，7.37(d，J=8.3Hz，1H)，7.31(dd，J-2.0，8.3Hz，1H)，7.20(s，1H)，6.90_6.86(m，2H)，6.81(d，J=7.9Hz，1H)，6.01(s，2H)，4.48(s，1H)，4.32(m，1H)，2.82-2.76(m，1H)，2.59-2.57(m，1H)，2.51(q，J=5.1Hz，1H)，2.33(td，J=8.9，6.1Hz，1H)，2.16(dd，J=5.3，12,5Hz，1H)，1.81-1,69(m，4H)，1.22(dd，J=5.0，7.6Hz，2H);HPLC保留時(shí)間2.81min，10-99%CH3CN，5min流出；ESI-MS532.2m/z(MH+)。借助用于(異構(gòu)體A)的工藝制備l-(苯并[d[1，3]二氧雜環(huán)戊烯-5-基)-N-(5-((3，4-二氯苯基)((R)-3-羥基吡咯烷-l-基)甲基)噻唑-2-基)環(huán)丙烷曱酰胺(異構(gòu)體B)，始于l-(苯并[d[1，3]二氧雜環(huán)戊烯-5-基)-N-(5-(((R)-3-(叔丁基二甲基甲硅烷氧基)吡咯烷-l-基)(3，4-二氯苯基)甲基)噻唑-2-基)環(huán)丙烷甲酰胺(異構(gòu)體B)(78%，95%de)。麗R(400MHz，CDC13)58.49(s，1H)，7.52(d,J=2.0Hz，1H)，7.37(d，J=8.3Hz，1H)，7.30(dd，J=2.0，8.3Hz，1H)，7.20(s，1H)，6.90-6.86(m，2H)，6.81(d，J=7.9Hz，1H)，6.01(s，2H)，4.48(s，1H)，4.34-4.32(m，1H)，2.76(td，J-8.5,6.0Hz，1H)，2.57(m，2H)，2.29(m，1H)，2.15(q，J-7.2Hz，1H)，1.81-1.68(m，4H)，1.25-1.20(m,2H);HPLC保留時(shí)間2.80min，10-99%CH3CN，5min流出；ESI-MS532.2m/z(MH+)。檢測(cè)和測(cè)量化合物AF508-CFTR糾正性質(zhì)的測(cè)定法I)測(cè)定化合物AF508-CFTR調(diào)控性質(zhì)的膜電位光學(xué)方法光學(xué)膜電位測(cè)定法采用如Gonzalez和Tsien所述的電壓-敏感性FRET傳感器(參見Gonzalez,J.E.andR.Y.Tsien(1995)"Voltagesensingbyfluorescenceresonanceenergytransferinsinglecells"BiophysJ69(4):1272=80，andGonzalez,J.E.和R.Y.Tsien(1997)"Improvedindicatorsofcellmembranepotentialthatusefluorescenceresonanceenergytransfer"ChemBiol4(4):269-77)與測(cè)量焚光變化的儀器的組合，例如電壓/離子探針讀數(shù)器(VIPR)(參見Gonzalez,J.E.，K.Oades，等人(1999)"Cell-basedassaysandinstrumentationforscreeningion—channeltargets"DrugDiscovToday4(9):431-439)。這些電壓敏感性測(cè)定法基于膜溶性、電壓敏感性染劑DiSBAC2(3)與熒光磷脂CC2-DMPE之間熒光共振能量轉(zhuǎn)移(FRET)的變化，所述熒光磷脂連接于質(zhì)膜的外部小葉，充當(dāng)FRET供體。膜電位OL)的變化導(dǎo)致帶負(fù)電的DiSBAC2(3)跨越質(zhì)膜重新分布，從CC2-DMPE轉(zhuǎn)移的能量相應(yīng)地改變。熒光發(fā)射的變化可以利用VIPRII監(jiān)測(cè)，它是一種整合的液體處理器和熒光檢測(cè)器，被設(shè)計(jì)用來在96-或384-孔微量滴定平板中進(jìn)行細(xì)胞類篩選。細(xì)胞培養(yǎng)使用穩(wěn)定表達(dá)AF508-CFTR的NIH3T3小鼠成纖維細(xì)胞進(jìn)行膜電位的光學(xué)測(cè)量。在175ci^培養(yǎng)燒瓶中，將細(xì)胞維持在37X:下、在5%0)2和90。/。濕度中、和Dulbecco氏改性Eagle氏培養(yǎng)基中，其中補(bǔ)充有2mM谷氨酰胺、10%胎牛血清、IXNEAA，p-ME、IX青霉素/鏈霉素和25mMHEPES。就全部光學(xué)測(cè)定而言，將細(xì)胞按30，000/孔接種在384-孔涂有matrigel的平板中，在37'C下培養(yǎng)2小時(shí)，然后在27C下培養(yǎng)24小時(shí)，供強(qiáng)化劑測(cè)定。就糾正(correction)測(cè)定而言，在27匸或37'C下將細(xì)胞用和不用化合物培養(yǎng)16-24小時(shí)。B)測(cè)定化合物的AF508-CFTR調(diào)控性質(zhì)的電生理測(cè)定法1.Ussing室領(lǐng)'J定法對(duì)表達(dá)AF508-CFTR的極化上皮細(xì)胞進(jìn)行Ussing室實(shí)驗(yàn)，以進(jìn)一步鑒定在光學(xué)測(cè)定法中鑒別的AF508-CFTR調(diào)控劑。將生長(zhǎng)在CostarSnapwell細(xì)胞培養(yǎng)插件上的FRTAF5°8—CFTR上皮細(xì)胞固定在Ussing室內(nèi)(PhysiologicInstruments,Inc.,SanDiego,CA)，利用電壓籍系統(tǒng)(DepartmentofBioengineering，UniversityofIowa,IA，and,PhysiologicInstruments,Inc.,SanDiego,CA)連續(xù)使單層短路。施加2mV脈沖測(cè)量跨上皮電阻。在這些條件下，F(xiàn)RT上皮證明有4KQ/cm2或以上的電阻。將溶液維持在27匸下，通入空氣。利用無電池插件糾正電極偏移電位和流體電阻。在這些條件下，電流反映頂端膜中CI—通過AF508-CFTR的流動(dòng)。利用MP100A-CE界面和AcqKnowledge軟件(v3.2.6;BI0PACSystems,SantaBarbara,CA)獲取數(shù)字方式的Isc。糾正化合物的鑒別典型的方案采用基底外側(cè)至頂端膜CI—濃度梯度。為了建立這種梯度，對(duì)基底外側(cè)膜使用正常的套環(huán)，而頂端NaCl被等摩爾葡糖酸鈉代替(用Na0H滴定至pH7.4)，得到跨越上皮的大幅CI—濃度梯度。所有實(shí)驗(yàn)均是用完整單層進(jìn)行的。為了充分活化AF508-CFTR，施加福司扣林(IO^iM)和PDE抑制劑IBMX(lOO^iM)，繼之以加入CFTR強(qiáng)化劑染料木素(50j^iM)。正如在其他細(xì)胞類型中所觀察到的，在低溫下溫育穩(wěn)定表達(dá)AF508-CFTR的FRT細(xì)胞會(huì)增加CFTR在質(zhì)膜中的功能密度。為了測(cè)定糾正化合物的活性，將細(xì)胞與lOnM供試化合物在37t:下溫育24小時(shí)，隨后洗滌3次，然后記錄。將cAMP-和染料木素-介導(dǎo)的化合物-處置細(xì)胞Ise正?；癁?7'C和37C對(duì)照，以活性百分比表示。與37C對(duì)照相比，細(xì)胞用糾正化合物預(yù)溫育顯著增加cAMP-和染料木素-介導(dǎo)的Isc。為了測(cè)定糾正化合物增加質(zhì)膜中功能性AF508-CFTR密度的活性，我們利用上述開孔-碎片-記錄技術(shù)測(cè)量糾正化合物處理24小時(shí)后的電流密度。為了充分活化AF508-CFTR，向細(xì)胞加入10|iM福司扣林和20^iM染料木素。在我們的記錄條件下，在27。C下溫育24小時(shí)后的電流密度高于在37。C下溫育24小時(shí)后的觀測(cè)值。這些結(jié)果與低溫溫育對(duì)質(zhì)膜中AF508-CFTR密度的已知影響是一致的。為了測(cè)定糾正化合物對(duì)CFTR電流密度的影響，將細(xì)胞與10^M供試化合物在37C下溫育24小時(shí)，與27X:和37X:對(duì)照比較電流密度(活性°/0。在記錄之前，將細(xì)胞用細(xì)胞外記錄介質(zhì)洗滌3次，以除去任何剩余的供試化合物。與37X:對(duì)照相比，用10|oM糾正化合物預(yù)溫育顯著增加cAMP-和染料木素-依賴性電流。表3闡述本發(fā)明示范性實(shí)施方式的EC50和相對(duì)功效。下表3中，適用下列含義EC50:"+++"表示<2uM;"++"表示2uM至20uM之間；"+"表示25uM至60uM之間。%功效"+"表示<25%;"++"表示25%至100%之間；"+++"表示>100%。表3<table>tableseeoriginaldocumentpage126</column></row><table>如上表3所述，本發(fā)明化合物意外地表現(xiàn)較好的糾正活性，正如上述測(cè)定法所測(cè)量的。權(quán)利要求1.式I或式II化合物id="icf0001"file="S2006800375561C00011.gif"wi="144"he="35"top="52"left="38"img-content="drawing"img-format="tif"orientation="portrait"inline="no"/>或其藥學(xué)上可接受的鹽，其中每個(gè)RX獨(dú)立地是氫、鹵代基、CF3、C1-C4烷基或-OC1-C4烷基；其條件是兩個(gè)RX不同時(shí)是氫；或者兩個(gè)RX一起構(gòu)成環(huán)(a)id="icf0002"file="S2006800375561C00012.gif"wi="38"he="14"top="124"left="59"img-content="drawing"img-format="tif"orientation="portrait"inline="no"/>X是CH2、CF2、CH2-CH2或CF2-CF2；環(huán)A是3-7元單環(huán)的環(huán)烷基環(huán)；RAA和RBB與氮原子一起構(gòu)成被OR’取代的吡咯烷基環(huán)；R’是氫或者C1-C6脂族基，其中所述脂族基的至多兩個(gè)碳單元選擇性地和獨(dú)立地被-CO-、-CS-、-COCO-、-CONR-、-CONRNR-、-CO2-、-OCO-、-NRCO2-、-O-、-NRCONR-、-OCONR-、-NRNR，-NRNRCO-、-NRCO-、-S-、-SO，-SO2-、-NR-、-SO2NR-，NRSO2-或-NRSO2NR-代替；R是氫或者C1-C6脂族基；Z是吸電子基團(tuán)；而q是0-3。2.根據(jù)權(quán)利要求1的化合物，其中兩個(gè)Rx—起構(gòu)成環(huán)(a)，X是CH2。3.根據(jù)權(quán)利要求1的化合物，其中兩個(gè)Rx—起構(gòu)成環(huán)(a)，X是CF2。4.根據(jù)權(quán)利要求1的化合物，其中一個(gè)Rx是氫，另一個(gè)f是卣代基、CF3、CI-C4烷基或-0Cl-C4烷基。5.根據(jù)權(quán)利要求1的化合物，其中一個(gè)Rx是氫，另一個(gè)W是4-曱氧基。6.根據(jù)權(quán)利要求1-5任意一項(xiàng)的化合物，其中環(huán)A是環(huán)丙基、環(huán)戊基或環(huán)己基。7.根據(jù)權(quán)利要求6的化合物，其中環(huán)A是環(huán)丙基或環(huán)戊基。8.根據(jù)權(quán)利要求6的化合物，其中環(huán)A是環(huán)丙基。9.根據(jù)權(quán)利要求1-8任意一項(xiàng)的化合物，其中R，是氬。10.根據(jù)權(quán)利要求l-8任意一項(xiàng)的化合物，其中R，是Cw烷基。11.根據(jù)權(quán)利要求1-10任意一項(xiàng)的化合物，其中R"和ir一起構(gòu)成被0H取代基取代的吡咯烷基。12.根據(jù)權(quán)利要求1-11任意一項(xiàng)的化合物，其中Z選自卣代基、CF3或二氟亞曱二氧基。13.根據(jù)權(quán)利要求1-12任意一項(xiàng)的化合物，其中q是0。14.根據(jù)權(quán)利要求1-12任意一項(xiàng)的化合物，其中q是l。15.根據(jù)權(quán)利要求l-14任意一項(xiàng)的化合物，其中R是氫。16.根據(jù)權(quán)利要求l-12或14任意一項(xiàng)的化合物，其中式I或式II化合物包含一個(gè)或多個(gè)、優(yōu)選全部下列特征兩個(gè)rx—起構(gòu)成環(huán)(a);X是CH2;環(huán)A是環(huán)丙基；R是氫；q是1;而Z是囟代基、CF3或二氟亞甲二氧基。17.根據(jù)權(quán)利要求l-16任意一項(xiàng)的化合物，其中式I中的Raa和rbb與氮原子一起構(gòu)成下列環(huán)(i):<formula>formulaseeoriginaldocumentpage4</formula>.18.根據(jù)權(quán)利要求l-16任意一項(xiàng)的化合物，其中式I中的R和rbb與氮原子一起構(gòu)成下列環(huán)(U):<formula>formulaseeoriginaldocumentpage4</formula>.19.選自表l的化合物。20.藥物組合物，包含(i)根據(jù)權(quán)利要求1-19任意一項(xiàng)的化合物；和(iO藥學(xué)上可接受的載體。21.根據(jù)權(quán)利要求20的組合物，選擇性地進(jìn)一步包含一種附加成分選自粘液溶解劑、支氣管擴(kuò)張劑、抗生素、抗感染劑、抗炎劑、除本發(fā)明化合物以外的CFTR強(qiáng)化劑或CFTR糾正劑、或者營(yíng)養(yǎng)劑。22.增加細(xì)胞膜中功能性CFTR數(shù)量的方法，包括使所述細(xì)胞與根據(jù)權(quán)利要求1—19任意一項(xiàng)的化合物接觸的步驟。23.用于體外或體內(nèi)測(cè)量生物樣品中CFTR或其片段活性的藥盒，包含(i)第一組合物，包含根據(jù)權(quán)利要求l-19任意一項(xiàng)的化合物；和(ii)關(guān)于下列內(nèi)容的說明書a)使該組合物與該生物樣品接觸；b)測(cè)量所述CFTR或其片段的活性。24.根據(jù)權(quán)利要求23的藥盒，進(jìn)一步包含關(guān)于下列內(nèi)容的說明書a)使附加組合物與該生物樣品接觸；b)在所述附加化合物的存在下測(cè)量所述CFTR或其片段的活性，和c)比較在該附加化合物存在下的CFTR活性與在所述第一組合物存在下的CFTR密度。25.根據(jù)權(quán)利要求24的藥盒，其中該藥盒用于測(cè)量CFTR的密度。26.治療患者牽涉CFTR的病癥、疾病或疾患的方法，包括對(duì)所述患者給予根據(jù)權(quán)利要求1-19任意一項(xiàng)的化合物的步驟。27.根據(jù)權(quán)利要求26的方法，其中所述病癥、疾病或疾患選自嚢性纖維化、遺傳性肺氣腫、遺傳性血色素沉著、凝血-纖維蛋白溶解缺陷(例如C蛋白缺陷)、1型遺傳性血管水胂、脂質(zhì)加工缺陷(例如家族性高膽固醇血)、1型乳糜微粒血、P-脂蛋白血、溶酶體貯存疾病(例如I-細(xì)胞疾病/假性赫爾勒氏病)、粘多糖病、桑德霍夫病/泰-薩二氏病、克-納二氏病II型、多內(nèi)分泌病/高胰島素血、糖尿病、拉倫侏儒、髄過氧化物酶缺陷、原發(fā)性曱狀旁腺機(jī)能減退、黑素瘤、聚糖病CDG1型、遺傳性肺氣胂、先天性曱狀腺機(jī)能亢進(jìn)、成骨不全、遺傳性低纖維蛋白原血、ACT缺陷、尿崩癥(DI)、后葉激素運(yùn)載蛋白性DI、腎原性DI、夏-馬-圖三氏綜合征、佩-梅二氏病、神經(jīng)變性疾病(例如阿爾茨海默氏病、帕金森氏病、肌萎縮性側(cè)索硬化、進(jìn)行性核上性麻瘠、皮克氏病)、若干聚谷氨酰胺神經(jīng)病學(xué)障礙(例如亨廷頓氏病、I型脊髓小腦性共濟(jì)失調(diào)、脊髄與延髓肌肉萎縮、齒狀紅核蒼白球丘腦下核萎縮和肌強(qiáng)直性營(yíng)養(yǎng)不良)以及海綿狀腦病(例如遺傳性克-雅二氏病(由朊病毒蛋白加工缺陷引起)、法布里氏病和斯-施二氏綜合征)、分泌性腹瑪、多嚢性腎疾病、慢性阻塞性肺疾病(C0PD)、干眼病或斯耶格倫氏綜合征。28.具有式r或式n，的化合物<formula>formulaseeoriginaldocumentpage6</formula>其中Rx、環(huán)A、Z和q是如權(quán)利要求1定義的;L是選自C(0)或S02的連接基團(tuán)；P是0或1;CA是適合的手性助劑。29.根據(jù)權(quán)利要求28的化合物，其中CA、L、p和連接于此的氧原子一起是(+)-10-樟腦磺酸酯、(1&4i)-(-)-w-莰烷酸酯、(1A2《5i)-(-)-薄荷醇碳酸酯、(1&2A55)-(+)-薄荷醇碳酸酯、(1A2^-1-苯基-2-環(huán)丙基酯或(3"-四氫呋喃-3-碳酸酯。30.生產(chǎn)式i或式ii化合物的方法:<formula>formulaseeoriginaldocumentpage7</formula>包括在第一適合的條件下使式R-l化合物與式I-A化合物反應(yīng)生成所述式I化合物、或者與式II-A化合物反應(yīng)生成所述式II化合物的步驟<formula>formulaseeoriginaldocumentpage7</formula>其中每個(gè)RX獨(dú)立地是氫、卣代基、CF3、Cl-C4烷基或-0Cl-C4烷基;其條件是兩個(gè)RX不同時(shí)為氫；或者兩個(gè)RX—起構(gòu)成環(huán)(a):<formula>formulaseeoriginaldocumentpage7</formula>X是CH2、CF2、CH廣CH2或CF2-CF2;環(huán)A是3-7元單環(huán)的環(huán)烷基環(huán)；R"和RBB與氮原子一起構(gòu)成被OR，取代的吡咯烷基環(huán)；R，是氫或者Cl-C6脂族基，其中所述脂族基的至多兩個(gè)碳單元選擇性地和獨(dú)立地被-CO-、-CS-、-COCO-、-CONR-、-C隨NR-、-CO廣、-0C0-、-NRCO廣、-O-、-NRCONR-、-OCONR-、-NRNR，-NRNRCO-、-NRCO-、-S-、-SO,-S0廣、-NR-、-S02NR-，NRS0廣或-NRS02NR-代替；R是氫或者Cl-C6脂族基；Z是吸電子基團(tuán)；而q是0-3;和Ld是第一適合的離去基團(tuán)。31.根據(jù)權(quán)利要求30的方法，其中LG,選自烷基磺酸酯、芳基磺酸酯、卣化物、烷基羧酸酯。32.根據(jù)權(quán)利要求30的方法，其中所述第一適合的條件包括第一適合的溶劑、笫一適合的溫度和適合的還原劑。33.根據(jù)權(quán)利要求32的方法，其中所述第一適合的溶劑是極性或非極性、質(zhì)子或非質(zhì)子溶劑。34.根據(jù)權(quán)利要求33的方法，其中所述溶劑選自曱醇、乙醇、丙醇、異丙醇、叔丁醇、二氯甲烷、二氯乙烷、甲苯、四氫呋喃、二嚙烷、二乙醚、二甲醚、乙腈、DMF、DMAC或NMP。35.根據(jù)權(quán)利要求32的方法，其中所述第一適合的溫度在約0"C至約1101C之間。36.根據(jù)權(quán)利要求32的方法，其中所述適合的還原劑是金屬硼氫化物或能夠催化氫化的試劑。37.根據(jù)權(quán)利要求36的方法，其中所述適合的還原劑選自硼氫化鈉、氰基硼氫化鈉、硼氫化鋰、三乙酰氧基硼氫化鈉、硼氫化鈣、在適合的金屬催化劑存在下的氫。38.根據(jù)權(quán)利要求30的方法，其中所述式I-A和式II-A化合物分別是從式I-B和式II-B化合物生成的I-BII-B;其中[CA]是適合的手性助劑；所述方法包括在第二適合的條件下除去所述手性助劑的步驟。39.根據(jù)權(quán)利要求38的方法，其中所述適合的手性助劑是烷基次硫酸基。40.根據(jù)權(quán)利要求38的方法，其中所述適合的第二條件包括適合的質(zhì)子酸和適合的第二溶劑。41.根據(jù)權(quán)利要求40的方法，其中所述適合的第二溶劑選自極性非質(zhì)子溶劑或質(zhì)子溶劑。42.根據(jù)權(quán)利要求41的方法，其中所述適合的第二溶劑是極性非質(zhì)子溶劑。43.根據(jù)權(quán)利要求42的方法，其中所述極性非質(zhì)子溶劑選自二喁烷、四氫呋喃、二乙醚或二氯曱烷。44.根據(jù)權(quán)利要求38的方法，其中所述式I-B化合物和式II-B化合物是如下生成的，分別使式I-C或式1I-C化合物與式R-2化合物在第三適合的條件下反應(yīng)z[CA其中W是氫或者第一適合的保護(hù)基團(tuán)；而[CA]是適合的手性助劑；LG2是第二適合的離去基團(tuán)。45.根據(jù)權(quán)利要求44的方法，其中LG2選自卣化物、0C(0)烷基、五氟苯氧基，烷氧基、0C02烷基或羥基。46.根據(jù)權(quán)利要求44的方法，其中W是氫。47.根據(jù)權(quán)利要求44的方法，其中所述第三適合的條件包括笫三適合的偶聯(lián)劑和笫三適合的溶劑。48.根據(jù)權(quán)利要求47的方法，其中所述適合的偶聯(lián)劑選自三乙胺、吡^t、DIEA、二甲基吡咬、HATU、TCPH或HBTU。<formula>formulaseeoriginaldocumentpage10</formula>49.根據(jù)權(quán)利要求47的方法，其中所述第三適合的溶劑選自二氯甲烷、二噍烷、DMF、二氯乙烷或四氫呋喃。50.根據(jù)權(quán)利要求44的方法，其中所述式I-C或式II-C化合物是從式R-3化合物的異構(gòu)體混合物生成的R-3;其中PG,是笫二適合的保護(hù)基團(tuán)；而[CA]是適合的手性助劑；所述方法包括兩個(gè)步驟，其中所述兩個(gè)步驟之一是利用適合的分離手段分離所述異構(gòu)體混合物，所述兩個(gè)步驟中的另一個(gè)是在第四適合的條件下轉(zhuǎn)化PGi為R1。51.根據(jù)權(quán)利要求50的方法，其中所述適合的分離手段包括適合的色譜手段。52.根據(jù)權(quán)利要求51的方法，其中所述適合的色鐠手段選自柱色謙或薄層色鐠。53.根據(jù)權(quán)利要求50的方法，其中所述適合的分離手段包括結(jié)晶方法。54.根據(jù)權(quán)利要求50的方法，其中所述第四適合的條件包括適合的去保護(hù)劑和第四適合的溶劑。55.根據(jù)權(quán)利要求54的方法，其中所述適合的去保護(hù)劑是三氟乙56.根據(jù)權(quán)利要求54的方法，其中所述第四適合的溶劑是極性非質(zhì)子溶劑。57.根據(jù)權(quán)利要求56的方法，其中所述極性非質(zhì)子溶劑是二氯甲烷。58.根據(jù)權(quán)利要求50的方法，其中所述式R-3化合物是從式R-4化合物和式R-5化合物生成的其中PGi是第二適合的保護(hù)基團(tuán)；M是適合的金屬陽離子；而[CA]是適合的手性助劑；所述方法包括在第五適合的條件下使所迷式R-4化合物與所述式R-5化合物反應(yīng)的步驟。59.根據(jù)權(quán)利要求58的方法，其中所述M選自Li+、Na+或Mg++。60.根據(jù)權(quán)利要求58的方法，其中PGi選自烷基氨基曱酸酯、三氟乙?；⑷榛坠柰榛蛐挛祯；?1.根據(jù)權(quán)利要求60的方法，其中所述PGi是BOC或三曱基曱硅烷基。62.根據(jù)權(quán)利要求58的方法，其中所述第五適合的條件包括第五適合的溶劑和第五適合的溫度。63.根據(jù)權(quán)利要求62的方法，其中所述適合的溫度為約-78匸。64.根據(jù)權(quán)利要求62的方法，其中所述第五適合的溶劑是四氫呋喃。65.根據(jù)權(quán)利要求30的方法，其中所述式R-l化合物是66.根據(jù)權(quán)利要求30的方法，其中所述式I或式II化合物選自表1。全文摘要本發(fā)明涉及囊性纖維化跨膜電導(dǎo)調(diào)節(jié)劑(CFTR)的調(diào)控劑、其組合物和有關(guān)方法。本發(fā)明也涉及使用這類調(diào)控劑治療CFTR介導(dǎo)疾病的方法。文檔編號(hào)A61P25/00GK101287732SQ200680037556公開日2008年10月15日申請(qǐng)日期2006年8月11日優(yōu)先權(quán)日2005年8月11日發(fā)明者F·F·范格爾,J·麥卡特尼,M·T·米勒,S·哈迪達(dá)魯阿,V·阿魯姆加姆,周競(jìng)蘭申請(qǐng)人:沃泰克斯藥物股份有限公司