專利名稱：以殼聚糖及其衍生物作為藥物載體負(fù)載丹參提取物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于制藥技術(shù)領(lǐng)域，具體地講，涉及以殼聚糖及其衍生物或海藻酸鈉作為控制釋放丹參提取物的載體，尤其是通過殼聚糖接枝疏水鏈獲得水溶性的高分子膠束，再負(fù)載丹參提取物，達(dá)到對丹參提取物的控制釋放的目的。
背景技術(shù)：
丹參是我國的一種傳統(tǒng)中藥，在臨床上廣泛應(yīng)用于治療心血管疾病、中風(fēng)、慢性遷延性肝炎、腎臟疾患、感染性疾病等。丹參的活性成分包括脂溶性的二萜醌類化合物和水溶性的酚酸類化合物。二萜醌類化合物是丹參脂溶性的主要藥效成分，常統(tǒng)稱為丹參酮類化合物，它們具有顯著的降血壓、降血脂作用，從而達(dá)到抗動脈粥樣硬化的效果，此外還有抗腫瘤、抗氧化、抗菌消炎等作用。然而丹參酮是脂溶性物質(zhì)，存在的最大用藥障礙是難溶于水，生物利用度低，造成制劑和應(yīng)用上的困難。1978年，錢名坤等將丹參酮II A磺化并制成鈉鹽，大大提高了丹參酮的水溶性，并制成針劑用于靜脈注射，但由于丹參酮II A磺酸鈉水溶性過大，注入體內(nèi)后迅速隨尿液和糞便排出，藥效得不到應(yīng)有的發(fā)揮。近年來，如何解決丹參酮類藥物的水溶性困難一直處在不斷研究和探索之中，目前我國已經(jīng)公布了幾十個專利，然而這些解決方案都有不甚理想之處，還有很多地方需要完善和改進(jìn)，譬如中國專利CN01141436通過環(huán)糊精包合增溶丹參酮，然而環(huán)糊精自身在水中的溶解度低，增溶作用有限。此外研究發(fā)現(xiàn)，在水溶液中，溶解的環(huán)糊精類物質(zhì)對制劑中的藥物或其他成分能產(chǎn)生象酶一樣的催化作用，這樣會加速被包合物的分解(Rainer H Muller等《現(xiàn)代給藥系統(tǒng)的理論和實踐》，人民軍醫(yī)出版社，2004)，而丹參酮是活性位點(diǎn)多且活性強(qiáng)的物質(zhì)，并不穩(wěn)定。
殼聚糖(chitosan)是為人們所熟悉的優(yōu)良藥物載體，其化學(xué)名為聚-1，4-β-葡萄糖胺，來源于蝦蟹外殼中的幾丁質(zhì)(俗稱甲殼素，甲殼質(zhì)，chitin)脫去大部分或全部氨基上的乙?；?，是自然界中儲量僅次于纖維素的第二大天然高分子可再生資源，來源極其豐富，價格便宜，由于存在良好的生物可降解性、生物相容性和無毒副作用，已在醫(yī)藥領(lǐng)域中得到深入的研究和廣泛的應(yīng)用。因殼聚糖及其衍生物具有生物活性的多樣性使其成為具有多種功能的藥物輔料，成為極有前景的新型藥劑，按照它們應(yīng)用的目的不同大致可分為緩/控釋劑、吸收劑、助溶劑、黏附劑、增效劑等。具體說，殼聚糖具有良好的成摸性能，容易形成凝膠，又因其表面帶正電荷，容易與海藻酸鈉或三聚磷酸鈉等通過離子交聯(lián)形成微球，從而可作為緩釋骨架片劑、顆粒劑、丸劑、緩釋微球(囊)、緩釋包衣、膠囊的輔料；殼聚糖及其衍生物可作為某些難溶藥物(例如灰黃霉素)的助溶劑，增加藥物的溶解度，利于藥物的吸收，提高其生物利用度。此外，殼聚糖及其衍生物還有一些獨(dú)特的生物活性，譬如具有抗菌性、抗腫瘤性、免疫調(diào)節(jié)活性，具有對膽固醇代謝的調(diào)節(jié)作用(侯春林等《幾丁質(zhì)和醫(yī)學(xué)》，上?？茖W(xué)技術(shù)出版社，2001)，殼聚糖的部分生物功能與丹參活性成分的藥效相似，尤其是對膽固醇代謝的調(diào)節(jié)作用，使殼聚糖及其衍生物對脂肪肝、肥胖病、動脈粥樣硬化等疾病的治療產(chǎn)生積極影響，使其有希望應(yīng)用于臨床和醫(yī)療保健造福于人類。殼聚糖及其衍生物對膽固醇代謝的調(diào)節(jié)機(jī)理初步研究如下由于能部分切斷膽汁的肝腸循環(huán)，以及攜帶正電荷的殼聚糖可與攜帶負(fù)電荷的脂類物質(zhì)相結(jié)合，從而降低血液中膽固醇的水平，抑制動脈粥樣班塊的擴(kuò)大和脂肪肝的形成。
近年來，用生物可降解的高分子膠束(polymer micelles)負(fù)載疏水藥物引起了藥學(xué)界的極大興趣。高分子膠束通常是有既含有親水鏈又含有疏水鏈的兩親性高分子在溶液中通過自組裝(self-assembly)形成粒徑為幾個到幾百個納米的納米顆粒(nanoparticle)，它具有疏水性的內(nèi)核用以包裹或負(fù)載脂溶性藥物，親水鏈段圍繞在疏水核外形成親水外殼。最近，Lee，K.Y等人通過殼聚糖接枝脫氧膽汁酸制備了水溶性的高分子膠束(Macromolecules31(1998)378-383；Langmuir 14(1998)2329-2332)，Chen，X.G等人通過殼聚糖接枝亞麻酸?；苽淞怂苄詺じ叻肿幽z束(J.Agric.Food Chem.51(2003)3135-3139)，由于膽汁酸和亞麻酸都是很特殊的脂肪酸，原料稀少，價格昂貴，如果能用普通的脂肪酸或鹵代烴為原料與殼聚糖反應(yīng)制備水容性膠束，則殼聚糖衍生物膠束才有可能作為一種新型藥劑實現(xiàn)在制藥工業(yè)上的應(yīng)用。但是，通常情況下殼聚糖接枝普通的長鏈?zhǔn)杷；?，所得的產(chǎn)物是不溶于水的，Hirano，S等報道了殼聚糖通過與酸酐反應(yīng)接枝7個碳原子以下的疏水性?；侨苡谒模珡?個碳開始，引入多碳原子疏水?；难苌锞蝗苡谒?Macromol.Biosci.3(2003)629-631)。而包括Wang and Engberts等在內(nèi)的許多研究小組都報道了通過接枝側(cè)鏈?zhǔn)杷奶荚觽€數(shù)至少不低于8個時，所得的兩親性衍生物才有通過自組裝形成膠束的可能(Int.J.Pharm.224(2001)185-199)。至于接疏水性烷基的情況，王愛勤等報道了碳原子數(shù)目少于8個的鹵代烴與殼聚糖反應(yīng)產(chǎn)物可溶于水，鹵代烴碳原子個數(shù)更高的接枝產(chǎn)物則不溶于水(功能高分子學(xué)報11(1998)83-86)。本發(fā)明通過改進(jìn)反應(yīng)條件，在殼聚糖上引入碳原子個數(shù)超過8個的疏水性酰基或烷基所得產(chǎn)物能溶于水，并能通過自組裝形成納米粒徑的高分子膠束，這些膠束既能通過疏水性內(nèi)核的自聚集作用(self-aggregation)包裹脂溶性的丹參酮類化合物，也能因殼聚糖主鏈上的氨基和羥基與丹參提取物中的酚酸類成分存在較強(qiáng)氫鍵作用，從而使這類酚酸類物質(zhì)也容易負(fù)載在殼聚糖高分子膠束上。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是把丹參活性成分負(fù)載在殼聚糖及其衍生物上，增加丹參脂溶性成分的溶解度，延長丹參活性成分的釋放時間，利于活性成分的吸收，提高其生物利用度，并利用作為藥劑的殼聚糖及其衍生物具有與丹參提取物部分相似的藥效，達(dá)到提高藥物的協(xié)同效應(yīng)的目的，尤其是希望通過把丹參提取物負(fù)載在水溶性的殼聚糖衍生物納米膠束的疏水核中，實現(xiàn)生物體對丹參脂溶性成分的充分吸收和利用。
本發(fā)明運(yùn)用殼聚糖及其衍生物增溶或負(fù)載丹參提取物的方法主要分為三類。第一類是用殼聚糖或海藻酸鈉制備的小球或微球負(fù)載藥物。方法是先把殼聚糖溶解在稀酸溶液中，加入丹參提取物固體或提取物的有機(jī)溶液，分散均勻后，滴入稀堿溶液固化形成載藥小球，或滴入表面帶負(fù)電荷的三聚磷酸鈉或海藻酸鈉或羧甲基纖維素的水溶液，通過離子交聯(lián)形成載藥小球，冷凍干燥得產(chǎn)品，可用于口服，相似的方法包括把丹參提取物分散在海藻酸鈉的水溶液中，用鈣離子交聯(lián)，得載藥小球。
第二類方法是用殼聚糖改性制備水凝膠(hydrogel)后再負(fù)載丹參提取物。其中一類水凝膠是在水溶性的殼聚糖衍生物(如羥乙基殼聚糖，glycol chitosan)上引入長鏈?zhǔn)杷?如軟脂?；?、硬脂酰基等)而制備的，其原理是通過疏水性基非共價交聯(lián)而獲得水凝膠，制備方法可參見Martin，L.等人的方法(Eur.J.Pharm.Biopharm.55(2003)35-45.J.controlled release80(2002)87-100)。若是為了應(yīng)用的需要，可在殼聚糖上既引入長鏈?zhǔn)杷忠爰句@鹽(提高抗菌能力)，或羧甲基(提高保濕功能)等功能基團(tuán)，若是為了增加水溶性，獲得水溶性較大的水凝膠(在水中實際上是一中黏度較大的溶液)，也可以只引入季銨鹽或羧甲基。另一類殼聚糖水凝膠是通過在殼聚糖的主鏈上接枝親水鏈聚乙二醇(PEG)而獲得的，接枝的方法文獻(xiàn)報道了很多，本發(fā)明設(shè)計的一種較經(jīng)濟(jì)的方法是通過甲氧基封端的聚乙二醇(mPEG)與丁二酸酐反應(yīng)引入活性羧基，再與亞硫酰氯反應(yīng)，把末端羧基變成酰氯后，再與殼聚糖反應(yīng)，主要產(chǎn)物是在殼聚糖的氨基上引入聚乙二醇。水凝膠負(fù)載丹參提取物的方法如下，把丹參提取物固體或有機(jī)溶液分散在水凝膠溶液中，冷凍干燥得到載藥粉末。
第三類方法是用殼聚糖衍生物高分子納米膠束增溶或負(fù)載丹參提取物。殼聚糖衍生物高分子膠束又分為兩大類，一類是通過在殼聚糖上既引入疏水基(如疏水性烷基或酰基)又引入親水基如磷酸基(carbohydrate polymers 51(2003)425-429)、羧甲基等，這類物質(zhì)的性質(zhì)與親水基和疏水基的取代度有很大關(guān)系，若取代度控制不好，容易變成水凝膠(hydrogels)、囊泡(vesicles or polysoap)、高分子表面活性劑(polymeric surfactant)，Uchegbu，I.F領(lǐng)導(dǎo)的研究小組有相當(dāng)多的報道(Inter.J.Pharm.224(2001)185-199.Polymer 45(2004)837-841.)，若合成產(chǎn)物得到的是上述非高分子膠束物質(zhì)(以沒有確定的臨界膠束濃度界定)，它們對丹參酮類藥物也有增溶和負(fù)載作用，只是增溶和負(fù)載能力比高分子膠束要弱很多。另一類方法是由本發(fā)明提出的在殼聚糖上只引入疏水性烷基或?；?，而獲得粒徑較小，膠束結(jié)構(gòu)緊密，臨界聚集濃度(CAC，critical aggregate concentration)低的殼聚糖衍生物高分子膠束，眾所周知，CAC數(shù)值越小，膠束在低濃度越穩(wěn)定。這類膠束的合成基本方法是把溶脹的殼聚糖均勻分散在液體分散相中，滴加由疏水性脂肪酸或芳香酸制備的酸酐或酰鹵，或滴加含疏水基團(tuán)的鹵代烴，40℃～100℃下溫和反應(yīng)2h～24h。該方法簡便經(jīng)濟(jì)，而得到的殼聚糖高分子膠束性能最佳，載藥量(loading capacity)大，藥物釋放時間長，是負(fù)載丹參提取物的理想載體。以殼聚糖衍生物高分子膠束負(fù)載丹參提取物的方法如下，先把丹參酮類藥物的固體粉末溶解在有機(jī)溶劑中或直接用提取了丹參活性成分的有機(jī)溶液，該溶劑是丹參酮類藥物的良溶劑，該溶劑在水中又有一定的溶解性，能微溶于水或與水混溶，通常是甲醇、乙醇、丙醇、丙酮、N，N-二甲酰胺(DMF)、二甲基亞砜(DMSO)、乙醚、二氯甲烷、三氯甲烷中的一種或幾種混合，但不局限于這些，再往溶解了丹參提取物的有機(jī)溶劑中添加能在水中形成膠束的殼聚糖衍生物，均勻攪拌的同時，緩慢加入有機(jī)溶劑量數(shù)倍或數(shù)十倍的水，隨著丹參酮類物質(zhì)緩慢地沉淀析出和殼聚糖衍生物緩慢溶解形成高分子膠束的同時，一部分沉淀析出的丹參酮類藥物被裹進(jìn)和富集在膠束的疏水核中，繼續(xù)攪拌，使全部液體混合均勻，冷凍干燥、噴霧干燥或常溫減壓干燥，揮發(fā)除去所有水分和有機(jī)溶劑，得到粉末或絲狀的藥物組合物固體，用有機(jī)溶劑淋洗3～5次除去附在粉末或絲狀組合物固體表面的疏水藥物，再減壓干燥得負(fù)載了丹參提取物的高分子膠束固體粉劑，其溶于水得透明溶液，載藥的膠束粒徑為10～300nm(TEM測定的結(jié)果)。
一、本發(fā)明設(shè)計的殼聚糖高分子膠束的制備方法與合成路線示意圖如下1.通過殼聚糖與酸酐反應(yīng)先用脂肪酸或芳香酸通過分子間脫水而得到酸酐，把被極性溶劑溶脹的殼聚糖分散在有機(jī)溶劑中，攪拌的同時滴加酸酐，40～70℃保溫反應(yīng)2～24h，反應(yīng)結(jié)束后加丙酮沉淀，過濾，濾餅依次用丙酮、乙醚洗滌3～5次，除盡脂肪酸或芳香酸及過量的酸酐，40～60℃真空干燥得產(chǎn)品。
合成路線圖解如下
其中R為疏水性烷基2.通過殼聚糖與酰鹵反應(yīng)先用脂肪酸或芳香酸與亞硫酰氯，三氯化磷，五氯化磷，三溴化磷，五溴化磷中的一種反應(yīng)制得酰鹵，把被極性溶劑溶脹的殼聚糖均勻分散在有機(jī)溶劑中，攪拌的同時滴加酰鹵，40～70℃保溫反應(yīng)5～24h，反應(yīng)結(jié)束后加丙酮沉淀，過濾，濾餅依次用丙酮、乙醚洗滌3～5次，除盡脂肪酸或芳香酸及過量的酰鹵，40～60℃真空干燥得產(chǎn)品。
合成路線圖解如下 其中R為疏水性烷基3.通過殼聚糖與鹵代烴反應(yīng)被極性溶劑溶脹的殼聚糖均勻分散在有機(jī)溶劑中，保持弱堿性，使PH值為8～11，攪拌的同時滴加鹵代烴，40～70℃保溫反應(yīng)5～24h，反應(yīng)結(jié)束后加丙酮沉淀，過濾，濾餅依次用丙酮，乙醚洗滌3～5次，除盡過量鹵代烴，40～60℃真空干燥得水溶性的N-烷基化殼聚糖產(chǎn)品。
合成路線圖解如下 其中R為疏水性烷基二、殼聚糖衍生物載藥材料的生物安全性說明殼聚糖本身的生物安全性早已經(jīng)過實驗和臨床驗證，作為藥物的包覆材料應(yīng)用很普遍，烷基化的衍生物中國專利CN03112981做了安全性驗證，王愛勤等還報道了烷基化衍生物有優(yōu)良的抗凝血性(功能高分子學(xué)報11(1998)83-86)。Kuen Yong Lee等報道了?；瘹ぞ厶怯辛己玫难合嗳菪院蜕锟山到庑?Biomaterials 16(1995)1211-1216)，Dong-Won Lee等也報道了?；瘹ぞ厶羌{米粒子有優(yōu)良的血液相容性(Carbohydrate polymer 58(2004)371-377)。故由本發(fā)明制備的N-烷基化殼聚糖和N-?；瘹ぞ厶歉捷d丹參提取物后，除可用作口服藥物的包覆材料外，因其能在水中形成納米膠束，還可用于肌肉和血液注射的劑型。
具體實施例方式
下面通過實施例對本發(fā)明做進(jìn)一步說明，它不限制本發(fā)明，本發(fā)明的范圍由權(quán)利要求限定。
實施例1丹參提取物的乙醇溶液取西藏林芝地區(qū)產(chǎn)丹參1Kg干燥粉碎，用二氧化碳超臨界萃取得65g漿狀浸膏，從中取10g加500mL 95％乙醇配成丹參提取物乙醇溶液，密封在帶磨口玻璃塞的棕色玻璃瓶中備用，據(jù)文獻(xiàn)混合提取物中大概含13個天然活性成分，分別是丹參酮II A，隱丹參酮，丹參酸甲酸，丹參酮I，二氫丹參酮I，丹參新醌甲，丹參新醌乙，丹參新醌丙，羥基醌，次甲丹參醌，1，2-二氫丹參醌，丹參內(nèi)酯，彌羅漢酚。
實施例2堿液固化殼聚糖負(fù)載丹參提取物小球的制備取粘均分子量為10萬，脫乙酰度為90％的殼聚糖2.0g溶于600mL2％的稀醋酸中，加入50mL實施例1配置的丹參提取物的乙醇溶液，攪拌分散均勻，用細(xì)嘴滴管緩慢滴入1000mL1.5％的NaOH溶液中，滴加的同時小心攪拌，過濾得載藥微球，冷凍干燥，掃描電鏡觀察得2～10um的小球。
實施例3三聚磷酸鈉交聯(lián)殼聚糖小球負(fù)載丹參提取物取粘均分子量為10萬，脫乙酰度為90％的殼聚糖2.0g溶于600mL 2％的稀醋酸中，加入1.0g明膠混合均勻，加入50mL實施例1配置的丹參提取物的乙醇溶液，攪拌分散均勻，通過7號針頭滴入1.0％三聚磷酸鈉交聯(lián)離子溶液中，調(diào)pH值到6左右，交聯(lián)30-40分鐘，過濾分出載藥小球，蒸餾水洗，常溫真空干燥，掃描電鏡觀察得15～30um的小球。
實施例4鈣離子交聯(lián)海藻酸鈉小球負(fù)載丹參酮類藥物取低黏度的海藻酸鈉溶于蒸餾水配成3％的溶液20mL，加入2mL 5.0％(W/V)丹參酮II A的乙醇溶液，攪拌均勻，通過7號針頭把上述混合液滴入500mL1.0％的CaCl2水溶液中固化3h，過濾收集小球，蒸餾水洗多次，常溫真空干燥，掃描電鏡觀察得30～50um的小球。
實施例5以殼聚糖接枝聚乙二醇獲得的水凝膠負(fù)載丹參提取物取Mn＝2000的甲氧基封端的聚乙二醇(mPEG)22g，置三口瓶中加熱到60C熔融，攪拌的同時，分批投入0.9g丁二酸酐反應(yīng)3h后，降溫到50℃，緩慢滴加0.8mL SOCl2反應(yīng)1h得末端活化了的聚乙二醇中間產(chǎn)物，減壓蒸餾除去過量的SOCl2。取4g粘均分子量為19萬，脫乙酰度為95％的殼聚糖置200mL異丙醇中，分批投入上述制備的聚乙二醇中間產(chǎn)物，60℃攪拌回流6h后結(jié)束反應(yīng)，趁熱過濾，分次倒入20mL乙醇洗滌濾渣5次，除去未接枝的聚乙二醇，40℃真空干燥備用。取上述聚糖衍生物2g溶于50mL蒸餾水，得粘稠的水凝膠，加入實施例1制備的丹參提取物的乙醇溶液10mL，攪拌分散均勻，冷凍干燥，得負(fù)載了丹參提取物的殼聚糖衍生物粉末。
實施例6以羧甲基殼聚糖負(fù)載丹參提取物取3.2g粘均分子量為19萬，脫乙酰度為95％的殼聚糖置200mL異丙醇中，磁力攪拌下分批加入0.9g氯乙酸，50℃反應(yīng)1h后傾入丙酮中，過濾，濾渣依次用乙醇和丙酮洗滌數(shù)次，40℃真空干燥得羧甲基殼聚糖產(chǎn)品。取上述羧甲基殼聚糖2.0g溶于100mL蒸餾水中，加入實施例1制備的丹參提取物的乙醇溶液20mL，攪拌分散均勻，冷凍干燥，得負(fù)載了丹參提取物的羧甲基殼聚糖固體粉末。
實施例7
以殼聚糖引入長鏈?zhǔn)杷榛汪燃谆难苌餅檩d體負(fù)載丹參酮類藥物取3.2g粘均分子量為19萬，脫乙酰度為95％的殼聚糖以水溶脹后，置200mL異丙醇中，升溫至60℃，磁力攪拌下，分批加入n-十四烷基溴2.3g保溫回流6h，再投入0.5g氯乙酸保溫回流1h，將反應(yīng)混合物傾入丙酮中，過濾，濾渣依次用乙醇和丙酮洗滌數(shù)次，40℃真空干燥，獲得接枝長鏈?zhǔn)杷榛汪燃谆臍ぞ厶茄苌锕腆w，其溶于水為水凝膠。取上述固體2.0g溶于100mL蒸餾水中，加入10mL5％(W/V)的丹參酮II A的乙醇溶液，攪拌分散均勻，冷凍干燥，得負(fù)載了丹參酮類藥物的殼聚糖衍生物水凝膠固體。
實施例8以殼聚糖引入長鏈?zhǔn)杷；图句@鹽的衍生物為載體負(fù)載丹參酮類藥物取粘均分子量為10萬，脫乙酰度為90％的殼聚糖1.61g溶于150mL 2％的稀醋酸中，加入350mL甲醇，升溫至50℃，緩慢滴加4.1g月桂酸酐(0.01mol(C12H25CO)2O)的甲醇溶液，反應(yīng)12h，將反應(yīng)混合物傾入丙酮中，過濾，濾渣依次用乙醇和丙酮洗滌數(shù)次，40℃真空干燥，元素分析得N-月桂酰殼聚糖的取代度為16％(定義為100個吡喃塘環(huán)中引入月桂?；膫€數(shù))。取上述N-月桂酰殼聚糖1.0g分散在80mL異丙醇中，加入0.12g NaOH，3.0g CH3I，0.15g NaI在40℃下反應(yīng)4h后，過濾，濾渣依次用無水乙醇，乙酸乙酯洗滌數(shù)次，再轉(zhuǎn)入透析袋中在流水中透析24h，冷凍干燥，元素分析最終產(chǎn)物的季銨鹽取代度為4.2％(在100個殼聚糖所有氨基中，季銨鹽占4.2個)。取上述最終產(chǎn)物0.5g溶于40mL蒸餾水，加入8mL5％(W/V)的丹參酮II A的乙醇溶液，攪拌分散均勻，冷凍干燥，得負(fù)載了丹參酮類藥物的殼聚糖衍生物水凝膠固體。
實施例9以N-正辛酰殼聚糖為原料制備高分子膠束取7.2g正辛酸置三口瓶中，滴入8mL醋酸酐，120℃下不斷蒸出醋酸，得到正辛酸酐。取粘均分子量為19萬，脫乙酰度為95％的殼聚糖1.5g用水溶脹后瀝干，轉(zhuǎn)入三口瓶，加入100mL DMSO(二甲基亞砜)，油浴加熱到60℃，滴加上述制備的正辛酸酐，保溫下攪拌反應(yīng)10h，停止反應(yīng)后趁熱過濾，濾餅依次用丙酮、乙醚洗3～5次，40℃真空干燥得產(chǎn)品N-正辛酰殼聚糖。產(chǎn)物易溶于水和DMSO，并能在水中自聚集形成膠束，用酸堿滴定和元素分析測得其取代度(定義為100個吡喃塘環(huán)中引入脂肪?；膫€數(shù)，以下相同)為46％。
實施例10
以N-軟脂酰為原料制備高分子膠束取5.0g軟脂酸置三口瓶中，滴入6mL醋酸酐，120℃下不斷蒸出醋酸，得到軟脂酸酐。取粘均分子量為19萬，脫乙酰度為95％的殼聚糖用水溶脹后瀝干，轉(zhuǎn)入三口瓶，加100mLDMSO，油浴加熱到60℃，滴加上述制備的軟脂酸酐，保溫下攪拌反應(yīng)10h，停止反應(yīng)后趁熱過濾，濾餅依次用丙酮、乙醚洗3～5次，40℃真空干燥得產(chǎn)品N-軟脂酰殼聚糖。產(chǎn)物易溶于水和DMSO，并能在水中自聚集形成膠束，用酸堿滴定和元素分析測得其取代度為23％，實施例11以N-硬脂酰殼聚糖為原料制備高分子膠束取7.0g硬脂酸置三口瓶中，油浴加熱到55℃，磁力攪拌同時滴加3.0mL亞硫酰氯，保溫反應(yīng)0.5h，減壓蒸餾除盡過量的亞硫酰氯，制得的硬脂酸酰氯加入20mL乙醚轉(zhuǎn)入滴液漏斗中備用。取粘均分子量為19萬，脫乙酰度為95％的殼聚糖1.5g用水溶脹后瀝干，轉(zhuǎn)入三口瓶，加100mLDMSO、2mL吡啶，油浴加熱到60℃，滴加硬脂酸酰氯，保溫下攪拌反應(yīng)10h，停止反應(yīng)后趁熱過濾，濾餅依次用丙酮、乙醚洗3～5次，40℃真空干燥得產(chǎn)品N-硬脂酰殼聚糖。產(chǎn)物易溶于水和DMSO，并能在水中自聚集形成膠束，用酸堿滴定和元素分析測得其取代度為37％。
紅外譜圖顯示?；磻?yīng)后殼聚糖原料在1574cm-1處(氨基的N-H彎曲振動)的峰消失，而出現(xiàn)1633cm-1(酰胺的羰基峰)和1521cm-1的峰(仲酰氨的N-H彎曲振動)。1H-MNR(氘代DMSO溶劑中)峰的歸宿δ0.85＝CH3(硬脂酰的甲基)，δ1.23＝CH2(硬脂酰的亞甲基)，δ1.49＝CH2(硬脂酰鏈中被羰基屏蔽的β位亞甲基)，δ1.85＝CH2(硬脂酰鏈中被羰基屏蔽的α位亞甲基氫)，δ2.08＝CH3(乙?；?，δ2.72-2.88屬于殼聚糖吡喃糖環(huán)上2號氫，分別對應(yīng)N-酰基化吡喃糖環(huán)上2號的氫，和帶自由氨基的吡喃糖環(huán)上2號氫(參見文獻(xiàn)carbohydrate research324(2000)268-274)，δ3.34--3.71歸屬于殼聚糖吡喃糖環(huán)上3，4，5，6，6’號氫，δ4.95-5.44分別對應(yīng)帶自由氨基殼聚糖吡喃糖環(huán)上和N-酰基化吡喃糖環(huán)上的1號氫，δ7.93--8.54為酰胺上的N-H。
實施例12通過用鹵代烴制備N-烷基化殼聚糖取粘均分子量為19萬，脫乙酰度為95％的殼聚糖1.5g被水溶脹后瀝干，均勻分散在100mL DMSO，2mL吡啶中，加熱到55℃，攪拌的同時滴加10g十六烷基溴，保溫反應(yīng)6h結(jié)束反應(yīng)過濾，濾餅用丙酮，乙醚等洗滌3～5次，60℃真空干燥得產(chǎn)品得到N-十六烷基殼聚糖。產(chǎn)物易溶于水并能在水中自聚集形成膠束，用酸堿滴定和元素分析測定其取代度為21％。
實施例13N-硬脂酰殼聚糖(取代度為37％)膠束性質(zhì)(1)利用芘做分子探針，檢測其熒光光譜，芘的激發(fā)譜圖顯示，隨著水溶液中N-硬脂酰殼聚糖濃度的增大，芘的(0，0)峰從334nm遷移到338nm，并測得其臨界膠束濃度(cac)為2.28×10-3mg/mL；(2)透視電鏡顯示其在水中自組裝成90nm左右的微球。
動態(tài)激光散射測得其流體力學(xué)半徑(Rh)為141nm。
實施例14用N-硬脂酰殼聚糖(取代度為37％)負(fù)載丹參酮類藥物取103.6mg丹參酮II A溶于10mL乙醇，加入0.605gN-硬脂酰殼聚糖，在磁力攪拌下，緩慢加入50mL水，N-硬脂酰殼聚糖在逐漸溶解的過程中自聚集形成高分子膠束，伴隨著丹參酮II A不斷沉淀析出的同時一部分丹參酮II A被裹進(jìn)N-硬脂酰殼聚糖形成的膠束中，將溶液過濾，濾渣為沒有被包裹而以沉淀析出的丹參酮II A，將其回收并干燥，濾液冷凍干燥，得到載了丹參酮II A的藥物組合物固體，再每次用10mL丙酮淋洗藥物組合物固體2～3次，洗脫附在組合物固體表面的丹參酮II A并回收干燥，和前面的析出的丹參酮II A一并稱重，得28.3mg，則間接計算得出組合物的載藥量(負(fù)載藥物重量/組合物重量)為11.1％。
實施例15N-硬脂酰殼聚糖膠束(取代度為37％)負(fù)載丹參酮II A(載藥量為11.1％)的釋放規(guī)律取實施例14的負(fù)載了參酮II A硬脂酰殼聚糖干燥固體粉末100.7mg，轉(zhuǎn)入羊腸半透膜袋中，加磷酸緩沖溶液(pH＝7.2的PBS溶液添加2％的乙醇)20mL，載藥固體粉末完全溶解得透明溶液，將整個羊腸半透膜袋浸入盛了60mL PBS溶液(添加2％的乙醇)的帶塞玻璃容器中，整個玻璃容器置于37℃恒溫水浴搖床中，隔時取半透膜外的溶液，用紫外光度計測268nm處的吸光度，用標(biāo)準(zhǔn)曲線換算其析出丹參酮II A的量。經(jīng)測定，其體外釋放規(guī)律如下剛開始有少量爆釋后，基本呈緩慢恒速釋放，直到22h后釋放速度突然加快，此時釋放了載藥總量的33％，快速釋放持續(xù)了7h，此時總共釋放了載藥總量的62％，此后釋放速度又慢下來，當(dāng)釋放到45h時，釋放的量占載藥總量的84％。
權(quán)利要求
1.一類以殼聚糖及其衍生物或海藻酸鈉作為藥物載體負(fù)載丹參提取物的組合物及其制備方法，其特征在于，用殼聚糖及其衍生物或海藻酸鈉作為丹參提取物的載體，達(dá)到對丹參提取物的增溶和控制釋放效果。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的以殼聚糖及其衍生物或海藻酸鈉作為藥物載體負(fù)載丹參提取物的組合物及其制備方法，其特征在于，先把丹參提取物分散在殼聚糖或海藻酸鈉的水溶液中，再固化成納米或納米級顆粒以上大小的載藥小球。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的以殼聚糖及其衍生物或海藻酸鈉作為藥物載體負(fù)載丹參提取物的組合物及其制備方法，其特征在于，先把殼聚糖溶解在稀酸水溶液中，再加入丹參提取物的固體粉末或丹參提取物的有機(jī)溶液攪拌分散均勻后，滴加到稀堿溶液或海藻酸鈉或三聚磷酸鈉溶液中，固化成載藥小球。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的以殼聚糖及其衍生物或海藻酸鈉作為藥物載體負(fù)載丹參提取物的組合物及其制備方法，其特征在于，把丹參提取物均勻分散到殼聚糖接枝聚乙二醇或既引入親水基又引入疏水基所得到的水凝膠溶液中，直接用于臨床，或冷凍干燥為固體或再通過化學(xué)或物理方法交聯(lián)固化后再用于臨床。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的以殼聚糖及其衍生物或海藻酸鈉作為藥物載體負(fù)載丹參提取物的組合物及其制備方法，其特征在于，對殼聚糖進(jìn)行改性所引入的基團(tuán)中包括季銨鹽或末端帶羧基的基團(tuán)譬如羧甲基、羧丙?；?，該衍生物可以是只含上述兩種基團(tuán)的一種或同時再包含其他基團(tuán)，再與丹參提取物復(fù)配。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的以殼聚糖及其衍生物或海藻酸鈉作為藥物載體負(fù)載丹參提取物的組合物及其制備方法，其特征在于，用殼聚糖衍生物高分子膠束或膠束類似物譬如殼聚糖衍生物高分子囊泡、殼聚糖衍生物高分子表面活性劑、殼聚糖衍生物高分子水凝膠來增溶或負(fù)載丹參提取物。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的以殼聚糖及其衍生物或海藻酸鈉作為藥物載體負(fù)載丹參提取物的組合物及其制備方法，其特征在于，用于負(fù)載丹參提取物的高分子膠束或膠束類似物譬如高分子囊泡、高分子表面活性劑、高分子水凝膠是由殼聚糖既引入親水基又引入疏水基而制備的，或僅只接枝疏水基而制備的，得到的載藥復(fù)合物可制成片劑、膠囊劑、顆粒劑、口服液、針劑、乳膏劑、外用貼劑、噴粉劑、洗液。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的以殼聚糖及其衍生物或海藻酸鈉作為藥物載體負(fù)載丹參提取物的組合物及其制備方法，其特征在于，用于負(fù)載丹參提取物的高分子膠束是由殼聚糖僅僅只引入疏水性的?；蛲榛苽涞?。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的以殼聚糖及其衍生物或海藻酸鈉作為藥物載體負(fù)載丹參提取物的組合物及其制備方法，其特征在于，用于負(fù)載丹參提取物的水溶性殼聚糖衍生物高分膠束是通過殼聚糖與鹵代烴反應(yīng)在殼聚糖分子上接枝碳原子個數(shù)不低于八個的疏水烷基而制備的，或由殼聚糖與七個碳原子以上并除亞麻酸(linolenic acid)以外的疏水性脂肪酸或芳香酸的酸酐或酰鹵反應(yīng)在殼聚糖分子中引入疏水?；苽涞摹?br> 10.根據(jù)權(quán)利要求6所述的以殼聚糖及其衍生物或海藻酸鈉作為藥物載體負(fù)載丹參提取物的組合物及其制備方法，其特征在于，用殼聚糖衍生物高分子膠束或膠束類似物負(fù)載丹參提取物的載藥方法如下，先把丹參提取物溶在有機(jī)溶劑中再加入能形成高分子膠束的殼聚糖衍生物固體粉末，不斷攪拌的同時緩慢加入蒸餾水，等殼聚糖衍生物固體粉末完全溶解，并揮發(fā)除去絕大部分溶解丹參提取物的有機(jī)溶劑后，過濾，將濾液冷凍干燥，得到負(fù)載了丹參提取物的殼聚糖衍生物高分子膠束凍干劑，可用于口服給藥或噴粉給藥或再溶于蒸餾水用于針劑給藥。
全文摘要
本發(fā)明屬于制藥領(lǐng)域，具體涉及一類以殼聚糖及其衍生物或海藻酸鈉作為藥物載體負(fù)載丹參提取物的新型藥物組合物及其方法，這類新型載體包括用殼聚糖或海藻酸鈉制備載藥小球，用殼聚糖的羧甲基衍生物和殼聚糖的季銨鹽衍生物作為丹參酮類藥物載體，用殼聚糖接枝聚乙二醇或既接枝親水基又接枝疏水基而獲得的水凝膠作為丹參活性成分的載體，用殼聚糖既引入親水基和又引入疏水基制備的高分子膠束或殼聚糖只引入疏水基制備的膠束作為丹參活性成分的載體，這些載體還包括殼聚糖衍生物膠束的類似物如殼聚糖衍生物高分子囊泡，殼聚糖衍生物高分子表面活性劑，該發(fā)明的目的是為了用殼聚糖及其衍生物實現(xiàn)對丹參活性提取物的增溶和控制釋放，并實現(xiàn)藥劑和藥物的藥效協(xié)同效應(yīng)。
文檔編號A61K47/36GK1698901SQ200510078739
公開日2005年11月23日 申請日期2005年6月15日 優(yōu)先權(quán)日2005年6月15日
發(fā)明者蔣斯揚(yáng) 申請人:蔣斯揚(yáng)