專利名稱：：緩釋的抗感染藥的制作方法緩釋的抗感染藥相關(guān)申請(qǐng)本申請(qǐng)是2004年12月28日登記的美國(guó)專利申請(qǐng)序列No.11/023,971的繼續(xù)申請(qǐng)，后者是2003年10月29日登記的美國(guó)專利申請(qǐng)序列No.10/696,389的繼續(xù)申請(qǐng)，該申請(qǐng)要求享有2002年10月29曰登記的美國(guó)臨時(shí)專利申請(qǐng)序列No.60/421,923的權(quán)益。介紹某些適于吸入給藥的緩釋技術(shù)使用脂質(zhì)體和脂質(zhì)復(fù)合物通過(guò)緩釋和尋靶能力以及提高藥物在疾病位點(diǎn)的吸收來(lái)向肺部和全身提供延長(zhǎng)的藥物治療效果。本發(fā)明包括一種脂質(zhì)體抗感染藥物，以及使用脂質(zhì)體或脂質(zhì)-復(fù)合抗感染藥物來(lái)治療肺部感染的方法。正如Goodman和Gilman's在ThePharmaceuticalBasisofTherapeutics第八版中所報(bào)導(dǎo)的,"由于腎中毒和耳中毒發(fā)病率與氨基糖苷積累達(dá)到的濃度有關(guān)，因此減少這些藥物在腎功能損傷患者中的維持劑量是至關(guān)重要的。"由于氨基糖苷能夠?qū)е虑巴セ蚵?tīng)覺(jué)功能障礙和腎中毒而不顧患者的損傷，因此減少維持劑量通常是重要的。本發(fā)明顯著降低了毒性，因此允許使用比慣用劑量高的劑量。嚢性纖維化(CF)患者的肺中具有厚的粘液和/或痰液分泌物、頻繁的相繼感染和由細(xì)菌入侵產(chǎn)生的生物薄膜。所有這些液體和材料都為抗感染藥有效地尋靶感染制造了障礙。本發(fā)明克服了這些障礙，甚至能夠降低劑量(在總量或在頻率上)，因此減少了藥物代給患者的負(fù)擔(dān)。對(duì)于肺部感染，通常本發(fā)明所提供的劑量方案提供了一種減輕藥物負(fù)擔(dān)的方法。對(duì)于脂質(zhì)藥物傳輸系統(tǒng)來(lái)說(shuō)，通常期望盡可能地降低脂質(zhì)與藥物(L/D)的比例以使脂質(zhì)負(fù)擔(dān)最小化從而避免體內(nèi)的飽和效應(yīng)。對(duì)于通過(guò)吸入進(jìn)行的肺傳輸來(lái)說(shuō)，這一點(diǎn)是特別正確的因?yàn)閷?duì)于長(zhǎng)期使用來(lái)說(shuō)，脂質(zhì)體的劑量可以會(huì)超過(guò)清除率并因此限制給藥并且因此限制藥物產(chǎn)品的效果。低L/D比將使得在達(dá)到劑量/清除率閾值之前能夠給予更多的藥物。發(fā)明簡(jiǎn)介通過(guò)本文所公開(kāi)的注入法，能夠制備出基本不含中等尺寸(<1pm)的陰離子脂質(zhì)的脂質(zhì)體，該脂質(zhì)體以一般為約4:1到約0.5:1的脂質(zhì)/抗感染藥物重量比來(lái)包埋抗感染藥物。測(cè)量了脂質(zhì)體的包埋體積，由這些數(shù)字能夠計(jì)算出在抗感染藥物表現(xiàn)為溶解物(即，其不會(huì)與脂質(zhì)體膜相互作用但能夠與水一起理想地包埋)時(shí)的理論包埋量。通過(guò)該對(duì)比，觀察到的包埋量數(shù)值比預(yù)期的高3-5倍，這表明發(fā)生了特異性的相互作用使得包埋量大于預(yù)期值并且脂質(zhì)/抗感染藥物比小于預(yù)期值。脂質(zhì)體形成于其中的溶液含有一定濃度的抗感染藥物，脂質(zhì)體內(nèi)抗感染藥物的濃度應(yīng)當(dāng)與溶液中的濃度大體相同。然而，計(jì)算出的內(nèi)部抗感染藥物濃度至少是溶液中濃度的約3倍高。部分地，本發(fā)明的特征在于一種脂質(zhì)體抗感染藥物制劑，其包含脂質(zhì)制劑和抗感染藥物，其中所述脂質(zhì)制劑基本上不含陰離子脂質(zhì)，并且其中脂質(zhì)與抗感染藥物的重量比為約4:1到約1:1。在某些實(shí)施方式中，脂質(zhì)與抗感染藥物的重量比為約3:1到約1:1，2:1到約1:1，或?yàn)榧s1:1。在一些實(shí)施方式中，本發(fā)明涉及一種包含抗感染藥物的脂質(zhì)制劑，其中脂質(zhì)與抗感染藥物的比為約1:1或更低，為約0.75:1或更低，或?yàn)榧s0.5:1或更低。在某些實(shí)施方式中，脂質(zhì)抗感染制劑所包含的脂質(zhì)體的平均直徑為約0.2pm到約l.Opm。在某些其它實(shí)施方式中，所述平均直徑為約0.2]im到約0.5pm。在某些其它實(shí)施方式中，所述平均直徑為約0.2pm到約0.3,。在某些實(shí)施方式中，所述抗感染藥物可以是本領(lǐng)域通常已知的任何抗感染藥物。在某些實(shí)施方式中，所述抗感染藥物可以是氨基糖苷，其包括但不限于，阿米卡星、妥布霉素或慶大霉素，或者它們的藥學(xué)上可接受的鹽。在某些實(shí)施方案中，脂質(zhì)制劑包含中性脂質(zhì)。在某些實(shí)施方案中，脂質(zhì)制劑不含陰離子脂質(zhì)。在某些其它實(shí)施方案中，所述脂質(zhì)是磷脂，其包括但不限于，卯磷脂例如二棕櫚酰磷脂酰膽堿或二油酰磷脂酰膽堿；或者所述脂質(zhì)可以是類固醇例如甾醇，其包括但不限于，膽固醇；或者所述脂質(zhì)可以是它們的組合。部分地，本發(fā)明的特征在于上述脂質(zhì)抗感染藥物制劑的制備方法，其包括在低于中性脂質(zhì)至少一種脂質(zhì)組分的相變溫度下向抗感染藥物的水或醇溶液或混合物中注入脂質(zhì)-醇溶液或混合物，其中注入是從上方進(jìn)行的。在某些實(shí)施方式中，所述醇是乙醇。在某些實(shí)施方式中，脂質(zhì)-醇溶液或混合物的濃度為約10到約30mg/mL。在某些實(shí)施方式中，抗感染藥物的水或醇溶液或混合物的濃度為約20到約70mg/mL。在某些實(shí)施方式中，中性脂質(zhì)-醇溶液或混合物的濃度為約10到約30mg/mL,并且抗感染藥物的水或醇溶液或混合物的濃度為約20到約70mg/mL。然而，本領(lǐng)域普通技術(shù)人員能夠理解，所述濃度是可以根據(jù)其所包含的脂質(zhì)和/或抗感染藥物而改變或優(yōu)化的。在某些實(shí)施方式中，本發(fā)明涉及上述的脂質(zhì)制劑，其中抗感染藥物選自以下藥物氨基糖苷、四環(huán)素、磺胺、對(duì)氨基苯曱酸、二氨基嘧啶、喹諾酮、(3-內(nèi)酰胺、|3-內(nèi)酰胺和(3-內(nèi)酰胺酶抑制劑、氯霉素、大環(huán)內(nèi)酯、林可霉素、氯潔霉素、奇霉素、多粘菌素B、粘菌素、萬(wàn)古霉素、桿菌肽素、異煙肼、利福平、乙胺丁醇、乙硫異煙胺、氨基水楊酸、環(huán)絲氨酸、巻曲霉素、砜類、氯苯吩。秦、瑟利德米、多烯抗真菌劑、氟胞嗜啶、咪唑類、三唑類、灰黃霉素、特康唑、布康唑、環(huán)己吡酮乙醇胺(ciclopirax)、環(huán)吡酮胺、卣丙炔氧苯、發(fā)躊退、萘替芬、特比萘芬或它們的組合。在某些實(shí)施方式中，本發(fā)明涉及上述的脂質(zhì)制劑，其中抗感染藥物是氨基糖苷。在進(jìn)一步的實(shí)施方式中，抗感染藥物是選自阿米卡星、慶大霉素或妥布霉素的氨基糖普。在進(jìn)一步的實(shí)施方式中，抗感染藥物是阿米卡星。在進(jìn)一步的實(shí)施方式中，抗感染藥物是慶大霉素。在進(jìn)一步的實(shí)施方式中，抗感染藥物是妥布霉素。在某些實(shí)施方式中，本發(fā)明涉及上述的脂質(zhì)制劑，其中所述脂質(zhì)制劑是脂質(zhì)體。在某些實(shí)施方式中，本發(fā)明涉及上述的脂質(zhì)制劑，其中所述脂質(zhì)制劑包含磷脂。在某些實(shí)施方式中，所述脂質(zhì)制劑包含類固醇。在某些實(shí)施方式中，所述脂質(zhì)制劑包含甾醇。在某些實(shí)施方式中，所述脂質(zhì)制劑包含二椋櫚酰磷脂酰膽堿(DPPC)。在某些實(shí)施方式中，所述脂質(zhì)制劑包含膽固醇。在某些實(shí)施方式中，所述脂質(zhì)制劑包含磷脂和類固醇。在某些實(shí)施方式中，所述脂質(zhì)制劑包含磷脂和甾醇。在某些實(shí)施方式中，所述脂質(zhì)制劑包含DPPC和膽固醇。在某些實(shí)施方式中，本發(fā)明涉及上述的制劑，其中所述脂質(zhì)制劑包含DPPC、二油酰磷脂酰膽堿(DOPC)和膽固醇。在某些實(shí)施方式中，本發(fā)明涉及上述的制劑，其中所述脂質(zhì)制劑包含的DPPC和膽固醇的摩爾比為約20:1、10:1、5:1、2:1或1:1。在某些實(shí)施方式中，本發(fā)明涉及上述的制劑，其中所述脂質(zhì)制劑包含的DPPC、DOPC和膽固醇的摩爾比為約5-20:1-20:0.5-1。在某些實(shí)施方式中，本發(fā)明涉及上述的脂質(zhì)制劑，其中所迷脂質(zhì)制劑是脂質(zhì)體，抗感染藥物是阿米卡星。在某些實(shí)施方式中，本發(fā)明涉及上述的脂質(zhì)制劑，其中所述脂質(zhì)制劑是脂質(zhì)體，抗感染藥物是阿米卡星，并且所述脂質(zhì)制劑包含磷脂和甾醇。在某些實(shí)施方式中，本發(fā)明涉及上述的脂質(zhì)制劑，其中所述脂質(zhì)制劑是脂質(zhì)體，抗感染藥物是阿米卡星，并且所述脂質(zhì)制劑包含DPPC和膽固醇。在另一個(gè)實(shí)施方式中，本發(fā)明涉及包含抗感染藥物的脂質(zhì)制劑的制備方法，其包括將脂質(zhì)溶液或混合物的物料流與抗感染藥物溶液或混合物的物料流混合，其中二種物料流是在管線內(nèi)混合的。在某些實(shí)施方式中，在在管線內(nèi)混合之前兩種物料流先進(jìn)入一個(gè)Y形連接器中。在某些實(shí)施方式中，本發(fā)明涉及如上所述的方法，其中脂質(zhì)溶液或混合物物料流和抗感染藥物溶液或混合物物料流是以約700到約900mL/mm的總流量混合的。在某些實(shí)施方式中，脂質(zhì)溶液或混合物物料流和抗感染藥物溶液或混合物料流是以約800mL/min的總流量混合的。在某些實(shí)施方式中，脂質(zhì)溶液或混合物物料流是以約200到約400mL/min的流量加入的。在某些實(shí)施方式中，脂質(zhì)溶液或混合物物料流是以約300mL/min的流量加入的。在某些實(shí)施方式中，抗感染藥物溶液或混合物物料流是以約400到約600mL/min的流量加入的。在某些實(shí)施方式中，抗感染藥物溶液或混合物物料流是以約500mL/min的流量加入的。在某些實(shí)施方式中，脂質(zhì)溶液或混合物物料流是以約300mL/min的流量加入的，抗感染藥物溶液或混合物物料流是以在約500mL/min的力fu量力o入的。在某些實(shí)施方式中，本發(fā)明涉及如上所述的方法，其中混合物料流的溫度是約30-40°C。在某些實(shí)施方式中，脂質(zhì)溶液或混合物的溫度是約3(TC,抗感染藥物溶液或混合物的溫度是約30°C。在某些實(shí)施方式中，脂質(zhì)溶液或混合物的溫度是約50°C,抗感染藥物溶液或混合物的溫度是室溫。在某些實(shí)施方式中，本發(fā)明涉及如上所述的方法，其中含有抗感染藥物的脂質(zhì)制劑的制備方法進(jìn)一步包括在混合后將混合物物料流用水稀釋至少約20秒的步驟。在某些實(shí)施方式中，本發(fā)明涉及如上所述的方法，其中抗感染藥物溶液或混合物的濃度是約30到約50mg/mL。在某些實(shí)施方式中，抗感染藥物溶液或混合物的濃度是約40到約50mg/mL。在某些實(shí)施方式中，本發(fā)明涉及如上所述的方法，其中脂質(zhì)溶液或混合物物料流是以約300mL/min的流量加入的，抗感染藥物溶液或混合物物料流是以約500mL/min的流量加入的；混合物料流的溫度是約30-4(TC;混合后將混合物料流用水稀釋至少約20秒；并且抗感染藥物溶液或混合物的濃度是約40到約50mg/mL。在某些實(shí)施方式中，本發(fā)明涉及如上所述的方法，其中所述溶液或混合物是含水的或是含醇的。在某些實(shí)施方式中，本發(fā)明涉及如上所述的方法，其中所述脂質(zhì)制劑是脂質(zhì)體。在某些實(shí)施方式中，本發(fā)明涉及如上所述的方法，其中所述抗感染藥物選自氨基糖苷、四環(huán)素、磺胺、對(duì)氨基苯曱酸、二氨基嘧啶、喹諾酮、(3-內(nèi)酰胺、P-內(nèi)酰胺和(3-內(nèi)酰胺酶抑制劑、氯霉素、大環(huán)內(nèi)酯、林可霉素、氯潔霉素、奇霉素、多粘菌素B、粘菌素、萬(wàn)古霉素、桿菌肽素、異煙肼、利福平、乙胺丁醇、乙硫異煙胺、氨基水楊酸、環(huán)絲氨酸、巻曲霉素、砜類、氯苯吩嗪、瑟利德米、多烯抗真菌劑、氟胞嘧t定、咪唑類、三唑類、灰黃霉素、特康唑、布康唑、環(huán)己吡酮乙醇胺、環(huán)吡酮胺、卣丙炔氧苯、發(fā)癬退、萘替芬、特比萘芬或它們的組合。在某些實(shí)施方式中，所述抗感染藥物是氨基糖普。在進(jìn)某些實(shí)施方式中，所述抗感染藥物是選自阿米卡星、慶大霉素或妥布霉素的氨基糖苷。在某些實(shí)施方式中，所述抗感染藥物是阿米卡星。在某些實(shí)施方式中，所述抗感染藥物是慶大霉素。在某些實(shí)施方式中，所述抗感染藥物是妥布霉素。在某些實(shí)施方式中，本發(fā)明涉及如上所述的方法，其中所述脂質(zhì)包含磷脂。在某些實(shí)施方式中，所述脂質(zhì)包含類固醇。在某些實(shí)施方式中，所述脂質(zhì)包含甾醇。在某些實(shí)施方式中，所述脂質(zhì)包含DPPC。在某些實(shí)施方式中，所述脂質(zhì)包含膽固醇。在某些實(shí)施方式中，所述脂質(zhì)包含磷脂和甾醇。在某些實(shí)施方式中，所述脂質(zhì)包含DPPC和膽固醇。在某些實(shí)施方式中，本發(fā)明涉及如上所述的方法，其中所述脂質(zhì)制劑是脂質(zhì)體，抗感染藥物是阿米卡星。在某些實(shí)施方式中，本發(fā)明涉及如上所述的方法，其中所述脂質(zhì)制劑是脂質(zhì)體，抗感染藥物是阿米卡星，并且所述脂質(zhì)體包含磷脂和甾醇。在某些實(shí)施方式中，本發(fā)明涉及如上所述的方法，其中所述脂質(zhì)制劑是脂質(zhì)體，抗感染藥物是阿米卡星，并且所述脂質(zhì)包含DPPC和膽固醇。在某些實(shí)施方式中，本發(fā)明涉及如上所述的方法，其中在所述脂質(zhì)制劑中脂質(zhì)與抗感染藥物的比為約1:1或低于1:1。在某些實(shí)施方式中，本發(fā)明涉及如上所述的方法，其中在所述脂質(zhì)制劑中脂質(zhì)與抗感染藥物的比為約0.75:1或低于0.75:1。在某些實(shí)施方式中，本發(fā)明涉及如上所述的方法，其中在所述脂質(zhì)制劑中脂質(zhì)與抗感染藥物的比為約0.5:1或低于0.5:1。在某些實(shí)施方式中，本發(fā)明涉及如上所述的方法，其中所述脂質(zhì)制劑是脂質(zhì)體，抗感染藥物是阿米卡星，所述脂質(zhì)包含DPPC和膽固醇，并且脂質(zhì)與抗感染藥物的比為約1:1或低于1:1。在另一個(gè)實(shí)施方式中，本發(fā)明涉及在需要的患者中治療肺部感染的方法，其包括向患者給藥以治療有效量的脂質(zhì)抗感染藥物制劑，所述脂質(zhì)抗感染藥物制劑包含脂質(zhì)制劑和抗感染藥物，其中所所述抗感染藥物的劑量為約100mg/天或少于100mg/天。在進(jìn)一步的實(shí)施方式中，所述抗感染藥物的劑量為約30mg到約50mg每?jī)商臁Ｔ谶M(jìn)一步的實(shí)施方式中，所述抗感染藥物的劑量為約30mg到約50mg每三天。在另一個(gè)實(shí)施方式中，本發(fā)明涉及如上所述的方法，其中所所述脂質(zhì)體的平均直徑為約0.2pm到約1.0jam。在進(jìn)一步的實(shí)施方式中，所述脂質(zhì)體的平均直徑為約0.2pm到約0.5|nm,或約0.2pm到約0.3在另一個(gè)實(shí)施方式中，本發(fā)明涉及如上所述的方法，其中肺感染是嚢性纖維化的結(jié)果。在另一個(gè)實(shí)施方式中，本發(fā)明涉及如上所述的方法，其中所述脂質(zhì)與抗感染物的重量比為約4:1到約0.5:1,約3:1到約0.5:1,約2:1到約0.5:1,或者約1:1到約0.5:1。在另一實(shí)施方式中，本發(fā)明涉及如上所述的方法，其中所述抗感染藥物選自氨基糖苷、四環(huán)素、磺胺、對(duì)氨基苯曱酸、二氨基嘧啶、喹諾酮、|3-內(nèi)酰胺、(3-內(nèi)酰胺和(3-內(nèi)酰胺酶抑制劑、氯霉素、青霉素、頭孢菌素、大環(huán)內(nèi)酯、林可霉素、氯潔霉素、皮質(zhì)類甾醇(coricosteroids)、前列腺素、奇霉素、多粘菌素B、粘菌素、萬(wàn)古霉素、桿菌肽素、異煙肼、利福平、乙胺丁醇、乙硫異煙胺、氨基水楊酸、環(huán)絲氨酸、巻曲霉素、砜類、氯苯吩嗪、瑟利德米、多烯抗真菌劑、氟胞嘧啶、咪唑類、三哇類、灰黃霉素、特康哇、布康口坐、環(huán)己吡酮乙醇胺、環(huán)吡酮胺、卣丙炔氧苯、發(fā)癬退、萘替芬、特比萘芬或它們的組合。在另一個(gè)實(shí)施方式中，所述抗感染藥物是氨基糖苷。在另一個(gè)實(shí)施方式中，所述抗感染藥物是阿米卡星。在另一個(gè)實(shí)施方式中，本發(fā)明涉及如上所述的治療方法，其中所述脂質(zhì)制劑包含中性脂質(zhì)。在另一個(gè)實(shí)施方式中，用于制備脂質(zhì)制劑的脂質(zhì)全部是中性脂質(zhì)。在另一個(gè)實(shí)施方式中，所述脂質(zhì)體不含陰離子脂質(zhì)。在另一個(gè)實(shí)施方式中，所述脂質(zhì)制劑包含磷脂。在另一個(gè)實(shí)施方式中，脂質(zhì)制劑包含甾醇。在另一個(gè)實(shí)施方式中，所述脂質(zhì)制劑包含DPPC和膽固醇。在另一個(gè)實(shí)施方式中，本發(fā)明涉及如上所述的治療方法，其中所述抗感染藥物是阿米卡星，并且脂質(zhì)制劑包含DPPC和膽固醇。在另一個(gè)實(shí)施方式中，本發(fā)明涉及如上所述的治療方法，其中所述抗感染藥物是阿米卡星，脂質(zhì)與抗感染藥物的重量比為約4:1到約1:1,并且脂質(zhì)制劑包含DPPC和膽固醇。在進(jìn)一步的實(shí)施方式中，所述重量比為約3:1到約1:1,2:1到約1:1,或者為約l:l。在另一個(gè)實(shí)施方式中，本發(fā)明涉及如上所述的治療方法，其中所述抗感染藥物是阿米卡星，脂質(zhì)與抗感染藥物的重量比為約4:1到約1:1,脂質(zhì)制劑包含DPPC和膽固醇，并且肺部感染是嚢性纖維化的結(jié)果。在一個(gè)進(jìn)一步的實(shí)施方式中，所述重量比為約3:1到約1:1，2:1到約1:1,或者為約1:1。在另一個(gè)實(shí)施方式中，本發(fā)明涉及如上所述的治療方法，其中所述抗感染藥物是阿米卡星，脂質(zhì)與抗感染藥物的重量比為約4:1到約0.5:1，脂質(zhì)制劑包含DPPC和膽固醇，并且脂質(zhì)體的平均直徑為約0.1pm到約0.5|um。在進(jìn)一步的實(shí)施方式中，所述平均直徑為約0.2pm到約0.4pm,或約0.2|um到約0.3|tim。在另一個(gè)實(shí)施方式中，本發(fā)明涉及如上所述的治療方法，其中所述抗感染藥物是阿米卡星，脂質(zhì)與抗感染藥物的重量比為約4:1到約0.5:1，脂質(zhì)制劑包含DPPC和膽固醇，肺部感染是由嚢性纖維化導(dǎo)致的，并且脂質(zhì)體的平均直徑為約0.1到約1.0jim。在進(jìn)一步的實(shí)施方式中，所述平均直徑為約0.2iiim到約0.5|LAm,或?yàn)榧s0.2|im到約0.3,。從下述說(shuō)明書(shū)、附圖和權(quán)利要求來(lái)看本發(fā)明的這些實(shí)施方式，其它實(shí)施方式，和它們的特征和特性是顯而易見(jiàn)的。附圖簡(jiǎn)介圖1描述了在患有嚢性纖維化的患者中所看到的痰液/生物薄膜的圖2描述了本發(fā)明藥物的尋靶和庫(kù)存作用的示意圖。圖3和圖4描述了多種形式的阿米卡星的細(xì)菌學(xué)活性示意圖。圖5描述了脂質(zhì)體/復(fù)合的阿米卡星和妥布霉素的緩釋示意圖。圖6描述了關(guān)于單體或復(fù)合的環(huán)丙沙星的數(shù)據(jù)。圖7描述了多種劑量方案給出的肺中藥物殘留的示意圖。圖8描述了制備脂質(zhì)體抗感染制劑的兩物料流管線內(nèi)注入法的示意圖。圖9描述了硫酸阿米卡星與乙醇/水的混溶性。直線代表室溫(RT)和40。C下，能夠與乙醇溶液混溶的最大阿米卡星濃度(堿)。在較高的濃度下阿米卡星形成了單獨(dú)的液相(凝聚層)，其后來(lái)沉淀為晶體。垂直的線表示在脂質(zhì)/阿米卡星注入混合物(300/500份)中的和加入200份水后的乙醇濃度。發(fā)明詳述本發(fā)明公開(kāi)了一種包含感染藥物的脂質(zhì)制劑，其中該脂質(zhì)制劑的尺寸以及脂質(zhì)與藥物的比要比先前已知的小。本發(fā)明還公開(kāi)了這些脂質(zhì)制劑的制備方法。/.定義為了方便，在進(jìn)一步描述本發(fā)明前，此處收集了說(shuō)明書(shū)、實(shí)施例和所附權(quán)利要求中使用的某些術(shù)語(yǔ)。這些定義應(yīng)當(dāng)根據(jù)發(fā)明公開(kāi)的其余部分來(lái)理解，并且由本領(lǐng)域技術(shù)人員理解。除非另外定義，本文使用的所有技術(shù)和科學(xué)術(shù)語(yǔ)的意思與本領(lǐng)域普通技術(shù)人員理解的相同。本文中冠詞"一個(gè)"和"一種"用于指代該冠詞表示的一個(gè)或多于一個(gè)(即至少一個(gè))這樣的語(yǔ)法目的。例如"一種組分"是指一種或多于一種的組分。術(shù)語(yǔ)"生物可利用的"是本領(lǐng)域公認(rèn)的，是指允許被所給予的個(gè)體或者患者吸收、摻入、或其它生理學(xué)可獲得的本發(fā)明的一種形式，或給予量的一部分。術(shù)語(yǔ)"包括"和"包含"是用于表示包含在內(nèi)的，開(kāi)放的意思，是指可以包含其它成分。術(shù)語(yǔ)"包嚢的"和"包嚢"是指將抗感染藥物吸附在脂質(zhì)基制劑的表面上、在雙層或兩個(gè)單層之間的間隙區(qū)域結(jié)合抗感染藥、在雙層之間的空間內(nèi)包埋抗感染藥、或在雙層的最內(nèi)層或單層所圍繞形成的空間內(nèi)包埋抗感染藥。本文中術(shù)語(yǔ)"包括"是用于指"包括但不限于"。"包括"和"包括但不限于"可以互換使用。本文所討論的術(shù)語(yǔ)"脂質(zhì)抗感染藥物制劑"或"Lip-抗感染藥物"或"Lip-An"是指任何形式的抗感染藥物組合物，其中按重量計(jì)至少約1%的抗感染藥物與脂質(zhì)相關(guān)，其或者作為與脂質(zhì)復(fù)合物的一部分，或者作為脂質(zhì)體，在該脂質(zhì)體中抗生素可以處于水相或疏水的雙層相或脂質(zhì)體雙層的分界面首基區(qū)域中。優(yōu)選地，至少約5%，或至少約10%,或至少約20%,或至少約25%能夠如上所述地結(jié)合。結(jié)合可以通過(guò)用過(guò)濾器分離而測(cè)定，其中脂質(zhì)和脂質(zhì)-結(jié)合的抗感染藥物得到保留而抗感染藥物單體則在濾液中。"脂質(zhì)體抗感染藥物制劑"是指其中脂質(zhì)基是脂質(zhì)體形式的脂質(zhì)抗感染藥物制劑。術(shù)語(yǔ)"哺乳動(dòng)物"是本領(lǐng)域已知的，示例性的哺乳動(dòng)物包括人、靈長(zhǎng)類動(dòng)物、牛、豬、狗、貓和嚙齒類動(dòng)物(例如，小鼠和大鼠)。通過(guò)本方法治療的"患者"、"個(gè)體"或"宿主"可指人或非人類動(dòng)物。術(shù)語(yǔ)"藥學(xué)上可接受的鹽"是本領(lǐng)域公認(rèn)的，是指化合物的相對(duì)無(wú)毒的無(wú)機(jī)和有機(jī)酸加成鹽，其包括，例如那些包含于本發(fā)明組合物中的鹽。術(shù)語(yǔ)"溶劑注入"是一種方法，其包括將一種或多種脂質(zhì)溶解于少量的，優(yōu)選最小限度量的方法相容的溶劑中形成脂質(zhì)懸浮液溶液(優(yōu)選溶液)，然后將該溶液加入到含有生物活性劑的含水介質(zhì)中。代表性的方法相容的溶劑是在例如透析的含水處理中可被洗去的溶劑。被冷/熱循環(huán)的組合物優(yōu)選通過(guò)溶液注入形成，其中乙醇注入是優(yōu)選的。優(yōu)選醇作為溶劑。"乙醇注入"是一類溶液注入，該方法包括將一種或多種脂質(zhì)溶于少量，優(yōu)選最小限度量的乙醇中形成脂質(zhì)溶液，然后將該溶液加入到含有生物活性劑的含水介質(zhì)中。"少量"的溶劑是在注入過(guò)程中適合于形成脂質(zhì)體或脂質(zhì)復(fù)合物的量。術(shù)語(yǔ)"溶液注入"還可以包括管線內(nèi)注入法，其中制劑組合物的兩種物料流首先進(jìn)行在管線內(nèi)混合。術(shù)語(yǔ)"基本上不含"是本領(lǐng)域公認(rèn)的，其是指微小或比微小更小的量。術(shù)語(yǔ)"治療劑"是本領(lǐng)域公認(rèn)的，是指任何的化學(xué)部分，所述化學(xué)部分是能夠局部或全身地作用于個(gè)體的生物學(xué)、生理學(xué)或藥理學(xué)活性物質(zhì)。治療劑，也稱作"藥物"，其實(shí)例描述于公知的參考文獻(xiàn)種，例^口MerckIndex,thePhysiciansDeskReference,口ThePharmacologicalBasisofTherapeutics,它們包括j旦不限于藥品；維生素；礦物補(bǔ)充物；用于處理、預(yù)防、診斷、治療或緩解疾病或病癥的物質(zhì)；影響身體結(jié)構(gòu)或機(jī)能的物質(zhì)；或者前藥，在被置于生物學(xué)環(huán)境后它們變?yōu)樯飳W(xué)活性的或活性更高。本文所使用的術(shù)語(yǔ)"治療有效量"是指包含根據(jù)本發(fā)明的脂質(zhì)抗感染藥物制劑的化合物、材料或組合物能夠通過(guò)抑制肺部感染而有效地產(chǎn)生一些期望的治療效果的量。術(shù)語(yǔ)"治療"是本領(lǐng)域公認(rèn)的，其是指使任何病癥或疾病的至少一種癥狀得到治療和改善。術(shù)語(yǔ)"治療"還指預(yù)防性的治療，其作用是防止或預(yù)防病癥或疾病?？垢腥舅幬锸悄軌虻挚垢腥镜脑噭龈腥纠缂?xì)菌、分枝桿菌、真菌、病毒或原生動(dòng)物感染。本發(fā)明所涉及的抗感染藥物包括但不限于氨基糖苷(例如，鏈霉素、慶大霉素、妥布霉素、阿米卡星、萘替米星和卡那霉素等)，四環(huán)素(例如金霉素、土霉素、曱烯土霉素、強(qiáng)力霉素和米諾環(huán)素等)，磺胺類藥物(例如，磺胺、磺胺嘧啶、新諾明(sulfamethaoxazole)、磺胺異噁唑和磺胺醋酰等)，對(duì)氨基苯曱酸，二氨基嘧啶(例如甲氧節(jié)氨嘧啶，其經(jīng)常與新諾明和吡。秦酰胺等結(jié)合使用)，喹諾酮(例如萘啶酮酸、噌"惡星、環(huán)丙沙星和諾氟殺星等)、青霉素(例如青霉素G、青霉素V、氨節(jié)青霉素、羥氨芐青霉素、氨下青霉素酞酯、羧千青霉素、卡茚西林、羧噻吩青霉素、阿洛西林、美洛西林和哌拉西林等)，耐青霉素酶青霉素(例如曱氧西林、囉灑西林、氯唑西林、雙氯西林和萘夫西林等)，第一代頭孢菌素(例如頭孢羥氨千、頭孢氨千、頭孢拉定、頭孢瘞吩、頭孢吡令和頭孢唑啉等)，第二代頭孢菌素(例如氯孢菌素、頭孢羥唑、頭孢尼西、頭孢西丁、頭孢替坦、頭孢氨呋將、頭孢呋辛酯、頭孢美唑、頭孢丙烯、氯碳頭孢和頭孢雷特等)，第三代頭孢菌素(例如氨曱苯唑頭孢菌素、頭孢哌酮、頭孢噻肟、頭孢唑肟、頭孢曲松、頭孢他啶、頭孢克將、頭孢泊將和頭孢布烯等)，其他(3-內(nèi)酰胺(例如亞胺培南、美羅培南、氨曲南、棒酸、舒巴坦和他唑巴坦等)，卩內(nèi)酰胺酶抑制劑(例如棒酸)，氯霉素，大環(huán)內(nèi)酯(例如紅霉素、阿奇霉素和克拉霉素等)，林可霉素，氯潔霉素，奇霉素，多粘菌素B，多粘菌素(例如多粘菌素A、B、C、D、El(粘菌素A)、或E2以及粘菌素B或C等)粘菌素，萬(wàn)古霉素，桿菌肽素，異煙肼，利福平，乙胺丁醇，乙石危異煙胺，氨基水楊酸，環(huán)絲氨酸，巻曲霉素，砜類(例如氨苯砜和索發(fā)克松鈉等)，氯苯吩。秦，瑟利德米，或者能夠被脂質(zhì)包嚢的任何其它抗菌劑?？垢腥舅幬锟梢园拐婢幬铮ǘ嘞┛拐婢鷦?例如兩性霉素B、制霉菌素和游霉素等)，氟胞嘧啶，咪唑類((例如n-p羞康唑、克霉唑、益康唑和酮康唑等)，三唑類(例如伊曲康唑和氟康唑等)，灰黃霉素，特康唑，布康唑，環(huán)己吡酮乙醇胺，環(huán)吡酮胺，卣丙炔氧笨，發(fā)辨退，萘替芬，特比萘芬或者能夠被脂質(zhì)包嚢或復(fù)合的其它任何抗真菌劑。討論和實(shí)施例是主要針對(duì)阿米卡星的，但并不是意圖將本申請(qǐng)的范圍限于該抗感染藥物?？梢允褂盟幬锏慕M合。優(yōu)選的抗感染藥物包括氨基糖普、*諾酮、多烯抗震真菌劑和多粘霉素。能夠用于本發(fā)明脂質(zhì)抗感染藥物制劑中的合適的抗感染藥物的還包括抗感染藥物的藥學(xué)上可接受的加成鹽和復(fù)合物。在化合物可以具有一個(gè)和多個(gè)手性中心的情況中，除非特別說(shuō)明，本發(fā)明包括每種單獨(dú)的外消旋化合物以及每種單獨(dú)的非外消旋化合物。在抗感染藥物具有不飽和碳碳雙鍵的情況中，順式(Z)和反式(E)異構(gòu)體均在本發(fā)明的范圍之內(nèi)。在抗感染藥物可以以互變異構(gòu)形式存OOR'在的情況下，例如酮-烯醇互變異構(gòu)體，例如J、和^^,每一種互變異構(gòu)形式都被認(rèn)為包含在本發(fā)明的范圍內(nèi)，無(wú)論其是以平衡形式還是以一種被R，適當(dāng)取代的固定形式存在。在任何情況下任何取代基的含義都與其在任何其它情況下的含義無(wú)關(guān)，或者與任何其它情況下任何其它取代基的含義無(wú)關(guān)。能夠用于本發(fā)明脂質(zhì)抗感染藥物制劑的合適的抗感染藥物的還包括鉑化合物的前藥。前藥被認(rèn)為是能夠在體內(nèi)釋放活性母體化合物的任何共價(jià)鍵合的載體。丄y^孝J染在肺部感染(例如嚢性纖維化患者)中，能夠用本發(fā)明方法治療的是假單胞菌(例如，銅綠假單胞菌(尸aen/g,'"ora)、食酸假單胞菌(尸.p"w"'wM,7w)、惡臭假單胞菌(尸pw"t^)、焚光假單胞菌(7V/womscera)和食酸假單胞菌(尸.acWovoraw)),葡萄球菌，耐曱氧西林金黃色葡萄球菌(MRSA)，鏈球菌(包括肺炎鏈球菌(5y，fococcws戶e訓(xùn)ow/ae))，大腸桿菌(￡^c/zer/c/7/》co//),克氏軒菌(A7e&,e〃a)，腸桿菌(￡"&ro/)(3"er),沙雷菌(Serra"a),嗜血桿菌(//ae,//n7z^),耶爾森氏菌pesos(1fewm'a/^cw)，類鼻疽伯克霍爾德氏菌(ZwA/zo/i/m'a戸ewdo廳〃ez'),洋蔥伯克霍爾德氏菌(j8.ce/"cz'a),椰毒伯克霍爾德氏菌(S.g/flAo/,),吩。秦伯克霍爾德氏菌(5.ww/"vora/w),越南伯克霍爾德氏菌(S.v/eMaw/e朋m)，結(jié)核菌分枝桿菌(A^yco/^"en力wfw6ercw/oi^')，鳥(niǎo)分才支4干菌復(fù)合菌(A/."v/wwcow//e;c)(MAC)(鳥(niǎo)分枝桿菌和胞內(nèi)分枝桿菌(M,'",race〃w/we))，堪薩斯分枝桿菌(MA朋m^,')，蟾分枝桿菌(M)，海洋分4支^f干菌(A</_ma〃"wm),潰瘍分枝桿菌(Mw/cera/w')或偶發(fā)分枝桿菌復(fù)合菌(M/b自"應(yīng)co—a)(偶發(fā)分枝桿菌和龜分枝桿菌(Mc/ze/匿z))感染。本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方式包括一種治療方法，所述方法包括給藥以治療有效量的脂質(zhì)抗感染藥物制劑。當(dāng)下文中沒(méi)有提供特定的劑量時(shí)，如果是通過(guò)噴霧器向肺傳送的，則本發(fā)明優(yōu)選的劑量是最小單體藥物(當(dāng)然其也可以是鹽)有效量的50%或小于50%,35%或小于35%,20%或小于20%,10%或小于10%,從而使肺中的CFU計(jì)數(shù)在14天的治療療程中減少一個(gè)數(shù)量級(jí)。藥物當(dāng)量是累積數(shù)量，其將在應(yīng)用本發(fā)明藥物給藥方案的劑量周期中使用。本段中所定義的最小單體藥物當(dāng)量是一個(gè)"相當(dāng)于單體藥物的量"。本發(fā)明的非-CF治療實(shí)施方式可以使用任何動(dòng)物，雖然優(yōu)選的是人。針對(duì)所給定的動(dòng)物測(cè)定這種動(dòng)物的相對(duì)用量。劑量方案優(yōu)選是一天一次或少于一天一次。在優(yōu)選的實(shí)施方式中，劑量方案是每?jī)商煲淮?，每三天一次，每周一次或者更少。例如，劑量方案可以是每?jī)商焓褂?0%或者小于50%的單體藥物當(dāng)量，或者是比這更少的劑量?；蛘?，例如所述劑量可以是每天使用35%或小于35%的單體藥物當(dāng)量。參見(jiàn)圖3和4的動(dòng)物數(shù)據(jù)，它們顯示本發(fā)明的脂質(zhì)抗感染藥物制劑比藥物單體更有效。為了治療感染，抗感染藥物的有效量是臨床醫(yī)師可獲知的，但是其包括對(duì)治療、減輕、改善、消除或預(yù)防所要治療的疾病或所要避免或治療的病癥的一種或多種癥狀有效的量，或者是對(duì)使疾病或病癥產(chǎn)生臨床上可識(shí)別的病理學(xué)變化的有效的量。改善包括在所預(yù)防性治療的動(dòng)物中，感染的發(fā)病率或嚴(yán)重性的減少。在某些實(shí)施方式中，有效量是在肺部感染癥狀出現(xiàn)后對(duì)治療或改善有效的量。在某些其它實(shí)施方式中，有效量是在所預(yù)防性治療的動(dòng)物中對(duì)治療或改善感染的平均發(fā)病率或嚴(yán)重性有效的量(是通過(guò)統(tǒng)計(jì)學(xué)研究測(cè)定的)。脂質(zhì)體或其它脂質(zhì)傳輸系統(tǒng)可以作為霧化噴霧、粉末或氣霧劑進(jìn)行吸入給藥，或者進(jìn)行鞘內(nèi)給藥。吸入給藥是優(yōu)選的?？偟慕Y(jié)果是，與藥物單體或胃腸外形式的藥物相比，其降低了給藥頻率并且提高了治療指數(shù)。脂質(zhì)體或其它脂質(zhì)制劑是特別有利的，這是由于它們具有在與肺泡襯里或肺泡表面活性物質(zhì)相容的同時(shí)還能夠保護(hù)藥物的能力。本發(fā)明包括用于治療肺部革蘭氏陰性感染的方法。一個(gè)有效地得到治療的感染是CF患者中的慢性假單胞菌感染。已知的用氨基糖苷對(duì)肺部感染進(jìn)行的治療(例如在CF患者中)通常包括通過(guò)吸入每天給藥以大約200-600mg的阿米卡星或妥布霉素。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方式中，本發(fā)明允許通過(guò)每天給藥以100mg或小于100mg(或者如果劑量不太頻繁，則其在標(biāo)準(zhǔn)化后相當(dāng)于100mg每天)的阿米卡星來(lái)進(jìn)行治療。在又另一個(gè)實(shí)施方式中，每天給藥以60mg或小于60mg的阿米卡星。在仍另一個(gè)實(shí)施方式中，進(jìn)行每?jī)商觳怀^(guò)一次的大約30到50mg的給藥。最優(yōu)選的實(shí)施方式包括每隔一天或每三天給藥大約30到50mg。5.財(cái)稀屏本發(fā)明組合物中所用的脂質(zhì)可以是合成、半合成或天然存在的脂質(zhì)，包括磷脂、生育酚、甾體、脂肪酸、糖蛋白例如白蛋白、陰離子脂質(zhì)和陽(yáng)離子脂質(zhì)。脂質(zhì)可以是陰離子的、陽(yáng)離子的或是中性的。在一個(gè)實(shí)施方式中，脂質(zhì)制劑基本上不含陰離子脂質(zhì)。在一個(gè)實(shí)施方式中，脂質(zhì)制劑僅包含中性脂質(zhì)。在另一個(gè)實(shí)施方式中，脂質(zhì)制劑不含陰離子脂質(zhì)。在另一個(gè)實(shí)施方式中，脂質(zhì)是磷脂。磷脂包括卵磷脂酰膽堿(EPC),卵磷脂酰甘油(EPG),卵磷脂酰肌醇(EPI),卯磷脂酰絲氨酸(EPS),卵磷脂酰乙醇胺(EPE)和卵磷脂酸(EPA);大豆對(duì)應(yīng)物，大豆磷脂酰膽堿(SPC);SPG，SPS,SPI,SPE,和SPA;氫化卯和大豆對(duì)應(yīng)物(例如，HEPC,HSPC)，其它的由脂肪酸在甘油的2和3位的酯鍵所構(gòu)成的磷脂，其中所述甘油含有12到26個(gè)碳原子的鏈并且在甘油的1位具有不同的端基，包括膽堿，甘油，肌醇，絲氨酸，乙醇胺以及相應(yīng)的磷脂酸。這些脂肪酸上的鏈可以是飽和或不飽和的，并且所述磷脂可以由不同鏈長(zhǎng)度和不同不飽和度的脂肪酸組成。特別是，制劑的組成可以包括二棕櫚酰磷脂酰膽堿(DPPC),天然存在的肺表面活性物質(zhì)的一種主要成分，和二油酰磷脂酰膽堿(DOPC)。其它實(shí)例包括二肉豆蔻?；字Ｄ憠A(DMPC)和二肉豆蔻?；字８视?DMPG)，二棕櫚酰磷脂酰膽堿(DPPC)和二棕櫚酰磷脂酰甘油(DPPG),二硬脂?；字Ｄ憠A(DSPC)和二硬脂酰基磷脂酰甘油(DSPG),二油?；字；掖及?DOPE)和混合磷脂如棕櫚酰硬脂?；字Ｄ憠A(PSPC)和棕櫚酰硬脂?；字８视?PSPG)，driacylglycerol,二酰甘油，seranide,鞘氨醇，鞘磷脂和單?；字鐔?油?；?磷脂酰乙醇胺(MOPE)。所使用的脂質(zhì)可以包括脂肪酸、磷脂和甘油酯，甾體，磷脂酰甘油(PGs),磷脂酸(PAs)，磷脂酰膽堿(PCs),磷脂酰肌醇(Pis)和磷脂酰絲氨酸(PSs)的銨鹽。脂肪酸包括碳鏈長(zhǎng)度為12到26個(gè)碳原子的脂肪酸，其可以是飽和或不飽和的。一些具體的例子包括肉豆蔻酰胺、棕櫚酰胺、月桂酰胺、硬脂酰胺、二月桂酰乙基磷酸膽堿(DLEP)、二肉豆蔻酰乙基磷酸膽堿(DMEP)、二棕櫚酰乙基磷酸膽堿(DPEP)和二硬脂酰乙基磷酸膽堿(DSEP)、N-(2,3-二-(9-(Z)-十八烯基氧)-丙-l-基-N,N,N-三甲基銨氯化物(DOTMA)和1,2-二(油酰氧)-3-(三曱基銨基)丙烷(DOTAP)。甾體的實(shí)例包括膽固醇和麥角固醇。PGs,Pas,Pis，PCs和PSs的實(shí)例包括DMPG，DPPG,DSPG,DMPA,DPPA,DSPA,DMPI,DPPI,DSPI,DMPS,DPPS和DSPS,DSPC,DPPG,DMPC,DOPC，卵PC。由卵磷脂，例如DPPC,組成的脂質(zhì)體或脂質(zhì)抗感染制劑能夠幫助肺部細(xì)胞例如肺泡巨噬細(xì)胞的吸收并且有助于抗感染藥劑在肺部的緩釋(Gonzales-Rothi等人(1991))。帶負(fù)電荷的脂質(zhì)例如PGs、Pas、PSs和PIs，除了能夠減少粒子的聚集以外，還可以在吸入制劑的緩釋特性以及在制劑穿過(guò)肺部(轉(zhuǎn)胞吞作用)以便全身性吸收的傳輸中起作用。甾醇化合物被認(rèn)為影響了制劑的釋放和滲濾特性。脂質(zhì)體是含有包埋含水容積的完全閉合的脂質(zhì)雙分子層膜。脂質(zhì)體可以是單層泡嚢(具有單一薄膜雙分子層膜)或多層泡嚢(是以多層薄膜雙分子層膜為特征的洋蔥狀結(jié)構(gòu)，每一層通過(guò)含水層二彼此分離)。所述雙分子層由兩個(gè)具有疏水"尾"區(qū)域和親水"頭"區(qū)域的脂質(zhì)單層組成。薄膜雙分子層的結(jié)構(gòu)是脂質(zhì)單層的疏水(非極性)"尾，，朝向雙分子層的中心，而親水性"頭"朝向水相。脂質(zhì)抗感染制劑是脂質(zhì)和抗感染藥物的結(jié)合。該結(jié)合可以是共價(jià)的、離子的、靜電的、非共價(jià)的或者是立體化學(xué)的。這些復(fù)合物是非-脂質(zhì)體的并且不能包埋另外的水溶性溶質(zhì)。這樣的復(fù)合物的實(shí)例包括兩性霉素B的脂質(zhì)復(fù)合物(Janoff等人，Proc.NatAcad.ScL，85:61226126，1988)和心磷脂與阿霉素的復(fù)合物。脂質(zhì)籠合物是用一種或多種脂質(zhì)形成的三維的、籠樣的結(jié)構(gòu)，其中所述結(jié)構(gòu)包埋有生物活性劑。這樣的籠合物也被歸入本發(fā)明的范圍。前體脂質(zhì)體是在與含水溶液浸漬接觸后能夠變?yōu)橹|(zhì)體或脂質(zhì)復(fù)合物的制劑。攪拌或其它的混合操作是必要的。這樣的前體脂質(zhì)體也;f皮歸入本發(fā)明的范圍內(nèi)。脂質(zhì)體可以通過(guò)許多方法制備(例如，參見(jiàn)，Bally,Cullis等人的，BiotechnolAdv.5(1):194,1987)。Bangham'sprocedure(J.Mol.Biol.,JMoIBiol.13(1):238畫(huà)52，1965)制備了普通的多層泡嚢(MLVs)。Lenk等人，(美國(guó)專利號(hào)4,522,803、5,030,453和5，169,637),Fountain等人(美國(guó)專利號(hào)4,588,578)和Cullis等人(美國(guó)專利號(hào)4,975,282)公開(kāi)了制備下述多層脂質(zhì)體的方法，所述多層脂質(zhì)體在其各個(gè)含水間隔中具有基本上相等的層間溶質(zhì)分布。Paphadjopoulos等人在美國(guó)專利號(hào)4,235,871中公開(kāi)了通過(guò)反向蒸發(fā)來(lái)制備寡層脂質(zhì)體。單層泡嚢可以由MLVs通過(guò)許多技術(shù)來(lái)制備，例如Cullis等人(美國(guó)專利號(hào)5,008,050)和Loughrey等人的(美國(guó)專利號(hào)5,059,421)擠壓方法。超聲處理和勻質(zhì)化作用可以用于由較大的脂質(zhì)體制備較小的單層月旨質(zhì)體(參見(jiàn)，例長(zhǎng)口Paphadjopoulos等人,Biochim.Biophys.Acta.，135:624-638，1967;D飄er,美國(guó)專利號(hào)4,515,736;和Chapman等人，LiposomeTechnol.,1984,第1-18頁(yè))。Bangham等人(J.Mol.Biol.,1965,13:238-252)最初的脂質(zhì)體的制備方法包括將磷脂懸浮于有機(jī)溶劑中，然后蒸干，在反應(yīng)容器中留下磷脂薄膜。接下來(lái)，加入適量的含水相，使混合物"膨脹，，，通過(guò)機(jī)械手段將所得的由多層泡嚢(MLVs)組成的脂質(zhì)體分散。該制備方法為Paphadjopoulos等人描述的小的超生處理單層泡嚢(Biochim.Biophys,Acta.,1967,135:624-638)和較大的單層泡嚢的開(kāi)發(fā)提供了基礎(chǔ)?？梢詫⒅苽浯髥螌优輫?LUVs)的技術(shù)，例如，反相蒸發(fā)法、注入法和清潔劑稀釋法，用于制備脂質(zhì)體。在本文中可以發(fā)現(xiàn)對(duì)制備脂質(zhì)體的這些以及其它方法的回顧。將Liposomes,MarcOstro編輯，MarcelDekker,Inc.,NewYork,1983,第l章，的相關(guān)部分引入本文以作參考。還參見(jiàn)Szoka,Jr.等人，(1980,Ann.Rev.Biophys.Bioeng.，9:467),也將該文獻(xiàn)的相關(guān)部分引入本文以作參考。用于制備泡嚢的其它技術(shù)包括那些形成反相蒸發(fā)泡嚢(REV)的技術(shù)，Papahadjopoulos等人，美國(guó)專利號(hào)4,235,871。另一類可使用的脂質(zhì)體是那些特征在于層溶質(zhì)分布大體相等的脂質(zhì)體。如在Lenk等人的美國(guó)專利號(hào)4,522,803中所定義的，該類脂質(zhì)體被命名為穩(wěn)定的多層泡嚢(SPLV),其包括Fountain等人的美國(guó)專利號(hào)4,588,578中所描述的單相泡嚢和如上所述的冷凍和熔化的多層泡嚢(FATMLV)。許多甾醇和它們的水溶性衍生物例如膽固醇半琥珀酸酯已經(jīng)被用于形成脂質(zhì)體；特別是參見(jiàn)Janoff等人的美國(guó)專利號(hào)4,721,612,該文獻(xiàn)是在1988年1月26日發(fā)行的，題目為"SteroidalLiposomes."。Mayhew等人描述了通過(guò)將抗菌劑和抗病毒劑包埋于包含ot-生育酚及其某些衍生物的脂質(zhì)體中來(lái)降低抗菌劑和抗病毒劑的毒性的方法。并且，許多生育酚和它們的水溶性衍生物已經(jīng)被用于形成脂質(zhì)體，參見(jiàn)Janoff等人，美國(guó)專利號(hào)5,041,278。6.教備才法用于形成脂質(zhì)體或者脂質(zhì)抗感染藥物制劑的方法包括"溶劑注入"法。該方法包括將一種或多種脂質(zhì)溶于少量的，優(yōu)選最小限度量的方法相容的溶劑中以形成脂質(zhì)懸浮液或溶液(優(yōu)選溶液)，然后將該溶液注入到含有抗感染藥物的含水介質(zhì)中。代表性的方法相容的溶劑是那些在諸如透析或透濾的水處理中能夠被洗去的溶劑。"乙醇注入"是一類溶液注入，該方法包括將一種或多種脂質(zhì)溶于少量，優(yōu)選最小限度量的乙醇中以形成脂質(zhì)溶液，然后將該溶液注入到含有抗感染藥物的含水介質(zhì)中。"少量"的溶劑是在注入過(guò)程中適合于形成脂質(zhì)體或脂質(zhì)復(fù)合物的量。這樣的方法描述于Lee等人，2003年8月4日登記的美國(guó)專利申請(qǐng)10/634,144,Pilkiewicz等人，2003年3月5日登記的美國(guó)專利申請(qǐng)10/383,173，和Boni等人，2003年3月5日登記的美國(guó)專利申請(qǐng)10/383,004，在此將這些專利申請(qǐng)的全部?jī)?nèi)容引入作為參考。將脂質(zhì)-醇溶液注入含有抗感染藥物的水或酒精溶液或混合物的步驟可以高于或低于含有抗感染藥物的水或醇溶液或混合物的表面進(jìn)行。優(yōu)選地，所述步驟是在高于所述溶液或混合物的表面進(jìn)行的。脂質(zhì)體還可以通過(guò)共同未決的專利申請(qǐng)2003年3月5日登記的10/383,004、2003年8月4日登記的10/634,144、2002年8月20日登記的10/224,293;和2003年10月29日登記的10/696,389中描述的方脂質(zhì)體或脂質(zhì)制劑的尺寸可以^t過(guò)許多方法獲得、，;列如擠出、超聲處理和勻質(zhì)化技術(shù)，這些都是本領(lǐng)域普通技術(shù)人員所熟知的并且容易實(shí)施。擠出包括在壓力下使脂質(zhì)體一次或多次地通過(guò)具有規(guī)定孔尺寸的過(guò)濾器。雖然過(guò)濾器通常是由聚碳酸酯制成的，但是過(guò)濾器可以由任何下述耐久的材料制成，其中所述材料不會(huì)與脂質(zhì)體相互作用并且是足夠堅(jiān)固的以便能夠在足夠的壓力下進(jìn)行擠出。優(yōu)選的過(guò)濾器包括"直通"過(guò)濾器，因?yàn)樗鼈兺ǔＤ軌蚪?jīng)得起本發(fā)明優(yōu)選擠出方法的較高的壓力。也可以使用"曲徑"過(guò)濾器。擠出還可以使用不對(duì)稱過(guò)濾器，例如AnoporeTM過(guò)濾器，其包括使脂質(zhì)體擠出通過(guò)枝狀-孔型氧化鋁多孔過(guò)濾器。還可以通過(guò)超聲處理來(lái)減小脂質(zhì)體或脂質(zhì)制劑的尺寸，其利用聲能來(lái)分裂或裁剪脂質(zhì)體，脂質(zhì)體將自然地重整為較小的脂質(zhì)體。超聲處理是通過(guò)將含有脂質(zhì)體懸浮液的玻璃管浸漬到由水浴型聲波儀產(chǎn)生的聲波震心中而進(jìn)行的?；蛘撸梢允褂锰结樞吐暡▋x，其中聲能是通過(guò)直接與脂質(zhì)體懸浮液接觸的鈦探針的振動(dòng)產(chǎn)生的?？梢允褂脛蛸|(zhì)化和碾壓設(shè)備來(lái)將較大的脂質(zhì)體或脂質(zhì)制劑分解為較小的脂質(zhì)體或脂質(zhì)制劑，所述勻質(zhì)化和碾壓設(shè)備例如GiffordWood勻化器、Polytron或Microfluidizer?？梢允褂帽绢I(lǐng)域熟知的方法將所得的脂質(zhì)體制劑分割成勻質(zhì)的種群；所述方法例如切向流過(guò)濾。在該方法中，不同尺寸的脂質(zhì)體或脂質(zhì)制劑種群被穿過(guò)切向流過(guò)濾器，由此產(chǎn)生了具有最高和/或最低尺寸限制的脂質(zhì)體種群。當(dāng)使用了兩種不同尺寸即具有不同孔徑的過(guò)濾器時(shí)，小于第一孔徑的脂質(zhì)體穿過(guò)過(guò)濾器。通過(guò)第二過(guò)濾器對(duì)該濾液進(jìn)行切向流過(guò)濾，所述第二過(guò)濾器的孔徑比第一過(guò)濾器小。該過(guò)濾的滯留物是尺寸分別大于和小于由第一和第二過(guò)濾器的孔徑所限定的尺寸范圍的脂質(zhì)體/復(fù)合物種群。Mayer等人發(fā)現(xiàn)使用橫跨膜離子梯度可以緩解與親脂性可電離生物活性劑例如抗腫瘤劑，如阿霉素或長(zhǎng)春花生物》威，的包埋效率有關(guān)的問(wèn)題。除了能夠引發(fā)更大量的吸收外，這樣的跨膜梯度還能夠起到增加抗感染藥物在脂質(zhì)體制劑中的滯留的作用。脂質(zhì)抗感染藥物制劑具有緩釋抗感染效果和較低的毒性，這使其具有較低的給藥頻率和提高的治療指數(shù)。在臨床前動(dòng)物研究中以及在與以相等劑量水平吸入的妥布霉素(非脂質(zhì)體或脂質(zhì)基的)的對(duì)比中，脂質(zhì)體阿米卡星在從給藥后不久到24小時(shí)后的這段時(shí)間內(nèi)顯示具有的肺部藥物水平是妥布霉素的二到幾百倍。此外，脂質(zhì)體阿米卡星能夠使上述水平保持遠(yuǎn)遠(yuǎn)超過(guò)24小時(shí)。在用來(lái)模擬CF患者中出現(xiàn)的假單胞菌感染的動(dòng)物模型中，脂質(zhì)體阿米卡星在與氨基糖苷單體比較時(shí)顯示出動(dòng)物肺部感染的明顯;肖除。肺表面活性物質(zhì)使得肺在呼吸過(guò)程中能夠膨脹和收縮。這是通過(guò)用脂質(zhì)和蛋白的結(jié)合物包覆肺臟而實(shí)現(xiàn)的。脂質(zhì)是作為單分子層存在的，所述單分子層具有直接向外的疏水鏈。脂質(zhì)代表了80%的肺表面活性物質(zhì)，大多數(shù)脂質(zhì)是卯磷脂，其中50%是二棕櫚酰磷脂酰膽堿(DPPC)(Veldhuizen等人，1998)。表面活性蛋白(SP)具有保持結(jié)構(gòu)和促進(jìn)肺表面活性物質(zhì)象呼吸期間進(jìn)行的那樣膨脹和收縮的功能。在這些表面活性蛋白中，特別是SP-B和SP-C具有溶胞性質(zhì)，其能夠溶解脂質(zhì)體(Hagwood等人，1998;Johansson,1998)。這種溶胞性質(zhì)可以促進(jìn)脂質(zhì)體的逐步分解。脂質(zhì)體還可以通過(guò)噬菌作用直接被巨噬細(xì)胞吞噬(Couveur等人，1991;Gonzales-Roth等人，1991;Swenson等人，1991)。脂質(zhì)體被肺泡巨噬細(xì)胞攝取的另一個(gè)含義是藥物被輸送到了患病位點(diǎn)。用于形成吸入用脂質(zhì)體或脂質(zhì)制劑的脂質(zhì)優(yōu)選是與肺表面活性物質(zhì)中存在的內(nèi)生脂質(zhì)相同的脂質(zhì)。脂質(zhì)體由能夠包埋所需藥物的雙分子層組成?？梢詫⑺鼈?cè)O(shè)置成同心雙分子層的多層泡嚢，其中藥物被包埋在不同層的脂質(zhì)內(nèi)部或各層之間的含水空間內(nèi)部。本發(fā)明利用獨(dú)特的方法創(chuàng)造出獨(dú)特的脂質(zhì)體或脂質(zhì)抗感染藥物制劑。所述方法和這些方法的產(chǎn)品均是本發(fā)明的一部分。在一個(gè)特別優(yōu)選的實(shí)施方式中，本發(fā)明的脂質(zhì)體抗感染藥物制劑是通過(guò)管線內(nèi)浸注入制備的，其中脂質(zhì)溶液物料流是在管線內(nèi)與抗感染藥物溶液物料流混合的。例如，如圖8中所描述的，兩種溶液可以在前部裝有Y形連接物的混合管內(nèi)部進(jìn)行在管線內(nèi)混合。以這樣的方式，管線內(nèi)注入法不同于上述的注入法，在后者中脂質(zhì)溶液是作為加入到大量抗感染藥物溶液中的物料流注入的。意想不到的是，本方法產(chǎn)生了較低的脂質(zhì)對(duì)藥物比和較高的包嚢效率。所述方法可以通過(guò)優(yōu)化參數(shù)例如流量、溫度、抗感染藥物濃度和在注入步驟后進(jìn)行鹽加成而得到進(jìn)一步的改善。保持總流量為800mL/min而改變各物料單獨(dú)的流量。為了實(shí)現(xiàn)上述條件，使用了兩個(gè)設(shè)置為不同泵速的單獨(dú)的泵。將混合后的溶液注入到含有NaCl溶液的燒杯中保持10秒，以使最終的NaCl濃度為1.5%,最終的乙醇濃度不超過(guò)30%?；旌虾螅筶mL的等分部分流過(guò)SephadexG-75凝膠過(guò)濾柱以從包嚢的阿米卡星中分離出阿米卡星單體。收集1mL具有最高密度(通過(guò)可視渾濁度來(lái)確定)的部分以用于進(jìn)一步的分析。所獲得的結(jié)果顯示于表1中。增大脂質(zhì)/阿米卡星流量比，在所述流量比到達(dá)300/500mL/min之前所產(chǎn)生的L/D幾乎為恒定值。隨著脂質(zhì)流量的進(jìn)一步增加，L/D開(kāi)始增加并且粒子尺寸也開(kāi)始變大。同時(shí)，較高的脂質(zhì)流量在加入了更多脂質(zhì)物質(zhì)的同時(shí)還提供了較好的阿米卡星回收率(包嚢效率)。表l.流量對(duì)阿米卡星包嚢的影響。*<table>tableseeoriginaldocumentpage29</column></row><table>*脂質(zhì)和阿米卡星溶液保存在40°C。阿米卡星原液為50mg/mL。在注入前加入NaCl10%溶液以獲得1.5%的最終濃度。注入時(shí)間為10s?；旌瞎荛L(zhǎng)10cm;6-元管線內(nèi)攪拌器設(shè)置在0cm處。脂質(zhì)/阿米卡星流量為300/500mL/min的第3批顯示出最好的L/D和粒子尺寸，以及合理的高阿米卡星回收率。因此決定在所有的進(jìn)一步的實(shí)驗(yàn)中均使用這樣的流量。如表2中所顯示的，為了重復(fù)選擇條件時(shí)的結(jié)果，制備了一個(gè)使用透濾法完全洗滌的批次(第6批)。在注入前向燒杯中加入NaCl10%溶液以使最終濃度為2%(作為與表1批次中的1.5%的對(duì)比)。所得L/D(1.71)不如表1中第3批中的好，并且粒子尺寸較大。這可能是由于在脂質(zhì)體形成初期用濃高度的NaCl接觸脂質(zhì)體所帶來(lái)的不良影響。與用透濾法洗滌的樣品相比，使用凝膠-過(guò)濾柱分離(洗滌)的樣品傾向于具有較好的L/D。這可能與應(yīng)力脂質(zhì)體實(shí)驗(yàn)的不同等級(jí)有關(guān)，或者是簡(jiǎn)單地由于在凝膠過(guò)濾柱上分離的樣品含有一部分具有較好L/D的脂質(zhì)體，其并不能代表整個(gè)種群。表2.完全洗滌批次的總結(jié)。改變的方法參數(shù)是溫度、阿米卡星原藥濃度以及其它(參見(jiàn)下面的表3)。將所有批次均濃縮到接近最大程度直到入口壓力達(dá)到IOPSI。<table>tableseeoriginaldocumentpage30</column></row><table>*第3列代表了臨注入前的脂質(zhì)和阿米卡星溶液的溫度，和洗滌(透濾法)過(guò)程中的溫度。RT-室溫。"VOL尺寸"是容重粒子尺寸。表3.第l-18批的操作條件。*<table>tableseeoriginaldocumentpage30</column></row><table>610010200注入前1,5透濾70510100注入前1.5(Seph柱)810510150注入期間1.5透濾91010150注入期間1.5透濾10105101005'后1.52倍稀釋1110510150剛注入后1.52倍稀釋12105mo18020"后1,52倍稀釋13105H2018030"后1.52倍稀釋1410H2018030"后1.5透濾15101.518030"后1.5透濾1660無(wú)0.9180注入期間0.9透濾1760無(wú)1.5180注入期間1.5透濾186001.5180注入期間1,5透濾*將脂質(zhì)和阿米卡星溶液以300/500mL/min的速度注入30s(實(shí)施例6-10)或20s(實(shí)施例11-18)。加入另外的含水溶液(NaCl或水)(其份數(shù)相當(dāng)于500份的阿米卡星體積)。(5./Z)模伴溫,的影詢除了加入NaCl溶液的量較少以外，其它設(shè)置保持與第3批中的相同，制得的最終濃度為1.0%。在開(kāi)始注入前再次加入溶液，因?yàn)樽⑷霑r(shí)間較短所以難以在注入期間進(jìn)行加入。同時(shí)，在注入期間在流動(dòng)壓力的作用下管線內(nèi)攪拌器被移到混合管的末端。攪拌器的位置為距管前端5cm處，而不是第3批中的2cm處。這可能是重要的，因?yàn)樵诘?0批中在相同溫度，40/44°C，的條件下獲得的L/D比為0.55,這幾乎是第3批中的一半。通過(guò)比較不同注入溫度下的阿米卡星的包嚢情況，意外地發(fā)現(xiàn)，較低的溫度給出了較好的L/D。在所試驗(yàn)的溫度中，脂質(zhì)/阿米卡星溫度為30/3(TC和50/RT時(shí)給出了相似的L/D比，為0.32和0.37。另一方面，如在第1-5批中，用凝膠-過(guò)濾進(jìn)行洗滌的樣品的數(shù)值低，該數(shù)值可能小于如果用透濾法洗滌該批次時(shí)所獲得的數(shù)值。表4.溫度對(duì)阿米卡星包嚢的影響。*<table>tableseeoriginaldocumentpage32</column></row><table>*將脂質(zhì)和阿米卡星溶液以300/500mL/min的速度注入30s。阿米卡星原液為50mg/mL。在注入前加入NaCl10%溶液以獲得最終1.0%的濃度。混合管長(zhǎng)10cm,6-元管線內(nèi)攪拌器位于5cm處。在單獨(dú)的實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，在30。C和3(TC下或者在50。C和22。C下混合卯％乙醇和水分別產(chǎn)生了相似的最終溫度，所述溫度為接近36。C。這提示，對(duì)于阿米卡星包嚢來(lái)說(shuō)重要的是最終混合物的溫度而不是單獨(dú)各組分的溫度。實(shí)施例6-15中使用的溫度是50。C/RT。實(shí)施例16-18中使用的兩種物料流的溫度是30。C和3(TC，其獲得了相當(dāng)?shù)慕Y(jié)果，雖然觀察到的阿米卡星包嚢稍少一些。6./c;^入y^》p入含;^溶濕^謬^的彩喊接下來(lái)將注意力集中到NaCl溶液加入步驟和洗滌方法上。在多個(gè)方面改變工藝參數(shù)。在流量為300/500的注入步驟剛結(jié)束時(shí)，混合物中乙醇的濃度達(dá)到34%。在該濃度下阿米卡星具有有限溶解度(參見(jiàn)圖9)。如果實(shí)驗(yàn)從50mg/mL的阿米卡星原液開(kāi)始，則在與脂質(zhì)溶液混合后阿米卡星的總量將超過(guò)30mg/mL,假設(shè)包嚢效率為50%，則其中至少一半(15mg/mL)是阿米卡星單體。這高于其在34%乙醇中的溶劑度極限。該問(wèn)題的一個(gè)可行解決方案就是向具有脂質(zhì)/阿米卡星混合物的容器中加入更多的水。例如，向800份的脂質(zhì)/阿米卡星中加入200份的水(或NaCl溶液)，這將使乙醇減少到27%(圖9)。這使阿米卡星能夠在15mg/mL甚至更高的濃度下溶解，其中所述更高的濃度取決于溫度。此外，加入NaCl可以使?jié)B透條件穩(wěn)定化。當(dāng)在200-300mg/mL的內(nèi)部濃度下形成脂質(zhì)體并包嚢阿米卡星時(shí)，僅有~15mg/mL左右的阿米卡星沒(méi)有被包嚢。缺少鹽水將導(dǎo)致滲透不平衡，其隨后將導(dǎo)致阿米卡星的漏失。向800份的脂質(zhì)/阿米卡星中加入150份的10%NaCl將產(chǎn)生約15。/。的最終NaCl濃度(脂質(zhì)體外)。針對(duì)注入操作進(jìn)行了很多批次的實(shí)驗(yàn)，其中包括在不同時(shí)間加入不同量的NaCl溶液(或者在一些批次中加入的是水)(參見(jiàn)表5，匯編自表2和3)。從表中可以看出一般趨勢(shì)，從而得到以下結(jié)論—為了獲得低L/D(如果使用的是短混合管)，則必須在注入和加入含水溶液之間存在一定的時(shí)間間隔。在第6-15批中，那些具有20s或更長(zhǎng)時(shí)間間隔的批次具有低的L/D。這可能說(shuō)明脂質(zhì)體不是完全在物料流混合之后立即形成的。當(dāng)使用較長(zhǎng)的混合管時(shí)(第16-18批)，其能夠提供較長(zhǎng)的混合時(shí)間，所以不需要時(shí)間間隔。一加入高濃度的NaCl溶液來(lái)平衡滲克壓度實(shí)際上并不會(huì)幫助保留阿米卡星。實(shí)際上，在適當(dāng)?shù)臅r(shí)間間隔后加入純水產(chǎn)生了最低的L/D和總阿米卡星濃度?！谧⑷牒?min時(shí)加入100份10%的NaCl(第9批)給出了有竟?fàn)幮缘腖/D比但是沒(méi)有給出良好的總阿米卡星濃度。這可能是由于NaCl,當(dāng)在早期與相對(duì)較高的乙醇濃度同時(shí)存在時(shí)，導(dǎo)致了聚集和粘性的增加。表5.加入到脂質(zhì)/阿米卡星混合物中用以調(diào)節(jié)乙醇濃度的含水容積和NaCl濃度的作用。沒(méi)有顯示所有的變量；參見(jiàn)表2和3。<table>tableseeoriginaldocumentpage34</column></row><table>一我虐'染秀#^濕^教#先前發(fā)現(xiàn)，使用50mg/mL的阿米卡星原液產(chǎn)生了最好的包埋。當(dāng)使用常用方法時(shí)，將阿米卡星原藥濃度降低到40mg/mL會(huì)增力。L/D。使用二-物料流流管線內(nèi)注入法時(shí)，乙醇濃度達(dá)到了較高的水平，因此現(xiàn)在50mg/mL的阿米卡星可能不是最大濃度。表6總結(jié)了使用多種阿米卡星原藥濃度的影響。40mg/mL給出了類似的或者較好的L/D值，甚至改善了阿米卡星的回收率。相對(duì)于恒量的脂質(zhì)使用較少的阿米卡星并且提供相似的L/D,導(dǎo)致了較高的包嚢百分比(第12批)。將阿米卡星原藥的濃度進(jìn)一步降低到30mg/mL,雖然回收率仍是令人印象深刻的但其導(dǎo)致L/D稍微有所增加(第13批)。表6.降低阿米卡星原液濃度的同時(shí)改善了效率。阿米卡星的回收率是以所獲得的L/D為基礎(chǔ)計(jì)算的并且假定脂質(zhì)的回收率為100%。<table>tableseeoriginaldocumentpage35</column></row><table>降低阿米卡星原藥的濃度具有另一個(gè)含義。其降低了注入前脂質(zhì)/阿米卡星混合物中阿米卡星單體的濃度，使得其在較高的乙醇濃度下仍保持是可溶解的。假設(shè)脂質(zhì)和阿米卡星是以300/500的比例混合的，阿米卡星原藥是50mg/mL,包嚢有效率是37%,那么初始阿米卡星單體將是~20mg/mL。類似地，包嚢率為52%的40mg/mL的阿米卡星原藥將產(chǎn)生~12mg/mL的阿米卡星單體，包嚢率為46%的30mg/mL的阿米卡星原藥將產(chǎn)生~10mg/mL的阿米卡星單體。7.提高抗感染藥物(例如氨基糖苷如阿米卡星、妥布霉素、慶大霉素)在脂質(zhì)體中的包埋的方法有幾種。一種方法是制備非常大的脂質(zhì)體(〉l^im),這樣單位數(shù)量的脂質(zhì)所包埋的體積是大的。該方法獲得的L/D比較小，不能實(shí)際用于脂質(zhì)體吸入劑(噴霧)，其原因是1)噴霧的脂質(zhì)體(〉0.5pmC遭受較多的破裂釋:，和2;較小的霧滴尺寸是獲得良好的肺部沉積所必需的，該尺寸本身小于約~3pm。因此為了吸入，希望能夠使脂質(zhì)體的尺寸保持盡可能的小以避免過(guò)多的破裂釋放。目前，本文公開(kāi)的脂質(zhì)體的平均直徑小于約0.4pm(參見(jiàn)表4)。另一個(gè)降低L/D的方法是使用帶負(fù)電荷的脂質(zhì)。以上所列出的氨基糖苷都是高正性的，每種化合物都有4到5個(gè)胺。用于治療性制劑的通常是這些氨基糖苷的硫酸鹽。多陽(yáng)離子特性所帶來(lái)的是與帶負(fù)電荷的脂質(zhì)體的強(qiáng)結(jié)合。這導(dǎo)致在脂質(zhì)體形成期間具有較多的包埋?？垢腥舅幬镏苿┑哪康氖窍蚍尾凯h(huán)境提供持續(xù)的釋放。通過(guò)巨噬細(xì)胞的吸收來(lái)快速地清除脂質(zhì)體是與上述目的背道而馳的。已經(jīng)有充分的文獻(xiàn)報(bào)導(dǎo)，帶負(fù)電荷的脂質(zhì)體所經(jīng)受的被巨噬細(xì)胞攝取的程度比中性脂質(zhì)體高得多。因此，使用中性脂質(zhì)體是所希望的。一組能夠使很多藥物包埋在小脂質(zhì)體中的技術(shù)是以梯度負(fù)載為基礎(chǔ)的，其中pH梯度、硫酸銨梯度或硫酸鎂梯度被用來(lái)負(fù)載胺-藥物成為脂質(zhì)體參見(jiàn)美國(guó)專利號(hào)5,578,3205,736,1555,837,2795,922,350(pH梯度);5,837,2825,785,987(硫酸鎂梯度);和5,316,771(硫酸銨梯度)。這些技術(shù)僅對(duì)膜可滲透性胺(中性形式的單-胺是可滲透性的，如亞德利亞霉素和道諾紅霉素)有效。梯度負(fù)載對(duì)某些抗感染藥物例如氨基糖苷不起作用，因?yàn)樗鼈兪欠菨B透性的(太大且電荷過(guò)多)。本文中所描述的所有方法均能夠很容易地為大規(guī)模的無(wú)菌制造廠所接受。最終脂質(zhì)體的尺寸可以通過(guò)改變脂質(zhì)組成、濃度、賦形劑和工藝參數(shù)而得到調(diào)整。本發(fā)明方法所使用的脂質(zhì)與藥物的比為約4:1到約1:1。在另一個(gè)實(shí)施方式中，脂質(zhì)與藥物的比為約3:1到約1:1,2:1到約1:1,約1:1或小于l:l,約0.75:1或小于0.75:1,或者約0.5:1或小于0.5:1。此外，降低了抗感染藥物單體的百分比，所述抗感染藥物單體在產(chǎn)品被滲析后還會(huì)存在一段特定的時(shí)間。^^部^襲^蘭#庠/差,礙治療感染性疾病例如銅綠假單胞菌的障礙是藥物向上皮細(xì)胞上的痰液/生物薄膜障礙內(nèi)的滲透(圖1),其中所述銅綠假單胞菌是導(dǎo)致嚢性纖維化患者的慢性疾病的主要原因。在圖1中，環(huán)形代表脂質(zhì)體抗感染藥物制劑，"+"符號(hào)代表抗感染藥物單體，"-"符號(hào)代表粘蛋白、海藻酸和DNA,實(shí)心棒形符號(hào)代表銅綠假單胞菌。該障礙是由植入和漂浮的銅綠假單胞菌，所述銅綠假單胞菌是嵌入在海藻酸或來(lái)自細(xì)菌的外多糖中的，以及來(lái)自受損白血球的DNA和來(lái)自肺上皮細(xì)胞的粘蛋白組成的，所有這些物質(zhì)均具有凈負(fù)電荷(Costerton等人，1999)。這些負(fù)電荷結(jié)合在一起阻擋了正電性藥物例如氨基糖普的滲透，使它們成為生物學(xué)無(wú)效的(Mendelman等人，1985)。將抗感染藥物包埋在脂質(zhì)體或脂質(zhì)制劑內(nèi)部可以保護(hù)或部分地保護(hù)抗感染藥物免受與痰液/生物薄膜的非特異性結(jié)合，使脂質(zhì)體或脂質(zhì)制劑(具有包埋的氨基糖普)能夠滲透通過(guò)(圖1)。阿米卡星已經(jīng)顯示出對(duì)細(xì)菌酶類具有高度的抵抗力，因此其提供了比其它氨基糖苷包括妥布霉素和慶大霉素所顯示的更高的易影響臨床分離抹百分比(Price等人，1976)。特別是，銅綠假單胞菌分離林對(duì)阿米卡星比對(duì)其它氨基糖苷敏感得多，并且顯示無(wú)交叉抗藥性(Damaso等人，1976)。從圖2中可以清楚地看出阿米卡星脂質(zhì)體制劑的緩釋和庫(kù)存效果。在該研究中通過(guò)氣管內(nèi)和靜脈內(nèi)給藥向大鼠提供妥布霉素。此外，通過(guò)氣管給予大鼠同樣劑量(4mg/大鼠)的阿米卡星脂質(zhì)體制劑。數(shù)據(jù)表明只有阿米卡星脂質(zhì)體制劑獲得了緩釋和庫(kù)存效果。實(shí)際上，在給藥后24小時(shí)，只有阿米卡星脂質(zhì)體制劑在動(dòng)物肺部顯示出了明顯的藥物水平，而兩種妥布霉素制劑所顯示的水平均可忽略不計(jì)，認(rèn)為這主要是由于快速地全身性吸收。這比在肺部增加一百倍的氨基糖普還要好，因?yàn)橹|(zhì)體抗感染藥物制劑證明了下述觀點(diǎn)，即緩釋脂質(zhì)體制劑抗感染藥物的服用頻率能夠明顯地少于目前批準(zhǔn)的TOBI⑧制劑(一種由ChironCorporation,Ameryville,CA制備的妥布霉素吸入劑溶液)。而且，痰液/生物薄膜的存在阻擋了氨基糖普單體的滲透，因?yàn)槠鋵⒖垢腥舅幬锸`在其表面上(圖1)。因此，在CF患者中需要使用超過(guò)1,000gm妥布霉素/克肺組織的劑量才能顯示出治療效果。阿米卡星脂質(zhì)體制劑克服了這一問(wèn)題。因此，阿米卡星脂質(zhì)體制劑中的藥物治療水平所保持的時(shí)間比妥布霉素單體的長(zhǎng)。結(jié)合和滲透的這種促進(jìn)作用還意味著阿米卡星脂質(zhì)體制劑可以顯著地減少細(xì)菌抗藥性，所述細(xì)菌抗藥性通常出現(xiàn)在抗感染藥物以低于最低抑菌濃度存在于體內(nèi)時(shí)。&2秀/七'動(dòng)力夢(mèng)阿米卡星的藥代動(dòng)力學(xué)是在氣管內(nèi)(IT)給予大鼠妥布霉素單體或阿米卡星脂質(zhì)體制劑后測(cè)定的。將這些數(shù)據(jù)與尾部靜脈注射妥布霉素單體后在肺部獲得的分步進(jìn)行比較。在所有情況中，給藥劑量均為4mg/大鼠。正如從圖2中所看到的，IT能夠輸送的氨基糖苷沉積物要比注射能夠輸送的大得多。脂質(zhì)體抗感染藥物技術(shù)的庫(kù)存效果也得到了證明，因?yàn)榕cIT或IV給予的妥布霉素相比，阿米卡星脂質(zhì)體制劑在給藥后二十四小時(shí)仍在肺部保持有大于一百倍的藥物增加。因此，與妥布霉素單體相比，阿米卡星脂質(zhì)體制劑中的藥物治療水平能夠保持較長(zhǎng)的一段時(shí)間。氨基糖苷與CF患者痰液的結(jié)合是值得關(guān)注的，特別是在如果該結(jié)合降低了抗感染藥物的生物學(xué)活性時(shí)(Hunt等人，1995)。為了確定阿米卡星脂質(zhì)體制劑是否能夠使生物活性保持的時(shí)間段延長(zhǎng)，將正常的大鼠通過(guò)氣管內(nèi)滴注給藥以阿米卡星脂質(zhì)體制劑。接著在第2或24小時(shí)時(shí)通過(guò)支氣管肺泡灌洗法(BAL)將其移出以確定生物活性。用超濾法(0.2微米)濃縮樣品接著進(jìn)行過(guò)濾以除去污染肺臟的微生物。使用TDX檢測(cè)儀測(cè)定阿米卡星的濃度并用MuellerHinton肉湯稀釋測(cè)定法測(cè)定其生物活性(銅綠假單胞菌)。結(jié)果顯示于表7中。表7.顯示阿米卡星脂質(zhì)體制劑能夠使生物活性保持時(shí)間延長(zhǎng)的結(jié)果。<table>tableseeoriginaldocumentpage38</column></row><table>如上表所顯示的，回收的過(guò)濾后的阿米卡星脂質(zhì)體制劑能夠在MuellerHinton肉湯試-驗(yàn)中殺滅銅綠假單胞菌，甚至在24小時(shí)后MIC還為4。在2小時(shí)時(shí)獲得的MIC為2,其與由過(guò)濾后的脂質(zhì)體/復(fù)合阿米卡星原藥所獲得的相似。因此，在肺部24小時(shí)后阿米卡星脂質(zhì)體制劑仍具有活性。24小時(shí)時(shí)在BAL中未能檢測(cè)到以同樣劑量給予的妥布霉素單體。這表明不僅脂質(zhì)體抗感染藥物制劑仍保留在肺中，而且其還能夠隨時(shí)間自由地滲透過(guò)痰液/生物薄膜。將這些數(shù)據(jù)與圖2和表9(在下文中)所顯示的事實(shí)相結(jié)合，結(jié)果是阿米卡星脂質(zhì)體制劑能夠隨時(shí)間釋放出抗感染藥物單體同時(shí)又能夠使肺部的抗感染藥物保持在高水平，這證明了該系統(tǒng)可以產(chǎn)生隨時(shí)間的緩釋效果的理論。該效果將證明其在降低假單胞菌的生物-負(fù)載和由抗感染藥物的水槽水平而引起的抗性發(fā)展方面是重要的。作為對(duì)阿米卡星脂質(zhì)體制劑緩釋以及其持續(xù)抗感染效果的體外證明，將所述制劑培養(yǎng)在來(lái)自患有慢性阻塞性肺病(COPD)患者的痰液中，所述痰液中含有PAOI黏液假單胞菌(尸化^/omo憩&)。還將阿米卡星脂質(zhì)體制劑培養(yǎng)在含有PAOI黏液假單胞菌的海藻酸中。如表8中所示，在兩種情況中均觀察到了隨時(shí)間持續(xù)且增高的假單胞菌殺滅作用。表8.假單胞菌體外隨時(shí)間的殺滅作用。<table>tableseeoriginaldocumentpage39</column></row><table>經(jīng)典殺滅曲線不適用于脂質(zhì)體抗感染藥物制劑技術(shù)，因?yàn)橹|(zhì)體制劑顯示出抗感染作用逐步增大的抗感染藥物緩釋效果。脂質(zhì)制劑保護(hù)阿米卡星免受痰液和/或海藻酸的影響直至其釋放。觀察到了及時(shí)、徹底的殺滅作用，這與對(duì)抗感染藥物無(wú)干擾或鈍化的緩釋持續(xù)的抗感染效果模型相一致。脂質(zhì)體阿米卡星制劑的效力是用慢性肺部感染模型研究的(Cash等人，1979)，其中將嵌在瓊脂糖?；|(zhì)中的銅綠假單胞菌滴入到大鼠的氣管中。建立該黏液假單胞菌屬動(dòng)物模型以模擬CF患者中所顯示的假單胞菌感染。一些與CF臨床相關(guān)的因素包括相似的肺部病理學(xué)；免疫復(fù)合物障礙的建立；以及通過(guò)銅綠假單胞菌林向黏液表型的轉(zhuǎn)換(Cantin和Woods,1999)。用超過(guò)107CFUs的黏液假單胞菌(菌抹PA01)感染大鼠肺部，所述黏液假單胞菌來(lái)自CF患者的離析抹，接著用以下物質(zhì)進(jìn)行治療(a)氨基糖苷單體，(b)僅使用脂質(zhì)載體作為非藥物對(duì)照，和(c)脂質(zhì)體阿米卡星制劑。此外，根據(jù)在Kirby-Bauer板上殺滅體外銅綠假單胞菌的能力來(lái)對(duì)制劑進(jìn)行頭道篩選。對(duì)多種脂質(zhì)體阿米卡星制劑進(jìn)行了試驗(yàn)，所述試驗(yàn)是以不同的脂質(zhì)組分或制備參數(shù)為基礎(chǔ)的，所述不同的組分或制備參數(shù)能夠在體外實(shí)驗(yàn)中產(chǎn)生不同的殺滅范圍。設(shè)計(jì)該實(shí)驗(yàn)的目的是測(cè)量由脂質(zhì)體氨基糖苷制劑獲得的效力相對(duì)于氨基糖苷單體的增加。比較空白對(duì)照脂質(zhì)組合物、兩種不同的脂質(zhì)體阿米卡星制劑和阿米卡星單體以及妥布霉素單體以相同的氨基糖苷濃度用作脂質(zhì)體抗感染制劑時(shí)的情況。此外，還進(jìn)行了10倍高劑量的阿米卡星單體和10倍高劑量的妥布霉素單體試驗(yàn)。給藥方案是每日IT給藥共七天。結(jié)果(圖3)表明在兩種制劑(脂質(zhì)組分不同)中的脂質(zhì)體阿米卡星顯示出CFU水平的明顯降低并且在降低CFU方面要優(yōu)于10倍高劑量的阿米卡星單體或妥布霉素單體。在圖3中，Lip-An-14是DPPC/膽固醇/DOPC/DOPG(42:45:4:9)和10mg/mL的阿米卡星，Lip-An-15是DDPC/膽固醇(1:1),其也為10mg/mL。本文中所有的脂質(zhì)-脂質(zhì)和脂質(zhì)-藥物比均為重量對(duì)重量比。設(shè)計(jì)下一個(gè)實(shí)驗(yàn)(圖4)的目的是證明脂質(zhì)體阿米卡星制劑的緩釋和持續(xù)抗感染能力。給藥方案是隔日給藥共14天，以與先前實(shí)驗(yàn)中的每天給藥共七天進(jìn)行對(duì)比。結(jié)果表明兩種制劑(脂質(zhì)組分不同)中的脂質(zhì)體阿米卡星的效力比阿米卡星單體或妥布霉素單體的高10到100倍(具有較高的降低CFU水平的能力)。每日600mgTOBI(由ChironCorporation,Ameryville,CA制備的妥布霉素吸入溶液)的人類劑量，或?yàn)榧s375mg/m2,相當(dāng)于每日9.4mg的大鼠劑量。因此所述數(shù)據(jù)與10到100倍的人類效力改善直接相關(guān)。應(yīng)當(dāng)注意的是，在該模型中所能觀察到的最好的情況是log值降低了2個(gè)單位。痰液試驗(yàn)中銅綠假單胞菌減少100倍已經(jīng)與肺功能的改善相關(guān)(Ramsey等人，1993)。脂質(zhì)體阿米卡星制劑的持續(xù)釋放表明能夠用較低的劑量和/或較少的定量給藥頻率獲得比氨基糖苷單體所獲得的高的細(xì)菌生長(zhǎng)減少。脂質(zhì)體阿米卡星制劑的效力是在慢性肺部感染用模型中研究的，其中將嵌在瓊脂糖粒基質(zhì)中的銅綠假單胞菌通過(guò)Sprague/Dawley大鼠的氣管滴入。三天后每日(圖3)或隔日(圖4)給藥以阿米卡星單體或脂質(zhì)體阿米卡星，給藥劑量為1mg/大鼠或10mg/大鼠的給定氨基糖苷或者1mg/大鼠的脂質(zhì)體阿米卡星，并用空白脂質(zhì)體(脂質(zhì)載體)作為對(duì)照，五只大鼠為一組。14天的實(shí)驗(yàn)后，分析勻質(zhì)化大鼠肺臟(冷凍)中氨基糖苷的含量和活性。用TDX檢測(cè)儀進(jìn)行臨床化學(xué)測(cè)定，而生物鑒定是通過(guò)測(cè)量嵌有草枯桿菌(Bacz〃wm^"/w)的瓊脂板上的抑菌區(qū)進(jìn)行的。結(jié)果顯示于表9中表9.脂質(zhì)體阿米卡星制劑治療大鼠肺部銅綠假單胞菌感染的結(jié)果<table>tableseeoriginaldocumentpage41</column></row><table>藥物的重量是標(biāo)準(zhǔn)化后的，不包含任何的鹽形式。表10的結(jié)果表明，兩種脂質(zhì)體抗感染藥物制劑中均存在氨基糖香并具有活性，而對(duì)于氨基糖苷單體，在甚至用IO倍高的劑量時(shí)仍只能夠檢測(cè)到很少的氨基糖苷。這些進(jìn)一步的結(jié)果證實(shí)了脂質(zhì)體抗感染藥物制劑的緩釋特性，并且還證明了其保留的抗感染藥物仍然具有活性。在上述制劑中只有妥布霉素單體(0.1微克/mL)顯示在腎中具有任何可檢測(cè)水平的氨基糖苷。脂質(zhì)體阿米卡星制劑的緩釋和庫(kù)存效果在圖5中得到進(jìn)一步的證實(shí)。將嵌在瓊脂糖?；|(zhì)中的銅綠假單胞菌通過(guò)氣管滴入以使大鼠患有慢性肺部感染，使用與效力研究中所使用的相同的微粒。接著通過(guò)氣管內(nèi)給藥給予大鼠相的劑量(2mg/大鼠)的妥布霉素單體或脂質(zhì)體阿米卡星(制劑Lip-An-14)。數(shù)據(jù)表明，所述數(shù)據(jù)是以微克抗感染藥物每克肺組織為單位隨時(shí)間測(cè)量的，脂質(zhì)體抗感染藥物顯示出緩釋和庫(kù)存效果，而妥布霉素單體在24小時(shí)后顯示的肺部中的水平可忽略不計(jì)，認(rèn)為這主要是由于快速的全身性的吸收。這比在肺部增加一百倍的氨基糖苷還要好，因?yàn)楸桓腥敬笫笾械闹|(zhì)體阿米卡星制劑能夠證明下述觀點(diǎn)，即持續(xù)釋放的脂質(zhì)體抗感染藥物的服用頻率明顯地少于目前批準(zhǔn)的TOBI⑧制劑(一種由ChironCorporation,Ameryville,CA制備的妥布霉素吸入劑溶液)。阿米卡星的藥代動(dòng)力學(xué)是通過(guò)氣管內(nèi)(IT)給予大鼠妥布霉素單體或脂質(zhì)體阿米卡星測(cè)定的。給藥劑量為2mg/大鼠。脂質(zhì)體抗感染藥物技術(shù)的庫(kù)存效果得到了證明，因?yàn)榕cIT給予的妥布霉素單體相比，脂質(zhì)體阿米卡星在給藥后二十四小時(shí)仍在感染肺部保持有大于一百倍的藥物增加。因此，與妥布霉素單體相比，脂質(zhì)體制劑中的藥物治療水平能夠保持較長(zhǎng)的一段時(shí)間。圖7顯示了有效量的抗感染藥物在肺中的顯著停留時(shí)間和累積，所述結(jié)果證明可以使用相對(duì)較不頻繁的劑量。每個(gè)劑量均為吸入(如上所述，在大鼠中，3只大鼠為一組)15mg/mL阿米卡星的霧化脂質(zhì)體阿米卡星制劑(DPPC/膽固醇，1:1)4小時(shí)。給藥在第一天；第一、三和五天；或者第一、二、三、四和五天進(jìn)行。將提供所給出的數(shù)據(jù)柱狀圖的大鼠在獲得各自的劑量數(shù)據(jù)柱狀圖后宰殺。所述制劑是如實(shí)施例中制備的?？梢允褂孟嗨频目垢腥舅幬飦?lái)治療細(xì)胞內(nèi)感染如肺炭疽和兔熱病。在肺炭疽中炭疽孢子隨氣霧劑達(dá)到肺泡。吸入的孢子被肺泡中的肺巨噬細(xì)胞吞下并通過(guò)淋巴管傳送到局部氣管支氣管淋巴結(jié)或縱隔淋巴結(jié)(Pile等人，1998;Gleiser等人，1968)。巨喧細(xì)胞位于兩種傳染性通道的中央并且是使宿主自毀于全身性(吸入)炭疽的主要原因。此外，由于其緩釋和尋靶特性，脂質(zhì)體抗感染藥物制劑技術(shù)能夠加強(qiáng)細(xì)胞吸收并且能夠?qū)⒎闻菥奘杉?xì)胞和肺上皮細(xì)胞用于藥物尋把和傳送。具有這些特征被認(rèn)為能夠促進(jìn)下述細(xì)胞內(nèi)感染的治療，所述感染發(fā)生在肺部并且通過(guò)巨噬細(xì)胞傳送。更重要的是，這些特征能夠使抗感染藥物更加有效，因?yàn)橹|(zhì)體抗感染藥物應(yīng)能夠被許多患有疾病的細(xì)胞吞噬?？垢腥舅幬飳⒁葬槍?duì)粑標(biāo)的方式被細(xì)胞內(nèi)釋放，所以進(jìn)攻感染是在其分散前進(jìn)行的。所包嚢的藥物可以是已經(jīng)批準(zhǔn)的藥物如環(huán)丙沙星、四環(huán)素、紅霉素或阿米卡星。已經(jīng)開(kāi)發(fā)出了脂質(zhì)體環(huán)丙沙星制劑。在研究中，將該化合物給藥于小鼠，并將其與細(xì)胞內(nèi)給藥的環(huán)丙沙星單體和口服給藥的環(huán)丙沙星單體進(jìn)行比較，所述三種化合物全部是以同樣劑量給予的(圖6)。每只小鼠的劑量是15mg/kg,每組有三只小鼠。脂質(zhì)體環(huán)丙沙星是DPPC/膽固醇(9:1)的形式，有效濃度為3mg環(huán)丙沙星/mL，所述制劑是如實(shí)施例制備的。脂質(zhì)與藥物的比按重量計(jì)為12.5:1。與口服給藥的環(huán)丙沙星相比，小鼠肺部存在的脂質(zhì)體環(huán)丙沙星的量比環(huán)丙沙星單體的量高兩個(gè)數(shù)量級(jí)。此外，24小時(shí)后只有脂質(zhì)體環(huán)丙沙星在肺部仍呈現(xiàn)出可檢測(cè)的水平，而口服給藥的藥品在不到兩小時(shí)時(shí)就檢測(cè)不到了。該數(shù)據(jù)支持，使用脂質(zhì)體環(huán)丙沙星制劑和其它的抗感染藥物如氨基糖苷、四環(huán)素和大環(huán)內(nèi)酯來(lái)治療和預(yù)防性防止生物恐怖襲擊所使用的細(xì)胞內(nèi)疾病。S丄/#|沐參^將所要使用的脂質(zhì)溶于乙醇中以形成脂質(zhì)-乙醇溶液。將所述脂質(zhì)-乙醇溶液注入到含有將被包埋的生物活性劑分子的水或乙醇溶液中。脂質(zhì)自然地形成泡嚢。表IO公開(kāi)了脂質(zhì)體抗感染藥物制劑的參數(shù)，其中脂質(zhì)是DPPC和膽固醇。表IO.補(bǔ)充的脂質(zhì)體抗感染藥物制劑參數(shù)。<table>tableseeoriginaldocumentpage44</column></row><table>氺DPPC/膽固醇脂質(zhì)體，其中DPPC/膽固醇的摩爾比為大約1:1。**在計(jì)算L/D時(shí)僅考慮了阿米卡星的包埋量。關(guān)于形成脂質(zhì)體抗感染藥物制劑的詳細(xì)情況可以參見(jiàn)2003年3月5日登記的PCT/US03/06847,將其全部?jī)?nèi)容引入本文作為參考。包埋體積是脂質(zhì)體制劑的一個(gè)基本特征，其是作為每單位脂質(zhì)的脂質(zhì)體內(nèi)水相體積而確定的。其通常用單位p升/|1摩爾表示。通常認(rèn)度。較高的包埋體積隨后將導(dǎo)丈較高的藥^J脂質(zhì)比^即較高的最終制劑總藥物濃度。然而，在脂質(zhì)體阿米卡星的制劑過(guò)程中發(fā)現(xiàn)產(chǎn)生的實(shí)際藥物/脂質(zhì)比率比以包埋體積為基礎(chǔ)預(yù)期的比率高3倍以上。表11顯示了4種不同脂質(zhì)抗感染藥物制劑制品樣品(參見(jiàn)實(shí)施例一節(jié)中的實(shí)施例2)的結(jié)果。表ll.負(fù)載在不同方法制備的脂質(zhì)體中的阿米卡星。<table>tableseeoriginaldocumentpage45</column></row><table>樣品1和2是通過(guò)本文所公開(kāi)的乙醇注入法制備的，樣品3和4是通過(guò)本領(lǐng)域已知的脂質(zhì)體形成技術(shù)制備的。阿米卡星的濃度是通過(guò)免疫焚光試驗(yàn)測(cè)量的，所述試驗(yàn)使用了置于TDx分析器儀上的INNOFLUOSeradyn試劑。脂質(zhì)是通過(guò)反相HPLC測(cè)定的，所述HPLC使用的是C-8柱和光散射檢測(cè)器。樣品#1-3中的脂質(zhì)體體積(每單位總體積中脂質(zhì)體所占的體積)是通過(guò)測(cè)量總體積和制劑濾失體積中的熒光探針(Sulforhodamine101或Carboxyfluorescein)的濃度而確定的，其中所述濾失體積是在CentriSart過(guò)濾裝置中通過(guò)離心分離獲得的。由于探針從脂質(zhì)體所占體積中的排出，所以濾液中的探針濃度高于平均濃度。在樣品#4中，脂質(zhì)體體積是通過(guò)向其中加入固定量的鉀離子后測(cè)量樣品中的鉀離子的濃度而確定的，其中向10mL的脂質(zhì)體懸浮液(Vo)中加入250ul的KC1(V加人)。接著將藥品以4000rpm的轉(zhuǎn)速離心分離30min并取上層清液用Cole-Parmer鉀壽文感電極測(cè)量鉀離子(K)。由于鉀離子從脂質(zhì)體所占體積中的排出，因此所測(cè)得的鉀離子的濃度通常比預(yù)期的高。在對(duì)照樣試驗(yàn)中，向10mL鹽水溶液中加入等量的KC1。測(cè)量對(duì)照KC中的鉀濃度。接著如下估算水和脂質(zhì)體的體積<formula>formulaseeoriginaldocumentpage46</formula>已知脂質(zhì)體體積和脂質(zhì)濃度后就可以確定包埋體積；，其中Lw和Lm分別是重量和摩爾脂質(zhì)濃度。脂質(zhì)的密度假定為接近1mg/mL。如果藥物理想地分散在脂質(zhì)體內(nèi)外的含水空間中，則由此就可以計(jì)算出樣品將具有的預(yù)期脂質(zhì)/藥物比D。"-"Av"",其中Do是脂質(zhì)體形成期間的藥物體積濃度，ML是脂質(zhì)的平均重量分子量。正如所看到的，樣品#1和#2的實(shí)際L/D比(1.8和1.9)一致地^f氐于由均勻分布的阿米卡星所預(yù)期的比(5.6和6.0),而樣品#3和#4的L/D與理論值接近。在2種脂質(zhì)抗感染藥物制劑樣品制品之間進(jìn)行類似的比較，其中所述抗感染藥物是硫酸慶大霉素(參見(jiàn)實(shí)施例一節(jié)的實(shí)施例3)。表12中的數(shù)據(jù)表明本文所公開(kāi)的方法提供了對(duì)慶大霉素的意想不到的高包埋。在#5和#6兩個(gè)樣品中，實(shí)際脂質(zhì)/藥物比幾乎是理論預(yù)期值的兩倍。表12.負(fù)載在不同方法制備的脂質(zhì)體上的慶大霉素<table>tableseeoriginaldocumentpage46</column></row><table>*綠/度卓應(yīng)蘿J^介#的藥物以活性形式在感染附近的釋放是本發(fā)明脂質(zhì)體藥物制劑作用的一個(gè)重要方面。上述尋靶釋放的潛能是通過(guò)監(jiān)測(cè)下述過(guò)程中的藥物釋放而測(cè)定的，所述過(guò)程為用來(lái)自CF患者的痰液進(jìn)行培養(yǎng)，將其釋放到用銅綠假單胞菌預(yù)先培養(yǎng)過(guò)的大鼠肺部中，以及測(cè)量抵抗銅綠假單胞菌培養(yǎng)物的活性。用本發(fā)明的脂質(zhì)體阿米卡星制劑直接培養(yǎng)銅綠假單胞菌培養(yǎng)物時(shí)的阿米卡星的釋放在前面已經(jīng)討論過(guò)了。為了進(jìn)一步研究該現(xiàn)象，將脂質(zhì)體阿米卡星制劑用痰液制備物進(jìn)行培養(yǎng)，其中所述痰液制備物來(lái)自感染有銅綠假單胞菌的嚢性纖維化患者。將咳出的痰液用牛DNaseI和海藻酸裂解酶在37。C下液化2hr。將脂質(zhì)體氨丁卡制劑或溶解的阿米卡星(1mg/mL的阿米卡星)與液化的痰液或?qū)φ瘴镆?:1的比例混合，并在37。C下輕輕搖動(dòng)。用AbbottTDx分析儀分析一部分樣品的阿米卡星濃度。將完整的脂質(zhì)體用去污劑細(xì)胞溶解于每種樣品的單獨(dú)的等分試樣中，所述去污劑為1%的TritonX-100。取每種樣品的上層清液用于分析。48小時(shí)后，在上述條件下(80-90%)的阿米卡星以時(shí)間依賴的方式從脂質(zhì)組合物中釋放，這表明在CF肺部的感染位點(diǎn)處可能發(fā)生了藥物釋放。比較藥物單體在已經(jīng)用含有銅綠假單胞菌的瓊脂粒侵染過(guò)的老鼠(3.5x104CFU/大鼠)和那些沒(méi)有被侵染的老鼠體內(nèi)的從脂質(zhì)體中的釋放。顆粒侵染三天后，使大鼠每日(無(wú)細(xì)菌的組)或隔日(用所述顆粒侵染的組)地吸入本發(fā)明的脂質(zhì)體阿米卡星制劑(日劑量大約為6mg/kg)14天。在最后一次治療的24小時(shí)后，如上所述地測(cè)量總阿米卡星量和阿米卡星單體量。在接種了細(xì)菌的大鼠中，平均大約50-70%的被檢測(cè)阿米卡星是單體的形式，即從脂質(zhì)體中釋放的阿米卡星。在沒(méi)有接種細(xì)菌的大鼠中，大約20-25%的藥物是單體的形式。這些數(shù)據(jù)強(qiáng)有力地表明阿米卡星單體從從脂質(zhì)體中的釋放可能是由體內(nèi)存在的銅綠假單胞菌介導(dǎo)的。釋放和活性的體外試驗(yàn)是在與肺部藥代動(dòng)力學(xué)試驗(yàn)相似的條件下進(jìn)行的，其中前面的內(nèi)容已經(jīng)表明抗生素單體在幾小時(shí)的時(shí)間坐標(biāo)處得到清除。在無(wú)菌的5mLSlide-A-Lyzer筒中用銅綠假單胞菌PAOl(~108/mL)培養(yǎng)不同藥物濃度的阿米卡星單體或脂質(zhì)體阿米卡星制劑。在這樣的條件下，單體藥物在幾小時(shí)的時(shí)間坐標(biāo)處從筒中滲出。24hrs后，從筒中取出樣品并涂板以測(cè)量CFU。在初步實(shí)驗(yàn)中，阿米卡星單體僅略^l地減少了這些樣品的CFU,而對(duì)以相同阿米卡星濃度(50貼/mL)含有脂質(zhì)組分的阿米卡星來(lái)說(shuō)則觀察到CFU的log值減少了兩個(gè)單位。這些數(shù)據(jù)表明在存在細(xì)菌時(shí)阿米卡星實(shí)際上是以主動(dòng)的形式釋放的，并且所述制劑賦予的緩釋特性使得能夠更有效地使用藥物。本發(fā)明脂質(zhì)體阿米卡星制劑與銅綠假單胞菌或其毒力因子的相互作用導(dǎo)致阿米卡星的釋放可能會(huì)直接地釋放到感染位點(diǎn)處。當(dāng)阿米卡星得到釋放時(shí)其能夠主動(dòng)地抵抗銅綠假單胞菌，并且在細(xì)菌附近的緩慢釋放要優(yōu)于非特異性的分散和吸入藥物單體的快速清除。S.5.^入^if,沐/t參教^/,單^^H/y應(yīng)^#1^教詢本發(fā)明的脂質(zhì)體阿米卡星制劑在一個(gè)實(shí)施方式中是納米尺寸的(200-300nm)脂質(zhì)體-微嚢形式的阿米卡星，所述阿米卡星是被配制用來(lái)治療嚢性纖維化患者中的慢性銅綠假單胞菌感染的。將試驗(yàn)設(shè)計(jì)為在肺中吸入緩釋的阿米卡星。由于已知肺泡巨噬細(xì)胞能夠積極地?cái)z取該尺寸范圍內(nèi)的粒子，所以脂質(zhì)體制劑對(duì)這些細(xì)胞的作用是特別值得關(guān)注的。大鼠肺泡巨噬細(xì)胞的基本和激發(fā)的功能是通過(guò)灌洗獲得的，研究給予和不給予脂質(zhì)體阿米卡星制劑時(shí)的上述功能并與多種對(duì)照物進(jìn)行比較。用PARILCStar霧化器制備脂質(zhì)體阿米卡星制劑、阿米卡星、安慰劑脂質(zhì)體和鹽水的氣霧劑，并且使CDIGS雌性大鼠在鼻部專用吸入室中吸入上述氣霧劑。每天吸入治療4hr并連續(xù)進(jìn)行14天，從而使脂質(zhì)體阿米卡星組的總酯質(zhì)的估算每日肺部劑量為大約12mg/kg,安慰劑脂質(zhì)體組的為11mg/kg。對(duì)剩余的老鼠在第43天時(shí)實(shí)施安樂(lè)死。收集每只老鼠的支氣管肺泡灌洗液(BALF)并儲(chǔ)存在-8(TC下以用于隨后的一氧化氮(代表總硝酸鹽)和腫瘤壞死因子a(TNF-a)分析。通過(guò)離心分離收集來(lái)自BALF的細(xì)胞，計(jì)數(shù)，并在含和不含脂多糖(LPS)的培養(yǎng)基中培養(yǎng)24hr。通過(guò)離心分離來(lái)濃縮這些培養(yǎng)物的上層清液并分析一氧化氮和TNF-a。BAL巨噬細(xì)胞((106)/mL)的吞噬功能是通過(guò)測(cè)量細(xì)菌調(diào)理過(guò)的熒光微球(0.22(109)/mL)而測(cè)定的。14天連續(xù)吸入脂質(zhì)體阿米卡星制劑、空白的脂質(zhì)體、溶解的阿米卡星或鹽水沒(méi)有在大鼠肺部產(chǎn)生顯著的急性或延遲性炎癥響應(yīng)，正如BALF中的一氧化氮(硝酸鹽)和TNF-a水平所證明的那樣，其中所述一氧化氮和TNF-a水平?jīng)]有明顯的不同于對(duì)照樣品，雖然在接受了吸入劑，包括對(duì)照樣品，的所有組中均存在早期達(dá)到較高NO水平的傾向。所有組中的細(xì)胞總病愈率沒(méi)有顯著的差異，在所有接受了吸入劑的組中在早期就傾向于具有較多的多形核白細(xì)胞白血球。盡管事實(shí)上在吸入脂質(zhì)體的組中在第15天時(shí)所述大鼠肺泡巨噬細(xì)胞有增大的表現(xiàn)，但大鼠肺泡巨噬細(xì)胞在暴露于以上試驗(yàn)制品的噴霧劑之后仍具有正常的功能。在研究的第15或43天檢測(cè)培養(yǎng)基中的肺泡巨噬細(xì)胞培養(yǎng)物，所;險(xiǎn)測(cè)到的硝酸鹽和TNF-a濃度與對(duì)照試^r的濃度并無(wú)顯著差異。當(dāng)接受LPS刺激時(shí)，巨噬細(xì)胞反應(yīng)正常，產(chǎn)生了大量濃度的一氧乂>備fon/inn6爪4mei^j、4"tvtt"f《，nn6水4mfl由、；玄jt匕P噬細(xì)胞對(duì)熒光粒的吸收與未處理的對(duì)照物相同，這表明這些巨噬細(xì)胞仍具有正常的噬菌細(xì)胞功能。從細(xì)菌調(diào)理過(guò)的微粒的吞噬作用、炎性介質(zhì)TNF—和NO的產(chǎn)生方面來(lái)看，連續(xù)14天吸入脂質(zhì)體阿米卡星制劑基本上沒(méi)有影響肺泡巨噬細(xì)胞的功能。本發(fā)明的任何組合物的劑量將依賴患者的癥狀、年齡和體重，要治療或預(yù)防疾病的性質(zhì)和嚴(yán)重性，給藥途徑和受試組合物的形式而改變。任何受試制劑都可以以單一劑量或分劑量給予。本發(fā)明組合物的劑量可通過(guò)本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的技術(shù)或本文的教導(dǎo)容易地確定。在某些實(shí)施方式中，受試化合物的劑量通常在約0.01ng到約10g每千克的范圍內(nèi)，特別是在約100ng到約50mg每千克的范圍內(nèi)。對(duì)于本發(fā)明任何具體的組合物都需要確定有效劑量或有效量，以及影響制劑給藥周期的任何可能。這可以通過(guò)本文所描述的常規(guī)實(shí)驗(yàn)使用一組或多組動(dòng)物(優(yōu)選每組至少5只動(dòng)物)或者如果合適的話在人體試驗(yàn)中完成。任何受試化合物和治療或預(yù)防方法的有效性均可以通過(guò)下述方法進(jìn)行評(píng)價(jià)，即給予組合物，測(cè)量一種或多種可應(yīng)用的指數(shù)來(lái)評(píng)價(jià)給藥的作用，以及將這些指數(shù)治療后的數(shù)值與同一指數(shù)治療前的數(shù)值進(jìn)行比較。任何具體受試組合物在給定患者中產(chǎn)生最有效治療的給藥精確時(shí)間和量依賴于受試組合物的活性、藥代動(dòng)力學(xué)和生物利用度，患者的生理?xiàng)l件(包括年齡、性別、疾病類型和階段、一般身體狀況和對(duì)給定藥物劑量和類型的響應(yīng)性)，以及給藥途徑等。本文所給出的指導(dǎo)可以用于優(yōu)化治療，例如確定最佳的給藥時(shí)間和/或給藥量，這需要的只是進(jìn)行由監(jiān)測(cè)個(gè)體和調(diào)整劑量和/或時(shí)間組成的常規(guī)實(shí)驗(yàn)。在個(gè)體接受治療的同時(shí)，可以通過(guò)在治療期間以預(yù)定次數(shù)測(cè)量一個(gè)或多個(gè)相關(guān)指數(shù)來(lái)監(jiān)測(cè)患者的健康狀態(tài)。治療，包括組合物、用量、給藥次數(shù)和制劑，可以根據(jù)上述監(jiān)測(cè)的結(jié)果而被最優(yōu)化?？梢詫?duì)患者進(jìn)行周期性的再評(píng)估以確定改善的程度?？梢曰谶@些再評(píng)估來(lái)調(diào)整受試組合物的給藥量并且還可能對(duì)給藥時(shí)間進(jìn)行調(diào)整。治療可以從低于該化合物最佳劑量的較小的劑量開(kāi)始。此后，可以通過(guò)很小的增量增加劑量直到獲得最佳治療效果。4吏用受試組合物可以減少組合物中所含的各個(gè)單個(gè)試劑(例如抗感染藥物)所需的劑量，因?yàn)椴煌噭┑钠鹦Ш统掷m(xù)時(shí)間是可以互補(bǔ)的。受試組合物的毒性和治療效果可以通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)藥學(xué)方法在細(xì)胞培養(yǎng)或?qū)嶒?yàn)動(dòng)物中測(cè)定，例如測(cè)定LD50和ED50。從細(xì)胞培養(yǎng)分析和動(dòng)物研究中獲得的數(shù)據(jù)可以用于形成在人類中使用的劑量范圍。任何受試組合物的劑量?jī)?yōu)選處在循環(huán)濃度的范圍之內(nèi)，所述范圍包括低或無(wú)毒性的ED50。所述劑量可以在該范圍內(nèi)變化，這依賴于所采用的劑型和所利用的給藥途徑。對(duì)于本發(fā)明的組合物，治療有效量最初可以由細(xì)胞培養(yǎng)試驗(yàn)進(jìn)行估算。/o.浙^y本發(fā)明的脂質(zhì)抗感染制劑可以包含水分散系和脂質(zhì)體。所述制劑可以含有形成脂質(zhì)體的脂質(zhì)賦形劑，和提供適當(dāng)滲透性和pH值的鹽/緩沖液。所述制劑可以包含藥物賦形劑。藥物賦形劑可以是在將任何目標(biāo)組合物或其組分從身體的一個(gè)器官或部位帶入或轉(zhuǎn)移到另一個(gè)器官或部位中所涉及的液體、稀釋劑、溶劑或包嚢材料。每種賦形劑必須都是"可接受的"，也就是與目標(biāo)組合物及其組分相容并且對(duì)患者無(wú)害的。合適的賦形劑包括海藻糖、棉子糖、甘露糖醇、蔗糖、亮氨酸、trileucine和氯化釣。其它合適的賦形劑的實(shí)例包括(1)糖類，例如乳糖和葡萄糖；(2)淀粉類，例如玉米淀粉和馬鈴薯淀粉；(3)纖維素及其衍生物，例如羧曱基纖維素鈉、乙基纖維素和醋酸纖維素；(4)黃芪膠粉；(5)麥芽；(6)明膠；(7)滑石；(8)賦形劑，例如可可脂和栓劑蠟類；(9)油類，例如花生油、棉子油、紅花油、麻油、橄欖油、玉米油和大豆油；(10)乙二醇，例如丙二醇；(11)多元醇類，例如甘油、山梨糖醇和聚乙二醇；(12)酯類，例如油酸乙酯和月桂酸乙酯；(13)瓊脂；(14)緩沖劑，例如氫氧化鎂和氫氧化鋁；(15)海藻酸；(16)無(wú)熱原的水；(17)等滲鹽水；(18)林格氏溶液；(19)乙醇；(20)磷酸鹽緩沖溶液；和(21)其它用于藥物制劑的無(wú)毒相容物質(zhì)。實(shí)施例實(shí)施例1以下詳細(xì)地說(shuō)明了150mL的脂質(zhì)體/復(fù)合阿米卡星的制備方法?？偝跏俭w積=1.5L乙醇含量=23.5%(v/v)脂質(zhì)組合物DPPC/膽固醇(摩爾比為1:1)初始[月旨質(zhì)]二7.6mg/mL初始[石危酸阿米卡星]=57.3mg/mL最終產(chǎn)品的體積=150mLI)復(fù)合和注入將7.47gDPPC和3.93g膽固醇在5(TC的水浴中直接溶解在352.5mL乙醇中。將85.95g硫酸阿米卡星直接溶解在1147.5mL的PBS緩沖液中。接著將溶液用10NNaOH或KOH滴定以使pH達(dá)到大約6.8。加入352.5mL的乙醇/脂質(zhì)或者將其注入到1147.5mL的阿米卡星/緩沖液中以獲得1.5L的初始體積。將乙醇/脂質(zhì)用蠕動(dòng)泵以@-30mUmin(又稱為注入速度)泵送注入到阿米卡星/緩沖液中，所述阿米卡星/緩沖液是在室溫下在攪拌板上的反應(yīng)容器中以150RPM的速度快速攪拌著的。將產(chǎn)品在室溫下攪拌20-30分鐘。II)透濾或"洗滌"步驟將混合容器鉤在蠕動(dòng)泵和透濾筒上。透濾筒是截留分子量為500,000道爾頓的凹膜纖維。在室溫下將產(chǎn)品從反應(yīng)容器中抽出，接著通過(guò)透濾筒倒進(jìn)混合容器中。在整個(gè)彈藥筒內(nèi)產(chǎn)生了大約7psi的反壓力。所述反壓力迫使阿米卡星單體和乙醇通過(guò)中空纖維膜，而脂質(zhì)體阿米卡星(產(chǎn)品)則留在后面。在室溫下洗滌產(chǎn)品8次。向反應(yīng)容器中加入(通過(guò)另一個(gè)蠕動(dòng)泵)新鮮的PBS緩沖液以補(bǔ)償滲透除去的部分并且保持穩(wěn)定產(chǎn)物的體積。將產(chǎn)品濃縮。實(shí)施例2阿米卡星的高脂質(zhì)體包埋。根據(jù)以下方法以多種脂質(zhì)和抗感染藥物濃度制備四個(gè)脂質(zhì)抗感染藥物制劑樣品。樣品#1.將1.72kg硫酸阿米卡星溶解在23升的鹽水溶液(0.9。/。NaCl)中并通過(guò)加入所需量的NaOH將pH調(diào)節(jié)到6.5。將脂質(zhì)_98.2gDPPC和51.8g膽固醇溶解在7升的乙醇中。在勻速攪拌下以600mL/min的流量將脂質(zhì)溶液注入到阿米卡星溶液中從而形成脂質(zhì)體。接著將所產(chǎn)生的懸浮液用孔徑為500kD的AmershamHollowFiber筒進(jìn)行透濾從而得到洗滌，以除去乙醇和未包埋的阿米卡星。對(duì)懸浮液進(jìn)行濃縮使其最終體積為3.5L。樣品#2.方法與樣品#1的類似，只是所有材料的量均按比例縮小100倍。將17.2g石危酸阿米卡星溶解在230mL的鹽水溶液(0.9%NaCl)中并通過(guò)加入所需量的NaOH將pH調(diào)節(jié)到6.6。將脂質(zhì)一0.982gDPPC和0.518g膽固醇溶解在70mL的乙醇中。在勻速攪拌下以300mL/mm的流量將脂質(zhì)溶液注入到阿米卡星溶液中從而形成脂質(zhì)體。接著將所產(chǎn)生的懸浮液用AmershamHollowFiber筒進(jìn)行透濾從而得到洗滌，以除去乙醇和未包埋的阿米卡星。濃縮懸浮液使其最終體積為35m樣品#3.通過(guò)被稱為SPLV的方法來(lái)制備脂質(zhì)體。將1.4g硫酸阿米卡星溶解在20mL鹽水溶液(0.9%NaCl)中使pH為3.3。將脂質(zhì)體，即0.666gDPPC和0.333g膽固醇溶解在40mL二氯曱烷中。在一個(gè)500mL的圓底燒瓶中將阿米卡星和脂質(zhì)溶液混合在一起并簡(jiǎn)單地進(jìn)行超聲處理以形成乳化液。接著將燒瓶連接到BUCHI旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)系統(tǒng)上從而在真空(-5英寸Hg)、501:和勻速旋轉(zhuǎn)下除去二氯甲烷直至阿米卡星-脂質(zhì)混合物形成凝膠。當(dāng)凝膠最終破裂時(shí)，將真空逐漸增加到-20英寸Hg并繼續(xù)干燥30多分鐘。所形成的脂質(zhì)體懸浮液的最終體積是22mL。樣品#4.方法與樣品#3的類似。將1.3g硫酸阿米卡星溶解在20mL鹽水溶液中并通過(guò)加入NaOH將pH調(diào)節(jié)到6.5。將脂質(zhì)體，即0.583gDPPC和0.291g膽固醇溶解在35mL二氯甲烷中。跳過(guò)超聲處理步驟。在40。C下在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)系統(tǒng)上進(jìn)行2hr的除溶劑步驟。最終體積為20mL。實(shí)施例3慶大霉素的高脂質(zhì)體包埋。樣品#5.將20.0g硫酸慶大霉素溶解在230mL鹽水溶液(0.9%NaCl)中并通過(guò)加入所需量的硫酸將pH調(diào)節(jié)到6.5。將脂質(zhì)一0.982gDPPC和0.518g膽固醇溶解在70mL乙醇中。在勻速攪拌下以500mL/min的流量將脂質(zhì)溶液注入到慶大霉素溶液中來(lái)形成脂質(zhì)體。用AmershamHollowFiber筒通過(guò)滲濾作用除去未包埋的慶大霉素和乙醇。濃縮懸浮'液至最鄉(xiāng)冬體積為35mL。樣品#6.方法與樣品#5的類似，除了將17.0g硫酸慶大霉素溶解在230mLNa2SO4的100mM溶液中并通過(guò)加入所需量的H2S04將pH調(diào)節(jié)到6.5。將脂質(zhì)一0.982gDPPC和0.518g膽固醇溶解在75mL乙醇中。實(shí)施例4其它鹽形式的阿米卡星的包埋。樣品#7.方法與實(shí)施例2中的樣品#2類似。將10.7g阿米卡星堿和4.2g檸檬酸溶解在230mL鹽水溶液(0.9%NaCl)中。所得的阿米卡星-檸檬酸溶液的pH為6.2。將脂質(zhì)一0.982gDPPC和0.518g膽固醇溶解在70mL乙醇中。在勻速攪拌下以500mL/min的流量將脂質(zhì)溶液注入到阿米卡星溶液中以形成脂質(zhì)體。用AmershamHollowFiber筒進(jìn)行透濾以除去未包埋的阿米卡星和乙醇。濃縮懸浮液至其最終體積為~35mL。實(shí)際的脂質(zhì)/藥物比與樣品#2的類似并且也低于預(yù)期值(藥物包埋比預(yù)期的高)。認(rèn)為事實(shí)上是，樣品#7中的包埋體積僅為1.5(對(duì)比于樣品#2的2.5),預(yù)期/實(shí)際L/D比高達(dá)5.2。因此，脂質(zhì)體檸檬酸阿米卡鹽，與硫酸阿米卡星一樣，也能夠用高包埋配制。表13.樣品5-7的參數(shù)總結(jié)。<table>tableseeoriginaldocumentpage54</column></row><table>實(shí)施例5大鼠中來(lái)自所吸入的脂質(zhì)體阿米卡星制劑的阿米卡星的生物利用度。在被大鼠吸入后測(cè)量來(lái)自脂質(zhì)體的阿米卡星的釋放速度并與吸入的溶解阿米卡星的釋放速度進(jìn)行比較。將測(cè)試物用附著在鼻部專用吸入室上的PariLCStar霧化器霧化。使CD⑧IGS大鼠連續(xù)14天地接受阿米卡星，其中肺部沉積劑量的推定量對(duì)于脂質(zhì)體制劑形式的阿米卡星來(lái)說(shuō)為6mg/kg,對(duì)于溶解的阿米卡星為5mg/kg,所述劑量可以作為單次劑量或日劑量。用Polytron儀將肺或其它組織勻質(zhì)化。從肺部清除阿米卡星的動(dòng)力學(xué)是通過(guò)在單次劑量治療后或在多次劑量給藥后的第1天和第28天時(shí)在變化的時(shí)間點(diǎn)分析肺組織勻漿而檢驗(yàn)的。阿米卡星的水平是通過(guò)在存在或不存在1%TritonX-100時(shí)的Abbott丁0乂@分析儀的免疫熒光偏振測(cè)量的，所述TritonX-100能夠使阿米卡星從脂質(zhì)體中釋放出來(lái)。在勻質(zhì)化前，用脂質(zhì)體刺穿整個(gè)肺樣品以在上述條件下檢測(cè)阿米卡星的釋放。在含或不含1%TritonX-100的情況下測(cè)量單體和總阿米卡星的量以評(píng)價(jià)藥物的滲出量。用Polytron勻化器在不存在上述去污劑時(shí)撒對(duì)組織進(jìn)行勻質(zhì)化的結(jié)果是，刺穿整個(gè)肺樣品的脂質(zhì)體阿米卡星顯示不存在明顯的阿米卡星釋放。然而，1%TritonX-100的加入能夠使所有預(yù)期藥物均被回收。因此可以對(duì)阿米卡星的總水平(具有去污劑)與肺組織中的可利用單體水平進(jìn)行直接比較。在以6mg/kg的單次劑量施用脂質(zhì)體阿米卡星后立刻觀察到了高的阿米卡星總濃度(大約500-600jag/g肺組織)，該濃度在7天時(shí)間后緩慢減少大到約50%。來(lái)自這些脂質(zhì)體的阿米卡星單體的瞬時(shí)釋放曲線顯示藥物單體具有高的初始濃度，這可能是由于噴霧作用導(dǎo)致的阿米卡星釋放。該階段之后是，在約第24小時(shí)處達(dá)到最低點(diǎn)，接下來(lái)增高，在給藥后96小時(shí)時(shí)達(dá)到279貼/g的最大值。在7天的實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)，留在肺中的大部分(大約50-70%)藥物都是單體形式的。通過(guò)吸入給予的可溶解藥物的一小部分似乎也在肺中殘留了很長(zhǎng)一段時(shí)間。然而，大多數(shù)以溶解形式給予的阿米卡星都在幾小時(shí)內(nèi)就消失了，脂質(zhì)體阿米卡星動(dòng)物7天后的顯著阿米卡星單體AUC值比接受可溶解阿米卡星的動(dòng)物的高至少2倍。這一特性的某些方面能夠用適當(dāng)?shù)那宄俾食?shù)和藥物從脂質(zhì)體中的緩釋速率常數(shù)來(lái)定量地模型化。14天的連續(xù)給藥后(最后劑量后24小時(shí))，在接受脂質(zhì)體阿米卡星的大鼠肺部中，有超過(guò)20%的總阿米卡星以藥物單體的形式存在(大約650^g/g)。該總藥物單體水平甚至高于吸入了可溶解阿米卡星大鼠中的量(大約500|ig/g)。在健康動(dòng)物的肺部中，阿米卡星單體是從脂質(zhì)體阿米卡星制劑的脂質(zhì)體中以天數(shù)為時(shí)間坐標(biāo)緩慢地釋放的。所釋放的藥物單體在肺中具有相對(duì)較長(zhǎng)的停留時(shí)間，正如所看到的，其使藥物單體大量地庫(kù)存于在肺部。實(shí)施例6管線內(nèi)注入法管線內(nèi)注入法的關(guān)鍵是將脂質(zhì)溶液物料流與抗感染藥物溶液物料流通過(guò)例如Y形連接器來(lái)"管線內(nèi)"混合，所述Y形連接器連接在一段管子上，該管子被定義為混合管，在該管中進(jìn)行進(jìn)一步的混合。從這一點(diǎn)來(lái)看，該新方法不同于"傳統(tǒng)的"乙醇注入法，后者是將脂質(zhì)溶液作為物料流注入到大量的阿米卡星溶液中。阿米卡星和脂質(zhì)溶液制品將12.0g^L酸阿米卡星溶解在200mL水中并通過(guò)加入需要量的25%的NaOH溶液將pH調(diào)節(jié)到6.5。將脂質(zhì)，即1.480gDPPC和0.520g的膽固醇溶解在60mL乙醇和10mL水的混合物中。這樣的量在分別以300/500mL/min的脂質(zhì)/阿米卡星流量注入后能夠產(chǎn)生300mL的批料。如果需要較大的規(guī)?；虿煌牧髁?，可以按比例調(diào)整所述體積。根據(jù)以上方法制備的阿米卡星溶液能夠產(chǎn)生大約40mg/mL的阿米卡星(每堿基)溶液。所存在的脂質(zhì)溶液是DPPC/膽固醇(摩爾比為60/40)，其濃度為大約20mg總脂質(zhì)/mL溶液(90%的乙醇)。為了更快的溶解，將脂質(zhì)加熱到40。C。300mL批量所需的精確用量為阿米卡星150mL,脂質(zhì)90mL，以及60mL額外的鹽水(或水)，在注入后或在注入過(guò)程中加入所述鹽水(或水)以調(diào)節(jié)最終的乙醇濃度。制造方法。圖8中顯示了注入系統(tǒng)的一個(gè)實(shí)施方式。使用Y形連接器(ID3.2mm,OD6.4mm)將脂質(zhì)和阿米卡星溶液以300/500mL/min(即用1/1.67的體積比代替?zhèn)鹘y(tǒng)方法中1/3.35的體積比)的流量進(jìn)行在管線內(nèi)混合。使用MasterFlex管L/S25(ID4.8mm)來(lái)輸送脂質(zhì)溶液，使用管L/S17(ID6.4mm)來(lái)輸送阿米卡星溶液。為了獲得同步的流量，用一個(gè)MasterFlex來(lái)驅(qū)動(dòng)兩個(gè)泵頭。根據(jù)管的橫截面積，理論流量比應(yīng)該是4.82/6.42=0.562=1/1.78。當(dāng)將用于阿米卡星管L/S17的泵動(dòng)力設(shè)置在500mL/min時(shí)，測(cè)量到的流量為~300/500=1/1.67。由于脂質(zhì)溶液含有90%的乙醇，所以在管線內(nèi)混合物含有~340/0的乙醇。為了防止阿米卡星沉淀，可以在注入后或注入期間以100-200mL/min的流量加入NaCl溶液(，"殳此時(shí)已經(jīng)形成了脂質(zhì)體)。因此，最終混合物將具有~27%的乙醇，預(yù)計(jì)這些乙醇能夠溶解所有的阿米卡星單體。800-1000mL/min的總液體注入流量與當(dāng)使用兩個(gè)透濾筒時(shí)的滲透流量相當(dāng)。這使得同時(shí)進(jìn)行注入和透濾濃縮成為可能。使用Amershamhollowfiber筒UFP-500-C-3MA(隔膜面積140cm,纖維ID0.5mm)通過(guò)透濾來(lái)洗滌所產(chǎn)生的脂質(zhì)體懸浮液以除去阿米卡星單體。在第一個(gè)步驟中，懸浮液被濃縮到接近原始體積的一半(150mL)。然后，在透濾洗滌期間，將懸浮液進(jìn)行再循環(huán)，并以-6mL/min的流量向混合物中投入新鮮的鹽水溶液以與滲透流量相匹配并因此保持恒容。繼續(xù)進(jìn)行透濾直到分配了4倍懸浮液體積的投入鹽水溶液(即4*150mL=600mL)。該透濾/洗滌方法^^皮稱為4次"洗滌"。最后，濃縮懸浮液(進(jìn)行不投入鹽水的透濾)以獲得具有所需阿米卡星和脂質(zhì)濃度的最終產(chǎn)品。透濾步驟期間的再循環(huán)流量為~350mL/min,在最后的濃縮步驟中逐漸將該流量降低為~150mL/min以使入口壓力保持低于10PSI。參考文獻(xiàn)1.Veldhuizen,R.,Nag,K.,Orgeig,S.和Possmayer，F(xiàn).,TheRoleofLipidsinPulmonarySurfactant,Biochim.Biophys.Acta1408:90-108(1998)。2.Hagwood,S.,Derrick,M.和Poulain，F(xiàn).,StructureandPropertiesofSurfactantProteinB,Biochim.Biophys.Acta1408:150-160(1998)。3.Johansson,J.，StructureandPropertiesofSurfactantProteinC,Biochim.Biophys.Acta1408:161-172(1998)。4.Ikegami,M.和Jobe,A.H.，SurfactantProteinMetabolisminvivo,Biochim.Biophys.Acta1408:218-225(1998)。5.Couveur,P.,Fattel，E.和Andremont,A.,LiposomesandNanoparticlesintheTreatmentofIntracellularBacterialInfections,Pharm.Res.8:1079-1085(1991)。6.Gonzales-Rothi,RJ.,Casace,J.,Straub,L.,禾口Schreier,H.,LiposomesandPulmonaryAlveolarMacrophages:FunctionalandMorphologicInteractions,Exp.LungRes.17:685-705(1991)。7.Swenson，C.E.,Pilkiewicz,F.G.,和Cynamon,M.H.，LiposomalAminoglycosidesandTLC-65AidsPatientCare290-296(1991,10月)。8.Costerton,J.W.,Stewart,P.S.,和Greenberg,E.P.，BacterialBiofilms:ACommonCauseofPersistentInfections,Science284:1318-1322(1999)。9.Cash,H.A.，Woods,D.E.,McCullough,W.G.,Johanson,J.R.,和Bass，J.A.,ARatModelofChronicRespiratoryInfectionwithPseudomonasaeruginosa,AmericanReviewofRespiratoryDisease119:453-459(1979)。10.Cantin，A.M和Woods,D.E.AerosolizedProlastinSuppressesBacterialProliferationinaModelofChronic尸化wd謂o?。縜eruginosaLungInfection,Am.J.Respir.Crit.CareMed.160:1130-1135(1999)。11.Ramsey,B.W.,Dorkin,H.L.,Eisenberg,J.D.,Gibson,R.L.,Harwood,LR.，Kravitz,R.M.,EfficacyofAerosolizedTobramycininPatientswithcysticFibrosis.NewEnglandJ.ofMed.328:1740-1746(1993)。12.Mendelrnan,P.M.,Smith,A.L.，Levy,J.，Weber,A.，Ramsey,B.，Davis,R.L.，AminoglycosidePenetration,InactivationandEfficacyinCysticFibrosisSputum，AmericanReviewofRespiratoryDisease132:761-765(1985)。13.Price,K.E.,DeFuria，M.D.，Pursiano,T.A.Amikacin,anaminoglycosidewithmarkedactivityagainstantibiotic-resistantclinicalisolates.JInfectDis134:S249261(1976)。14.Damaso,D.,Moreno-Lopez,M.,Martinez-Beltran,J.,Garcia-Iglesias,M.C.SusceptibilityofcurrentclinicalisolatesofPseudomonasaeruginosaandentericgram-negativebacillitoAmikacinandotheraminoglycosideantibiotics.JInfectDis134:S394曙90(1976)。15.Pile,J.C.,Malone,D.,Eitzen,E.M.,Friedlander,A.M.,Anthraxasapotentialbiologicalwarfareagent.Arch.Intern.Med.158:429-434(1998)。16.Gleiser,C.A.,Berdjis,C.C.,Hartman,H.A.,&Glouchenour,W.S.,PathologyofexperimentalrespiratoryanthraxinMacacamulatta.Brit.J.Exp.Path.,44:416-426(1968)。參考文獻(xiàn)的引入在此將本說(shuō)明書(shū)中引用的出版物和參考文獻(xiàn)的全部?jī)?nèi)容完整地引入作為參考，其中所述出版物和參考文獻(xiàn)包括但不限于專利和專利申請(qǐng)，引入方式就象每篇單獨(dú)的出版物或參考文獻(xiàn)都被具體且分別地指出在此引入作為參考一樣，引入程度就像上述出版物或參考文獻(xiàn)被完全公開(kāi)了一樣。將本申請(qǐng)要求享有優(yōu)選權(quán)的任何專利申請(qǐng)也在此引入作為參考，引入方式與上述的引入出版物和參考文獻(xiàn)的方式相同。等價(jià)方案雖然已經(jīng)著重于優(yōu)選實(shí)施方案對(duì)本發(fā)明進(jìn)行了描述，但是所使用的優(yōu)選裝置和方法可以被改變，還可以試圖將本發(fā)明用與本文詳述的實(shí)施方式不同的方式實(shí)施，這些都是本領(lǐng)域普通技術(shù)人員顯而易見(jiàn)的。因此，本發(fā)明包括所有包括在本發(fā)明精神和范圍之內(nèi)的所有改進(jìn)，其中本發(fā)明的精神和范圍是如下述權(quán)利要求所定義的。權(quán)利要求1.一種包含脂質(zhì)制劑和抗感染藥物的脂質(zhì)抗感染藥物制劑，其中所述脂質(zhì)制劑基本上不含陰離子脂質(zhì)，并且其中脂質(zhì)與抗感染藥物的重量比為4∶1到1∶1，3∶1到1∶1，2∶1到1∶1，或?yàn)?∶1。2.如權(quán)利要求1所述的脂質(zhì)抗感染藥物制劑，其中所述脂質(zhì)制劑是脂質(zhì)體。3.如權(quán)利要求2所述的脂質(zhì)抗感染藥物制劑，其中所述脂質(zhì)體的平均直徑為0.1)im到1.0|um,0.2pm到0.5|um,0.2)tim到0.4)iim或0,2jim到0.3)Lim。4.如權(quán)利要求1所述的脂質(zhì)抗感染藥物制劑，其中所述抗感染藥物選自氨基糖苷、四環(huán)素、磺胺、對(duì)氨基苯曱酸、二氨基嘧啶、喹諾酮、p-內(nèi)酰胺、P-內(nèi)酰胺和p-內(nèi)酰胺酶抑制劑、氯霉素、大環(huán)內(nèi)酯、青霉素、頭孢霉素、皮質(zhì)類甾醇、前列腺素、林可霉素、氯潔霉素、奇霉素、多粘菌素B、粘菌素、萬(wàn)古霉素、桿菌肽素、異煙肼、利福平、乙胺丁醇、乙硫異煙胺、氨基水楊酸、環(huán)絲氨酸、巻曲霉素、砜、氯苯吩嗪、瑟利德米、多烯抗真菌劑、氟胞嘧啶、咪唑、三唑、灰黃霉素、特康唑、布康唑、環(huán)己吡酮乙醇胺、環(huán)吡酮胺、面丙炔氧苯、發(fā)癬退、萘替芬、特比萘芬或它們的組合。5.如權(quán)利要求1所述的脂質(zhì)抗感染藥物制劑，其中所述抗感染藥物是氨基糖苷。6.如權(quán)利要求1所述的脂質(zhì)抗感染藥物制劑，其中所述抗感染藥物是阿米卡星。7.如權(quán)利要求1所述的脂質(zhì)抗感染藥物制劑，其中所述抗感染藥物是妥布霉素。8.如權(quán)利要求1所述的脂質(zhì)抗感染藥物制劑物是慶大霉素。9.如權(quán)利要求1所述的脂質(zhì)抗感染藥物制劑包含中性脂質(zhì)。10.如權(quán)利要求1所述的脂質(zhì)抗感染藥物制劑，其中組成脂質(zhì)制劑的脂質(zhì)全部是中性脂質(zhì)。11.如權(quán)利要求1所述的脂質(zhì)抗感染藥物制劑，其不含陰離子脂質(zhì)。其中所述抗感染藥其中所述脂質(zhì)制劑12.如權(quán)利要求1所述的脂質(zhì)抗感染藥物制劑，其中所述脂質(zhì)制劑包含磷脂。13.如權(quán)利要求1所述的脂質(zhì)抗感染藥物制劑，其中所述脂質(zhì)制劑包含類固醇。14.如權(quán)利要求1所述的脂質(zhì)抗感染藥物制劑，其中所述脂質(zhì)制劑包含甾醇。15.如權(quán)利要求1所述的脂質(zhì)抗感染藥物制劑，其中所述脂質(zhì)制劑包含磷脂和類固醇。16.如權(quán)利要求1所述的脂質(zhì)抗感染藥物制劑，其中所述脂質(zhì)制劑包含磷脂和甾醇。17.如權(quán)利要求1所述的脂質(zhì)抗感染藥物制劑，其中所述脂質(zhì)制劑包含二棕櫚酰磷脂酰膽堿(DPPC)和膽固醇。18.如權(quán)利要求1所述的脂質(zhì)抗感染藥物制劑，其中所述脂質(zhì)制劑是平均直徑為0.1ium到1.0|um,0.2|tim到0.5|iim,0.2|iim到0.4|tim或0.2pm到0.3的脂質(zhì)體；所述抗感染藥物是阿米卡星；并且所述脂質(zhì)制劑包含磷脂和類固醇。19.如權(quán)利要求1所述的脂質(zhì)抗感染藥物制劑，其中所述脂質(zhì)制劑是平均直徑為0.1iiim到1.0|nm,0.2|iim到0.5jam,0.2到0.4fxm或0.2pm到0.3pm的脂質(zhì)體；所述抗感染藥物是阿米卡星；并且所述脂質(zhì)制劑包含有磷脂和甾醇。20.如權(quán)利要求1所述的脂質(zhì)抗感染藥物制劑，其中所述脂質(zhì)制劑是平均直徑為0.1到1.0|im,0.2|iim到0.5pm，0.2jLim到0.4|tim或0.2jam到0.3的脂質(zhì)體；所述抗感染藥物是阿米卡星；并且所述脂質(zhì)制劑包含DPPC和膽固醇。21.如權(quán)利要求1所述的脂質(zhì)抗感染藥物制劑的制備方法，其包括在低于至少一種脂質(zhì)的相變溫度的溫度下向抗感染藥物的水或醇溶液或混合物中注入脂質(zhì)-醇溶液或混合物，其中所述抗感染藥物的水或醇溶液或混合物的注入是從上方進(jìn)行的。22.如權(quán)利要求21所述的方法，其中所述脂質(zhì)-醇溶液或混合物的濃度為10到30mg/mL。23.如權(quán)利要求21所述的方法，其中所述抗感染藥物的水或醇溶液或混合物的濃度為20到70mg/mL。24.如權(quán)利要求21所述的方法，其中所述脂質(zhì)-醇溶液或混合物的濃度為10到30mg/mL,所述抗感染藥物的水或醇溶液或混合物的濃度為20到70mg/mL。25.如權(quán)利要求21所述的方法，其中所述抗感染藥物選自氨基糖普、四環(huán)素、磺胺、對(duì)氨基苯曱酸、二氨基嘧啶、喹諾酮、p-內(nèi)酰胺、(3-內(nèi)酰胺和(3-內(nèi)酰胺酶抑制劑、氯霉素、大環(huán)內(nèi)酯、青霉素、頭孢霉素、皮質(zhì)類甾醇、前列腺素、林可霉素、氯潔霉素、奇霉素、多粘菌素B、粘菌素、萬(wàn)古霉素、桿菌肽素、異煙肼、利福平、乙胺丁醇、乙硫異煙胺、氨基水楊酸、環(huán)絲氨酸、巻曲霉素、砜、氯苯吩嗪、瑟利德米、多烯抗真菌劑、氟胞嘧啶、咪唑、三唑、灰黃霉素、特康唑、布康唑、環(huán)己吡酮乙醇胺、環(huán)吡酮胺、卣丙炔氧苯、發(fā)癬退、萘替芬、特比萘芬或它們的組合。26.如權(quán)利要求21所述的方法，其中所述抗感染藥物是氨基糖苷。27.如權(quán)利要求21所述的方法，其中所述抗感染藥物是阿米卡星。28.如權(quán)利要求21所述的方法，其中所述抗感染藥物是妥布霉素。29.如權(quán)利要求21所述的方法，其中所述抗感染藥物是慶大霉素。30.如權(quán)利要求21所述的方法，其中所述脂質(zhì)-醇溶液或混合物包含磷脂。31.如權(quán)利要求21所述的方法，其中所述脂質(zhì)-醇溶液或混合物包含甾醇。32.如權(quán)利要求21所述的方法，其中所述脂質(zhì)-醇溶液或混合物包含DPPC和膽固醇。33.—種包含脂質(zhì)制劑和抗感染藥物的脂質(zhì)抗感染藥物制劑，其中脂質(zhì)與抗感染藥物的比為1:1或小于1:1。34.如權(quán)利要求33所述的脂質(zhì)抗感染藥物制劑，其中所述脂質(zhì)與抗感染藥物的比小于0.75:1。35.如權(quán)利要求33所述的脂質(zhì)抗感染藥物制劑，其中所述脂質(zhì)與抗感染藥物的比小于0.5:1。36.如權(quán)利要求33所述的脂質(zhì)抗感染藥物制劑，其中所述抗感染藥物是氨基糖苷。37.如權(quán)利要求33所述的脂質(zhì)抗感染藥物制劑，其中所述抗感染藥物是選自阿米卡星、慶大霉素或妥布霉素的氨基糖苷。38.如權(quán)利要求33所述的脂質(zhì)抗感染藥物制劑，其中所述抗感染藥物是阿米卡星。39.如權(quán)利要求33所述的脂質(zhì)抗感染藥物制劑，其中所述抗感染藥物是慶大霉素。40.如權(quán)利要求33所述的脂質(zhì)抗感染藥物制劑，其中所述抗感染藥物是妥布霉素。41.如權(quán)利要求33所述的脂質(zhì)抗感染藥物制劑，其中所述脂質(zhì)制劑是脂質(zhì)體。42.如權(quán)利要求33所述的脂質(zhì)抗感染藥物制劑，其中所述脂質(zhì)制劑包含磷脂。43.如權(quán)利要求33所述的脂質(zhì)抗感染藥物制劑，其中所述脂質(zhì)制劑包含類固醇。44.如權(quán)利要求33所述的脂質(zhì)抗感染藥物制劑，其中所述脂質(zhì)制劑包含甾醇。45.如權(quán)利要求33所述的脂質(zhì)抗感染藥物制劑，其中所述脂質(zhì)制劑包含二棕櫚酰磷脂酰膽堿(DPPC)。46.如權(quán)利要求33所述的脂質(zhì)抗感染藥物制劑，其中所述脂質(zhì)制劑包含膽固醇。47.如權(quán)利要求33所述的脂質(zhì)抗感染藥物制劑，其中所述脂質(zhì)制劑包含磷脂和類固醇。48.如權(quán)利要求33所述的脂質(zhì)抗感染藥物制劑，其中所述脂質(zhì)制劑包含磷脂和甾醇。49.如權(quán)利要求33所述的脂質(zhì)抗感染藥物制劑，其中所述脂質(zhì)制劑包含DPPC和膽固醇。50.如權(quán)利要求33所述的脂質(zhì)抗感染藥物制劑，其中所述脂質(zhì)制劑是脂質(zhì)體，所述抗感染藥物是阿米卡星。51.如權(quán)利要求33所述的脂質(zhì)抗感染藥物制劑，其中所述脂質(zhì)制劑是脂質(zhì)體，所述抗感染藥物是阿米卡星，并且所述脂質(zhì)制劑包含磷脂和甾醇。52.如權(quán)利要求33所述的脂質(zhì)抗感染藥物制劑，其中所述脂質(zhì)制劑是脂質(zhì)體，所述抗感染藥物是阿米卡星，并且所述脂質(zhì)制劑包含DPPC和膽固醇。53.—種包含脂質(zhì)制劑和抗感染藥物的脂質(zhì)抗感染藥物制劑的制備方法，其包括將脂質(zhì)溶液或混合物物料流與抗感染藥物溶液或混合物物料流混合，其中兩種物料流是在管線內(nèi)混合的。54.如權(quán)利要求53所述的方法，其中兩種物料流在進(jìn)行在管線內(nèi)混合之前要先進(jìn)入Y形連接器。55.如權(quán)利要求53所述的方法，其中所述溶液或混合物是含水或醇的。56.如權(quán)利要求53所述的方法，其中所述脂質(zhì)制劑是脂質(zhì)體。57.如權(quán)利要求53所述的方法，其中所述抗感染藥物是氨基糖普。58.如權(quán)利要求53所述的方法，其中所述抗感染藥物是選自阿米卡星、慶大霉素或妥布霉素的氨基糖苷。59.如權(quán)利要求53所述的方法，其中所述抗感染藥物是阿米卡星。60.如權(quán)利要求53所述的方法，其中所述抗感染藥物是慶大霉素。61.如權(quán)利要求53所述的方法，其中所述抗感染藥物是妥布霉素。62.如權(quán)利要求53所述的方法，其中脂質(zhì)溶液或混合物物料流與抗感染藥物溶液或混合物物料流是以700到900mL/min的總流量混合的。63.如權(quán)利要求53所述的方法，其中脂質(zhì)溶液或混合物物料流與抗感染藥物溶液或混合物料流是以800mL/min的總流量混合的。64.如權(quán)利要求53所述的方法，其中脂質(zhì)溶液或混合物物料流是以200到400mL/min的流量加入的。65.如權(quán)利要求53所述的方法，其中脂質(zhì)溶液或混合物物料流是以300mL/min的流量加入的。66.如權(quán)利要求53所述的方法，其中抗感染藥物溶液或混合物物料流是以400到600mL/min的流量加入的。67.如權(quán)利要求53所述的方法，其中抗感染藥物溶液或混合物物料流是以500mL/min的流量加入的。68.如權(quán)利要求53所述的方法，其中脂質(zhì)溶液或混合物料流是以300mL/min的流量加入的，抗感染藥物溶液或混合物物料流是以500mL/min的流量力口入的。69.如權(quán)利要求53所述的方法，其中混合物料流的溫度是30-40。C。70.如權(quán)利要求53所述的方法，其中脂質(zhì)溶液或混合物的溫度是為3(TC,抗感染藥物溶液或混合物的溫度為3(TC。71.如權(quán)利要求53所述的方法，其中脂質(zhì)溶液或混合物的溫度為50°C,抗感染藥物溶液或混合物的溫度是室溫。72.如權(quán)利要求53所述的方法，其進(jìn)一步包括在混合后將混合物料流用水稀釋至少20秒的步驟。73.如權(quán)利要求53所述的方法，其中抗感染藥物溶液或混合物的濃度是30到50mg/mL。74.如權(quán)利要求53所述的方法，其中抗感染藥物溶液或混合物的濃度是40到50mg/mL。75.如權(quán)利要求53所述的方法，其中脂質(zhì)溶液或混合物料流是以300mL/min的流量加入的，抗感染藥物溶液或混合物物料流是以500mL/min的流量加入的；混合物料流的溫度是30-40°C;混合后將混合物料流用水稀釋至少20秒；并且抗感染藥物溶液或混合物的濃度是40到50mg/mL。76.如權(quán)利要求53所述的方法，其中所述脂質(zhì)包含磷脂。77.如權(quán)利要求53所述的方法，其中所述脂質(zhì)包含類固醇。78.如權(quán)利要求53所述的方法，其中所述脂質(zhì)包含甾醇。79.如權(quán)利要求53所述的方法，其中所述脂質(zhì)包含DPPC。80.如權(quán)利要求53所述的方法，其中所述脂質(zhì)包含膽固醇。81.如權(quán)利要求53所述的方法，其中所述脂質(zhì)包含磷脂和甾醇。82.如權(quán)利要求53所述的方法，其中所述脂質(zhì)包含DPPC和膽固醇。83.如權(quán)利要求53所述的方法，其中所述脂質(zhì)制劑是脂質(zhì)體，所述抗感染藥物是阿米卡星。84.如權(quán)利要求53所述的方法，其中所述脂質(zhì)制劑是脂質(zhì)體，所述抗感染藥物是阿米卡星，并且所述脂質(zhì)包含磷脂和甾醇。85.如權(quán)利要求53所述的方法，其中所述脂質(zhì)制劑是脂質(zhì)體，所述抗感染藥物是阿米卡星，并且所述脂質(zhì)包含DPPC和膽固醇。86.如權(quán)利要求53所述的方法，其中脂質(zhì)與抗感染藥物的比為1:1或小于1:1。87.如權(quán)利要求53所述的方法，其中脂質(zhì)與抗感染藥物的比為0.75:1或小于0.75:1。88.如權(quán)利要求53所述的方法，其中脂質(zhì)與抗感染藥物的比為0.5:1或小于0.5:1。89.如權(quán)利要求53所述的方法，其中所述脂質(zhì)制劑是脂質(zhì)體，所述抗感染藥物是阿米卡星，所述脂質(zhì)包含DPPC和膽固醇，并且脂質(zhì)與抗感染藥物的比為1:1或小于1:1。90.—種用于肺部感染患者的治療方法，其包括向患者給藥以治療有效量的權(quán)利要求1或33所述的脂質(zhì)抗感染藥物制劑。91.如權(quán)利要求90所述的方法，其中所述肺部感染是假單胞菌，銅綠假單胞菌(尸^n^,脂m)、少動(dòng)假單胞菌(尸/^wc,mo^7")、惡臭假單胞菌(尸pw〃c/a)、熒光假單胞菌(7VZwor^ce朋)和食酸假單胞菌(尸ac/Jovorara)),葡萄球菌，耐甲氧西林金黃色葡萄球菌(MRSA)，MJ求菌,月申炎卡連5求菌(iSVrejf^oc'occz^/wewwom'ae)、大腸斥干菌(￡^c/^n'c/zz.aco//)、克氏桿菌(《/eZw'e〃(2)、腸桿菌(￡>7fera6a"er)、沙雷菌(5"erra"'")、嗜血斥干菌(//"ewo//2,7z^)、耶爾才糴氏菌pesos(yeAS7'w'a)類鼻疽伯克霍爾德氏菌(，ew^顧〃e/)、洋蔥伯克霍爾德氏菌(S.ce/^c/a)、椰毒伯克霍爾德氏菌(S.g/a&o//)、吩，溱伯克霍爾德氏菌(S.ww/"vorara)、越南伯克霍爾德、氏菌(5.W"waw/e^7^)、結(jié)核菌分才支4干菌(A<(vco6"c,e〃ww,w厶en:'w/oszJ),鳥(niǎo)分斗支4干菌復(fù)合菌(vVf.av/wmcow//e;c)(MAC)、烏分枝桿菌("v,ww)、胞內(nèi)分枝桿菌(M,"/race〃w/we)、堪薩斯分枝桿菌(A/.y^mm7)、蟾分枝桿菌(M.jce朋p)、海洋分枝桿)、潰瘍分枝桿菌(M.w/cera朋)、偶發(fā)分枝桿菌復(fù)合菌(A/./ortw"wmcow//ex)、偶發(fā)分枝桿菌(Af./oWw"wm)或龜分枝桿菌(c/ze/owe,)感染。92.—種用于由嚢性纖維化引起的肺部感染患者的治療方法，其包括向患者給藥以治療有效量的如權(quán)利要求1或33所述的脂質(zhì)抗感染藥物制劑。全文摘要本發(fā)明提供了一種脂質(zhì)抗感染藥物制劑，其基本上不含陰離子脂質(zhì)，其中脂質(zhì)與抗感染藥物的比為約1∶1到約4∶1，其平均的平均直徑小于約1μm。本發(fā)明還提供了一種制備脂質(zhì)抗感染藥物制劑的方法，其包括注入步驟。本發(fā)明還提供了一種脂質(zhì)抗感染藥物制劑，其中脂質(zhì)與藥物的比為約1∶1或更小，約0.75∶1或更小，后者約0.5∶1或更小，所述制劑是通過(guò)管線內(nèi)注入法制備的。本發(fā)明還涉及一種肺部感染患者的治療方法，其包括向患者給要以治療有效量的本發(fā)明脂質(zhì)抗感染藥物制劑。本發(fā)明還涉及囊性纖維化患者的治療方法，其包括向患者給藥以治療有效量的本發(fā)明脂質(zhì)抗感染藥物制劑。文檔編號(hào)A61K9/00GK101267806SQ200680034397公開(kāi)日2008年9月17日申請(qǐng)日期2006年7月19日優(yōu)先權(quán)日2005年7月19日發(fā)明者B·S·米勒,L·T·博尼,V·馬利寧,X·李申請(qǐng)人:特蘭薩夫公司