專利名稱：：頭孢菌素衍生物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及新的頭孢菌素衍生物、其易水解的酯或其藥學上可接受的鹽，這些化合物的制備方法，含有這些化合物的藥物組合物，以及這些化合物在制備用于治療和/或預(yù)防感染性疾病的藥物中的用途，屬于醫(yī)藥
技術(shù)領(lǐng)域：
。2
背景技術(shù)：
：抗生素廣泛用于臨床后，細菌產(chǎn)生的耐藥性便隨之而來。細菌基因的突變是導(dǎo)致細菌產(chǎn)生耐藥的根本原因。在抗生素的選擇性壓力下，突變率可成百倍增加，并極易發(fā)展為多重耐藥，給臨床治療造成嚴重困難，因此新的抗耐藥菌藥物的研發(fā)己成為國內(nèi)外關(guān)注的焦點。3
發(fā)明內(nèi)容為了克服臨床上廣泛的耐藥性，使感染性疾病得到更好的治療，本發(fā)明提供了新的具有免疫保護的頭孢菌素衍生物，其具有廣譜、高效、耐藥性小的特點本發(fā)明的技術(shù)方案如下-.本發(fā)明提供了通式(I)所示的化合物、其易水解的酯或其藥學上可接受的鹽<image>imageseeoriginaldocumentpage3</image>其中Ri為氫原子、16個碳原子的直鏈或支鏈的烷基、被12個碳原子的烷基取代的或未取代的37個碳原子的環(huán)烷基或苯基；R2為氫原子、16個碳原子的直鏈或支鏈的烷基、被12個碳原子的烷基取代的或未取代的37個碳原子的環(huán)烷基或苯基、16個碳原子的直鏈或支鏈的垸基羧酸基。上文所述的16個碳原子的直鏈或支鏈的烷基包括甲基、乙基、丙基、異丙基、丁基、異丁基、叔丁基、仲丁基、戊基、新戊基、己基等。上文所述的被12個碳原子的烷基取代的或未取代的37個碳原子的環(huán)烷基或苯基包括環(huán)丙基、環(huán)丁基、甲基環(huán)丙基、環(huán)戊基、2-甲基環(huán)丁基、3-甲基環(huán)丁基、乙基環(huán)丙基、環(huán)己基、2-甲基環(huán)戊基、3-甲基環(huán)戊基、2-乙基環(huán)丁基、3-乙基環(huán)丁基、環(huán)庚基、2-甲基-環(huán)己基、3-甲基-環(huán)己基、4-甲基-環(huán)己基、2-乙基環(huán)戊基、3-乙基環(huán)戊基、苯基、芐基等。上文所述的16個碳原子的直鏈或支鏈的烷基羧酸基包括乙酸基、丙酸基、異丙酸基、丁酸基、異丁酸基、叔丁酸基、戊酸基、異戊酸基、己酸基、異己酸基、庚酸基等。其中，列舉部分化合物如表1所示表l本發(fā)明的頭孢菌素衍生物的分子式及分子量<table>tableseeoriginaldocumentpage4</column></row><table>優(yōu)選的化合物為R為氫原子、14個碳原子的直鏈或支鏈的烷基；R2為氫原子、14個碳原子的直鏈或支鏈的垸基、14個碳原子的直鏈或支鏈的烷基羧酸基。最優(yōu)的化合物為R,和R2各自為獨立的甲基。其化學名稱和結(jié)構(gòu)式如下化學名稱(6R，7R)-7-2-呋喃基(順甲氧亞氨基)乙酰氨基卜3-[(5-羧甲基-4-甲基-2-噻唑基)硫1甲萄-8-氧代-5-硫雜-1-氮雜二環(huán)[4.2.01辛-2-烯-2-甲酸。以下簡稱化合物A:結(jié)構(gòu)式本發(fā)明人對最優(yōu)化合物A的衍生物進行了研究，發(fā)現(xiàn)其鈉鹽，尤其是二鈉鹽具有良好的易于制成注射劑的特性。其化學名稱和結(jié)構(gòu)式如下化學名稱(6R，7R)-7-[2-呋喃基(順甲氧亞氨基)乙酰氨基]-3-[(5-羧甲基-4-甲基-2-噻唑基)硫l甲萄-8-氧代-5-硫雜-1-氮雜二環(huán)[4.2.01辛-2-烯-2-甲酸二鈉鹽。以下簡稱化合物B:結(jié)構(gòu)式:<formula>formulaseeoriginaldocumentpage5</formula>本發(fā)明還提供了制備上述化合物A、B的制備方法，但不僅限于下述制備方法，也可以通過其他方法制得方法一反應(yīng)方程式-<formula>formulaseeoriginaldocumentpage5</formula>實驗歩驟步驟l:(6R，7R)-7-2-呋喃基(順甲氧亞氨基)乙酰氨基]-3-[(5-羧甲基-4-甲基-2-噻唑基)硫1甲基卜8-氧代-5-硫雜-1-氮雜二環(huán)[4丄01辛-2-烯-2-甲酸的制備(化合物A)在反應(yīng)瓶中加入頭孢呋辛鈉，MMTA，NaHC03，水，攪拌制成溶液后水浴加熱，60。C下反應(yīng)。反應(yīng)結(jié)束后加入少量活性炭，攪拌，過濾。冰水浴冷卻下向濾液中滴加入鹽酸調(diào)pH，再用乙酸乙酯萃取。水層減壓除去殘余的乙酸乙酯，然后用2N鹽酸調(diào)pH，低溫放置后過濾，得到黃色固體。步驟2:(6R，7R)-7-[2-呋喃基(順甲氧亞氨基)乙酰氨基-3-[[(5-羧甲基-4-甲基-2-噻唑基)硫1甲萄-8-氧代-5-硫雜-1-氮雜二環(huán)[4.2.01辛-2-烯-2-甲酸二鈉鹽的制備(化合物B)將上步所得A加入NaHC03溶解于水中制成溶液，加入少量活性炭攪拌約，過濾，向濾液中加入大量丙酮至無渾濁產(chǎn)生后，冷凍放置，過濾，固體真空室溫干燥后得成品，為白色固體。方法二實驗步驟步驟l:中間體TACS的制備反應(yīng)方程式COOH在錐形瓶中加入7-ACA、水，振蕩制成均勻懸濁液待用。在三口瓶中加入MMTA、水，攪拌下分批加入NaOH固體，然后用飽和NaHC03溶液調(diào)節(jié)pH，水浴控溫，再滴加入7-ACA懸濁液并滴加飽和NaHC03溶液反應(yīng)。然后加入活性炭攪拌后趁熱過濾，濾液在冰水浴中用2NHC1調(diào)節(jié)pH，攪拌后過濾，濾餅用水洗滌后用乙醇洗滌，室溫真空干燥得中間體TACS。步驟2:(6R，7R)-7-2-呋喃基(順甲氧亞氨基)乙酰氨基-3-[(5-羧甲基-4-甲基-2-噻唑基)硫甲基-8_氧代-5-硫雜-1-氮雜二環(huán)[4.2.01辛-2-烯-2-甲酸的制備(化合物A)反應(yīng)方程式<formula>formulaseeoriginaldocumentpage7</formula>在干燥的三口瓶中加入PCls、三氯甲烷，攪拌下冷卻，滴加入N，N-二甲基乙酰胺(以下稱DMA)，攪拌后分批加入甲氧亞胺基呋喃乙酸銨鹽反應(yīng)。然后加入碎冰，攪拌片刻后分層，三氯甲烷層置于冰鹽浴中待用。在三口瓶中加入DMA、乙腈和TACS，攪拌下冷卻，然后滴加入三乙胺、水，攪拌到全溶。然后滴加入上步預(yù)先冷卻的三氯甲烷溶液，加完后反應(yīng)。然后加入水，冰水浴冷卻下用1NHCl調(diào)節(jié)pH，分層，水層用三氯甲烷萃取。有機層合并用活性炭脫色后減壓濃縮。殘余物用大量飽和食鹽水洗滌得固體，固體再用水洗滌后加入甲醇溶解，再將甲醇溶液滴加到大量水中，過濾得固體，固體室溫真空干燥。步驟3:(6R，7R)-7-2-呋喃基(順甲氧亞氨基)乙酰氨萄-3-[(5-羧甲基-4-甲基-2-噻唑基)硫1甲萄-8-氧代-5-硫雜-1-氮雜二環(huán)[4.2.0辛-2-烯-2-甲酸二鈉鹽的制備(化合物B)反應(yīng)方程式:<formula>formulaseeoriginaldocumentpage7</formula>將上步所得化合物加入到水和丙酮中，加入NaHCCb，攪拌。然后滴加入丙酮到有褐色固體析出，加入活性炭攪拌脫色，過濾，濾液滴加入丙酮到渾濁后加入硅膠攪拌，過濾。再向濾液中滴加入丙酮到無渾濁產(chǎn)生后放置，然后過濾，濾餅用無水乙醇洗滌兩次后丙酮洗滌一次，室溫真空干燥得產(chǎn)物。通式(I)所示的化合物易于水解的酯是其羧基以易于水解的酯基形式存在的化合物。這些酯可以是常規(guī)的，例如乙酰氧基乙酯、乙酸基甲基酯、新戊酰氧甲基酯、1-乙酸基乙基酯、1-新戊酰氧乙基酯、甲氧羰基氧甲基酯、1-乙氧羰基氧乙基酯、1-異丙基羰基氧乙基酯、苯并呋喃酮基酯、硫代苯并呋喃酮基酯、甲氧基甲基酯、乙酰氨基甲基酯。也可以使用其他的酯例如芐基酯和氰基甲基酯。這些酯的其他實例如下(2，2-二甲基-1-氧丙氧基)甲基酯;(1RS)-l-乙酰氧基乙酯;2-[(2-甲基丙氧基)羰基]-2-戊烯基酯;l-[[(l-甲基乙氧基)羰基]氧]乙基酯；1-(乙酸基)乙基酯；(5-甲基-2-氧代-l，3-間二氧雜環(huán)戊烯-4-基)甲基酯；l-[[(環(huán)己氧基)羰基]氧]乙基酯；3,3-二甲基-2-氧代丁基酯。對于本領(lǐng)域?qū)I(yè)人員來說顯而易見的是，本發(fā)明化合物的易于水解的酯可以在該化合物的游離羧基處形成，例如在2末位的羧基處，優(yōu)選(1RS)-l-乙酰氧基乙酯,即(6R，7R)-7-[2-呋喃基(順甲氧亞氨基)乙酰氨基]-3-[[(5-羧甲基-4-甲基-2-噻哇基)硫]甲基]-8-氧代-5-硫雜-1-氮雜二環(huán)[4.2.0]辛-2-烯-2-甲酸，(1RS)-l-乙酰氧基乙酯。本發(fā)明上述任一化合物藥學上可接受的鹽為有機酸鹽、無機酸鹽、有機堿鹽或無機堿鹽，其中有機酸包括乙酸、三氟乙酸、甲磺酸、甲苯磺酸、馬來酸、琥珀酸、酒石酸、檸檬酸、富馬酸；無機酸包括鹽酸、氫溴酸、硝酸、硫酸、磷酸；有機堿包括葡甲胺、氨基葡萄糖；無機堿包括堿金屬鈉、鉀、鋰的堿性化合物，堿土金屬包括鋇、鈣、鎂、鋅的堿性化合物。本發(fā)明包括上面所述的任一化合物及其藥學上可接受的鹽與其它藥用活性成分的藥物組合物，如舒巴坦及其鈉鹽、他唑巴坦及其鈉鹽、克拉維酸及其鉀鹽。本發(fā)明進一步要求保護包括上面所述的任一化合物及其藥學上可接受的鹽與一種或多種藥用載體和/或稀釋劑的藥物組合物，其中含有按式(I)所述化合物0.1g5g的活性組分，可以為0.1g、0.125g、0.25g、0.5g、0.75g、lg、1.25g、1.5g、1.75g、2g、2.5g、3g、4g、5g等，例如對優(yōu)選化合物A及其衍生物如B而言，可以為0.1g、0.125g、0.25g、0.5g、0.75g、lg、1.25g、1.5g、1.75g、2g、2.5g、3g、4g、5g等(以化合物A計)，優(yōu)選0.25g、0.5g、lg、2g。上述藥物組合物可以以口服、腸胃外給藥或外用等方式施用于需要治療的患者，優(yōu)選口服制劑或注射劑或外用制劑。用于腸胃外給藥時，可制成注射劑。注射劑系指藥物制成的供注入體內(nèi)的溶液、乳液或混懸液及供臨用前配制或稀釋成溶液或混懸液的粉末或濃溶液的無菌制劑，注射劑可分為注射液、注射用無菌粉末與注射用濃溶液。注射液系指藥物制成的供注射入體內(nèi)用的無菌溶液型注射液、乳液型注射液或混懸型注射液，可用于肌內(nèi)注射、靜脈注射、靜脈滴注等；其規(guī)格有l(wèi)ml、2ml、5ml、10ml、20ml、50ml、100ml、200ml、250ml、500ml等，其中供靜脈滴注用的大體積(一般不小于100ml)注射液也稱靜脈輸液。注射用無菌粉末系指藥物制成的供臨用前用適宜的無菌溶液配制成澄清溶液或均勻混懸液的無菌粉末或無菌塊狀物，可用適宜的注射用溶劑配制后注射，也可用靜脈輸液配制后靜脈滴注；無菌粉末用溶媒結(jié)晶法、噴霧干燥法或冷凍干燥法等制得。注射用濃溶液系指藥物制成的供臨用前稀釋供靜脈滴注用的無菌濃溶液。制成注射劑時，可采用現(xiàn)有制藥領(lǐng)域中的常規(guī)方法生產(chǎn)，可選用水性溶劑或非水性溶劑。最常用的水性溶劑為注射用水，也可用0.9%氯化鈉溶液或其他適宜的水溶液；常用的非水性溶劑為植物油，主要為供注射用大豆油，其他還有乙醇、丙二醇、聚乙二醇等的水溶液。配制注射劑時，可根據(jù)藥物的性質(zhì)加入適宜的附加劑，如滲透壓調(diào)節(jié)劑、pH值調(diào)節(jié)劑、增溶劑、填充劑、抗氧劑、抑菌劑、乳化劑、助懸劑等。常用的滲透壓調(diào)節(jié)劑包括氯化鈉、葡萄糖、氯化鉀、氯化鎂、氯化鈣、山梨醇等，優(yōu)選氯化鈉或葡萄糖；常用的pH值調(diào)節(jié)劑包括醋酸-醋酸鈉、乳酸、枸櫞酸-枸櫞酸鈉、碳酸氫鈉-碳酸鈉等；常用的增溶劑包括聚山梨酯80、丙二醇、卵磷脂、聚氧乙烯蓖麻油等；常用的填充劑包括乳糖、甘露醇、山梨醇、右旋糖酐等；常用的抗氧劑有亞硫酸鈉、亞硫酸氫鈉、焦亞硫酸鈉等；常用抑菌劑為苯酚、甲酚、三氯叔丁醇等。注射劑常用容器有玻璃安瓿、玻璃瓶、塑料安瓿、塑料瓶等。用于口服時，可制成常規(guī)的固體制劑，如片劑、膠囊劑、丸劑、顆粒劑等；也可制成口服液體制劑，如口服溶液劑、口服混懸劑、糖漿劑等。片劑系指藥物與適宜的輔料混勻壓制而成的圓片狀或異形片狀的固體制劑，以口服普通片為主，另有含片、舌下片、口腔貼片、咀嚼片、分散片、可溶片、泡騰片、緩釋片、控釋片與腸溶片等。膠囊劑系指藥物或加有輔料充填于空心膠囊或密封于軟質(zhì)囊材中的固體制劑，依據(jù)其溶解與釋放特性，可分為硬膠囊(通稱為膠囊)、軟膠囊(膠丸)、緩釋膠囊、控釋膠囊和腸溶膠囊等。丸劑系指藥物與適宜的輔料均勻混合，以適當方法制成的球狀或類球狀固體制劑，包括滴丸、糖丸、小丸等。顆粒劑系指藥物與適宜的輔料制成具有一定粒度的干燥顆粒狀制劑，可分為可溶顆粒(通稱為顆粒)、混懸顆粒、泡騰顆粒、腸溶顆粒、緩釋顆粒和控釋顆粒等?？诜芤簞┫抵杆幬锶芙庥谶m宜溶劑中制成供口服的澄清液體制劑?？诜鞈覄┫抵鸽y溶性固體藥物，分散在液體介質(zhì)中，制成供口服的混懸液體制劑，也包括干混懸劑或濃混懸液。糖漿劑系指含有藥物的濃蔗糖水溶液。制成口服制劑時，可以加入適宜的填充劑、粘合劑、崩解劑、潤滑劑等。常用填充劑包括淀粉、糖粉、磷酸鈣、硫酸鈣二水物、糊精、微晶纖維素、乳糖、預(yù)膠化淀粉、甘露醇等；常用粘合劑包括羧甲基纖維素鈉、PVP-K30、羥丙基纖維素、淀粉漿、甲基纖維素、乙基纖維素、羥丙甲纖維素、膠化淀粉等；常用崩解劑包括干淀粉、交聯(lián)聚維酮、交聯(lián)羧甲基纖維素鈉、羧甲基淀粉鈉、低取代羥丙基纖維素等；常用潤滑劑包括硬脂酸鎂、滑石粉、十二烷基硫酸鈉、微粉硅膠等。本發(fā)明還提供了頭孢菌素衍生物在制備用于治療和/或預(yù)防感染性疾病的藥物中的用途，本發(fā)明的頭孢菌素衍生物對金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌、肺炎克雷伯菌、卡他莫拉菌、流感嗜血桿菌、肺炎鏈球菌、化膿性鏈球菌、臨床分離乙型溶血性鏈球菌、奇異變形桿菌、淋球菌ATCC49266等細菌均有良好的抗菌活性，可用于治療和/或預(yù)防哺乳動物(包括人)的由病原微生物引起的各種疾病，如呼吸道感染和泌尿道感染，對敗血癥、腦膜炎也有效。本發(fā)明的頭孢菌素衍生物與現(xiàn)有技術(shù)相比，具有以下優(yōu)點(1)首次提供了一種新的頭孢菌素衍生物，尤其是(6R，7R)-7-[2-呋喃基(順甲氧亞氨基)乙酰氨萄-3-[[(5-羧甲基-4-甲基-2-噻唑基)硫]甲基]-8-氧代-5-硫雜-1-氮雜二環(huán)[4.2.0]辛-2-烯-2-甲酸(即上述優(yōu)選化合物A)，其抗菌活性更強、耐藥性更好。(2)本發(fā)明進一步對上述優(yōu)選化合物即化合物A的衍生物進行研究，實驗發(fā)現(xiàn)其二鈉鹽即化合物B具有更好的易于制成注射劑的特性。(3)本發(fā)明進一步對化合物A的二鈉鹽(即化合物B)進行藥效學實驗，結(jié)果表明其具有廣譜、高效的抗菌作用及對感染的實驗動物有很好的保護作用等優(yōu)點，而且對小鼠網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)(RES)對血流中惰性炭粒有很強的廓清能力，對小鼠有很強的免疫保護作用。(4)本發(fā)明進一步對化合物A的二鈉鹽(即化合物B)進行急毒試驗，結(jié)果表明毒性較低，保證臨床用藥安全。(5)本發(fā)明上述化合物的制備工藝簡單，藥品純度高、收率高、質(zhì)量穩(wěn)定，易于進行大規(guī)模工業(yè)生產(chǎn)。以下通過實驗例來進一步闡述本發(fā)明的頭孢菌素衍生物的有益效果，這些實驗例包括本發(fā)明的新的頭孢菌素衍生物藥效學實驗、毒理學實驗。本發(fā)明的新的頭孢菌素衍生物具有下列有益效果，但不應(yīng)將此理解為本發(fā)明的新的頭孢菌素衍生物僅具有下列有益效果。以下實驗例中化合物B表示(6R,7R)-7-[2-呋喃基(順甲氧亞氨基)乙酰氨基]-3-[[(5-羧甲基-4-甲基-2-噻唑基)硫]甲基]-8-氧代-5-硫雜-1-氮雜二環(huán)[4.2.0]辛-2-烯-2-甲酸二鈉鹽。實驗例l:化合物B的抗菌譜及抗菌活性供試菌種金黃色葡萄球菌ATCC25923、大腸埃希菌ATCC25922、肺炎克雷伯菌ATCC49790、卡他莫拉菌ATCC3658、流感嗜血桿菌CMCC00332、化膿性鏈球菌CMCC02404、肺炎鏈球菌ATCC49619、臨床分離乙型溶血性鏈球菌、奇異變形桿菌、淋球菌ATCC49266。實驗方法(1)試管法實驗菌液的制備從新鮮菌種斜面蘸取少量菌苔，接種在適合實驗菌生長的培養(yǎng)基上，于規(guī)定溫度培養(yǎng)適當?shù)臅r間，培養(yǎng)后作為原菌液，用滅菌生理鹽水進行10倍系列的稀釋，取適宜濃度的O.lml菌液測定活菌數(shù)。取滅菌試管15支，各加入肉湯lml，第一管加入藥物原液lml，混勻后取lml加入第二管，依次稀釋至第15管，從第15管取出l.Oml于一滅菌試管內(nèi)不加實驗菌作為空白對照，其余試管各加入O.lml菌液，同時設(shè)陽性對照。置培養(yǎng)箱中培養(yǎng)18小時，觀察結(jié)果，以肉眼觀察無細菌生長的藥物濃度作為最低抑菌濃度MIC(pg/ml)，取無菌生長的試管中O.Olml液體接種于平板上，測出MBC(最低殺菌濃度，pg/ml)。(2)藥敏紙片法菌懸液的制備挑取35個菌落，置肉湯中孵育26小時，其濁度相當于0.5號麥氏濁度或用生理鹽水調(diào)至0.5號麥氏濁度，此時肉湯中細菌數(shù)約為1億個細菌/ml。接種M-H平板在瓊脂平板上均勻的涂布一層稀釋的實驗菌，用無菌鑷子將待測藥紙片均勻的貼在平板上，在適宜溫度下培養(yǎng)18小時，取出平板，測量紙片周圍抑菌圈直徑(mm，每張紙片含藥量均為l(Hig)。實驗結(jié)果及結(jié)論結(jié)果見表2。從表2可以看出，化合物B對所有供試菌種的MIC值和MBC值都較低，且抑菌圈也很大，表明化合物B對所有供試菌種均有很好的抑菌作用及殺菌作用。上述實驗結(jié)果中，化合物B對供試菌種的抑菌效果及殺菌效果均很好，表明本發(fā)明的新的頭孢菌素衍生物具有抗菌譜廣、抗菌活性高的優(yōu)點，為具有很好的臨床應(yīng)用潛力的新化合物。表2化合物B的抗菌譜及抗菌活性菌屬代表菌珠抗菌藥物MIC值MBC值((xg/ml)紙片法抑菌圈大小(mm)葡萄球菌屬金黃色葡萄球菌ATAA25923化合物B0.250.2521.6腸桿菌屬大腸埃希菌ATAA25922化合物B2220.2克雷伯菌屬肺炎克雷伯菌ATAA49790化合物B1220.5莫拉氏菌屬卡他莫拉菌ATCC3658化合物B0.250.521.3嗜血桿菌屬流感嗜血桿菌CMCC00332化合物B0.1250.2523.2鏈球菌屬化膿性鏈球菌CMCC02404化合物B0.5222.1鏈球菌屬肺炎鏈球菌ATCC49619化合物B0.1250.2524.0鏈球菌屬臨床分離乙型溶血性鏈球菌化合物B0.1250.2523.5變形桿菌屬奇異變形桿菌化合物B0.06250.2525淋球菌屬淋球菌ATCC49266化合物B0.5123實驗例2:化合物B的耐藥性研究實驗菌株實驗用菌株主要來源于包括痰、分泌物、咽拭子、血液、尿液、胸腔積液、腹腔積液等。共分離出656株大腸埃希菌，628株肺炎克雷伯菌兩種革蘭氏陰性桿菌，其余分離的菌株未作統(tǒng)計。供試品頭孢呋辛鈉、頭孢曲松鈉、頭孢噻肟鈉、頭孢哌酮、頭孢他啶5種頭孢類抗生素均由中國藥品生物制品檢定所提供。本發(fā)明化合物B，自制。方法采用紙片擴散法、Microscam系統(tǒng)的MIC法進行藥敏實驗，嚴格按照美國臨床實驗室標準化委員會(NAALS)2005年制定的規(guī)則進行操作及判讀。質(zhì)量控制每批實驗同時用標準大腸埃希菌ATCC25922、標準肺炎克雷伯菌ATCC700603測定相對應(yīng)抗生素紙片。實驗結(jié)果及結(jié)論結(jié)果見表3。通過臨床分離的大腸埃希菌、肺炎克雷伯菌對頭孢呋辛鈉、頭孢曲松鈉、頭孢噻肟鈉、頭孢哌酮、頭孢他啶以及本發(fā)明化合物B的耐藥率表明頭孢呋辛鈉、頭孢曲松鈉、頭孢噻肟鈉、頭孢哌酮、頭孢他啶對大腸埃希菌的耐藥率均在40%以上，而本發(fā)明化合物B的耐藥率僅為12.20%，說明本發(fā)明化合物B對大腸埃希菌的的抗菌活性高于頭孢呋辛鈉、頭孢曲松鈉、頭孢噻肟鈉、頭孢哌酮、頭孢他啶；頭孢呋辛鈉、頭孢曲松鈉、頭孢噻肟鈉、頭孢哌酮、頭孢他啶對肺炎克雷伯菌的耐藥率均在35%以上，而本發(fā)明化合物B的耐藥率僅為11.62%，說明本發(fā)明化合物B對肺炎克雷伯菌的抗菌活性均高于頭孢呋辛鈉、頭孢曲松鈉、頭孢噻肟鈉、頭孢哌酮、頭孢他啶。實驗結(jié)果表明本發(fā)明化合物B在抗革蘭氏陰性菌耐藥性方面有意想不到的優(yōu)點。表3化合物B的耐藥情況<table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table>注S:敏感；R:耐藥。實驗例3:化合物B的體內(nèi)抑菌實驗一對細菌感染的小鼠的保護作用供試品對照組注射用頭孢地嗪鈉，山東魯抗醫(yī)藥集團魯亞有限公司，規(guī)格l.Og;供試組化合物B，自制。受試動物健康小鼠120只，體重18~22g,雌雄兼用，隨機分為對照組低、中、高劑量組，化合物B低、中、高劑量組，共12組，每組10只。菌液用5%胃膜素稀釋金黃色葡萄球菌、肺炎克雷伯菌混懸液，含菌量均為l(^個/ml。實驗方法每只小鼠腹腔注射菌液0.5ml感染，將對照組的注射用頭孢地嗪鈉低、中、高劑量組和化合物B低、中、高劑量組分別用生理鹽水稀釋，注射菌液后1、6小時分別腹腔注射頭孢地嗪鈉和化合物B。感染后觀察24小時動物生存數(shù)，判斷藥品保護作用。結(jié)果見表4。實驗結(jié)果及結(jié)論金黃色葡萄球菌感染小鼠各治療組中，化合物B低、中、高劑量組對感染小鼠的保護作用相當或略強于對照組的注射用頭孢地嗪鈉低、中、高劑量組；肺炎克雷伯菌感染小鼠各治療組的結(jié)果，與金黃色葡萄球菌實驗組相似。其中以化合物B高劑量時作用最強。表4化合物B對2種實驗菌感染小鼠的體內(nèi)保護作用菌種組別給藥劑量(mg/kg)每組動物數(shù)(只)24h生存數(shù)24h死亡數(shù)對照組(低劑量)601073金黃色葡萄球菌對照組(中劑量)1201073對照組(高劑量)化合物B(低劑量)1806010108822化合物B(中劑量)1201091化合物B(高劑量)18010100對照組(低劑量)601064對照組(中劑量)1201082肺炎克對照組(高劑量)1801091雷伯菌化合物B(低劑量)601082化合物B(中劑量)1201091化合物B(高劑量)180109*:小鼠瀕臨死亡而處死實驗例4:化合物B對小鼠網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)(RES)對血流中惰性炭粒廓清能力的影響原理當顆粒異物進入人體血液循環(huán)時，可迅速被單核巨噬細胞吞噬而清除，其主要部位為肝、脾，故測定對血中異物的清除能力可以反映機體網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)的吞噬功能狀況。實驗動物雄性小鼠，體重1822g，40只。器材分光光度計，特制尖嘴玻璃吸管，4號針頭和0.251111注射器等。藥品及試劑生理鹽水、化合物B、印度墨汁。實驗方法取雄性小鼠40只，隨即分為藥物組及對照組，每組20只，藥物組每日腹腔注射化合物B180mg/kg，對照組同法注射等容積NS，連續(xù)6天，于末次給藥后lh，各鼠由尾經(jīng)脈注射稀釋的印度墨汁0.1ml/10g，然后每隔5min在小鼠眼后經(jīng)脈叢用尖嘴吸管取血0.025ml，加入盛有l(wèi)mg/mlNa2C03溶液的試管中，搖勻后于675nm測定吸光度(看吸光度有沒有統(tǒng)計學意義)，計算炭粒在血液中消失的T^。表5化合物B對小鼠炭粒廓清率的影響(X±Sn=10)組別體重(g)肝脾重A值(g)5min10min15min20mintl/2對照組21.51.180細2±0.0547±0.0469±0.0416±20.60.01020.0130.01040扁7化合物B組22.11.230.0496±0.0132*0.0367±0.019*0.0296±0.011*0.0154±0扁5'10.4*注p<0.05，與對照組相比。實驗結(jié)果及結(jié)論實驗結(jié)果見表5。由表中結(jié)果可看出化合物B組的吸光度與對照組相比顯著降低，且t^顯著減少(p<0.05)。實驗結(jié)果表明小鼠給予本發(fā)明化合物B后其血中炭粒的清除能力與對照組相比有明顯提高，表明本發(fā)明化合物B對小鼠網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)(RES)對血流中惰性炭粒有很強的廓清能力，對小鼠有很強的免疫保護作用。具體實施例方式以下通過實施例形式的具體實施方式，對本發(fā)明的上述內(nèi)容作進一步的詳細說明。但不應(yīng)將此理解為本發(fā)明上述主題的范圍僅限于以下實施例。凡基于本發(fā)明上述內(nèi)容所實現(xiàn)的技術(shù)均屬于本發(fā)明的范圍。以下實施例中各劑型的輔料可以用藥學上可接受的輔料替換，或者減少、增加。以下實施例中用化合物A表示(6R,7R)-7-[2-呋喃基(順甲氧亞氨基)乙酰氨基]-3-[[(5-羧甲基-4-甲基-2-噻唑基)硫]甲基]-8-氧代-5-硫雜-1-氮雜二環(huán)[4.2.0]辛-2-烯-2-甲酸；用化合物B表示(6R，7R)-7-[2-呋喃基(順甲氧亞氨基)乙酰氨基]-3-[[(5-羧甲基-4-甲基-2-噻唑基)硫]甲基]-8-氧代-5-硫雜-l-氮雜二環(huán)[4.2.0]辛-2-烯-2-甲酸二鈉鹽。實施例1化合物A、化合物B的制備一(1)(6R，7R)-7-[2-呋喃基(順甲氧亞氨基)乙酰氨基-3-[[(5-羧甲基-4-甲基-2-噻唑基)硫甲基卜8-氧代-5-硫雜-1-氮雜二環(huán)4.2.01辛-2-烯-2-甲酸的制備(化合物A)<formula>formulaseeoriginaldocumentpage15</formula>在反應(yīng)瓶中加入頭孢呋辛鈉1.3g(0.003mol)，MMTA0.6g(0.0032mol)，NaHC030.32g(0.0038mo1)，水15ml，攪拌制成溶液后水浴加熱，6(TC下反應(yīng)8h。反應(yīng)結(jié)束后加入少量活性炭，攪拌約15min，過濾。冰水浴冷卻下向濾液中滴加入鹽酸至pH約為6，再用20ml乙酸乙酯萃取3次(共60ml)。水層減壓除去殘余的乙酸乙酯，然后用2N鹽酸調(diào)至pH約為2，低溫放置lh后過濾，得到黃色固體，即化合物A0.9g(收率54.3%)。(2)(6R，7R)-7-[2-呋喃基(順甲氧亞氨基)乙酰氨基-3-[[(5-羧甲基-4-甲基-2-噻唑基)硫]甲基1-8-氧代-5-硫雜-1-氮雜二環(huán)[4.2.01辛-2-烯-2-甲酸二鈉鹽的制備(化合物B)<formula>formulaseeoriginaldocumentpage15</formula>將上步所得A0.9gC0.0016mo1)加入NaHCO30.28g(O.0033mol)溶解于約4ml水中制成溶液，加入少量活性炭攪拌約半小時，過濾，向濾液中加入大量丙酮至無渾濁產(chǎn)生后，冷凍放置約2h，過濾，固體真空室溫千燥后得成品約0.5g(收率52.4%)，為白色固體，HPLC檢測純度>96%。分子式C21H18N4Na208S3分子量596.6元素分析結(jié)果理論值C:42.28%;H:3.04%;N:9.39%;Na:7.71%;S:16.12%實測值C:42.15%;H:3.11%;N:9.30%;Na:7.63%;S:16.01%實施例2化合物A、化合物B的制備二(1)中間體TACS的制備在錐形瓶中加入7-ACA2.8g(O.Olmol)，水15ml，振蕩制成均勻懸濁液待用。在250ml三口瓶中加入MMTA2.9gC0.015mo1),水40ml，攪拌下分批加入NaOH固體0.56g(0.014mol)，然后用飽和NaHC03溶液調(diào)節(jié)pH至6.0，水浴控溫70'C，再滴加入7-ACA懸濁液并滴加飽和NaHCCb溶液使反應(yīng)液pH約為6.0，15min加完，加完后反應(yīng)lh。然后加入活性炭攪拌10min后趁熱過濾，濾液在冰水浴中用2NHC1調(diào)節(jié)pH2，攪拌約15min后過濾，濾餅用水洗滌兩次，室溫真空干燥得中間體丁八083.28，收率75。/。(以7-ACA計算)。(2)(6R，7R)-7-2-呋喃基(順甲氧亞氨基)乙酰氨基I-3-[(5-羧甲基-4-甲基-2-噻唑基)硫甲基-8-氧代-5-硫雜-1-氮雜二環(huán)4.2.01辛-2-烯-2-甲酸的制備(化合物A)在100ml干燥的三口瓶中加入PCl53.0gC0.016mo1)，三氯甲烷30ml，攪拌下冷卻到-40'C，滴加入5.5mlN，N-二甲基乙酰胺(以下稱DMA)，攪拌約5min后分批加入甲氧亞胺基呋喃乙酸銨鹽2.50g，-35卩下反應(yīng)30min。然后加入碎冰，攪拌片刻后分層，三氯甲烷層置于冰鹽浴中待用。在500ml三口瓶中加入15mlDMA，50ml乙腈，禾卩4.6gTACS(O.Ollmol)，攪拌下冷卻到-20'C，然后滴加入三乙胺9.5ml，水2tnl，攪拌到全溶。然后滴加入上步預(yù)先冷卻的三氯甲烷溶液，15min加完，加完后反應(yīng)lh，然后-2(TC反應(yīng)lh，O'C反應(yīng)lh，室溫反應(yīng)0.5h。然后加入水50ml，冰水浴冷卻下用INHC1調(diào)節(jié)pH到4，分層，水層用三氯甲烷20ml萃取3次(共60ml)。有機層合并用活性炭脫色后35'C下減壓濃縮。殘余物用大量飽和食鹽水洗滌得固體，固體再用水洗漆后加入甲醇溶解，再將甲醇溶液滴加到大量水中，過濾得固體，固體室溫真空干燥后得化合物A4.0g，收率65%。(3)(6R，7R)-7-[2-呋喃基(順甲氧亞氨基)乙酰氨基]-3-[(5-羧甲基-4-甲基-2-噻唑基)硫1甲基卜8-氧代-5-硫雜-1-氮雜二環(huán)[4.2.01辛-2-烯-2-甲酸二鈉鹽的制備(化合物B)將5.0g(0.009mol)TBFXH加入到10ml水和10ml丙酮中，加入NaHC031.6g(0.019mo1)，攪拌30min，加入活性炭攪拌脫色15min，過濾。再向濾液中滴加入丙酮到無渾濁產(chǎn)生后0'C放置15min，然后過濾，濾餅用無水乙醇洗滌兩次后丙酮洗滌一次，室溫真空干燥得產(chǎn)物3.6g,收率66.6%。'H-NMR(300MHz，DMSO-d6)S:9.752(1H，d)，7.835(lH，d)，6.638(2H，t，t)，5.607(lH,q),5.033(1Hd)4.639(lH，d),4.097(lH，d)，3.386(3H，s)，3.621(lH，d),3.371(lH，d)，3.310(2H，s),2.162(3H，s)分子式C21H18N4Na208S3分子量596.6元素分析結(jié)果理論值C:42.28%;H:3.04%;N:9.39%;Na:7.71%;S:16.12%實測值C:42.25%;H:3.06%;N:9.32%;Na:7,68%;S:16.07%實施例3化合物B無菌粉針的制備1、處方<table>tableseeoriginaldocumentpage17</column></row><table>2、制備工藝(1)將制備所用的抗生素玻璃瓶、膠塞等進行無菌處理；(2)按處方稱取原料(折算后投料)，將無菌粉末置于分裝機中分裝，隨時檢測裝量；(3)加塞，壓蓋，成品全檢，包裝入庫。實施例4化合物B片劑的制備1、處方處方h化合物B250g(以C2!H2oN40sS3計)預(yù)膠化淀粉50g低取代羥丙基纖維素40g微晶纖維素40g2%HPMC水溶液適量微粉硅膠4.0g硬脂酸鎂4.0g羧甲淀粉鈉2.0g共制備1000片化合物B125g(WC21H20N4O8SOt)預(yù)膠化淀粉30g低取代羥丙基纖維素20g微晶纖維素20g2XHPMC水溶液適量微粉硅膠4.0g硬脂酸鎂4.0g羧甲淀粉鈉2.0g共制備薩片制備工藝(1)將原料粉碎過IOO目篩，其余輔料分別過IOO目篩，備用。(2)按照處方量稱取原料和輔料。(3)將羥丙甲纖維素溶于水中制成2%的水溶液備用。(4)將化合物B、預(yù)膠化淀粉、低取代羥丙基纖維素、微晶纖維素混合均勻，加入2%HPMC水溶液適量，攪拌均勻，制成適宜軟材。(5)過20目篩制顆粒。(6)顆粒在6(TC的條件下烘干。(7)干燥好的顆粒加入硬脂酸鎂、微粉硅膠和羧甲淀粉鈉，過18目篩整粒，混合均勻。(8)取樣，半成品化驗。(9)按照化驗確定的片重壓片。(10)成品全檢，包裝入庫。實施例5化合物B膠囊的制備1、處方處方1:化合物B250g(以C21H2oN408S3計)預(yù)膠化淀粉50g低取代羥丙基纖維素40g微晶纖維素40g2XHPMC水溶液適量微粉硅膠4.0g硬脂酸鎂__共制備1000粒處方2:化合物B500g(以C21H2oN408S3計)預(yù)膠化淀粉80g低取代羥丙基纖維素50g微晶纖維素50g2XHPMC水溶液適量微粉硅膠8.0g硬脂酸鎂__共制備1000粒制備工藝(1)將原料粉碎過100目篩，其余輔料分別過100目篩，備用。(2)按照處方量稱取原料和輔料。(3)將羥丙甲纖維素溶于水中制成2%的水溶液備用。(4)將化合物B、預(yù)膠化淀粉、低取代羥丙基纖維素、微晶纖維素混合均勻，加入2%HPMC水溶液適量，攪拌均勻，制成適宜軟材。(5)過20目篩制顆粒。(6)顆粒在6(TC的條件下烘干。(7)干燥好的顆粒加入硬脂酸鎂、微粉硅膠，過18目篩整粒，混合均勻。(8)取樣，半成品化驗。(9)按照化驗確定的裝量裝入膠囊。(10)成品全檢，包裝入庫。權(quán)利要求1、通式(I)所示的化合物、其易水解的酯或其藥學上可接受的鹽其中R1為氫原子、1～6個碳原子的直鏈或支鏈的烷基、被1～2個碳原子的烷基取代的或未取代的3～7個碳原子的環(huán)烷基或苯基；R2為氫原子、1～6個碳原子的直鏈或支鏈的烷基、被1～2個碳原子的烷基取代的或未取代的3～7個碳原子的環(huán)烷基或苯基、1～6個碳原子的直鏈或支鏈的烷基羧酸基。2、如權(quán)利要求1所述的化合物，其中&為氫原子、14個碳原子的直鏈或支鏈的垸基；R2為氫原子、14個碳原子的直鏈或支鏈的垸基、14個碳原子的直鏈或支鏈的烷基3、如權(quán)利要求2所述的化合物，其中R!和R2各自為獨立的甲基。4、權(quán)利要求3所述的化合物的易水解的酯為(1RS)-l-乙酰氧基乙酯，即(6R,7R)-7-[2-呋喃基(順甲氧亞氨基)乙酰氨基]-3-[[(5-羧甲基-4-甲基-2-噻唑基)硫]甲基]-8-氧代-5-硫雜-1-氮雜二環(huán)[4.2.0]辛-2-烯-2-甲酸，(1RS)-l-乙酰氧基乙酯。5、權(quán)利要求3所述的化合物的鈉鹽，即(6R，7R)-7-[2-呋喃基(順甲氧亞氨基)乙酰氨基]-3-[[(5-羧甲基-4-甲基-2-噻唑基)硫]甲萄-8-氧代-5-硫雜-1-氮雜二環(huán)[4.2.0]辛-2-烯-2-甲酸二鈉鹽。6、權(quán)利要求15所述的任一化合物，其藥學上可接受的鹽為有機酸鹽、無機酸鹽、有機堿鹽或無機堿鹽，其中有機酸包括乙酸、三氟乙酸、甲磺酸、甲苯磺酸、馬來酸、琥珀酸、酒石酸、檸檬酸、富馬酸；無機酸包括鹽酸、氫溴酸、硝酸、硫酸、磷酸；有機堿包括葡甲胺、氨基葡萄糖；無機堿包括鈉、鉀、鋇、鈣、鎂、鋅、鋰的堿性化合物。7、包括權(quán)利要求15所述的任一化合物、其易水解的酯或其藥學上可接受的鹽與一種或多種藥用載體和/或稀釋劑的藥物組合物。8、如權(quán)利要求7所述的藥物組合物為藥學上可接受的任一劑型。9、如權(quán)利要求8所述的劑型為注射劑、口服制劑。10、權(quán)利要求15所述的任一化合物、其易水解的酯或其藥學上可接受的鹽在制備用于治療和/或預(yù)防感染性疾病的藥物中的應(yīng)用。全文摘要本發(fā)明涉及新的頭孢菌素衍生物、其易水解的酯或其藥學上可接受的鹽，這些化合物的制備方法，含有這些化合物的藥物組合物，以及這些化合物在制備用于治療和/或預(yù)防感染性疾病的藥物中的應(yīng)用，屬于醫(yī)藥
技術(shù)領(lǐng)域：
。研究發(fā)現(xiàn)新的頭孢菌素衍生物、其易水解的酯或其藥學上可接受的鹽，具有廣譜、高效的抗菌作用、保護感染的實驗動物及低毒的優(yōu)點，而且對小鼠網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)(RES)對血流中惰性炭粒有很強的廓清能力，對小鼠有很強的免疫保護作用，具有良好的臨床使用價值，可廣泛用于臨床。文檔編號A61K31/546GK101113152SQ20061014717公開日2008年1月30日申請日期2006年11月8日優(yōu)先權(quán)日2006年7月28日發(fā)明者黃振華申請人:黃振華