專利名稱：從綠茶茶葉分離兒茶素的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及從綠茶茶葉分離兒茶素的方法。
背景技術(shù)：
綠茶含有許多成分，包括通常已知為兒茶素的多酚。認(rèn)為兒茶素 是茶葉的許多生物學(xué)作用的原因。綠茶多酚的一些主要成分是(-)-表掊
兒茶素-3-掊酸酯(EGCG)、(-)-表掊兒茶素(EGC)、表兒茶素-3-掊酸酯 (ECG)和(-)-表兒茶素(EC)。特別是，(-)-EGCG,作為最豐富的兒茶素， 己經(jīng)發(fā)現(xiàn)其具有抗癌、抗菌、抗病毒作用，并且對血液中的膽固醇水 平具有有益的作用。盡管發(fā)現(xiàn)綠茶中的其它兒茶素在上述應(yīng)用中的有 效性低于EGCG，但是它們也可具有其它生物活性，并且提高它們的可 用性可幫助發(fā)現(xiàn)這些活性。綠茶還含有其它組分如咖啡因、原花色素、 碳水化物、氨基酸、和可溶性礦物質(zhì)，它們在綠茶輸液中與兒茶素一 起可溶于水中。
已有許多關(guān)于從綠茶分離(-)-EGCG的報道。然而，許多水溶性與 兒茶素相似并且結(jié)構(gòu)與兒茶素類似的組分的存在使得分離純(-)-EGCG 變得困難。美國專利6，210，679描述了四步驟過程，包括三個柱色譜分 離過程從而最終得到95-98。/。純的(-)-EGCG。因為需要使用昂貴的反相 柱添充，該方法耗時且不經(jīng)濟。美國專利公開20030083270描述了通 過在大孔極性樹脂上在加壓下使用極性洗脫溶劑對綠茶提取物進行色 譜分離提供(-)-EGCG的方法。該方法提供了 75。/。-97。/。純的(-)-EGCG。 然而，從綠茶提取物獲得(-)-EGCG的收率僅為約73%，因此認(rèn)為該方 法不是有效方法。缺少簡單、有效和廉價的獲得純T(-)-EGCG的方法 妨礙了在動物和人的臨床研究中對(-)-EGCG進行評估。本發(fā)明目的
因此，本發(fā)明的目的是提供從綠茶提取物分離兒茶素的方法，該 方法包括相對簡單的步驟，并且優(yōu)選更有效。本發(fā)明的另一目的是解 決了現(xiàn)有技術(shù)中所述的至少一個或多個問題。至少，本發(fā)明的目的是 為公眾提供了一種有用的選擇方案。
發(fā)明概述
因此，本發(fā)明提供從綠茶茶葉分離兒茶素的方法。首先將兒茶素 轉(zhuǎn)化成相應(yīng)的酯形式，形成酯混合物，然后通過適當(dāng)?shù)姆椒ㄟM行分離。
優(yōu)選地，將兒茶素轉(zhuǎn)化成它們各自的全乙酸酯形式。更優(yōu)選地， 通過乙酸酐將兒茶素轉(zhuǎn)化成相應(yīng)的全乙酸酯形式。
轉(zhuǎn)化的兒茶素可通過柱色譜法進行分離，優(yōu)選通過包含己烷和乙
酸乙酯的混合物在硅膠上洗脫。更優(yōu)選地，己烷和乙酸乙酯的比為1:2 的體積比。
任選地，在分離轉(zhuǎn)化的兒茶素之前可首先過濾酯混合物得到濾液。 更優(yōu)選地，在分離轉(zhuǎn)化的兒茶素之前濾液可用水洗滌，干燥，然后濃縮。
轉(zhuǎn)化的兒茶素被分離后，可將它們變回到兒茶素，優(yōu)選通過乙酸 銨的甲醇溶液進行。
可通過本發(fā)明方法分離的兒茶素可包括(-)-表掊兒茶素-3-掊酸 酯、(-)-表掊兒茶素、表兒茶素-3-掊酸酯和(-)-表兒茶素。


本發(fā)明的優(yōu)選方案將以附圖作為例子并參考附圖進行說明，其中 圖1表示本發(fā)明的分離方法的優(yōu)選方案的反應(yīng)路線圖；和圖2表示(-)-EGC六乙酸酯(2)的X射線衍射晶體結(jié)構(gòu)。
優(yōu)選實施方案的詳述
現(xiàn)在參考附圖在下文中描述本發(fā)明。
本發(fā)明的目的、特征和各方面在以下描述中被公開或者是顯而易 見的。本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員可以理解的是，本發(fā)明的討論僅用于描 述示例性實施方案，其并非意在對本發(fā)明的廣泛方面進行限制，本發(fā) 明的廣泛方面以示例性構(gòu)造被概括。
根據(jù)本發(fā)明，令人驚訝地發(fā)現(xiàn)，綠茶粗提取物中的兒茶素可在兒 茶素被轉(zhuǎn)化成它們各自的酯形式之后相對容易地分離。然后分離轉(zhuǎn)化 的兒茶素。柱色譜法是廣泛使用的分離方法之一。雖然在目前沒有任 何證據(jù)，但是據(jù)信將兒茶素轉(zhuǎn)化成它們各自的酯形式可增強兒茶素對 例如色譜分離期間所用的固定載體的物理性質(zhì)的區(qū)別。
兒茶素可被轉(zhuǎn)化成多種不同的酯形式。雖然有可能僅僅將兒茶素 上的一部分羥基轉(zhuǎn)化為酯形式，但是優(yōu)選將所有的羥基轉(zhuǎn)化成單一類 型的酯基。首先，這減少了后續(xù)分離的復(fù)雜性。另外，其更加經(jīng)濟。 在以下的實施例中，通過過量的乙酸酐將兒茶素轉(zhuǎn)化成它們各自的全 乙酸酯形式。應(yīng)當(dāng)注意到，可使用其它的酯形式如過苯甲酸酯形式。 當(dāng)然可使用任何適當(dāng)?shù)姆椒▽翰杷剞D(zhuǎn)化成它們各自的全乙酸酯形 式，例如使用乙酰氯代替乙酸酐。
雖然還可將兒茶素轉(zhuǎn)化成醚形式，但不希望如此，因為將兒茶素 轉(zhuǎn)化成酯形式或?qū)Ⅴピ僮兓氐絻翰杷貢r所涉及的劇烈的反應(yīng)條件可能 破壞兒茶素本身。
圖1表示本發(fā)明的分離方法的優(yōu)選方案的反應(yīng)路線圖。如圖1所 示，綠茶茶葉中的兒茶素首先被轉(zhuǎn)化成它們的全乙酸酯形式。直接對綠茶茶葉施用酯化劑如乙酸酐可實現(xiàn)這一目的?；蛘?，通過將綠茶茶 葉置于熱水中首先獲得綠茶粗提取物，可將熱水提取物干燥然后與酯 化劑反應(yīng)。然而，這可能是較不希望的，因為這一額外提取步驟可降 低總提取效率。然后通過常規(guī)的柱色譜法分離轉(zhuǎn)化的兒茶素。洗脫液
可以是包含己烷和乙酸乙酯的混合物，己烷和乙酸乙酯的優(yōu)選比為1:2
的體積比。
為了進一步增強本發(fā)明的分離方法的效率，在通過色譜法分離轉(zhuǎn) 化的兒茶素之前可首先過濾全乙酸酯混合物。然后濾液可用水洗滌， 干燥，然后通過蒸發(fā)進行濃縮。
將兒茶素分離成它們各自的酯形式后，可通過例如使用乙酸銨的 甲醇溶液將它們轉(zhuǎn)化成兒茶素。
根據(jù)本發(fā)明的方法，可從綠茶提取物分離包括以下的兒茶素類
(-)-表掊兒茶素-3-掊酸酯、(-)-表掊兒茶素、表兒茶素-3-掊酸酯和(-)-表
兒茶素。
實施例 一般概括
綠茶包裝購自SEIYU,商標(biāo)為OSK，或者，ShouMee綠茶茶葉購 自Hong Kong的Ying Kee Tea House。除非另作說明，所有試劑和溶劑 購自商業(yè)供應(yīng)商并且無需另外純化即可使用。在使用前將乙酸銨進行 減壓干燥。HPLC中使用的水是雙重去離子水。使用Varian-500核磁共 振波譜儀測定&和nC光譜。在Finnigan型Mat 95 ST質(zhì)譜儀上，使 用陽離子電噴射離子化技術(shù)記錄低分辨率質(zhì)譜和高分辨率質(zhì)譜。在 Biichi熔點B-545儀上記錄熔點測定并且該測定值未經(jīng)校正。在Merck 預(yù)涂覆硅膠60 F254板上進行薄層色譜法，并且在254 nm燈下進行觀 察。硅膠(Merck， 230-400目)用于柱色譜法。在裝備有C-18反相柱 (CAPCELLPAKC18UG 120， 4.6 mm i.d. x 250 mm)的HP 1100液相色譜儀上進行HPLC。
從得自SEIYU的綠茶茶葉分離單獨的兒茶素
將吡啶(12 mL)和乙酸酐(8 mL)添加到在圓底燒瓶中的綠茶茶葉 (4.55 g，購自SEIYU)中，混合物在室溫下攪拌過夜，然后將其真空干 燥，反應(yīng)混合物用乙酸乙酯(20mLx4)洗滌并過濾，濾液用水(20mLx 4)洗滌。濾液用硫酸鈉干燥并蒸發(fā)，粗產(chǎn)物通過硅膠柱色譜法使用正己 垸:乙酸乙酯(體積比為l:2)作為洗脫液進行純化，得到粗的(-)-EGCG全 乙酸酯l(Rf值為0.3，綠色)，將粗產(chǎn)物1溶于乙酸乙酯中并通過活性 炭層(l cm寬x 3 cm長)過濾，蒸發(fā)后得到純的(-)-EGCG全乙酸酯(l)， 為白色固體(0.19g，4.3。/o收率)。除1之外，還從柱色譜法(己烷:乙酸乙 酯為1:2， Rf值為0.6)并通過活性炭層過濾分離了(-)-EGC六乙酸酯(2)。 粗化合物2從二氯甲垸:乙醚:己烷(1:2:0.5)重結(jié)晶，得到純的EGC六乙 酸酯2，為白色固體(0.07g， 1.5%收率)。
(-)-EGCG全乙酸酯(l): Mp 112.4-113.8。C(與從市售的(-)-EGCG合 成的全乙酸酯115。C相比較)；[a]D-67.7(c 1.0, CHC13); NMR(CDC13, 500MHz):S7.62(s, 2H)， 7.23(s， 2H)， 6.73(d， J=2.5 Hz， 1H)， 6.61(d, J=2.5 Hz, 1H)， 5.63(br s， 1H)， 5.18(s， 1H)， 3.02(m, 2H)， 2.28(s, 3H), 2.27(s, 9H)， 2.26(s, 3H), 2.24(s， 3H)， 2.22(s， 6H); 13C NMR(125 MHz, CDC13):5 168.89， 168.40, 167.59， 167.43, 166.72， 166.20, 163.51， 154.71， 149.72， 149.64， 143.38, 143.29， 138.93， 135.06， 134.34， 127.41 , 122.34, 118.79， 109.42， 109.00， 108.06, 76.46， 67.98， 25.85, 21.06， 20.75， 20.54, 20.11; LRMS m/z(ESI)817 [M+Na]+; HRMS:C38H34019Na的計算值817.1592; 實測值817.1586。
(-)-EGC六乙酸酯(2): Mp 189.5-191.2°C; [a]D-14.6(c=1.0, CHC13); 'H NMR(CDC13, 500MHz):57.22(s， 2H)， 6.67(d， J=2.0 Hz, 1H), 6.57(d， J=2.0 Hz, IH)， 5.38(br s, 1H), 5.08(s， 1H), 2.93(m， 2H)， 2.29(s， 6H)， 2.28(s, 6H), 2.28(s， 3H), 1.94(s， 3H); 13C NMR(CDC13, 120MHz):S 170.58169.06， 168.50， 167.72, 166.90, 154.80， 149.73， 149.69， 143.26, 135.48, 134.28, 119.01, 109.56, 108.86, 108.08， 76.49, 66.44, 25.95, 21.10， 20.80， 20.77, 20.69， 20.19:LRMS m/z(ESI):581 [M+Na]+; HRMS:C27H26013Na的 計算值581.1271 ;實測值581.1252。
從得自SEIYU的綠茶茶葉大規(guī)模分離兒茶素乙酸酯。 將綠茶茶葉(83.2g，購自SElYU)添加到吡啶(160mL)和乙酸酐(80 mL)的混合物中，得到的混合物在室溫下攪拌過夜，減壓除去溶劑，然 后將混合物通過燒結(jié)玻璃漏斗過濾并用乙酸乙酯(IOO mL x 5)洗滌，濾 液用水(IOO mL x 5)和鹽水溶液(20 mL)洗滌，有機相用MgS04干燥， 過濾并通過旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀蒸發(fā)，粗產(chǎn)物通過硅膠柱色譜法使用正己烷/乙 酸乙酯(體積比為l:2)作為洗脫液進行純化，使用三個柱(分別是25 x 6 cm i. d.， 25 x 6 cm i.d.禾口 24 x 3.5 cm i.d.，在第三個柱的頂端裝載3 cm 的活性炭)，粗產(chǎn)物通過這三個柱進行色譜分離，使用TLC分析，用正 己垸/乙酸乙酯(體積比為l:2)作為洗脫液收集級份。Rf值為0.32的含有 化合物的級份經(jīng)合并和蒸發(fā)得到(-)-EGCG全乙酸酯(l)，為白色固體 (2.83 g， 3.4%收率)。Rf值為0.46的含有化合物的級份經(jīng)合并和蒸發(fā)得 到(-)-ECG七乙酸酯(4)。然后是Rf值為0.58的含化合物的級份，將其 蒸發(fā)得到(-)-EGC六乙酸酯(2)(0.92 g， 1.1%收率)。最后，還將Rf值為 0.68的含化合物的級份合并和蒸發(fā)得到(-)-EC五乙酸酯(3)?；衔? 和4的收率低于0.01%。
EC五乙酸酯(3):'H NMR(CDC13， 500MHz):57.22(m， 3H), 6.67(s， 1H), 6.57(s, 1H), 5.38(br s. 1H), 5.08(s， 1H), 2.94(m, 2H), 2.29(m, 15H); HRMS(ESI):C2sH240uNa(M+Na)+計算值523,1216，實測值523.1198。
ECG七乙酸酯(4):111 NMR(CDC13， 500MHz):S7.62(s， 2H), 7.25(m, 3H), 6.73(s， 1H)， 6.60(s， 1H), 5.63(br s， 1H)， 5.20(s， 1H)， 3.06(m, 2H)， 2.27(m， 21H); HRMS(ESI):C36H320"Na(M+Na)+的計算值759.1537，實 測值759.1515。從Shou Mee綠茶茶葉分離單獨的兒茶素。
將綠茶茶葉(26.9g)(Shou Mee)研磨成粉末，將粉末添加到在冰-水 浴中的乙酸酐(30mL)和吡啶(40mL)中，得到的混合物在室溫下攪拌12 小時。然后減壓(20mmHg)除去過量的吡啶和乙酸酐，混合物用硅膠層 過濾，濾餅用乙酸乙酯(5x 100mL)洗滌，濾液用0.1MHC1(5 x 100mL)、 飽和碳酸氫鈉溶液(3 x 100mL)和鹽水溶液(200 mL)洗滌。有機相用 MgS04干燥并過濾，濾液( 40mL)通過旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀蒸發(fā)。粗產(chǎn)物為暗 綠色的泡沫狀物質(zhì)，粗產(chǎn)物通過柱色譜法(硅膠，10 g)，使用正己烷/ 乙酸乙酯(1:2的體積比)作為洗脫液進行純化。
收集含有(-)-EGCG全乙酸酯(l)的級份并蒸發(fā)溶劑得到(-)-EGCG 全乙酸酯(1.25g，4.6X)，其物理性質(zhì)和光譜性質(zhì)與真實樣品相同。
收集含(-)-ECG七乙酸酯(4)的級份并蒸發(fā)溶劑得到(-)-ECG七乙酸 酯(0.24g， 0.88%): Mp 104-110°C ; [a]D20-57.6(c = 0.60， CHC13); 'H NMR(CDC13, 400MHz)S 7.62(s, 2H), 7.29-7.33(m, 2H), 7.2l(s， 1H), 6.73(d， J= 2.2Hz, 1H), 6.60(d, J= 2,1Hz， IH)， 5.63(s， 1H), 5.20(s, 1H), 3.08(dd， J = 17.9, 4.6Hz, 1H), 2.98(dd, J = 17.9, 2.0Hz， 1H), 2.14-2.29(m, 21H); 13C NMR(CDC13， lOOMHz)S 168.9, 168.4, 168.0, 167.9， 167.4, 166,2， 163.5， 154.9， 149.7, 143.3, 142.1 ， 142.0, 138.9, 135.4， 127.4, 124.4 123.5， 122.3， 121.8， 118.7, 109.5， 108.9， 108.0， 76.7， 68.1, 25.9， 21.1， 20.7 20.5， 20.1; LRMS(ESI)m/z 759([M+Na]+， 66), 737([M+H〗+, 42); HRMS C36H320 Na的計算值759.1537，實測值759.1508。
收集含(-)-EGC六乙酸酯(2)的級份并蒸發(fā)溶劑得到(-)-EGC六乙酸 酯，其物理性質(zhì)與真實樣品相同。
收集含(-)-EC五乙酸酯(3)的級份并蒸發(fā)溶劑得到(-)-EC五乙酸酯， 其物理性質(zhì)與真實樣品相同。2和3的合并收率低于0.5 %。從(-)-EGCG全乙酸酯(l)合成(-)-EGCG的過程
在室溫下，將 NH4OAc(4.3 g， 56 mmol)添力B至lj在 MeOH:H2O(4:l)(20 mL)中的(-)-EGCG全乙酸酯1(350 mg， 0.42 mmol) 和維生素C(35 mg)中，得到的混合物在4(TC攪拌直到1消失并且形成 EGCG(反應(yīng)過程通過HPLC監(jiān)控C-18反相柱；流速，1 mL/min;檢 測，UV 280 mn;流動相，0-8分鐘(20%的乙腈水溶液和0.016% TFA)， 8-13分鐘(從含0.016% TFA的20%的乙腈水溶液到含0.008% TFA的 60%的乙腈水溶液變化)。反應(yīng)混合物經(jīng)真空干燥，添加水，混合物用 乙酸乙酯(8mLx3)提取，然后濾液用硫酸鈉干燥并蒸發(fā)，粗產(chǎn)物通過 硅膠柱色譜法(乙酸乙酯，Rf值為0.5)進行純化，得到EGCG(180 mg， 90% 收率)，為淺白色固體。其與(-)-EGCG真實樣品的一致性通過NMR共 振光譜數(shù)據(jù)和其它物理數(shù)據(jù)得以證實。
晶體結(jié)構(gòu)的測定
在Bmker CCD區(qū)域檢測器衍射儀上，使用從在50KV， 30mA條 件下操作的發(fā)生器產(chǎn)生的MoK (^輻射=0.71073 A)，通過直接法測定 化合物2的晶體結(jié)構(gòu)。使用了一部分非氫原子位置和隨后的差值傅里 葉合成對所有在最初結(jié)構(gòu)中未顯示的殘留的非氫原子進行定位。限定 了所有的非氫原子的各向異性?；诓钪蹈道锶~合成并結(jié)合幾何分析 對氫原子進行定位。所有的實驗和計算在使用Bruker Smart程序和 Bruker Shelxtl包的個人電腦上進行。化合物2的晶體結(jié)構(gòu)如圖2所示。
結(jié)果和討論
綠茶茶葉用乙酸酐和吡啶直接在室溫下進行處理。假定所有的兒 茶素，包括(-)-EGCG，被轉(zhuǎn)化成相應(yīng)的乙酸酯(圖1)，因為使用過量的 乙酸酐。然后將反應(yīng)混合物用乙酸乙酯提取并過濾。然后通過簡單的 硅膠柱色譜法，使用己烷:乙酸乙酯(1:2的體積比)將兒茶素乙酸酯彼此 分開，得到純的結(jié)晶EGCG全乙酸酯(1)作為主要產(chǎn)物，其占綠茶茶葉 干重的3.4-4.6%。還得到了 EGC六乙酸酯(2)，其作為結(jié)晶形式，為1.1-1.5干重％。由此分離的化合物1在各個方面與先前合成的樣品一
致。除了與光譜數(shù)據(jù)一致之外，通過x射線衍射進行結(jié)晶測定證實了 化合物2的結(jié)構(gòu)(圖2)。除了分離1和2之外，還分離了少量的(-)-EC 五乙酸酯(3)和(-)-ECG七乙酸酯(4)。在使用正相硅膠色譜法分離不同的 兒茶素乙酸酯1-4的容易性與分離具有游離酚基的兒茶素的困難性之 間形成鮮明對比。
準(zhǔn)備好可被使用的化合物1可使用在甲醇水溶液中的乙酸銨被轉(zhuǎn) 化成前體(-)-EGCG，以90。/。收率得到(-)-EGCG，為白色晶體，其與真 實樣品具有相同的NM R光譜。
描述了(-)-EGCG全乙酸酯(l)和其它兒茶素乙酸酯作為人癌細(xì)胞 的蛋白酶體抑制和細(xì)胞程序死亡誘導(dǎo)物的前藥的用途[D. Kuhn， W. H. Lam, A. Kazi, K. G. Daniel, S. Song, L M. C. Chow, T. H. Chan, Q. P. Dou, Synthetic peracetate polyphenols as potent proteasome inhibitors and apoptosis inducers in human cancer cells, Frontiers in Bioscience, 10， 1010-1023(2005); W. H. Lam， A. Kazi, D. J. Kuhn， L. M. C. Chow, A. S. C. Chan， Q. P. Dou， T. H. Chan, A potential prodrug for a green tea polyphenol proteasome inhibitor:evaluation of the peracetate ester of(-)-epigallocatechin gallatc [(-)-EGCG], Bioorg. Med. Chem., 12， 5587-5593(2004)]。這些酯衍生物通常從純的(-)-EGCG或其它兒茶素的 酯化制得。缺少簡單、有效和廉價的獲得純的(-)-EGCG或其它兒茶素 的方法還妨礙了(-)-EGCG全乙酸酯(l)的制備和在動物和人的臨床研究中對1或其它兒茶素酯衍生物進行評估。使用本發(fā)明的方法，從綠茶 提取物中獲得兒茶素可變得容易，這促進了對該類化合物進行生物可 行性研究。
盡管已經(jīng)參考實施例詳細(xì)描述了本發(fā)明的優(yōu)選方案，但是顯然可 由本領(lǐng)域技術(shù)人員對本發(fā)明進行修改和改變。另外，本發(fā)明的實施方 案將不被解釋為僅僅由實施例或附圖進行限定。然而，可明顯地理解 的是，這些修改和修改在本發(fā)明的范圍內(nèi)，并且如權(quán)利要求所述。例 如，作為一個實施方案的一部分進行說明或描述的特征可用于另外的 實施方案，從而獲得更進一步的實施方案。因此，本發(fā)明覆蓋了在本 發(fā)明的權(quán)利要求及其等價物的范圍內(nèi)的這些修改和變體。
權(quán)利要求
1.從綠茶茶葉分離兒茶素的方法，該方法包括以下步驟將兒茶素轉(zhuǎn)化成相應(yīng)的酯形式，形成酯混合物；分離酯混合物中的轉(zhuǎn)化的兒茶素。
2. 權(quán)利要求l的方法，其中兒茶素被轉(zhuǎn)化成它們各自的全乙酸酯 形式。
3. 權(quán)利要求2的方法，其中兒茶素通過乙酸酐被轉(zhuǎn)化成相應(yīng)的全 乙酸酯形式。
4. 權(quán)利要求l的方法，其中轉(zhuǎn)化的兒茶素通過柱色譜法被分離。
5. 權(quán)利要求4的方法，其中轉(zhuǎn)化的兒茶素在硅膠上通過包含己垸 和乙酸乙酯的混合物被洗脫。
6. 權(quán)利要求5的方法，其中己垸和乙酸乙酯的比為l:2的體積比。
7. 權(quán)利要求1的方法，另外包括在分離轉(zhuǎn)化的兒茶素之前過濾酯 混合物得到濾液的步驟。
8. 權(quán)利要求7的方法，另外包括在分離轉(zhuǎn)化的兒茶素之前用水洗 滌濾液、干燥濾液、然后濃縮濾液的步驟。
9. 權(quán)利要求1的方法，另外包括在分離轉(zhuǎn)化的兒茶素之后將轉(zhuǎn)化 的兒茶素變回到兒茶素的步驟。
10. 權(quán)利要求9的方法，其中轉(zhuǎn)化的兒茶素通過乙酸銨的甲醇溶 液被變回到兒茶素。
11.權(quán)利要求l的方法，其中兒茶素選自(-)-表掊兒茶素-3-掊酸 酯、(-)-表掊兒茶素、表兒茶素-3-掊酸酯和(-)-表兒茶素。
全文摘要
已有許多關(guān)于從綠茶分離(-)-EGCG的報道。然而，許多水溶性與兒茶素相似并且結(jié)構(gòu)與兒茶素類似的組分的存在使得分離純(-)-EGCG變得困難。缺少簡單、有效和廉價的獲得純(-)-EGCG的方法妨礙了在動物和人的臨床研究中對(-)-EGCG進行評估。本發(fā)明提供了分離兒茶素(包括(-)-EGCG)的方法首先將兒茶素轉(zhuǎn)化成它們各自的酯形式，然后通過色譜法分離酯化的兒茶素，并將其變回到兒茶素。本發(fā)明的方法相對簡單，并且可獲得大量的兒茶素。
文檔編號A61K125/00GK101316830SQ200580052013
公開日2008年12月3日 申請日期2005年10月8日 優(yōu)先權(quán)日2005年10月8日
發(fā)明者林惠霞, 陳德恒 申請人:香港理工大學(xué);麥吉爾大學(xué)