專利名稱：：39-去甲氧基雷帕霉素及其類似物的醫(yī)藥用途的制作方法39-去甲氧基雷帕霉素及其類似物的醫(yī)藥用途
背景技術(shù)：
：雷帕霉素(Rapamycin)(西羅莫司(sirolimus))(圖l)是由吸濕鏈霉菌(&/^/tom_yc^/^gmscop/cw)NRRL5491產(chǎn)生的親脂性的大環(huán)內(nèi)西旨(Sehgal等，1975;V6zina等，1975;U.S.3,929，992;U.S.3,993,749),其帶有與哌可酸內(nèi)酯相連的l，2,3-三羰基部分(Paiva等，1991)。對于本發(fā)明的目的來說，不使用Findlay等(1980)或化學(xué)文摘(第ll累積索引，1982-1986p60719CS)的編號方式規(guī)定，而通過McAlpine等(1991)的編號方式規(guī)定來描述雷帕霉素。由于其廣譜生物活性，雷帕霉素具有重要治療價(jià)值(Huang等，2003)。該化合物是哺乳動物雷帕霉素靶位(mTOR)的有效抑制劑，該靶位處于介導(dǎo)細(xì)胞存活和增殖的磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/Akt(蛋白激酶B)信號途徑的絲氨酸-蘇氨酸激酶下游。雷帕霉素結(jié)合于免抑蛋白FK506結(jié)合蛋白12(FKBP12)后便獲得了該抑制活性(D腦nt,F.J.和Q.X.Su,1995)。在T細(xì)胞中，雷帕霉素抑制來自IL-2受體的信號傳遞和隨后的T細(xì)胞自我增殖，從而導(dǎo)致免疫抑制。雷帕霉素作為免疫抑制劑上市，用于治療器官移植患者以防止移植物排斥(Huang等，2003)。除了免疫抑制，雷帕霉素在治療大量疾病中有著潛在的治療用途，例如，癌癥、諸如再狹窄的心血管疾病、諸如多發(fā)性硬化、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的自體免疫疾病、真菌感染和諸如阿爾茨海默氏病、帕金森氏病和亨廷頓氏癥的神經(jīng)退行性疾病。盡管其可用于多種疾病狀態(tài)，但是雷帕霉素也有許多大缺點(diǎn)。首先它是細(xì)胞膜流出泵P-糖蛋白(P-gp，LaPlante等，2002,Crowe等，1999)的底物，所述P-糖蛋白將化合物泵出細(xì)胞，從而使得雷帕霉素穿過細(xì)胞膜的能力差。這造成給藥后化合物吸收差。另外，由于癌細(xì)胞的多藥物耐受性的主要機(jī)理是通過細(xì)胞膜流出泵，因此雷帕霉素針對多藥物耐受性(MDR)的癌細(xì)胞較不有效。其次，雷帕霉素通過細(xì)胞色素P450酶被廣泛代謝(Lampe等，1998)。其在肝臟第一關(guān)卡(hepaticfirstpass)會喪失掉很多，進(jìn)一步導(dǎo)致其低口服生物利用度。CYP3A4和P-gp在雷帕霉素低生物利用度中的作用已經(jīng)在研究中被確認(rèn)了，這些研究證實(shí)了施用CYP3A4和/或P-gp抑制劑減少了雷帕霉素從轉(zhuǎn)染了CYP3A4的Caco-2細(xì)胞中流出(Cummins等，2004),而且施用CYP3A4抑制劑能降低雷帕霉素的小腸代謝(Lampen等，1998)。雷帕霉素低生物利用度造成了顯著的個體間差異，導(dǎo)致治療結(jié)果不一致并且難以進(jìn)行臨床管理(Kuhn等，2001，Crowe等，1999)。所以，有需求要開發(fā)新的雷帕霉素樣化合物，其不是P-gp的底物，其代謝更穩(wěn)定，因而生物利用度改善。當(dāng)用作抗癌劑時，這些化合物可以更有效地抗MDR癌細(xì)胞，尤其是抗表達(dá)P-gp的癌細(xì)胞。已經(jīng)報(bào)道利用分子上可化學(xué)利用的位點(diǎn)的一些合成的雷帕霉素類似物。以下化合物的說明與圖1所述雷帕霉素分子的編號系統(tǒng)相適應(yīng)。.分子上用于衍生或取代的可化學(xué)利用的位點(diǎn)包括C40和C28羥基(如U.S.5，665,772;U.S.5，362,718)、C39和C16曱氧基(如WO96/41807;U.S.5，728，710)、C32、C26和C9酮基(如U.S.5，378，836;U.S.5,138,051;U.S.5，665,772)。在C17、C19和/或C21上氫化，靶向于三烯，可保持抗真菌活性但相對損失了免疫抑制能力(如U.S.5,391，730;U.S.5，023，262)。通過衍生化，已經(jīng)顯著改善了分子的穩(wěn)定性(如在C32、O40和/或C28上形成肝，U.S.5，563,145，U.S.5，446，048)、對代謝攻擊的耐受性(如U.S.5，912,253)、生物利用度(如U.S.5,221，670;U.S.5，955，457;WO98/04279)并產(chǎn)生前藥(如U.S.6,015,815;U.S.5,432，183)。臨床開發(fā)中的兩種最先進(jìn)的雷帕霉素衍生物是40-(9-(2-羥基)乙基-雷帕霉素(RADOOl，Certican,everolimus)-顯示出免疫抑制藥理效應(yīng)的雷帕霉素半合成類似物(Sedrani,R.等，1998;Kirchner等，2000;U.S.5，665，772)和40-C>-[2，2-二(羥曱基)丙酰氧基]雷帕霉素(CCI-779(Wyeth-Ayerst))——抑制細(xì)胞體外生長并抑制胂瘤體內(nèi)生長的雷帕霉素酯(Yu等，2001)。CCI-779目前在各種臨床試驗(yàn)中用作潛在的抗癌藥物。近來公開的CCI-779在患有復(fù)發(fā)性多形性成膠質(zhì)細(xì)胞瘤的患者中進(jìn)行的II期研究(Chang，等，2005)暗示，在這些患者中該藥物的低功效可歸因于其不良的血腦屏障穿透性。調(diào)查RAD001藥物動力學(xué)的研究表明，與雷帕霉素類似，它是P-gp的底物(Crowe等，1999，LaPlante等，2002)。盡管本發(fā)明的化合物結(jié)構(gòu)與雷帕霉素很相似，但是他們出人意料地顯示出不同的藥理學(xué)特性。與雷帕霉素相比，它們尤其顯示出能顯著增加細(xì)胞膜穿透性并減少流出，而且它們不是P-gp的底物。另外，39-去曱氧基雷帕霉素比雷帕霉素有更強(qiáng)的抗多藥物耐受性和抗表達(dá)P-gp的癌細(xì)胞系活性。當(dāng)與雷帕霉素比較時，39-去曱氧基雷帕霉素顯示出顯著不同的針對NCI60細(xì)胞系的抑制特性。另外，與雷帕霉素和臨床試驗(yàn)中領(lǐng)先的衍生物比較，39-去曱氧基雷帕霉素類似物顯示出顯著不同的藥物動力學(xué)特性。出人意料的是，39-去曱氧基雷帕霉素類似物顯示出穿過血腦屏障的能力增強(qiáng)，由此證明了其在腦中利用度改善。所以，本發(fā)明提供了39-去曱氧基雷帕霉素類似物的醫(yī)藥用途，這些雷帕霉素類似物具有顯著改變的藥物動力學(xué)性質(zhì)，穿過血腦屏障的能力改善，代謝穩(wěn)定性改善，細(xì)胞膜穿透性改善，流出率減低，并有不同于雷帕霉素的腫瘤細(xì)胞抑制特性。這些化合物可用于醫(yī)藥中，尤其用于治療癌癥和/或B-細(xì)胞惡性腫瘤，用于誘導(dǎo)或維持免疫抑制，刺激神經(jīng)元再生或治療真菌感染、移植排斥、移植物抗宿主疾病、自體免疫性疾病、炎性血管疾病和纖維化疾病。本發(fā)明尤其提供了39-去曱氧基雷帕霉素在治療癌癥和/或B-細(xì)胞惡性肺瘤中的用途。已經(jīng)證明雷帕霉素能刺激自體吞噬(Raught等，2001)。許多疾病涉及自體吞嗟受損或自體吞噬失調(diào)，包括阿茨海默氏病、帕金森民癥、亨廷頓氏病和朊病毒疾病(包括克雅二氏癥)，這暗示了操控該途徑可證明對這些疾病有益。近來體外研究證明，施用雷帕霉素能減少與轉(zhuǎn)染的COS-7細(xì)胞中聚(Q)和聚(A)增加相關(guān)的凝集體的出現(xiàn)和細(xì)胞死亡(Ravikumar等，2002)。所以，如果雷帕霉素能穿過血腦屏障，那么這些結(jié)果顯示它成為了用以治療亨廷頓氏病和其他相關(guān)疾病的合適的候選物。這暗示了需要開發(fā)能穿過血腦屏障的雷帕霉素類似物。微管相關(guān)蛋白質(zhì)t的超磷酸化及其隨之凝集成不可溶的形成細(xì)胞內(nèi)"纏結(jié)，，的成對螺旋絲，這是阿爾茨海默氏病的典型特征之一，而且神經(jīng)原纖維病理的凝集及相關(guān)神經(jīng)細(xì)胞死亡與認(rèn)知衰退非常相關(guān)。近來An等(2003)的研究i正明了，活化的p70S6激酶在阿爾茨海默氏病的腦中與神經(jīng)原纖維病理共分布，尤其是在發(fā)展成纏結(jié)前，活化的p70S6激酶在神經(jīng)元中明顯增加(An等，2003)。在體外試驗(yàn)中，當(dāng)施用硫酸鋅活化了p70S6激酶并增加總的、正常的和超磷酸化的T的水平時，用雷帕霉素預(yù)處理細(xì)胞顯示出p70S6激酶活化減少三倍并顯著降低了總的、正常的和超磷酸化的T的水平。所以，這些結(jié)果顯示，如果化合物能到達(dá)作用位點(diǎn)，施用雷帕霉素或雷帕霉素類似物有益于減輕阿爾茨海默氏病的神經(jīng)原纖維病理。另外，據(jù)報(bào)道，雷帕霉素在幾個體外和體內(nèi)模型中能增加神經(jīng)突長出和神經(jīng)元存活(Avramut和Achim，2002),這顯示雷帕霉素及其類似物可用于治療其中神經(jīng)再生可能具有顯著治療益處的疾病。可是，該應(yīng)用依賴于其能到達(dá)作用位點(diǎn)，因而穿過血腦屏障能力改善的雷帕霉素類似物是尤其優(yōu)選的。本發(fā)明提供了新的而且令人吃驚的39-去曱氧基雷帕霉素類似物在藥物中的用途，尤其是39-去曱氧基雷帕霉素的用途，特別用于治療癌癥或B-細(xì)胞惡性肺瘤，用于誘導(dǎo)或維持免疫抑制，刺激神經(jīng)元再生或治療真菌感染、移植排斥、移植物抗宿主疾病、自體免疫性疾病、神經(jīng)退行性病癥、炎性血管疾病和纖維化疾病。尤其是，本發(fā)明提供了39-去曱氧基雷帕霉素類似物在治療癌癥和B-細(xì)胞惡性腫瘤中的用途。在優(yōu)選的具體實(shí)施方式中，本發(fā)明提供了39-去曱氧基雷帕霉素類似物在治療神經(jīng)或神經(jīng)退行性疾病中的用途。在進(jìn)一步優(yōu)選的具體實(shí)施方式中，本發(fā)明提供了39-去曱氧基雷帕霉素類似物在治療腦腫瘤、尤其是多形性成膠質(zhì)細(xì)胞瘤(glioblastomamultiforme)中的用途。在本發(fā)明的一個特定方面，39-去曱氧基雷帕霉素類似物是39-去曱氧基雷帕霉素。發(fā)明概要本發(fā)明涉及39-去曱氧基雷帕霉素類似物、尤其是39-去甲氧基雷帕審素的醫(yī)藥用途，尤其用于治療癌癥和/或B-細(xì)胞惡性腫瘤，誘導(dǎo)或維持免疫抑制，治療移植排斥、移植物抗宿主疾病、自體免疫性疾病、神經(jīng)退行性病癥、炎癥疾病、血管疾病和纖維化疾病，刺激神經(jīng)元再生或治療真菌感染。尤其，本發(fā)明涉及39-去曱氧基雷帕霉素類似物用于治療癌癥和B-細(xì)胞惡性腫瘤的用途。在特定的具體實(shí)施方式中，本發(fā)明涉及39-去曱氧基雷帕霉素在治療癌癥和B-細(xì)胞惡性腫瘤中的用途。本發(fā)明還明確提供了39-去曱氧基雷帕霉素類似物在治療一種或多種腦腫瘤或神經(jīng)退行性病癥中的用途。在特定的具體實(shí)施方式中，本發(fā)明提供了39-去曱氧基雷帕霉素在治療一種或多種腦腫瘤或神經(jīng)退行性病癥中的用途。本發(fā)明還明確提供了39-去曱氧基雷帕霉素類似物在治療神經(jīng)退行性病癥中的用途。尤其，本發(fā)明提供了39-去曱氧基雷帕霉素在治療神經(jīng)退行性病癥中的用途。定義本文所用的冠詞"a"和"an"指冠詞的一個或指超過一個(即至少一個)語法對象。例如，"類似物"指一個或指超過一個類似物。如本文所用的，術(shù)語"一種或多種自體免疫性疾病"包括而不限于系統(tǒng)性紅斑狼瘡(SLE)，類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎，重癥肌無力和多發(fā)性硬化。如本文所用的，術(shù)語"炎癥疾病"包括而不限于牛皮癬，皮炎，濕滲，脂溢性皮炎，炎性腸病(包括但不限于潰瘍性結(jié)腸炎和克羅恩氏病)，肺部炎癥(包括哮喘、慢性梗阻性肺病、肺氣腫、急性呼吸窘迫綜合征和支氣管炎)，類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎和眼色素層炎。如本文所用的，術(shù)語"癌癥"指細(xì)胞在皮膚或身體器官中惡性或良性的生長，例如但不限于在乳腺、前列腺、肺、腎、胰腺、腦、胃或腸中。癌傾向于滲透到鄰近組織并擴(kuò)散(轉(zhuǎn)移)到遠(yuǎn)處器官上，如轉(zhuǎn)移到骨、肝、肺或腦中。本文所用的術(shù)語癌包括轉(zhuǎn)移性腫瘤細(xì)胞類型(例如但不限于黑素瘤、淋巴瘤、白血病、纖維肉瘤、橫紋肌肉瘤、和肥大細(xì)胞瘤)和組織癌類型(例如但不限于結(jié)腸直腸癌、前列腺癌、小細(xì)胞肺癌和非小細(xì)胞肺癌、乳腺癌、胰腺癌、膀胱癌、腎癌、胃癌、神經(jīng)膠質(zhì)瘤、原發(fā)性肝癌和卵巢癌。該術(shù)語也明確涵蓋以下更完整描述的一種或多種腦腫瘤。本文所用的術(shù)語"一種或多種腦腫瘤，，指細(xì)胞在腦中惡性或良性的生長，它包括原發(fā)和繼發(fā)性(轉(zhuǎn)移性)的腫瘤。原發(fā)腦腫瘤包括而不限于，神經(jīng)膠質(zhì)瘤(如多形性成膠質(zhì)細(xì)胞瘤、星細(xì)胞瘤、腦干神經(jīng)膠質(zhì)瘤、室鼓膜瘤和寡枝神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞瘤)、成神經(jīng)管細(xì)胞瘤、腦膜瘤、神經(jīng)鞘瘤(或聽神經(jīng)瘤)、顱咽管瘤、腦部干細(xì)胞肺瘤(如生殖細(xì)胞瘤)、或松果體區(qū)域的腫瘤。術(shù)語"腦癌"也用于描述以上疾病，這些術(shù)語在本文中可互換使用。本文所用的術(shù)語"B-細(xì)胞惡性腫瘤"包括一組疾病，其包括慢性淋巴細(xì)胞白血病(CLL)、多發(fā)性骨髓瘤、和非何杰金氏淋巴瘤(NHL)。它們是血液和造血器官的瘤性疾病。它們造成骨髓和免疫系統(tǒng)障礙，其使宿主高度易受感染和出血影響。如本文所用的，術(shù)語"血管疾病，，包括而不限于超增殖性血管病癥(如再狹窄和血管閉塞)、移植物血管動脈粥樣硬化癥、心血管疾病、腦血管疾病和外周血管疾病(如冠狀動脈疾病、動脈硬化、動脈粥樣硬化癥、非動脈粥樣化的動脈硬化或血管壁損傷)。它還用于涉及眼中血管再生或增殖的疾病，尤其是脈絡(luò)膜新生血管化。本文所用的術(shù)語"神經(jīng)再生"指刺激細(xì)胞生長，并包括神經(jīng)突長出和神經(jīng)元細(xì)胞功能恢復(fù)。神經(jīng)再生對其是有顯著治療益處的疾病和病癥包括但不限于，阿爾茨海默氏病、帕金森氏癥疾病、亨廷頓氏舞蹈病(癥)、肌萎縮性脊髓側(cè)索硬化癥、三叉神經(jīng)痛、舌咽神經(jīng)痛、顏面神經(jīng)麻痹、肌肉萎縮癥、中風(fēng)、進(jìn)行性肌萎縮、進(jìn)行性延髓遺傳性肌萎縮、頸部脊稚強(qiáng)硬癥、Gullain-Barre綜合癥、癡呆、外周神經(jīng)病和外周神經(jīng)損傷，其可以是物理損傷(如脊髓損傷或外傷、坐骨或臉神經(jīng)損傷或傷害)或疾病狀況(如糖尿病)造成的。如本文所用的，術(shù)語"由神經(jīng)損傷或疾病造成的醫(yī)學(xué)病癥"包括而不限于，一種或多種神經(jīng)退行性病癥、一種或多種腦腫瘤、腦部感染或炎癥和其他可導(dǎo)致神經(jīng)或神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞或組織死亡的病癥。本文所用的術(shù)語"一種或多種神經(jīng)退行性病癥"包括而不限于，阿爾茨海默氏病、帕金森氏癥、亨廷頓氏病、肌萎縮性脊髓側(cè)索硬化癥(ALS)、(眼咽)肌營養(yǎng)不良(包括眼咽肌營養(yǎng)不良)，多發(fā)性硬化、朊病毒疾病(如克雅病(CJD))、Pick氏病、Lewy小體癡呆(或Lewy小體疾病)和/或運(yùn)動神經(jīng)元疾病。如本文所用的，術(shù)語"需要藥物穿越血腦屏障的影響中樞神經(jīng)的醫(yī)學(xué)病癥"包括而不限于得自神經(jīng)損傷或疾病的醫(yī)學(xué)病癥、和需要藥物到達(dá)神經(jīng)元細(xì)胞進(jìn)行有效治療的任何其他狀況。本文所用的術(shù)語"纖維化疾病"指與過量產(chǎn)生細(xì)胞外基質(zhì)相關(guān)的疾病，其包括(而不限于)結(jié)節(jié)病、瘢痕瘤、血管球性腎炎、末期腎病、肝纖維化(包括但不限于硬化、酒精肝病和脂肪性肝炎、慢性移植腎病(chronicgraftnephropathy)、外科手術(shù)粘連、血管病癥、心臟纖維化、肺纖維化(包括但不限于先天肺纖維化和原因不明性纖維性肺泡炎)、黃斑變性、視網(wǎng)膜和虹膜視網(wǎng)膜病和化療或放射誘發(fā)的纖維化。如本文所用的，術(shù)語"移植物抗宿主疾病"指同種異體干細(xì)胞/骨髓移植后觀察到的并發(fā)癥。它發(fā)生在供體的對抗感染的細(xì)胞將患者身體識別為不同或外來物的時候。然后這些對抗感染的細(xì)胞攻擊患者身體組織，就好像它們在攻擊感染。GvHD被分成急性的和慢性的，在移植后前100天內(nèi)發(fā)生的是急性的，而移植后超過100天發(fā)生的是慢性的。典型涉及的組織包括肝、胃腸道和皮膚。慢性移植物抗宿主疾病發(fā)生在干細(xì)胞/骨髓移植后約百分之10-40的患者中。如本文所用的，術(shù)語"生物利用度"指施用后藥物或其他物質(zhì)被吸收或變得在生物活性位點(diǎn)上可利用的程度或比率。該性質(zhì)依賴于許多因素，包括化合物的可溶性、腸中的吸收率、蛋白質(zhì)結(jié)合和代謝的程度等。各種生物利用度測試對所屬領(lǐng)域技術(shù)人員來說是熟悉的，其在本文中有描述(也可參見Trepanier等，1998，Gallant-Haidner等，2000)。本文所用的術(shù)語"對一種或多種現(xiàn)有抗癌劑有耐受性的癌癥或B-細(xì)胞惡性腫瘤"指癌癥或B-細(xì)胞惡性腫瘤，至少一種常規(guī)使用的療法對其是無效的。這些癌癥的特征在于能在施用至少一種瘤制劑后存活，而相應(yīng)正常的細(xì)胞(即，相同起源的生長受調(diào)節(jié)的細(xì)胞)會顯示出細(xì)胞毒性、細(xì)胞死亡或細(xì)胞靜止(即，不會分裂)的跡象。尤其是，這包括MDR癌癥或B-細(xì)胞惡性腫瘤，特定的例子是表達(dá)高水平P-gp的癌癥和B-細(xì)胞惡性腫瘤。這些耐受的癌癥或B-細(xì)胞惡性腫瘤的鑒別是在醫(yī)師或其他類似熟練技術(shù)人員的能力和常規(guī)工作的范圍內(nèi)。本文所用的術(shù)語"39-去甲氧基雷帕霉素類似物"指根據(jù)下式(I)所示的化合物、或其藥學(xué)上可接受的鹽。PH其中，R,代表(H,H)或二O,而且R2和R3各自獨(dú)立代表H、OH或OCH3。這些化合物也被稱為"本發(fā)明的化合物"，而且這些術(shù)語在本申請中可互換使用。在本申請中，術(shù)語"39-去曱氧基雷帕霉素類似物"包括39-去曱氧基雷帕霉素本身。如本文所用的，術(shù)語"39-去曱氧基雷帕霉素"指根據(jù)上式(I)所示的化合物、或其藥學(xué)上可接受的鹽，其中1^代表=0,而且R2和Rs各自代表OCH3。39-去曱氧基雷帕霉素類似物的藥學(xué)上可接受的鹽包括由藥學(xué)上可接受的無機(jī)或有機(jī)酸或堿以及季銨酸式加成鹽形成的常規(guī)的鹽。合適酸式鹽的更特定的例子包括鹽酸、氫溴酸、硫酸、磷酸、硝酸、高氯酸、富馬酸、醋酸、丙酸、琥珀酸、乙醇酸、曱酸、乳酸、馬來酸、酒石酸、檸檬酸、棕櫚酸、丙二酸、羥基馬來酸、笨乙酸、谷氨酸、安息香酸、水楊酸、反丁烯二酸、甲苯磺酸、曱基磺酸、萘-2-磺酸、笨磺酸羥基萘酸、氫碘酸、蘋果酸、類固醇、丹寧酸等的鹽。其他酸，如草酸，它們不是藥學(xué)上可接受的，可用于制備鹽，以用作為中間體獲得本發(fā)明的化合物和它們的藥學(xué)上可接受的鹽。合適的堿式鹽的更特定例子包括鈉、鋰、鉀、鎂、鋁、鈣、鋅、N，N'-二千基乙二胺、氯普魯卡因、膽堿、二乙醇胺、乙二胺、N-曱基葡萄糖胺和普魯卡因鹽。下文對于本發(fā)明所述的化合物的表述包括39-去曱氧基雷帕霉素及其藥學(xué)上可接受的鹽。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明涉及39-去曱氧基雷帕霉素類似物在醫(yī)藥中的用途，尤其用于治療癌癥、B-細(xì)胞惡性腫瘤，誘導(dǎo)或維持免疫抑制，治療移植排斥、移植物抗宿主疾病、自體免疫性疾病、神經(jīng)退行性病癥、炎癥疾病、血管疾病和纖維化疾病，刺激神經(jīng)元再生，治療神經(jīng)疾病或神經(jīng)退行性病癥或治療真菌感染。所以，本發(fā)明提供了39-去曱氧基雷帕霉素類似物、或其藥學(xué)上可接受的鹽的用途，其用于治療由神經(jīng)損傷或疾病造成的醫(yī)學(xué)病癥。在特定的具體實(shí)施方式中，本發(fā)明提供了39-去曱氧基雷帕霉素、或其藥學(xué)上可接受的鹽的用途，其用于治療由神經(jīng)損傷或疾病造成的醫(yī)學(xué)病癥。在進(jìn)一步的具體實(shí)施方式中，本發(fā)明提供了與雷帕霉素在第9、16或27位之一個或多個位置上有額外區(qū)別的39-去曱氧基雷帕霉素類似物在治療由神經(jīng)損傷或疾病造成的醫(yī)學(xué)病癥中的用途。本發(fā)明還提供了39-去曱氧基雷帕霉素類似物的用途，即增加了血腦屏障穿透性的雷帕霉素類似物、或其藥學(xué)上可接受的鹽的用途，用于治療需要藥物穿越血腦屏障的影響中樞神經(jīng)的醫(yī)學(xué)病癥，即血腦屏障阻礙遞送化合物的醫(yī)學(xué)病癥。在特定的具體實(shí)施方式中，本發(fā)明提供了39-去曱氧基雷帕霉素、或其藥學(xué)上可接受的鹽的用途，用于治療其中血腦屏障阻礙遞送化合物的影響中樞神經(jīng)系統(tǒng)的醫(yī)學(xué)病癥。在進(jìn)一步的具體實(shí)施方式中，本發(fā)明提供了與雷帕霉素在第9、16或27位之一個或多個位置上有額外區(qū)別的39-去曱氧基雷帕霉素類似物的用途，用于治療其中血腦屏障阻礙遞送化合物的影響中樞神經(jīng)系統(tǒng)的醫(yī)學(xué)病癥。在特定的具體實(shí).施方式中，本發(fā)明涉及39-去曱氧基雷帕霉素類似物用于治療癌癥和B-細(xì)胞惡性腫瘤的用途。在進(jìn)一步的具體實(shí)施方式中，本發(fā)明涉及39-去曱氧基雷帕霉素用于治療癌癥和B-細(xì)胞惡性肺瘤的用途。在進(jìn)一步的具體實(shí)施方式中，本發(fā)明涉及與雷帕霉素在第9、16或27位之一個或多個位置上有額外區(qū)別的39-去曱氧基雷帕霉素類似物用于治療癌癥和B-細(xì)胞惡性腫瘤的用途。本發(fā)明還明確提供了39-去曱氧基雷帕霉素類似物在治療一種或多種腦腫瘤中的用途。本發(fā)明進(jìn)一步提供了39-去曱氧基雷帕霉素治療一種或多種腦腫瘤的用途。在進(jìn)一步的具體實(shí)施方式中，本發(fā)明提供了與雷帕霉素在第9、16或27位之一個或多個位置上有額外區(qū)別的39-去曱氧基雷帕霉素類似物在治療一種或多種腦腫瘤中的用途。特別地，本發(fā)明提供了39-去曱氧基雷帕霉素類似物在治療多形性成膠質(zhì)細(xì)胞瘤中的用途。在特定的具體實(shí)施方式中，本發(fā)明提供了39-去曱氧基雷帕霉素在治療多形性成膠質(zhì)細(xì)胞瘤中的用途。在進(jìn)一步的具體實(shí)施方式中，本發(fā)明提供了與雷帕霉素在第9、16或27位之一個或多個位置上有額外區(qū)別的39-去曱氧基雷帕霉素類似物在治療多形性成膠質(zhì)細(xì)胞瘤中的用途。本發(fā)明還提供了39-去曱氧基雷帕霉素類似物在治療神經(jīng)退行性病癥中的用途。在進(jìn)一步的具體實(shí)施方式中，本發(fā)明提供了39-去曱氧基雷帕霉素在治療神經(jīng)退行性病癥中的用途。在進(jìn)一步的具體實(shí)施方式中，本發(fā)明提供了與雷帕霉素在第9、16或27位之一個或多個位置上有額外區(qū)別的39-去曱氧基雷帕霉素類似物在治療神經(jīng)退行性病癥中的用途。特別地，神經(jīng)退行性病癥可選自由阿爾茨海默氏病、多發(fā)性硬化和亨廷頓氏病組成的組。所以，在一個具體實(shí)施方式中，本發(fā)明提供了39-去曱氧基雷帕霉素類似物在治療阿爾茨海默氏病中的用途。在進(jìn)一步的具體實(shí)施方式中，本發(fā)明提供了39-去曱氧基雷帕霉素在治療阿爾茨海默氏病中的用途。在進(jìn)一步的具體實(shí)施方式中，本發(fā)明提供了與雷帕霉素在第9、16或27位之一個或多個位置上有額外區(qū)別的39-去曱氧基雷帕霉素類似物在治療阿爾茨海默氏病中的用途。在進(jìn)一步的具體實(shí)施方式中，本發(fā)明提供了39-去曱氧基雷帕霉素類似物在治療多發(fā)性硬化中的用途。在進(jìn)一步的具體實(shí)施方式中，本發(fā)明提供了39-去曱氧基雷帕霉素在治療多發(fā)性硬化中的用途。在進(jìn)一步的具體實(shí)施方式中，本發(fā)明提供了與雷帕霉素在第9、16或27位之一個或多個位置上有額外區(qū)別的39-去曱氧基雷帕霉素類似物在治療多發(fā)性硬化中的用途。在可選的具體實(shí)施方式中，本發(fā)明提供了39-去曱氧基雷帕霉素類似物在治療亨廷頓氏病中的用途。在進(jìn)一步的具體實(shí)施方式中，本發(fā)明提供了39-去曱氧基雷帕霉素在治療亨廷頓氏病中的用途。在進(jìn)一步的具體實(shí)施方式中，本發(fā)明提供了與雷帕霉素在第9、16或27位之一個或多個位置上有額外區(qū)別的39-去曱氧基雷帕霉素類似物在治療亨廷頓氏病中的用途。在可選的具體實(shí)施方式中，本發(fā)明提供了用于治療癌癥或B-細(xì)胞惡性腫瘤的方法，誘導(dǎo)或維持免疫抑制、刺激神經(jīng)元再生的方法，治療真菌感染、移植排斥、移植物抗宿主疾病、自體免疫性疾病、神經(jīng)退行性病癥、炎癥疾病、血管疾病和纖維化疾病的方法，其包括向患者施用有效量的39-去曱氧基雷帕霉素類似物，特別是39-去曱氧基雷帕霉素或與雷帕霉素在第9、16或27位之一個或多個位置上有額外區(qū)別的39-去曱氧基雷帕霉素類似物。特定地，本發(fā)明提供了治療由神經(jīng)損傷或疾病造成的醫(yī)學(xué)病癥的方法，其包括施用39-去曱氧基雷帕霉素類似物、或其藥學(xué)上可接受的鹽。在特別的具體實(shí)施方式中，本發(fā)明提供了治療由神經(jīng)損傷或疾病造成的醫(yī)學(xué)病癥的方法，其包括施用39-去曱氧基雷帕霉素。在進(jìn)一步的具體實(shí)施方式中，本發(fā)明提供了治療由神經(jīng)損傷或疾病造成的醫(yī)學(xué)病癥的方法，其包括施用與雷帕霉素在第9、16或27位之一個或多個位置上有額外區(qū)別的39-去曱氧基雷帕霉素類似物。本發(fā)明還提供了治療其中血腦屏障阻礙遞送化合物的影響中樞神經(jīng)系統(tǒng)的醫(yī)學(xué)病癥的方法，其通過施用有效量的39-去曱氧基雷帕霉素類似物(即增加了血腦屏障穿透性的雷帕霉素類似物)、或其藥學(xué)上可接受的鹽來進(jìn)行。在特定的方面，39-去曱氧基雷帕霉素類似物是39-去曱氧基雷帕霉素。在另一個方面，39-去曱氧基雷帕霉素類似物是與雷帕霉素在第9、16或27位之一個或多個位置上有額外區(qū)別的39-去曱氧基雷帕霉素類似物。本發(fā)明優(yōu)選提供治療癌癥或B-細(xì)胞惡性腫瘤的方法，其包括向患者施用有效量的39-去曱氧基雷帕霉素類似物。在進(jìn)一步優(yōu)選的具體實(shí)施方式中，本發(fā)明提供了治療一種或多種腦腫瘤的方法，其包括向患者施用有效量的39-去曱氧基雷帕寧素類似物。在特定的方面，39-去曱氧基雷帕霉素類似物是39-去曱氧基雷帕霉素。在另一個方面，39-去曱氧基雷帕霉素類似物是與雷帕霉素在第9、16或27位之一個或多個位置上有額外區(qū)別的39-去曱氧基雷帕霉素類似物。在特定的具體實(shí)施方式中，本發(fā)明提供了治療多形性成膠質(zhì)細(xì)胞瘤的方法，其包括向患者施用有效量的39-去曱氧基雷帕霉素類似物。在特定的方面，39-去曱氧基雷帕霉素類似物是39-去曱氧基雷帕霉素。在另一個方面，39-去曱氧基雷帕霉素類似物是與雷帕霉素在第9、16或27位之一個或多個位置上有額外區(qū)別的39-去曱氧基雷帕霉素類似物。在進(jìn)一步優(yōu)選的具體實(shí)施方式中，本發(fā)明提供了治療神經(jīng)退行性病癥的方法，其包括向患者施用有效量的39-去曱氧基雷帕霉素類似物。在特定的方面，39-去曱氧基雷帕霉素類似物是39-去曱氧基雷帕霉素。在另一個方面，39-去曱氧基雷帕霉素類似物是與雷帕霉素在第9、16或27位之一個或多個位置上有額外區(qū)別的39-去曱氧基雷帕霉素類似物。特別是，神經(jīng)退行性病癥可選自由阿爾茨海默氏病、多發(fā)性硬化和亨廷頓氏病組成的組。所以，在一個具體實(shí)施方式中，本發(fā)明提供了治療阿爾茨海默氏病的方法，其包括向患者施用有效量的39-去曱氧基雷帕霉素類似物。在特定的方面，39-去曱氧基雷帕霉素類似物是39-去曱氧基雷帕霉素。在另一個方面，39-去曱氧基雷帕霉素類似物是與雷帕霉素在第9、16或27位之一個或多個位置上有額外區(qū)別的39-去曱氧基雷帕霉素類似物。在進(jìn)一步的具體實(shí)施方式中，本發(fā)明提供了治療多發(fā)性硬化的方法，其包括向患者施用有效量的39-去曱氧基雷帕霉素類似物。在特定的方面，39-去曱氧基雷帕霉素類似物是39-去曱氧基雷帕霉素。在另一個方面，39-去甲氧基雷帕霉素類似物是與雷帕霉素在第9、16或27位之一個或多個位置上有額外區(qū)別的39-去曱氧基雷帕霉素類似物。在可選的具體實(shí)施方式中，本發(fā)明提供了治療亨廷頓氏病的方法，其包括向患者施用有效量的39-去曱氧基雷帕霉素類似物。在特定的方面，39-去曱氧基雷帕霉素類似物是39-去曱氧基雷帕霉素。在另一個方面，39-去曱氧基雷帕霉素類似物是與雷帕霉素在第9、16或27位之一個或多個位置上有額外區(qū)別的39-去曱氧基雷帕霉素類似物。本發(fā)明還提供了39-去曱氧基雷帕霉素類似物在制備藥物中的用途，所述藥物用于治療癌癥或B-細(xì)胞惡性肺瘤，用于誘導(dǎo)或維持免疫抑制，用于刺激神經(jīng)元再生，用于治療真菌感染、移植排斥、移植物抗宿主的疾病、自體免疫性疾病、神經(jīng)退行性病癥、炎癥疾病、血管疾病和纖維化疾病。特定地，本發(fā)明提供了39-去曱氧基雷帕霉素類似物、或其藥學(xué)上可接受的鹽的用途，用于制備治療由神經(jīng)損傷或疾病造成的醫(yī)學(xué)病癥的藥物。在特定的方面，39-去曱氧基雷帕霉素類似物是39-去甲氧基雷帕霉素。在另一個方面，39-去曱氧基雷帕霉素類似物是與雷帕霉素在第9、16或27位之一個或多個位置上有額外區(qū)別的39-去曱氧基雷帕霉素類似物。本發(fā)明還提供了39-去曱氧基雷帕霉素類似物(即增加了血腦屏障穿透性的雷帕霉素類似物)、或其藥學(xué)上可接受的鹽的用途，用于制備治療其中血腦屏障阻礙遞送化合物的影響中樞神經(jīng)系統(tǒng)的醫(yī)學(xué)病癥的藥物。在特定的方面，39-去曱氧基雷帕霉素類似物是39-去曱氧基雷帕霉素。在另一個方面，39-去曱氧基雷帕霉素類似物是與雷帕霉素在第9、16或27位之一個或多個位置上有額外區(qū)別的39-去甲氧基雷帕霉素類似物。本發(fā)明還明確提供了39-去曱氧基雷帕霉素類似物在制備治療一種或多種腦肺瘤的藥物中的用途。在特定的方面，39-去甲氧基雷帕霉素類似物是39-去曱氧基雷帕霉素。在另一個方面，39-去甲氧基雷帕霉素類似物是與雷帕霉素在第9、16或27位之一個或多個位置上有額外區(qū)別的39-去曱氧基雷帕霉素類似物。在特定的具體實(shí)施方式中，本發(fā)明明確提供了39-去曱氧基雷帕霉素類似物在制備治療多形性成膠質(zhì)細(xì)胞瘤的藥物中的用途。在特定的方面，39-去曱氧基雷帕霉素類似物是39-去曱氧基雷帕霉素。在另一個方面，39-去曱氧基雷帕霉素類似物是與雷帕霉素在第9、16或27位之一個或多個位置上有額外區(qū)別的39-去曱氧基雷帕霉素類似物。本發(fā)明還明確提供了39-去甲氧基雷帕霉素類似物在制備治療神經(jīng)退行性病癥的藥物中的用途。在特定的方面，39-去曱氧基雷帕霉素類似物是39-去曱氧基雷帕霉素。在另一個方面，39-去曱氧基雷帕霉素類似物是與雷帕霉素在第9、16或27位之一個或多個位置上有額外區(qū)別的39-去曱氧基雷帕霉素類似物。特別地，神經(jīng)退行性病癥可選自由阿爾茨海默氏病、多發(fā)性硬化和亨廷頓氏病組成的組。所以，在一個具體實(shí)施方式中，本發(fā)明提供了39-去曱氧基雷帕霉素類似物在制備治療阿爾茨海默氏病的藥物中的用途。在特定的方面，39-去曱氧基雷帕霉素類似物是39-去曱氧基雷帕霉素。在另一個方面，39-去曱氧基雷帕霉素類似物是與雷帕霉素在第9、16或27位之一個或多個位置上有額外區(qū)別的39-去曱氧基雷帕霉素類似物。在進(jìn)一步的具體實(shí)施方式中，本發(fā)明提供了39-去曱氧基雷帕霉素類似物在制備治療多發(fā)性硬化的藥物中的用途。在特定的方面，39-去曱氧基雷帕霉素類似物是39-去曱氧基雷帕霉素。在另一個方面，39-去曱氧基雷帕霉素類似物是與雷帕霉素在第9、16或27位之一個或多個位置上有額外區(qū)別的39-去曱氧基雷帕霉素類似物.在可選的具體實(shí)施方式中，本發(fā)明提供了39-去曱氧基雷帕霉素類似物在制備治療亨廷頓氏病的藥物中的用途。在特定的方面，39-去甲氧基雷帕霉素類似物是39-去曱氧基雷帕霉素。在另一個方面，39-去曱氧基雷帕霉素類似物是與雷帕霉素在第9、16或27位之一個或多個位置上有額外區(qū)別的39-去曱氧基雷帕霉素類似物。39-去曱氧基雷帕霉素類似物是雷帕霉素的結(jié)構(gòu)相近的類似物，利用WO04/007709所述的方法可制備它?？墒牵鼈冿@示出不同于雷帕霉素的活性語，例如用NCI60細(xì)胞系對39-去曱氧基雷帕霉素和相關(guān)類似物進(jìn)行的COMPARE分析所示的(參見下表1)。COMPARE分析利用Pearson分析來比較2種化合物在NCI60-細(xì)胞系上的活性，并產(chǎn)生相關(guān)系數(shù)，其顯示2種化合物活性i普有多少相似，而且這可以顯示它們的作用機(jī)理有多少相關(guān)。如特定例子所示，雷帕霉素和39-去曱氧基雷帕霉素的Pearson系數(shù)是0.614，相較雷帕霉素和CCI-779(雷帕霉素的40-羥基酯衍生物)之間的Pearson系數(shù)是0.86(Dancey,2002)。所以，可以看出，39-去甲氧基雷帕霉素類似物與雷帕霉素相比有不同的活性譜。表1<table>tableseeoriginaldocumentpage19</column></row><table>多藥物耐受性(MDR)是治療癌癥和B-細(xì)胞惡性腫瘤中的重要難題。它是許多癌癥中發(fā)展出藥物耐受性背后的根本原因(PersidisA,1999)。最初有效的藥物在一段時間后變得完全無效。MDR與三磷酸腺苷結(jié)合表達(dá)盒傳送蛋白(ABC傳送蛋白)水平增高、特別是編碼P-糖蛋白(P-gp)的MDi/基因或編碼MRP1的Afi尸7基因的表達(dá)增加相關(guān)。MDW基因表達(dá)水平在不同癌衍生出的細(xì)胞系之間變化很大，它在一些細(xì)胞系中檢測不到，而在另一些中可以顯示出比標(biāo)準(zhǔn)對照表達(dá)增加多至10或100倍。雷帕霉素和39-去曱氧基雷帕霉素之間的活性譜中所顯示的一些差異可以被解釋，因?yàn)?9-去曱氧基雷帕霉素類似物不是P-gp的底物。與雷帕霉素相比，39-去曱氧基雷帕霉素類似物從Caco-2細(xì)胞流出減少，而且體外P-gp底物試驗(yàn)顯示39-去曱氧基雷帕霉素不是P-gp的底物(參見本文的實(shí)施所以，本發(fā)明的另一方面提供了39-去曱氧基雷帕霉素類似物在治療對一種或多種現(xiàn)有抗癌劑有耐受性的癌癥或B-細(xì)胞惡性腫瘤(即MDR癌癥或B-細(xì)胞惡性肺瘤)中的用途。在特定的方面，本發(fā)明提供了39-去曱氧基雷帕霉素在治療表達(dá)P-gp的癌癥或B-細(xì)胞惡性腫瘤中的用途。在更優(yōu)選的具體實(shí)施方式中，本發(fā)明提供了39-去曱氧基雷帕霉素在治療高表達(dá)P-gp的癌癥或B-細(xì)胞惡性腫瘤中的用途。特別地，高表達(dá)P-gp的癌癥或B-細(xì)胞惡性腫瘤可以相對對照水平增加表達(dá)2倍、5倍、10倍、20倍、25倍、50倍或100倍。在以上用途的特定的方面，39-去曱氧基雷帕霉素類似物是39-去曱氧基雷帕霉素。在以上用途的另一個方面，39-去曱氧基雷帕霉素類似物是與雷帕霉素在第9、16或27位之一個或多個位置上有額外區(qū)別的39-去曱氧基雷帕霉素類似物。合適的對照是不表達(dá)P-gp的細(xì)胞，其具有低表達(dá)水平的P-gp或其具有低MDR功能，所屬領(lǐng)域技術(shù)人員知道或能鑒定出這種細(xì)胞系；例如G旦不限于)，合適的細(xì)胞系包括MDA435/LCC6,SBC-3/CDDP，MCF7,NCI-H23，NCI-H522，A549/ATCC，EKVX，NCI-H226，NCI-H322M，NCI-H460,HOP-18，HOP-92，LXFL529,DMS114,DMS273,HT29,HCC-2998,HCT-116,COLO205，KM12，KM20L2,MDA-MB-231/ATCC，MDA-MB-435，MDA-N,BT-549,T-47D,OVCAR陽3，OVCAR-4，OVCAR-5，OVCAR-8,IGROV1,SK-OV-3,K-562，MOLT-4，HL-60(TB),RPMI-8226,SR，SN12C,RXF-631,786-0，TK-10,LOXIMVI，MALME-3M，SK-MEL-2，SK-MEL-5，SK-MEL-28，M14,UACC-62,UACC-257,PC-3,DU-145,SNB-19，SNB-75,SNB-78，U251，SF-268，SF-539，XF498。在可選的方面，本發(fā)明提供了39-去曱氧基雷帕霉素類似物在制備用于治療MDR癌癥或B-細(xì)胞惡性腫瘤的藥物中的用途。在特定的方面，本發(fā)明提供了39-去曱氧基雷帕霉素類似物在制備用于治療表達(dá)P-gp的癌癥或B-細(xì)胞惡性腫瘤的藥物中的用途。在更優(yōu)選的具體實(shí)施方式中，本發(fā)明提供了39-去曱氧基雷帕霉素類似物在制備用于治療高表達(dá)P-gp的癌癥或B-細(xì)胞惡性胂瘤的藥物中的用途。特別地，高表達(dá)P-gp的癌癥或B-細(xì)胞惡性腫瘤可相對對照水平增加表達(dá)2倍、5倍、10倍、20倍、25倍、50倍或100倍。在特定的方面，39-去曱氧基雷帕霉素類似物是39-去曱氧基雷帕霉素。在另一個方面，39-去曱氧基雷帕霉素類似物是與雷帕霉素在第9、16或27位之一個或多個位置上有額外區(qū)別的39-去曱氧基雷帕霉素類似物。合適的對照如上所述。在樣品中確定P-gp表達(dá)水平的方法在本文中另外有描述。所以，在另一個方面，本發(fā)明才是供了用于治療表達(dá)P-gp的癌癥或B-細(xì)胞惡性腫瘤的方法，其包括施用治療有效量的39-去曱氧基雷帕霉素類似物。在特定的方面，39-去甲氧基雷帕霉素類似物是39-去曱氧基雷帕霉素。在另一個方面，39-去曱氧基雷帕霉素類似物是與雷帕霉素在第9、16或27位之一個或多個位置上有額外區(qū)別的39-去曱氧基雷帕霉素類似物。P-糖蛋白(P-gp)在特定癌癥類型中的表達(dá)水平可由所屬領(lǐng)域技術(shù)人員利用技術(shù)來確定，所述技術(shù)包括但不限于實(shí)時RT-PCR(Szakdcs等，2004;Stein等，2002;Langmann等;2003)、通過免疫組織化學(xué)(Stein等，2002)或利用微陣列(Lee爭，2003),這些方法僅供示例，其他合適的方法也將會為所屬領(lǐng)域技術(shù)人員所想到。如本文實(shí)施例所示，39-去曱氧基雷帕霉素相對于雷帕霉素顯示出增加了代謝穩(wěn)定性。以前許多論文將雷帕霉素上的39-曱氧基鑒定為代謝進(jìn)攻以將雷帕霉素轉(zhuǎn)化成39-0-去曱基雷帕霉素的主要位點(diǎn)(Trepanier等，l"8)。與親本化合物相比，雷帕霉素的主要代謝物顯著降低了活性(Gallant-Haidner等,2000，Trepanier等，1998)。相反，39-去曱氧基雷帕霉素不再具有代謝進(jìn)攻可利用的最主要的位點(diǎn)，造成了能增加化合物的穩(wěn)定性(參見實(shí)施例)。將39-去曱氧基雷帕霉素的較高或相當(dāng)?shù)墓πНB加到雷帕霉素親本化合物上，這為本發(fā)明的化合物提供了更長的半衰期。這是39-去曱氧基雷帕霉素相對于雷帕霉素的又一令人驚訝的優(yōu)點(diǎn)。上述39-去曱氧基雷帕霉素的性質(zhì)(不是P-gp的底物，增加了代謝穩(wěn)定性和減少了通過P-gp的細(xì)胞流出)顯示，與親本化合物雷帕霉素相比，39-去曱氧基雷帕霉素改善了生物利用度。所以，本發(fā)明提供了39-去曱氧基雷帕霉素(改善了代謝穩(wěn)定性、改善了細(xì)胞膜穿透性并有獨(dú)特的癌細(xì)胞抑制特性的雷帕霉素類似物)在醫(yī)藥中的用途，尤其用于治療癌癥或B-細(xì)胞惡性腫瘤。本發(fā)明還提供了藥物組合物，其包含39-去曱氧基雷帕霉素類似物、或其藥學(xué)上可接受的鹽，以及藥學(xué)上可接受的載體。在特定的方面，本發(fā)明提供了藥物組合物，其包含39-去曱氧基雷帕霉素。在另一個方面，本發(fā)明提供了藥物組合物，其包含與雷帕霉素在第9、16或27位之一個或多個位置上有額外區(qū)別的39-去曱氧基雷帕霉素類似物。在特定的具體實(shí)施方式中，本發(fā)明提供了上述藥物組合物，其特定地配制成用于靜脈內(nèi)施用的配方。雷帕霉素和正在或已經(jīng)進(jìn)行臨床試驗(yàn)中的相關(guān)化合物，如CCI-779和RADOOl，具有差的藥理學(xué)特性，包括差的代謝穩(wěn)定性、差的穿透性、通過P-gp的高流出水平和差的生物利用度。本發(fā)明提供了39-去曱氧基雷帕霉素類似物或其藥學(xué)上可接受的鹽，其與雷帕霉素相比具有改善的藥理學(xué)性質(zhì)。本發(fā)明另一令人驚訝的方面是，與現(xiàn)有雷帕霉素類似物相比，39-去曱氧基雷帕霉素類似物顯示出顯著不同的藥物動力學(xué)特性。特別地，39-去曱氧基雷帕霉素類似物顯示出能增加血腦屏障穿透性，因而對于給定的血液水平與相關(guān)類似物相比，能在腦中見到這些化合物的更高暴露水平。該藥物動力學(xué)差異完全是無法預(yù)料的，并且沒有被任何現(xiàn)有技術(shù)所提示。對于包括神經(jīng)退行性病癥和腦腫瘤的疾病來說，當(dāng)前可利用療法的已知缺點(diǎn)是要解決讓藥物到達(dá)作用位點(diǎn)的難題(參見Pardridge，2005)。已有報(bào)道說這是現(xiàn)有雷帕霉素類似物用于治療時的難題，特別是有研究調(diào)查了CCI-779在治療多形性成膠質(zhì)細(xì)胞瘤中的功效，結(jié)論是盡管全身濃度足夠，但血腦屏障起了阻礙藥物遞送到腫瘤的屏障作用(Chang，2005)。所以，本發(fā)明首次公開了改善了血腦屏障穿透性的雷帕霉素類似物以及由此帶來的治療腦肺瘤和神經(jīng)退行性病癥的重要用途。優(yōu)選用于本發(fā)明上述方面之任意的39-去曱氧基雷帕霉素類似物包括與雷帕霉素在第9、16或27位之任一位置上有額外區(qū)別的那些，即優(yōu)選39-去甲氧基雷帕霉素類似物不是39-去曱氧基雷帕霉素本身。進(jìn)一步優(yōu)選的39-去曱氧基雷帕霉素類似物包括那些，其中-39-去曱氧基雷帕霉素類似物在第27位上有羥基，即R3代表OH;-39-去曱氧基雷帕霉素類似物在第27位上有氫，即R3代表OH;或■39-去曱氧基雷帕霉素類似物在第16位上有羥基，即R2代表OH。利用所屬領(lǐng)域技術(shù)人員已知的體內(nèi)和體外方法，所屬領(lǐng)域技術(shù)人員將能確定本發(fā)明化合物的藥物動力學(xué)和生物利用度，所述方法包括但不限于下述的和Gallant-Haidner等，2000和Trepanier等，1998和其中參考文獻(xiàn)中的那些。通過許多因素來確定化合物的生物利用度，(如水溶性、細(xì)胞膜穿透性、蛋白質(zhì)結(jié)合和代謝以及穩(wěn)定性的程度)其中每個都可通過本文實(shí)施例所述的體外測試來確定，所屬領(lǐng)域技術(shù)人員將能理解的是，改善這些因素中的一種或多種將能改善化合物的生物利用度?？蛇x地，39-去曱氧基雷帕霉素或其藥學(xué)上可接受的鹽的生物利用度可利用以下更詳細(xì)描述的或本文實(shí)施例中的體內(nèi)方法來測定。體內(nèi)試驗(yàn)體內(nèi)試驗(yàn)也可用于測定諸如39-去甲氧基雷帕霉素的化合物的生物利用度。通常，所述化合物向測試動物(如小鼠或大鼠)腹膜內(nèi)(i.p.)或靜脈內(nèi)(i.v.)并口服(p.o.)施用，定期取血樣以檢測藥物的血漿濃度如何隨時間變化。血漿濃度隨時間的時程可用于將化合物的絕對生物利用度計(jì)算成利用標(biāo)準(zhǔn)模型的百分比。典型規(guī)程的示例如下所述。向小鼠靜脈內(nèi)給藥3mg/kg39-去曱氧基雷帕霉素或口服給藥10mg/kg39-去曱氧基雷帕霉素。在5分鐘、15分鐘、lh、4h和24h間隔時取血樣，通過HPLC確定樣品中的39-去曱氧基雷帕霉素濃度。然后可用血漿或全血濃度的時程來得出關(guān)鍵的參數(shù)，如血漿或血液濃度-時間曲線下的面積(AUC—其直接與到達(dá)系統(tǒng)循環(huán)的未改變的藥物的量成正比)、最大(峰值)血漿或血液藥物濃度、最大血漿或血液藥物濃度發(fā)生的時間(峰值時間)、用于精確確定生物利用度的其他因素，包括化合物的終末半衰期、全身清除率、分布的穩(wěn)態(tài)體積和F%。然后通過非間隔或間隔方法分析這些參數(shù)以給出計(jì)算得出的生物利用度百分比，這種方法的例子參見Gallant-Haidner等，2000和Trepanier等，1998，和其中的參考文獻(xiàn)。屬領(lǐng)域技術(shù)人員已知的體內(nèi)模型中測試。這些模型包括但不限于，對于阿爾茨海默氏病——表達(dá)人家族性阿爾茨海默氏病(FAD)p-淀粉樣蛋白前體(APP)的動物、過量表達(dá)人野生型APP的動物、過量表達(dá)p-淀粉樣蛋白l-42(pA)的動物、表達(dá)FAD早老素-1(PS-1)的動物(如German和Eisch，2004)。對于多發(fā)性硬化——實(shí)驗(yàn)性自體免疫腦脊髓炎(EAE)模型(參見Bradl,2003和實(shí)施例7)。對于帕金森氏癥——1-曱基-4-笨基-1,2，3,6-四氫吡啶(MPTP)模型或6-羥基多巴胺(6-0HDA)模型(參見如Emborg，2004;SchoberA.2004)。對于亨廷頓氏病，有幾種模型，包括通過將帶有高度延伸的CAG重復(fù)序列的人亨廷頓氏病(HD)基因外顯子1導(dǎo)入進(jìn)小鼠生殖系而產(chǎn)生的R6品系模型(Sathasivam等，1999)和其他的(參見Hersch和Ferrante,2004)。本發(fā)明前述化合物或其配方可通過任何常規(guī)方法施用，例如但不限于非腸道、口服、局部(包括口腔、舌下或透皮)、通過醫(yī)療設(shè)備(如支架)、通過吸入或通過注射(皮下或肌肉內(nèi))施用。治療可由一段時間的單劑量或多劑量構(gòu)成。盡管39-去甲氧基雷帕霉素類似物可以單獨(dú)施用，然而優(yōu)選將它與一種或多種可接受的載體一起以藥物配制品提供。一種或多種載體必須是"可接受的"，含義是與本發(fā)明的化合物相容并且對其受體無害。合適的載體例子在以下將更詳細(xì)地描述。39-去曱氧基雷帕霉素類似物可單獨(dú)或與其他治療劑聯(lián)合施用，聯(lián)合施用兩種(或更多)制劑能顯著降低每種所用的劑量，由此減少它們所見到的副作用。增加39-去曱氧基雷帕霉素的代謝穩(wěn)定性是優(yōu)于雷帕霉素的額外優(yōu)點(diǎn)，因此不夫可能在與是P450酶底物的藥物聯(lián)合使用時如與雷帕霉素一起所產(chǎn)生的一樣造成藥物-藥物相互作用(Lampen等，1998)。所以在一個具體實(shí)施方式中，39-去曱氧基雷帕霉素類似物與另一種治療劑聯(lián)合施用，用于誘導(dǎo)或維持免疫抑制，用于治療移植排斥、移植物抗宿主疾病、自體免疫性病癥或炎癥疾病。優(yōu)選的試劑包括但不限于免疫調(diào)節(jié)劑，如硫唑。票呤、皮質(zhì)甾醇、環(huán)磷酰胺、環(huán)孢霉素A、FK506、霉酚酸酯、OKT-3和ATG。在可選的具體實(shí)施方式中，39-去曱氧基雷帕霉素類似物與另一種治療劑聯(lián)合施用，用于治療癌癥或B-細(xì)胞惡性腫瘤。優(yōu)選的試劑包括但不限于，曱氨蝶呤、甲酰四氬葉酸、阿霉素、強(qiáng)的松、博來霉素、環(huán)磷酰胺、5-氟尿嘧啶、紫杉醇、多西紫杉醇、長春新堿、長春堿、長春瑞賓、亞德里亞霉素、它莫西芬、托瑞米芬、乙酸曱地孕酮、阿那曲唑、戈舍瑞林、抗HER2單克隆抗體(如HerceptinTM)、卡培他濱、鹽酸雷洛昔芬、EGFR抑制劑(如Iressa,TarcevaTM、ErbituxTM)、VEGF抑制劑(如AvastinTM)、蛋白酶體抑制劑(如VelcadeTM)、Glivec⑧或hsp90抑制劑(如17-AAG)。另夕卜，39-去曱氧基雷帕霉素與其他療法一起施用，包括但不限于放射療法或外科手術(shù)。在一個具體實(shí)施方式中，39-去曱氧基雷帕霉素類似物與另一種治療劑聯(lián)合施用，用于治療血管疾病，優(yōu)選的試劑包括但不限于，ACE抑制劑、血管緊張素II受體拮抗劑、貝丁酸(fibricacid)衍生物、HMG-CoA還原酶抑制劑、)3腎上腺素阻斷劑、鈣通道阻斷劑、抗氧化劑、抗凝血劑和血小板抑制劑(如Plavix)。在一個具體實(shí)施方式中，39-去曱氧基雷帕霉素類似物與另一種治療劑聯(lián)合施用，用于刺激神經(jīng)元再生，優(yōu)選的試劑包括但不限于，諸如神經(jīng)生長因子的神經(jīng)營養(yǎng)因子、神經(jīng)膠質(zhì)衍生的生長因子、腦衍生的生長因子、睫狀神經(jīng)營養(yǎng)因子和神經(jīng)營養(yǎng)素-3。在一個具體實(shí)施方式中，39-去曱氧基雷帕霉素類似物與另一種治療劑聯(lián)合施用，用于治療真菌感染；優(yōu)選的試劑包括但不限于，兩性霉素B、氟胞嘧啶、棘白菌素(如卡泊芬凈、阿尼芬凈或米卡芬凈(micaflmgin))、灰黃霉素、咪唑或三唑抗真菌劑(如克霉唑、密康唑、酮康唑、益康唑、布康唑、奧昔康唑、特康唑、伊曲康唑、氟康唑或伏立康唑)。在一個具體實(shí)施方式中，39-去曱氧基雷帕霉素類似物與另一種治療劑聯(lián)合施用，用于治療阿爾茨海默氏病；優(yōu)選的試劑包括但不限于，膽堿脂酶抑制劑，如多奈哌齊、卡巴拉汀、和加蘭他敏；N-曱基-D-天冬氨酸(NMDA)受體拮抗劑，如美金剛胺。在一個具體實(shí)施方式中，39-去甲氧基雷帕霉素類似物與另一種治療劑聯(lián)合施用，用于治療多發(fā)性硬化；優(yōu)選的試劑包括但不限于，千擾素(3-lb、千擾素(3-la、格拉默(glatiramer)、米托蒽醌、環(huán)磷酰胺、皮質(zhì)甾醇(如曱基氫化潑尼松、強(qiáng)的松、地塞米松)。聯(lián)合施用包括任何作為同一治療方案的部分向患者遞送兩種或更多治療劑的方法，這對于普通技術(shù)人員來說是顯而易見的。盡管兩種或更多試劑可在單一制劑中同時施用，然而這不是必要的。試劑可用不同制劑并在不同時間施用。制劑可方便地以單位劑量呈現(xiàn)，并可由任何現(xiàn)有公知制藥技術(shù)來制備。這些方法包括組合活性成分(本發(fā)明的化合物)和包括一種或多種輔助成分的載體的步驟。通常，配方通過均一并緊密地組合活性成分和液體載體或細(xì)分的固體載體或兩者來制備，然后必要時，給產(chǎn)品賦形。'39-去曱氧基雷帕霉素類似物通常靜脈內(nèi)、口服或通過任何非腸道途徑以包括活性成分的藥物制劑施用，任選是非毒性有機(jī)或無機(jī)酸、或堿、加成鹽的形式，其是藥學(xué)上可接受的劑量形式。根據(jù)要治療的疾病和患者、以及施用途徑，組合物可以可變劑量施用。本發(fā)明適于注射使用的藥物組合物包括無菌水溶液或分散體。而且，組合物可以是無菌粉末的形式，可用于臨時配制成該無菌水溶液或分散體。對于所有情況，最終的注射形式必須是無菌的，并必須是易于有效注射的液體。在生產(chǎn)和儲存的條件下，藥物組合物必須是穩(wěn)定的；因而，保存優(yōu)選應(yīng)該能抗諸如細(xì)菌和真菌的微生物的污染作用。載體可以是溶劑或分散介質(zhì)，其包括如，水、乙醇、多元醇(如甘油、丙二醇和液態(tài)聚乙二醇)、植物油、和其合適的混合物。例如，39-去曱氧基雷帕霉素類似物可以口服、口腔或舌下施用，施用形式有片劑、膠嚢、丸、酏劑、溶液或混懸液，其中可含調(diào)味劑或著色劑，用于即時、延時或控釋使用。適于口服施用的39-去曱氧基雷帕霉素類似物溶液或混懸液還可包含賦形劑(如N,N-二曱基乙酰胺)、分散劑(如聚山梨酸酯80)、表面活性劑、和助溶劑(如聚乙二醇、Phosal50PG(其由卵磷脂、大豆脂肪酸、乙醇、單/二甘油酯、丙二醇和抗壞血酸棕櫚酸酯組成))。這些片劑可包含賦形劑，如微晶纖維素、乳糖(如乳糖一水合物或無水乳糖)、檸檬酸鈉、碳酸4丐、磷酸二釣和甘氨酸、丁基羥基曱苯(E321)、交聚維酮、羥丙曱纖維素、崩解劑(如淀粉(優(yōu)選玉米、馬鈴薯或木薯淀粉))、淀粉乙醇酸鈉、交聯(lián)羥曱基纖維素鈉(croscarmellosesodium)、和某些復(fù)合硅酸鹽、和粒狀粘合劑(如聚乙烯吡咯烷酮、羥基丙曱基纖維素(HPMC)、羥基-丙基纖維素(HPC)、聚乙二醇8000、蔗糖、明膠和阿拉伯樹膠。另外，可包括潤滑劑，如硬脂酸鎂、硬脂酸、甘油山崳酸酯和滑石。相似類型的固體組合物也可用作明膠膠嚢中的填充物。在這方面，優(yōu)選的賦形劑包括乳糖、淀粉、纖維素、牛乳糖或高分子量聚乙二醇。對于水混懸液和/或酏劑來說，本發(fā)明的化合物可與多種甜味劑或調(diào)味劑、著色物質(zhì)或染料組合，與乳化和/或懸浮劑并與稀釋劑(如水、乙醇、丙二醇和甘油、及其組合)組合。片劑可通過壓縮或鑄模壓制而制造出，可任選與一種或多種輔助成分一起制造。壓制的片劑的制備是在合適的機(jī)器中壓縮自由流動形式(如粉或顆粒)的活性成分，可任選與粘合劑(如聚乙烯吡咯酮、明膠、羥基丙曱基纖維素)、潤滑劑、惰性稀釋劑、防腐劑、崩解劑(如淀粉乙醇酸鈉、交聯(lián)的聚乙烯吡咯酮、交聯(lián)的羧曱基纖維素鈉)、表面活性劑或分散劑混合在一起。鑄模壓制的片劑的制造是在合適的機(jī)器中鑄模壓制用惰性液體稀釋劑弄濕的粉狀化合物的混合物。任選將片劑涂覆或刻痕并可制成制劑，從而緩釋或控釋其中所用的活性成分，例如，以各種比例的羥基丙基曱基纖維素來提供所需的釋放特性。根據(jù)本發(fā)明所述的適于口服施用的配方可以作為離散單位來提供，如膠嚢、糯米紙嚢劑或片劑，每種都包含預(yù)先確定量的活性成分；作為粉末或顆粒；作為水性液體或非水性液體的溶液或混懸液；或作為水包油乳劑或油包水乳劑?；钚猿煞忠部梢酝杷?、藥糖劑或糊劑來提供。適于口中局部施用的配方包括糖錠劑，其包含調(diào)味基質(zhì)中的活性成分，基質(zhì)通常是蔗糖和阿拉伯樹膠或黃芪膠；包括錠劑，其包含惰性基質(zhì)中的活性成分，基質(zhì)如明膠和甘油、或蔗糖和阿拉伯樹膠；并包括漱口水，其包含合適液體載體中的活性成分。應(yīng)該能理解除了上述特定成分，本發(fā)明的配方可包括其他根據(jù)要解決問題的制劑類型得出的現(xiàn)有常規(guī)試劑，例如適于口服施用的那些可包括調(diào)味適于局部施用的藥物組合物可配成藥膏、乳劑、混懸液、洗液、粉、溶液、糊劑、凝膠、填充敷料劑、噴霧劑、氣霧劑或油、透皮設(shè)備、隔離劑等。容的常規(guī)載體和添加劑，如防腐劑、輔助藥物滲透的溶劑、乳劑或藥膏中的潤膚劑和用于洗液的乙醇或油醇。這些載體可以占組合物約1%至約98%的形式來提供。更常用的是，它們將至多構(gòu)成組合物的約80%，僅作為示例，乳劑或藥膏的制備是混合足量的親水物質(zhì)和水，其包含占化合物重量約5-10%，該量足以產(chǎn)生具有所需粘稠度的乳劑或藥膏。適于透皮施用的藥物組合物可以離散的貼片來提供，從而長期保持與接收者表皮的密切接觸。例如，通過電離子滲透療法可將活性試劑從貼片上傳送出來。為了用于外部組織，如口和皮膚，組合物優(yōu)選制成局部使用的藥膏或乳劑。當(dāng)要配成藥膏時，活性試劑可與含蠟或易溶于水的藥膏基質(zhì)一起運(yùn)用?？蛇x地，活性試劑可與水包油乳劑基質(zhì)或油包水基質(zhì)配成乳劑。對于非腸道施用，液體單位劑量形式的制備是利用活性成分和無菌載體，例如但不限于水，S孚、多元醇、甘油和植物油，優(yōu)選是水。根據(jù)所用的載體和濃度，活性成分可溶解或懸浮在載體中。在制備溶液時，活性成分可溶于注射用水中并過濾除菌，然后加入合適的小瓶或安瓿中并密封。有益的是，試劑(如局部麻醉劑、防腐劑和緩沖劑)可溶于載體中。為了增強(qiáng)穩(wěn)定性，組合物可在裝入小瓶并真空脫水后冷凍。然后將凍干粉。因此，它們也可包含相密封在小瓶內(nèi)，并提供注射用水的另一個相應(yīng)的小瓶從而在使用前能重新形成液體。用與溶液基本相同的方式制備非腸道混懸液，不同在于將活性成分懸浮于載體中而不是溶解其中，而且不能通過過濾來完成滅菌?？赏ㄟ^暴露于環(huán)氧乙烷而對活性成分滅菌，然后懸浮于無菌載體中。有益的是，表面活性劑或潤濕劑包括在組合物中以使活性成分更容易分布均勻。39-去曱氧基雷帕霉素類似物也可利用現(xiàn)有已知醫(yī)藥設(shè)備來施用。例如，在一個具體實(shí)施方式中，本發(fā)明的藥物組合物可用無針皮下注射設(shè)備來施用，如公開于U.S.5，399,163;U.S.5,383,851;U.S.5,312，335;U.S.5,064,413;U.S.4,941,880;U.S.4，790，824;或U.S.4，596，556的設(shè)備。用于本發(fā)明的公知的移植物和組合部件實(shí)例包括US4,487,603,其公開了可植入的微輸注泵，用于以可控速率分發(fā)藥物；US4,486，194,其公開了治療設(shè)備，用于通過皮膚來施用藥物；US4，447,233,其公開了藥物輸注泵，用于以精確輸注率遞送藥物；US4,447,224,其公開了可變流量的可植入的輸注裝置，用于持續(xù)遞送藥物；US4,439，196,其公開了滲透性藥物遞送系統(tǒng)，其具有多腔間隔小室；和US4，475，196,其公開了滲透性藥物遞送系統(tǒng)。在特定的具體實(shí)施方式中，39-去曱氧基雷帕霉素類似物可以利用藥物-洗脫支架來施用，例如WO01/87263及相關(guān)公開文獻(xiàn)所述的那些之一或Perin(Perin,EC,2005)所述的那些。許多其他這類移植物、遞送系統(tǒng)和組合部件對所屬領(lǐng)域技術(shù)人員來說是已知的。本發(fā)明化合物的施用劑量將根據(jù)特定化合物、所涉及的疾病、個體、和疾病性質(zhì)和嚴(yán)重度以及個體的身體狀況、和所選擇的施用途徑而變化。所屬領(lǐng)域技術(shù)人員能容易地確定合適的劑量。根據(jù)施用方法，組合物可包含超過重量0.1%、優(yōu)選5-60%、更優(yōu)選重量的10-30%的本發(fā)明化合物。所屬領(lǐng)域技術(shù)人員將會認(rèn)識到，通過要治療的病癥性質(zhì)和范圍、施用形式、途徑和位點(diǎn)、和要治療的特定個體的年齡和病癥，將會確定出本發(fā)明化合物的單個劑量的最佳量和間隔，而且醫(yī)師會最終確定合適的用量。該劑量可以合適的頻率重復(fù)。如果副作用產(chǎn)生了，則可以根據(jù)常規(guī)臨床實(shí)踐，改變或減少劑量的量和/或頻率。附圖簡述圖1:顯示了雷帕霉素的結(jié)構(gòu)。圖2:顯示了39-去曱氧基雷帕霉素的裂解途徑。圖3:簡要顯示了免疫印跡，概述了39-去曱氧基雷帕霉素和雷帕霉素的mTOR抑制活性。圖4:紫杉醇(A和C)和39-去曱氧基雷帕霉素(B和D)在正常(A和B)或高P-gp表達(dá)(C和D)的細(xì)胞系中以所有測試濃度得到的。/。T/C值。圖5:A-顯示了在單次靜脈內(nèi)或口服施用雷帕霉素和39-去曱氧基雷帕霉素后腦組織或血樣的0-24h的總曲線下面積(AUC)。B-顯示了單次靜脈內(nèi)施用后在腦組織中檢測到的隨時間變化的39-去曱氧基雷帕霉素和雷帕霉素水平。圖6:A-顯示了預(yù)防方案下的EAE模型中的疾病進(jìn)程。取值為載體或治療組的中值。B-顯示了治療方案下的EAE模型中的疾病進(jìn)程。取值為載體或治療組的中值。圖7:該圖顯示了通過立體定位注射U87-MG細(xì)胞誘導(dǎo)神經(jīng)膠質(zhì)瘤后小鼠的相對存活％。實(shí)心菱形代表未治療組、實(shí)心方塊代表載體治療組，空心圓代表39-去曱氧基雷帕霉素治療組。實(shí)施例材料和方法材料除非另外說明，所有以下實(shí)施例中所用的試劑都得自商業(yè)渠道。潛#參吸濕鏈霉菌MG2-10[IJMNOQLhis](WO04/007709;Gregory等，2004)于28°C生長在培養(yǎng)基1瓊脂平板(見下)上。在培養(yǎng)基1上生長出后制備出孢子儲存物，保存于含20。/。w/v甘油10。/。w/v乳糖的蒸餾水中并保存于-80。C。將0.1mL冷凍的儲存物接種到250mL長頸瓶中的50mL培養(yǎng)基2(見下)中，制備出營養(yǎng)性培養(yǎng)物。培養(yǎng)物于28。C、300rpm溫育36至48小時。以2.5-5%v/v將營養(yǎng)性培養(yǎng)物接種入培養(yǎng)基3中。以26。C、300rpm進(jìn)行培養(yǎng)6-7天。除非另外說明，接種后24-48小時補(bǔ)料/添加羧酸環(huán)己烷，并以1-2mM的終濃度補(bǔ)料。<table>tableseeoriginaldocumentpage30</column></row><table>用1MNaOH調(diào)節(jié)pH至7.5_然后培養(yǎng)基于121。C高壓滅菌20分鐘。滅菌后每7mL培養(yǎng)基中加入0.16mL40。/。葡萄糖。培#差丄-雄6絲差W,絲淘<table>tableseeoriginaldocumentpage31</column></row><table>滅菌后每7mL中加入0.35mL無菌40%果糖和0.10mLL-賴氨酸(140mg/mL,溶于水，過濾除菌)。i卬K7a押子培養(yǎng)差<table>tableseeoriginaldocumentpage31</column></row><table>AvedexW80糊4青(DeymerIngredientsLtd)35g玉米浸漬固體(Sigma)4g(NH4)2S042g乳酸(80%)1.6mLCaC03(Caltec)7g用1MNaOH調(diào)節(jié)pH至7.5然后培養(yǎng)基于121°C高壓滅菌20分鐘。培券差5:MD6/5-7培#差卩發(fā)攀凝#差)成分每LToastedNutrisoy(ADMIngredientsLtd)15gAvedexW80糊4青(DeymerIngredientsLtd)50g酵母(Allinson)3g玉米浸漬固體(Sigma)1gKH2P042.5gK2HP042.5g(NH4)2S0410gNaCl13gCaC03(Caltec)10gMnCl2.4H203.5mgMgS04.7H2015mgFeS04.7H20150mgZnS04.7H2060mgSAG4710.1ml培養(yǎng)基于121°C滅菌30分鐘。滅菌后每L加入15g果糖。48小時后加入0.5g/LL-賴氨酸。方法A注射體積0.005-0.lmL(根據(jù)靈敏度需要)。HPLC在Agilent"Spherisorb""RapidResolution"卡式(cartridges)SBC8上進(jìn)行，3微米，30mmx2.1mm,運(yùn)行如下流動相流動相A:含0.01%曱酸的純水流動相B:含0.01%曱酸的乙腈流速1mL/分鐘。使用線性梯度，從第0分鐘的5。/。B,到第2.5分鐘的95。/。B,保持95%B直到第4分鐘，回到5。/。B,再進(jìn)行下一輪。通過254nm處的UV吸收和/或通過利用MicromasssQuattro-Micro4義器進(jìn)行質(zhì)譜電噴霧離子化(正性或負(fù)性)來才全測。方法B注射體積0.02mL。HPLC在3微米BDSC18Hypersil(ThermoHypersil-KeystoneLtd)柱上進(jìn)行，其為150x4.6mm,維持在50°C，其運(yùn)行的流動相為流動相A:乙腈(lOOmL),三氟醋酸(1mL),1M醋酸銨(10mL),用去離子水加至1L。流動相B:去離子水(100mL),三氟醋酸(1mL),1M醋酸銨(10mL)，用乙腈加至1L。流速1mL/分鐘。利用55%B-95%B的線性梯度進(jìn)行10分鐘，然后以95。/。B2分鐘，55%B0.5分鐘，再用55%B2.5分鐘。通過280nm處的UV吸收來檢測化合物。方法CHPLC系統(tǒng)包括AgilentHP1100并在3微米BDSCI8Hypersil(ThermoHypersil-KeystoneLtd)柱上進(jìn)行，其為150x4.6mm,維持在40。C,其運(yùn)4亍的流動相為流動相A:去離子水。流動相B:乙腈。流速1mL/分鐘。該系統(tǒng)與BmkerDaltonicsEsquire3000電噴霧質(zhì)譜儀相連。在500至1000道爾頓的掃描范圍設(shè)置正性負(fù)性轉(zhuǎn)換。利用55%B-95%B的線性梯度進(jìn)行10分鐘，然后95%B2分鐘，55%B0.5分鐘，再55。/。B2.5分鐘。針對抗癌活性的體外生物試驗(yàn)用單層增殖試驗(yàn)對12種人肺瘤細(xì)胞系在OncotestTestingFacility(實(shí)驗(yàn)?zāi)[瘤學(xué)研究所，OncotestGmbH,Freiburg)上進(jìn)行化合物抗癌活性的體外評估。所選的12種細(xì)胞系的特征在表2中簡述。表2測試細(xì)胞系#細(xì)胞系特征1MCF-7乳腺，NCI標(biāo)準(zhǔn)2MDA-MB-231乳月泉-PTEN陽性，耐受17-AAG3MDA-MB-468乳腺-PTEN陰性，耐受17-AAG4NCI-H460肺,NCI標(biāo)準(zhǔn)SF-268CNS,NCI標(biāo)準(zhǔn)6OVCAR-3卯巢-p85突變。AKT擴(kuò)增的。7A498腎，高M(jìn)DR表達(dá)，8GXF251L田9MEXF394NL黑素瘤10UXF1138L子宮11LNCAP前列腺-PTEN陰性12DU145前列腺-PTEN陽性如Roth等1999所述，Oncotest細(xì)胞系從人腫瘤異種移植體中建立。供體異種移植體的來源如Fiebig等1992所述。其他細(xì)胞系得自NCI(H460，SF-268，OVCAR-3，DU145,MDA-MB-231，MDA-MB-468)或購自DSMZ(Braunschweig,德國)(LNCAP)。所有細(xì)胞系，除非另外指明，均于37。C生長在空氣潮濕(95。/。空氣，5%C02)的含RPMI1640培養(yǎng)基、10%胎牛血清、和0.1mg/mL慶大霉素(PAA，C6lbe,德國)的'混合即可用的，培養(yǎng)基中。卓層試驗(yàn)-說癥7.'使用改進(jìn)的碘化丙錠試驗(yàn)評估一種或多種測試化合物對12種人腫瘤細(xì)胞系生長的影響(Dengler等，1995)。簡而言之，在指數(shù)生長階段的培養(yǎng)物中通過胰蛋白酶化來收獲細(xì)胞，計(jì)數(shù)并鋪于96孔平底微滴定板中，其中細(xì)胞密度取決于細(xì)胞系(5-10，000個活細(xì)胞/孔)。讓細(xì)胞恢復(fù)24h,以使細(xì)胞恢復(fù)指數(shù)生長，將0.01mL培養(yǎng)基(每個平板6個對照孔)或含39-去曱氧基雷帕霉素的培養(yǎng)基加入到孔中。每種濃度一式三份鋪板。39-去曱氧基雷帕霉素用兩種濃度(0.001mM和O.OlmM)應(yīng)用。持續(xù)溫育4天后，有或沒有39-去曱氧基雷帕霉素的細(xì)胞培養(yǎng)基用0.2mL碘化丙錠(PI)水溶液(7mg/L)替換。為了測量活細(xì)胞的比例，冷凍平板以通透細(xì)胞。解凍平板后，用Cytofluor4000微板讀數(shù)儀測量熒光(530nm激發(fā)，620nm發(fā)射)，得出與活細(xì)胞總數(shù)的直接關(guān)系。生長抑制被表示成處理/對照x100(%T/C)。繪制化合物濃度相對于細(xì)胞存活的圖，來評估活性化合物的IC5o和IC7()值。-說程2:國家癌癥研究所(NCI)癌癥篩選小組的人腫瘤細(xì)胞系生長于含5%胎牛血清和2mML-谷氨酰胺的RPMI1640培養(yǎng)基中(Boyd和Paull,1995)。將細(xì)胞以0.1mL接種于96孔微滴定板中，其中根據(jù)單個細(xì)胞系的倍增時間，鋪板密度從5，000至40,000個細(xì)胞/孔。細(xì)胞接種后，于37。C、5%C02、95%空氣和100。/。相對濕度溫育微滴定板24h,然后加入實(shí)驗(yàn)藥物。24h后，用三氯乙酸(TCA)原位固定每種細(xì)胞系的兩塊板，由此測量藥物加入的時間點(diǎn)(Tz)上每種細(xì)胞系的纟田胞群。將實(shí)驗(yàn)藥物以所需最終最大測試濃度的400倍溶解于二曱亞砜中，使用前冷凍保存。在加入藥物的時候，解凍冷凍濃縮物的等分試樣，并用含0.05mg/mL慶大霉素的完全培養(yǎng)基稀釋至所需最終最大測試濃度的兩倍。制備另外的4個10倍或i/2對數(shù)連續(xù)稀'釋液，以提供總共5種藥物濃度，外加對照。將這些不同藥物稀釋液的0.1mL等分試樣加到已經(jīng)含0.1mL培養(yǎng)基的合適的微滴定孔中，由此得到所需的最終藥物濃度。加入藥物后，于37。C、5%C02、95%空氣和100%相對濕度再溫育平才反48h。對于粘附的細(xì)胞，通過加入冷的TCA來終止試馬全。通過輕輕加入0.05mL冷的50%(w/v)TCA(終濃度，10%TCA)來原位固定細(xì)胞并于4。C溫育60分鐘。棄上清液，并滴水洗板5次，并于空氣中干燥。在1%乙酸中的0.4。/。(w/v)硫若丹明B(SRB)溶液(O.lmL)加到每個孔中，并于室溫溫育板10分鐘。染色后，用1%乙酸洗滌5次以去除未結(jié)合的染料，并于空氣中干燥板。然后用lOmM三羥曱基氨基曱烷堿溶解結(jié)合的著色劑，并在自動平板讀數(shù)儀上以515nm波長讀出吸收值。對于懸浮的細(xì)胞，用相同的方法，但不同點(diǎn)在于通過輕輕加入0.05mL80。/。TCA(終濃度，16。/。TCA)固定沉淀在孔底的細(xì)胞來終止試驗(yàn)。利用7種吸收測量值[零時間，(Tz),對照生長，(C),和存在5種藥物濃度水平時的測試生長(Ti)],計(jì)算每種藥物濃度水平的生長百分比。生長抑制百分比算作對于Ti上Tz的濃度，[(Ti-Tz)/(C-Tz)]x100對于Ti<Tz的濃度，[(Ti-Tz)/Tz]x100。為每種實(shí)驗(yàn)試劑計(jì)算3個劑量反應(yīng)參數(shù)。由[(Ti-Tz)/(C-Tz)]x100=50算出50。/。生長抑制(GI50)，其為藥物溫育時造成比對照細(xì)胞中蛋白質(zhì)凈增量(通過SRB染色測得)減少50%的藥物濃度。由Ti二Tz算出造成完全生長抑制(TGI)的藥物濃度。LC50(造成在藥物處理末期測得的蛋白質(zhì)相對于開始時減少50%的藥物濃度)顯示處理后細(xì)胞的凈喪失，其由[(Ti-Tz)/Tz]x100=-50計(jì)算而來。通過若丹明B流出(Lee等，1994)并通過PCR檢測mdr-l的mRNA(Al雷z等,1995)來鑒定，NCI鑒定出60種細(xì)胞系中的多藥耐受性細(xì)胞系為高P-gp含量的細(xì)胞系。藥物動力學(xué)分析-規(guī)程1用載體(在0.15MNaCl中的4%乙醇、5%吐溫-20、5%聚乙二醇400)制備測試化合物。向雌性CD1小鼠組以10mg/kg口服或3mg/kg靜脈內(nèi)單劑施用(每種化合物每個時間點(diǎn)用3只小鼠)。在第O分鐘、4分鐘、15分鐘、lh,4h，和24h時，處死小鼠并從每只小鼠中收集血液和腦，用于進(jìn)一步分析。腦樣品在液氮中急速冷凍并儲存于-20。C。每只動物至少收集0.2mL全血，裝入含抗凝劑乙二胺四乙酸(EDTA)的試管中，徹底混合，并儲存于-20。C。藥物動力學(xué)分析-規(guī)程2為了制備給藥溶液，5mg測試化合物溶于lOOpL乙醇中，形成50mg/mL的化合物溶液。然后加入約2.4mL0.15MNaCl(0.9%w/v鹽水)、5%v/v吐溫20和5%v/vPEG400(最終乙醇濃度為4%v/v),將溶液稀釋成2mg/mL。單劑10mg/kg口服或2mg/kg靜脈內(nèi)的測試化合物以10mg/kg口服或2mg/kg靜脈內(nèi)的濃度向每組3只雌性BalbC小鼠施用。在第5分鐘、15分鐘、60分鐘、4h、8h和24h時，處死小鼠并收集約0.2mL全血樣品入EDTA以達(dá)到0.5mM的EDTA最終濃度，另外切下腦。全血和腦在液氮中急速冷凍并儲存于-20。C，直至裝到干冰上用以分析。分析藥物動力學(xué)研究樣品由ASILimited(StGeorge'sHospitalMedicalSchool,倫i文)進(jìn)4亍分才斤。所提供的血和腦樣品中測試化合物的濃度通過帶有MS檢測的HPLC來確定。對照(無測試化合物)血樣得自HarlanSera-LabLimited(Loughborough,英格蘭)。零時間的腦樣用作對照(無測試化合物)腦樣。制備腦樣每個腦的一個半球用5mL水均漿。提取樣品小鼠腦或血的對照或測試樣品(0.05mL)、內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)溶液(0.1mL)、5%硫酸鋅溶液(C.5mL)、和丙酮(0.5mL)被吸入2mL聚丙烯管(SarstedtLimited,BeaumontLeys,Leicester,英國)，然后將它們混合至少5分鐘(IKA-Vibrax-VXR混合4義，Merck(BDH)Limited,PooleDorset,英國)。然后用微型離心機(jī)離心試管至少2分鐘。溶劑層倒入含氫氧化鈉(0.1M，0.1mL)和曱基-叔-丁基醚(MTBE，2mL)的4.5mL聚丙烯試管中。然后混合試管至少5分鐘(IKA-Vibrax-VXR混合儀)，然后以3500rpm離心5分鐘。將溶劑層移入4.5mL圓錐形的聚丙烯試管中，置于SpeedVac⑧中并蒸發(fā)至干燥。干燥的提取物用0.15mL80%甲醇重溶，并混合至少5分鐘(IKA-Vibrax-VXR混合儀)并以3500rpm離心5分鐘。將提取物移入自動取樣器的管(NLGAnalytical,AdelphiMill,Bollington，Cheshire,英國)并置于自動取樣器托盤上，該托盤設(shè)置為周圍環(huán)境溫度。自動取樣器被編排成將每種提取物0.03mL等分試樣注射到分析柱上。實(shí)施例1.發(fā)酵并分離測試化合物1.1發(fā)酵并分離39-去曱氣基雷帕霉素如下所述，通過使吸濕鏈霉菌MG2-10[IJMNOQLhis]培養(yǎng)物生長并補(bǔ)料以環(huán)己烷羧酸(CHCA),來產(chǎn)生39-去曱氧基雷帕霉素。通過向WO2004/007709所述的MG2-10抹導(dǎo)入含基因ra//、ra/丄ra/Af,rapW、rapO、ra/g和的質(zhì)粒來產(chǎn)生吸濕鏈霉菌MG2-10[IJMNOQLhis]。用含5，閱讀框內(nèi)組氨酸標(biāo)簽的基因構(gòu)建基因表達(dá)盒。如WO2004/007709所述，質(zhì)粒還包含轉(zhuǎn)移起點(diǎn)和阿泊拉霉素抗性標(biāo)記(用于通過接合和選擇接合后體來轉(zhuǎn)化MG2-10)和phiBTl附著位點(diǎn)(用以位點(diǎn)特異性地整合入染色體)。如WO2004/007709所述，分離這些基因中的每一種，并實(shí)施構(gòu)建含PKS后的基因(post-PKSgenes)的組合的基因表達(dá)盒的方法。如材料和方法所述，培養(yǎng)吸濕鏈霉菌MG2-10[IJMNOQLhis]的生長培養(yǎng)物。生產(chǎn)培養(yǎng)物用營養(yǎng)培養(yǎng)物以0.5mL接種于50mL試管中的7mL培養(yǎng)基3中。于26。C培養(yǎng)7天，300rpm。取1毫升樣品以1:1用乙腈提取，震蕩30分鐘，13，000rpm離心10分鐘，并根據(jù)分析方法B(參見材^f和方法)分析并定量。通過利用分析方法C(參見材料和方法)進(jìn)行質(zhì)譜來確認(rèn)產(chǎn)物。根據(jù)以下表征中所述分析數(shù)據(jù)，觀察到的雷帕霉素類似物被認(rèn)為是所希望的39-去曱氧基雷帕霉素。犮^基本如材料和方法所述，培養(yǎng)在培養(yǎng)基4中的吸濕鏈霉菌MG2-10[IJMNOQLhis]的初級營養(yǎng)性培養(yǎng)物。在培養(yǎng)基4中的次級營養(yǎng)性培養(yǎng)物以10%v/v、28。C、250rpm接種24h。營養(yǎng)性培養(yǎng)物被以5%v/v接種入20L發(fā)酵罐中的培養(yǎng)基5中(參見材料和方法)。于26。C、0.5vvm培養(yǎng)6天。通過改變推動器尖端速度來保持>30%的溶解氧，其中推動器尖端速度最小為1.18ms-'，推動器尖端速度最大為2.75ms人接種后第24和48小時補(bǔ)料環(huán)己烷羧酸，使最終濃度為2mM。提承和純化發(fā)酵肉湯(30L)與等體積曱醇一起攪拌2小時，然后離心(10分鐘，3500rpm)以沉淀細(xì)胞。上清液與Diaion⑧HP20樹脂(43g/L)—起攪拌1小時，然后過濾。用丙酮分批洗樹脂來洗脫雷帕霉素類似物，真空除去溶劑。然后用水將該水溶性濃縮物稀釋至2L,并用EtOAc(3x2L)提取。真空去除溶劑，得到棕色的油(20.5g)。提取物溶于丙酮，在硅石上干燥，上樣于硅石柱(6x6.5cm直徑)并用丙酮/己烷等級梯度(20%-40%)洗脫。匯集含雷帕霉素類似物的級分，真空除去溶劑。殘余物(2.6g)進(jìn)一步過SephadexLH20柱層析(分三批)，用10:10:1的氯仿/庚烷/乙醇洗脫。通過反相(C18)制備性HPLC,利用GilsonHPLC,用65%乙腈/水以21mL/分鐘洗脫P(yáng)henomenex21.2x250mmLuna5|LimC18BDS柱，來純化半純化的雷帕霉素類似物(l.7g)。合并最純的級分(通過分析性HPLC、方法B來鑒定)，真空除去溶劑，得到39-去曱氧基雷帕霉素(563mg)。4在39-去曱氧基雷帕霉素的'HNMR譜與標(biāo)準(zhǔn)物的相同(P.Lowden，博士論文,UniversityofCambridge,1997)。培養(yǎng)物提取物的LCMS和LCMS"分析顯示雷帕霉素類似物的m/z比率低于雷帕霉素30個質(zhì)量單位，與其缺少曱氧基符合。觀察到的離子[M-H]882.3,[M+NH4〗+901.4，[M+Na]+906.2,[M+K]十922.2。對鈉加合物的裂解給出所預(yù)測出的39-去曱氧基雷帕霉素離子，符合以前婆定出的裂解途徑(圖2)(J.A.Reather，博士論文，UniversityofCambridge,2000)。該質(zhì)譜裂解數(shù)據(jù)收窄了雷帕霉素類似物的區(qū)域，其中丟失曱氧基是發(fā)生在含環(huán)己基部分的片段C28-C42上。這些質(zhì)譜裂解數(shù)據(jù)完全符合39-去曱氧基雷帕霉素的結(jié)構(gòu)。1.2發(fā)酵并分離27-6>-去曱基-39-去曱氧基雷帕霉素如下所述，通過使吸濕鏈霉菌MG2-10[JMNOLhis]培養(yǎng)物生長并補(bǔ)料環(huán)己烷羧酸(CHCA)，來產(chǎn)生27-(9-去甲基-39-去甲氧基雷帕霉素。通過向WO2004/007709所述的MG2-10抹導(dǎo)入含基因rapJ、rapM、ra;W、ra尸O、和ra/丄的質(zhì)粒來產(chǎn)生吸濕鏈霉菌MG2-10[JMNOLhis]。用含5'閱讀框內(nèi)組氨酸標(biāo)簽的m;丄基因構(gòu)建基因表達(dá)盒。如WO2004/007709所述，質(zhì)粒還包含轉(zhuǎn)移起點(diǎn)和阿泊拉霉素抗性標(biāo)記(用于通過接合和選擇接合后體來轉(zhuǎn)化MG2-10)和phiBTl附著位點(diǎn)(用以位點(diǎn)特異性地整合入染色體)。如WO2004/007709所述，分離這些基因中的每一種，并實(shí)施構(gòu)建含PKS后的基因的組合的基因表達(dá)盒方法。如材料和方法所述，培養(yǎng)吸濕鏈霉菌MG2-10[JMNOLhis]的營養(yǎng)性培養(yǎng)物。生產(chǎn)培養(yǎng)物用營養(yǎng)培養(yǎng)物以0.5mL接種于50mL試管中的7mL培養(yǎng)基3中。于26。C培養(yǎng)7天，300rpm。取1毫升樣品以1:1用乙腈提取，震蕩30分鐘，13，000rpm離心IO分鐘，并根據(jù)分析方法B(參見材料和方法)分析并定量。通過利用分析方法C(參見材料和方法)進(jìn)行質(zhì)譜來確認(rèn)產(chǎn)物。根據(jù)以下表征中所述分析數(shù)據(jù)，觀察到的雷帕霉素類似物被認(rèn)為是所希望的27-0-去曱基-39-去曱氧基雷帕霉素。發(fā)'餘基本如材料和方法所述，培養(yǎng)在培養(yǎng)基2中的吸濕鏈霉菌MG2-10[IJMNOQLhis]的初級營養(yǎng)性培養(yǎng)物。在培養(yǎng)基2中的次級營養(yǎng)性培養(yǎng)物以10%v/v、28。C、250rpm接種24h。營養(yǎng)性培養(yǎng)物被以10%v/v接種入20L發(fā)酵罐中的培養(yǎng)基5中(參見材料和方法)。于26。C、0.乃vvm培養(yǎng)6天。通過改變推動器尖端速度來保持》30%的溶解氧，其中推動器尖端速度最小為1.18ms-1,推動器尖端速度最大為2.75ms"。接種后第24和48小時補(bǔ)料環(huán)己烷羧酸，使最終濃度為2mM。炎承和免化發(fā)酵肉湯(15L)與等體積甲醇一起攪拌2小時，然后離心(10分鐘、3500rpm)以沉淀細(xì)胞。上清液與DiaionHP20樹脂(43g/L)—起攪拌1小時，然后過濾。用丙酮分批洗樹脂來洗脫雷帕霉素類似物，真空除去溶劑。然后用水將該水溶性濃縮物稀釋至2L,并用EtOAc(3x2L)提取。真空去除溶劑，得到椋色的油(12g)。提取物溶于丙酮，在硅石上干燥，上樣于硅石柱(4x6.5cm直徑)并用丙酉同/己烷分級梯度(20%-40%)洗脫。匯集含雷帕霉素類似物的級分，真空除去溶劑。殘余物(0.203g)通過反相(C18)制備性HPLC富集，其利用GilsonHPLC，用65%乙腈/水以21mL/分鐘洗脫P(yáng)henomenex21.2x250mmLuna5pmC18BDS柱。合并最純的級分(通過分析性HPLC、方法B來鑒定)，真空除去溶劑，得到殘余物(25.8mg)。殘余物通過反相(C18)制備性HPLC純化。其利用GilsonHPLC,用60%乙腈/水以1mL/分鐘洗脫Hypersil4.6x150mm3pmC18BDS柱。合并最純的級分(通過分析性HPLC、方法B來鑒定)，真空除去溶劑，得到27-0-去曱基-39-去曱氧基雷帕霉素(19.9mg)?！对?H和13CNMR譜符合27-0去曱基-39-去曱氧基雷帕霉素的結(jié)構(gòu)，而且分配情況如下表3所示。表3:溶于CDCl3的27-0-去曱基-39-去曱氧基雷帕霉素在500MHz處的'H-NMR和在125處的13C-NMR的NMR數(shù)據(jù)。<formula>formulaseeoriginaldocumentpage42</formula><table>tableseeoriginaldocumentpage42</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage43</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage44</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage45</column></row><table>位置'H-醒R13C-NMHMBC校正5多重性，HzCOSYR5'H至l3CPPmppm421.46-0.69m,復(fù)雜的復(fù)雜的33.6*-*所示的值是與'SC-NMR譜中其他13(3值比較的二重積分。沒有確定立體化學(xué)，這是因?yàn)槲覀冃枰郚MR實(shí)驗(yàn)(如1D和2DNOESY),因?yàn)閬啎趸绷⒑推椒?amp;的這一成因沒有被分配。對培養(yǎng)物提取物的LCMS和LCMSn分析顯示雷帕霉素類似物的m/z比率低于雷帕霉素44個質(zhì)量單位，與其缺少曱基和曱氧基相符合。觀察到的離子[M-H]868.7,[M+NH4]+887.8,[M+Na]+892.8。鈉加合物的裂解給出27-0-去曱基-39-去曱氧基雷帕霉素的預(yù)測出的離子，符合以前鑒定出的裂解途徑(圖2)(J.A.Reather,博士論文，UniversityofCambridge,2000)。該質(zhì)謙裂解數(shù)據(jù)收窄了雷帕霉素類似物的區(qū)域，其中丟失曱氧基是發(fā)生在含環(huán)己基部分的片段C28-C42上，而且收窄了雷帕霉素類似物的區(qū)域，其中丟失O-曱基是發(fā)生在片段C15-C27上。這些質(zhì)譜裂解數(shù)據(jù)完全符合27-0-去曱基-39-去曱氧基雷帕霉素的結(jié)構(gòu)。1.3發(fā)酵并分離16-6>-去曱基-27-6>-去曱基-39-去曱氧基雷帕霉素■如下所述，通過使吸濕鏈霉菌MG2-10[IJNOLhis]培養(yǎng)物生長并補(bǔ)料環(huán)己烷羧酸(CHCA)，來產(chǎn)生16-(9-去曱基-27-0-去曱基-39-去曱氧基雷帕霉素。通過向WO2004/007709所述的MG2-10抹導(dǎo)入含基因ra/7>aA/、rapA^ra/0和r印L的質(zhì)粒來產(chǎn)生吸濕鏈霉菌MG2-10[IJNOLhis]。用含5，閱讀框內(nèi)組氨酸標(biāo)簽的rap丄基因構(gòu)建基因表達(dá)盒。如WO2004/007709所述，質(zhì)粒還包含轉(zhuǎn)移起點(diǎn)和阿泊拉霉素抗性標(biāo)記(用于通過接合和選擇接合后體來轉(zhuǎn)化MG2-10)和phiBTl附著位點(diǎn)(用以位點(diǎn)特異性地整合入染色體)。如WO2004/007709所述，分離這些基因中的每一種，并實(shí)施構(gòu)建含PKS后的基因的組合的基因表達(dá)盒的方法。濕謬培^參如材料和方法所述，培養(yǎng)吸濕鏈霉菌MG2-10[IJNOLhis]的營養(yǎng)性培養(yǎng)物。生產(chǎn)培養(yǎng)物用營養(yǎng)性培養(yǎng)物以0.5mL接種于50mL試管中的7mL培養(yǎng)基3中。于26。C培養(yǎng)7天，300rpm。取1毫升樣品以1:1用乙腈提取，震蕩30分鐘，13,000rpm離心10分鐘，并根據(jù)分析方法B(參見材料和方法)分析并定量。通過利用分析方法C(參見材料和方法)進(jìn)行質(zhì)譜來確認(rèn)產(chǎn)物。根據(jù)以下表征中所述分析數(shù)據(jù)，觀察到的雷帕霉素類似物被認(rèn)為是所希望的16-0-去曱基-27力-去曱基-39-去曱氧基雷帕霉素。^:攀基本如材料和方法所述，培養(yǎng)在培養(yǎng)基2中的吸濕鏈霉菌MG2-10[IJMNOQLhis]的初級營養(yǎng)性培養(yǎng)物，培養(yǎng)3天。在培養(yǎng)基2中的次級營養(yǎng)性培養(yǎng)物以10%v/v、28。C、250rpm接種48h，三級培養(yǎng)物被以10%v/v、28。C、250rpm、24h接種。營養(yǎng)性培養(yǎng)物被以10%v/v接種入3x7L發(fā)酵罐中的培養(yǎng)基5中(參見材料和方法)。于26。C、0.75vvm培養(yǎng)6天。通過改變推動器尖端速度來保持230%的溶解氧，其中推動器尖端速度最小為0.94ms-1,推動器尖端速度最大為1.88ms"。接種后第24小時補(bǔ)料環(huán)己烷羧酸，使最終濃度為2mM。在t-O時補(bǔ)料L-賴氨酸。提取和純化發(fā)酵肉湯(12L)與等體積曱醇一起攪拌2小時，然后離心(10分鐘、3500rpm)以使細(xì)胞沉淀。上清液與Diaion②HP20樹脂(43g/L)—起攪拌1小時，然后過濾。用丙酮分批洗樹脂來洗脫雷帕霉素類似物，真空除去溶劑。然后用水將該水溶性濃縮物稀釋至2L,并用EtOAc(3x2L)提取。真空去除溶劑，得到棕色的油(8.75g)。提取物溶于丙酮，在硅石上干燥，上樣于硅石柱(4x6.5cm直徑)并用丙酮/己烷梯度(20°/。-40%)逐步洗脫。收集含雷帕霉素類似物的級分，真空除去溶劑。殘余物(0.488g)進(jìn)一步過SephadexLH20柱層析(分三批)，用10:10:1的氯仿/庚烷/乙醇洗脫。匯集含雷帕霉素類似物的級分，真空除去溶劑。半純化的雷帕霉素類似物(162mg)通過反相(C18)制備性HPLC來純化，其利用GilsonHPLC,用65%乙腈/水以21mL/分鐘洗脫P(yáng)henomenex21.2x250mmLuna5pmC18BDS柱。合并最純的級分(通過分析性HPLC、方法B來鑒定)，真空除去溶劑，得到16-(9-去曱基-27-6>-去曱基-39-去曱氧基雷帕霉素(44.7mg)?！对趯ε囵B(yǎng)物提取物的LCMS和LCMS"分析顯示新的雷帕霉素類似物的存在，其洗脫遠(yuǎn)早于所有其他39-去曱氧基類似物。該雷帕霉素類似物的許多離子的m/z比率低于雷帕霉素58個質(zhì)量單位，與其缺少兩個O-曱基和曱氧基相符合。觀察到的離子[M-H]-854.7,[M+NH4]+877.8，[M+Na]+892.7，[M+K]+908.8。鈉加合物的裂解片段給出16-(9-去曱基-27-(9-去曱基-39-去曱氧基雷帕霉素所預(yù)測出的離子，符合以前鑒定出的裂解途徑(圖2)(J.A.Reather,博士論文，UniversityofCambridge,2000)。該質(zhì)譜裂解數(shù)據(jù)收窄了雷帕霉素類似物的區(qū)域，其中丟失曱氧基是發(fā)生在含環(huán)己基部分的片段C28-C42上，而且收窄了雷帕霉素類似物的區(qū)域，其中丟失O-曱基是發(fā)生在片段C15-C27上。這些NMR和質(zhì)譜裂解數(shù)據(jù)完全符合16-(9-去曱基-27-(9-去曱基-39-去曱氧基雷帕霉素的結(jié)構(gòu)。實(shí)施例2.針對抗癌活性的體外生物試驗(yàn)###估39-去f真差^辯##的我蕃活#如規(guī)程l所述，在以上利用改良的碟化丙錠試驗(yàn)的普通方法中，用單層增殖試驗(yàn)在12種人腫瘤細(xì)胞系中體外評估39-去曱氧基雷帕霉素的抗癌活性。結(jié)果顯示在下表4中，每個結(jié)果代表兩次重復(fù)實(shí)驗(yàn)的平均值。表5顯示了化合物和雷帕霉素對測試細(xì)胞系的IC50和IC70。表4<table>tableseeoriginaldocumentpage48</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage49</column></row><table>，^差f辯,;f的^i^務(wù)耐愛rMZ^」這捧7^我遂《'/i用基于SRB的試驗(yàn)，如材料和方法的規(guī)程2所述，用單層增殖試驗(yàn)在人胂瘤細(xì)胞系的NCI60細(xì)胞系上體外評估39-去曱氧基雷帕霉素的選擇性MDR抗癌活性。結(jié)果顯示在下表6中表6-針對高表達(dá)MDR的細(xì)胞系的體外活性<table>tableseeoriginaldocumentpage49</column></row><table><formula>formulaseeoriginaldocumentpage50</formula>可以看出，除了一種細(xì)胞系之外，與雷帕霉素相比，39-去曱氧基雷帕霉素針對高表達(dá)MDR的細(xì)胞系都有相等或改善的功效。實(shí)施例3.體外ADME試驗(yàn)Caco-2遞邊試—發(fā)在24孑LCorningCostarTranswell形式上的滿板Caco-2細(xì)胞(Li,A.P.,1992;Grass,G.M.，等，1992,Volpe，D.A.，等，2001)由InVtroTechnologiesInc.(IVTInc.，Baltimore,Maryland,美國)提供。頂部腔室含有0.15mLpH7.4的Hank氏平衡緩沖液(HBBS)、1%DMSO、0.1mM焚光黃?；康那皇液?.6mLpH7.4的HBBS、1%DMSO。對照和測試品在加濕溫育箱中于37。C溫育，以130rpm震蕩1h。熒光黃僅能通過細(xì)胞旁(在緊密連接之間)途徑滲入，熒光黃的高可見通透性(Papp)顯示出試驗(yàn)期間細(xì)胞損傷了，所有這些孔被排除。普萘洛爾(被動通透性好，而無已知的轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白效應(yīng))和醋丁洛爾(被動通透性差，其通過借助于P-糖蛋白的主動流出而減輕)被用作參照化合物。通過將化合物(以0.01mM)加入頂部或基部的腔室，以單和雙向形式測試化合物。通過HPLC-MS(方法A,參見材料和方法)分析頂部或基部腔室中的化合物。結(jié)果表示成可見穿透性(ApparentPermeability)(Papp)(nm/s)和流出率(A至B比B至A)。Papp(腿/s)=受體體積xA「受體l面積x[供體;i△時間0.6ml(A〉B)和0.15ml(B>A)0.33cm260分鐘流出率的正值表示A/v細(xì)胞的頂層表面主動流出。受體體積單層面積:△時間沐(HiJK)潛,定扭試驗(yàn)用肝勻漿液測量化合物對I期(氧化)酶的內(nèi)在弱點(diǎn)，該酶包括CYP450(如CYP2C8、CYP2D6、CYP1A、CYP3A4、CYP2E1)、酯酶、酰胺酶和黃素單氧酶(FMO)。通過LC-MS監(jiān)視它們隨時間的消失情況，確定測試化合物暴露于人肝微粒體的半衰期(T1/2)。0.001mM化合物以0.25mg/mL蛋白質(zhì)與人微粒體亞細(xì)胞級分于37。C在pH7.4的0.1MTris-HCl中溫育40分鐘，并將飽和水平的NADPH作為輔因子。以給定時間間隔，向測試樣品中加入乙腈來沉淀蛋白質(zhì)和并終止代謝。離心樣品并月分析方法A(參見材料和方法)分析親本化合物。表7-體外ADME試驗(yàn)結(jié)果<table>tableseeoriginaldocumentpage51</column></row><table>實(shí)施例4.體外結(jié)合試驗(yàn)FKBP12FKBP12能在化學(xué)變性劑鹽酸胍(GdnHCI)中可逆解折疊，而且能通過蛋白質(zhì)固有熒光的變化而監(jiān)測解折疊(Main等，1998)。特異結(jié)合并穩(wěn)定天然狀態(tài)FKBP12的配體可使變性曲線移動，由此可使蛋白質(zhì)在較高化學(xué)變性劑濃度下才變性(Main爭，1999)。通過穩(wěn)定性的差異，配體結(jié)合常數(shù)可用方程式1來確定。<formula>formulaseeoriginaldocumentpage52</formula>(1)其中AG，是游離和配體結(jié)合形式解折疊自由能的表觀差值，AG，、'是游離蛋白質(zhì)在水中的解折疊自由能，[L]是配體濃度，而&是蛋白質(zhì)-配體復(fù)合物的解離常數(shù)(Meiering等，1992)。利用以下方程式，可將解折疊自由能與解折疊轉(zhuǎn)變的中點(diǎn)發(fā)生關(guān)聯(lián)50%V"其中^是針對給定蛋白質(zhì)和給定變性劑的常數(shù)，其與解折疊對殘基暴露程度的改變成比例(Tanford1968和Tanford1970)，而且5。％是對應(yīng)解折疊中點(diǎn)的變性劑濃度。我們將AAG^——用雷帕霉素和未知配體(以相同配體濃度)對FKBP12穩(wěn)定性的差值，定義為AAG;;一a,=<mu—w>酬50%(3)其中<附,^>是解折疊轉(zhuǎn)化的平均m-值，而且A[D]，是雷帕霉素-FKBP12解折疊轉(zhuǎn)變和未知配體-FKBP12復(fù)合物解折疊轉(zhuǎn)變中點(diǎn)的差值。在[L]〉&的條件下，則通過方程式4，w能與兩種化合物的相對&相關(guān)聯(lián)AAG"=imn|^(4)其中《7是雷帕霉素的解離常數(shù)，而"是未知配體的解離常數(shù)。所以，W=尺rexp(<-w:與。"(5)為了確定39-去曱氧基雷帕霉素的擬合變性曲線來產(chǎn)生m^和[D]5。％的值，用其計(jì)算平均w-值、<—w>、和A["]腦，并由此計(jì)算《。用02nM的《'7文獻(xiàn)值。表8-體外FKBP12結(jié)合試驗(yàn)結(jié)果<table>tableseeoriginaldocumentpage52</column></row><table>mTOR通過測定mTOR途徑替代標(biāo)記物和p70S6激酶和S6的磷酸化水平，可間接進(jìn)行mTOR抑制(Bmnn等，1997;Mothe-Satney等，2000;Tee和Proud，2002;Huang和Houghton,2002)。HEK293細(xì)胞與FLAG-標(biāo)記的mTOR和myc-標(biāo)記的Raptor共轉(zhuǎn)染，培養(yǎng)24h，然后無血清過夜。用100nM胰島素刺激細(xì)胞，然后收獲并通過3次冷凍/化凍周期裂解。匯集裂解產(chǎn)物，并與等量針對mTOR/Raptor復(fù)合物的FLAG抗體進(jìn)行免疫沉淀。然后對免疫沉淀進(jìn)行加工用化合物(0.00001-0.003mM)處理的樣品與FKBP12/雷帕霉素、FKBP12/39-去曱氧基雷帕霉素或載體(DMSO)于30。C預(yù)溫育30分鐘，未處理的樣品在激酶緩沖液中溫育。然后免疫沉淀產(chǎn)物用于進(jìn)行體外激酶試驗(yàn)，其中存在3mMATP、10mMMn"和GST-4E-BP1作為底物。用4x上樣緩沖液終止反應(yīng)，然后進(jìn)行15%SDS-PAGE,濕法轉(zhuǎn)移到PVDF膜上，然后探測磷酸-4E-BPl(T37/46)?？蛇x地，HEK293細(xì)胞接種到6孔板中并預(yù)溫育24h，然后無血清過夜。然后用載體或化合物于30。C預(yù)處理細(xì)胞30分鐘，然后用100nM胰島素于30°C刺激30分鐘并通過3個冷凍/化凍周期裂解，并測定蛋白質(zhì)濃度。將等量蛋白質(zhì)上樣于SDS-PAGE膠上并分離。然后用濕法將蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)移到PVDF膜上并探測磷酸-S6(S235/36)或磷酸-p70S6K(T389)。這些實(shí)驗(yàn)的結(jié)果簡述于圖3實(shí)施例5:體外P-gp底物試驗(yàn)細(xì)胞系用在本研究中的細(xì)胞系(MACLMCF7和MACLMCF7ADR)都由美國國家癌癥研究所提供。細(xì)胞每周按常規(guī)傳代一次或兩次。它們在培養(yǎng)基中維持不超過20代。所有細(xì)胞在潮濕空氣(95%空.氣，5。/。C02)中于37。C生長在添加了5%胎牛血清(PAA，C6lbe，德國)和0.1。/。慶大霉素(PAA，C6lbe,德國)的RPMI1640培養(yǎng)基(PAA，Cmbe，德國)中。試驗(yàn)規(guī)程用基于上述規(guī)程1的改良的碘化丙錠試驗(yàn)來評估39-去曱氧基雷帕霉素的作用(Dengler等，1995)。簡而言之，在指數(shù)生長階段的培養(yǎng)物中通過胰蛋白酶化來收獲細(xì)胞，計(jì)數(shù)并于96孔平底微滴定板中鋪板，其中細(xì)胞密度為5,000個細(xì)胞/孔)。讓細(xì)胞恢復(fù)24h以使細(xì)胞恢復(fù)指數(shù)生長，向細(xì)胞中加入0.01mL濃度為0.18mg/mL的異搏定或0.01mL培養(yǎng)基，以使孔中異搏定終濃度為0.01mg/mL。在以前實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)該濃度對細(xì)胞無毒性。加入含39-去曱氧基雷帕霉素或紫杉醇的培養(yǎng)基或僅加入培養(yǎng)基(對于對照孔)，每孔0.01mL。8個濃度的化合物重復(fù)測試三次，濃度間相差半個對數(shù)，范圍從0.03mM下降至10nM。持續(xù)藥物暴露3天后，培養(yǎng)基或含化合物的培養(yǎng)基替換為0.2mL碘化丙錠(PI)水溶液(7mg/L)。由于PI僅能通過有洞的或裂開的膜，因此能染色并測定死細(xì)胞的DNA，而活細(xì)胞不會被染色。為了測量活細(xì)胞的比例，冷凍平板以通透細(xì)胞，使所有細(xì)胞死亡。平板化凍后，用Cytofluor4000微板讀數(shù)儀測量焚光(530nm激發(fā)，620nm發(fā)射)，得出與細(xì)胞總數(shù)的直接關(guān)系。生長抑制表示成測試/對照x100(%T/C)。如果陽性對照(紫杉醇)在存在和沒有異搏定的情況下誘導(dǎo)出腫瘤生長抑制變化，并且如果載體處理的對照細(xì)胞的菱光強(qiáng)度>500，則試驗(yàn)才被認(rèn)可是可評估的。*備^-去尸真差#帕##都試溶濕在DMSO中制備出3.3mM39-去曱氧基雷帕霉素的儲存溶液并保存于-20。C。然后在使用之日化凍儲存溶液并在施用前和施用期間于室溫保存。利用RPMI1640培養(yǎng)基進(jìn)行稀釋步驟，產(chǎn)生18倍于最終濃度的溶液。結(jié)果圖4顯示的4幅圖確證了在正常(A和B)或高P-gp表達(dá)(C和D)的細(xì)胞系中，在所有測試濃度上針對紫杉醇(A和C)和39-去曱氧基雷帕霉素(B和D)的。/。T/C值。實(shí)心菱形代表單獨(dú)施用紫杉醇或39-去曱氧基雷帕霉素后的值，空心方塊代表存在0.01mg/mL異搏定(P-gp抑制劑)時施用紫杉醇或39-去曱氧基雷帕霉素的值。紫杉醇(一種已知的P-gp底物)，顯示出抑制表達(dá)P-gp的癌細(xì)胞系MCF7ADR的能力降低，而且該能力的降低通過聯(lián)合施用異搏定(P-gp抑制劑)而被恢復(fù)(圖4A和4C)。有或沒有異搏定，39-去曱氧基雷帕霉素都沒有顯示出對表達(dá)P-gp的細(xì)胞系MCF7ADR的生長增殖曲線有顯著改變(圖4B和4D)，這證明了39-去曱氧基雷帕霉素不是P-gp的底物。實(shí)施例6-藥物動力學(xué)分析6.1雷帕霉素和39-去甲氧基雷帕霉素的PK分析用上述標(biāo)準(zhǔn)方法對雷帕霉素和39-去曱氧基雷帕霉素進(jìn)行藥物動力學(xué)分析(每種化合物使用的規(guī)程如表9所示)。血和腦組織中每種化合物的AUC用Kinetica4.4(InnaPhaseCorporation)、用非間隔模型和用于AUC計(jì)算的梯形方法計(jì)算出?？诜挽o脈內(nèi)施用后每種化合物的分隔系數(shù)(凡)如下所示計(jì)算出<formula>formulaseeoriginaldocumentpage55</formula>該分析結(jié)果簡述于下表9和圖5中。表9-藥物動力學(xué)數(shù)據(jù)簡述<table>complextableseeoriginaldocumentpage55</column></row><table>6.2雷帕霉素、39-去曱氧基雷帕霉素和27-0-去曱基-39-去曱氣基雷帕霉素的PK分析用上述標(biāo)準(zhǔn)方法對雷帕霉素，39-去曱氧基雷帕霉素和27-0-去曱基-39-去曱氧基雷帕霉素進(jìn)行藥物動力學(xué)分析(使用上述規(guī)程1)。血和腦組織中每種化合物的AUC用Kinetica4.4(InnaPhaseCorporation),用非間隔模型和用于AUC計(jì)算的梯形方法計(jì)算出。靜脈內(nèi)施用后每種化合物的分隔系數(shù)(7,)如下所示計(jì)算出/,=AUC腦AUC血炎表10-藥物動力學(xué)數(shù)據(jù)<table>tableseeoriginaldocumentpage56</column></row><table>實(shí)施例7-在多發(fā)性硬化的實(shí)驗(yàn)性過敏性腦脊髓炎(EAE)模型中的活性實(shí)驗(yàn)性過敏性腦脊髓炎(EAE)是中樞神經(jīng)系統(tǒng)(CNS)自體免疫炎性和脫髓鞘疾病，并被認(rèn)為是多發(fā)性硬化(MS)的最佳可用的動物對應(yīng)疾病。通過注射溶于完全福氏佐劑(CFA)的全脊髓或髓磷脂堿性蛋白質(zhì)(MBP),可在遺傳上易感的動物中誘導(dǎo)出該疾病。涉及CNS損傷的抗原特異性效應(yīng)器細(xì)胞是II類主要組織相容性復(fù)合物(MHC)限制性的CD4+T淋巴細(xì)胞。近來，細(xì)胞因子(如白細(xì)胞介素-l(IL-1)、肺瘤壞死因子(TNF)或干擾素(IFN))在炎性應(yīng)答中的作用正受到越來越多的關(guān)注。通過抗原活化，T細(xì)胞產(chǎn)生幾種淋巴因子，其在EAE的情況中可直接或間接造成CNS損傷應(yīng)答?？赡苌婕霸贓AE病理過程中的淋巴因子是IL-2、IFN-y和TNF-(3。IL-2在T細(xì)胞活化和增殖中起重要作用，而IFN-y是巨噬細(xì)胞活化的有效介導(dǎo)者。另夕卜，IFN-y誘導(dǎo)產(chǎn)生了炎性細(xì)胞因子，如IL-1、TNF，而且其也在CNS中的血管內(nèi)皮細(xì)胞上、并在星形細(xì)胞上表達(dá)II類MHC分子，它被認(rèn)為在將抗原提呈到能致腦炎的T細(xì)胞中起重要作用。7.1-動物和免疫過程8至10周大的雄性Lewis大鼠飼養(yǎng)在標(biāo)準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)室條件下(沒有非特異性病原體)，其可自由接觸食物和水。通過往尾部基部單次注射50mL福氏不完全佐劑(Difco,Detroit,MI)和50mL含25mg豚鼠脊髓和1mg結(jié)核分支桿菌H37RA抹(Difco)的鹽水，由此誘導(dǎo)出EAE。7.2-臨床和組織學(xué)評分每天通過測量它們的體重和EAE臨床癥候檢測大鼠，直至免疫后30天。由不知道治療方案的觀察者進(jìn)行這些臨床評分0=無病，1=尾部無力，2=下身中度癱瘓，3=下身嚴(yán)重癱瘓，4=垂死狀態(tài)，5=死亡。疾病結(jié)束被定義為完全缺乏臨床癥狀并且恢復(fù)到免疫前的運(yùn)動性，大鼠連續(xù)5天4皮評為0分。7.3-實(shí)驗(yàn)性治療在預(yù)防和治療方案下，不同劑量(5或15mg/kg體重)給予測試化合物。對于本研究的預(yù)防部分，治療始于免疫前一天，而對于本研究的治療部分，治療處理，它們被用作對照。每天給予口服治療，一周六次，直至免疫后第30天，環(huán)磷酰胺被用作陽性對照。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示在圖6和下表11中。圖6A顯示了5和15mg/kg39-去曱氧基雷帕霉素的預(yù)防方案的效果，圖6B顯示了5和15mg/kg39-去曱氧基雷帕霉素的治療方案的效果。對于每種方案，將40mg/kg環(huán)磷酰胺的效果看作陽性對照。在兩幅圖中，顯示了每組的中值得分?？梢钥闯觯谠撃Ｐ椭?9-去曱氧基雷帕霉素與環(huán)磷酰胺有同等的功效，而且它不僅降低了癥狀的嚴(yán)重程度，而且減少了發(fā)作的持續(xù)時間。應(yīng)該注意到，由于在研究中7只載體治療的大鼠有5只死亡了，該組的中值保持在5，可是2只幸存的大鼠到第28天終于恢復(fù)到基線值。表11<table>tableseeoriginaldocumentpage57</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage58</column></row><table>*-與載體治療的對照有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，其中p<0.05,使用了MannWhitneyRankSum測試。實(shí)施例8-39-去曱氧基雷帕霉素在神經(jīng)膠質(zhì)瘤同位異種移植的棵鼠模型中的抗肺瘤活性研究8.1-研究準(zhǔn)備測試化合物溶解在乙醇中(0.027mL/mg化合物)并攪拌20分鐘直至溶液澄清。乙醇溶液等分成合適的量并保存于-20。C。然后用載體(含4%乙醇、5%吐溫-20、5%聚乙二醇400的0.15MNaCl，可能時用無菌無內(nèi)毒素成分制備)將乙醇溶液調(diào)至正確的濃度。S.丄2-滋j才式通過注射入測試小鼠的尾靜脈靜脈內(nèi)(IV,快速灌注)施用測試物質(zhì)和對照載體。根據(jù)小鼠最近的體重，使用10mL/kg注射體積。用在本研究中的細(xì)胞系是U87-MG,其為最初由J.Ponten從44歲的白人女性的III級成膠質(zhì)細(xì)胞瘤中起始的成膠質(zhì)細(xì)胞瘤細(xì)胞系(Poten等，1968)。&7.4—^f建ji細(xì)應(yīng)系的細(xì)/6培#奈伴肺瘤細(xì)胞于37。C在潮濕的空氣(5。/。C02,95%空氣)中以單層生長。培養(yǎng)基是含2mML-谷氨酸并添加有100/。月臺牛血清(Ref.DE14-801E,Cambrex)的RPMI1640(Ref.BE12-702F,Cambrex)。細(xì)胞粘附于塑料瓶中。為了實(shí)驗(yàn)應(yīng)用，用含胰蛋白酶-維爾烯(Ref.BE17-161E,Cambrex)的不含鈣或鎂的Hanks氏培養(yǎng)基(Ref.BE10-543F,Cambrex)處理5分鐘，使腫瘤細(xì)胞從燒瓶上脫離出。細(xì)胞在血球計(jì)中計(jì)數(shù)，并通過0.25%臺盼藍(lán)排斥評估它們的存活率。8.2-通過立體定位注射在棵鼠腦中誘導(dǎo)神經(jīng)膠質(zhì)瘤小鼠全身用Y-源(2.5Gy，Co6°，INRABRETENIERE，Dijon)照射后24至48小時，在第0天用U87-MG細(xì)胞立體定位注射。為了立體定位注射肺瘤細(xì)胞，以10mL/kg/針腹膜內(nèi)注射溶于0.9。/。NaCl溶液的克他命100mg/kg(Ketamine500,Ref043KET204，Centravet,法國)和曱笨漆喚5mg/kg(Rompun,Ref002ROM001，Centravet，法國)來麻醉小鼠。利用3種獨(dú)立的立體定位裝置(KopfInstrument,德國和StoeltingCompany,美國)將重懸于0.002mLRPMI-1640培養(yǎng)基中的lxl()S個U87-MG腫瘤細(xì)胞立體定位注射入右額葉中。以500nL/分鐘注射0.002mL細(xì)胞懸浮液。8.3-治療日程在第7天，小鼠稱重并根據(jù)個體體重隨機(jī)分成3組小鼠。為每個治療組加入額外四(4)只小鼠，用于MRI成像。選擇組，從而使每組平均體重與其他的沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(方差分析)。以如下定義來施用測試物質(zhì)。S.丄/組1的小鼠每天接受IV注射測試物質(zhì)載體，連續(xù)進(jìn)行3天，進(jìn)行5輪(在第7至9天、第14至16天、第21至23天、第28至30天和第35至37天(QlDx3)x5W)。每輪由4天沖洗(wash-out)期分開S.丄2組2的小鼠以3mg/kg/針每天接受IV注射39-去曱氧基雷帕霉素，連續(xù)進(jìn)行3天，進(jìn)行5輪(在第7至9天、第14至16天、第21至23天、第28至30天和第35至37天(QlDx3)x5W)。每輪由4天沖洗期分開。OJ組3的小鼠不治療。治療日程簡述于下表12中表12:<table>tableseeoriginaldocumentpage59</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage60</column></row><table>8.4-MRI分析在D23和D37進(jìn)行MRI分析。所有MRI分析在4.7T在Pharmascan磁體(Bruker,Wissembourg)中進(jìn)行。在用異氟烷持續(xù)麻醉的條件下，將小鼠裝入專供小鼠的支架和38mm直徑圓柱線圈中。在三次試-驗(yàn)性(tripilot)探測后，進(jìn)行turboRareT2加權(quán)的順序。探測覆蓋了包括腫瘤的全部腦。通過人工畫出每個薄片中腫瘤周圍感興趣的區(qū)域(ROI)并匯總所有表面，由此來確定腫瘤體積。8.5—結(jié)果圖7顯示了直到第43天時每個治療組的存活圖。另夕卜，結(jié)果表示成百分比(T/C。/。)，其中T代表用39-去曱氧基雷帕霉素治療的動物的中值存活時間，而C代表用載體治療的對照動物的中值存活時間。T/C。/。按下式計(jì)算T/C%=[T/C]x100另夕卜，用MRI分析算出每個治療組的平均算得的腫瘤體積，結(jié)果概括于下表13。由于到第37天所有載體治療的動物都死了，因此在該階段不可能比較肺瘤大小。表13<table>tableseeoriginaldocumentpage60</column></row><table>每個數(shù)據(jù)點(diǎn)代表4個值的平均值。參考文獻(xiàn)Alvarez,M.,Paull,K.，Monks,A.,Hose,C.，Lee,J.S.，Weinstein，J.，Grever,M,,Bates,S.,Fojo,T.,(1995)."Generationofadrugresistanceprofilebyquantitationofmdr-l/P-glycoproteininthecelllinesoftheNationalCancerInstituteAnticancerDrugScreen",Jbwr"a/o/C/z'm'ca//wve幼'g加.o",95，2205-2214.An,W丄.，R.RCowburn，爭(2003)."Up-regulationofphosphorylated/activatedp70S6kinaseanditsrelationshiptoneurofibrillarypathologyinAlzheimer'sdisease."X附/■PflAo/163(2):591-607.Avramut,M.和Achim,C丄.(2002)."Immunophilinsandtheirligands:insightsintosurvivalandgrowthofhumanneurons."尸/yw'o/Se/iav77(4-5):463-8.Baker,H.,Sidorowicz,A.,Sehgal，S.N.，和V6zina，C.(1978)"Rapamycin(AY-22，989),anewantifungalantibiotic.III./〃v"raandWvoevaluation".Jowma/o/JwW/Wcs31,539-545.Boyd,M.R,和Paull,K.D.，(1995)."SomePracticalConsiderationsandApplicationsoftheNationalCancerInstituteInVitroAnticancerDrugDiscoveryScreen',,Z>wgZ)eve/o/me"Zi^eorc/z34，91-109,BradlM.'HohlfeldR.(2003),"Molecularpathogenesisofneuroinflammation，,./iVewx(/iVewnwwrgi^_yc/2/<3r_y.74:1364-70.Br腿，G丄，F(xiàn)adden,P.,Haystead,T.A.，Lawrence,J.C.Jr.(1997)"Themammaliantargetofrapamycinphosphorylatessiteshavinga(Ser/Thr)-PromotifandisactivatedbyantibodiestoaregionnearitsCOOHterminus",JS/o/.C/綴272(51),32547-32550.Bmnn，G.J.，Williams,J.,Sabers,C.，Wiederrecht,G.,Lawrence,J.C.,和Abraham,R.T.(1996)"Directinhibitionofthesignalingfunctionsofthemammaliantargetofrapamycinbythephosphoinositide3-kinaseinhibitors,wortmanninandLY294002".Jowma/15:5256-5267.Chang,S.M.，P.Wen,爭(2005)."PhaseIIstudyofCCI-779inpatientswithrecurrentglioblastomamultiforme."/"veW臉wZ>wgs23(4》357-61.Crowe,A.,Bmelisauer,A.，Duerr，L.,Guntz，P.，Lemaire,M.,(1999),"AbsorptionandintestinalmetabolismofSDZ-RADandrapamycininrats".DragMeto6；27(5),627-32.Cummins,C丄.，Jacobsen,W"Christians,U,,Benet,L.Z.,(2004)，,CYP3A4-TransfectedCaco-2CellsasaToolforUnderstandinfBiochemicalAbsorptionBankers:StudieswithSirolimusandMidazolam",777eJc朋/q/"P^,'waco/og7'308(1),143-155Dancey，J.E.,(2002),"Clinicaldevelopmentofmammaliantargetofrapamycininhibitors"http://em她/Owco/C7/wTV爿m，16,1101-1114.DenglerW.A.,SchulteJ.，BergerD.P"MertelsmannR.andFiebigHH.(1995)"Developmentofapropidiumiodidefluorescenceassayforproliferationandcytotoxicityassay".J油.-CawcerZ>wg^，6，522-532.Dumont,F丄和Su,Q.X.(1995)."Mechanismofactionoftheimmunosuppressantrapamycin".丄z/eS"'e"ce5158(5):373-395.EmborgM.E.,(2004)"EvaluationofanimalmodelsofParkinson'sdiseaseforneuroprotectivestrategies,,/iVewms1"'Me/zo成139(2):121-43;FiebigH.H.,DenglerW.A.和RothT.(1999)"Humantumorxenografts:Predictivity,characterization,anddiscoveryofnewanticanceragents".In:FiebigHH,BurgerAM(eds).RelevanceofTumorModelsforAnticancerDrugDevelopment.54:29-50.FindlayJ.A,和Radics,L.(1980)Cawo^/awJc腦/o/C7zem^^y58:579.Gallant-HaidnerH丄,，TrepanierD丄，F(xiàn)reitagD.G.,YatscoffR.W.2000，"Pharmacokineticsandmetabolismofsirolimus".T7zerDragMom'f.22(1),31-5.GermanD.C.和EischA丄,(2004),"MousemodelsofAlzheimer'sdisease:insightintotreatment",iev7Vewras"'，15:353-69.Grass,G.M.,Rubas,W"Jezyk,N.,(1992)"EvaluationofCACO-2monolayersasapredictorofdrugpermeabilityincolonictissues"./^五jBJw憩/,6,A1002.GregoryM.A.，GaisserS,LillR.E.,HongH,SheridanR.M.,WilkinsonB,PetkovicH，WestonA丄，CarlettiI,LeeH丄.，StauntonJ，LeadlayPF.(2004)"Isolationandcharacterizationofpre-rapamydn，thefirstmacrocyclicintermediateinthebiosynthesisoftheimmunosuppressantrapamycinbyS.hygroscopicus".爿wgewC/2em/"f五d￡>g/.43(19),2551-3HerschS.M.和FerranteR.J,，(2004)，"TranslatingtherapiesforHuntington'sdiseasefromgeneticanimalmodelstoclinicaltrials",TVewrai^.l(3):298-306Huang,S.和Houghton，P.J.,2002."Mechanismsofresistancetorapamycins，，.i>wgf^fee,4(6)，378-391.H腿g，S.，Bjornsti,M.A.和HoughtonP.J.(2003)."Rapamycins:mechanismofactionandcellularresistance."Cawcer5z'o/T7zer2(3):222-32.Kahan，B.D.,Chang,J.Y.,和Sehgal，S.N.(1991)"Preclinicalevaluationofanewpotentimmunosuppressiveagent,rapamycin".rram7/a"to"ow52:185-191,Kirchner，G.I.,Winkler,M.，MuellerL.，Vidal,C.,Jacobsen,W.,Franzke,A.，Wagner，S.,Blick,S.，Ma應(yīng)M.P"和SewingK.-F.(2000)"PharmacokineticsofSDZRADandcyclosporinincludingtheirmetabolitesinsevenkidneygraftpatientsafterthefirstdoseofSDZRAD".BritishJournalofClinicalPharmacology50:449-454.KuhnB.，JacobsenW,，ChristiansU.,BenetL.Z.，KollmanP.A.(2001)，"MetabolismofsirolimusanditsderivativeeverolimusbycytochromeP4503A4:insightsfromdocking,moleculardynamics,andquantumchemicalcalculations".JMWC7z隱44(12),2027-34,Kuo,C.J.，Chung，J.K,,Fiorentino,D.F.,Flanagan,W.M.，Blenis,J.,和Crabtree,G.R.(1992)"Rapamycinselectivelyinhibitsinterleukin-2activationofp70S6kinase".淑,358:70-73.LampenA.,ZhangY.，HackbarthI.,BenetL.Z.，SewingK.F.,ChristiansU.(1998)"Metabolismandtransportofthemacrolideimmunosuppressantsirolimusinthesmallintestine"./P/7a，ac0/Exp777er285(3)，1104-12.LangmannT.,MauererR.，ZahnA.,MoehleC.，ProbstM.,StremmelW.,SchmitzG.(2003)"Real-timereversetmnscription-PCRexpressionprofilingofthecompletehumanATP-bindingcassettetransportersuperfamilyinvarioustissues".C/zem.49(2),230-8.LaplanteA.，DemeuleM.,MurphyG.F.，BeliveauR.(2002)"InteractionofimmunosuppressiveagentsrapamycinanditsanalogueSDZ-RADwithendothelialP-gp，，.r腦一福Prac.34(8),3393-5.Lee,J-S.,Paull,K,,Alvarez,M.,Hose,C.,Monks,A.,Grever，M,Fojo,A,T.,Bates,S.E.,1994."RhodamineeffluxpatternspredictP-glycoproteinsubstratesintheNationalCancerInstitutedrugscreen".A/o/ecw/or尸/za簡(3co/ogy46,627-638.LeeJ.K.,BusseyK丄，GwadryF.G,,ReinholdW.，RiddickG.,PelletierS丄.，NishizukaS.,SzakacsG.,AnnereauJ.P.，ShankavaramU.,LababidiS.,SmithL.H.,GottesmanM.M.,WeinsteinJ.N.(2003)"ComparingcDNAandoligonucleotidearraydata:concordanceofgeneexpressionacrossplatformsfortheNCI-60cancercells".Ge"ome說W.4(12)，R82.Li，A.R(1992)"ScreeningforhumanADME/Toxdrugpropertiesindrugdiscovery".Z)ragZ)^cover_y7bda_y,6,357-366.Lowden,P.A.S.,(1997)Ph.D.Dissertation,UniversityofCambridge."Studiesonthebiosynthesisofrapamycin".Main,E.R.G"Fulton，K.F.&Jackson,S.E.(1998)."TheContext-DependentNatureofDestabilisingMutationsontheStabilityofFKBP12".歷oc/7em/5/,"737,6145-6153.Main,E.R.G"Fulton，K.F.&Jackson,S.E.(1999)."FoldingofFKBP12:PathwayofFoldingandCharacterisationoftheTransitionState".JMo/.說o/.291,429-444.McAlpine，J.B，.SwansonS丄，Jackson，M，Whittern,D.N.(1991)."RevisedNMRassignmentsforrapamycin".J0wm3/o/^wri&.orics44:688-690.Meiering,E,M.,Se腿o，L.&Fersht,A.R.(1992)."EffectofActiveSiteHesiduesinBamaseonActivityandStability".Mo/,S/o/.225,585-589.Mothe-Satney,I.,Bmnn,GJ"McMahon,L.P.,Capaldo,C.T.,Abraham,R.T,,Lawrence,J.C.Jr-.(2000)"Mammaliantargetofrapamycin-dependentphosphorylationofPHAS-Iinfour(S/T)Psitesdetectedbyphospho-specificantibodies"JA'o/CZem.275(43),33836-33843.Paiva,N丄.,Demain,A丄.，和Roberts,M.F.(1991)"Incorporationofacetate,propionate,andmethionineintorapamycinBy5^取om少cey/^gmcop/cMs".Jowma/o/jVafwra/iVo(iMcto54:167-177.Pardridge,(2005),"TheBlood-BrainBarrier:BottleneckinBrainDrugDevelopment",臉wraix,2,3-14Perin,E.C.,(2005)，"ChoosingaDmg-ElutingStent:AComparisonBetweenCYPHERandTAXUS",ieWe>wCaWovacw/arMecftc/we,6(suppl1),ppS13-S21.PersidisA.(1999)，"Cancermultidrugresistance"NatBiotechnol,17:94-5PotenJ.爭,(1968)，"Longtermcultureofnormalandneoplastichumanglia."ActaPathol.Microbiol.Scand,,74:465-86RaughtB.,Gingras,A-C.和So腦berg,N.;(2001)，"Thetargetofrapamycin(TOR)proteins",/W」《98(13):7037-7044Ravikumar,B.,R.Duden,等(2002)."Aggregate-proneproteinswithpolyglutamineandpolyalanineexpansionsaredegradedbyautophagy,"http://顧M/G匿f11(9):1107-17.Reather,J.A.,(2000)，Ph.D.Dissertation,UniversityofCambridge."Latestepsinthebiosynthesisofmacrocycliclactones".RothT"BurgerA.M.,DenglerW"WillmannH.和FiebigH.H.(1999)"Humantumorcelllinesdemonstratingthecharacteristicsofpatienttumorsasusefulmodelsforanticancerdrugscreening".In:FiebigHH,BurgerAM(eds》RelevanceofTumorModelsforAnticancerDrugDevelopment.CoWn力.Ozco/.,54:145-156.Sathasivam,K.，C.Hobbs,爭(1999)."TransgenicmodelsofHuntington'sdisease."SocZW踐o/354(1386):963-9Sedrani,R.,Cottens,S.，Kallen,J"和Schuler,W.(1998)"Chemicalmodificationsofrapamycin:thediscoveryofSDZRAD".7>arap/ato"oPracee&，30:2192-2194.Sehgal，S.N.,Baker,H.,和V6zina,C.(1975)"Rapamycin(AY-22,989)，anewantifungalantibioticII.Fermentation,isolationandcharacterization".77ze/ow憩/o/yln"6/Wc>s28:727-733.SchoberA.(2004),"Classictoxin-inducedanimalmodelsofParkinson'sdisease:6-OHDAandMPTP"Ce〃T^weies,318(l):215-24)SteinU.,JurchottK.,SchlafkeM.,HohenbergerP.(2002)"ExpressionofmultidrugresistancegenesMVP,MDRl,andMRPldeterminedsequentiallybefore,during,andafterhyperthermicisolatedlimbperfusionofsofttissuesarcomaandmelanomapatients".JClinOncol.20(15》3282-92.SzakacsG.，AnnereauJ.P.,LababidiS.,ShankavaramU.,ArcielloA.,BusseyK丄，ReinholdW.，GuoY.,KruhG.D.,ReimersM.，WeinsteinJ.N.，GottesmanM,M.2004,"Predictingdrugsensitivityandresistance:profilingABCtransportergenesincancercells".CancerCell.6(2):129-37.Tanford,C.(1968)."ProteinDenaturation".」A.Prof.CTzem.23,121-282.Tanford,C.(1970)."ProteinDenaturation.PartC.Theoreticalmodelsforthemechanismofdenaturation".Jdva"cesz>/Votez'"C7zem&^y24,1-95Tee,A.R.和Proud，C.G,(2002)"Caspasecleavageofinitiationfactor4E-bindingprotein1yieldsadominantinhibitorofCap-dependenttranslationandrevealsanovelregulatorymotif'.M9/.CW/.S/o/.22,1674-1683TrepanierD丄，GallantH.,LegattD.F.,YatscoffR.W.(1998),"R叩amycin:distribution,pharmacokineticsandtherapeuticrangeinvestigations:anupdate".C//"腸c/2綴31(5):345-51.V6zina,C.,Kudelski,A"和Sehgal,S.N.(1975)"Rapamycin(AY-22,989),anewantifungalantibiotic.I.Taxonomyoftheproducingstreptomyceteandisolationoftheactiveprinciple".77zeJbwnW0/v4油'6/o"os128:721-726.Volpe,D.A.,Faustino，P.J.，Yu,L.X.,(2001)"Towardsstandardisationofaninvitromethodofdrugabsorption".尸/za環(huán)acope/a/Foram,27，2916-2922.Yu,K.,Toral-Barza,L.,Discafani,C.，Zhang,W.G"Skotnicki,J.,Frost,P"Gibbons,J丄(2001)"mTOR,anoveltargetinbreastcancer:theeffectofCCI-779,anmTORinhibitor,inpreclinicalmodelsofbreastcancer".￡<iwz>ze-ietoe(iC朋cer8:249-258.權(quán)利要求1.根據(jù)式(I)所示的39-去甲氧基雷帕霉素類似物或其藥學(xué)上可接受的鹽在制備用于治療由神經(jīng)損傷或疾病造成的醫(yī)學(xué)病癥的藥物中的用途，id="icf0001"file="S2006800126751C00011.gif"wi="87"he="79"top="5"left="5"img-content="drawing"img-format="tif"orientation="portrait"inline="no"/>其中，R1代表(H，H)或＝O而且R2和R3各自獨(dú)立地代表H、OH或OCH3。2.根據(jù)式(I)所示的39-去曱氧基雷帕霉素類似物在制備用于治療影響中樞神經(jīng)系統(tǒng)的醫(yī)學(xué)病癥的藥物中的用途，一-(I)其中，R,代表(H，H)或二O而且R2和R3各自獨(dú)立地代表H、OH或()CH:',其中所述醫(yī)學(xué)病癥需要藥物穿越血腦屏障。3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的用途，其中所述醫(yī)學(xué)病癥選自由一種或多種腦腫瘤和神經(jīng)退行性病癥組成的組。4.權(quán)利要求3的用途，其中所述藥物用于治療腦腫瘤。5.權(quán)利要求4的用途，其中所述腦腫瘤是多形性成膠質(zhì)細(xì)胞瘤。6.權(quán)利要求3的用途，其中所述藥物是用于治療神經(jīng)退行性病癥。7.權(quán)利要求6的用途，其中所述神經(jīng)退行性病癥是阿爾茨海默氏病。8.權(quán)利要求6的用途，其中所述神經(jīng)退行性病癥是多發(fā)性硬化。9.根據(jù)式(I)所示的39-去甲氧基雷帕霉素類似物或其藥學(xué)上可接受的鹽在制備用于治療癌癥或B-細(xì)胞惡性腫瘤的藥物中的用途，▲OH(I)其中，R,代表(H，H)或^0而且R2和R3各自獨(dú)立地代表H、OH或OCH3,其中癌癥或B-細(xì)胞惡性胂瘤對一種或多種現(xiàn)有的抗癌劑有耐受性10.權(quán)利要求9的用途，其中所述癌癥或B-細(xì)胞惡性腫瘤表達(dá)P-糖蛋白。11.權(quán)利要求10的用途，其中癌癥或B-細(xì)胞惡性腫瘤具有高表達(dá)水平的P-糖蛋白。12.權(quán)利要求1至11之任一項(xiàng)的用途，其中所述藥物是用于靜脈內(nèi)施用39-去曱氧基雷帕霉素類似物或其藥學(xué)上可接受的鹽。13.權(quán)利要求1至11之任一項(xiàng)的用途，其中所迷藥物進(jìn)一步包含一種或多種其他治療上有效的試劑。14.權(quán)利要求3-5或9-13之任一項(xiàng)的用途，其中所述藥物是用于治療癌癥或B-細(xì)胞惡性肝瘤，而且其中所述藥物進(jìn)一步包含一種或多種選自由下列組成的組的試劑曱氨蝶呤、曱酰四氫葉酸、阿霉素、強(qiáng)的松、博來霉素、環(huán)磷酰胺、5-氟尿嘧啶、紫杉醇、多西紫杉醇、長春新堿、長春堿、長春瑞賓、亞德里亞霉素、它莫西芬、托瑞米芬、乙酸曱地孕酮、阿那曲唑、戈舍瑞林、抗HER2單克隆抗體(如HerceptinTM)、卡培他濱、鹽酸雷洛昔芬、EGFR抑制劑、VEGF抑制劑、蛋白酶體抑制劑、和hsp90抑制劑。15.權(quán)利要求1至14之任一項(xiàng)的用途，其中所述39-去曱氧基雷帕霉素類似物是39-去曱氧基雷帕霉素。16.權(quán)利要求1至14之任一項(xiàng)的用途，其中所述39-去曱氧基雷帕霉素類似物還與雷帕霉素在第9、16或27位之一或多個位置上有區(qū)別。17.根據(jù)權(quán)利要求16所述的用途，其中所述39-去曱氧基雷帕霉素類似物與雷帕霉素在第16或27位之一或多個位置上有區(qū)別。18.根據(jù)權(quán)利要求16所述的用途，其中所述39-去曱氧基雷帕霉素類似物與雷帕霉素在第16和27位上有區(qū)別。19.根據(jù)權(quán)利要求16至18之任一項(xiàng)所述的用途，其中所述39-去曱氧基雷帕霉素類似物在第27位上有羥基，即R3代表OH。20.根據(jù)權(quán)利要求16至18之任一項(xiàng)所述的用途，其中所述39-去曱氧基雷帕霉素類似物在第27位上有氫，即R3代表OH。21.根據(jù)權(quán)利要求16至20之任一項(xiàng)所述的用途，其中所述39-去曱氧基雷帕霉素類似物在第16位上有羥基，即R2代表OH。22.藥物組合物，其包含根據(jù)式(I)所示的39-去曱氧基雷帕霉素類似物或其藥學(xué)上可接受的鹽，以及藥學(xué)上可接受的載體，<formula>formulaseeoriginaldocumentpage4</formula>其中，R,代表(H,H)或^0而且R2和R3各自獨(dú)立地代表H、OH或OCH3。23.根據(jù)權(quán)利要求23所述的藥物組合物，其特定地配制成用于靜脈內(nèi)施用。全文摘要本發(fā)明涉及39-去甲氧基雷帕霉素類似物的醫(yī)藥用途。文檔編號A61K31/436GK101180054SQ200680012675公開日2008年5月14日申請日期2006年3月10日優(yōu)先權(quán)日2005年3月11日發(fā)明者張明強(qiáng),羅斯·M·謝里登,馬修·A·格雷戈里申請人:比奧蒂卡科技有限公司