專利名稱：新的安莎霉素衍生物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及安莎霉素化合物的衍生物，它們可用于例如治療癌癥或B-細(xì)胞惡性腫瘤，具體而言，所述衍生物是安莎霉素化合物的前藥。本發(fā)明還提供了生產(chǎn)這些化合物的方法和它們?cè)卺t(yī)療中的用途，特別是在治療和/或預(yù)防癌癥或B-細(xì)胞惡性腫瘤中的用途。

背景技術(shù)：
開(kāi)發(fā)具有低毒性和良好的藥物動(dòng)力學(xué)性質(zhì)的高特異性抗癌藥物構(gòu)成了抗癌治療中的主要挑戰(zhàn)。
90kDa熱休克蛋白(Hsp90)是一種與蛋白質(zhì)折疊和裝配有關(guān)的大量的分子伴侶，所述蛋白質(zhì)中的許多與信號(hào)傳導(dǎo)通路有關(guān)(參見(jiàn)Neckers，2002；Sreedhar等人，2004a；Wegele等人，2004以及其中的參考文獻(xiàn))。目前已經(jīng)鑒定了近50個(gè)這些所謂的客戶蛋白(client)，它們包括類固醇受體、非受體酪氨酸激酶(例如src家族)、細(xì)胞周期蛋白依賴性激酶(例如cdk4和cdk6)、囊性跨膜調(diào)節(jié)蛋白、一氧化氮合酶等(Donzé和Picard，1999；McLaughlin等人，2002；Chiosis等人，2004；Wegele等人，2004；http://www.picard.ch/downloads/Hsp90interactors.pdf)。此外，Hsp90在應(yīng)激響應(yīng)和保護(hù)細(xì)胞對(duì)抗突變作用中起關(guān)鍵作用(Bagatell和Whitesell，2004；Chiosis等人，2004)。Hsp90的功能是復(fù)雜的，并且它與動(dòng)態(tài)的多酶復(fù)合體的形成有關(guān)(Bohen，1998；Liu等人，1999；Young等人，2001；Takahashi等人，2003；Sreedhar等人，2004；Wegele等人，2004)。Hsp90是致使客戶蛋白降解、細(xì)胞周期失調(diào)和細(xì)胞凋亡的抑制劑的靶點(diǎn)(Fang等人，1998；Liu等人，1999；Blagosklonny，2002；Neckers，2003；Takahashi等人，2003；Beliakoff和Whitesell，2004；Wegele等人，2004)。最近，已確認(rèn)Hsp90為腫瘤侵襲的重要細(xì)胞外介質(zhì)(Eustace等人，2004)。人們確定對(duì)癌癥治療而言Hsp90是新的主要治療靶點(diǎn)，這反映在對(duì)Hsp90功能的熱情和詳細(xì)的研究(Blagosklonny等人，1996；Neckers，2002；Workman和Kaye，2002；Beliakoff和Whitesell，2004；Harris等人，2004；Jez等人，2003；Lee等人，2004)以及高通量篩選實(shí)驗(yàn)的發(fā)展(Carreras等人，2003；Rowlands等人，2004)中。Hsp90抑制劑包括下面類型的化合物，例如安莎霉素類、大環(huán)內(nèi)酯類、嘌呤類、吡唑類、香豆素抗生素類等(參見(jiàn)Bagatell和Whitesell，2004；Chiosis等人，2004以及其中的參考文獻(xiàn))。
苯型安莎霉素類是一類范圍廣泛的化學(xué)結(jié)構(gòu)，其特征在于連接在芳香環(huán)結(jié)構(gòu)的任一側(cè)的各種長(zhǎng)度的脂族環(huán)。天然存在的安莎霉素類化合物包括macbecin和18，21-二氫macbecin(也分別稱為macbecin I和macbecin II)(1& 2；Tanida等人，1980)、格爾德霉素(geldanamycin)(3；DeBoer等人，1970；DeBoer和Dietz，1976；WO 03/106653以及其中的參考文獻(xiàn))和除莠霉素家族(4、5、6，Omura等人，1979；Iwai等人，1980；和Shibata等人，1986a，WO03/106653以及其中的參考文獻(xiàn))。


安莎霉素類最初被鑒定，是因?yàn)樗鼈兊目咕涂共《净钚?，但是，最近它們作為抗癌藥的潛在效用已?jīng)變得越來(lái)越有價(jià)值(Beliakoff和Whitesell，2004)。目前，許多Hsp90抑制劑在進(jìn)行臨床實(shí)驗(yàn)評(píng)價(jià)(Csermely和Soti，2003；Workman，2003)。特別是，格爾德霉素具有納摩爾級(jí)的效力，且對(duì)異常蛋白激酶依賴的腫瘤細(xì)胞具有明顯的特異性(Chiosis等人，2003；Workman，2003)。
已經(jīng)表明，用Hsp90抑制劑治療可增強(qiáng)放射對(duì)腫瘤細(xì)胞死亡的誘導(dǎo)作用，而且還已證明，Hsp90抑制劑與細(xì)胞毒藥物組合可提高細(xì)胞殺傷能力(例如乳腺癌、慢性髓細(xì)胞性白血病和非小細(xì)胞肺癌)(Neckers，2002；Beliakoff和Whitesell，2004)。潛在的抗血管生成活性也是有價(jià)值的Hsp90客戶蛋白HIF-1α在實(shí)體瘤的惡化中起關(guān)鍵作用(Hur等人，2002；Workman和Kaye，2002；Kaur等人，2004)。
Hsp90抑制劑還可作為免疫抑制劑，并與Hsp90抑制后幾種類型腫瘤細(xì)胞的補(bǔ)體誘導(dǎo)的溶胞有關(guān)(Sreedhar等人，2004)。用Hsp90抑制劑治療還可能導(dǎo)致產(chǎn)生誘導(dǎo)的超氧化物(Sreedhar等人，2004a)，該超氧化物與免疫細(xì)胞介導(dǎo)的溶胞有關(guān)(Sreedhar等人，2004)。有人已經(jīng)對(duì)Hsp90抑制劑作為潛在的抗瘧藥的用途進(jìn)行了討論(Kumar等人，2003)。此外，已經(jīng)表明，格爾德霉素干擾復(fù)合的糖基化的哺乳動(dòng)物朊蛋白PrPc的形成(Winklhofer等人，2003)。
如上所述，安莎霉素類作為潛在的抗癌和抗B細(xì)胞惡性腫瘤化合物是有價(jià)值的，但是目前可用的安莎霉素類具有差的藥理學(xué)或藥物性質(zhì)，例如它們具有差的水溶性、差的代謝穩(wěn)定性、差的生物利用度或差的制劑性能(Goetz等人，2003；Workman 2003；Chiosis 2004)。因?yàn)槌顾谹和格爾德霉素具有強(qiáng)的肝毒性，所以認(rèn)為它們均為較差的臨床實(shí)驗(yàn)候選物(參見(jiàn)Workman，2003)，并且由于其肝毒性，將格爾德霉素從I期臨床實(shí)驗(yàn)中撤出(Supko等人，1995，WO 03/106653)。
格爾德霉素是從吸水鏈霉菌(Streptomyces hygroscopicus)的培養(yǎng)物濾出液中分離得到的，它顯示出強(qiáng)的體外抗原生動(dòng)物活性和弱的抗細(xì)菌和真菌活性。在1994年，發(fā)現(xiàn)了格爾德霉素與Hsp90間的聯(lián)系(Whitesell等人，1994)。將格爾德霉素的生物合成基因簇克隆并測(cè)序(Allen和Ritchie，1994；Rascher等人，2003；WO 03/106653)。該DNA序列可在NCBI登錄號(hào)AY179507下找到。最近，對(duì)由吸水鏈霉菌二重霉素亞種(S.hygroscopicussubsp.duamyceticus)JCM4427衍生的基因工程格爾德霉素生產(chǎn)菌株的分離以及4，5-二氫-7-O-脫氨基甲?；?7-羥基格爾德霉素和4，5-二氫-7-O-脫氨基甲?；?7-羥基-17-O-脫甲基格爾德霉素的分離進(jìn)行了描述(Hong等人，2004)。通過(guò)將格爾德霉素加料至除莠霉素生產(chǎn)菌株即吸水鏈霉菌AM-3672，分離得到化合物15-羥基格爾德霉素、三環(huán)格爾德霉素類似物KOSN-1633和格爾德霉素甲酯(methyl-geldanamycinate)(Hu等人，2004)。從含有質(zhì)粒pKOS279-78的吸水鏈霉菌NRRL 3602中分離得到兩種化合物17-甲酰基-17-脫甲氧基-18-O-21-O-二氫格爾德霉素和17-羥甲基-17-脫甲氧基格爾德霉素，所述質(zhì)粒含有來(lái)自除莠霉素生產(chǎn)菌株即吸水鏈霉菌AM-3672的各種基因(Hu等人，2004)。
在1979年，從編號(hào)為AM-3672的吸水鏈霉菌菌株的發(fā)酵液中分離得到安莎霉素抗生素除莠霉素A，并根據(jù)它的強(qiáng)除草活性命名。用被Rous肉瘤病毒(RSV)的溫度敏感突變體感染的大鼠腎細(xì)胞系測(cè)定抗腫瘤活性，用于篩選恢復(fù)這些細(xì)胞的變形形態(tài)的藥物(參見(jiàn)Uehara，2003)。人們假設(shè)除莠霉素A主要通過(guò)結(jié)合至Hsp90伴侶蛋白而起作用，但是也對(duì)其直接結(jié)合至保守的半胱氨酸殘基并隨后使激酶失活進(jìn)行了討論(Uehara，2003)。
目前已經(jīng)分離得到一些化學(xué)衍生物，在苯醌母核的C19位帶有改變的取代基的化合物和在柄(ansa)鏈處鹵代的化合物與除莠霉素A相比，具有更低的毒性和更高的抗腫瘤活性(Omura等人，1984；Shibata等人，1986b)。除莠霉素生物合成基因簇的序列在WO 03/106653和最近的文章(Rascher等人，2005)中進(jìn)行了確認(rèn)。
由于它們的抗真菌和抗原生動(dòng)物活性而鑒定的安莎霉素抗生素macbecin(1)和18，21-二氫macbecin(2)(C-14919E-1和C-14919E-1)，分離自某種諾卡氏菌(Nocardia sp)編號(hào)C-14919(珍貴橙色束放線菌pretiosum亞種(Actinosynnema pretiosum subsp pretiosum)ATCC 31280)的培養(yǎng)物上清液中(Tanida等人，1980；Muroi等人，1980；US 4,315,989和US4,187,292)。18，21-二氫macbecin的特征是含有氫醌形式的母核。Macbecin和18，21-二氫macbecin顯示具有相似的抗菌活性和對(duì)抗癌細(xì)胞系(如鼠白血病P388細(xì)胞系)的抗腫瘤活性(Ono等人，1982)。Macbecin不抑制逆轉(zhuǎn)錄酶和末端脫氧核苷酸轉(zhuǎn)移酶的活性(Ono等人，1982)。Macbecin的Hsp90抑制作用已經(jīng)報(bào)道在文獻(xiàn)中(Bohen，1998；Liu等人，1999)。在加至微生物培養(yǎng)液后，macbecin和18，21-二氫macbecin轉(zhuǎn)化為在某位置或某些位置羥基代替甲氧基的化合物，這描述在專利US 4,421,687和US 4,512,975中。
在篩選大量土壤微生物期間，從屬于鏈霉菌屬(Streptomyces)的生產(chǎn)菌株中鑒定出抗生素TAN-420A至E(7-11，EP 0 110 710)。

在2000年，對(duì)從某種鏈霉菌(Streptomyces sp.)S6699的細(xì)胞培養(yǎng)物中分離格爾德霉素相關(guān)的非苯醌安莎霉素代謝物reblastatin和它在治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎中的潛在治療價(jià)值進(jìn)行了描述(Stead等人，2000)。
另一Hsp90抑制劑，與化學(xué)無(wú)關(guān)的苯醌安莎霉素類不同，是根赤殼菌素(單根菌素)，最初因?yàn)樗目咕钚?，從真菌Monosporium bonorden中發(fā)現(xiàn)了它(參見(jiàn)Uehara，2003)，并且發(fā)現(xiàn)其結(jié)構(gòu)與從Nectria radicicola.中分離得到的14元大環(huán)內(nèi)酯結(jié)構(gòu)相同。除了它的抗真菌、抗細(xì)菌、抗原生動(dòng)物和細(xì)胞毒活性外，還發(fā)現(xiàn)它為Hsp90伴侶蛋白的抑制劑(參見(jiàn)Uehara，2003；Schulte等人，1999)。還已描述了根赤殼菌素的抗血管生成活性(Hur等人，2002)和它的半合成衍生物(Kurebayashi等人，2001)。
最近人們的興趣集中在作為新一代安莎霉素抗癌化合物的格爾德霉素的17-氨基衍生物(Bagatell和Whitesell，2004)上，例如17-(烯丙基氨基)-17-脫甲氧基格爾德霉素(17-AAG，12)(Hostein等人，2001；Neckers，2002；Nimmanapalli等人，2003；Vasilevskaya等人，2003；Smith-Jones等人，2004)和17-脫甲氧基-17-N，N-二甲氨基乙氨基-格爾德霉素(17-DMAG，13)(Egorin等人，2002；Jez等人，2003)。最近，在格爾德霉素的17位上進(jìn)行衍生，以生成17-格爾德霉素酰胺、氨基甲酸酯、脲和17-芳基格爾德霉素(LeBrazidec等人，2003)?，F(xiàn)已報(bào)道了一個(gè)超過(guò)六十個(gè)17-烷基氨基-17-脫甲氧基格爾德霉素類似物的庫(kù)，并測(cè)定它們對(duì)Hsp90的親和性和它們的水溶性(Tian等人，2004)。另一減少格爾德霉素毒性的方法是通過(guò)與腫瘤靶向單克隆抗體連接，選擇性尋靶和遞送活性格爾德霉素化合物至惡性細(xì)胞中(Mandler等人，2000)。

在這些衍生物展示出降低肝毒性的同時(shí)，它們?nèi)詢H具有有限的水溶性并需要使用增溶載體(例如Cremophore，DMSO-卵磷脂)，增溶載體本身可能會(huì)在一些患者中產(chǎn)生副作用。
因此，仍需要尋找新的水溶性改善的安莎霉素類化合物，就給藥而言，它們將具有改善的藥理學(xué)性質(zhì)和減少的副作用。本發(fā)明公開(kāi)了新的安莎霉素衍生物，它們是前藥并且可以被裂解(化學(xué)裂解或酶裂解)為母體分子，并且與目前可用的安莎霉素類相比，它們通常具有改善的藥物性質(zhì)；特別是，它們?cè)谌缦碌囊环N或多種性質(zhì)方面得到改善水溶性、生物利用度和制劑性能。


發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明提供了安莎霉素類的衍生物、制備這些化合物的方法、制備中的中間體和在醫(yī)療中使用這些化合物的方法。具體而言，所述安莎霉素類的衍生物是前藥。
在其最廣泛的方面，本發(fā)明提供了在母體分子的18和/或21位包含自裂解并增加水溶性的衍生基團(tuán)的苯型安莎霉素類的衍生物。這些基團(tuán)設(shè)計(jì)為可化學(xué)裂解，以產(chǎn)生有生物活性的母體分子，或者裂解可以通過(guò)酶方法實(shí)現(xiàn)。
因此，本發(fā)明涉及苯型安莎霉素的衍生物，該衍生物包含在6位帶有氨基羧基取代基的1，4-二羥基苯基基團(tuán)，其中2位和在6位的羧基取代基通過(guò)長(zhǎng)度變化的脂族鏈連接，其特征在于苯環(huán)中的1位羥基和4位羥基中的一個(gè)或兩個(gè)羥基獨(dú)立地被氨基亞烷基氨基羰基基團(tuán)衍生化，該亞烷基(其可以任選被例如甲基基團(tuán)的烷基取代)具有2或3個(gè)碳原子長(zhǎng)的鏈，且所述衍生化基團(tuán)增加母體分子的水溶性和/或生物利用度，但是其能夠被在體內(nèi)除去，例如通過(guò)自裂解。
在本文中，“母體分子”指在苯環(huán)(即氫醌)的1和4位帶有未衍生化的羥基基團(tuán)的相應(yīng)分子或其苯醌形式。
在更具體方面，本發(fā)明提供了根據(jù)下面式(IA-IC)的安莎霉素衍生物或 其藥學(xué)上可接受的鹽
其中 R1代表H、OH、OMe、-NHCH2CH＝CH2或-NHCH2CH2N(CH3)2； R2代表OH或酮； R3代OH或OMe；
R5代表H或 其中 n代表0或1； R6代表H、Me、Et或異丙基； R7、R8和R9各自獨(dú)立代表H或支鏈或直鏈的C1-C4烷基基團(tuán)；或者R7和R8，或R8和R9可以連接起來(lái)，以形成6元碳環(huán)； R10代表H或支鏈或直鏈的C1-C4烷基基團(tuán)； 但是，前提是兩R5基團(tuán)不都為H，且當(dāng)兩R5基團(tuán)都不代表H時(shí)，兩R5基團(tuán)是相同的。
上面的結(jié)構(gòu)顯示了代表性的互變異構(gòu)體，本發(fā)明包括式(IA)、(IB)和(IC)化合物的所有互變異構(gòu)體，例如當(dāng)用烯醇化合物進(jìn)行圖例說(shuō)明時(shí)，還包括其酮化合物，反之，當(dāng)用酮化合物進(jìn)行圖例說(shuō)明時(shí)，還包括其烯醇化合物。
上述的式(IA)、(IB)和(IC)化合物統(tǒng)稱為式(I)化合物。
在另一方面，本發(fā)明提供用作藥物的安莎霉素衍生物，例如式(I)化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽。
定義 如文中所用，冠詞“一個(gè)”和“一種”指一個(gè)(種)或多個(gè)(種)(即至少一個(gè)(種))冠詞的語(yǔ)法對(duì)象。例如“一個(gè)類似物”指一個(gè)類似物或多個(gè)類似物。
如文中所用，術(shù)語(yǔ)“類似物”指結(jié)構(gòu)上與另一個(gè)化合物相似但在組成上有微小不同(例如一個(gè)原子被另一個(gè)原子所代替或者存在或缺失特定的官能團(tuán))的化合物。
如文中所用，術(shù)語(yǔ)“癌癥”指產(chǎn)生自上皮細(xì)胞的惡性腫瘤，其可在皮膚或更通常在身體器官(例如乳腺、前列腺、肺、腎、胰腺、胃或腸)的內(nèi)層中發(fā)現(xiàn)。癌癥傾向于浸潤(rùn)進(jìn)入鄰近組織中并擴(kuò)展(轉(zhuǎn)移)至遠(yuǎn)距離器官(例如骨骼、肝臟、肺或腦)中。如文中所用，術(shù)語(yǔ)癌癥包括轉(zhuǎn)移腫瘤細(xì)胞型，例如但不限于黑色素瘤、淋巴瘤、白血病、纖維肉瘤、橫紋肌肉瘤和肥大細(xì)胞瘤；以及組織癌型，例如但不限于結(jié)直腸癌、前列腺癌、小細(xì)胞肺癌和非小細(xì)胞肺癌、乳腺癌、胰腺癌、膀胱癌、腎癌、胃癌、成膠質(zhì)細(xì)胞瘤、原發(fā)性肝癌和卵巢癌。
如文中所用，術(shù)語(yǔ)“生物利用度”指在給藥后，藥物或其它物質(zhì)被吸收或在生物活性位點(diǎn)起效的程度或速度。該性質(zhì)取決于許多因素，包括化合物的溶解性、在腸中的吸收速度、蛋白質(zhì)結(jié)合的程度和代謝等。本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)熟知的各種測(cè)定生物利用度的實(shí)驗(yàn)描述在文中(還參見(jiàn)Egorin等人(2002))。
如文中所用，術(shù)語(yǔ)“B細(xì)胞惡性腫瘤”包括下列疾病慢性淋巴細(xì)胞性白血病(CLL)、多發(fā)性骨髓瘤和非何杰金淋巴瘤(NHL)。它們是血液和血液生成器官的腫瘤疾病。它們引起骨髓和免疫系統(tǒng)功能障礙，這致使宿主對(duì)感染和出血有高易感性。
如在本申請(qǐng)中所用，術(shù)語(yǔ)“前藥”指具有藥物活性的物質(zhì)的前體或衍生物形式，與母藥相比，該前體或衍生物形式具有改善的制劑性質(zhì)，例如與母藥相比，它可能毒性更低或溶解性更好，且它能夠被活化(例如經(jīng)化學(xué)裂解或酶裂解)或另外轉(zhuǎn)變?yōu)楦踊钚缘哪阁w形式(參見(jiàn)，例如WilmanD.E.V.(1986)“癌癥化療中的前藥(Pro-drugs in Cancer Chemotherapy)”生物化學(xué)學(xué)會(huì)會(huì)報(bào)(Biochemical Society Transactions)14，375-382(第615次會(huì)議，Belfast)和Stella V.J.等人(1985)“前藥靶向藥物遞送的化學(xué)方法(Pro-drugsA Chemical Approach to Targeted Drug Delivery)”定向藥物遞送(Directed Drug Delivery)R.Borchardt等人(編者)247-267頁(yè)(Humana Press))。
如在本申請(qǐng)中所用，術(shù)語(yǔ)“水溶性”指在含水介質(zhì)(例如pH 7.4的磷酸緩沖鹽溶液(PBS)或5％葡萄糖溶液)中的溶解性。對(duì)水溶性的測(cè)試在下面實(shí)施例“水溶性實(shí)驗(yàn)”中給出。
如文中所用，術(shù)語(yǔ)“安莎霉素衍生物”指如上所述的代表本發(fā)明最廣泛方面的苯型安莎霉素衍生物，例如根據(jù)上面式(I)的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽。這些化合物還稱為“本發(fā)明化合物”或“安莎霉素類衍生物”，在本申請(qǐng)中這些術(shù)語(yǔ)可以互換。
本發(fā)明化合物(如式(I)化合物)的藥學(xué)上可接受的鹽包括由藥學(xué)上可接受的無(wú)機(jī)或有機(jī)酸或堿形成的常規(guī)鹽以及季銨酸加成鹽。適當(dāng)?shù)乃猁}的更具體示例包括鹽酸鹽、氫溴酸鹽、硫酸鹽、磷酸鹽、硝酸鹽、高氯酸鹽、富馬酸鹽、乙酸鹽、丙酸鹽、琥珀酸鹽、羥基乙酸鹽、甲酸鹽、乳酸鹽、馬來(lái)酸鹽、酒石酸鹽、檸檬酸鹽、撲酸鹽(palmoic)、丙二酸鹽、羥基馬來(lái)酸鹽、苯乙酸鹽、谷氨酸鹽、苯甲酸鹽、水楊酸鹽、富馬酸鹽、甲苯磺酸鹽、甲磺酸鹽、萘-2-磺酸鹽、苯磺酸鹽、羥基萘甲酸鹽、氫碘酸鹽、蘋(píng)果酸鹽、steroic、鞣酸鹽等。鹽酸鹽是特別有用的。例如草酸的其它酸，盡管它們本身不是藥學(xué)上可接受的，但是可用于制備用作中間體的鹽，該中間體鹽用于獲得本發(fā)明化合物或它們的藥學(xué)上可接受的鹽。適當(dāng)?shù)膲A鹽的更加具體的示例包括鈉鹽、鋰鹽、鉀鹽、鎂鹽、鋁鹽、鈣鹽、鋅鹽、N，N’-二芐基乙二胺鹽、氯普魯卡因鹽、膽堿鹽、二乙醇胺鹽、乙二胺鹽、N-甲基葡糖胺鹽和普魯卡因鹽。下文中根據(jù)本發(fā)明的化合物的稱謂包括式(I)化合物和它們的藥學(xué)上可接受的鹽。
烷基、鏈烯基和炔基基團(tuán)可以是直鏈或支鏈的。
例如C1-C4烷基基團(tuán)的烷基示例包括甲基、乙基、正丙基、異丙基和正丁基。
如文中所用，術(shù)語(yǔ)“18，21-二氫macbecin”和“macbecin II”(macbecinI的氫醌化合物)可以互換使用。



圖1顯示在裂解實(shí)驗(yàn)中母體化合物的分解(decay)和釋放的化合物的相對(duì)量 圖2顯示隨時(shí)間推移，在PRXF DU-145異種移植物中的組中值相對(duì)腫瘤體積。
發(fā)明詳述 改善藥物候選物的物理性質(zhì)(例如生物利用度)的策略通常利用前藥前體，該前藥前體依賴如酶水解的環(huán)境影響釋放活性母體藥物。然而，由于個(gè)體差異，在體內(nèi)活性藥物的釋放可能不會(huì)達(dá)到所需的速度。
本發(fā)明提供了用可選的方法控制活性藥物釋放速度的安莎霉素的衍生物。該方法利用引入的氨基側(cè)鏈在生理pH條件下觸發(fā)的經(jīng)分子內(nèi)環(huán)化消除反應(yīng)的自裂解。此類由氨基甲酸酯官能團(tuán)上的末端氨基基團(tuán)的分子內(nèi)進(jìn)攻致使產(chǎn)生環(huán)狀脲碎片并導(dǎo)致母體藥物釋放。
藥物釋放速度由化學(xué)環(huán)化速率常數(shù)和相關(guān)的取代基控制，而不是由外部影響因素控制。
預(yù)期本發(fā)明化合物能夠化學(xué)介導(dǎo)自裂解，同時(shí)，它們還可能是酶裂解的底物，且這也包括在本發(fā)明的范圍內(nèi)。
因此，本發(fā)明提供了如上所述的安莎霉素類衍生物、制備這些化合物的方法、制備中的中間體和在醫(yī)療中使用這些化合物的方法。
在式IA-IC化合物的一個(gè)示例集合(set)中，R6代表H、Me或Et，在在式IA-IC化合物的另一個(gè)示例集合中，R10代表支鏈或線性的C1-4烷基基團(tuán)。在式IA-IC化合物的另一個(gè)示例集合中，R6代表H、Me或Et，且R10代表支鏈或線性的C1-4烷基基團(tuán)。
每個(gè)R5基團(tuán)是相同的，或一個(gè)R5基團(tuán)為H同時(shí)另一個(gè)R5基團(tuán)是如文中所述取代的。在一個(gè)示例方面，R5基團(tuán)中的一個(gè)為H；在另一示例方面，兩個(gè)R5基團(tuán)均不為H。優(yōu)選地，C21 R5基團(tuán)為H。
R6優(yōu)選代表Me?；蛘?，R6優(yōu)選代表Et。
R10優(yōu)選代表Me?；蛘?，R10優(yōu)選代表Et。
R7優(yōu)選代表H。R8優(yōu)選代表H。R9優(yōu)選代表H。
當(dāng)R7和R8，或者R8和R9連接起來(lái)形成六元碳環(huán)時(shí)，該環(huán)可適當(dāng)?shù)貫榄h(huán)己基環(huán)。
優(yōu)選地，n＝0。
側(cè)鏈相對(duì)于安莎霉素環(huán)的立體化學(xué)優(yōu)選遵從相應(yīng)的母體化合物(即macbecin、格爾德霉素、除莠霉素A，參見(jiàn)例如表4上面所示的結(jié)構(gòu))。
式(I)化合物例如可以代表下面化合物的衍生物 ·macbecin(式(IA))； ·格爾德霉素(式(IB)，其中R1代表OMe，特別當(dāng)R2代表OH時(shí))； ·除莠霉素B(式(IB)，其中R1代表H，特別當(dāng)R2代表OH時(shí))； ·17-AAG(式(IB)，其中R1代表NHCH2CH＝CH2，特別當(dāng)R2代表OH時(shí))； ·17-DMAG(式(IB)，其中R1代表NHCH2CH2NMe2，特別當(dāng)R2代表OH時(shí))； ·除莠霉素A(式(IC)，其中R2代表OMe且R3代表OMe)；或 ·除莠霉素C(式(IC)，其中R2代表OH且R3代表OMe)。通常，通過(guò)安莎霉素家族化合物的半合成衍生化制備本發(fā)明化合物。因此，制備式(I)化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽的方法包括(a)制備其中兩個(gè)R5基團(tuán)均不為H的式(I)化合物，這是通過(guò)將式(IIA)、(IIB)或(IIC)化合物或者它們的保護(hù)的衍生物
其中L為離去基團(tuán) 與式(H)化合物反應(yīng)實(shí)現(xiàn)的，
其中P代表保護(hù)基團(tuán)；或 (b)制備其中C21R5基團(tuán)為H的式(I)化合物，這是通過(guò)將式(IID)、(IIE)或(IIF)或者它們的保護(hù)的衍生物
其中L為離去基團(tuán) 與式(H)化合物反應(yīng)實(shí)現(xiàn)的，
其中P代表保護(hù)基團(tuán)；或 (c)將式(I)化合物或其鹽轉(zhuǎn)化為另一種式(I)化合物或另一種其藥學(xué)上可接受的鹽；或 (d)將保護(hù)的式(I)化合物脫保護(hù)。
在上文中的式(IIA)、(IIB)、(IIC)、(IID)、(IIE)和(IIF)化合物統(tǒng)稱為式(II)化合物。
在方法(a)和(b)中，示例性的離去基團(tuán)L包括鹵素(如氯、溴)、烷氧基(如C1-4烷氧基)、芳基(如苯氧基或如4-硝基苯氧基的取代的苯氧基)或烷基芳基(如C1-4烷基芳基，如芐氧基)。L優(yōu)選代表4-硝基苯氧基。示例性的保護(hù)基團(tuán)P包括叔丁氧羰基(“Boc”)和三苯甲基基團(tuán)。
式(II)化合物與式(H)化合物的反應(yīng)可以在本身是公知的用于氨基甲酸酯形成的常規(guī)條件下進(jìn)行，例如將上述成分在惰性溶劑(如二氯甲烷)中回流，并用水進(jìn)行后處理。
式(II)化合物或其保護(hù)的衍生物可以如下制備將式IIIA-IIIC化合物或其保護(hù)的衍生物
與式(J)化合物反應(yīng)， L’-CO-L(J) 其中L’代表離去基團(tuán)，優(yōu)選比L更不穩(wěn)定的離去基團(tuán)。示例性L’基團(tuán)如上面對(duì)L所描述。優(yōu)選的式J化合物為氯甲酸4-硝基苯酯。
式(III)化合物與式(J)化合物的反應(yīng)可以在本身是公知的常規(guī)條件下進(jìn)行，例如將上述成分在惰性溶劑(如二氯甲烷)中回流。
由于C18OH基團(tuán)比C21OH基團(tuán)反應(yīng)活性更高，通過(guò)將相應(yīng)的式(IIIA)-(IIIC)化合物與稍過(guò)量的式J化合物反應(yīng)，可以獲得式(IID)-(IIF)化合物。通過(guò)將相應(yīng)的式(IIIA)-(IIIC)化合物與超過(guò)兩倍量的過(guò)量式J化合物反應(yīng)可以獲得式(IIA)-(IIC)化合物。
式IIIA-IIIC化合物(下文中稱為“式(III)化合物”)和其保護(hù)的衍生物可以如下制備 首先，經(jīng)可生產(chǎn)所需化合物的菌株直接發(fā)酵可以獲得用作模板的天然存在的安莎霉素類化合物。本領(lǐng)域技術(shù)人員將能夠在適當(dāng)?shù)臈l件下培養(yǎng)生產(chǎn)菌株，以生產(chǎn)并分離得到天然產(chǎn)物模板。列在表1中的菌株是天然產(chǎn)物模板的生產(chǎn)菌株的示例，但是本領(lǐng)域技術(shù)人員將理解，可以存在在適當(dāng)?shù)臈l件下產(chǎn)生相同化合物的另外的可用菌株。
表1-生產(chǎn)菌株 或者，上述化合物可以商業(yè)購(gòu)得；表2列出了可以購(gòu)買(mǎi)到的化合物以及它們的目錄號(hào) 表2-商業(yè)可得的式(I)化合物 除了文中提供的具體方法和參考文獻(xiàn)外，本領(lǐng)域技術(shù)人還可以參閱用作合成方法的參照的標(biāo)準(zhǔn)教科書(shū)，包括但不限于沃格爾氏實(shí)用有機(jī)化學(xué)教科書(shū)(Vogel’s Textbook of Practical Organic Chemistry)(Furniss等人，1989)和馬奇氏高等有機(jī)化學(xué)(March’s Advanced Organic Chemistry)(Smith和March，2001)。
天然存在的安莎霉素類化合物主要以它們的苯醌形式存在，并可主要以該形式分離得到。在一些情況中，可以從發(fā)酵液中分離得到氫醌形式。如果分離得到苯醌形式，需要將它轉(zhuǎn)變?yōu)橄鄳?yīng)的式(III)化合物(氫醌類)。在本領(lǐng)域中，眾所周知苯醌類可以用化學(xué)方法轉(zhuǎn)化為氫醌類(還原)，反之，氫醌類可以用化學(xué)方法轉(zhuǎn)化為苯醌類(氧化)。這可以應(yīng)用于如上所述的安莎霉素天然產(chǎn)物，因此，當(dāng)苯醌形式是天然存在的時(shí)，可以通過(guò)許多方法合成氫醌形式。例如(但不受任何限制)，這可以在有機(jī)介質(zhì)中用氫化物源(例如但不限于LiAlH4或SnCl2-HCl)實(shí)現(xiàn)?；蛘?，該轉(zhuǎn)化可如下進(jìn)行將苯醌形式的安莎霉素溶解在有機(jī)介質(zhì)中，然后用還原劑(包括但不限于連二亞硫酸鈉(Na2S2O4或硫代硫酸鈉(sodium thionite))的水溶液洗滌。優(yōu)選地，該轉(zhuǎn)化如下進(jìn)行將macbecin或格爾德霉素溶解在乙酸乙酯中，然后將該溶液與連二亞硫酸鈉水溶液劇烈混合(Muroi等人，1980)。然后可將得到的有機(jī)溶液用水洗滌，干燥并在減壓條件下除去有機(jī)溶劑，分別得到幾乎定量的18，21-二氫macbecin或18，21-二氫格爾德霉素。
式(IIB)和(IIC)化合物，如由格爾德霉素衍生得到的那些，可以或的確在C-11位處含有仲羥基。為了單獨(dú)在C-18位羥基處衍生這些化合物，可能首先必須修飾C-11位羥基。另外，特別將在C-11位以及在C-18或C-21處衍生的化合物在其各自范圍內(nèi)認(rèn)作本發(fā)明化合物。下面所述的是對(duì)于格爾德霉素而言實(shí)現(xiàn)上面所述的方法，但是本領(lǐng)域技術(shù)人員將理解，這些同樣可以應(yīng)用于其母體化合物在C-11處含有OH基團(tuán)的其它式(IIB)和(IIC)、(IIE)和(IIF)化合物。
例如，可以將C-11羥基氧化為酮，這是通過(guò)許多將仲醇氧化為酮的標(biāo)準(zhǔn)方法之一實(shí)現(xiàn)的，所述方法例如為(但不限于)Swern氧化、Dess-Martinperiodination、高釕酸四丙基銨(TPAP)、Jones試劑、氯鉻酸吡啶鹽(Corey試劑)或重鉻酸吡啶鹽。采用手頭的11-氧代格爾德霉素，現(xiàn)在可以如上所述將苯醌還原為氫醌。本領(lǐng)域技術(shù)人員將理解，必須注意不要伴隨地將新形成的C-11位酮還原，也就是說(shuō)，所選的還原劑應(yīng)當(dāng)對(duì)苯醌體系的化學(xué)選擇性大于對(duì)C-11位羰基的，這類化學(xué)選擇性試劑對(duì)本領(lǐng)域技術(shù)人而言是公知的，適當(dāng)?shù)脑噭┑氖纠?但不限于)連二亞硫酸鈉，不適當(dāng)?shù)脑噭┌ǖ幌抻贚iAlH4。11-氧代-18，21-二氫格爾德霉素可以用作進(jìn)一步衍生為如下所述的式I化合物的模板。
如果需要的話，保護(hù)基團(tuán)通?？梢詰?yīng)用于本發(fā)明化合物和中間體化合物的合成中，對(duì)此本領(lǐng)域技術(shù)人員將是可理解的。
如果需要的話，由它們的苯醌形式轉(zhuǎn)化得到的如式(III)所示的氫醌安莎霉素可以用作進(jìn)一步半合成(即方法(a))的模板。
本發(fā)明包括的其它化合物可以用文中所述的方法和/或本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的方法制備。
式(H)化合物可以用本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的方法制備。用于制備式H化合物的一個(gè)適當(dāng)?shù)姆椒ㄈ缦聢D所示，但應(yīng)當(dāng)理解，可以使用其它同樣適當(dāng)?shù)闹苽浞椒ā?br>
因此，在一個(gè)實(shí)施方案中，可以在18，21-二氫macbecin的C18和/或21位引入各種自裂解且增加水溶性的側(cè)鏈(R5)。這可以如下完成用中間體macbecin的4-硝基苯基碳酸酯類似物(例如上面式(II)化合物)處理各種鏈長(zhǎng)和取代模式的單N-保護(hù)的二胺(H)。
將用保護(hù)基團(tuán)處理氨基醇衍生得到的伯氨基烷基芐基醚(A)與苯甲醛反應(yīng)，得到席夫(Schiff)堿(B)。將形成的亞胺用例如三烷基氧四氟硼酸鹽的烷基化試劑處理，以引入R10，從而產(chǎn)生亞胺(iminium)鹽(C)。經(jīng)氫化物還原為芐胺(D)，隨后經(jīng)催化氫解進(jìn)行二脫芐基反應(yīng)，得到仲胺型(E)。經(jīng)N-Boc保護(hù)轉(zhuǎn)化為(F)，然后將羥基活化為適當(dāng)?shù)碾x去基團(tuán)，例如甲磺酸酯(G)。如果需要的話，通過(guò)用另外的保護(hù)試劑處理化合物(E)可以將圖中化合物(F)、(G)和(H)的Boc基團(tuán)替換為不同的保護(hù)基團(tuán)。優(yōu)選的另外的保護(hù)基團(tuán)為三苯甲基。
在方法(c)中，鹽的形成和交換可以用本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的常規(guī)方法進(jìn)行。式(I)化合物的互變可以用公知的方法進(jìn)行，例如羥基和酮基團(tuán)可以通過(guò)如文中其它地方所述的氧化/還原反應(yīng)進(jìn)行互變。
在方法(a)、(b)和(d)中，保護(hù)基團(tuán)的示例和除去它們的方法可以在T WGreene的“有機(jī)合成中的保護(hù)基團(tuán)(Protective Groups in OrganicSynthesis)”(約翰威立(J Wiley and Sons)，1991)中發(fā)現(xiàn)。適當(dāng)?shù)牧u基保護(hù)基團(tuán)包括烷基(例如甲基)、乙縮醛(例如丙酮化合物)和酰基(例如乙?；虮郊柞；?，可以通常水解將它們除去；以及芳基烷基(例如芐基)，可以通過(guò)催化氫解將其除去；或硅醚，可以通過(guò)酸性水解或氟離子輔助裂解將其除去。適當(dāng)?shù)陌繁Ｗo(hù)基團(tuán)包括磺?；?例如甲苯磺?；?、?；?例如芐氧羰基或叔丁氧羰基)和芳基烷基(例如芐基)，可以通過(guò)適當(dāng)?shù)乃饣驓浣鈱⑺鼈兂ァ?br> 其中C18 R5為H的式(I)化合物可以通過(guò)將式(IVA)-(IVC)化合物(統(tǒng)稱為“式(IV)化合物”)或其進(jìn)一步保護(hù)的衍生物脫保護(hù)而制備
其中R1、R2、R3和R5如上所定義(除R5不為H外)且Pa代表保護(hù)基團(tuán)。示例性羥基保護(hù)基團(tuán)Pa包括上面提到的那些羥基保護(hù)基團(tuán)，尤其是硅醚。除去硅烷基基團(tuán)的脫保護(hù)可以通過(guò)在常規(guī)條件下水解來(lái)實(shí)現(xiàn)。
式(IV)化合物或其進(jìn)一步保護(hù)的衍生物可以如下制備將式(VA)-(VC)化合物(統(tǒng)稱為“式(V)化合物”)或其保護(hù)的衍生物
其中L為離去基團(tuán) 與式(H)化合物反應(yīng)。
適當(dāng)?shù)臈l件包括上面給出的用于方法(a)和(b)的那些條件。
式(V)化合物或其保護(hù)的衍生物可以如下制備將式(VIA)-(VIC)化合物(統(tǒng)稱為“式(VI)化合物”)或其保護(hù)的衍生物

與式(J)化合物反應(yīng)。
適當(dāng)?shù)臈l件包括上面給出的用于式(III)化合物與式(J)化合物反應(yīng)的那些條件。
式(VI)化合物或其保護(hù)的衍生物可以通過(guò)保護(hù)式(III)化合物制備。當(dāng)Pa代表硅醚時(shí)，保護(hù)可以通過(guò)在堿存在下用三烷基氯硅烷或三氟甲磺酸三烷基硅酯處理式(III)化合物實(shí)現(xiàn)。
本發(fā)明的其它化合物可以用本身為公知的方法或上面描述的類似方法制備。
本發(fā)明的化合物可直接，和作為進(jìn)一步半合成或生物轉(zhuǎn)化的模板，用于生產(chǎn)用作抗癌藥的化合物。用于安莎霉素類(如格爾德霉素)和相關(guān)化合物的半合成衍生化的方法在本領(lǐng)域中是公知的，并包括(但不限于)在例如WO 03/013430、WO 02/079167、WO 03/066005中所述的那些修飾方法。
具體而言，本發(fā)明化合物可用作前藥，它們可以被化學(xué)裂解，產(chǎn)生活性母體化合物。評(píng)估裂解速度的裂解實(shí)驗(yàn)在本領(lǐng)域中是公知的。
上面的中間體的結(jié)構(gòu)可以進(jìn)行互變異構(gòu)化，當(dāng)將代表性的互變異構(gòu)體圖例顯示時(shí)，應(yīng)當(dāng)將其理解為該代表性互變異構(gòu)體和所有互變異構(gòu)體，例如當(dāng)將烯醇化合物圖例顯示時(shí)，其還代表酮化合物；反之，當(dāng)將酮化合物圖例顯示時(shí)，其還代表烯醇化合物。
式(II)、(III)、(IV)、(V)和(VI)的新化合物以及其保護(hù)的衍生物也作為本發(fā)明的一個(gè)方面要求保護(hù)。
另外，本發(fā)明提供了本發(fā)明化合物在治療癌癥或B細(xì)胞惡性腫瘤中的用途。它還提供了用于治療癌癥或B細(xì)胞惡性腫瘤的本發(fā)明化合物。它還提供了治療癌癥或B細(xì)胞惡性腫瘤的方法，該方法包括將治療有效量的本發(fā)明化合物給藥至患者。它還提供了本發(fā)明化合物在制備治療癌癥或B細(xì)胞惡性腫瘤的藥物中的用途。
還已知安莎霉素類具有治療其它疾病的用途，包括但不限于治療心臟停搏和中風(fēng)(US 6,174,875、WO 99/51223)、纖維化(fibrogenic)疾病(WO02/02123)、治療或預(yù)防再狹窄(WO 03/079936)、治療或預(yù)防與蛋白聚集和淀粉樣作用相關(guān)的疾病(WO 02/094259)、治療外周神經(jīng)損傷和促進(jìn)神經(jīng)再生(WO 01/03692、US 6,641,810、EP 1 024 806、US 2002/0086015、US6,210,974、WO 99/21552、US 5,968,921)以及抑制血管生成(WO04/000307)。與本發(fā)明化合物有關(guān)的用途和方法還擴(kuò)展到上述的其它適應(yīng)征。
在優(yōu)選實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了具有治療癌癥用途的化合物。本領(lǐng)域技術(shù)人員將能夠通過(guò)常規(guī)實(shí)驗(yàn)確定這些化合物抑制腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)的能力(參見(jiàn)Tian等人，2004；Hu等人，2004；Dengler等人，1995)。
本發(fā)明還提供了包含安莎霉素衍生物或其藥學(xué)上可接受的鹽以及藥學(xué)上可接受的載體的藥物組合物。
正在或已經(jīng)進(jìn)行臨床實(shí)驗(yàn)的現(xiàn)有的安莎霉素HSP90抑制劑，例如格爾德霉素、17-AAG和17-DMAG具有差的藥理學(xué)性質(zhì)、差的水溶性和差的生物利用度。本發(fā)明提供具有改善的性質(zhì)(例如溶解性和/或生物利用度)的安莎霉素衍生物。本領(lǐng)域技術(shù)人員將能夠容易地采用標(biāo)準(zhǔn)方法測(cè)定給定的本發(fā)明化合物的溶解性。代表性的方法顯示在文中的實(shí)施例中。
另外，本領(lǐng)域技術(shù)人員將能夠用本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的體內(nèi)和體外方法測(cè)定本發(fā)明化合物的藥物動(dòng)力學(xué)和生物利用度，所述方法包括但不限于下面所述的那些方法和Egorin MJ等人，(2002)中的方法?；衔锏纳锢枚扔稍S多因素(例如水溶性、在腸中的吸收速度、蛋白結(jié)合的程度和代謝)決定，每種因素可以通過(guò)下面所述的體外實(shí)驗(yàn)進(jìn)行測(cè)定，本領(lǐng)域技術(shù)人員將理解，這些因素中的一種或多種因素的改善將導(dǎo)致化合物的生物利用度提高。或者，化合物的生物利用度可以用下面詳細(xì)描述的體內(nèi)方法測(cè)定。
體外實(shí)驗(yàn) a)Caco-2滲透實(shí)驗(yàn) 采用文中所述的方法，用在24孔Corning Costar Transwell板(format)中的匯合的Caco-2細(xì)胞(Li，A.P.，1992；Grass，G.M.，等人，1992，Volpe，D.A.，等人，2001)測(cè)定滲透性和化合物的排出速度，適當(dāng)?shù)陌灏w外生物技術(shù)有限公司(In Vitro Technologies Inc.)，巴爾的摩(Baltimore)，馬里蘭(Maryland)，USA提供的那些板。在適當(dāng)?shù)陌逯校斒抑泻衟H 7.4的0.15mL HBBS、1％DMSO、0.1mM螢光黃，底室中含有pH 7.4的0.6mLHBBS、1％DMSO。將對(duì)照和測(cè)試實(shí)驗(yàn)板在潮濕的培養(yǎng)箱中在37℃和130rpm振搖的條件下孵育。螢光黃只能夠通過(guò)細(xì)胞旁路(即緊密聯(lián)接之間)滲透，螢光黃的高表觀滲透性(Papp)表明實(shí)驗(yàn)期間細(xì)胞損傷，并將所有這樣的孔舍棄。除了母體化合物外，適當(dāng)?shù)膶?duì)照品包括普萘洛爾和醋丁洛爾，普萘洛爾具有良好的被動(dòng)滲透性，沒(méi)有已知的轉(zhuǎn)運(yùn)載體效應(yīng)；醋丁洛爾具有被P糖蛋白的主動(dòng)外排減弱的差的被動(dòng)滲透性。
通過(guò)將化合物加至頂室或底室(濃度為0.01mM)，在單向和雙向板中測(cè)試化合物。將在頂室或底室的化合物用LC-MS進(jìn)行分析。結(jié)果用表觀滲透性Papp(nm/s)和流出比(A至B與B至A相比)表示。

受室(acceptor)體積0.6mL(A＞B)和0.15mL(B＞A) 單層的面積0.33cm2 時(shí)間60分鐘 流出比例的正值表明由細(xì)胞的頂(apical)表面主動(dòng)外排。因此，提高的生物利用度在上面的實(shí)驗(yàn)中顯示為本發(fā)明的化合物相對(duì)于它的母體分子Papp增加和/或流出比例減少。
b)人肝微粒體(HLM)穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn) 代謝穩(wěn)定性增加也與提高生物利用度相關(guān)，這可以用例如下面所述的HLM實(shí)驗(yàn)測(cè)定。用肝勻漿測(cè)定化合物對(duì)包括CYP450s(如CYP2C8、CYP2D6、CYP1A、CYP3A4、CYP2E1)的I相(氧化)酶、酯酶、酰胺酶和黃素單加氧酶(FMOs)的內(nèi)在易損性。
化合物的半衰期(T1/2)(暴露在人肝微粒體下)可以通過(guò)用LC-MS監(jiān)測(cè)它們隨時(shí)間推移的消失進(jìn)行測(cè)定。在37℃下，將0.001mM的化合物在含有蛋白質(zhì)為0.25mg/mL的人肝的微粒體亞細(xì)胞部分和作為輔因子的飽和水平的NADPH的pH 7.4的0.1M Tris-HCl中孵育40分鐘。在一定間隔時(shí)，將乙腈加入到測(cè)試樣品中，使蛋白質(zhì)沉淀并中止代謝。將樣品離心并分析母體化合物。
在上面實(shí)驗(yàn)中，相對(duì)于母體化合物的增加的T1/2顯示生物利用度提高。
體內(nèi)實(shí)驗(yàn) 體內(nèi)實(shí)驗(yàn)也可用于測(cè)定化合物的生物利用度。通常，將化合物腹腔內(nèi)(i.p.)或靜脈內(nèi)(i.v.)和口服(p.o.)給藥至測(cè)試動(dòng)物(如小鼠或大鼠)，以一定間隔采取血樣，測(cè)定藥物的血漿濃度隨時(shí)間推移如何變化。使用標(biāo)準(zhǔn)模型，可以用隨時(shí)間推移的血漿濃度-時(shí)間曲線計(jì)算化合物的絕對(duì)生物利用度(以百分?jǐn)?shù)表示)。典型方法的示例如下所述。
將1、10或75mg/kg的本發(fā)明化合物或母體化合物i.p.、i.v.或p.o.給藥至小鼠。在5、10、15、30、45、60、90、120、180、240、360、420和2880分鐘時(shí)采取血樣，用HPLC測(cè)定血樣中的本發(fā)明化合物或母體化合物的濃度。然后可以用血漿濃度-時(shí)間曲線派生出關(guān)鍵參數(shù)，如血漿濃度-時(shí)間曲線下面積(AUC-這與到達(dá)體循環(huán)的未變化的藥物總量直接成比例)、最大(峰)血漿藥物濃度、出現(xiàn)最大血漿藥物濃度的時(shí)間(峰時(shí)間)、用于準(zhǔn)確測(cè)定生物利用度的另外的因素(包括化合物的終末半衰期、機(jī)體總清除率、穩(wěn)態(tài)分布容積和F％)。然后，用非隔室方法或隔室方法分析這些參數(shù)，以得到計(jì)算的百分比生物利用度，這種類型的方法的示例參見(jiàn)Egorin等人2002和其中的參考文獻(xiàn)。
上面提到的本發(fā)明化合物或其制劑可以用任何常規(guī)方法給藥，例如但不限于，可以將它們胃腸外(包括靜脈內(nèi)給藥)、口服、局部(包括經(jīng)頰、舌下或經(jīng)皮)、經(jīng)醫(yī)療裝置(例如斯滕特(stent))、經(jīng)吸入或注射(皮下或肌內(nèi))給藥。治療可以包括單劑量或歷經(jīng)一段時(shí)間的多劑量的治療。
盡管可以將本發(fā)明化合物單獨(dú)給藥，但是優(yōu)選將它與一種或多種可接受的載體一起作為藥物制劑提供。因此，提供了包含本發(fā)明化合物和一種或多種藥學(xué)上可接受的稀釋劑或載體的藥物組合物。在與本發(fā)明化合物可配伍且對(duì)其受試者無(wú)害的意義上，該稀釋劑或載體必須是“可接受的”。適當(dāng)?shù)妮d體的示例在下面進(jìn)行詳細(xì)描述。
本發(fā)明化合物可以單獨(dú)給藥或與其它治療藥物組合給藥。兩種(或多種)藥物共同給藥可以使所使用的每種藥物的劑量顯著降低，因此減少可見(jiàn)的副作用。還提供了包含本發(fā)明化合物和另外的治療藥物以及一種或多種藥學(xué)上可接受的稀釋劑或載體的藥物組合物。
在另一方面，本發(fā)明提供了與使用另一種藥物的治療組合的本發(fā)明化合物在治療癌癥或B細(xì)胞惡性腫瘤中的用途。
在一個(gè)實(shí)施方案中，將本發(fā)明化合物與另一種治療藥物共同給藥用于治療癌癥或B細(xì)胞惡性腫瘤，優(yōu)選的藥物包括但不限于甲氨蝶呤、leukovorin、阿霉素、prenisone、博來(lái)霉素、環(huán)磷酰胺、5-氟尿嘧啶、紫杉醇、多西紫杉醇、長(zhǎng)春新堿、長(zhǎng)春堿、長(zhǎng)春瑞濱、多柔比星、他莫昔芬、托瑞米芬、醋酸甲地孕酮、阿那曲唑、戈舍瑞林、抗HER2單克隆抗體(如HerceptinTM)、卡培他濱、鹽酸雷洛昔芬、EGFR抑制劑(如Iressa、TarcevaTM、ErbituxTM)、VEGF抑制劑(如AvastinTM)、蛋白酶體抑制劑(如VelcadeTM)或Glivec。另外，可以將給藥本發(fā)明化合物與其它治療聯(lián)合，所述其它治療包括但不限于放療或手術(shù)。
制劑可以方便地以單位劑型提供，并可以用藥學(xué)領(lǐng)域公知的任何方法制備。這類方法包括如下步驟將活性成分(本發(fā)明化合物)與包含一種或多種助劑的載體混合。通常如下制備制劑將活性成分與液體載體或微粉化固體載體或兩者均勻并緊密地混合，然后，如果需要的話，使產(chǎn)品成形。
本發(fā)明化合物通常以包含活性成分的藥物制劑形式口服或經(jīng)任何胃腸外途徑給藥，所述活性成分任選以在藥學(xué)上可接受的劑型中的非毒性的有機(jī)或無(wú)機(jī)的酸或堿加成鹽形式存在。根據(jù)治療的疾病和患者以及給藥途徑，所述組合物可以以不同劑量給藥。
例如，本發(fā)明化合物可以以片劑、膠囊、珠劑(ovules)、酏劑、溶液劑或混懸劑形式口服、經(jīng)頰或舌下給藥，上述制劑可以含有矯味劑或著色劑并可用于速釋、緩釋或控釋使用。
上述片劑可以包含賦形劑，例如微晶纖維素、乳糖、檸檬酸鈉、碳酸鈣、磷酸氫鈣和甘氨酸；崩解劑，如淀粉(優(yōu)選玉米淀粉、馬鈴薯淀粉或木薯淀粉)、羥基乙酸淀粉鈉、交聯(lián)羧甲基纖維素鈉和某些復(fù)合硅酸鹽類；以及制粒粘合劑，如聚乙烯吡咯烷酮、羥丙基甲基纖維素(HPMC)、羥丙基纖維素(HPC)、蔗糖、明膠和阿拉伯膠。此外，還可以包含潤(rùn)滑劑，如硬脂酸鎂、硬脂酸、山崳酸甘油酯和滑石粉。
相似類型的固體組合物也可以作為明膠膠囊中的填充物使用。就此而言，優(yōu)選的賦形劑包括乳糖(lactose)、淀粉、纖維素、乳糖(milk sugar)或高分子量的聚乙二醇類。對(duì)于含水的混懸劑和/或酏劑而言，本發(fā)明化合物可以與下列各種物質(zhì)混合甜味劑或矯味劑、色素或染料；乳化劑和/或助懸劑；稀釋劑，如水、乙醇、丙二醇和甘油；以及它們的組合。
通過(guò)壓制或模制可以任選與一種或多種助劑制備片劑。壓制片劑可以如下制備在適當(dāng)?shù)臋C(jī)器中將自由流動(dòng)形式(如粉末或顆粒)的任選與下列物質(zhì)混合的活性成分壓片，所述物質(zhì)為粘合劑(如聚維酮、明膠、羥丙基甲基纖維素)、潤(rùn)滑劑、惰性稀釋劑、防腐劑、崩解劑(如羥基乙酸淀粉鈉、交聯(lián)聚維酮、交聯(lián)羧甲基纖維素鈉)、表面活性劑或分散劑。通過(guò)在適當(dāng)?shù)臋C(jī)器中將用惰性液體稀釋劑潤(rùn)濕的粉末化合物的混合物模制，可以制備模制片劑。該片劑可以被任選包衣或壓痕，并可以例如使用提供所需釋放模式的各種比例的羥丙基甲基纖維素配制該制劑，以使其中的活性成分緩釋或控釋釋放。
根據(jù)本發(fā)明的適于口服給藥的制劑可以以下列形式提供各獨(dú)立(discrete)的單位，如膠囊、袋裝劑或片劑，所述每種各獨(dú)立的單位含有預(yù)定量的活性成分；散劑或顆粒劑；在含水液體或非水液體中的溶液劑或混懸劑；或水包油的液體乳劑或油包水的液體乳劑?；钚猿煞诌€可以以丸劑(bolus)、煎膏劑(electuary)或糊劑形式提供。
適于口腔局部給藥的制劑包括錠劑，該錠劑包含在矯味基質(zhì)(通常為蔗糖和阿拉伯膠或黃蓍膠)中的活性成分；軟錠劑，該軟錠劑包含在惰性基質(zhì)(如明膠和甘油，或者蔗糖和阿拉伯膠)中的活性成分；和漱口藥，該漱口藥包含在適當(dāng)?shù)囊后w載體中的活性成分。
應(yīng)當(dāng)理解，除了上面特別提到的成分外，本發(fā)明制劑還可以包含本領(lǐng)域中與所述制劑類型相關(guān)的其它常規(guī)物質(zhì)，例如那些適于口服給藥的制劑可以包含矯味劑。
適于局部給藥的藥物組合物可以制成軟膏劑、乳膏劑、混懸劑、洗劑、散劑、溶液劑、糊劑、凝膠劑、浸藥的敷裹劑(impregnated dressings)、噴霧劑、氣霧劑或油劑、經(jīng)皮給藥裝置(transdermal devices)、撲粉劑(dustingpowders)等。這些含有活性成分的組合物可以經(jīng)常規(guī)方法制備。因此，它們還可以包含可配伍的常規(guī)載體和添加劑，例如防腐劑、輔助藥物滲透的溶劑、乳膏劑或軟膏劑中的軟化劑以及洗劑所用的乙醇或油醇。這些載體可以占組合物的約1％至約98％。更通常地，它們將至多占組合物的約80％。僅用于舉例說(shuō)明，乳膏劑或軟膏劑如下制備將足量的親水材料與足量的含有約5-10％(重量)的所述化合物的水混合，以制備具有所需稠度的乳膏劑或軟膏劑。
適于經(jīng)皮給藥的藥物組合物可以以各獨(dú)立的貼劑提供，該貼劑將與受試者的表皮緊密接觸較長(zhǎng)時(shí)間。例如，可以通過(guò)電離子透入療法從貼劑中遞送活性成分。
對(duì)于應(yīng)用于外部組織，例如口腔和皮膚，組合物優(yōu)選以局部軟膏劑或乳膏劑施用。當(dāng)配制在軟膏劑中時(shí)，活性成分可以與石蠟族軟膏基質(zhì)或水可混溶的軟膏基質(zhì)一起使用。
或者，可以將活性成分配制在含有水包油型乳膏基質(zhì)或油包水型基質(zhì)的乳膏劑中。
對(duì)于胃腸外給藥而言，用活性成分和無(wú)菌溶媒制備液體單位劑型，所述溶媒例如為(但不限于)水、醇類、多元醇類、甘油和植物油類，優(yōu)選水。根據(jù)所用的溶媒和濃度，活性成分可以混懸或者溶解在該溶媒中。在制備溶液劑時(shí)，可以將活性成分溶解在注射用水中并過(guò)濾除菌，然后裝入適當(dāng)?shù)男∑炕虬碴持胁⒎庋b。
可以將例如局麻藥、防腐劑和緩沖劑的物質(zhì)溶解在溶媒中，這是有利的。為了提高穩(wěn)定性，在裝入小瓶中后可以將組合物冷凍，并在真空下除去水。然后將干燥的冷凍粉末密封在小瓶中，并可以附隨提供裝有注射用水的小瓶，以在使用前重構(gòu)上述液體。
除了活性成分混懸在而不是溶解在溶媒中和不能用過(guò)濾除菌外，用與溶液劑基本相同的方法制備胃腸外混懸劑。可以在混懸于無(wú)菌溶媒中之前，通過(guò)暴露于環(huán)氧乙烷中將活性成分滅菌。下述是有利的，表面活性劑或潤(rùn)濕劑包含在組合物中，以使活性成分易于分布均勻。
本發(fā)明化合物還可以用本領(lǐng)域公知的醫(yī)療裝置給藥。例如，在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的藥物組合物可以用無(wú)針的皮下注射裝置給藥，例如在U.S.5,399,163、U.S.5,383,851、U.S.5,312,335、U.S.5,064,413、U.S.4,941,880、U.S.4,790,824或U.S.4,596,556中所公開(kāi)的裝置。可在本發(fā)明中使用的眾所周知的植入物(implants)和模塊的示例包括US 4,487,603，其公開(kāi)了用于以控制速度遞送藥物的可植入的微量輸注泵；US 4,486,194，其公開(kāi)了通過(guò)皮膚給藥的治療裝置；US 4,447,233，其公開(kāi)了以精確輸注速度遞送藥物的藥物輸注泵；US 4,447,224，其公開(kāi)了用于連續(xù)藥物遞送的流速可變的植入式輸注裝置；US 4,439,196，其公開(kāi)了具有多個(gè)隔室的滲透型藥物遞送系統(tǒng)。許多其它此類植入物、遞送系統(tǒng)和模塊對(duì)本領(lǐng)域技術(shù)人而言是公知的。
本發(fā)明化合物的給藥劑量將根據(jù)具體化合物、所涉及的疾病、受試者、疾病的性質(zhì)及嚴(yán)重程度、受試者的身體條件以及所選的給藥途徑變化。本領(lǐng)域技術(shù)人員可以很容易地確定適當(dāng)?shù)膭┝俊?br> 按重量計(jì)算，所述組合物可以含有大于0.1％、優(yōu)選5-60％、更優(yōu)選10-30％的本發(fā)明化合物，這取決給藥的方法。
本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)明白，本發(fā)明化合物的個(gè)體劑量的最佳量和范圍將由下列因素決定所治療的疾病的性質(zhì)和程度；給藥的劑型、途徑和位置；以及所治療的具體受試者的年齡和狀況，醫(yī)師將最終確定適當(dāng)?shù)氖褂脛┝?。只要適當(dāng)，可以經(jīng)常重復(fù)給予該劑量。如果副作用加重了，可以根據(jù)正常臨床實(shí)踐改變或減少該劑量的量和/或頻率。
實(shí)施例 通用方法 培養(yǎng)物的發(fā)酵 用于細(xì)菌菌株珍貴橙色束放線菌pretiosum亞種ATCC 31280(US4,315,989)和Actinosynnema mirum DSM 43827(KCC A-0225，Watanabe等人，1982)生長(zhǎng)的條件描述在專利US 4,315,989和US 4,187,292中。兩種菌株都可以在ISP2瓊脂(Shirling，E.B.和Gottlieb，D.(1966)國(guó)際細(xì)菌分類學(xué)雜志(International Journal of Systematic Bacteriology)16313-340)上在28℃下生長(zhǎng)2-3天，并用于接種種子培養(yǎng)基(20份葡萄糖、30份可溶性淀粉、10份玉米漿、10份豆粉、5份蛋白胨、3份氯化鈉和5份碳酸鈣/1000份水(體積)，pH 7.0，參見(jiàn)US 4,315,989和US 4,187,292)。將接種的種子培養(yǎng)基在28℃下振搖培養(yǎng)48小時(shí)。為了生產(chǎn)macbecin和18，21-二氫macbecin，最初將發(fā)酵培養(yǎng)基(5％甘油、2％玉米漿、2％酵母提取物、2％KH2PO4、0.5％MgCl2和0.1％CaCO3，pH6.5，參見(jiàn)US 4,315,989和US4,187,292)在28℃培養(yǎng)24小時(shí)，然后在26℃培養(yǎng)4至6天。然后收獲培養(yǎng)物，用于提取。
用于LCMS分析的培養(yǎng)液提取物 加入培養(yǎng)液(1mL)和乙酸乙酯(1mL)，并混合15-30分鐘，然后離心10分鐘。收集0.5mL有機(jī)層，蒸發(fā)至干，然后再溶解在0.25mL甲醇中。
用于發(fā)酵液分析和體內(nèi)轉(zhuǎn)化研究的LCMS分析方法 LCMS是在與Bruker Daltonics Esquire 3000+電噴霧質(zhì)譜儀(在正離子模式下操作)聯(lián)用的整合的Agilent HP1100 HPLC系統(tǒng)上進(jìn)行的。層析在Phenomenex Hyperclone柱(C18 BDS，3u，150×4.6mm)上完成，用乙腈/水(40/60)至乙腈/水(80/20)的線性梯度洗脫劑洗脫超過(guò)11分鐘，流速為1mL/min。
合成 除非另外說(shuō)明，所有的反應(yīng)在無(wú)水條件下、在烘干且在真空下冷卻的玻璃器皿中使用無(wú)水溶劑進(jìn)行。在聯(lián)接至Bruker Daltonics Esquire3000電噴霧質(zhì)譜儀(在正離子模式和負(fù)離子模式下交替掃描)的Agilent 1100HPLC上，通過(guò)LC-UV-MS監(jiān)測(cè)反應(yīng)。層析在Phenomenex Hyperclone柱BDS C18 3u(150×4.6mm)上完成，用線性梯度的乙腈∶水(40∶60至100)洗脫超過(guò)11分鐘，流速為1mL/min。
水溶性實(shí)驗(yàn) 動(dòng)力學(xué)測(cè)定 制備化合物在DMSO中的原液(10mM)。將每份等分試樣(0.01mL)用PBS溶液或DMSO補(bǔ)至0.5mL。將制得的0.2mM溶液在IKAvibraxVXR搖床上在室溫中振搖。
振搖后，將得到的溶液或混懸液轉(zhuǎn)移至2mL艾本德(Eppendorf)管中，并在13200rpm下離心30分鐘。然后，用聯(lián)接至Bruker DaltonicsEsquire3000電噴霧質(zhì)譜儀的Agilent 1100 HPLC分析上清液的等分試樣(詳述見(jiàn)文中的具體實(shí)施例)。層析在Phenomenex Hyperclone柱BDS C183u(150×4.6mm)上完成，用線性梯度的乙腈∶水(40∶60至100)洗脫超過(guò)11分鐘，流速為1mL/min。在λ＝258和280nm下監(jiān)測(cè)UV吸收。
所有的分析一式三份進(jìn)行，通過(guò)將個(gè)體化合物在PBS中的溶解度與假定為100％的0.2mM時(shí)在DMSO中的溶解度比較，計(jì)算它們的溶解度。
熱力學(xué)測(cè)定 將2、5、10和/或20mM的化合物溶液的適當(dāng)量的化合物與適當(dāng)量的5％葡萄糖溶液和DMSO在棕色玻璃瓶中混合，并在IKAvibrax VXR搖床上在室溫振搖。6小時(shí)后，將得到的混懸液/溶液在13200rpm離心20分鐘。
然后用聯(lián)接至Bruker Daltonics Esquire3000電噴霧質(zhì)譜儀的Agilent1100 HPLC分析上清液的等分試樣(詳情見(jiàn)文中的具體實(shí)施例)。層析在Phenomenex Hyperclone柱BDS C18 3u(150×4.6mm)上完成，用線性梯度的乙腈∶水(40∶60至100)洗脫超過(guò)11分鐘，流速為1mL/min。在λ＝258和280nm下監(jiān)測(cè)UV吸收。
所有的分析一式三份進(jìn)行，通過(guò)將個(gè)體化合物在5％葡萄糖溶液中的溶解度與假定為100％的在DMSO中的溶解度相比，計(jì)算它們的溶解度。
18，21-二氫macbecin的前藥的裂解實(shí)驗(yàn) 測(cè)定前藥裂解為它們的母體化合物的速度的實(shí)驗(yàn)如文中所述進(jìn)行。這些實(shí)驗(yàn)在血漿、血液或緩沖液中進(jìn)行。使用含有EDTA或肝素作為抗凝劑的混合的小鼠、人或混合的大鼠血漿或者去纖維蛋白的兔全血(小鼠和大鼠血漿以及兔血得自Harlan-Sera Labs，人血漿得自BiopredicInternational)。
如果使用血漿，則采用下面的方法將血漿在水浴中在37℃下解凍。將血漿分加至各個(gè)20mL管中，對(duì)于每種測(cè)試化合物而言，使每個(gè)進(jìn)行分析的時(shí)間點(diǎn)能夠使用0.5mL血漿。含有血漿的管還包括用作對(duì)照品的。將這些管在37℃下孵育15分鐘。
將每種測(cè)試化合物重構(gòu)在DMSO或其它適當(dāng)?shù)娜軇┲?。將血漿從水浴中移出，將化合物加至血漿中，得到0.001-0.010mg/mL的終濃度，并保持溶劑的終濃度低于5％。在對(duì)照的情況中，加入等體積的DMSO或其它溶劑。在加入化合物后，立即從管中取出0.4mL樣品，轉(zhuǎn)移至2mL微量離心管中。迅速將血漿放回到37℃水浴中。在一定時(shí)間點(diǎn)(例如30分鐘后，然后每小時(shí))取出0.4mL樣品，并立即將樣品在-80℃下冷凍。
用相同的方法還對(duì)測(cè)試化合物在特定pH的磷酸鹽緩沖液(PBS)中在每一實(shí)驗(yàn)過(guò)程的穩(wěn)定性進(jìn)行分析。
在最后時(shí)間點(diǎn)取樣后，將樣品如下提取。
對(duì)于每個(gè)時(shí)間點(diǎn)樣品而言，將Oasis MCX(3cc/60mg)或Oasis HLB(333/60mg)柱(cartridge)用2mL甲醇接著用2mL水處理和平衡。將1.5mL水和0.002mg/mL的內(nèi)標(biāo)物(IS)加至每一份0.4mL血漿樣品中。將這上樣到柱子上。用2mL水沖洗柱子，將被測(cè)物洗脫在2mL甲醇中。不用進(jìn)一步處理，采用下述條件用LC/MS分析該提取物。
如果使用全血，如去纖維蛋白的兔全血，則采用下面的方法將血液在水浴中37℃下解凍。將血液分加至各個(gè)20mL管中，對(duì)于每種測(cè)試化合物而言，使每個(gè)進(jìn)行分析的時(shí)間點(diǎn)能夠使用0.5mL。含有血液的管還包括用作對(duì)照的。將這些管在37℃下孵育15分鐘。
將每種測(cè)試化合物重構(gòu)在DMSO或其它適當(dāng)?shù)娜軇┲?。將血液從水浴中移出，加入化合物，得?.001-0.010mg/mL的終濃度，并保持溶劑的終濃度低于5％。在對(duì)照的情況中，加入等體積的DMSO或其它溶劑。在加入化合物后，立即從管中取出0.4mL樣品，轉(zhuǎn)移至2mL微量離心管中。迅速將血漿放回到37℃水浴中。在一定時(shí)間點(diǎn)(例如30分鐘后，然后每小時(shí))取出0.4mL樣品，并立即將樣品在-80℃下冷凍。向每份2mL微量離心管中的0.4mL樣品中加入1.5mL 0.1M磷酸二氫鉀，將該管倒轉(zhuǎn)以混合。以0.002mg/mL濃度加入在乙腈中的穩(wěn)定內(nèi)標(biāo)物(IS)。將這在IKA搖床上在1500rpm下?lián)u動(dòng)5分鐘。在5000rpm離心5分鐘，致使產(chǎn)生由紅細(xì)胞和沉淀的蛋白質(zhì)組成的稠密沉淀物(pellet)和粉紅色/紅色的上清液。將Oasis HLB(333/60mg)柱用2mL甲醇然后用2mL水平衡。將1.5mL上清液轉(zhuǎn)移至柱子上，當(dāng)需要時(shí)，可通過(guò)施加輕度正壓以使流動(dòng)。用注射器加入一柱體積的空氣，快速通過(guò)柱子，將其弄干，用1mL乙腈洗脫被測(cè)物。將0.01mL 10％甲酸加入到洗脫液中，然后將其轉(zhuǎn)移至HPLC小瓶中，用于分析。
用于測(cè)定裂解速度的不同LCMS分析方法為 方法A 進(jìn)樣體積0.03mL。HPLC在Phenomenex Hyperclone 3微米BDSC18柱(150mm×4.60mm)上進(jìn)行，使用的流動(dòng)相 流動(dòng)相A0.1％甲酸水溶液 流動(dòng)相B0.1％甲酸乙腈溶液 流速1mL/min。
HPLC條件是30％B洗脫2分鐘，然后在14分鐘內(nèi)線性梯度至100％B，并用100％B等度洗脫4分鐘。利用UV吸收(255nm)和質(zhì)譜法(使用聯(lián)接至HPLC的Bruker Daltonics Esquire 3000+質(zhì)譜儀)檢測(cè)被測(cè)物。被測(cè)物根據(jù)提取物的離子色譜圖定量。為了保證定量可信，對(duì)有用的濃度范圍而言，檢驗(yàn)質(zhì)譜儀的線性響應(yīng)。
方法B 進(jìn)樣體積0.030mL。HPLC在Waters Symmetry C8 3.5微米柱(50mm×2.1mm)上進(jìn)行，使用的流動(dòng)相 流動(dòng)相A0.1％甲酸水溶液 流動(dòng)相B0.1％甲酸乙腈溶液 流速1mL/min。
HPLC條件是10％B洗脫1分鐘，然后在7分鐘內(nèi)線性梯度至100％B，并用100％B等度洗脫2分鐘。利用UV吸收(255nm)和質(zhì)譜法(使用聯(lián)接至HPLC的Bruker Daltonics Esquire 3000+質(zhì)譜儀)檢測(cè)被測(cè)物。被測(cè)物根據(jù)提取物的離子色譜圖定量。為了保證定量可信，對(duì)有用的濃度范圍而言，檢驗(yàn)質(zhì)譜儀的線性響應(yīng)。
方法C 進(jìn)樣體積0.02mL。HPLC在Phenomenex Hyperclone 3微米BDSC18柱(150mm×4.60mm)上進(jìn)行，使用的流動(dòng)相 流動(dòng)相A0.1％甲酸水溶液 流動(dòng)相B0.1％甲酸乙腈溶液 流速1mL/min。
HPLC條件是10％B洗脫1分鐘，然后在7分鐘內(nèi)線性梯度至100％B，并用100％B等度洗脫2分鐘。利用UV吸收(255nm)和質(zhì)譜法(使用聯(lián)接至HPLC的Bruker Daltonics Esquire 3000+質(zhì)譜儀)檢測(cè)被測(cè)物。被測(cè)物根據(jù)提取出物的離子色譜圖定量。為了保證定量可信，對(duì)有用的濃度范圍而言，檢驗(yàn)質(zhì)譜儀的線性響應(yīng)。
抗癌活性的體外生物測(cè)定 在單層增殖實(shí)驗(yàn)中的一組12種人腫瘤細(xì)胞系中的化合物抗癌活性體外評(píng)價(jià)可以在腫瘤測(cè)試試驗(yàn)裝置(Oncotest Testing Facility)，實(shí)驗(yàn)?zāi)[瘤學(xué)研究所(Institute for Experimental Oncology)，Oncotest GmbH，弗萊堡(Freiburg)上進(jìn)行。12種所選細(xì)胞系的特征總結(jié)在表3中。
表3-實(shí)驗(yàn)細(xì)胞系 所述腫瘤測(cè)試細(xì)胞系建立自人腫瘤異種移植物，如Roth等人，(1999)所述。供體異種移植物的來(lái)源如Fiebig等人，(1999)所述。其它細(xì)胞系得自NCI(H460、SF-268、OVCAR-3、DU145、MDA-MB-231、MDA-MB-468)或購(gòu)自DSMZ，Braunschweig，德國(guó)(LNCAP)。
除非另外指出，所有細(xì)胞系在潮濕氣氛(95％空氣，5％CO2)、37℃下在“預(yù)先混合”的培養(yǎng)基中生長(zhǎng)，所述培養(yǎng)基含有RPMI 1640培養(yǎng)基、10％胎牛血清和0.1mg/mL慶大霉素(PAA，Clbe，德國(guó))。
單層實(shí)驗(yàn)-方法簡(jiǎn)述 用改良的碘化丙啶實(shí)驗(yàn)評(píng)價(jià)測(cè)試化合物對(duì)12種人腫瘤細(xì)胞系的生長(zhǎng)的影響(Dengler等人，(1995))。
簡(jiǎn)而言之，通過(guò)胰蛋白酶消化從指數(shù)生長(zhǎng)期培養(yǎng)物中收獲細(xì)胞，計(jì)數(shù)并平鋪在96孔平底微孔板(microtitre plates)中，細(xì)胞密度取決于細(xì)胞系(5-10.000存活細(xì)胞/孔)。在24小時(shí)恢復(fù)(使細(xì)胞重新開(kāi)始指數(shù)生長(zhǎng))后，將0.01mL培養(yǎng)基(每板6個(gè)對(duì)照孔)或含有macbecin的培養(yǎng)基加到孔中。每個(gè)濃度一式三份進(jìn)行平鋪?；衔镆詢煞N濃度使用(0.001mM和0.01mM)。在4天連續(xù)暴露后，將含有或不含測(cè)試化合物的細(xì)胞培養(yǎng)基用0.2mL碘化丙啶(PI)水溶液(7mg/L)替換。為了測(cè)定活細(xì)胞的比例，將板子冷凍，對(duì)細(xì)胞進(jìn)行可滲透化處理。在將板子解凍后，用Cytofluor 4000微孔板讀板儀測(cè)定熒光(激發(fā)光530nm，發(fā)射光620nm)，給出與存活細(xì)胞總數(shù)的直接關(guān)系。
生長(zhǎng)抑制用處理/對(duì)照×100(％T/C)表示。
抗腫瘤效力的體內(nèi)評(píng)價(jià)-方法簡(jiǎn)述 PRXF DU-145是前列腺癌細(xì)胞系，最初從69歲的患有前列腺癌的男子的轉(zhuǎn)移中樞神經(jīng)系統(tǒng)損害中分離得到。將PRXF DU-145細(xì)胞懸液皮下注射到裸鼠中，并將得到的異種移植物在裸鼠中傳代，直到穩(wěn)定的生長(zhǎng)模式建立。
從裸鼠中連續(xù)傳代的異種移植物中獲得腫瘤碎片。從供體小鼠中移除腫瘤后，將它們切成碎片(1-2mm直徑)并置于RPMI 1640培養(yǎng)基中(包含含有L-谷氨酰胺的25mM HEPES緩沖液的RPMI 1640培養(yǎng)基，吉百科(Gibco)，目錄號(hào)52400-025)，直到皮下植入。通過(guò)吸入異氟烷，將受體小鼠麻醉。為了雙向植入，在背部皮膚中做出小的切口。將腫瘤碎片用鑷子進(jìn)行移植。
隨機(jī)地，根據(jù)腫瘤體積，利用“Lindner氏隨機(jī)表(Lindner′sRandomization Tables)”，將帶有腫瘤的動(dòng)物分為治療組和對(duì)照組。僅將帶有適當(dāng)大小的腫瘤(指腫瘤直徑6-8mm，最小可接受的腫瘤直徑5mm)的動(dòng)物進(jìn)行隨機(jī)化。當(dāng)小鼠的最大數(shù)達(dá)到進(jìn)行隨機(jī)化的條件時(shí)，將小鼠進(jìn)行隨機(jī)化。隨機(jī)化的日子指定為第0天。第0天也是給藥的第一天。然后在給予不同劑量方案的小鼠間比較腫瘤生長(zhǎng)。每天對(duì)小鼠進(jìn)行監(jiān)測(cè)，觀察期持續(xù)42天。
在隨機(jī)化的那天(第0天)、然后每周兩次，用測(cè)徑器通過(guò)二維測(cè)量法測(cè)定腫瘤體積。根據(jù)以下公式計(jì)算腫瘤體積(a×b2)×0.5，其中a代表最大的腫瘤直徑且b代表與之垂直的腫瘤直徑。
抗腫瘤活性用與溶媒對(duì)照組比較的最大腫瘤體積抑制進(jìn)行評(píng)價(jià)。
個(gè)體腫瘤的相對(duì)體積(RTVs)用第X天的個(gè)體腫瘤體積(Tx)除以第0天的個(gè)體腫瘤體積(T0)乘以100％計(jì)算。

組腫瘤體積以組中所有腫瘤的中值(median)RTV(組中值RTV)表示。組中值RTV值用來(lái)繪制生長(zhǎng)曲線并且用于治療評(píng)價(jià)。
就每一組而言，在特定天的腫瘤抑制(以％表示的T/C)如下計(jì)算各個(gè)測(cè)試組的中值RTV值和溶媒對(duì)照組的中值RTV值的比例乘以100％。

對(duì)于各治療而言，在實(shí)驗(yàn)期間特定測(cè)試組的記錄的最小(或最佳)T/C％值代表最大抗腫瘤活性。
為了評(píng)價(jià)統(tǒng)計(jì)意義上的腫瘤抑制，進(jìn)行Mann-Whitney-Wilcoxon U檢驗(yàn)。該檢驗(yàn)一方面比較溶媒對(duì)照組中的根據(jù)相對(duì)體積的個(gè)體腫瘤等級(jí)(ranking)，另一方面比較有價(jià)值的測(cè)試組中的根據(jù)相對(duì)體積的個(gè)體腫瘤等級(jí)。根據(jù)常規(guī)，p值＜0.05表明腫瘤抑制顯著。
中間體1用Actinosynnema mirum DSM 43827和珍貴橙色束放線菌 pretiosum亞種ATCC 31280在falcon管中生產(chǎn)macbecin 將含有10mL種子培養(yǎng)基的falcon管用從生長(zhǎng)在ISP2瓊脂上的稠密的A.mirum菌苔上切得的瓊脂塞(plug)進(jìn)行接種，并如通用方法中所述進(jìn)行培養(yǎng)。用種子培養(yǎng)基(0.5mL)接種10mL生產(chǎn)培養(yǎng)基，然后如在通用方法部分所述進(jìn)行培養(yǎng)和提取。LCMS分析顯示存在macbecin([M+Na]+，m/z＝581.3)，其在9.5分鐘時(shí)洗脫出來(lái)。
中間體1(另一種制備方法)用Actinosynnema mirum DSM 43827在15L發(fā)酵罐中生產(chǎn)macbecin 5個(gè)2L錐形搖瓶，每個(gè)加入300mL種子培養(yǎng)基，并且每瓶用15個(gè)從稠密生長(zhǎng)的A.mirum菌苔上切得的瓊脂塞進(jìn)行接種。將培養(yǎng)物在28℃振搖48小時(shí)。這些種子培養(yǎng)物用于接種(10％接種物)含有15L生產(chǎn)培養(yǎng)基的發(fā)酵容器。發(fā)酵在葉輪的槳尖速度為1.18m/s-2.75m/s、空氣流為1vvm的條件下進(jìn)行；將這些物質(zhì)在28℃加熱24小時(shí)，然后降至24℃。在發(fā)酵進(jìn)行期間，用1M H2SO4和1M NaOH將pH調(diào)節(jié)至pH 6.5-7。將擋板(baffles)傾斜至45°，并根據(jù)需氧量(溶解的氧最少維持在30％)調(diào)節(jié)葉輪的槳尖速度。在高壓滅菌前，然后如發(fā)酵進(jìn)行期間所需和當(dāng)在發(fā)酵進(jìn)行期間需要時(shí)，以0.2％v/v的量加入止泡劑。230小時(shí)后，收獲發(fā)酵罐。LCMS分析顯示存在macbecin([M+Na]+，m/z＝581.3)，其在9.5分鐘后洗脫出來(lái)。
將發(fā)酵液在3500rpm離心30分鐘，以使細(xì)胞從上清液中分離出。然后，將上清液用等體積的乙酸乙酯分配3次。將細(xì)胞沉淀物用等體積的丙酮提取兩次。并合并有機(jī)部分，在真空中除去溶劑。將得到的含水漿狀物用等體積的乙酸乙酯萃取三次，將合并的有機(jī)部分濃縮，得到粗提取物。
在溶解于丙酮前，將快速(flash)硅膠加至粗提取物中，然后真空中除去溶劑。將浸透的硅膠加至用己烷預(yù)處理的開(kāi)放快速硅膠柱上。將這用階式梯度的己烷∶乙酸乙酯(100∶0、80∶20、75∶25、70∶30、50∶50、0∶100)洗脫，最后用乙酸乙酯∶甲醇(50∶50、0∶100)洗脫。每一階流分的體積約為1L溶劑混合物。合并含有macbecin的流分，蒸發(fā)至干。用制備型反相HPLC在Phenomenex Luna柱(C18，10微米，250×5u，250×21.20mm)上完成進(jìn)一步純化，用洗脫劑A(乙腈∶水，20∶80)至洗脫劑B(乙腈)的梯度洗脫劑洗脫超過(guò)30分鐘，流速為21mL/min。合并含有macbecin的流分，濃縮得到黃色粉末(45mg)。使用Bruker Advance 500MHz冷凍探頭儀器，利用多維NMR波譜法確定macbecin(在CDCl3中)的結(jié)構(gòu)，見(jiàn)表4。這與公布的數(shù)據(jù)一致(Muroi等人1981)。

表4 實(shí)施例1合成18-O-(N，N’-二甲基乙二胺-N’-氨基甲?；?-18，21-二氫macbecin鹽酸鹽，1(路線1) Macbecin轉(zhuǎn)化為18，21-二氫macbecin 將Macbecin(107.8mg，0.193mmol)溶解在乙酸乙酯(25mL)中，并用96mM連二亞硫酸鈉溶液(3×5mL)處理。每一次處理時(shí)，將各相在分液漏斗中劇烈混合，并放出水層。有機(jī)層由深黃色變?yōu)榛緹o(wú)色。然后將該有機(jī)層用水(3×10mL)洗滌，然后用無(wú)水硫酸鈉干燥，過(guò)濾，在減壓下將溶劑除去，得到18，21-二氫macbecin，為灰白色玻璃狀固體(105.0mg，0.187mmol，97％分離產(chǎn)率)。18，21-二氫macbecin不用進(jìn)一步純化即可使用。
LCMSmacbecin，RT＝8.2分鐘([M-H]-，m/z＝557.5，[M+Na]+，m/z＝581.2)UVλ最大＝256(肩峰)nm；18，21-二氫macbecin，RT＝3.5分鐘([M-H]-，m/z＝559.5，[M+Na]+，m/z＝583.3)UVλ最大＝302nm。
N-叔丁氧羰基-N，N’-二甲基乙二胺的制備 將N，N’-二甲基乙二胺(1.0g，11.3mmol)溶解在無(wú)水二氯甲烷(10mL)中，并用三乙胺(1.6mL，11.3mmol)處理。將混合物冷卻到0℃，加入二碳酸二叔丁酯(2.5g，11.3mmol)。將反應(yīng)物在0℃攪拌30分鐘，然后在室溫下攪拌2小時(shí)。然后用水(10mL)洗滌反應(yīng)混合物，將水層用另外的二氯甲烷(2×10mL)萃取。將合并的有機(jī)層經(jīng)Na2SO4干燥并在真空下除去溶劑。經(jīng)柱色譜純化(40∶8∶1，二氯甲烷∶甲醇∶氨水)，得到所需的N-叔丁氧羰基-N，N’-二甲基乙二胺(508mg，24％)，為無(wú)色油狀物。
用N-(叔丁氧羰基)-N，N’-二甲基乙二胺對(duì)18，21-二氫macbecin進(jìn)行O-?；?，制備18-O-[(N-叔丁氧羰基)-N，N’-二甲基乙二胺-N’-氨基甲酰基]-18，21-二氫macbecin 將18，21-二氫macbecin(2.00mg，3.6×10-3mmol)溶解在脫氣的無(wú)水二氯甲烷(1mL)中。加入氯甲酸4-硝基苯酯(0.86mg，4.3×10-3mmol)，然后加入2，6-二甲基吡啶(2.48×10-3mL，21.4×10-3mmol)。將反應(yīng)混合物加熱回流4小時(shí)，以形成碳酸酯中間體。加入N-叔丁氧羰基-N，N’-二甲基乙二胺(2.70mg，14.2×10-3mmol)，并將反應(yīng)物再加熱回流2小時(shí)。用水(2mL)洗滌反應(yīng)混合物，并對(duì)該粗制物質(zhì)進(jìn)行分析。數(shù)據(jù)與所需的18-O-[(N-叔丁氧羰基)-N，N’-二甲基乙二胺-N’-氨基甲?；鵠-18，21-二氫macbecin相符。
LCMS18-O-[(N-叔丁氧羰基)-N，N’-二甲基乙二胺-N’-氨基甲酰基]-18，21-二氫macbecin，RT＝6.8分鐘([M-H]-，m/z＝773.4)，UVλ最大＝266nm。
18-O-[(N-叔丁氧羰基)-N，N’-二甲基乙二胺-N’-氨基甲?；鵠-18，21-二氫macbecin脫保護(hù)，制備18-O-(N，N’-二甲基乙二胺-N’-氨基甲?；?-18，21-二氫macbecin鹽酸鹽 將18-O-[(N-叔丁氧羰基)-N，N’-二甲基乙二胺-N’-氨基甲酰基]-18，21-二氫macbecin(20mg，25.8μmol)用過(guò)量的2M HCl的乙醚溶液處理，直到起始原料全部消耗完。通過(guò)用乙醚研磨(tituration)純化殘留物，得到18-O-(N，N’-二甲基乙二胺-N’-氨基甲?；?-18，21-二氫macbecin鹽酸鹽(11mg，60％)，為淺黃色固體。
直接進(jìn)樣的MS18-O-(N，N’-二甲基乙二胺-N’-氨基甲?；?-18，21-二氫macbecin，[M-H]+，m/z＝673.5，[M+Na]+，m/z＝697.4，[M+NH]+，m/z＝675.4。
實(shí)施例2合成18-O-(N，N’-二甲基乙二胺-N’-氨基甲?；?-18，21-二氫macbecin鹽酸鹽，1(路線2) 18-O-(4-硝基苯基碳酸酯)-18，21-二氫macbecin的制備 將Macbecin II(0.30g，0.54mmol)溶解在無(wú)水二氯甲烷(72ml)中。向該溶液中加入固體氯甲酸4-硝基苯酯(0.183g，0.91mmol)，然后加入2，6-二甲基吡啶(0.217ml，1.87mmol)。在氬氣氣氛、50℃(油浴)下，將反應(yīng)混合物加熱回流5小時(shí)，使反應(yīng)物冷卻至環(huán)境溫度，依次用等體積的1N HCl和水洗滌，經(jīng)Na2SO4干燥，過(guò)濾，在減壓下除去溶劑。將得到的物質(zhì)在硅膠上用不連續(xù)梯度的丙酮的己烷溶液(5-40％丙酮，以5％增量增加)洗脫純化，得到標(biāo)題化合物。分離產(chǎn)率0.310g(79％)。在CDCl3中、400MHz下得到的NMR波譜與標(biāo)題化合物一致。
LCMSRT＝7.2min([M-H]-，m/z＝724.0)。
N-三苯甲基-N，N’-二甲基乙二胺的制備 在氬氣氣氛下，將N，N’-二甲基乙二胺(5.0g，56.7mmol)溶解于二氯甲烷(20ml)中，然后用三乙胺(5.74g，56.7mmol)處理。將攪拌的混合物冷卻至0℃，然后緩慢滴加加入三苯甲基氯(15.82g，56.7mmol)的二氯甲烷(20mL)溶液。加完該溶液后，將反應(yīng)混合物在0℃下再攪拌30分鐘，此時(shí)將冷卻浴移去，使反應(yīng)物回溫至室溫。在氬氣氣氛、室溫下，將混合物攪拌過(guò)夜。將得到的溶液在二氯甲烷和水之間分配，觀察到產(chǎn)物鹽酸鹽的白色沉淀。用10％K2CO3水溶液(100mL)處理該混合物，這導(dǎo)致白色固體溶解并且兩相之間進(jìn)行分配。分離兩相，將水相用二氯甲烷(2×200mL)萃取。將合并的有機(jī)萃取物經(jīng)MgSO4干燥，在減壓下除去溶劑。將殘留物在硅膠上用二氯甲烷∶甲醇∶氨水(80∶5∶0.5)洗脫純化。收集純的流分，并在減壓下除去溶劑。通過(guò)加入異丙醇，接著在減壓下除去(3×300mL)，然后置于高真空下，從而除去殘留的水/氨，得到標(biāo)題化合物，為淺黃色固體。分離產(chǎn)率，6.30g(34％)。在CDCl3中、400MHz下得到的1H NMR波譜與標(biāo)題化合物一致。
18-O-(N-三苯甲基-N，N’-二甲基乙二胺-N’-氨基甲酰基)-18-21-二氫macbecin的制備 將18-O-(4-硝基苯基碳酸酯)-18，21-二氫macbecin(0.89g，1.23mmol)溶解在二氯甲烷(40mL)中。然后加入N-三苯甲基-N，N’-二甲基乙二胺(1.21g，3.68mmol)的二氯甲烷(40mL)溶液，將該溶液加熱回流2小時(shí)，然后室溫過(guò)夜。TLC顯示存在起始原料，將混合物再回流2小時(shí)。然后將其冷卻到室溫，用水洗滌，經(jīng)Na2SO4干燥，在減壓下除去溶劑。將得到的物質(zhì)采用色譜法在硅膠上用己烷∶丙酮(5∶3)洗脫，得到淺綠色固體。分離產(chǎn)率0.92g(82％)。在CDCl3中、400MHz下得到的NMR波譜與標(biāo)題化合物一致。
LCMSRT＝11.1分鐘([M-H]-，m/z＝915.6(弱)；[M-H-三苯甲基]-，m/z＝673.4；[M+H-三苯甲基]+，m/z＝675.5)。
制備18-O-(N，N’-二甲基乙二胺-N’-氨基甲?；?-18，21-二氫macbecin鹽酸鹽，1 在氬氣氣氛下，將18-O-(N-三苯甲基-N，N’-二甲基乙二胺-N’-氨基甲?；?-18，21-二氫macbecin(0.10g，0.11mmol)溶解在無(wú)水二氯甲烷(40mL)中，并用冰/鹽浴冷卻至-5℃。將2M HCl的乙醚溶液(0.104mL，0.21mmol)溶解在無(wú)水二氯甲烷(0.2mL)中，然后滴加至上述冷卻的底物溶液中。將反應(yīng)物在-5℃攪拌5分鐘，然后在室溫?cái)嚢?0分鐘。加入己烷(40mL)，以沉淀產(chǎn)物鹽和剩余的起始原料。將沉淀研磨，然后用冷乙醚洗滌兩次，以除去任何起始原料和其它雜質(zhì)。分離產(chǎn)率0.060g(77％)。
LCMSRT＝3.1分鐘([M-H]-，m/z＝673.5；[M+H]+，m/z＝675.4)。
實(shí)施例3合成18-O-(N-甲基乙二胺-N’-氨基甲?；?-18，21-二氫macbecin鹽酸鹽，2 N-三苯甲基-N-甲基乙二胺的制備 在氬氣氣氛下，將N-甲基乙二胺(5.96g，80.41mmol)溶解在二氯甲烷(100mL)中。將攪拌的混合物冷卻至0℃，然后緩慢滴加加入三苯甲基氯(6.47g，23.21mmol)的二氯甲烷(40ml)溶液。加完該溶液后，將反應(yīng)混合物在0℃再攪拌30分鐘，此時(shí)將冷卻浴移去，并使反應(yīng)物回溫到室溫。在氬氣氣氛、室溫下，將該混合物攪拌過(guò)夜。從得到的溶液中除去溶劑，加入乙酸乙酯(200mL)和飽和NaHCO3水溶液(200mL)。將得到的混合物振搖，分離，將水層用另一等體積的乙酸乙酯萃取。將合并的有機(jī)物經(jīng)Na2SO4干燥，過(guò)濾，在減壓下除去溶劑。將殘留物在硅膠上用二氯甲烷∶甲醇∶氨水(80∶5∶0.1)洗脫進(jìn)行純化。
觀察到兩個(gè)區(qū)域異構(gòu)體(regioisomers)，并分別將其分離得到。收集標(biāo)題化合物(硅膠上極性更大的)的純的流分，在減壓下除去溶劑。分離產(chǎn)率，1.66g(22％)。在DMSO中、400MHz下得到的1H NMR波譜與標(biāo)題化合物一致，并能夠指定為正確的區(qū)域異構(gòu)體。
18-O-(N-三苯甲基-N-甲基乙二胺-N’-氨基甲?；?-18，21-二氫macbecin的制備 將18-O-(4-硝基苯基碳酸酯)-18，21-二氫macbecin(0.100g，0.14mmol)溶解在二氯甲烷(20ml)中。然后加入N-三苯甲基-N-甲基乙二胺(0.131g，0.41mmol)，將該溶液加熱回流2小時(shí)，然后在室溫下過(guò)夜。用水(20mL)洗滌有機(jī)物，然后經(jīng)無(wú)水Na2SO4干燥，過(guò)濾，在減壓下除去溶劑。將得到的物質(zhì)采用色譜法在硅膠上用己烷∶丙酮(7∶3)洗脫進(jìn)行純化。分離產(chǎn)率0.093g(74％)。在CDCl3中、400MHz下得到的NMR波譜與標(biāo)題化合物一致。
LCMSRT＝11.2分鐘([M-H]-，m/z＝901.4)。
制備18-O-(N-甲基乙二胺-N’-氨基甲?；?-18，21-二氫macbecin鹽酸鹽，2 在氬氣氣氛下，將18-O-(N-三苯甲基-N-甲基乙二胺-N’-氨基甲酰基)-18，21-二氫macbecin(0.093g，0.10mmol)溶解在無(wú)水二氯甲烷(19.5mL)中，并用冰/鹽浴冷卻至-5℃。然后將2M HCl的乙醚溶液(0.098mL，0.196mmol)滴加至上述冷卻的底物溶液中。將反應(yīng)物在-5℃攪拌5分鐘，然后在室溫?cái)嚢?0分鐘。加入己烷(20mL)，以沉淀產(chǎn)物鹽和剩余的起始原料。將沉淀研磨，然后用冷乙醚洗滌兩次，以除去任何起始原料和其它雜質(zhì)。將得到的固體從二氯甲烷∶乙醚中重結(jié)晶。分離產(chǎn)率0.021g(29％)。
LCMS9.7分鐘([M-H]-，658.9)。
實(shí)施例4合成18-O-(N，N’-二乙基乙二胺-N’-氨基甲?；?-18，21-二氫macbecin鹽酸鹽，3 N-三苯甲基-N，N’-二乙基乙二胺的制備 在氬氣氣氛下，將N，N’-二乙基乙二胺(2.5g，21.5mmol)溶解在二氯甲烷(20ml)中。將攪拌的混合物冷卻至0℃，然后緩慢滴加加入三苯甲基氯(2.4g，8.6mmol)的二氯甲烷(20mL)溶液。加完該溶液后，將反應(yīng)混合物在0℃下再攪拌30分鐘，此時(shí)移除冷卻浴，使反應(yīng)物回溫至室溫。在氬氣氣氛、室溫下，將該混合物攪拌過(guò)夜。從得到的溶液中除去溶劑，并加入乙酸乙酯(200mL)和飽和NaHCO3水溶液(200mL)。將得到的混合物振搖，分離，將水層再用等體積的乙酸乙酯萃取。將合并的有機(jī)物經(jīng)Na2SO4干燥，過(guò)濾，在減壓下除去溶劑。將殘留物在硅膠上用二氯甲烷∶甲醇∶氨水(80∶5∶0.5)洗脫進(jìn)行純化。收集純的流分，并在減壓下除去溶劑。通過(guò)加入異丙醇，接著在減壓下除去(2×100mL)，然后置于高真空下，從而除去殘留的水/氨，得到標(biāo)題化合物，為淺黃色固體。分離產(chǎn)率2.60g(84％)。在CDCl3中、400MHz下得到的1H NMR波譜與標(biāo)題化合物一致。
18-O-(N-三苯甲基-N，N’-二乙基乙二胺-N’-氨基甲?；?-18，21-二氫macbecin的制備 將18-O-(4-硝基苯基碳酸酯)-18，21-二氫macbecin(0.296g，0.41mmol)溶解在二氯甲烷(15mL)中。然后加N-三苯甲基-N，N’-二乙基乙二胺(0.438g，1.22mmol)的二氯甲烷(15mL)溶液，將該溶液加熱回流2小時(shí)，然后室溫過(guò)夜。用水洗滌得到的溶液，經(jīng)Na2SO4干燥，并在減壓除去溶劑。將得到的物質(zhì)采用色譜法在硅膠上用階式梯度的丙酮的己烷溶液(5-25％的丙酮)洗脫進(jìn)行純化，得到淺黃色的固體。分離產(chǎn)率0.23g(59％)。在CDCl3中、400MHz下得到的NMR波譜與標(biāo)題化合物一致。
LCMS該物質(zhì)在流動(dòng)相條件下裂解，失去三苯甲基基團(tuán)，釋放出仲胺，RT＝4分鐘(寬)([M-H]-，m/z＝701.6；[M+H]+，m/z＝703.6)。
制備18-O-(N，N’-二乙基乙二胺-N’-氨基甲?；?-18，21-二氫macbecin鹽酸鹽，3 在氬氣氣氛下，將18-O-(N-三苯甲基-N，N’-二乙基乙二胺-N’-氨基甲酰基)-18，21-二氫macbecin(0.206g，0.22mmol)溶解在無(wú)水二氯甲烷(40mL)中，用冰/鹽浴冷卻至-5℃。將2M HCl的乙醚溶液(0.207mL，0.41mmol)溶解在無(wú)水二氯甲烷(1mL)中，然后滴加加至上述冷卻的底物溶液中。將反應(yīng)物在-5℃攪拌5分鐘，然后在室溫?cái)嚢?0分鐘。加入己烷(50mL)，以沉淀產(chǎn)物鹽和剩余的起始原料。將沉淀研磨，然后用冷乙醚洗滌兩次，以除去任何起始原料和其它雜質(zhì)。分離產(chǎn)率0.090g(55％)。
LCMSRT＝3.4分鐘([M-H]-，m/z＝701.6；[M+H]+，m/z＝703.6)。
實(shí)施例5合成18-O-(N，N’-二甲基-1，3-丙二胺-N’-氨基甲酰基)-18，21-二氫macbecin鹽酸鹽，4 N-三苯甲基-N，N’-二甲基-1，3-丙二胺的制備 在氬氣氣氛下，將N，N’-二甲基-1，3-丙二胺(2.50g，24.5mmol)溶解在二氯甲烷(20ml)中。將攪拌的混合物冷卻至0℃，然后緩慢滴加加入三苯甲基氯(2.73g，9.80mmol)的二氯甲烷(20mL)溶液。加完該溶液后，將反應(yīng)混合物在0℃下再攪拌30分鐘，此時(shí)移除冷卻浴，使反應(yīng)物回溫至室溫。在氬氣氣氛、室溫下，將該混合物攪拌過(guò)夜。從得到的溶液中除去溶劑，并加入乙酸乙酯(200mL)和飽和NaHCO3水溶液(200mL)。將得到的混合物振搖，分離，將水層再用等體積的乙酸乙酯萃取。將合并的有機(jī)物經(jīng)Na2SO4干燥，過(guò)濾，并在減壓下除去溶劑。將殘留物在硅膠上用二氯甲烷∶甲醇∶氨水(80∶5∶0.5)洗脫進(jìn)行純化。收集純的流分，并在減壓下除去溶劑。通過(guò)加入乙醇(2×100mL)，并在減壓和50℃條件下除去，然后在高真空下干燥，從而除去殘留的水/氨，得到標(biāo)題化合物。分離產(chǎn)率2.60g(76％)。在CDCl3中、400MHz下得到的1H NMR波譜與標(biāo)題化合物一致。
18-O-(N-三苯甲基-N，N’-二甲基-1，3-丙二胺-N’-氨基甲?；?-18，21-二氫macbecin的制備 將18-O-(4-硝基苯基碳酸酯)-18，21-二氫macbecin(0.161g，0.22mmol)溶解在二氯甲烷(15mL)中。然后加入N-三苯甲基-N，N’-二甲基-1，3-丙二胺(0.229g，0.67mmol)的二氯甲烷(15mL)溶液，將該溶液加熱回流3.5小時(shí)，然后室溫過(guò)夜。用水洗滌得到的溶液，經(jīng)Na2SO4干燥，并在減壓除去溶劑。將得到的物質(zhì)采用色譜法在硅膠上用階式梯度的丙酮的己烷溶液(30-50％的丙酮)洗脫進(jìn)行純化，得到淺黃色的固體。分離產(chǎn)率0.080g(37％)。在CDCl3中、400MHz下得到的NMR波譜與標(biāo)題化合物一致。
LCMSRT＝8.3分鐘([M-H-三苯甲基]-，m/z＝687.5；[M+H-三苯甲基]+，m/z＝689.5)；該物質(zhì)在流動(dòng)相條件下也會(huì)裂解，釋放出游離胺，RT＝3.2分鐘([M-H-三苯甲基]-，687.5；[M+H-三苯甲基]+，689.5)。
制備18-O-(N，N’-二甲基-1，3-丙二胺-N’-氨基甲酰基)-18，21-二氫macbecin鹽酸鹽，4 在氬氣氣氛下，將18-O-(N-三苯甲基-N，N’-二甲基-1，3-丙二胺-N’-氨基甲酰基)-18，21-二氫macbecin(0.075g，0.08mmol)溶解在無(wú)水二氯甲烷(8mL)中，用冰/鹽浴冷卻至-5℃。將2M HCl的乙醚溶液(0.079mL，0.16mmol)溶解在無(wú)水二氯甲烷(0.5mL)中，然后滴加加至上述冷卻的底物溶液中。將反應(yīng)物在-5℃攪拌5分鐘，然后在室溫?cái)嚢?0分鐘。加入己烷(20mL)，以沉淀產(chǎn)物鹽和剩余的起始原料。將沉淀研磨，然后用冷乙醚洗滌兩次，以除去任何起始原料和其它雜質(zhì)。分離產(chǎn)率0.038mg(65％)。
LCMSRT＝3.3分鐘([M-H]-，m/z＝687.7；[M+H]+，689.7)。
實(shí)施例6合成18-O-(N，N’-二異丙基乙二胺-N’-氨基甲?；?-18，21-二氫macbecin鹽酸鹽，5 18-O-(N-三苯甲基-N，N’-二異丙基乙二胺-N’-氨基甲?；?-18，21-二氫macbecin的制備 將18-O-(4-硝基苯基碳酸酯)-18，21-二氫macbecin(0.161g，0.22mmol)溶解在二氯甲烷(15mL)中。然后加入N-三苯甲基-N，N’-二異丙基乙二胺(0.257g，0.67mmol)的二氯甲烷(15mL)溶液，并將該溶液加熱回流3.5小時(shí)，然后室溫過(guò)夜。用水洗滌得到的溶液，經(jīng)Na2SO4干燥，并在減壓下除去溶劑。將得到的物質(zhì)采用色譜法在硅膠上用階式梯度的丙酮的己烷溶液(30-50％的丙酮)洗脫進(jìn)行純化，得到淺黃色固體。分離產(chǎn)率0.060g(28％)。在CDCl3中、400MHz下得到的NMR波譜與標(biāo)題化合物一致。
LCMSRT＝7.8分鐘[M-H-三苯甲基]-，m/z＝729.6；[M+H-三苯甲基]+，m/z＝731.6.；該物質(zhì)在流動(dòng)相條件下也會(huì)裂解，釋放出仲胺，RT＝5.7分鐘([M-H]-，m/z＝729.6；[M+H]+，m/z＝731.6)。
制備18-O-(N，N’-二異丙基乙二胺-N’-氨基甲酰基)-18，21-二氫macbecin鹽酸鹽，5 在氬氣氣氛下，將18-O-(N-三苯甲基-N，N’-二異丙基乙二胺-N’-氨基甲?；?-18，21-二氫macbecin(0.055g，0.06mmol)溶解在無(wú)水二氯甲烷(10mL)中，用冰/鹽浴冷卻至-5℃。將2M HCl的乙醚溶液(0.055mL，0.11mmol)溶解在無(wú)水二氯甲烷(1mL)中，然后滴加加至上述冷卻的底物溶液中。將反應(yīng)物在-5℃攪拌5分鐘，然后在室溫?cái)嚢?0分鐘。加入己烷(20mL)，以沉淀產(chǎn)物鹽和剩余的起始原料。將沉淀研磨，然后用冷乙醚洗滌兩次，以除去任何起始原料和其它雜質(zhì)。分離產(chǎn)率0.032mg(70％)。
LCMSRT＝5.5分鐘([M-H]-，m/z＝729.9；[M+H]+，731.9)。
實(shí)施例7化合物1在人類血漿中的裂解實(shí)驗(yàn) 如上面的通用方法-裂解實(shí)驗(yàn)中所述，將化合物1在人類血漿中孵育。每15分鐘取出一份等分試樣，并加入0.01mL磷酸進(jìn)行酸化，以中止化學(xué)觸發(fā)的母體化合物的裂解。然后將樣品如上所述進(jìn)行提取，并采用分析方法B立即進(jìn)行分析。母體化合物的分解和釋放的化合物的相對(duì)量顯示在圖1中，其中空心圓(open circles)表示1的分解，實(shí)心方形和實(shí)心三角形分別代表macbecin和18，21-二氫macbecin的累積量。
實(shí)施例8化合物1-5在磷酸鹽緩沖液和在全血中的裂解速度比較 對(duì)裂解為18，21-二氫macbecin而言，將每個(gè)化合物如下進(jìn)行評(píng)價(jià)。
如上面通用方法-裂解實(shí)驗(yàn)中所述，將化合物1-5在去纖維蛋白的兔全血中孵育。在2分鐘、1小時(shí)、2.25小時(shí)和3.5小時(shí)采取等分試樣。加入1.5mL磷酸二氫鉀，加入內(nèi)標(biāo)物(IS)至0.002mg/mL。將樣品應(yīng)用于如上所述的柱子，并用分析方法C立即進(jìn)行分析。計(jì)算T1/2值并將其列在表5中。
還如上面在通用方法-裂解實(shí)驗(yàn)中所述，在磷酸鹽緩沖液中，在pH 7.2和pH 7.4下測(cè)定化合物1-3的裂解，計(jì)算的T1/2值如下面表5中所示。
表5-化合物1-5的裂解速度 Na，不可得 NT，在該次中沒(méi)有測(cè)定 *，該批次化合物2含有使分析準(zhǔn)確度受限的雜質(zhì) 實(shí)施例9化合物1-3的溶解度測(cè)定 用通用方法中所述的方法對(duì)化合物1-3的熱力學(xué)溶解度進(jìn)行測(cè)試。結(jié)果顯示在下面的表6中。
表6化合物1-3的溶解度 mAU.S，吸收度測(cè)定的度量單位 實(shí)施例10生物學(xué)數(shù)據(jù)-macbecin的抗癌活性的體外評(píng)價(jià) 如在通用方法中所述，采用改良的碘化丙啶實(shí)驗(yàn)進(jìn)行Macbecin的抗癌活性的體外評(píng)價(jià)，該評(píng)價(jià)是在單層增殖實(shí)驗(yàn)中的一組12種人類腫瘤細(xì)胞系中進(jìn)行的。
結(jié)果顯示在下面的表7中，每個(gè)結(jié)果代表了一式三份進(jìn)行的實(shí)驗(yàn)的平均值。
表7-體外實(shí)驗(yàn)的12種細(xì)胞系數(shù)據(jù) 實(shí)施例11生物學(xué)數(shù)據(jù)-18-O-(N，N’-二甲基乙二胺-N’-氨基甲酰基)-18，21-二氫macbecin鹽酸鹽(化合物1)的體內(nèi)評(píng)價(jià) 如通用方法中所述，在帶有人類前列腺癌細(xì)胞系DU-145的異種移植物的裸鼠中進(jìn)行18-O-(N，N’-二甲基乙二胺-N’-氨基甲?；?-18，21-二氫macbecin鹽酸鹽1的體內(nèi)評(píng)價(jià)。將在5％葡萄糖溶液的溶媒中的18-O-(N，N’-二甲基乙二胺-N’-氨基甲?；?-18，21-二氫macbecin鹽酸鹽1以60mg/kg/天的劑量水平在第0-4、7-11、14-18、21、24、25、28和29天腹腔內(nèi)給藥，并與給予標(biāo)準(zhǔn)溶媒(10％DMSO，0.05％吐溫80)的對(duì)照組進(jìn)行比較。
在第0-4、7-11、14-18、21、24、25、28和29天以60mg/kg/天腹腔內(nèi)給藥18-O-(N，N’-二甲基乙二胺-N’-氨基甲?；?-18，21-二氫macbecin鹽酸鹽1顯著(p＜0.001；Mann-Whitney-Wilcoxon U-檢驗(yàn))降低腫瘤生長(zhǎng)速度(最小T/C值24.3％，在第31天記錄的)。顯示整個(gè)研究過(guò)程中的組中值RTV值的圖如圖2所示。
用相對(duì)于對(duì)照組腫瘤的腫瘤體積抑制測(cè)定抗腫瘤活性，所述對(duì)照組在第0-4、7-11、14-18、21、24、25、28和29天以10mL/kg/天通過(guò)腹腔內(nèi)給藥接受標(biāo)準(zhǔn)溶媒即在PBS中的10％DMSO、0.05％吐溫80。溶媒對(duì)照組的組大小為6只小鼠，在植入兩個(gè)腫瘤碎片的各治療組中有6只小鼠。實(shí)驗(yàn)在第42天結(jié)束。
將在本申請(qǐng)中涉及的包含專利和專利申請(qǐng)的所有參考文獻(xiàn)在最大可能的程度上引入文中作為參考。
在整個(gè)說(shuō)明書(shū)和權(quán)利要求書(shū)中，除非上下文中另外特別要求，它們遵從下述單詞“包含”、“包括”應(yīng)當(dāng)理解為，意指包含(包括)所述的整體或者整體的步驟或組，但不排除任何其它整體或者整體的步驟或組或者多個(gè)步驟。
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權(quán)利要求
1.苯型安莎霉素的衍生物，該衍生物包含在6位帶有氨基羧基取代基的1，4-二羥基苯基基團(tuán)，其中2位和在6位的羧基取代基通過(guò)長(zhǎng)度變化的脂族鏈連接，其特征在于苯環(huán)中的1位羥基和4位羥基中的一個(gè)或兩個(gè)羥基獨(dú)立地被氨基亞烷基氨基羰基基團(tuán)衍生化，該亞烷基具有2或3個(gè)碳原子長(zhǎng)的鏈，它可以任選被烷基基團(tuán)取代，且所述衍生化基團(tuán)增加母體分子的水溶性和/或生物利用度，但是其能夠被在體內(nèi)除去。
2.根據(jù)下面式(IA-IC)的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽
其中
R1代表H、OH、OMe、-NHCH2CH＝CH2或-NHCH2CH2N(CH3)2；
R2代表OH或酮；
R3代表OH或OMe；
R5代表H或
其中
n代表0或1；
R6代表H、Me、Et或異丙基；
R7、R8和R9各自獨(dú)立地代表H或支鏈或直鏈的C1-C4烷基基團(tuán)；或者R7和R8，或R8和R9可以連接起來(lái)形成6元碳環(huán)；
R10代表H或支鏈或直鏈的C1-C4烷基基團(tuán)；
但是，前提是R5基團(tuán)不都為H，且當(dāng)R5基團(tuán)都不代表H時(shí)，兩個(gè)R5基團(tuán)是相同的。
3.根據(jù)權(quán)利要求2的化合物，其中R6代表H、Me或Et。
4.根據(jù)權(quán)利要求2的化合物，其中R10代表支鏈或直鏈的C1-C4烷基基團(tuán)。
5.根據(jù)權(quán)利要求2的化合物，其中R6代表H、Me或Et，且R10代表支鏈或直鏈的C1-C4烷基基團(tuán)。
6.根據(jù)權(quán)利要求2-5中的任何一項(xiàng)的化合物，其中R5都不代表H。
7.根據(jù)權(quán)利要求2-5中的任何一項(xiàng)的化合物，其中一個(gè)R5基團(tuán)代表H。
8.根據(jù)權(quán)利要求7的化合物，其中C21R5基團(tuán)為H。
9.根據(jù)權(quán)利要求2-8中的任何一項(xiàng)的由結(jié)構(gòu)(IA)定義的化合物。
10.根據(jù)權(quán)利要求2-8中的任何一項(xiàng)的由結(jié)構(gòu)(IB)定義的化合物。
11.根據(jù)權(quán)利要求10的化合物，其中R1代表-NHCH2CH＝CH2。
12.根據(jù)權(quán)利要求10的化合物，其中R1代表-NHCH2CH2N(CH3)2。
13.根據(jù)權(quán)利要求10的化合物，其中R1代表OMe。
14.根據(jù)權(quán)利要求2-8中的任何一項(xiàng)的由結(jié)構(gòu)(IC)定義的化合物。
15.根據(jù)權(quán)利要求2-14中的任何一項(xiàng)的化合物，其中n為0。
16.根據(jù)權(quán)利要求2-15中的任何一項(xiàng)的化合物，其中R6代表Me。
17.根據(jù)權(quán)利要求2-15中的任何一項(xiàng)的化合物，其中R6代表Et。
18.根據(jù)權(quán)利要求2-17中的任何一項(xiàng)的化合物，其中R10代表Me。
19.根據(jù)權(quán)利要求2-17中的任何一項(xiàng)的化合物，其中R10代表Et。
20.根據(jù)權(quán)利要求2-19中的任何一項(xiàng)的化合物，其中R7代表H。
21.根據(jù)權(quán)利要求2-20中的任何一項(xiàng)的化合物，其中R8和R9代表H。
22.根據(jù)權(quán)利要求2的化合物，該化合物為18-O-(N，N’-二甲基乙二胺-N’-氨基甲酰基)-18，21-二氫macbecin或其藥學(xué)上可接受的鹽。
23.根據(jù)權(quán)利要求2的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽，所述化合物選自
18-O-(N-甲基乙二胺-N’-氨基甲?；?-18，21-二氫macbecin；
18-O-(N，N’-二乙基乙二胺-N’-氨基甲酰基)-18，21-二氫macbecin；
18-O-(N，N’-二甲基-1，3-丙二胺-N’-氨基甲?；?-18，21-二氫macbecin；和
18-O-(N，N’-二異丙基乙二胺-N’-氨基甲?；?-18，21-二氫macbecin。
24.鹽酸鹽形式的根據(jù)權(quán)利要求1-23中的任何一項(xiàng)的化合物。
25.根據(jù)權(quán)利要求1-24中的任何一項(xiàng)的化合物，該化合物用作藥物。
26.根據(jù)權(quán)利要求1-24中的任何一項(xiàng)的化合物，該化合物用作治療癌癥或B細(xì)胞惡性腫瘤的藥物。
27.藥物組合物，該藥物組合物包含根據(jù)權(quán)利要求1-24中的任何一項(xiàng)的化合物以及一種或多種藥學(xué)上可接受的稀釋劑或載體。
28.治療癌癥或B細(xì)胞惡性腫瘤的方法，該方法包括將有效量的根據(jù)權(quán)利要求1-24中的任何一項(xiàng)的化合物給藥至患者。
29.根據(jù)權(quán)利要求1-24中的任何一項(xiàng)的化合物在制備治療癌癥或B細(xì)胞惡性腫瘤的藥物中的用途。
30.制備式(I)化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽的方法，該方法包括
(a)制備其中R5基團(tuán)都不為H的式(I)化合物，這是通過(guò)將式(IIA)、(IIB)或(IIC)化合物或其保護(hù)的衍生物
其中R1、R2和R3如權(quán)利要求2-23中的任何一項(xiàng)中所定義，且L為離去基團(tuán)，
與式(H)化合物反應(yīng)實(shí)現(xiàn)的，
其中n、R6、R7、R8、R9和R10如權(quán)利要求2-23中的任何一項(xiàng)中所定義且P代表保護(hù)基團(tuán)；或者
(b)制備C21R5基團(tuán)為H的式(I)化合物，這是通過(guò)將式(IID)、(IIE)或(IIF)化合物或其保護(hù)的衍生物
其中R1、R2和R3如權(quán)利要求2-23中的任何一項(xiàng)中所定義，且L為離去基團(tuán)，
與式(H)化合物反應(yīng)實(shí)現(xiàn)的，
其中n、R6、R7、R8、R9和R10如權(quán)利要求2-23中的任何一項(xiàng)中所定義，且P代表保護(hù)基團(tuán)；或者
(c)將式(I)化合物或其鹽轉(zhuǎn)化為另一種式(I)化合物或另一種其藥學(xué)上可接受的鹽；或者
(d)將保護(hù)的式(I)化合物脫保護(hù)。
31.式(IIA)、(IIB)或(IIC)化合物或者其任何一個(gè)化合物的保護(hù)的衍生物
其中R1、R2和R3如權(quán)利要求2-23中的任何一項(xiàng)中所定義，且L為離去基團(tuán)。
32.式(IID)、(IIE)或(IIF)化合物或者其任何一個(gè)化合物的保護(hù)的衍生物
其中R1、R2和R3如權(quán)利要求2-23中的任何一項(xiàng)中所定義，且L為離去基團(tuán)。
33.式(IVA)、(IVB)或(IVC)化合物或者其任何一個(gè)化合物的保護(hù)的衍生物
其中R1、R2、R3和R5如權(quán)利要求2-23中的任何一項(xiàng)中所定義，且Pa為保護(hù)基團(tuán)。
34.式(VA)、(VB)或(VC)的化合物或者其任何一個(gè)化合物的保護(hù)的衍生物
其中R1、R2、和R3如權(quán)利要求2-23中的任何一項(xiàng)中所定義，L為離去基團(tuán)且Pa為保護(hù)基團(tuán)。
全文摘要
本發(fā)明尤其提供了苯型安莎霉素的衍生物，該衍生物包含在6位帶有氨基羧基取代基的1，4-二羥基苯基基團(tuán)，其中2位和在6位的羧基取代基通過(guò)長(zhǎng)度變化的脂族鏈連接，其特征在于苯環(huán)中的1位羥基和4位羥基中的一個(gè)或兩個(gè)羥基獨(dú)立地被氨基亞烷基氨基羰基基團(tuán)衍生化，該亞烷基具有2或3個(gè)碳原子長(zhǎng)的鏈，它可以任選被烷基取代，且所述衍生化基團(tuán)增加母體分子的水溶性和/或生物利用度，但是其能夠被在體內(nèi)除去。所述的這類化合物用于治療癌癥或B細(xì)胞惡性腫瘤。
文檔編號(hào)A61P35/00GK101253154SQ200680032047
公開(kāi)日2008年8月27日 申請(qǐng)日期2006年9月1日 優(yōu)先權(quán)日2005年9月2日
發(fā)明者A·R·古布林, B·威爾金森, S·J·摩斯, M-Q·張, A·D·麥克爾西尼, C·J·馬丁 申請(qǐng)人:百奧帝卡技術(shù)有限公司