專利名稱：具有協(xié)同作用的藥物組合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及藥物組合，具體地說(shuō)，是一種含有天然植物提取物或單體的藥用或功能性保健品用組合物，用于治療和/或預(yù)防心腦血管疾病、糖尿病及其并發(fā)癥、老年癡呆癥、腦細(xì)胞保護(hù)、視網(wǎng)膜中央靜脈阻塞、高脂血癥、脂肪肝的藥物中的應(yīng)用，以及用于預(yù)防心腦血管疾病復(fù)發(fā)及防止血管成形術(shù)后再狹窄的藥物中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
隨著現(xiàn)代科學(xué)的高速發(fā)展，人們?cè)絹?lái)越重視“天然”藥物。近年來(lái)，醫(yī)藥界在防治心腦血管疾病、糖尿病等疾病的藥用植物研究方面做了諸多工作，加強(qiáng)了對(duì)生物活性物質(zhì)的分析和研究，以期進(jìn)一步明確其功效。然而，取得的成效是有限的。這主要是由于心腦血管疾病、糖尿病等疾病的致病機(jī)理復(fù)雜，常伴有不同類別的一種或多種并發(fā)癥，已有的單一天然活性成分難以全方位奏效。
而且，大量不良反應(yīng)報(bào)道的出現(xiàn)使人們認(rèn)識(shí)到，天然藥物在發(fā)揮治療作用的同時(shí)也一樣具有副作用，人們由此而越來(lái)越重視這些天然植物藥物的安全性問(wèn)題。例如，有報(bào)道(參見Rosenblatt M等，N Engl J Med 1997，3361108；Gianni L M等，USPharmacist 1998，23(5)80-86；Rowin J等，Neurology 1996，46(6)1775-6)表明，銀杏葉制品可與維生素E、阿司匹林等抗血小板聚集和抗血凝藥物發(fā)生潛在的相互作用，可導(dǎo)致出血、淤血或視覺變化等，甚至引起自發(fā)性雙側(cè)硬膜下血腫。另有報(bào)道(參見Hederson GL等，Life Sci 1999，65PL209-314；Anon等，Pharm J 2001，267(7157)79；康魯平，醫(yī)藥導(dǎo)報(bào)2004，23(12)974-6，中成藥，2005，27(5)520)表明，人參皂苷與經(jīng)CYP2C9和CYP3A4酶代謝的藥物合用時(shí)，可能會(huì)由于酶誘導(dǎo)作用而影響藥物療效和不良反應(yīng)，而且人參皂也可與維生素E、阿司匹林等抗血小板聚集和抗血凝藥物發(fā)生潛在的相互作用，甚至某些品種的人參制品被禁止用于高血壓患者。
人們?cè)噲D采用多種天然藥物聯(lián)用的方式，以期通過(guò)它們之間的加合、甚至協(xié)同作用來(lái)減少用藥量，從而在確保(甚至提高)療效的同時(shí)進(jìn)一步降低不良反應(yīng)。遺憾的是，天然藥物的作用機(jī)理十分復(fù)雜，大多數(shù)天然藥物的藥物動(dòng)力學(xué)參數(shù)、藥物代謝機(jī)制、作用機(jī)理均不清楚。因此，與化學(xué)藥品之間的相互作用相比，更難以預(yù)測(cè)天然藥物間的相互作用。以心腦血管領(lǐng)域常用的銀杏、人參和芍藥為例，雖然人們對(duì)它們之間的聯(lián)合給藥進(jìn)行了廣泛研究(例如，中國(guó)專利申請(qǐng)ZL200310111065.5、ZL200310123995.2、ZL98110756.7)，但多著眼于不同組分針對(duì)不同癥狀的加和作用，即不同的藥物實(shí)際上是各自獨(dú)立地發(fā)揮著其原有的藥理活性，幾乎沒(méi)有有關(guān)協(xié)同作用和/或降低毒副反應(yīng)的報(bào)道。
本發(fā)明人注意到，在已有技術(shù)水平下，沒(méi)有關(guān)于銀杏與芍藥這兩種組分聯(lián)合應(yīng)用的報(bào)道。李文軍(ZL200310110709.9)和董莉(醫(yī)藥論壇雜志2004，25(17)63-64)披露了人參、芍藥這兩種組分的聯(lián)合應(yīng)用，但是依然沒(méi)有有關(guān)二者產(chǎn)生協(xié)同增效或減毒作用的報(bào)道。鑒于人參皂苷對(duì)某些疾病的冶療有賴于血漿有效濃度、并且有溶血等不良現(xiàn)象(孫光等，大連醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)1996，16(2)107-110)，本發(fā)明人推測(cè)以銀杏代替人參與芍藥聯(lián)用，似乎是一種不錯(cuò)的解決方案。但是，很明顯地，銀杏(主要含內(nèi)酯和黃酮)和人參(主要含皂苷)是組成和活性均不同的兩類藥物(參見ZL200310111065.5；鐘利群等，中華全科醫(yī)師雜志2003，2(4)251-252)，二者似乎是不可相互替代的。
更為不利的是，迄今為止，針對(duì)銀杏能否與芍藥聯(lián)合應(yīng)用，二者的作用機(jī)制是加和、協(xié)同還是拮抗等基礎(chǔ)問(wèn)題，已有技術(shù)沒(méi)有提供科學(xué)依據(jù)。至于二者是否能聯(lián)合用于其它疾病(例如糖尿病、老年癡呆癥)，已有技術(shù)甚至沒(méi)有類似的暗示或嘗試。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明人在這方面進(jìn)行了有益的探索，并取得了喜人的結(jié)果。
本發(fā)明的一個(gè)目的在于提供于銀杏和芍藥在治療和/或預(yù)防心腦血管疾病、糖尿病及其并發(fā)癥、老年癡呆癥、腦細(xì)胞保護(hù)、視網(wǎng)膜中央靜脈阻塞、高脂血癥、脂肪肝的藥物中的應(yīng)用。
以下對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步闡述。
糖尿病及其并發(fā)癥至于本發(fā)明藥物組合物的有益作用，首先是在研究治療糖尿病的過(guò)程中發(fā)現(xiàn)的。
研究表明，糖尿病、尤其是其合并性病癥(例如糖尿病性冠心病)的發(fā)病率和死亡率均很高，而且糖尿病可導(dǎo)致心臟微血管病變、大血管病變、心肌病變、糖尿病自主神經(jīng)紊亂等危險(xiǎn)疾病(北京醫(yī)學(xué)2003，25(2)84-85)。鑒于糖尿病及其并發(fā)癥的發(fā)生機(jī)制非常復(fù)雜，學(xué)術(shù)界和臨床對(duì)此也存在爭(zhēng)議(J Am Coll Cardiol 2003，41(1)1-7；InternMed 2003，42(7)554-9；Exp Clin Endocrinol Diabetes 2002，110(5)212-8；Biol PharmBull 2003，26(12)1668-73；山東醫(yī)藥2003，43(1)14-15)，尚無(wú)切實(shí)可行的治療方案(尤其是采用天然藥物的療法)，且有些降糖藥物之間的聯(lián)用反而加重其心血管病變發(fā)生。
在此，我們發(fā)現(xiàn)本發(fā)明藥物組合對(duì)糖尿病及其心腦血管相關(guān)并發(fā)癥具有極好的治療效果。同時(shí)，本發(fā)明人大膽推測(cè)這是由于銀杏內(nèi)酯和芍藥苷作用于不同靶點(diǎn)，尤其是在不同病理階段發(fā)揮治療作用，發(fā)揮了藥物聯(lián)用的整體治療優(yōu)勢(shì)。上述藥物組合克服了已有藥物存在的作用單一、服藥量大等缺點(diǎn)，代表了天然藥物治療和預(yù)防糖尿病及其并發(fā)癥的新趨勢(shì)。
心腦血管疾病、老年癡呆癥二者聯(lián)用的有益效果并不僅局限于糖尿病及其并發(fā)癥中。在進(jìn)一步的研究中，我們驚奇地發(fā)現(xiàn)，本發(fā)明藥物組合在心腦血管疾病(尤其是缺血性疾病)、老年癡呆癥的治療和/或預(yù)防中也表現(xiàn)出極好的治療效果。
所述心腦血管疾病例如包括冠心病、腦卒中(也稱腦中風(fēng))、心肌梗塞，和所述老年癡呆癥包括阿爾茨海默病(簡(jiǎn)稱AD)或腦血管性癡呆(簡(jiǎn)稱VD)。
腦細(xì)胞保護(hù)目前學(xué)術(shù)觀點(diǎn)公認(rèn)，在缺血性腦卒中急性期病程中，腦缺血再灌注損傷是影響預(yù)后的重要因素，降低再灌注損傷有助于保護(hù)腦細(xì)胞，減少細(xì)胞受損程度，改善預(yù)后。腦缺血再灌注損傷的機(jī)理有多種，其中自由基增多是公認(rèn)的主要因素之一。目前已經(jīng)上市的腦細(xì)胞保護(hù)劑(如依達(dá)拉奉)，其作用機(jī)制均為游離基清除劑，通過(guò)清除病變部位的游離基，阻斷腦細(xì)胞受損過(guò)程，盡可能減少受損腦細(xì)胞數(shù)量以最大限度保留患者的正常機(jī)能，阻止病情進(jìn)一步惡化。由于本發(fā)明組合具有較強(qiáng)的清除自由基功效，因此本發(fā)明人針對(duì)此進(jìn)行了研究，結(jié)果表明本發(fā)明組合在腦細(xì)胞保護(hù)方面具有顯著效果。
高脂血癥、脂肪肝在針對(duì)上述疾病的研究中，還發(fā)現(xiàn)本發(fā)明組合具有調(diào)節(jié)血脂的作用。由于高脂血癥是非酒精性脂肪肝患者的重要(特征性)表象，所以我們進(jìn)一步進(jìn)行了有關(guān)高脂血癥、脂肪肝方面的研究，結(jié)果，我們驚喜的發(fā)現(xiàn)本發(fā)明組合同樣具有良好的治療效果。
心腦血管疾病復(fù)發(fā)本發(fā)明的另一個(gè)重要發(fā)現(xiàn)是本發(fā)明藥物組合在防止心腦血管疾病復(fù)發(fā)方面的有益效果。
心腦血管疾病是危害現(xiàn)代人健康的常見病和多發(fā)病，其發(fā)病率、病死率和致殘率均很高。當(dāng)前，心腦血管疾病發(fā)病后的治療研究結(jié)果尚無(wú)法令人滿意，但已公認(rèn)這類疾病是可以預(yù)防的疾病(Sacco RL等，Cerebrovasc Dis 1999，(增刊3)37-44)。按照干預(yù)措施介入的時(shí)間，預(yù)防可通常分為兩個(gè)階段“一級(jí)預(yù)防”，即對(duì)健康人群或存在心腦血管疾病危險(xiǎn)因素、但尚無(wú)心腦血管疾病癥狀的人群開展預(yù)防?！耙患?jí)預(yù)防”通常主要強(qiáng)調(diào)生活(行為)方式干預(yù)，而不倡導(dǎo)使用藥物干預(yù)；和“二級(jí)預(yù)防”，即對(duì)已出現(xiàn)心腦血管疾病癥狀，如短暫性腦缺血發(fā)作(TIA)或已有缺血性卒中后癡呆發(fā)作史的病人開展預(yù)防，防止其再次發(fā)生同種疾病而采取的措施。在此，本發(fā)明術(shù)語(yǔ)“預(yù)防復(fù)發(fā)”是指“二級(jí)預(yù)防”。
雖然常規(guī)化學(xué)藥物例如阿司匹林等可在一定程度上實(shí)現(xiàn)有效預(yù)防，但是有相當(dāng)?shù)木窒扌?，甚至失敗的案例也很?參見王少華等，鐵道醫(yī)學(xué)1999年，27(2)136)，臨床上俗稱為“阿司匹林抵抗”。同時(shí)，阿司匹林增加機(jī)體出血(尤其是上消化道出血)的危險(xiǎn)性，相當(dāng)一部分患者使用受限。并且，最近有報(bào)道，美國(guó)食品藥品監(jiān)督管理局(FDA)綜合現(xiàn)有的研究數(shù)據(jù)認(rèn)為，非甾體抗炎藥存在增加心血管不良事件的可能性。目前，在臨床實(shí)踐中，還沒(méi)有任何一種藥物可以同時(shí)具有下述藥理作用(特別是協(xié)同作用)，臨床醫(yī)生被迫選擇多種藥物同時(shí)使用。而同時(shí)使用種類繁多的藥物，很可能帶來(lái)藥物副作用的疊加(盡管報(bào)道很少，但臨床醫(yī)生實(shí)際應(yīng)用藥物時(shí)難以決策，往往是顧及藥物副作用)。尤為不利的是，在眾多復(fù)發(fā)危險(xiǎn)因素中，究竟哪一種危險(xiǎn)因素對(duì)復(fù)發(fā)起著主要作用，也沒(méi)有明確結(jié)論，因此目前尚無(wú)一種藥物是以“一級(jí)預(yù)防”或“二級(jí)預(yù)防”作為主要活性/適應(yīng)癥而上市的。
本發(fā)明人在此方面做了有益的嘗試和探索，而且取得了誘人的成果。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)表明，銀杏與芍藥的組合在同時(shí)控制多個(gè)主要的復(fù)發(fā)危險(xiǎn)因素方面表現(xiàn)出了出人意料的協(xié)同作用。鑒于時(shí)間及醫(yī)學(xué)論理學(xué)因素，我們只進(jìn)行了有限數(shù)量的缺血性腦卒中“二級(jí)預(yù)防”臨床觀察試驗(yàn)，但是已可以從中預(yù)測(cè)出本發(fā)明組合在心腦血管疾病“一級(jí)預(yù)防”、尤其是“二級(jí)預(yù)防”臨床上的潛在應(yīng)用前景。
根據(jù)試驗(yàn)結(jié)果，并結(jié)合目前國(guó)際公認(rèn)的心腦血管疾病“一級(jí)預(yù)防”、“二級(jí)預(yù)防”循證醫(yī)學(xué)證據(jù)，我們推測(cè)，本發(fā)明藥物組合物之所以能有效地防止了心腦血管疾病的復(fù)發(fā)，極有可能是在以下作用中表現(xiàn)出的協(xié)同作用①抗血小板聚集作用(抑制血小板的聚集與分泌，改變血小板和管內(nèi)皮細(xì)胞的前列腺素代謝途徑，使血管內(nèi)環(huán)境趨向防止血小板聚集、防止血栓形成及血管內(nèi)皮破損)；②調(diào)節(jié)血脂作用(使甘油三酯和總膽固醇降低，高密度脂蛋白稍增加，肝臟合成極低密度脂蛋白減少，這三種變化都能積極防止動(dòng)脈硬化的發(fā)生)；③調(diào)節(jié)糖代謝作用(將糖尿病患者的血糖水平控制在理想范圍內(nèi)，改善脂肪代謝障礙，控制膽固醇的合成)；④抗氧化作用(激活人體內(nèi)的SOD，抑制自由基的作用，抑制脂質(zhì)過(guò)氧化物對(duì)體內(nèi)生物膜正常功能的破壞，減少動(dòng)脈、尤其是小動(dòng)脈的硬化機(jī)會(huì))；⑤調(diào)節(jié)血壓作用(降低血管的被動(dòng)擴(kuò)張，減少血管壁所受張力、通透性增加，防止血漿成分外滲；降低血管壁厚，改善其堅(jiān)固性增加，防止出現(xiàn)平滑肌玻璃樣變性和壞死)；⑥血管內(nèi)皮細(xì)胞保護(hù)作用，降低血栓形成機(jī)會(huì)。
同時(shí)，鑒于心腦血管疾病二級(jí)預(yù)防的復(fù)雜性，本發(fā)明人期望不受任何理論的限制，所取得的有益效果皆由藥理藥效實(shí)驗(yàn)證明。有利的是，動(dòng)物實(shí)驗(yàn)表明，本發(fā)明藥物組合還表現(xiàn)出顯著的抗炎性反應(yīng)作用施用本發(fā)明藥物后，受試動(dòng)物的動(dòng)脈粥樣硬化斑塊形成的受抑制程度，與其體內(nèi)炎性標(biāo)志物CRP(或者M(jìn)CP-1)的降低水平相平行，這明顯提示本發(fā)明藥物組合物通過(guò)抑制血管發(fā)生炎性反應(yīng)，從而抑制了脂質(zhì)沉著引起動(dòng)脈硬化的機(jī)會(huì)，降低了腦卒中復(fù)發(fā)或死亡的重要危險(xiǎn)因素。上述發(fā)現(xiàn)結(jié)合臨床試驗(yàn)結(jié)果，進(jìn)一步驗(yàn)證了本發(fā)明組合在缺血性腦卒中“二級(jí)預(yù)防”方面的應(yīng)用潛力。
因此，本發(fā)明的另一個(gè)目的在于提供于銀杏和芍藥在制備用于防止心腦血管疾病復(fù)發(fā)的藥物中的應(yīng)用。在臨床應(yīng)用時(shí)，醫(yī)師可以根據(jù)患者的年齡、體制、嚴(yán)重程度等因素，制定個(gè)體給藥方案，例如給予1/5-1倍治療/預(yù)防有效量的本發(fā)明藥物組合物。眾所周知，長(zhǎng)期口服給藥比較適于預(yù)防復(fù)發(fā)。
防止血管成形術(shù)后再狹窄在現(xiàn)代臨床醫(yī)學(xué)實(shí)踐中，微創(chuàng)傷的介入治療已經(jīng)得到廣泛應(yīng)用。其中，血管內(nèi)支架置入成形術(shù)是介入治療中重要手段之一，該手段應(yīng)用在心梗、腦梗、大靜脈血栓等疾病的治療中取得了令人矚目的短期療效。但令人遺憾的是，血管內(nèi)支架成形術(shù)后的血管再狹窄及再閉塞率居高不下，一年內(nèi)的再狹窄率高達(dá)20％，三年可達(dá)50％。雖然藥物涂層支架可以降低血管成形術(shù)后再狹窄(RS)的發(fā)生率，但其有效率仍然不能令人滿意。也有報(bào)道使用某些藥物(如抗生素、免疫抑制劑)可以降低RS的發(fā)生率，但顯而易見的是，抗生素或免疫抑制劑的副作用使其并不適宜長(zhǎng)期使用。
血管平滑肌細(xì)胞(VSMCs)的異常增殖，是RS重要的病理特征，抑制VSMCs異常增殖是預(yù)防RS的重要手段。我們的研究表明，本發(fā)明藥物組合具有顯著抑制VSMCs的作用，推測(cè)其機(jī)理是由于本發(fā)明組合物具有較強(qiáng)的抗炎及內(nèi)皮細(xì)胞保護(hù)作用，可以有效抑制血管內(nèi)皮細(xì)胞受損傷后產(chǎn)生的炎性反應(yīng)，從而達(dá)到抑制VSMCs的作用。同時(shí)，由于本發(fā)明組合物具有副作用低下的優(yōu)良特性，更適合長(zhǎng)期給藥，在防止RS中具有現(xiàn)有技術(shù)所不具備的優(yōu)勢(shì)。
功能性保健品本發(fā)明的第三個(gè)目的在于本發(fā)明組合在制備功能性保健品中的應(yīng)用。
由于本發(fā)明組合物具備上述功效，也符合功能性保健品安全性的要求。因此，本發(fā)明上述組合也可作為制備功能性保健食品的主要功能成分、或作為增益劑摻加到食品、飲料中，供適應(yīng)人群長(zhǎng)期使用。而且，在本發(fā)明試驗(yàn)的基礎(chǔ)上，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以理解的是，含有本發(fā)明上述組合的功能性保健品至少具有下述保健功能輔助降血脂功能、輔助降血糖功能、抗氧化功能、輔助改善記憶功能、緩解視疲勞功能、提高缺氧耐受力功能、化學(xué)性肝損傷輔助保護(hù)功能。
同樣，功能性保健品制備技術(shù)也屬于已知技術(shù)。相對(duì)于可藥物而言，本發(fā)明組合物用于功能性保健品的來(lái)源、條件可以更為廣泛和寬松。例如，可以選擇銀杏葉和芍藥提取物，也可以選擇含有銀杏內(nèi)酯(和/或黃酮)的其它植物提取物或使用其化學(xué)全合成、半合成物。在功能性保健品的功效成分構(gòu)成中，可以僅含有本發(fā)明組合，也可以是本發(fā)明組合加其它輔助或加強(qiáng)功效的成分，如添加維生素E用以增強(qiáng)抗氧化功效，在此不再贅述。
本發(fā)明組合及相應(yīng)制劑本發(fā)明組合是指以單獨(dú)含有銀杏、芍藥的獨(dú)立制劑形式供聯(lián)合給藥，或者以同時(shí)含有二者的組合物/產(chǎn)品形式提供。
因此，本發(fā)明的另一個(gè)目的在于提供用于含有銀杏內(nèi)酯和芍藥苷的藥用組合，其中以銀杏葉中的銀杏內(nèi)酯和芍藥中的芍藥苷計(jì)，二者的重量比例為0.01-20∶1，優(yōu)選0.05-5∶1、0.1-1∶1，和更優(yōu)選0.2∶1、0.5∶1、1∶1和2∶1。
本發(fā)明組合物中，可以選擇藥味(例如芍藥)直接粉碎成粉末入藥，也可以相當(dāng)于上述天然藥物材生藥量的提取物或其他形式入藥。因此，本發(fā)明藥物組合物的活性組成包括藥材原粉、脂或水溶性提取物、有效部位、或有效成分。例如，所述活性組成包括a)銀杏銀杏提取物(例如低級(jí)醇、丙酮、乙酸乙酯的銀杏葉提取物)，主要含有銀杏內(nèi)酯和銀杏黃酮作為活性成分的銀杏提取物(例如標(biāo)準(zhǔn)提取物Egb)，或銀杏黃酮單體和銀杏內(nèi)酯單體，或銀杏內(nèi)酯單體，或銀杏黃酮單體。其中，所述銀杏內(nèi)酯(Ginkgolides)是指含有各種銀杏萜類內(nèi)酯物質(zhì)(二萜內(nèi)酯A、B、C、M、J，倍半內(nèi)酯等)的混合物；“銀杏內(nèi)酯單體”是指上述萜類內(nèi)酯中各種內(nèi)酯類物質(zhì)的單體和/或其衍生物、或其化學(xué)修飾物、類似物。所述銀杏黃酮是指含有各種銀杏黃酮物質(zhì)(銀杏黃酮及其苷、總黃酮醇及其苷、雙黃酮、兒茶素等)的混合物；“銀杏黃酮單體”是指上述黃酮中各種黃酮類物質(zhì)的單體和/或其衍生物、或其化學(xué)修飾物、類似物。
b)芍藥芍藥(白芍、赤芍、川赤芍)的干燥根粉末，含有苷類化合物(優(yōu)選為芍藥苷和芍藥內(nèi)酯苷)的提取物，或芍藥苷(Paeoniflorin)單體。另外，研究表明，同時(shí)含有芍藥苷、芍藥內(nèi)酯苷、羥基芍藥苷、氧化芍藥苷、苯甲酰芍藥苷、芍藥新苷、丹皮酚(paenol)、丹皮酚原苷(paeonolide)、丹皮酚苷(paeoniside)、芍藥苷元(paeoniflorgenone)等的有效部位也是有益的。本領(lǐng)域技術(shù)人員可以理解的是，本發(fā)明芍藥苷類的來(lái)源并不局限于芍藥，含有芍藥苷類的其它植物(例如牡丹皮)也可實(shí)現(xiàn)本發(fā)明，其提取和制備方法為已知技術(shù)，在此不作贅述。
在上下文中，“本發(fā)明藥物組合”所涉及術(shù)語(yǔ)“銀杏”、“芍藥”具有上述定義。
下面的試驗(yàn)將證實(shí)按照本發(fā)明描述的具有上述定義之“銀杏”與“芍藥”的組合，具有本發(fā)明所述的有益效果。鑒于現(xiàn)有技術(shù)中業(yè)已存在著相當(dāng)成熟有效的提取、制備上述定義組分的技術(shù)，在此不作重點(diǎn)描述。例如，可以采用現(xiàn)代提取和分離技術(shù)，以提高活性物質(zhì)的純度、盡量除去不需要的雜質(zhì)，類似的技術(shù)在已有技術(shù)中已相當(dāng)成熟有效，例如DE2117429A、中國(guó)專利申請(qǐng)ZL021109737、ZL02133298.3、ZL031131263、ZL03152921、ZL03119744、ZL03114826、ZL03153496、ZL01128926、ZL200410041120、遼寧中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)(2002年，4(1)24)、中成藥(2005年，27(3)350-351)、世界科學(xué)技術(shù)-中醫(yī)藥現(xiàn)代化(2003年，(1)33-39)、中國(guó)天然藥物(2004年，2(1)11-15)等。
可針對(duì)銀杏內(nèi)酯、芍藥苷的溶解特性和體內(nèi)吸收特點(diǎn)(張壯等，中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志2000，6(6)21-24)，采用標(biāo)準(zhǔn)制劑技術(shù)制成適宜的口服或非腸道給藥劑型，類似的技術(shù)在已有技術(shù)中也已相當(dāng)成熟有效，例如制備銀杏內(nèi)酯鈉鹽(ZL00115134)、口腔快速崩解片(ZL200310123852)、軟膠囊(ZL03116572)、緩控釋制劑(ZL02116223、ZL200310110709)、環(huán)糊精包合物(ZL200310125175)、注射劑(ZL99124228、ZL021153590、ZL03113818、ZL031399428、ZL200410069038)、粉針劑(ZL03131959.9、ZL200410013937、ZL2003101210259、ZL200410000912)、滴丸(ZL03136485)、分散片(ZL03125462)、磷脂復(fù)合物(ZL01139971、ZL03128337)等。
可以理解的是，本領(lǐng)域技術(shù)人員根據(jù)不同的疾病狀況，可選用不同組合形式。例如，在以抗動(dòng)脈粥樣硬化作用為主的治療中，可采用“銀杏內(nèi)酯(為主)+芍藥苷”的組合；而在以抗氧化作用為主的治療中，可采用“銀杏黃酮(為主)+芍藥苷”的組合。本發(fā)明組合物臨床使用中，每日口服推薦劑量(優(yōu)選)為銀杏內(nèi)酯2mg-30mg、芍藥苷5-50mg、銀杏黃酮10-100mg。
隨后進(jìn)行的研究表明，與已有的“銀杏(內(nèi)酯)+人參(皂苷)+芍藥(苷)”組合(例如ZL98110756.7)相比，在減少了一種活性成分的情況下，本發(fā)明藥物組合物依然保持了相同、甚至就某些方面而言更為有利的藥理作用(例如避免了不需要的人參皂苷之不良反應(yīng))，多項(xiàng)指標(biāo)顯著優(yōu)于單獨(dú)施用的銀杏內(nèi)酯、銀杏黃酮或芍藥苷，這是本領(lǐng)域技術(shù)人員無(wú)法根據(jù)現(xiàn)有技術(shù)推測(cè)的。因此，本發(fā)明試圖提供一種選擇，它提供了一種新的安全產(chǎn)品作為現(xiàn)有技術(shù)的替代，這種產(chǎn)品及其相應(yīng)治療方案將是醫(yī)生高度認(rèn)可并著力推薦的。
藥理藥效學(xué)試驗(yàn)研究一.心腦血管方面的藥理作用1.對(duì)離體豚鼠心臟冠脈流量的影響1.1材料本發(fā)明藥物組合物銀杏內(nèi)酯-芍藥苷(2∶1、1∶1、1∶5、1∶10)，4mg/kg注射給藥；陽(yáng)性對(duì)照藥銀杏內(nèi)酯(4mg/kg)；芍藥苷(4mg/kg)；銀杏內(nèi)酯+人參皂苷+芍藥苷(1∶1∶1，簡(jiǎn)稱“銀-人-芍”，12mg/kg)；硫酸異丙腎上素注射液。
1.2實(shí)驗(yàn)方法A.調(diào)節(jié)恒溫灌流裝置(參照《中藥藥理研究方法學(xué)》，人民衛(wèi)生出版社，第一版，第523頁(yè))；B.制備豚鼠離體心臟，放入低溫洛氏液中排出余血，在升主動(dòng)脈最高處插入主動(dòng)脈插管，固定，使洛氏液由冠脈經(jīng)心肌入右心房，從腔靜脈和肺動(dòng)脈的斷端流出，心尖通過(guò)蛙心夾連接記錄杠桿，描記心臟搏動(dòng)曲線，記錄心率；C.測(cè)定冠脈流量冠脈流量、心率、心搏幅度基本穩(wěn)定后，連續(xù)測(cè)量3次每分鐘流量球平均值，作為給藥前的正常流量；D.給藥后的作用從主動(dòng)脈上方注入各藥，測(cè)定給藥后1-10分鐘內(nèi)每分鐘流量、心率和心搏幅度，找出其極值，算出給藥后灌流量的最大增建值。每個(gè)藥物重復(fù)5個(gè)心臟，結(jié)果見表1。
表1.不同配比的本發(fā)明組合物(注射)對(duì)離體豚鼠心臟的影響(X±SD)

自身前后比較*p＜0.05**p＜0.011.3結(jié)論由結(jié)果可知，硫酸異腎上腺素、銀杏內(nèi)酯、銀-人-芍、本發(fā)明組合物均能增加離體心臟冠脈流量。硫酸異腎上腺素和銀杏內(nèi)酯雖然可明顯增加冠脈流量，也明顯增加心率和心搏幅度。銀-人-芍也可增加冠脈流量，但同時(shí)也增加心率，因而增加心肌耗氧量，所以可據(jù)此推測(cè)硫酸異腎上腺素和銀杏內(nèi)酯+人參皂苷+芍藥苷并不適用于冠心病患者。
本發(fā)明組合物明顯增加冠脈流量，但不增加心率和心搏幅度，效果好于硫酸異腎上腺素和銀-人-芍，也好于單獨(dú)施用的銀杏內(nèi)酯或芍藥苷。
2.對(duì)不同誘導(dǎo)劑(包括血小板活化因子、腺苷二磷酸)誘導(dǎo)血小板凝集的影響2.1材料本發(fā)明藥物組合物(銀杏內(nèi)酯-芍藥苷1∶1，簡(jiǎn)稱組合物A，4mg/kg注射)，和銀杏葉和白芍的提取物(1∶1，簡(jiǎn)稱組合物B，10、20、30mg/kg灌胃)；空白對(duì)照組生理鹽水；陽(yáng)性對(duì)照藥相當(dāng)于同樣用藥量的單組分的銀杏內(nèi)酯(4mg/kg)；相當(dāng)于同樣用藥量的單組分的芍藥苷(10mg/kg)；天保寧片(含銀杏葉提取物20mg/kg)；銀杏+人參+芍藥提取物(1∶1∶1，30mg/kg)；2.2實(shí)驗(yàn)方法豚鼠分組，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物連續(xù)灌胃5天，空白對(duì)照用生理鹽水。末次給藥1小時(shí)后頸動(dòng)脈采血，以枸櫞酸鈉抗凝，混勻后離心(800r/min)2次，合并上清液作為富血小板血漿(PRP)，血小板計(jì)數(shù)；余下血漿離心(3000r/min)，取上清液作為貧血小板血漿(PPP)；以PPP調(diào)零，取PRP300μl加入比濁管，37℃溫育5分鐘，加入誘導(dǎo)劑血小板活化因子(PAF)，聚集不同時(shí)間，記錄數(shù)據(jù)，結(jié)果見表2。
表2.對(duì)PAF誘導(dǎo)的豚鼠血小板聚集的影響

與空白對(duì)照組比較*p＜0.05**p＜0.01誘導(dǎo)劑為腺苷二磷酸(ADP)的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，類似于表2顯示的效果。
由上述結(jié)果可知，銀杏內(nèi)酯、銀-人-芍、天保寧片、本發(fā)明組合物高和中劑量組均能抑制不同誘導(dǎo)劑誘導(dǎo)的血小板聚集(凝集)、降低最大聚集率，其中以銀-人-芍、本發(fā)明組合物高劑量效果最好，中劑量組也表現(xiàn)出抑制血小板聚集作用，優(yōu)于單獨(dú)施用的銀杏內(nèi)酯或芍藥苷。
還對(duì)大鼠頸動(dòng)-靜脈血流旁路術(shù)血栓形成的影響、對(duì)大鼠體外血栓形成的影響等進(jìn)行了實(shí)驗(yàn)，結(jié)果表明本發(fā)明組合物對(duì)體內(nèi)血栓形成具有明顯對(duì)抗作用。
3.對(duì)大鼠試驗(yàn)性腦缺血的影響還對(duì)腦水含量的影響、MCAO所致大鼠缺血損傷行為學(xué)指標(biāo)的影響等進(jìn)行了實(shí)驗(yàn)，結(jié)果表明①本發(fā)明各配比組、銀-人-芍組、以及單獨(dú)施用的銀杏內(nèi)酯，對(duì)不完全性腦缺血引起的腦水腫均顯示出明顯保護(hù)作用，單獨(dú)施用的芍藥苷治療組作用不明顯。與單獨(dú)施用的銀杏葉治療組相比，本發(fā)明組合物各組的腦含水量顯著減少(P＜0.01)，表明其對(duì)不完全性腦缺血引起的腦水腫有顯著的保護(hù)作用，效果稍優(yōu)于或等于銀-人-芍組；②大鼠MCAO后明顯有腦梗塞發(fā)生，本發(fā)明各配比組均可明顯降低腦梗塞組織重量百分比(P＜0.01)，效果與銀杏+人參+芍藥組相近似，單獨(dú)施用的芍藥苷治療組作用不明顯。而單獨(dú)施用的銀杏內(nèi)酯組也有較明顯的降低效果(P＜0.05)，但明顯不如本發(fā)明組合物的大、中劑量組；③同樣，在對(duì)MCAO所致大鼠缺血損傷行為學(xué)指標(biāo)的影響的實(shí)驗(yàn)中，顯示了與上述相類似的結(jié)果，即本發(fā)明的組合物大、中劑量組的效果最好，明顯優(yōu)于單獨(dú)施用的銀杏內(nèi)酯或芍藥苷組，而且效果稍優(yōu)于或等于銀-人-芍組。
4防止血管成形術(shù)后再狹窄血管成形術(shù)后再狹窄(RS)，其發(fā)病率高達(dá)30-50％。由于血管平滑肌細(xì)胞(VSMCs)的異常增殖，是RS的病理特征，因此抑制VSMCs異常增殖成為世界性心血管研究預(yù)防RS的重要手段。
4.1材料本發(fā)明藥物組合(芍藥苷+銀杏內(nèi)酯+銀杏黃酮2∶1∶5，以8、16、32mg/kg注射)；空白對(duì)照組生理鹽水；陽(yáng)性對(duì)照藥芍藥苷注射，8mg/kg；銀杏葉注射，8mg/kg。
4.2方法血管平滑肌細(xì)胞分離、培養(yǎng)、鑒定，參照文獻(xiàn)(Piper HM編輯，Cell Culture Techinquesin Heart and Vessel Research.Springer-VerlagGermany.1990280)操作。
待90％VSMCs匯合后，經(jīng)胰蛋白酶消化后種于培養(yǎng)碟內(nèi)，加10％FBS+SMWM過(guò)夜培養(yǎng)，使細(xì)胞貼壁，細(xì)胞匯合約80％，再換成無(wú)血清DMEM(含青霉素100U/ml，鏈霉素100μg/ml)繼續(xù)培養(yǎng)24h，使細(xì)胞生長(zhǎng)同步，最后換成10％FBS+DMEM，并隨機(jī)加入藥物，各濃度用DMEM稀釋至10μl/孔。
3H-TdR摻入實(shí)驗(yàn)置換每孔1ml的DMEM，加入luCi的3H-TdR，用液體閃爍計(jì)數(shù)器(1900CA)測(cè)定各孔的CPM值。
細(xì)胞存活率＝貼壁細(xì)胞/總細(xì)胞數(shù)(貼壁細(xì)胞+不貼壁細(xì)胞)4.3結(jié)果結(jié)果見下二表。
對(duì)平滑肌細(xì)胞3H-TdR摻入量的影響(X±s)


與空白對(duì)照比較，*p＜0.05**p＜0.01；與芍藥比較，△P＜0.05，△△P＜0.01；與銀杏葉比較，#P＜0.05。
對(duì)平滑肌細(xì)胞計(jì)數(shù)的影響(X±s)

與空白對(duì)照比較，*p＜0.05**p＜0.01；與芍藥比較，△P＜0.05，△△P＜0.01；與銀杏葉比較，#P＜0.05，##P＜0.01本實(shí)驗(yàn)用細(xì)胞計(jì)數(shù)法分析，各組藥物對(duì)細(xì)胞增殖的影響與對(duì)平滑肌細(xì)胞3H-TdR摻入基本一致，并且測(cè)得細(xì)胞存活率沒(méi)有明顯影響，均在90％以上。
4.4結(jié)論本發(fā)明藥物組合物、芍藥苷、銀杏葉注射液對(duì)血管平滑肌細(xì)胞(VSMCs)的異常增殖具有抑制作用，其中本發(fā)明藥物組合物最強(qiáng)，芍藥苷和銀杏葉分別次之，本發(fā)明藥物組合與芍藥苷和銀杏葉比較，組間具有顯著性差異，分析可能是芍藥苷和銀杏葉提取物(銀杏內(nèi)酯)的作用機(jī)制不同帶來(lái)的組間顯著性差異。
5腦細(xì)胞保護(hù)作用5.1材料和方法實(shí)驗(yàn)動(dòng)物健康Wistar大鼠72只，體重250±10g；藥物本發(fā)明組合物(芍藥苷+銀杏內(nèi)酯5∶1，12mg/kg)；陽(yáng)性對(duì)照藥芍藥苷注射，10mg/kg；銀杏組(銀杏內(nèi)酯+銀杏黃酮)注射，10mg/kg；依達(dá)拉奉注射液注射，10mg/kg；實(shí)驗(yàn)方法大鼠隨機(jī)分為6組，每組12只。正常對(duì)照組由左頸外靜脈插管，靜注1％肝素，分別于即刻及1.5h經(jīng)左頸外靜脈插管給0.9％氯化鈉液3ml/kg，3h后取腦檢測(cè)或固定。模型組參照Kaizumis栓線法建立腦缺血再灌注動(dòng)物模型。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型均缺血1.5h取腦檢測(cè)或固定，然后取出栓線再灌注1.5h，取腦檢測(cè)或固定。標(biāo)本將大鼠斷頭取腦，剝離腦組織，取視交叉和腳間窩兩個(gè)冠狀切面間分別取腦皮質(zhì)和尾殼核光、電鏡標(biāo)本。
腦水腫及腦鈣含量的測(cè)定取右前腦50～100mg，烘干至恒重，即為干重。
腦含水量測(cè)定用公式(濕重-干重)/濕重，計(jì)算腦含水量。
5.2結(jié)果(1)大鼠腦組織梗塞區(qū)觀察光鏡下模型組神經(jīng)元輪廓模糊，胞體著色變深，胞核小、胞質(zhì)分界不清。細(xì)胞周圍亮區(qū)變寬與正常對(duì)照組有顯著差異(P＜0.01)。本發(fā)明組合物組及依達(dá)拉奉組神經(jīng)元結(jié)構(gòu)尚清晰，胞核與胞質(zhì)界限尚能分清，細(xì)胞周圍亮區(qū)較寬，與模型組相比雖有縮小，但無(wú)顯著性差異。芍藥苷組和銀杏組神經(jīng)元結(jié)構(gòu)欠清晰，胞核與胞質(zhì)界限能分清，細(xì)胞周圍亮區(qū)較寬，與模型組相比未見明顯縮小。
電鏡下模型組神經(jīng)元變形，明暗神經(jīng)元不易區(qū)分，胞核變形，表面呈鋸齒狀，核內(nèi)異染色質(zhì)增多、核膜及核周隙模糊不清、核質(zhì)分界不清、網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)消失、細(xì)胞器減少或變形、結(jié)構(gòu)不清。線粒體呈氣球樣腫脹、質(zhì)膜結(jié)構(gòu)不清或消失斷裂、細(xì)胞周圍有大量水腫液呈低電子密度亮區(qū)。本發(fā)明組合物組及依達(dá)拉奉組神經(jīng)元核周核膜清晰、核內(nèi)異染色質(zhì)稍增多、核周間隙較狹窄、胞質(zhì)內(nèi)細(xì)胞器較明顯、但線粒體均有水腫樣改變、細(xì)胞周圍有少量水腫液。芍藥苷組和銀杏組神經(jīng)元核周核膜欠清晰、核內(nèi)異染色質(zhì)稍明顯增多、核周間隙較狹窄、胞質(zhì)內(nèi)細(xì)胞器不明顯、線粒體有水腫樣改變。模型組星形膠質(zhì)細(xì)胞水腫、胞質(zhì)電子密度降低、細(xì)胞器減少、局部細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)不清。本發(fā)明組合物組及依達(dá)拉奉組星形膠質(zhì)細(xì)胞的水腫表現(xiàn)較模型組輕，細(xì)胞器與模型組相比明顯較多。芍藥苷組和銀杏組星形膠質(zhì)細(xì)胞則與模型組基本相似。
(2)腦組織鈣、丙二醛、超氧化物歧化酶、腦水分含量的實(shí)驗(yàn)結(jié)果模型組腦組織丙二醛含量、鈣含量、腦水分均較正常對(duì)照組明顯升高(P＜0.01)，而SOD活性則明顯低于正常對(duì)照組(P＜0.01)；本發(fā)明組合物能抑制灌注后腦組織丙二醛含量的升高和升高SOD活性(P＜0.01)，改善腦水含量(P＜0.01)，效果與依達(dá)拉奉相當(dāng)，明顯優(yōu)于銀杏組和芍藥苷組。
5.3結(jié)論本發(fā)明組合物能顯著抑制腦缺血再灌注大鼠腦組織MDA含量的升高和提高SOD活性，改善腦水含量，并從超微結(jié)構(gòu)上證實(shí)對(duì)膜性結(jié)構(gòu)尚有一定保護(hù)作用。本發(fā)明組合物主要通過(guò)提高SOD活性，清除氧自由基，從而對(duì)腦細(xì)胞起保護(hù)作用，其作用與依達(dá)拉奉相當(dāng)，明顯優(yōu)于其單獨(dú)成分組。
二.糖尿病方面的藥理作用1.對(duì)糖尿病大鼠的影響1.1材料本發(fā)明藥物組合物(銀杏內(nèi)酯-芍藥苷1∶5，簡(jiǎn)稱組合物A，注射)，和銀杏葉和白芍的提取物(簡(jiǎn)稱組合物B，灌胃)；正常對(duì)照組生理鹽水；糖尿病組生理鹽水；陽(yáng)性對(duì)照藥相當(dāng)于同樣用藥量的單組分的銀杏內(nèi)酯；相當(dāng)于同樣用藥量的單組分的芍藥苷；降糖靈片；銀杏內(nèi)酯+人參皂苷+芍藥苷。
1.2.實(shí)驗(yàn)方法糖尿病實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ偷慕⒍?jí)SD大鼠按照150mg/kg體重尾靜脈注射四氧嘧啶液，在四氧嘧啶液作用下，大鼠的胰島β細(xì)胞受到損傷，造成胰島素發(fā)生障礙，3天后尾靜脈采血測(cè)空腹血糖，血糖值大于11.0mmol/L的為糖尿病大鼠。
每日一次，連續(xù)4周，之后，尾靜脈采血測(cè)空腹血糖(FBG)和血清Ins。
表3.對(duì)糖尿病大鼠的FBG和血清Ins的影響

與糖尿病組比較*p＜0.05**p＜0.011.3.結(jié)論上述實(shí)驗(yàn)表明，以銀杏內(nèi)酯和芍藥苷組成的組合物注射組和提取物的高劑量口服組的降血糖效果最明顯(p＜0.01)，芍藥苷、降糖靈組次之。口服芍藥苷可產(chǎn)生一定的降低血糖的作用，但不如本發(fā)明組合物明顯?？诜y杏內(nèi)酯組降血糖作用不明顯，口服銀-人-芍組，可以降低四氧嘧啶糖尿病的血糖，并使血清Ins水平呈一定程度升高。降糖靈片只顯示降低血糖的效果，對(duì)血清Ins水平的影響不顯著。本發(fā)明組合物注射組明顯降低了四氧嘧啶糖尿病的血糖，并且對(duì)血清Ins水平的影響不顯著，這表明銀杏內(nèi)酯與芍藥苷的聯(lián)合用藥對(duì)四氧嘧啶糖尿病大鼠產(chǎn)生了較強(qiáng)的降血糖作用，且降血糖作用不是通過(guò)提高胰島素水平實(shí)現(xiàn)的。
同時(shí)，本發(fā)明研究了本發(fā)明組合物對(duì)糖尿病模型的大鼠的血清、肝、腦中脂質(zhì)過(guò)氧化產(chǎn)物丙二醛(MDA)的影響。與正常對(duì)照組相比，糖尿病模型的大鼠的血清、肝、腦、胰腺中脂質(zhì)過(guò)氧化產(chǎn)物丙二醛(MDA)含量顯著提高，而經(jīng)過(guò)本發(fā)明的組合物高劑量給藥后，上述組織中的MDA明顯下降，而胰腺M(fèi)DA值變化不明顯，說(shuō)明銀杏(內(nèi)酯)和芍藥(苷)是改善和治療糖尿病的有效藥物，尤其以二者的一定比例配伍使用，其伍用加合的效果最好(明顯優(yōu)于單用各組分)。
另外，進(jìn)一步的實(shí)驗(yàn)證明，本發(fā)明組合物可以糾正糖尿病微血管動(dòng)力學(xué)異常，其效果優(yōu)于單獨(dú)施用的銀杏內(nèi)酯或芍藥苷。
2.對(duì)糖尿病大鼠視網(wǎng)膜保護(hù)作用2.1材料與方法實(shí)驗(yàn)動(dòng)物選用雄性SD大鼠100只，適應(yīng)性飼養(yǎng)7天，測(cè)空腹血糖均低于7mmol/L，隨機(jī)分為正常對(duì)照組(E組)20只，實(shí)驗(yàn)組80只。用鏈尿佐菌素(STZ)誘發(fā)糖尿病。凡血糖≥16.7mmol/L作為糖尿病組，再隨機(jī)分為4組，各20只，D組為糖尿病未治療組，每天生理鹽水100mg/kg灌胃；A組為銀杏葉提取物組，50mg/kg灌胃；B組為赤芍提取物組(含芍藥苷)，30mg/kg灌胃；C組為本發(fā)明組合物組芍藥提取物+銀杏葉提取物5∶1，60mg/kg灌胃。
2.2結(jié)果試驗(yàn)表明，本發(fā)明組合物對(duì)于D大鼠有促進(jìn)體重增加、降低血糖的作用，見表4。
與正常組比較，各組糖尿病大鼠視網(wǎng)膜組織NOS的活性、AR(醛糖還原酶)的活性顯著增強(qiáng)，NO含量顯著增加。與D組比較，C組大鼠視網(wǎng)膜組織NOS的活性、AR的活性明顯被抑制，NO的含量也顯著減少，而A、B組的抑制作用不明顯，見表5。
2.3討論①高血糖水平和糖化血紅蛋白比例升高與視網(wǎng)膜病變發(fā)生、發(fā)展之間有密切的關(guān)系。上述實(shí)驗(yàn)表明，本發(fā)明組合物降低血糖的作用，能明顯抑制AR和NOS的活性，減少NO的合成，對(duì)糖尿病視網(wǎng)膜病變有明顯防治作用。
同時(shí)發(fā)現(xiàn)，本發(fā)明組合物能顯著降低NO含量，這可能與本發(fā)明組合物能提高糖尿病大鼠視網(wǎng)膜組織SOD的活性有關(guān)，SOD活性增強(qiáng)，及時(shí)清除過(guò)量生成的NO，對(duì)自由基損傷起一定保護(hù)作用。
②在另一項(xiàng)試驗(yàn)中，考察了本發(fā)明組合物對(duì)糖尿病型小豬視網(wǎng)膜血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子表達(dá)的影響，研究表明本發(fā)明組合物有明顯的降血糖和減輕胰島素抵抗的作用。
③另外，國(guó)內(nèi)外學(xué)者認(rèn)為可通過(guò)抑制VEGF的表達(dá)來(lái)阻止和延遲增生性糖尿病視網(wǎng)膜病變(PDR)的形成。申請(qǐng)人已進(jìn)行的研究表明，與對(duì)照組(高脂高蔗糖飼料+銀杏葉提取物或芍藥提取物)相比，治療組(高脂高蔗糖飼料+本發(fā)明組合物)的動(dòng)物視網(wǎng)膜組織中的VEGF蛋白表達(dá)具有顯著性差異(P＜0.01)。
發(fā)明人希望借上述表述非限定性地解釋本發(fā)明組合物效果明顯優(yōu)于單獨(dú)使用銀杏葉提取物或芍藥的機(jī)制。
表4 各組大鼠體重和血糖比較(n＝20)

與E組比較，*P＜0.01；與D組比較，#P＜0.01表5 各組大鼠視網(wǎng)膜組織NO的含量、NOS的活性、AR的活性(n＝20)

三.高血脂方面的藥理作用
1.材料本發(fā)明藥物組合物(銀杏內(nèi)酯-芍藥苷2∶1，簡(jiǎn)稱組合物A，注射)，和銀杏葉和白芍的提取物(簡(jiǎn)稱組合物B，灌胃)；正常對(duì)照組生理鹽水；高血脂組生理鹽水；陽(yáng)性對(duì)照藥相當(dāng)于同樣用藥量的單組分的銀杏內(nèi)酯；相當(dāng)于同樣用藥量的單組分的芍藥苷；洛伐他??；銀杏內(nèi)酯+人參皂苷+芍藥苷；2.實(shí)驗(yàn)方法高血脂模型的建立Wistar大鼠給予高脂飼料20g/只/天，共12天；正常對(duì)照組喂食普通飼料。
每日一次，藥物灌胃，連續(xù)12天，最后一天禁食不禁水，次日麻醉，之后腹主動(dòng)脈取血，分離血清，測(cè)空腹血脂包括甘油三酯(TG)、總膽固醇(TC)、高密度脂蛋白(HDL)、低密度脂蛋白(LDL)，按照試劑盒說(shuō)明書操作，結(jié)果見下表表6.對(duì)糖尿病大鼠TG、TC、HDL和LDL的影響

與高血脂組比較*p＜0.05**p＜0.01上述實(shí)驗(yàn)表明，口服銀杏內(nèi)酯可以降低TG、TC和LDL，升高HDL(p＜0.05)；口服銀-人-芍也可以降低TG、TC和LDL，但升高HDL不明顯(p＞0.05)；而銀杏內(nèi)酯和芍藥苷組成的組合物注射，以及銀杏葉-白芍的提取物的高劑量口服，明顯降低TG、TC和LDL，升高HDL(p＜0.01)，這表明銀杏-白芍的聯(lián)合用藥對(duì)四氧嘧啶糖尿病大鼠血脂代謝產(chǎn)生了較強(qiáng)的調(diào)節(jié)作用。
四.抗氧化方面的藥理作用1.對(duì)高血脂癥大鼠的抗氧化作用
1.1材料本發(fā)明藥物組合物銀杏黃酮+芍藥苷1∶1(40、20、10mg/kg灌胃)；正常對(duì)照組生理鹽水；高血脂組生理鹽水；陽(yáng)性對(duì)照藥銀杏黃酮(20mg/kg、40mg/kg)；銀杏內(nèi)酯(10mg/kg、20mg/kg)；芍藥苷(40mg/kg、20mg/kg)；VE(150mg/kg)；人參+芍藥(2∶1，100mg/kg)；1.2實(shí)驗(yàn)方法高血脂模型的建立Wistar大鼠給予高脂飼料20g/只/天，共12天；正常對(duì)照組喂食普通飼料。高脂模型與正常組比較，血清和肝臟的LPO明顯升高，而SO D活性明顯降低，表明高血脂大鼠伴有自由基脂質(zhì)過(guò)氧化損傷。
每日一次，藥物灌胃，連續(xù)12天，最后一天禁食不禁水，次日麻醉，之后腹主動(dòng)脈取血，分離血清，測(cè)過(guò)氧化脂質(zhì)(LPO)和超氧化物歧化酶(SOD)，按照試劑盒說(shuō)明書操作，取1/2肝臟待測(cè)LPO和SOD，結(jié)果見下表表7.對(duì)高血脂大鼠血清和肝臟LPO和SOD的影響(nmol/L)

與高血脂組比較*p＜0.05**p＜0.011.3.結(jié)論上述實(shí)驗(yàn)表明，單獨(dú)施用的銀杏黃酮、銀杏內(nèi)酯和芍藥苷大劑量時(shí)存在一定的抗氧化活性(芍藥苷的活性優(yōu)于銀杏內(nèi)酯)，低劑量銀杏黃酮、銀杏內(nèi)酯、芍藥苷則不明顯。本發(fā)明組合物的中、高劑量組有抗氧化活性，尤其是高劑量組的活性更顯著(p＜0.01)，明顯優(yōu)于單獨(dú)施用的銀杏黃酮、銀杏內(nèi)酯和其他對(duì)照藥，推測(cè)這是由于銀杏葉中銀杏總黃酮的清除自由基能力較強(qiáng)，抗氧化活性優(yōu)于銀杏內(nèi)酯，而本發(fā)明的組合物中有效成分為銀杏總黃酮，所以活性優(yōu)于單純的銀杏內(nèi)酯。
另外，還從保護(hù)神經(jīng)細(xì)胞、減少腦組織丙二醛(MDA)和NO生成等方面，考察了本發(fā)明組合物的抗氧化作用，結(jié)果證明本發(fā)明組合物對(duì)腦組織MDA有明顯抑制作用，降低腦組織中升高的NO，對(duì)神經(jīng)細(xì)胞也顯示了保護(hù)作用，實(shí)驗(yàn)也證明銀杏內(nèi)酯的抗氧化作用較弱，推測(cè)本發(fā)明組合物在抗氧化中以銀杏葉總黃酮的活性為主。其中的銀杏和芍藥提取物兩者存在明顯的協(xié)同作用，其原因和機(jī)理有待進(jìn)一步探討。五.老年癡呆方面的藥理作用1.材料本發(fā)明藥物組合物含有銀杏和白芍的提取物(簡(jiǎn)稱組合物，配比分別為6∶1、1∶1、1∶6，ip 20mg/kg)；正常對(duì)照組生理鹽水；模型組β-淀粉樣肽；陽(yáng)性對(duì)照藥銀杏內(nèi)酯(20mg/kg)；芍藥苷(20mg/kg)；銀杏內(nèi)酯+人參皂苷+芍藥苷(20mg/kg)；2.實(shí)驗(yàn)方法模型的建立將小鼠麻醉，將其前囟處皮膚開一小口，暴露顱骨，側(cè)腦室注入β-淀粉樣肽，對(duì)照組注射生理鹽水。
ip給藥10天。之后將透明的安全島置于水迷宮第三象限，以第一、第二象限為小鼠的入水點(diǎn)，水面高出安全島1cm，室溫，上方通過(guò)攝像機(jī)和監(jiān)視屏與計(jì)算機(jī)相連，自動(dòng)檢測(cè)和記錄活動(dòng)軌跡(大致分為邊緣型、隨機(jī)型、趨向型和直線型)以及到達(dá)安全島的時(shí)間，同步進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，每天訓(xùn)練4次，每次3min，每次入水前將小鼠擱置在安全島30秒，訓(xùn)練結(jié)束再擱置30秒，以強(qiáng)化記憶，記錄進(jìn)步的速度(是否路程增加、潛伏期延長(zhǎng)、尋找策略目的性是否增強(qiáng)等)，第四天，結(jié)果見下表。
表8.對(duì)β-淀粉樣肽所致的AD小鼠學(xué)習(xí)記憶功能障礙改善的作用(n＝10)


與模型組比較*p＜0.05上述實(shí)驗(yàn)表明，銀-人-芍、本發(fā)明各配比組均具有路程減少、潛伏期縮短、尋找策略目的性增強(qiáng)的作用，銀杏內(nèi)酯組也有該方面的作用，但不如銀-人-芍以及本發(fā)明組合物組的效果，而本發(fā)明組合物的作用相近似或略優(yōu)于銀-人-芍組。
同時(shí)本發(fā)明對(duì)上述實(shí)驗(yàn)的大鼠死亡率、抗D-半乳糖致腦老化、預(yù)防/治療VD、被動(dòng)回避實(shí)驗(yàn)中對(duì)誘發(fā)小鼠記憶鞏固/再現(xiàn)障礙的作用等指標(biāo)也作以詳細(xì)測(cè)試，實(shí)驗(yàn)證明，本發(fā)明的組合物的合用施用效果均好于單獨(dú)使用銀杏內(nèi)酯或芍藥苷。說(shuō)明本發(fā)明的組合物產(chǎn)生了效果加合/協(xié)同作用。
六.抗AS(動(dòng)脈粥樣硬化)的藥理作用1.對(duì)兔AS病變進(jìn)展的抑制作用1.1材料本發(fā)明藥物組合物為含有銀杏、白芍的提取物(1∶2，100mg/kg灌胃)；正常對(duì)照組生理鹽水；模型組生理鹽水；陽(yáng)性對(duì)照藥銀杏內(nèi)酯(10mg/kg)芍藥苷(20mg/kg)；阿司匹林(50mg/kg)；1.2實(shí)驗(yàn)方法將雄性新西蘭兔，隨機(jī)分組正常組(A組，空白對(duì)照組，喂普通標(biāo)準(zhǔn)飼料)、AS模型組(B組，喂含1％膽固醇飼料)、AS+陽(yáng)性對(duì)照藥銀杏內(nèi)酯組(C1組，膽固醇喂料與B組同，另同時(shí)給予銀杏內(nèi)酯口服，10mg/kg)、AS+陽(yáng)性對(duì)照藥芍藥苷組(C2組，膽固醇喂料與B組同，另同時(shí)給予芍藥苷口服，20mg/kg)、AS+陽(yáng)性對(duì)照藥阿司匹林組(C3組，膽固醇喂料與B組同，另同時(shí)給予阿司匹林口服，50mg/kg)、AS+本發(fā)明組合物組(D組，膽固醇喂料與B組同，另同時(shí)給予本發(fā)明實(shí)施例1的組合物口服)。動(dòng)物均單籠飼養(yǎng)。實(shí)驗(yàn)期為12周。12周后處死動(dòng)物。
測(cè)定指標(biāo)1血脂、血清C反應(yīng)蛋白(CRP)和單核細(xì)胞趨化因子-1(MCP-1)水平在0、12周末經(jīng)耳緣靜脈抽血，用酶學(xué)法測(cè)血清TG、TC、HDL-C、LDL-C，其中LDL-C由Friedewald公式計(jì)算得出，按照試劑盒說(shuō)明書操作。
實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，各組高膽固醇塑料組動(dòng)物的血清TG、TC、LDL-C水平均明顯高于喂養(yǎng)前，也顯著高于正常對(duì)照組；口服銀杏內(nèi)酯可以降低TG、TC和LDL，升高HDL(p＜0.05)；口服阿司匹林也可以降低TG、TC和LDL，但升高HDL不明顯(p＞0.05)；而本發(fā)明組合物的高劑量口服組則明顯地降低了TG、TC和LDL，升高HDL(p＜0.01)。
再于12周末取靜脈血，利用固相酶聯(lián)免疫吸附法測(cè)血清CRP水平和MCP-1水平，結(jié)果見表9。
結(jié)果表明，口服芍藥苷的作用不明顯，銀杏內(nèi)酯、阿司匹林組和本發(fā)明組合物組的血清CRP和MCP-1的濃度仍高于正常，但明顯低于模型組和芍藥苷組。D組與C1之間雖然無(wú)顯著性差異，但是數(shù)據(jù)表明銀杏內(nèi)酯與芍藥苷藥物的合用具有使血清CRP和MCP-1進(jìn)一步降低的趨勢(shì)，其增強(qiáng)銀杏內(nèi)酯活性的機(jī)理有待進(jìn)一步探討。
測(cè)定指標(biāo)2主動(dòng)脈組織病理形態(tài)學(xué)改變并分析病變程度于12周末處死動(dòng)物，剖開胸腹腔，游離主動(dòng)脈全長(zhǎng)，剝離外膜脂肪組織，縱行剖開置于10％中性福爾馬林中保存，大體標(biāo)本行蘇丹III染色厚攝像，利用生物醫(yī)學(xué)圖像分析系統(tǒng)測(cè)定斑塊大體面積、內(nèi)膜總面積和血管周長(zhǎng)，計(jì)算斑塊與內(nèi)膜面積比；并將主動(dòng)脈全長(zhǎng)分段，常規(guī)石蠟包埋，制成4μm厚度的病理切片，染色，測(cè)量?jī)?nèi)膜厚度、中膜厚度，計(jì)算內(nèi)膜與中膜厚度比，并加以平均，作為病理形態(tài)學(xué)觀察指標(biāo)的測(cè)定值，見表8。
測(cè)定指標(biāo)3斑塊部位的巨噬細(xì)胞、平滑肌細(xì)胞陽(yáng)性率以及COX-2的表達(dá)取4μm厚主動(dòng)脈組織切片采用EnVision法進(jìn)行免疫組織化學(xué)染色，設(shè)替代對(duì)照(PBS代替一抗)，棕黃色顆粒裝產(chǎn)物為陽(yáng)性標(biāo)記，采用細(xì)胞圖像分析系統(tǒng)計(jì)算陽(yáng)性細(xì)胞百分率，取平均值，見表10。
病理形態(tài)學(xué)改變與模型組比較，芍藥苷組各項(xiàng)指標(biāo)均無(wú)明顯變化；與模型組比較，銀杏內(nèi)酯、阿司匹林組和本發(fā)明組合物組的各項(xiàng)指標(biāo)呈顯著性減少，同時(shí)巨噬細(xì)胞含量明顯減少，平滑肌細(xì)胞含量明顯增加，其中以本發(fā)明組合物組最為顯著(p＜0.01)。
表9.對(duì)兔主動(dòng)脈的CRP和MCP-1水平的影響n＝10

與模型組比較*p＜0.05**p＜0.01
表10.兔主動(dòng)脈組織病理形態(tài)學(xué)改變以及斑塊部位的巨噬細(xì)胞、平滑肌細(xì)胞陽(yáng)性率(％)

與模型組比較*p＜0.05，**p＜0.01七.抗炎性方面的藥理作用1.對(duì)二甲苯致小鼠皮膚毛細(xì)血管通透性的影響1.1材料本發(fā)明藥物組合物芍藥+銀杏葉8∶1，30mg/kg、50mg/kg灌胃；正常對(duì)照組生理鹽水；陽(yáng)性對(duì)照藥銀杏葉提取物(50mg/kg)；芍藥提取物(50mg/kg)；雙黃連提取物(50mg/kg)；1.2實(shí)驗(yàn)方法參照陳奇主編的《中藥藥理研究方法學(xué)》制作動(dòng)物炎癥模型，結(jié)果見下表

與對(duì)照組比較，*P＜0.05，**P＜0.01；與芍藥提取物比較，△P＜0.05，△△P＜0.01；與銀杏葉提取物比較，#P＜0.05，##P＜0.01。
1.3結(jié)果無(wú)論是芍藥、銀杏葉提取物，還是公認(rèn)的解熱抗炎藥物雙黃連，以及本發(fā)明組合物，都可以減輕二甲苯致小鼠皮膚毛細(xì)血管通透性，具有抑制炎癥早期毛細(xì)血管通透性增高的作用，與對(duì)照組相比具有顯著性差異，與同等劑量的單組分提取物組相比，本發(fā)明高劑量組合物組也具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.05)；而且，申請(qǐng)人還在試驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，本發(fā)明組合物對(duì)炎癥的早期、中期和晚期均呈現(xiàn)明顯的抑制作用和效果，推測(cè)其機(jī)制可能是銀杏葉提取物可抑制體內(nèi)早期的炎性介質(zhì)PGE2的合成，而芍藥苷更側(cè)重于抑制炎癥晚期的肉芽組織增生，因此，本發(fā)明芍藥和銀杏葉在均具有抗炎作用的前提下，二藥合用，效果明顯增強(qiáng)，顯示出顯著的協(xié)同作用。
八.其它面的藥理作用1.治療大鼠脂肪肝的療效觀察1.1材料與方法本發(fā)明組合(芍藥苷+銀杏葉提取物10∶1，40mg/kg、20mg/kg)；銀杏葉提取物(40mg/kg)；芍藥苷(20mg/kg)。
雄性SD大鼠50只，體重160g±10g。正常喂養(yǎng)1周后，隨機(jī)分為2組實(shí)驗(yàn)組(40只)，飼以高脂高膽固醇飼料(10.0％豬油、2.0％膽固醇、0.5％膽酸鈉、87.5％基礎(chǔ)飼料)；和正常對(duì)照組(10只)，給予基礎(chǔ)飼料，兩組大鼠均自由進(jìn)水。
12周后，從實(shí)驗(yàn)組隨機(jī)抽取8只，正常對(duì)照組隨機(jī)抽取2只，處死動(dòng)物取肝臟做病理切片，驗(yàn)證脂肪肝造模成功。將余下實(shí)驗(yàn)組大鼠按體重層次再隨機(jī)分為組合物高劑量治療組、組合物低劑量治療組、銀杏葉治療組及芍藥苷治療組。正常對(duì)照組以同等容積蒸餾水灌胃，各組均予基礎(chǔ)飼料飼養(yǎng)，給藥4周后取血及肝組織，檢測(cè)各項(xiàng)指標(biāo)。
1.2觀察指標(biāo)(1)實(shí)驗(yàn)結(jié)束處死動(dòng)物時(shí)，稱體重及肝重；(2)生物化學(xué)指標(biāo)測(cè)定空腹血糖(FBG)總膽固醇(TC)、甘油三酯(TG)和高密度脂蛋白-膽固醇(HDL-C)的含量、空腹血清胰島素(FINS)；(3)胰島素抵抗指數(shù)胰島素抵抗指數(shù)HOMA-IR＝(FBG×FINS)/22.5；和(4)組織病理學(xué)檢查分光光度法測(cè)定TG的含量。
1.3結(jié)果實(shí)驗(yàn)進(jìn)行中各組均無(wú)動(dòng)物死亡。
實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)，銀杏葉、芍藥苷治療組動(dòng)物的體重、肝指數(shù)(肝濕重/體重×100％)比正常對(duì)照組顯著增高(P＜0.05；P＜0.01)；與銀杏葉、芍藥苷治療組比較，高、低劑量組合物治療組的體重、肝指數(shù)顯著降低(P＜0.01)；與正常對(duì)照組相比，高、低劑量組合物治療組體重、肝指數(shù)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，見下表11。
血清和肝組織勻漿脂質(zhì)的變化銀杏葉、芍藥苷治療組血清TG、TC及肝組織TG較正常對(duì)照組升高；與銀杏葉、芍藥苷治療組比較，高、低劑量組合物治療組中上述指標(biāo)均明顯改善，見下表12。
FBG和FINS等變化銀杏葉治療組FBG和FINS及HOMA-IR呈增高趨勢(shì)；芍藥苷治療組FBG和FINS及HOMA-IR呈下降趨勢(shì)；與銀杏葉組比較，高、低劑量組合物組的FINS及HOMA-IR顯著下降，其余比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，見下表13。
病理學(xué)改變(1)肉眼觀察銀杏葉、芍藥治療組大鼠肝外觀呈奶油黃，體積明顯增大，邊緣變鈍，質(zhì)地變軟，切面略帶油膩感；高、低劑量組合物治療組肝外觀接近正常對(duì)照組；和(2)光鏡觀察銀杏葉、芍藥苷治療組肝小葉中心帶肝細(xì)胞中出現(xiàn)大小不等的脂肪滴，部分肝細(xì)胞核則被脂肪滴擠壓而明顯偏位，小葉內(nèi)及匯管區(qū)局灶性炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，伴有一定程度的點(diǎn)片狀壞死；高、低劑量組合物治療組肝小葉和肝血竇結(jié)構(gòu)清晰，細(xì)胞內(nèi)見少許小泡性脂肪滴，偶見肝細(xì)胞壞死。
1.4結(jié)論上述實(shí)驗(yàn)提示，本發(fā)明組合用于大鼠脂肪肝模型干預(yù)可以顯著改善脂肪肝病變程度，改善脂肪代謝，優(yōu)于單獨(dú)應(yīng)用銀杏葉或芍藥干預(yù)，具有顯著性差異。
由于非酒精性脂肪肝的發(fā)生與胰島素抵抗密切相關(guān)，且患者常合并肥胖、高血糖、高胰島素血癥。我們認(rèn)為本發(fā)明組合物是通過(guò)降低患者胰島素抵抗，改善脂代謝，抗細(xì)胞炎性等方面產(chǎn)生改善脂肪肝病變的作用，且這種作用在單獨(dú)使用銀杏葉及芍藥的情況下均未呈現(xiàn)，其協(xié)同作用機(jī)制值得進(jìn)一步探討。
表11 大鼠體重、肝指數(shù)的變化(X±S，n＝8)

與正常對(duì)照組比較*P＜0.05；#P＜0.01；與正常對(duì)照組比較□P＞0.05；與銀杏葉、芍藥治療組比較▲P＜0.01表12 大鼠血清及肝勻漿脂質(zhì)的變化(X±S)


與正常對(duì)照組比較*p＜0.05；#p＜0.01；與模型對(duì)照組比較□P＞0.05；與銀杏葉、芍藥治療組比較▲p＜0.05表13 大鼠空腹血糖、血清胰島素及胰島素抵抗指數(shù)水平的變化(X±S)

與銀杏葉治療組比較*p＜0.052.治療兔視網(wǎng)膜靜脈阻塞的實(shí)驗(yàn)研究2.1材料和方法純種雄性新西蘭白兔48只，造成視網(wǎng)膜靜脈阻塞模型。
分為6組，每組8只，即空白對(duì)照組、本發(fā)明組合物治療組(芍藥苷+銀杏黃酮1∶10，分高、中、低三個(gè)劑量組)、銀杏黃酮治療組、芍藥苷治療組，造模后第3天開始連續(xù)給藥10天，空白對(duì)照組給予等容量飲用水。
2.2結(jié)果眼底情況造模第2天可見眼底出血，第6天本發(fā)明組合物高劑量組眼底出血明顯開始吸收，而空白對(duì)照組眼底出血20天后才明顯開始吸收，差別有顯著性差異。銀杏黃酮治療組和芍藥苷治療組分別與第11、18天開始眼底出血明顯開始吸收，這與空白對(duì)照組相比無(wú)顯著性差異。血液完全吸收后，空白對(duì)照組與芍藥苷治療組的眼底血管細(xì)而迂曲，而本發(fā)明組合物3個(gè)劑量組的眼底血管均接近正常情況，銀杏黃酮治療組的眼底血管改變介于空白對(duì)照組和本發(fā)明組合物低劑量組之間。結(jié)果見表14。
眼底照相及熒光素眼底血管造影檢查本發(fā)明組合物3個(gè)劑量組、銀杏黃酮治療組眼底血管形態(tài)接近正常，未見熒光素滲漏，亦未見新生血管，而空白對(duì)照組、芍藥苷組雖然眼底出血已經(jīng)吸收，但仍可見熒光素滲漏，并可見新生血管。眼底照相見6個(gè)組出血均已完全吸收，但血管形態(tài)不同，情況與直接檢眼鏡的檢查一致。
2.3結(jié)論實(shí)驗(yàn)表明，本發(fā)明組合物對(duì)兔實(shí)驗(yàn)性視網(wǎng)膜中央靜脈阻塞有非常顯著的治療作用。尤其值得注意的是，單獨(dú)施用的銀杏黃酮或芍藥均無(wú)法達(dá)到本發(fā)明組合物的治療效果。我們認(rèn)為，這與組合物中銀杏黃酮和芍藥苷在下述作用機(jī)制中產(chǎn)生明顯協(xié)同作用有關(guān)擴(kuò)張血管，減少血管阻力；改善微循環(huán)，提高耐缺氧能力；抑制纖維蛋白合成，抗凝血和組織增生；抑制過(guò)敏介質(zhì)的釋放，抗過(guò)敏反應(yīng)。
表14 對(duì)兔眼底出血完全吸收時(shí)間的影響(x±s，n＝8)

與生理鹽水組比較，*P＜0.05**P＜0.01毒理學(xué)小鼠急毒、長(zhǎng)毒實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明本發(fā)明的組合物靜脈注射小鼠的最大耐受量為1.5g/kg，腹腔注射的LD50為3g/kg；與對(duì)照組相比，本發(fā)明組合物在給藥30周時(shí)，各臟器系數(shù)均無(wú)顯著差異。
病理形態(tài)學(xué)觀察大鼠主要臟器均未見與受試藥物毒性相關(guān)的病理改變。
缺血性腦卒中二級(jí)預(yù)防的臨床觀察1.對(duì)象入選標(biāo)準(zhǔn)年齡＜75歲；缺血性腦卒中；首發(fā)或二次復(fù)發(fā)病例；急性期3月后；有CT/MRI診斷，并與臨床表現(xiàn)相符合。
排除標(biāo)準(zhǔn)各種出血性卒中；三次及以上腦卒中發(fā)作；影像學(xué)檢查為缺血性腦卒中，而無(wú)臨床癥狀或體征的病人；無(wú)CT/MRI確診的腦卒中患者；缺血性腦卒中急性期3個(gè)月內(nèi)；瘤卒中；血液??；嚴(yán)重肝腎功能損傷；靜息卒中。
2.方法與結(jié)果本發(fā)明組合物組400例病人，口服(銀杏內(nèi)酯15mg+芍藥苷40mg/天)；藥物對(duì)照組480例病人，阿司匹林，口服75mg/天；
空白對(duì)照組470例病人，不提供阿司匹林或組合物藥物。
于實(shí)驗(yàn)開始的第30、60、90、180天，觀察是否有卒中復(fù)發(fā)、副作用(出現(xiàn)胃腸不適、腹痛、惡心、噯氣等癥狀)和嚴(yán)重副作用(以出現(xiàn)黑便，大便潛血檢查陽(yáng)性，經(jīng)停藥抗酸治療后黑便、潛血消失為判定上消化道出血副反應(yīng)依據(jù))，評(píng)定復(fù)發(fā)必須有CT/MRI確診。結(jié)果見下表表15.180天復(fù)發(fā)率觀察表

表16.180天消化道副反應(yīng)觀察表

表17.180天上消化道出血副反應(yīng)觀察表

3.結(jié)論本發(fā)明組合物及阿司匹林均可以降低缺血性腦卒中的復(fù)發(fā)率，兩者效果相當(dāng)，與空白對(duì)照組相比，本發(fā)明組合物組和藥物對(duì)照組均有著顯著性差異。
服用阿司匹林的480例病人中出現(xiàn)41例副作用和13例嚴(yán)重副作用，而服用本發(fā)明組合物的400例病人只有9例副作用，1例嚴(yán)重副作用產(chǎn)生，兩組對(duì)比有顯著性差異。
制劑實(shí)施例實(shí)施例1 膠囊劑處方一取銀杏葉提取物(純度97％，其中黃酮含24％，內(nèi)酯含6％)5g，取赤芍提取物(含芍藥苷20％)5g；處方二取銀杏葉提取物(純度96％，其中黃酮含22％，內(nèi)酯含5％)3g，取赤芍提取物(含芍藥苷15％)8g；處方三取銀杏葉提取物(純度90％，其中黃酮含20％，內(nèi)酯含3％)8g，取赤芍提取物(含芍藥苷10％)5g；以上三種處方采取同樣工藝制備膠囊劑加入淀粉，混合均勻，制粒、粉碎過(guò)篩、干燥制得顆粒，裝入20粒硬膠囊中即得。
經(jīng)檢測(cè)，處方一每膠囊中含有銀杏內(nèi)酯15mg、和芍藥苷50mg；處方二每膠囊中含有銀杏內(nèi)酯7.5mg、和芍藥苷60mg；處方三每膠囊中含有銀杏內(nèi)酯12mg、和芍藥苷25mg。
實(shí)施例2 片劑取銀杏內(nèi)酯8g，芍藥苷60g，磨細(xì)粉過(guò)80目篩，加適量糊精，混勻，先用40-60％乙醇濕勻，后用淀粉漿制粒，過(guò)篩后80℃干燥，制得1000片，包衣即得。經(jīng)檢測(cè)，每片中含有銀杏內(nèi)酯8mg、和芍藥苷60mg。
實(shí)施例3 軟膠囊劑取銀杏黃酮40g、芍藥苷20g，加入植物油中混勻，用明膠作囊殼材料，壓制成1000粒軟膠囊。經(jīng)檢測(cè)，每膠囊中含有銀杏黃酮40mg、和芍藥苷20mg。
實(shí)施例4 緩釋片取銀杏內(nèi)酯40g、芍藥苷5g、加入乳糖、微晶纖維素、羥丙甲基基纖維素、聚乙烯吡咯、硬質(zhì)酸鎂，按照標(biāo)準(zhǔn)制粒和壓片工藝制備1000粒。經(jīng)檢測(cè)，每膠囊中含有銀杏內(nèi)酯40mg、和芍藥苷5mg。
實(shí)施例5 凍干針劑取羥丙基-β-環(huán)糊精80克、葡甲胺3克加2000ml注射用水溶解，得溶液I，85℃保溫，備用；另取銀杏內(nèi)酯10克加適量丙酮使其溶解，取芍藥苷20g，再將二者緩緩加入溶液I中進(jìn)行溶解，保溫65分鐘，然后放冷至室溫，濾過(guò)，再微孔濾膜過(guò)濾，分裝1000支，凍干，其凍干工藝為，先-15℃冷凍成型，再-40℃冷凍降溫，冷凍下真空干燥，36小時(shí)后，緩緩升溫，直至25℃封蓋，即得。經(jīng)檢測(cè)每支含有銀杏內(nèi)酯10mg、和芍藥苷20mg。
實(shí)施例6 功能性保健食品取銀杏葉提取物100g、芍藥提取物200g、維生素E 50g、甜味添加劑適量，加入淀粉等輔料至總質(zhì)量500g，混勻，按標(biāo)準(zhǔn)工藝壓片成2000片，即得功能性保健食品片劑。
實(shí)施例7 功能性保健食品取銀杏葉提取物500g、芍藥提取物100g，混勻、噴霧干燥，即得功能性保健食品添加劑，可以直接添加于液態(tài)、固體食品或保健食品中。
權(quán)利要求
1.一種藥用或功能性保健品用組合物，包括以下組分a.銀杏提取物，或主要含有銀杏內(nèi)酯和銀杏黃酮作為活性成分的銀杏提取物，或銀杏黃酮單體和銀杏內(nèi)酯單體、或銀杏內(nèi)酯單體、或銀杏黃酮單體；和b.芍藥的干燥根粉末，或含有芍藥苷、芍藥內(nèi)酯苷、羥基芍藥苷、氧化芍藥苷、苯甲酰芍藥苷、芍藥新苷的芍藥提取物，或芍藥苷單體，其中組分a中銀杏內(nèi)酯與組分b中芍藥苷的重量比例為0.01-20∶1。
2.如權(quán)利要求1的藥物組合物，包括以下組分a.主要含有銀杏內(nèi)酯和銀杏黃酮作為活性成分的銀杏提取物；和b.含有芍藥苷、芍藥內(nèi)酯苷的芍藥提取物。
3.如權(quán)利要求1的藥物組合物，包括以下組分a.銀杏黃酮單體和銀杏內(nèi)酯單體；和b.含有芍藥苷、芍藥內(nèi)酯苷的芍藥提取物。
4.如權(quán)利要求1的藥物組合物，包括以下組分a.銀杏內(nèi)酯單體；和b.芍藥苷單體，其中銀杏內(nèi)酯與芍藥苷的重量比例為0.05-10∶1。
5.如權(quán)利要求1的藥物組合物，包括以下組分a.銀杏黃酮單體；和b.芍藥苷單體，其中銀杏黃酮與芍藥苷的重量比例為0.05-10∶1。
6.如權(quán)利要求4的藥物組合物，其中銀杏內(nèi)酯與芍藥苷的重量比例為0.1-1∶1。
7.如權(quán)利要求5的藥物組合物，其中銀杏黃酮與芍藥苷的重量比例為0.1-1∶1。
8.如權(quán)利要求1-7之一的藥物組合物，為口服或非腸道給藥制劑形式。
9.權(quán)利要求1-8之一的藥物組合物在制備用于治療和/或預(yù)防糖尿病及其并發(fā)癥、老年癡呆癥、心腦血管疾病、腦細(xì)胞保護(hù)、視網(wǎng)膜中央靜脈阻塞、高脂血癥、脂肪肝的藥物中的應(yīng)用。
10.權(quán)利要求1-9之一的藥物組合物在制備用于預(yù)防心腦血管疾病復(fù)發(fā)及防止血管成形術(shù)后再狹窄的藥物中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種藥用或功能性保健品用組合物、制備方法及其應(yīng)用，所述組合物含有天然植物提取物或單體為活性成分。本發(fā)明藥物組合物可用于治療和預(yù)防糖尿病及其并發(fā)癥、老年癡呆癥、心腦血管疾病、腦細(xì)胞保護(hù)、視網(wǎng)膜中央靜脈阻塞、高脂血癥、脂肪肝，以及用于預(yù)防心腦血管疾病的復(fù)發(fā)及防止血管成形術(shù)后再狹窄。
文檔編號(hào)A61P25/28GK1813920SQ20051012774
公開日2006年8月9日 申請(qǐng)日期2005年12月5日 優(yōu)先權(quán)日2005年12月5日
發(fā)明者林艷和, 潘錫平, 林谷風(fēng) 申請(qǐng)人:深圳市生物谷科技有限公司