專利名稱：：蒲黃或其提取物和山楂葉或其提取物的藥物組合物的制作方法蒲黃或其提取物和山楂葉或其提取物的藥物組合物
技術(shù)領(lǐng)域：
1本發(fā)明涉及蒲黃或其提取物與山楂葉或其提取物的藥物組合物及其制備方法，在制備治療心腦血管疾病的藥物中的應(yīng)用和含有該藥物組合物的制劑，屬于醫(yī)藥
技術(shù)領(lǐng)域：
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背景技術(shù)：
1心腦血管疾病包括冠心病、心絞痛、心肌梗塞、瘀血型肺心病、缺血性腦病、腦血栓、高血壓、高血脂等。這些疾病的主要發(fā)病原因是動(dòng)脈硬化造成管腔狹窄、管道阻塞，從而導(dǎo)致心腦供血不足，引起頭沉、頭暈、頭痛、胸悶等癥狀，嚴(yán)重者可導(dǎo)致腦中風(fēng)及心肌梗塞的發(fā)生。心腦缺血后影響能量代謝，繼發(fā)乳酸堆積、鈣超載、自由基損傷等多種變化。一直以來(lái)心腦血管疾病都是威脅人類健康的大敵，每年奪走1200多萬(wàn)人的生命，接近人口總死亡的1/4。隨著我國(guó)逐漸進(jìn)入老年社會(huì)，且隨著經(jīng)濟(jì)的發(fā)展和生活方式、飲食習(xí)慣的改變，心腦血管疾病的患病率和死亡率正逐年上升，根據(jù)世界衛(wèi)生組織預(yù)測(cè)，至2020年，非傳染性疾病將占我國(guó)死亡原因的79%，其中心腦血管疾病將占首位。因此，如何有效防治心腦血管疾病也就引起人們的高度重視。目前，心腦血管疾病的診斷和防治是世界性研究熱點(diǎn)，也是中醫(yī)藥理論和臨床研究的重要內(nèi)容。蒲黃為香蒲科植物水燭香蒲7>//a"wgw幼/o/ZfifL.、東方香蒲7>/tow/ewtofoPresl或同屬植物的干燥花粉。剪取雄花后，曬干，成為帶有雄花的花粉，即為草蒲黃。蒲黃還可經(jīng)炮制制成生蒲黃或蒲黃炭。蒲黃味甘，性平，歸肝、心包經(jīng)。具有止血、化瘀、通淋的功效。主要用于治療吐血、衄血、咯血、崩漏、外傷出血、經(jīng)閉痛經(jīng)、脘腹刺痛、跌撲腫痛、血淋澀痛。研究表明，蒲黃中的黃酮類化合物有降壓、降血脂，增加冠脈血流量和擴(kuò)張血管等作用。山楂葉為薔薇科植物山里紅Cratoegwp/朋a/i/WaBge.var.wa/orN.E.Br或山楂Oatoegt^內(nèi)m^/i/WoBge.的干燥葉。山楂葉中的黃酮類化合物如蘆丁、金絲桃苷、槲皮素、牡荊素等，是其主要的有效成分，具有擴(kuò)張血管、增加冠脈血流量以及心肌缺血和腦缺血保護(hù)等多種藥理活性，具有降壓、降血脂和強(qiáng)心作用，能改善心臟活力和興奮中樞神經(jīng)系統(tǒng)等。大量研究表明，山楂葉提取物還具有抗氧化功能，對(duì)血管內(nèi)皮細(xì)胞的氧化損傷具有明顯的保護(hù)作用。臨床應(yīng)用于冠心病心絞痛及各種原因引起的早搏有明顯療效，能有效的緩解心絞痛及心悸、胸悶等癥狀，改善心電圖，降低血脂，提高HDL，改善微循環(huán)和血流變，增加腦血流量，抗脂質(zhì)過(guò)氧化。中國(guó)藥典2005年版一部575576頁(yè)，益心酮片項(xiàng)下，有山楂葉提取物的標(biāo)準(zhǔn)。其中規(guī)定，山楂葉提取物按干燥品計(jì)算，含總黃酮以無(wú)水蘆丁(C27H3(A6)計(jì)，不得少于80.0%;含金絲桃苷(C21H2C012)，不得少于0.40%。已有益心酮片、滴丸、軟膠囊上市。目前利用蒲黃或蒲黃提取物與山楂葉或山楂葉提取物的相互作用，配伍組方，制備治療心腦血管疾病等方面的藥物，尚未見(jiàn)報(bào)道。
發(fā)明內(nèi)容為了滿足臨床需要，更好的治療心腦血管疾病等，提高人民健康水平，本發(fā)明提供了蒲黃或其提取物與山楂葉或其提取物的藥物組合物及其制備方法，在制備治療心腦血管疾病中的應(yīng)用和含有該藥物組合物的制劑。制成本發(fā)明藥物組合物所含藥效組分的原料藥為蒲黃、山楂葉，本發(fā)明藥物組合物具有顯著的抗心肌缺血、增加冠脈血流量，抗血小板聚集，降低血壓，改善血液流動(dòng)力學(xué)，改善腦血管循環(huán)，抗缺氧等作用，產(chǎn)生了意想不到的效果。經(jīng)過(guò)發(fā)明人大量的篩選實(shí)驗(yàn)證明，按照重量組份計(jì)算，蒲黃100010000份、山楂葉50010000份范圍內(nèi)具有顯著協(xié)同增效作用；優(yōu)選為蒲黃20005000份、山楂葉10004000份；進(jìn)一步優(yōu)選為蒲黃3000份、山楂葉2000份。上述藥物組合物中的蒲黃和山楂葉可以用適宜的溶劑分別或混合經(jīng)過(guò)提取加工得到其提取物，總提取物再和藥用輔料混合加工制成制劑，所得總提取物的主要有效成分為黃酮類化合物。所述的溶劑是指藥學(xué)上常用的溶劑，優(yōu)選水或醇，提取方法可以用藥學(xué)上常規(guī)的方法進(jìn)行提取，如煎煮法、滲漉法、回流提取法、連續(xù)提取法等。上述藥物組合物中的蒲黃可以通過(guò)下述優(yōu)選工藝提取制備，但不僅限于下述工藝取蒲黃藥材，加70%乙醇提取三次，每次提取3小時(shí)。第一、第二次加醇14倍量，第三次加醇10倍量。合并提取液，濾過(guò)，濾液回收乙醇至相對(duì)密度為1.041.06(50°C)的濃縮液，加等量水稀釋，混勻，4'C冷藏24小時(shí)，離心，取上清液，用等量石油醚振搖提取2次，棄去石油醚液，水液用等量水飽和正丁醇振搖提取3次，合并正丁醇提取液，濃縮至干，殘?jiān)由倭克谷芙?，上AB-8大孔樹(shù)脂柱，分別用水、35%乙醇、70%乙醇洗脫，收集70%乙醇洗脫液，回收乙醇，減壓干燥，即得。通過(guò)上述工藝制備的蒲黃提取物，得率為24%，黃酮類化合物的含量不低于50%。蒲黃除采用上述方法提取外，還可以通過(guò)以下方法提取制備，但不僅限于下述方法工藝一取蒲黃藥材，加水煎煮三次，第一、第二次每次煎煮3小時(shí)，加水12倍量，第三次煎煮2小時(shí)，加水10倍量。合并提取液，濾過(guò)，濾液濃縮至相對(duì)密度為1.101.15(60°C)的浸膏，加入乙醇至含量達(dá)80%，攪勻，放置過(guò)夜，濾過(guò)，濾液回收乙醇至無(wú)醇味，減壓濃縮至稠膏狀，真空干燥，即得。通過(guò)上述工藝制備的蒲黃提取物，得率為1020%，黃酮類化合物的含量不低于30%。工藝二取蒲黃藥材，加水煎煮三次，第一、第二次每次煎煮3小時(shí)，加水12倍量，第三次煎煮2小時(shí)，加水10倍量。合并提取液，濾過(guò)，濾液濃縮至相對(duì)密度為1.101.15(60'C)的浸膏，加入乙醇至含量達(dá)80%，放置過(guò)夜，濾過(guò)，濾液回收乙醇至相對(duì)密度為1.041.06(6(TC)的濃縮液，加等量水稀釋后，用等量石油醚振搖提取2次，棄去石油醚液，水液用等量水飽和正丁醇振搖提取3次，合并正丁醇提取液，濃縮至稠膏狀，噴霧干燥，即得。通過(guò)上述工藝制備的蒲黃提取物，得率為510%，黃酮類化合物的含量不低于50%。工藝三取蒲黃藥材，加水煎煮三次，第一、第二次每次煎煮3小時(shí)，加水12倍量，第三次煎煮2小時(shí)，加水10倍量。合并提取液，濾過(guò)，濾液濃縮至相對(duì)密度為1.101.15(60。C)的浸膏，加入乙醇至含量達(dá)80%，攪勻，放置過(guò)夜，濾過(guò)，濾液回收乙醇至相對(duì)密度為1.041.06(60'C)的濃縮液，加等量水稀釋后，用等量石油醚振搖提取2次，棄去石油醚液，水液用等量水飽和正丁醇振搖提取3次，合并正丁醇提取液，濃縮至干，殘?jiān)由倭克谷芙?，上大孔?shù)脂柱，先用l倍柱體積的水洗脫，棄去水洗液，再用2倍體積的35%乙醇洗脫，棄去35%乙醇洗脫液，然后用3倍柱體積的70%乙醇洗脫，收集70%乙醇洗脫液，減壓回收乙醇，濃縮至稠膏狀，噴霧干燥，即得。通過(guò)上述工藝制備的蒲黃提取物，得率為15%，黃酮類化合物的含量不低于50%。工藝四取蒲黃藥材，加70%乙醇提取三次，每次提取3小時(shí)。第一、二次加醇14倍量，第三次加醇10倍量。合并提取液，濾過(guò)，濾液回收乙醇至相對(duì)密度為1.041.06(50。C)的清膏，加等量水稀釋，混勻，4'C冷藏24小時(shí)，離心，取上清液，用等量石油醚振搖提取2次，棄去石油醚液，水液用等量水飽和正丁醇振搖提取3次，合并正丁醇提取液，濃縮至稠膏狀，噴霧干燥，即得。通過(guò)上述工藝制備的蒲黃提取物，得率為39%，黃酮類化合物的含量不低于50%。上述藥物組合物中的山楂葉可以通過(guò)下述優(yōu)選工藝提取制備，但不僅限于下述工藝取山楂葉，烘干，切碎，加60%乙醇回流提取三次，每次1小時(shí)，加乙醇8倍量，合并提取液，濾過(guò)，濾液減壓回收乙醇至相對(duì)密度為1.041.06(60°C)的濃縮液，加等量水稀釋后，用1/2倍量的石油醚(60卯'C)振搖提取，棄去石油醚液，水層用乙酸乙酯振搖提取，提取液減壓回收乙酸乙酯并濃縮至干，再加入適量水溶解，加于已處理好的聚酰胺柱(3060目，乙醇濕法裝柱，乙醇適量預(yù)洗，再用水洗至無(wú)醇味，備用)上，先用2倍柱體積的水洗脫，棄去水洗液，然后分別用3倍柱體積的60%乙醇、75%乙醇、95%乙醇和無(wú)水乙醇洗脫，收集各洗脫液，合并，回收乙醇并濃縮至相對(duì)密度約1.081.12的濃縮液，噴霧干燥，即得。通過(guò)上述工藝制備的山楂葉提取物的得率為23%，黃酮類化合物的含量不低于80.0%，金絲桃苷的含量不低于0.40%。山楂葉除采用上述方法提取外，還可以通過(guò)以下方法提取制備，但不僅限于下述方法方法一取山楂葉，烘干，切碎，加70%乙醇回流提取兩次，第一次加12倍量乙醇，第二次加10倍量乙醇，每次2小時(shí)，合并提取液，濾過(guò)，濾液減壓濃縮至相對(duì)密度為1.081.12，加3倍藥材量的水，靜置24小時(shí)，抽濾，濾液濃縮至相對(duì)密度為1.051.08，加于已處理好的聚酰胺柱G060目，乙醇濕法裝柱，乙醇適量預(yù)洗，再用水洗至無(wú)醇味，備用)上，先用2倍柱體積的水洗脫，棄去水洗液，再用3倍柱體積的75%乙醇洗脫，收集洗脫液，回收乙醇至無(wú)醇味，真空干燥，即得。通過(guò)上述工藝制備的山楂葉提取物得率為24%，黃酮類化合物的含量不低于60.0%，金絲桃苷含量不低于0.30%。方法二取山楂葉，烘干，切碎，加水煮沸提取兩次，每次2小時(shí)，過(guò)濾，合并濾液，濾液用高速離心機(jī)離心20min，400rpm。過(guò)濾上清液，并加熱濃縮(加熱溫度在70°C左右)至相對(duì)密度為1.051.08。濃縮液冷卻后加入等體積乙醇，放入冰箱內(nèi)2h后，5000r/min離心30min。過(guò)濾，濾液回收乙醇(加熱溫度為7(TC左右)至無(wú)醇味，加于已處理好的大孔樹(shù)脂柱(D101型，乙醇濕法裝柱，乙醇適量預(yù)洗，再用水洗至無(wú)醇味，備用)上，先用2倍柱體積的水洗脫，棄去水洗液，然后用3倍柱體積的80%乙醇洗脫，收集洗脫液，回收乙醇并濃縮至相對(duì)密度為1.041.06(60°C)的濃縮液，噴霧干燥，即得。通過(guò)上述工藝制備的山楂葉提取物得率為24%，黃酮類化合物的含量不少于50.0%，金絲桃苷含量不少于0.20%。上述藥物組合物中，其中的蒲黃和山楂葉均可由相應(yīng)重量份的提取物直接投料制成，按照蒲黃提取物相對(duì)于藥材的得率為24%，山楂葉提取物相對(duì)于藥材的得率為23。/。分別計(jì)算，制成該藥物組合物所含藥效組分的原料藥的組成還可以為蒲黃提取物20400份、山楂葉提取物10300份；優(yōu)選為蒲黃提取物40200份、山楂葉提取物20120份；進(jìn)一步優(yōu)選為蒲黃提取物60120份、山楂葉提取物4060份。上述藥物組合物中，蒲黃提取物中黃酮類化合物的含量不低于30%,最好不低于50%;山楂葉提取物中黃酮類化合物的含量不低于50%、最好不低于80%，其中金絲桃苷的含量不低于0.2%、最好不低于0.4%。.上述藥物組合物中，藥物組分的用量是經(jīng)過(guò)發(fā)明人進(jìn)行大量摸索總結(jié)得出的，各組分用量在上述重量份范圍內(nèi)都具有較好療效。上述組成，若以克為單位，可以制成10010000次用量的制劑，如作為片劑，可制成10010000片，每次服用110片；如作為膠囊劑，可制成10010000粒，每次服用110粒，如作為注射劑可以制成101000支，每次用量110支。上述組成是按重量份作為配比的，如大規(guī)模生產(chǎn)可以以千克為原料，或以噸為單位，小規(guī)模生產(chǎn)也可以以克為單位。上述重量份數(shù)對(duì)于特殊病人，可以相應(yīng)調(diào)整組成的比例，增加或者減少不超過(guò)100%。本藥物組合物可用于制備治療心腦血管疾病的藥物。藥理藥效實(shí)驗(yàn)研究表明，本藥物組合物可以顯著減小心肌梗塞面積；可顯著降低缺血心肌耗氧量，提高缺血心肌組織中抗自由基酶活性，增強(qiáng)心肌組織清除自由基的能力，減少心肌過(guò)氧化物及羥自由基的生成；顯著對(duì)抗垂體后葉素所致大鼠急性心肌缺血心電圖變化；顯著抗血小板聚集；顯著增加冠脈血流量，增加心肌供血，降低左室舒張末期壓，降低心臟前負(fù)荷，顯著改善犬血液流動(dòng)力學(xué)；顯著改善腦血管循環(huán)，減小腦缺血面積；顯著延長(zhǎng)小鼠在常壓缺氧狀態(tài)下的生存時(shí)間。共同發(fā)揮抗心肌缺血、增加冠脈血流量，抗血小板聚集，降低血壓，改善血液流動(dòng)力學(xué)，改善腦血管循環(huán)，抗缺氧等作用。上述藥物組合物，可以與任一藥學(xué)上可接受的輔料混合制成任何一種臨床上或藥學(xué)上可接受的劑型，優(yōu)選口服制劑或注射劑，以口服或腸胃外給藥的方式施用于需要這種治療的患者。用于口服給藥時(shí)，可將其制成常規(guī)的固體制劑，包括片劑、膠囊劑、顆粒劑、丸劑和口服溶液劑等。片劑系指藥物與適宜的輔料混勻壓制而成的圓片狀或異形片狀的固體制劑；片劑以口服普通片為主，另有含片、舌下片、口腔貼片、咀嚼片、分散片、可溶片、泡騰片、緩釋片、控釋片與腸溶片等。膠囊劑系指藥物或加有輔料充填于空心膠囊或密封于軟質(zhì)囊材中的固體制劑；膠囊劑依據(jù)其溶解與釋放特性，可分為硬膠囊(通稱為膠囊)、軟膠囊(膠丸)、緩釋膠囊、控釋膠囊和腸溶膠囊。顆粒劑系指藥物與適宜的輔料制成具有一定粒度的干燥顆粒狀制劑；顆粒劑可分為可溶顆粒(通稱為顆粒)、混懸顆粒、泡騰顆粒、腸溶顆粒、緩釋顆粒和控釋顆粒等。丸劑系指藥物與適宜的輔料均勻混合，以適當(dāng)方法制成的球狀或類球狀固體制劑；丸劑包括滴丸、糖丸、小丸等?？诜芤簞┫抵杆幬锶芙庥谶m宜溶劑中制成供口服的澄清液體制劑。腸胃外給藥時(shí)，可將其制成注射用的溶液、注射用水或油懸浮劑、吸入劑等。優(yōu)選劑型為口服制劑如片、膠囊、軟膠囊、顆粒、滴丸、口服液等。用于腸胃外給藥時(shí)，可制成注射劑。注射劑系指藥物制成的供注入體內(nèi)的溶液、乳液或混懸液及供臨用前配制或稀釋成溶液或混懸液的粉末或濃溶液的無(wú)菌制劑，注射劑可分為注射液、注射用無(wú)菌粉末與注射用濃溶液。注射液系指藥物制成的供注射入體內(nèi)用的無(wú)菌溶液型注射液、乳液型注射液或混懸型注射液，可用于肌內(nèi)注射、靜脈注射、靜脈滴注等；其規(guī)格有l(wèi)ml、2ml、5ml、lOml、20ml、50ml、100ml、200ml、250ml、500mi等，其中供靜脈滴注用的大體積(一般不小于100ml)注射液也稱靜脈輸液。注射用無(wú)菌粉末系指藥物制成的供臨用前用適宜的無(wú)菌溶液配制成澄清溶液或均勻混懸液的無(wú)菌粉末或無(wú)菌塊狀物，可用適宜的注射用溶劑配制后注射，也可用靜脈輸液配制后靜脈滴注；無(wú)菌粉末用溶媒結(jié)晶法、噴霧干燥法或冷凍干燥法等制得。注射用濃溶液系指藥物制成的供臨用前稀釋供靜脈滴注用的無(wú)菌濃溶液。本發(fā)明藥物組合物的制劑可采用現(xiàn)有制藥領(lǐng)域中的常規(guī)方法生產(chǎn)，需要的時(shí)候可以添加各種藥學(xué)上可接受的載體。所述的載體包括藥學(xué)領(lǐng)域常規(guī)的滲透壓調(diào)節(jié)劑、pH值調(diào)節(jié)劑、增溶劑、抗氧劑、抑菌劑、乳化劑、助懸劑、填充劑、粘合劑、崩解劑、潤(rùn)滑劑等。制成口服制劑時(shí)，可以加入適宜的填充劑、粘合劑、崩解劑、潤(rùn)滑劑等。填充劑包括淀粉、糖粉、磷酸鈣、硫酸鈣二水物、糊精、微晶纖維素、乳糖、預(yù)膠化淀粉、甘露醇等；粘合劑包括羧甲基纖維素鈉、PVP-K30、羥丙基纖維素、淀粉漿、甲基纖維素、乙基纖維素、輕丙甲纖維素、膠化淀粉等；崩解劑包括干淀粉、交聯(lián)聚維酮、交聯(lián)羧甲基纖維素鈉、羧甲基淀粉鈉、低取代羥丙基纖維素等；潤(rùn)滑劑包括硬脂酸鎂、滑石粉、十二烷基硫酸鈉、微粉硅膠等。制成注射劑時(shí)，可選用水性溶劑或非水性溶劑，可根據(jù)藥物的性質(zhì)加入適宜的附加劑。最常用的水性溶劑為注射用水，也可用0.9%氯化鈉溶液或其他適宜的水溶液；常用的非水性溶劑為植物油，主要為供注射用大豆油，其他還有乙醇、丙二醇、聚乙二醇等的水溶液。常用的附加劑包括滲透壓調(diào)節(jié)劑、pH值調(diào)節(jié)劑、增溶劑、填充劑、抗氧劑、抑菌劑、乳化劑、助懸劑等。常用的滲透壓調(diào)節(jié)劑包括氯化鈉、葡萄糖、氯化鉀、氯化鎂、氯化鈣、山梨醇等，優(yōu)選氯化鈉或葡萄糖；常用的pH值調(diào)節(jié)劑包括醋酸-醋酸鈉、乳酸、枸櫞酸-枸櫞酸鈉、碳酸氫鈉-碳酸鈉等；常用的增溶劑包括聚山梨酯80、丙二醇、卵磷脂、聚氧乙烯蓖麻油等；常用的填充劑包括乳糖、甘露醇、山梨醇、右旋糖酐等；常用的抗氧劑有亞硫酸鈉、亞硫酸氫鈉、焦亞硫酸鈉等；常用抑菌劑為苯酚、甲酚、三氯叔丁醇等。注射劑常用容器有玻璃安瓿、玻璃瓶、塑料安瓿、塑料瓶等。本發(fā)明藥物組合物的優(yōu)點(diǎn)在于(1)首次提供了蒲黃或其提取物和山楂葉或其提取物用于制備治療心腦血管疾病藥物的組合物，并通過(guò)藥理實(shí)驗(yàn)證實(shí)兩者有協(xié)同增效的作用，優(yōu)于兩者單獨(dú)用藥。(2)對(duì)本發(fā)明藥物組合物中藥物組份的用量進(jìn)行了大量摸索研究，通過(guò)研究本發(fā)明藥物組合物各配比對(duì)大鼠實(shí)驗(yàn)性心肌梗塞范圍的影響、對(duì)小鼠常壓耐缺氧能力的影響，篩選出具有顯著療效的重量份范圍。(3)藥理藥效實(shí)驗(yàn)研究表明，本藥物組合物可以顯著減小心肌梗塞面積；可顯著降低缺血心肌耗氧量，提高缺血心肌組織中抗自由基酶活性，增強(qiáng)心肌組織清除自由基的能力，減少心肌過(guò)氧化物及羥自由基的生成；顯著對(duì)抗垂體后葉素所致大鼠急性心肌缺血心電圖變化;顯著抗血小板聚集；顯著增加冠脈血流量，增加心肌供血，降低左室舒張末期壓，降低心臟前負(fù)荷，顯著改善犬血液流動(dòng)力學(xué)；顯著改善腦血管循環(huán)，減小腦缺血面積；顯著延長(zhǎng)小鼠在常壓缺氧狀態(tài)下的生存時(shí)間。上述實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，蒲黃或蒲黃提取物與山楂葉或山楂葉提取物合并用藥有協(xié)同作用，藥效明顯增強(qiáng)，其結(jié)果是本
技術(shù)領(lǐng)域：
的普通人員所意想不到的。(4)本發(fā)明藥物組合物的有效成分明確、含量高，制劑穩(wěn)定性好，便于控制產(chǎn)品質(zhì)量，可以保證臨床用藥安全。(5)對(duì)蒲黃提取物和山楂葉提取物的質(zhì)量進(jìn)行控制，并提供了優(yōu)選的制備工藝，簡(jiǎn)便易行，且質(zhì)量較好，適用于工業(yè)化大生產(chǎn)。以下通過(guò)實(shí)驗(yàn)例來(lái)進(jìn)一步闡述本發(fā)明所述藥物的有益效果，這些實(shí)驗(yàn)例包括本發(fā)明藥物組合物的藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)，蒲黃或其提取物和山楂葉或其提取物制備而成的藥物組合物以下簡(jiǎn)稱PS。以下實(shí)驗(yàn)例中所用的山楂葉提取物均取自于實(shí)施例l，蒲黃提取物均取自實(shí)施例2。實(shí)驗(yàn)例lPS對(duì)大鼠實(shí)驗(yàn)性心肌梗塞范圍的影響受試動(dòng)物Wistar大鼠，雄性，體重200220g，160只。供試品生理鹽水市購(gòu)；蒲黃顆粒劑自制，(相當(dāng)于原藥材3g);山楂葉顆粒劑自制，(相當(dāng)于原藥材2g);PS顆粒劑(山楂葉+蒲黃)自制，見(jiàn)表l。實(shí)驗(yàn)方法將大鼠隨機(jī)分為16個(gè)組，每組10只空白對(duì)照組、模型組、蒲黃顆粒劑組、山楂葉顆粒劑組、PS顆粒劑組12個(gè)不同配比組，山楂葉+蒲黃(10000+1000、6000+1000、4000+1000、4000+2000、2000+2000、2000+3000、1000+2000、2000+5000、500+2000、500+3000、500+5000、500+10000)。各給藥組均為用生理鹽水配制成混懸液后灌胃給藥。大鼠實(shí)驗(yàn)性心肌梗死模型動(dòng)物戊巴比妥腹腔注射麻醉(45mg/kg)仰位固定。氣管插管，在胸骨左側(cè)作2cm的縱切口，近胸骨側(cè)剪斷第3、第4肋軟骨，打開(kāi)胸腔后，連接人工呼吸機(jī)(通氣量2ml/100g，50次/min)。剪開(kāi)心包膜，暴露心臟，冠狀動(dòng)脈左前降支根部穿線以備結(jié)扎，記錄標(biāo)準(zhǔn)II導(dǎo)聯(lián)心電圖，穩(wěn)定10分鐘，結(jié)扎冠狀動(dòng)脈左前降支，關(guān)閉胸腔。用針筒吸出動(dòng)物喉部分泌物，使動(dòng)物恢復(fù)自主呼吸。結(jié)扎冠狀動(dòng)脈15min后，灌胃給藥。結(jié)扎冠狀動(dòng)脈4小時(shí)后，摘取心臟，在結(jié)扎線以下橫切5片，進(jìn)行氯化硝基四氮唑藍(lán)(N-BT)染色，計(jì)算心肌梗死塞區(qū)面積占心室及心臟面積的百分比，并進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理(t檢驗(yàn))。表lPS對(duì)大鼠實(shí)驗(yàn)性心肌梗塞范圍的影響(5±s，n=10)組別重量份數(shù)配比二，梗死區(qū)/心室(％)梗死區(qū)/心臟(％)空白對(duì)照組—一29.11±5.1323.59±4.79模型組一—33.19±6.37$26.66±4.48$蒲黃組24028.32土6.11'23.17士5.66'山楂葉組16025.26土6.59'22.14土6.37'1()()()()1()()()16014.56±5.62"&#13.05±5.27，6000+100016013.84±5.47，12.36±4.78，4000+畫(huà)16013.06±3.55"&#11.94±4.17"&#4000+200016011.98±4.63"&#9.54±3.26"&#PS組(山楂葉+蒲黃)2000+200016011.74±4.33，9.32±3.15"&#2000+300016011.27±4.08"&#9.15±3.02"&#1000+200016011.55±5.64**&#9.52±4.54"&#2000+500016011.89±3.2廣&#10.01±4.19，500+200016012.92±4.23，12.67±3.28"&#500+300016013.89±4.26"&#12.74±3.99"&#500+500016014.48±4.63"&#13.25±4.32，500+1000016014.41±5.67"&#14.18±5.79，注$p<0.05，與空白對(duì)照組相比；p<0.05，p<0.01，與模型組相比；&p<0.05，與蒲黃組相比；#p<0.05，與山楂葉組相比。實(shí)驗(yàn)結(jié)果及結(jié)論實(shí)驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表l。(1)與空白對(duì)照組相比，模型組的心肌梗塞面積顯著增加(p<0.05)，說(shuō)明造模成功。(2)與模型組相比，山楂葉組心肌梗塞面積顯著減小(p<0.05)，蒲黃組心肌梗塞面積顯著減小(p<0.05)，各PS重量配比組心肌梗塞面積均極顯著減小(p<0.01)。(3)與山楂葉組、蒲黃組相比，PS各重量配比的抗心肌梗塞作用均優(yōu)于單用山楂葉(p<0.05)和蒲黃(p<0.05)的作用。PS均可顯著減小心肌梗塞面積，效果優(yōu)于單用山楂葉和蒲黃，提示兩藥配伍有協(xié)同增效作用，尤其是山楂葉+蒲黃在h0.51:2.5范圍內(nèi)，效果更好，提示其可能為最佳配比范圍。實(shí)驗(yàn)例2PS對(duì)心肌耗氧量及抗氧化酶的影響受試動(dòng)物雜種犬42只，體重12.68kg±1.87kg，雌雄各半。供試品蒲黃膠囊劑自制，(相當(dāng)于原藥材3g);山楂葉膠囊劑自制，(相當(dāng)于原藥材2g);PS膠囊劑自制，(相當(dāng)于含蒲黃lg，山楂葉lg)實(shí)驗(yàn)方法42只犬，隨機(jī)分為7組假結(jié)扎組、模型對(duì)照組、蒲黃膠囊劑組、山楂葉膠囊劑組、PS膠囊劑低劑量組、PS膠囊劑中劑量組、PS膠囊劑高劑量組。各給藥組均為用生理鹽水配制成混懸液后喂服。犬心肌缺血模型制備給藥期滿的各組犬靜脈注射戊巴比妥鈉(30mgAg")麻醉固定，監(jiān)測(cè)肢體II導(dǎo)聯(lián)心電圖；建立股靜脈通道，0.5%肝素鈉體內(nèi)抗凝；分離股動(dòng)脈，肝素化后股動(dòng)脈插管連續(xù)監(jiān)測(cè)BP;分離氣管并插管，行人工呼吸機(jī)正壓呼吸(頻率1618次，min—\吸氣呼氣比1:1.5，潮氣量350550ml);開(kāi)胸暴露心臟，分離左冠狀動(dòng)脈左旋支，連接血流量計(jì)，測(cè)定冠脈血流量；分離左冠脈前降支第一分支下方2mm，除假結(jié)扎組只穿線不結(jié)扎外，其余各組均穿入兩條1號(hào)絲線，一期結(jié)扎前5min，按每公斤體重2mg,靜脈滴入利多卡因。第一條絲線結(jié)扎時(shí)將一根處理過(guò)直徑為lmm的9號(hào)針頭置于結(jié)扎線和血管之間，結(jié)扎后將針頭抽出，進(jìn)行血管狹窄的一期結(jié)扎，30min后，再將第二條絲線結(jié)扎，進(jìn)行血流阻斷的二期結(jié)扎，完成心肌缺血模型的制備。檢測(cè)指標(biāo)血氧飽和度測(cè)定于結(jié)扎前、一期結(jié)扎10mm、二期結(jié)扎即刻、15min、30min、60min、120min測(cè)定并記錄冠脈血流量，并于結(jié)扎前和二期結(jié)扎120min時(shí)分別于冠狀竇(靜脈血)、頸主動(dòng)脈各取血lml，測(cè)定血氧飽和度，按公式心肌耗氧量(MV02)ml/(min'100g)-冠狀動(dòng)脈血流量(CBF)ml/(min.lOOg)x(動(dòng)脈血氧ml。/。-冠狀竇血氧ml。/。)計(jì)算各組心肌耗氧量。心肌組織SOD、MDA、-OH'測(cè)定二期結(jié)扎120min各組立即取出心臟，用冰生理鹽水注射液沖洗、吸干、稱重后取左心室心尖部心肌組織lg，以生理鹽水注射液為介質(zhì)，用勻漿器制成10%心肌組織勻漿，測(cè)定SOD活性、MDA和-OH'含量。表2PS對(duì)犬缺血心肌耗氧量及SOD、MDA、-OH'的影響(；±s,n=6)<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>注$p<0.05，$$p<0.01，與假結(jié)扎組比；*p<0.05，**p<0.01，與模型組比；&p<0.05，與蒲黃膠囊劑組比；#p<0.05，與山楂葉組相比。實(shí)驗(yàn)結(jié)果及結(jié)論對(duì)心肌耗氧量的影響模型組與假結(jié)扎組相比心肌耗氧量極顯著升高(p<0.01);蒲黃組、山楂葉組、PS高、中、低各劑量組心肌耗氧量均極顯著低于模型組(p<0.01)，見(jiàn)表2。對(duì)心肌組織中SOD、MDA及-OH'的影響模型組與假結(jié)扎組相比心肌組織中SOD活性極顯著升高(pO.Ol)，MDA及-OH'含量極顯著降低(pO.01);蒲黃組、山楂葉組、PS高、中、低各劑量組，心肌組織中SOD活性極顯著高于模型組(pO.01);MDA含量、-OH'含量顯著降低均極顯著低于模型組(pO.Ol)。與山楂葉組、蒲黃組相比，PS各劑量的效果均優(yōu)于單用山楂葉(p<0.05)和蒲黃(p<0.05)的效果。PS各劑量組在冠脈結(jié)扎阻斷血流后，可顯著降低缺血心肌耗氧量，提高缺血心肌組織中抗自由基酶活性，增強(qiáng)心肌組織清除自由基的能力，減少心肌過(guò)氧化物及羥自由基的生成，且均優(yōu)于但用蒲黃和山楂葉的效果，提示兩藥配伍具有協(xié)同增效作用。實(shí)驗(yàn)例3PS對(duì)實(shí)驗(yàn)性大鼠急性心肌缺血保護(hù)作用的研究實(shí)驗(yàn)動(dòng)物Wistar大鼠，70只，體重在200220g，雌雄各半。供試品生理鹽水，市購(gòu)；硝酸甘油片，規(guī)格0.5mg，北京益民藥業(yè)有限公司；蒲黃提取物片劑，自制，(73mg，相當(dāng)于原藥材3g);山楂葉提取物片劑，自制，(49mg，相當(dāng)于原藥材2g);PS片劑，自制，(含蒲黃提取物73mg，相當(dāng)于原藥材3g;含山楂葉提取物49mg，相當(dāng)于原藥材2g)。實(shí)驗(yàn)方法大鼠70只，隨機(jī)分為7組，每組10只，分別為空白對(duì)照組，硝酸甘油組，蒲黃提取物組，山楂葉提取物組，PS低劑量組，PS中劑量組，PS髙劑量組。各給藥組均為用生理鹽水配制成混懸液后灌胃給藥，各組動(dòng)物每天灌胃給予PS1次，連續(xù)7天(硝酸甘油組于給垂體后葉素前舌下靜脈注射1次)。末次給藥后60min，用氨基甲酸乙酯(lg/kg)腹腔注射麻醉于六道生理記錄儀(上海醫(yī)用儀器廠)，連接肢體導(dǎo)聯(lián)和胸前導(dǎo)聯(lián)，于示波器觀測(cè)并記錄心電圖。舌下靜脈注射垂體后葉素5ul/kg后，立即記錄V3心電圖，并于15s、30s、lmin、2min、5min各描記l次，比較各組靜脈注入垂體后葉素后心電圖ST段上移及T波升高的幅度，并觀察各組出現(xiàn)心律失常的動(dòng)物數(shù)。表3PS對(duì)抗垂體后葉素所致大鼠急性心肌缺血心電圖變化(x±s,n=10)<table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table>注*p<0.05，**p<0.01，與空白對(duì)照組相比；&p<0.05，與蒲黃提取物組相比；#p<0.05，與山楂葉提取物組相比。實(shí)驗(yàn)結(jié)果及結(jié)論給予垂體后葉素后各組心電圖ST段上移及T波升高的幅度以及出現(xiàn)心率失常的動(dòng)物數(shù)見(jiàn)表3。注射垂體后葉素后，空白對(duì)照組多數(shù)動(dòng)物即刻出現(xiàn)ST段上移，2min內(nèi)達(dá)到最高峰，5min基本恢復(fù)。T波即刻2min出現(xiàn)升高，隨之逐漸恢復(fù)，但5min未恢復(fù)至正常。硝酸甘油組和PS組ST段上移及T波升高出現(xiàn)的時(shí)間與對(duì)照組一致，但幅度明顯小于對(duì)照組，且恢復(fù)較快。與蒲黃提取物組、山楂葉提取物組相比，PS各劑量的抗心電圖變化的作用均優(yōu)于單用蒲黃提取物和山楂葉提取物的作用，有顯著性差異(p<0.05)。提示蒲黃提取物與山楂葉提取物合并用藥具有協(xié)同增效作用。實(shí)驗(yàn)例4PS抗血小板聚集作用受試動(dòng)物Wistar大鼠，雄性，體重200220g，60只，隨機(jī)分為6組，每組10只。供試品生理鹽水，市購(gòu)；注射用蒲黃提取物，自制，(73mg，相當(dāng)于原藥材3g);注射用山楂葉提取物，自制，(49mg，相當(dāng)于原藥材2g);注射用PS，自制，(含蒲黃提取物99mg，相當(dāng)于原藥材4g;含山楂葉提取物24mg，相當(dāng)于原藥材lg)。實(shí)驗(yàn)方法將大鼠隨機(jī)分為6組，每組10只，分別為空白對(duì)照組，注射用蒲黃提取物組，注射用山楂葉提取物組，注射用PS高、中、低劑量組。各給藥組均腹腔注射給藥，每日一次,連續(xù)給藥7天，末次給藥后l小時(shí)，動(dòng)物麻醉后自腹主動(dòng)脈取血，抗凝劑采用3.28%枸櫞酸鈉，與血液以1:9比例混合。將抗凝全血在2(TC條件下1500r/min離心5min獲得富血小板血漿(PPR)。留取定量PPR后，將剩余PPR再次以3000r/min離心10min，獲得自身對(duì)照貧血小板血漿(PPP)。以PPP調(diào)節(jié)PPR濃度，使各PPR濃度相同。將PPR在37'C的恒溫孔中預(yù)熱后，加入ADP(終濃度為3nmol/L)引起血小板聚集，記錄最大聚集率。表4PS抗血小板聚集作用(5±s，n=10)<table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table>注'p<0.05,"pO.Ol，與空白對(duì)照組相比;&p<0.05，與蒲黃提取物組相比；#p<0.05，與山楂葉提取物組相比。實(shí)驗(yàn)結(jié)果及結(jié)論實(shí)驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表4。(1)與空白對(duì)照組相比，注射用蒲黃提取物組和注射用山楂葉提取物組血小板最大聚集率均顯著降低(p<0.05)，注射用PS各劑量組血小板最大聚集率極顯著降低(p<0.01)。(2)與注射用蒲黃提取物組、注射用山楂葉提取物組相比，注射用PS各劑量的血小板最大聚集率均顯著降低(p<0.05，p<0.05)。注射用PS各劑量組均都能明顯抑制血小板聚集，且優(yōu)于與單用注射用蒲黃提取物組或注射用山楂葉提取物組，表明山楂葉提取物與蒲黃提取物配伍有很好的協(xié)同作用；且作用效果與給藥劑量有關(guān)，高劑量時(shí)效果最好。實(shí)驗(yàn)例5PS對(duì)小鼠常壓耐缺氧能力的影響受試動(dòng)物小鼠，300只，體重2025g，雌雄各半。供試品生理鹽水，市購(gòu)；蒲黃膠囊劑，自制；(相當(dāng)于原藥材3g)山楂葉膠囊劑，自制；(相對(duì)于原藥材2g)PS膠囊劑(山楂葉+蒲黃)，自制，見(jiàn)表5。實(shí)驗(yàn)方法將大鼠隨機(jī)分為15個(gè)組，每組20只空白對(duì)照組、模型組、蒲黃組、山楂葉組、PS組(重量配比見(jiàn)表5)。各給藥組均為用生理鹽水配制成混懸液后灌胃給藥，空白對(duì)照組灌胃給予同體積的生理鹽水，每天1次，連續(xù)5天，給藥劑量見(jiàn)表5。末次給藥lh后，分別置于經(jīng)容量標(biāo)定125ml的廣口瓶中，瓶?jī)?nèi)置10g鈉石灰以吸收CO2和水份，瓶蓋涂以凡士林密封，記錄小鼠的死亡時(shí)間。表5PS對(duì)小鼠常壓耐缺氧能力的影響(5±S，n=20)<table>tableseeoriginaldocumentpage14</column></row><table>注'p<0.05,"pO.Ol，與對(duì)照組相比；&p<0.05，與蒲黃提取物組相比；#p<0.05，與山楂葉提取物組相比。實(shí)驗(yàn)結(jié)果及結(jié)論實(shí)驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表5。(1)與對(duì)照組相比較，在常壓缺氧情況下，蒲黃可顯著延長(zhǎng)小鼠存活時(shí)間，(p<0.05);山楂葉可顯著延長(zhǎng)小鼠存活時(shí)間，(p<0.05)。(2)與對(duì)照組相比較，在常壓缺氧情況下，PS可極顯著延長(zhǎng)小鼠的存活時(shí)間(pO.01);(3)與山楂葉組和蒲黃組相比，PS各重量配比組均可顯著延長(zhǎng)小鼠存活時(shí)間(p<0.05)。表明PS各重量配比組中小鼠的存活時(shí)間均長(zhǎng)于山楂葉組和蒲黃組，提示山楂葉和蒲黃合并用藥有協(xié)同增效作用，可顯著延長(zhǎng)小鼠在常壓缺氧狀態(tài)下的生存時(shí)間，在治療缺氧性心腦血管疾病及其它缺氧性疾病方面將有顯著療效，其中山楂葉+蒲黃在h0.51:2.5范圍內(nèi)效果更好，提示其可能為最佳配比范圍。具體實(shí)施方式以下通過(guò)實(shí)施例形式的具體實(shí)施方式，對(duì)本發(fā)明的上述內(nèi)容作進(jìn)一步的詳細(xì)說(shuō)明。但不應(yīng)將此理解為本發(fā)明上述主題的范圍僅限于以下的實(shí)施例。凡基于本發(fā)明上述內(nèi)容所實(shí)現(xiàn)的技術(shù)均屬于本發(fā)明的范圍。以下實(shí)施例中各劑型的輔料可以用藥學(xué)上可接受的輔料代替，或者減少、增加。1、山楂葉提取物的制備方法取山楂葉，烘干粉碎，加60%乙醇回流提取三次，每次1小時(shí)，加乙醇8倍量，合并提取液，濾過(guò)，濾液減壓回收乙醇至相對(duì)密度為1.041.06(60'C)的濃縮液，加等量水稀釋后，用l/2倍量的石油醚(6090'C)振搖提取，棄去石油醚液，水層用乙酸乙酯振搖提取，提取液減壓回收乙酸乙酯并濃縮至干，再加入適量水溶解，加于已處理好的聚酰胺柱(3060目，乙醇濕法裝柱，乙醇適量預(yù)洗，再用水洗至無(wú)醇味，備用)上，先用2倍柱體積的水洗脫，棄去水洗液，然后分別用3倍柱體積的60%乙醇、75%乙醇、95%乙醇和無(wú)水乙醇洗脫，收集各洗脫液，合并，回收乙醇并濃縮至相對(duì)密度約1.081.12的濃縮液，噴霧干燥，即得。2、山楂葉提取物的鑒別取山楂葉提取物研細(xì)，取0.1g，加乙醇5ml，搖勻，超聲處理5分鐘，濾過(guò)，取濾液作為供試品溶液。另取蘆丁對(duì)照品、金絲桃苷對(duì)照品，分別加乙醇制成每lml含0.2mg的溶液，作為對(duì)照品溶液，照薄層色譜法實(shí)驗(yàn)，吸取上述三種溶液各lnl，分別點(diǎn)于同一聚酰胺薄膜上，以乙醇-丙醇-水(7:5:6)為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，噴以三氯化鋁試液，吹干，放置l小時(shí)后，置紫外光燈下(365nm)下，檢視。供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)。3、山楂葉提取物的含量測(cè)定黃兩類化合物的含量測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備精密稱取蘆丁對(duì)照品200mg，置于100ml容量瓶中，加入乙醇溶解并稀釋至刻度，搖勻。精密吸取此溶液10ml置100ml容量瓶中，加乙醇定容至刻度，搖勻即得(每lml含無(wú)水蘆丁0.2mg)。標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備精密吸取標(biāo)準(zhǔn)溶液O.Ol、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0ml分別置25ml容量瓶中，各加乙醇至6ml，加10Q/。亞硝酸鈉溶液1.0ml，混勻，放置6min，力1]10%硝酸鋁溶液l.Oml，放置6min，加氫氧化鈉試液10.0ml，最后用乙醇稀釋至刻度。搖勻，以第l瓶為空白，照紫外分光光度法，在510nm處測(cè)定吸收度。供試品的制備精密稱定提取物1.0g，置索氏提取器中，加乙醇回流至無(wú)色，提取液于蒸發(fā)皿中，水浴濃縮至干，用50ml熱水溶解并轉(zhuǎn)移至分液漏斗中，加入水飽和正丁醇液萃取3次，每次10ml，合并萃取液于蒸發(fā)皿中，水浴蒸干，再加乙醇使溶解，并濾入50ml容量瓶中，加乙醇至刻度，搖勻。精密吸取5ml于25ml容量瓶中。加乙醇至刻度，搖勻，即得。測(cè)定法按標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備操作測(cè)定供試品溶液的吸收度，帶入回歸方程，計(jì)算，即得。金絲桃苷的含量測(cè)定色譜條件及系統(tǒng)適應(yīng)性以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以乙腈-四氫呋喃-水-甲酸(55:45:400:1.5)為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為255nm;柱溫為25'C;流速為lml/min。對(duì)照品溶液的制備精密稱取以五氧化二磷為千燥劑減壓干燥24h的金絲桃苷對(duì)照品適量，加甲醇制成每lml中含20網(wǎng)的溶液，即得。供試品溶液的制備取山楂葉提取物約0.4g，精密稱定，加入70%丙酮溶液超聲提取，共3次，每次使用溶液30ml，超聲10min，濾過(guò)，最后使用少量70%丙酮溶液反復(fù)洗滌34次，合并濾液，水浴揮干，殘?jiān)蛹状既芙?，并稀釋?0ml，搖勻，過(guò)微孔濾膜，得供試品。測(cè)定法分別精密吸取上述對(duì)照品溶液和供試品溶液各20pl，注入液相色譜儀，測(cè)定，即得。按照上述方法制備三批山楂葉提取物，總黃酮的含量和得率見(jiàn)表6。從結(jié)果可以看出，通過(guò)本工藝得到的山楂葉提取物的得率為23%，總黃酮含量不低于80%，金絲桃苷含量不低于0.4%。表6山楂葉提取物的含量測(cè)定結(jié)果和得率<table>tableseeoriginaldocumentpage17</column></row><table>實(shí)施例2蒲黃提取物的制備1、蒲黃提取物的制備方法取蒲黃藥材，加70%乙醇提取三次，每次提取3小時(shí)。第一、二次加醇14倍量，第三次加醇10倍量。合并提取液，濾過(guò)，濾液回收乙醇至相對(duì)密度為1.041.06(5(TC)的濃縮液,加等量水稀釋，混勻，4'C冷藏24小時(shí)，離心，取上清液，用等量石油醚振搖提取2次，棄去石油醚液，水液用等量水飽和正丁醇振搖提取3次，合并正丁醇提取液，濃縮至干，殘?jiān)由倭克谷芙?，上AB-8大孔樹(shù)脂柱，分別用水、35%乙醇、70%乙醇洗脫，收集70%乙醇洗脫液，回收乙醇，減壓干燥，即得蒲黃提取物。2、蒲黃提取物的含量測(cè)定黃翻類化合物的含量測(cè)定-色譜條件及系統(tǒng)適應(yīng)性以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以甲醇-0.4%磷酸液(50:50)為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為360nm;以異鼠李素、山奈酚、槲皮素計(jì)算柱效，理論塔板數(shù)在30004000。對(duì)照品溶液的制備分別精密稱取經(jīng)五氧化二磷干燥過(guò)夜的槲皮素、山柰酚、異鼠李素對(duì)照品適量，各加甲醇制成每lml含0.04mg、0.02mg、O.lmg的溶液，作為對(duì)照品溶液。再逐級(jí)稀釋分別配成一系列對(duì)照品溶液，即得。供試品溶液的制備取蒲黃粉末1.0g，精密稱定，置250ml三角燒瓶中，加甲醇100ml超聲提取40min，放冷過(guò)濾，取濾液，提取液蒸干，殘?jiān)蛹状?25%鹽酸(4:1)混合液25ml，回流45min,放冷，轉(zhuǎn)移至50ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，取適量離心，即得。測(cè)定法分別精密吸取上述對(duì)照品溶液和供試品溶液各20nl，注入5^1定量管的液相色譜儀進(jìn)樣器，測(cè)定，即得。按照上述方法工藝五制備六批蒲黃提取物，總黃酮的含量和得率見(jiàn)表7。從結(jié)果可以看出，通過(guò)本工藝得到的蒲黃提取物的得率為24%，總黃酮含量不低于50%。表7蒲黃提取物的含量測(cè)定結(jié)果和得率批次黃酮類化合物的含量(％)得率(％)<table>tableseeoriginaldocumentpage18</column></row><table>實(shí)施例3PS片劑的制備處方一山楂葉提取物蒲黃提取物預(yù)膠化淀粉微晶纖維素低取代羥丙纖維素2%HPMC水溶液硬脂酸鎂羧甲淀粉鈉12g相當(dāng)于原藥材0.5kg24g相當(dāng)于原藥材lkg120g40g40g6g12g共制備1000片山楂葉提取物25g相當(dāng)于原藥材lkg蒲黃提取物24g相當(dāng)于原藥材lkg預(yù)膠化淀粉120g微晶纖維素40g低取代羥丙纖維素40g2%HPMC水溶液適量硬脂酸鎂6g羧甲淀粉鈉12g共制備1000片山楂葉提取物49g相當(dāng)于原藥材2kg蒲黃提取物24g相當(dāng)于原藥材lkg預(yù)膠化淀粉120g微晶纖維素40g低取代羥丙纖維素40g2%HPMC水溶液適量硬脂酸鎂6g羧甲淀粉鈉12g共制備1000片處方四山楂葉提取物99g相當(dāng)于原藥材4000g蒲黃提取物24g相當(dāng)于原藥材lkg預(yù)膠化淀粉120g微晶纖維素40g低取代羥丙纖維素40g2%HPMC水溶液適量硬脂酸鎂6g羧甲淀粉鈉_^|_共制備訓(xùn)片處方五山楂葉提取物247g相當(dāng)于原藥材10kg蒲黃提取物24g相當(dāng)于原藥材lkg預(yù)膠化淀粉120g微晶纖維素40g低取代羥丙纖維素40g2%HPMC水溶液適量硬脂酸鎂6g羧甲淀粉鈉__共制備1000片處方六山楂葉提取物12g相當(dāng)于原藥材0.5kg蒲黃提取物49g相當(dāng)于原藥材2kg預(yù)膠化淀粉120g微晶纖維素40g低取代羥丙纖維素40g2%HPMC水溶液適量硬脂酸鎂6g羧甲淀粉鈉__共制備誦片處方七山楂葉提取物12g相當(dāng)于原藥材0.5kg蒲黃提取物244g相當(dāng)于原藥材10kg預(yù)膠化淀粉120g微晶纖維素40g低取代羥丙纖維素40g2%HPMC水溶液適量硬脂酸鎂6g羧甲淀粉鈉_^_共制備畫(huà)片制備工藝(1)將蒲黃提取物和山楂葉提取物粉碎過(guò)100目篩備用。(2)按照處方量稱取原料和輔料。(3)將羥丙甲纖維素溶于水中制成2%的水溶液備用。(4)將山楂葉提取物、蒲黃提取物、預(yù)膠化淀粉、微晶纖維素、低取代羥丙纖維素混合均勻，加入2MHPMC水溶液適量，攪拌均勻，制成適宜軟材。(5)過(guò)20目篩制顆粒。(6)顆粒在6(TC的條件下烘干。(7)干燥好的顆粒加入硬脂酸鎂和羧甲淀粉鈉，過(guò)18目篩整粒，混合均勻。(8)取樣，半成品化驗(yàn)。(9)按照化驗(yàn)確定的片重壓片。(10)成品全檢，包裝入庫(kù)。實(shí)施例4PS膠囊劑的制備處方一:山楂葉提取物49g相當(dāng)于原藥材2kg蒲黃提取物49g相當(dāng)于原藥材2kg預(yù)膠化淀粉120g微晶纖維素50g低取代羥丙纖維素30g2%HPMC水溶液適量硬脂酸鎂6g共制備tr一翻粒3—山楂葉提取物99g相當(dāng)于原藥材4kg蒲黃提取物49g相當(dāng)于原藥材2kg預(yù)膠化淀粉120g微晶纖維素50g低取代羥丙纖維素30g2%HPMC水溶液適量硬脂酸鎂6g共制備1000粒3二山楂葉提取物15g相當(dāng)于原藥材lkg蒲黃提取物49g相當(dāng)于原藥材2kg預(yù)膠化淀粉120g微晶纖維素50g低取代羥丙纖維素30g2%HPMC水溶液適量硬脂酸鎂6g共制備函0粒處方四山楂葉提取物247g相當(dāng)于原藥材10kg蒲黃提取物49g相當(dāng)于原藥材2kg預(yù)膠化淀粉120g微晶纖維素50g低取代羥丙纖維素30g2%HPMC水溶液適量硬脂酸鎂__共制備1000粒處方五山楂葉提取物12g相當(dāng)于原藥材0.5kg蒲黃提取物73g相當(dāng)于原藥材3kg預(yù)膠化淀粉120g微晶纖維素50g低取代羥丙纖維素30g2%HPMC水溶液適量硬脂酸鎂__共制備1000粒處方六山楂葉提取物25g相當(dāng)于原藥材1kg蒲黃提取物73g相當(dāng)于原藥材3kg預(yù)膠化淀粉120g微晶纖維素50g低取代羥丙纖維素30g2%HPMC水溶液適量硬脂酸鎂__共制備1000粒處方七山楂葉提取物247g相當(dāng)于原藥材10kg蒲黃提取物122g相當(dāng)于原藥材5kg預(yù)膠化淀粉120g微晶纖維素50g低取代羥丙纖維素30g2%HPMC水溶液適量硬脂酸鎂__共制備難粒制備工藝(1)將蒲黃提取物和山楂葉提取物粉碎過(guò)ioo目篩備用。(2)按照處方量稱取原料和輔料。(3)將羥丙甲纖維素溶于水中制成2%的水溶液備用。(4)將山楂葉提取物、蒲黃提取物、預(yù)膠化淀粉、微晶纖維素、低取代羥丙纖維素混合均勻，加入2WHPMC水溶液適量，攪拌均勻，制成適宜軟材。(5)過(guò)20目篩制顆粒。(6)顆粒在6(TC的條件下烘干。(7)干燥好的顆粒加入硬脂酸鎂，過(guò)18目篩整粒，混合均勻<(8)取樣，半成品化驗(yàn)。(9)按照化驗(yàn)確定的裝量裝入膠囊。(10)成品全檢，包裝入庫(kù)。實(shí)施例5PS顆粒劑的制備處方一山楂葉提取物49g相當(dāng)于原藥材2kg蒲黃提取物73g相當(dāng)于原藥材3kg糖粉2000g甜菊素15g檸檬香精適量2%HPMC50%乙醇溶液適量共制備1000包山楂葉提取物99g相當(dāng)于原藥材4kg蒲黃提取物73g相當(dāng)于原藥材3kg糖粉2000g甜菊素15g檸檬香精適量2。/。HPMC50。/。乙醇溶液適量共制備1000包山楂葉提取物247g相當(dāng)于原藥材10kg蒲黃提取物73g相當(dāng)于原藥材3kg糖粉2000g甜菊素"g檸檬香精適量2%HPMC50°/。乙醇溶液適量共制備畫(huà)包處方處方四:山楂葉提取物蒲黃提取物糖粉甜菊素檸檬香精2yoHPMC50y。乙醇溶液共制備12g相當(dāng)于原藥材0.5kg122g相當(dāng)于原藥材5kg2000g15g畫(huà)包處方五山楂葉提取物25g相當(dāng)于原藥材lkg蒲黃提取物122g相當(dāng)于原藥材5kg糖粉2000g甜菊素15g檸檬香精適量20/oHPMC50。/。乙醇溶液適量_共制備畫(huà)包處方六山楂葉提取物49g相當(dāng)于原藥材2kg蒲黃提取物122g相當(dāng)于原藥材5kg糖粉2000g甜菊素15g檸檬香精適量2。/oHPMC50。/。乙醇溶液適量_共制備畫(huà)包處方七山楂葉提取物99g相當(dāng)于原藥材4kg蒲黃提取物122g相當(dāng)于原藥材5kg糖粉2000g甜菊素15g檸檬香精適量2n/oHPMC5(P/。乙醇溶液適量_共制備1000包制備工藝(1)將蔗糖粉碎過(guò)80目篩備用；將蒲黃提取物和山楂葉提取物粉碎過(guò)IOO目篩備用。(2)按照處方量稱取原料和輔料。(3)將蒲黃提取物、山楂葉提取物與糖粉、甜菊素以等量遞加的方法混合均勻，加入20/oHPMC50^乙醇溶液適量，攪拌均勻，制成適宜軟材，(4)過(guò)20目篩制顆粒。(5)顆粒在6(TC的條件下烘干。(6)干顆粒過(guò)18目篩整粒，噴入適量檸檬香精。(7)取樣，半成品化驗(yàn)顆粒中主藥的含量，確定裝量。(8)包裝，成品全檢，包裝入庫(kù)。實(shí)施例6PS口服液的制備<table>tableseeoriginaldocumentpage24</column></row><table>制備工藝(1)將山楂葉提取物和蒲黃提取物加入配液量50%的純化水中加熱攪拌溶解完全；再加入丙二醇攪拌溶解完全。(2)將苯甲酸鈉和甜菊甙用配液量20%的水溶解完全。(3)合并上述溶液，補(bǔ)加純化水至全量。(4)過(guò)0.8pm的微孔濾膜過(guò)濾。(5)半成品化驗(yàn)。(6)灌裝，成品全檢，包裝入庫(kù)。實(shí)施例7本發(fā)明藥物組合物注射液的制備處方蒲黃提取物A73g(相當(dāng)于原藥材3kg)山楂葉提取物49g(相當(dāng)于原藥材2kg)聚山梨酯80100g注射用^C_加至5000ml_共制備1000支具體步驟(1)提前一天處理配液用的管道及容器等，臨用前再用新鮮的注射用水沖洗；(2)將聚山梨酯80制成20%的水溶液，加入處方量的蒲黃提取物和山楂葉提取物，加熱攪拌溶解完全；(3)補(bǔ)加注射用水至全量；(4)加入配液量0.1%的針用活性炭，加熱攪拌15分鐘；(5)經(jīng)砂濾棒過(guò)濾脫炭，測(cè)定并調(diào)節(jié)溶液的pH值；(6)經(jīng)0.45pm的微孔濾膜精濾；(7)檢查溶液的澄明度，半成品化驗(yàn)；(8)將溶液熔封于玻璃安瓿中；(9)100'C流通蒸汽滅菌30分鐘；(10)趁熱將樣品放入0.01%的亞甲藍(lán)溶液中檢漏；(11)燈檢，成品全檢，包裝入庫(kù)。權(quán)利要求1、一種用于心腦血管疾病的藥物組合物，其特征在于，按照重量組份計(jì)算，制成該藥物組合物所含藥效成分的原料藥的組成為蒲黃1000～10000份、山楂葉500～10000份。2、根據(jù)權(quán)利要求1所述的藥物組合物，其特征在于，按照重量組份計(jì)算，制成該藥物組合物所含藥效成分的原料藥的組成為蒲黃20005000份、山楂葉10004000份。3、根據(jù)權(quán)利要求2所述的藥物組合物，其特征在于，按照重量組份計(jì)算，制成該藥物組合物所含藥效成分的原料藥的組成為蒲黃3000份、山楂葉2000份。4、根據(jù)權(quán)利要求13所述的任一藥物組合物的制備方法，其特征在于，所述的蒲黃和山楂葉可以用適宜的溶劑分別或混合經(jīng)過(guò)提取加工得到其提取物，總提取物再和藥用輔料混合加工制成制劑，所得總提取物的主要有效成分為黃酮類化合物。5、根據(jù)權(quán)利要求1所述的藥物組合物，其特征在于，按照重量組份計(jì)算，制成該藥物組合物所含藥效組分的原料藥的組成還可以為蒲黃提取物20400份、山楂葉提取物10300份。6、根據(jù)權(quán)利要求5所述的藥物組合物，其特征在于，按照重量組份計(jì)算，制成該藥物組合物所含藥效組分的原料藥的組成為蒲黃提取物40200份、山楂葉提取物20120份。7、根據(jù)權(quán)利要求6所述的藥物組合物，其特征在于，按照重量組份計(jì)算，制成該藥物組合物所含藥效組分的原料藥的組成為蒲黃提取物60120份、山楂葉提取物4060份。8、根據(jù)權(quán)利要求57所述的任一藥物組合物，其特征在于，所述的蒲黃提取物中黃酮類化合物含量不低于30%;山楂葉提取物中總黃酮的含量不低于50%，其中金絲桃苷的含量不低于0.2%。9、根據(jù)權(quán)利要求13、57所述的任一藥物組合物，其特征在于，該藥物組合物可以與任一藥學(xué)上可接受的輔料混合制成任何一種臨床上或藥學(xué)上可接受的劑型。10、根據(jù)權(quán)利要求9所述的藥物組合物，其特征在于，所述的劑型為口服制劑或注射劑。全文摘要本發(fā)明屬于醫(yī)藥
技術(shù)領(lǐng)域：
，公開(kāi)了蒲黃或其提取物與山楂葉或其提取物的藥物組合物及其制備方法、在制備治療心腦血管疾病的藥物中的應(yīng)用和含有該藥物組合物的制劑。按照重量組份計(jì)算，制成它所含藥效成分的原料藥的組成為蒲黃1000～10000份、山楂葉500～10000份，或者為蒲黃提取物20～400份、山楂葉提取物10～250份?？芍瞥扇我慌R床上或藥學(xué)上可接受的劑型，優(yōu)選口服制劑或注射劑。該發(fā)明藥物組合物中兩藥具有協(xié)同增效的作用，比單用蒲黃或其提取物與山楂葉或其提取物的治療效果大大提高。共同發(fā)揮抗心肌缺血、增加冠脈血流量，抗血小板聚集，降低血壓，改善血液流動(dòng)力學(xué)，改善腦血管循環(huán)，抗缺氧等作用。文檔編號(hào)A61K36/88GK101161269SQ200610069279公開(kāi)日2008年4月16日申請(qǐng)日期2006年10月12日優(yōu)先權(quán)日2006年10月12日發(fā)明者黃振華申請(qǐng)人:黃振華