專利名稱：殼聚糖基自組裝納米微囊的制備方法及其藥物釋放調(diào)控方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及醫(yī)藥工業(yè)領(lǐng)域中的藥物新劑型技術(shù)，具體內(nèi)容是N，N-雙烷基化殼聚糖自組裝納米藥用微囊的制備方法及其藥物釋放調(diào)控方法。
背景技術(shù)：
殼聚糖是一種天然多糖，無(wú)毒、無(wú)刺激性、無(wú)致敏性、無(wú)突變作用，具有良好的生物相容性和生物降解性，最近又發(fā)現(xiàn)殼聚糖有促進(jìn)藥物吸收的特性。殼聚糖及其衍生物是一種很有應(yīng)用前途的藥物控制釋放載體。用殼聚糖基材料作為藥物控釋載體如pH響應(yīng)水凝膠、聚電解質(zhì)絡(luò)合物微囊等已有報(bào)道，這些技術(shù)所制備的微囊不能達(dá)到納米尺寸。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種所制備的微囊達(dá)到納米尺寸的殼聚糖基自組裝納米微囊的制備方法。
本發(fā)明的另一目的是提供一種殼聚糖基自組裝納米微囊的藥物釋放調(diào)控方法。
本發(fā)明的技術(shù)方案是這樣的殼聚糖基自組裝納米微囊的制備方法，通過(guò)以下步驟實(shí)現(xiàn)
一、配制混合液體將0.1g的殼聚糖主鏈分子量為3000的N，N-雙烷基化殼聚糖溶于20-26mL氯仿中，再加入6-10mL濃度為3.0-5.0mg/mL的維生素B12(VB12)水溶液；二、浴式超聲將步驟一所得的混合液體浴式超聲15-30分鐘形成W/O乳液；三、減壓蒸發(fā)溶劑將步驟二所得的W/O乳液減壓蒸發(fā)除去氯仿至半固體膠狀，在真空干燥器室溫放置12-24小時(shí)，進(jìn)一步除去剩余的氯仿。
四、二次強(qiáng)力超聲然后在強(qiáng)力超聲波儀中超聲3-12分鐘，即得包埋藥物的N，N-雙烷基化殼聚糖自組裝納米藥用微囊。
五、離心分離將步驟四所得的包埋藥物的N，N-雙烷基化殼聚糖自組裝納米藥用微囊在超速冷凍離心機(jī)上進(jìn)行分離，除去未包封的藥物；分離條件離心溫度為10-15℃，相對(duì)離心力為2.0-2.2×104g，離心時(shí)間為60-90分鐘，即得到含有藥物(VB12)的N，N-雙烷基化殼聚糖自組裝納米藥用微囊。
上述N，N-雙烷基化殼聚糖由如下方案制備而成將殼聚糖溶于百分比濃度為3％～10％的醋酸水溶液中，攪拌均勻，使殼聚糖在醋酸水溶液中的質(zhì)量百分比濃度為2％～5％；在實(shí)驗(yàn)控制的溫度90℃～100℃下，加入醛和相轉(zhuǎn)移催化劑，其中，醛的用量為理論量的3-5倍，相轉(zhuǎn)移催化劑與殼聚糖的重量比為1∶3～1∶1；攪拌反應(yīng)6～10小時(shí)后，用NaOH溶液調(diào)節(jié)pH至6～8，緩慢加入過(guò)量的5％～15％NaBH4或NaCNBH3水溶液，繼續(xù)加熱攪拌2～3小時(shí)；然后用冰醋酸調(diào)節(jié)pH至弱酸性，再加入理論量的2-3倍量的醛，攪拌反應(yīng)6～10小時(shí)后，用NaOH溶液調(diào)節(jié)pH至6～8，緩慢加入過(guò)量的5％～15％NaBH4或NaCNBH3水溶液，繼續(xù)加熱攪拌2～3小時(shí)；當(dāng)二次還原完畢后，用熱丙酮和熱水依次洗滌產(chǎn)物，再用索氏提取器純化24～48小時(shí)；產(chǎn)物于真空干燥箱中烘至恒重后，加入氯仿溶解，過(guò)濾除去不溶物，蒸干濾液中的溶劑，即得可溶于有機(jī)溶劑的N，N-雙烷基化殼聚糖。
上述相轉(zhuǎn)移催化劑為十二烷基磺酸鈉。
上述用冰醋酸調(diào)節(jié)pH至弱酸具體為pH＝4～6。
上述NaBH4或NaCNBH3的用量為理論量的3～5倍。
殼聚糖基自組裝納米微囊的藥物釋放調(diào)控方法，通過(guò)以下方案實(shí)現(xiàn)在上述殼聚糖基自組裝納米微囊的制備方法中，僅在其步驟一中加入0.04-0.06g的添加劑，其它制備條件不變。
上述添加劑為膽固醇。
本發(fā)明是以N，N-雙烷基化殼聚糖為囊材，根據(jù)自組裝技術(shù)的原理，采用改進(jìn)的逆相蒸發(fā)法，即在離心分離前，增加二次強(qiáng)力超聲這步操作，制備殼聚糖基納米藥用微囊。本發(fā)明的殼聚糖基自組裝藥用微囊的粒徑在納米水平，能穿過(guò)組織間隙并被細(xì)胞吸收，可通過(guò)人體最小的毛細(xì)血管，還可通過(guò)血腦屏障。在此基礎(chǔ)上，加入添加劑(膽固醇等)可提高微囊的藥物釋放速率。該技術(shù)可應(yīng)用于醫(yī)藥、農(nóng)藥、香料和日用化工等領(lǐng)域。
本發(fā)明的雙親性囊材、微囊的制備方法和藥物釋放調(diào)控方法有如下特點(diǎn)和優(yōu)勢(shì)1、使用的囊材為油溶性的雙親性殼聚糖基材料，具有易形成自組裝微囊的天然優(yōu)勢(shì)。同時(shí)，此類殼聚糖基材料還具有無(wú)毒、生物相容性和生物可降解性，因此保證了其生產(chǎn)和使用的安全性，符合新一代藥劑要求。殼聚糖本身具有生物學(xué)活性，作為藥物輔料和藥物結(jié)合在一起將具有雙重的治療效果。
2、微囊的制備方法，操作簡(jiǎn)單，過(guò)程易于控制。制得的微囊尺寸在100-250nm之間，可滿足靜脈注射、經(jīng)鼻給藥等劑型的要求。
3、制得的微囊具有良好的緩釋能力。體外藥物釋放實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明維生素B12可持續(xù)釋放30小時(shí)以上，胰島素可持續(xù)釋放藥物72小時(shí)以上。
4、在殼聚糖基自組裝微囊的制備過(guò)程中，加入添加劑劑可提高微囊的藥物釋放速率及達(dá)到平衡的釋放百分率。這種“添加劑效應(yīng)”對(duì)殼聚糖分子量較大、烷基側(cè)鏈較長(zhǎng)的微囊的影響更為明顯。


圖1為本發(fā)明N，N-雙辛烷基化殼聚糖自組裝納米微囊的透射電鏡圖。
圖2為本發(fā)明N，N-雙辛烷基化殼聚糖自組裝納米微囊的掃描電鏡圖。
圖3為本發(fā)明N，N-雙辛烷基化殼聚糖自組裝納米微囊的藥物(VB12)釋放曲線。
圖4為本發(fā)明N，N-雙辛烷基化殼聚糖自組裝納米藥用微囊加添加劑的藥物(VB12)釋放曲線。
具體實(shí)施例方式
為了更好地理解與實(shí)施，下面結(jié)合圖1、圖2、圖3、圖4和實(shí)施例詳細(xì)說(shuō)明本發(fā)明殼聚糖基自組裝納米微囊的制備方法及其藥物釋放調(diào)控方法。
N，N-雙辛烷基化殼聚糖自組裝納米藥用微囊的制備方法，通過(guò)如下方案實(shí)現(xiàn)將0.1G的N，N-雙辛烷基化殼聚糖溶于24mL氯仿中，再加入8mL濃度為4.0mg/mL的VB12水溶液。浴式超聲15-30分鐘形成W/O乳液。所得乳液減壓蒸發(fā)除去氯仿至半固體膠狀。在真空干燥器室溫放置12小時(shí)，進(jìn)一步除去剩余的氯仿。然后在強(qiáng)力超聲波儀中超聲3-12分鐘，即得包埋藥物的N，N-雙辛烷基化殼聚糖基自組裝納米藥用微囊。將載藥N，N-雙辛烷基化殼聚糖基自組裝納米藥用微囊在超速冷凍離心機(jī)上進(jìn)行分離，除去未包封的藥物；分離條件離心溫度為10℃，相對(duì)離心力為21475g，離心時(shí)間為60分鐘。即得到含有藥物(VB12)的N，/N-雙辛烷基化殼聚糖自組裝納米藥用微囊。
在上述N，N-雙辛烷基化殼聚糖自組裝納米藥用微囊的制備方法中所用到的N，N-雙辛烷基化殼聚糖通過(guò)如下步驟實(shí)現(xiàn)1、稱取6.0g殼聚糖于180mL 5％的醋酸溶液中，攪拌溶解。
2、在50℃下，加入理論量的4倍的辛醛和5g相轉(zhuǎn)移催化劑十二烷基磺酸鈉。100℃攪拌反應(yīng)8小時(shí)后，用NaOH溶液調(diào)節(jié)pH至7左右，緩慢加入理論量的3倍的10％NaBH4水溶液，繼續(xù)加熱攪拌2～3小時(shí)。
3、用冰醋酸調(diào)節(jié)pH至弱酸性，第二次加入辛醛，此次辛醛的用量為理論量的2倍。100℃攪拌反應(yīng)8小時(shí)后，用NaOH溶液調(diào)節(jié)pH至7左右，緩慢加入理論量的3倍的10％NaBH4水溶液，繼續(xù)加熱攪拌2～3小時(shí)。當(dāng)二次還原完畢后，用NaOH溶液調(diào)節(jié)pH至9～10，沉淀出來(lái)的產(chǎn)物用蒸餾水洗至中性，用丙酮除去過(guò)量的醛和還原產(chǎn)物醇，再用索氏提取器純化48小時(shí)。
4、產(chǎn)物于真空干燥箱中烘至恒重后，加入氯仿溶解，過(guò)濾除去不溶物，蒸干濾液中的溶劑，便得到可溶于有機(jī)溶劑的雙親性N，N-雙辛烷基化殼聚糖。
N，N-雙烷基化殼聚糖自組裝納米藥用微囊的藥物釋放調(diào)控方法，通過(guò)如下方案實(shí)現(xiàn)將0.1g的N，N-雙辛基化殼聚糖和0.05g的膽固醇溶于24mL氯仿中，再加入8mL濃度為4.0mg/mL的VB12水溶液。浴式超聲15-30分鐘形成W/O乳液。所得乳液減壓蒸發(fā)除去氯仿至半固體膠狀。在真空干燥器室溫放置12小時(shí)，進(jìn)一步除去剩余的氯仿。然后在強(qiáng)力超聲波儀中超聲3-12分鐘，即得包埋藥物的微囊。將載藥微囊在超速冷凍離心機(jī)上進(jìn)行分離，除去未包封的藥物；分離條件離心溫度為10℃，相對(duì)離心力為21475g，離心時(shí)間為60分鐘。即得到含有藥物(VB12)的N，N-雙辛烷基化殼聚糖自組裝納米藥用微囊。
權(quán)利要求
1.殼聚糖基自組裝納米微囊的制備方法，其特征在于通過(guò)以下步驟實(shí)現(xiàn)一、配制混合液體將0.1g的殼聚糖主鏈分子量為3000的N，N-雙烷基化殼聚糖溶于20-26mL氯仿中，再加入6-10mL濃度為3.0-5.0mg/mL的維生素B12(VB12)水溶液；二、浴式超聲將步驟一所得的混合液體浴式超聲15-30分鐘形成W/O乳液；三、減壓蒸發(fā)溶劑將步驟二所得的W/O乳液減壓蒸發(fā)除去氯仿至半固體膠狀，在真空干燥器室溫放置12-24小時(shí)，進(jìn)一步除去剩余的氯仿。四、二次強(qiáng)力超聲然后在強(qiáng)力超聲波儀中超聲3-12分鐘，即得包埋藥物的N，N-雙烷基化殼聚糖自組裝納米藥用微囊。五、離心分離將步驟四所得的包埋藥物的N，N-雙烷基化殼聚糖自組裝納米藥用微囊在超速冷凍離心機(jī)上進(jìn)行分離，除去未包封的藥物；分離條件離心溫度為10-15℃，相對(duì)離心力為2.0-2.2×104g，離心時(shí)間為60-90分鐘，即得到含有藥物(VB12)的N，N-雙烷基化殼聚糖自組裝納米藥用微囊。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的殼聚糖基自組裝納米微囊的制備方法，其特征在于上述N，N-雙烷基化殼聚糖由如下方案制備而成將殼聚糖溶于百分比濃度為3％～10％的醋酸水溶液中，攪拌均勻，使殼聚糖在醋酸水溶液中的質(zhì)量百分比濃度為2％～5％；在實(shí)驗(yàn)控制的溫度90℃～100℃下，加入醛和相轉(zhuǎn)移催化劑，其中，醛的用量為理論量的3-5倍，相轉(zhuǎn)移催化劑與殼聚糖的重量比為1∶3～1∶1；攪拌反應(yīng)6～10小時(shí)后，用NaOH溶液調(diào)節(jié)pH至6～8，緩慢加入過(guò)量的5％～15％ NaBH4或NaCNBH3水溶液，繼續(xù)加熱攪拌2～3小時(shí)；然后用冰醋酸調(diào)節(jié)pH至弱酸性，再加入理論量的2-3倍量的醛，攪拌反應(yīng)6～10小時(shí)后，用NaOH溶液調(diào)節(jié)pH至6～8，緩慢加入過(guò)量的5％～15％ NaBH4或NaCNBH3水溶液，繼續(xù)加熱攪拌2～3小時(shí)；當(dāng)二次還原完畢后，用熱丙酮和熱水依次洗滌產(chǎn)物，再用索氏提取器純化24～48小時(shí)；產(chǎn)物于真空干燥箱中烘至恒重后，加入氯仿溶解，過(guò)濾除去不溶物，蒸干濾液中的溶劑，即得可溶于有機(jī)溶劑的N，N-雙烷基化殼聚糖。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的殼聚糖基自組裝納米微囊的制備方法，其特征在于上述相轉(zhuǎn)移催化劑為十二烷基磺酸鈉。
4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的殼聚糖基自組裝納米微囊的制備方法，其特征在于上述用冰醋酸調(diào)節(jié)pH至弱酸具體為pH＝4～6。
5.根據(jù)權(quán)利要求2所述的殼聚糖基自組裝納米微囊的制備方法，其特征在于上述NaBH4或NaCNBH3的用量為理論量的3～5倍。
6.殼聚糖基自組裝納米微囊的藥物釋放調(diào)控方法，其特征在于通過(guò)以下方案實(shí)現(xiàn)在權(quán)利要求1所述的殼聚糖基自組裝納米微囊的制備方法中，僅在其步驟一中加入0.04-0.06g的添加劑，其它制備條件不變。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的殼聚糖基自組裝納米微囊的藥物釋放調(diào)控方法，其特征在于上述添加劑為膽固醇。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了殼聚糖基自組裝納米微囊的制備方法及其藥物釋放調(diào)控方法。屬于藥物新劑型的制備技術(shù)。本發(fā)明的納米藥用微囊以N，N－雙烷基化殼聚糖為囊材，根據(jù)自組裝技術(shù)的原理，采用改進(jìn)的逆相蒸發(fā)法，即在離心分離前，增加二次強(qiáng)力超聲這步操作獲得。本方法所制得的微囊尺寸主要分布在100－250nm。可滿足靜脈注射、經(jīng)鼻給藥等劑型的要求。本發(fā)明在殼聚糖基自組裝納米藥用微囊的制備過(guò)程中加入添加劑，可使殼聚糖基自組裝納米藥用微囊藥物釋放速率較快。本發(fā)明可應(yīng)用于醫(yī)藥、農(nóng)藥、香料和日用化工等領(lǐng)域。
文檔編號(hào)A61K47/36GK1839805SQ200610037720
公開(kāi)日2006年10月4日 申請(qǐng)日期2006年1月6日 優(yōu)先權(quán)日2006年1月6日
發(fā)明者李明春, 辛梅華 申請(qǐng)人:華僑大學(xué)