專利名稱：丹參提取物納米顆粒及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及丹參提取物納米顆粒及其制備方法，特別是利用聚乙二醇接枝聚乳酸 共聚物包裹丹參提取物制備納米顆粒的方法。
背景技術(shù)：
納米藥物(nanodrug)是以納米粒(nanoparticle，NP)、納米球(nanosphere, NS) 或納米囊(nanocapsule，NC)等納米微粒作為載體系統(tǒng)，與藥效粒子以一定方式結(jié)合在一 起后制成的藥物，其粒徑范圍在Ι-lOOnm，也可以是直接將原料藥物加工制成的納米粒。納 米藥物與常規(guī)藥物相比，具有顆粒小、比表面積大、表面反應(yīng)活性高、活性中心多、吸附能力 強(qiáng)等特性，因此具有許多常規(guī)藥物難以比擬的優(yōu)點(diǎn)。在保證藥效的前提下，減少藥用量，減 輕或消除毒副作用；改變膜運(yùn)轉(zhuǎn)機(jī)制，增加藥物對(duì)生物膜的透過性，有利于藥物透皮吸收 及細(xì)胞內(nèi)藥效的發(fā)揮；增加藥物溶解度；有利于藥物的局部滯留，增加藥物與腸壁接觸的 時(shí)間和面積，提高口服藥物吸收利用度，防止胃蛋白酶等對(duì)藥物的水解，提高藥物胃腸穩(wěn)定 性，有利于存儲(chǔ)。聚乳酸(PLA)是一種具有良好生物相容性和生物降解性的材料，它作為一種良好 的藥物載體材料被廣泛研究。聚乳酸納米微球可實(shí)現(xiàn)藥物緩釋和被動(dòng)靶向作用，但它表面 疏水，易于吸附蛋白質(zhì)，并被體內(nèi)的網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)識(shí)別而清除，在體血液循環(huán)時(shí)間短，藥物 的生物利用率不高。聚乙二醇(PEG)是應(yīng)用最廣泛的微粒表面修飾材料，實(shí)現(xiàn)修飾的方法 大多是預(yù)先將PEG與聚乳酸化學(xué)結(jié)合，然后再制備納米粒。它顯著提高了聚乳酸納米微球 在體血液循環(huán)的時(shí)間，提高了藥物的生物利用率，并利于實(shí)現(xiàn)靶向釋放。PEG接枝改性聚乳 酸(PPLA，

圖1)是一種合成新型材料，其優(yōu)點(diǎn)為不破壞聚乳酸的主鏈結(jié)構(gòu)而在側(cè)鏈改性， PEG的接枝率易調(diào)控，分子量小、生物相容性好。 PPLA 結(jié)構(gòu)式有研究報(bào)道以PEG的單體環(huán)氧乙烷和丙交酯(LA)開環(huán)共聚，形成多嵌段共聚物， 也有以PEG-PLA雙嵌段共聚物作為蛋白質(zhì)藥物轉(zhuǎn)運(yùn)載體的做法，此納米微球在胃腸液中穩(wěn) 定，并且能夠穿透胃粘膜屏障，在體內(nèi)表現(xiàn)出強(qiáng)而持久的免疫應(yīng)答。在大分子藥物修飾中，聚乙二醇作為載體材料得到廣泛深入的研究，并在藥學(xué)和 生物技術(shù)應(yīng)用上得到了成功應(yīng)用。隨著各種載體材料的發(fā)展，用生物活性成分作為藥物的 載體極大的增加了藥物的傳輸效率。特別是將其應(yīng)用到抗心腦血管藥物領(lǐng)域，將使得高分子藥物載體在藥物修飾中的應(yīng)用前景更為廣闊。自1987年以來，心腦血管藥物一直位居世界藥品市場(chǎng)首位。由于丹參在治療冠心 病、胸悶、心絞痛等方面有很好的療效，是治療心腦血管病的常用藥。因而，丹參制劑具有良 好的市場(chǎng)前景，市場(chǎng)潛力大?，F(xiàn)代中藥藥理學(xué)研究表明，丹參能夠增加冠狀動(dòng)脈血流量、降 血脂、抑制血栓形成或抗血栓、改善微循環(huán)作用。特別是在近20年里，丹參治療冠心病的研 究報(bào)道甚多。故臨床上把復(fù)方丹參注射液、復(fù)方丹參片列為心腦血管病的理想藥物。近年 來研究發(fā)現(xiàn)鐵依賴性脂質(zhì)過氧化(IDLPO)在腦損傷的發(fā)生發(fā)展過程中起極其重要的作用， 丹參中的丹酚酸B是很好的鐵螯合劑，能有效抑制IDLPO作用，故可對(duì)抗腦損傷。有報(bào)道用高速離心剪切粉粹法把丹參原藥材粉粹成納米顆粒，以明膠和羥甲基纖 維素鈉鹽為壁材物質(zhì)，以丹參納米粒子為芯材物質(zhì)，采用粉碎技術(shù)結(jié)合噴霧干燥技術(shù)制 備了丹參微囊，研究結(jié)果顯示，納米丹參中有效成分丹參酮IIA的溶出量與原粉相比增加 了 25. 62%，丹參在大鼠體內(nèi)的藥代動(dòng)力學(xué)研究表明大鼠服用丹參原粉和納米粉后，丹參酮 IIA在體內(nèi)的達(dá)峰時(shí)間明顯小于丹參原粉組的達(dá)峰時(shí)間，且峰濃度也明顯增高，表明納米粉 在體內(nèi)能夠更快更多地被吸收，從而藥物的生物利用度也得到了提高。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種聚乙二醇接枝聚乳酸共聚物(PPLA)包裹丹參提取物得 到的納米顆粒。本發(fā)明另一目的是提供制備上述納米顆粒的方法。本發(fā)明實(shí)現(xiàn)過程如下一種丹參提取物納米顆粒，其特征在于聚乙二醇接枝聚乳酸共聚物與丹參水溶 性成分或丹參脂溶性成分重量比為(4 9) (1 5)，優(yōu)選的重量比為(5 8) (2 4)。所述的聚乙二醇接枝聚乳酸共聚物中乳酸與聚乙二醇的重量比為(7 10) (1 3)，聚乙二 醇的分子量為 400 8000，如 PEG-400，PEG-600，PEG-4000、 PEG-8000。所述的丹參提取物納米顆粒尺度為20-500納米，優(yōu)選的為100-300納米。所述的丹參水溶性成分選自丹參酸A、B、C，丹參酚酸A、B、C、D、E、G，丹參素，迷迭 香酸，原兒茶醛，咖啡酸，紫草酸。所述的丹參脂溶性成分選自丹參酮I、IIA、IIB，隱丹參酮，異丹參酮I、IIA，異隱 丹參酮，羥基丹參酮IIA，左旋二氫丹參酮I，丹參新醌甲、乙、丙，丹參酸甲酯、紫丹參素。上述丹參提取物納米顆粒的制備方法如下將聚乙二醇接枝聚乳酸共聚物溶于四 氫呋喃或水中，向其中相應(yīng)的加入丹參水溶性成分或丹參脂溶性成分，室溫?cái)嚢栊纬杉{米 膠束，揮發(fā)溶劑得到聚乙二醇接枝聚乳酸共聚物包裹的丹參提取物納米顆粒。本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)與積極效果以生物可降解聚合物為膠束把丹參水溶性或脂溶性 成分包裹成納米顆粒，形成的納米顆粒具有比表面積大和功能基團(tuán)多的特點(diǎn)，可與多種用 于診斷和治療的分子形成共軛物，使顆粒具有特異性和選擇性，納米尺寸范圍的載藥膠束 可順利通過毛細(xì)血管網(wǎng)和脾靜脈竇狀隙，穿過血腦屏障，親水性表面能避免網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng) (reticulo endothelial system, RES)吞噬，捕捉并延長(zhǎng)其在血液循環(huán)系統(tǒng)的時(shí)間，利用REP效應(yīng)、病變組織的特殊結(jié)構(gòu)、受體-配體特異性相互作用實(shí)現(xiàn)藥物載體的被動(dòng)或主動(dòng)靶 向，增強(qiáng)其療效，為丹參臨床應(yīng)用和心腦血管病的治療開辟新的更為廣闊的途徑。
具體實(shí)施例方式聚乙二醇接枝聚乳酸共聚物的制備參考文獻(xiàn)(李繼航，PLA-b-PEG共聚物膜的制 備與性能研究，應(yīng)用化工，2009，38 (6) =819-822.)公開方法，具體如下取IOg乳酸、2g的PEG、催化劑辛酸亞錫(1 % w)和30ml 二甲苯作為溶劑放入 IOOmL三頸燒瓶中，安裝恒溫加熱系統(tǒng)、攪拌系統(tǒng)、冷凝系統(tǒng)和分水系統(tǒng)。先通N2保護(hù)，在 100°C下磁力攪拌反應(yīng)2h，令乳酸生成低聚物，再升溫至180°C反應(yīng)至預(yù)定時(shí)間。反應(yīng)結(jié)束 后將聚合物溶于三氯甲烷中，用分液漏斗以一定的速度滴加進(jìn)無水乙醇中，沉淀提純，抽濾 得到白色固體。將白色固體置于索氏提取器中，用乙醇洗滌12h，在30°C電熱鼓風(fēng)干燥箱干 燥至恒重得最終產(chǎn)物PLA-PEG。丹參治療心腦血管病的有效成分分為脂溶性成分及水溶性成分。采用的提取方法 不同各種有效成分的提取率不同，造成制得的丹參制劑的質(zhì)量不同。為保證丹參制劑的療 效，應(yīng)根據(jù)制劑的特點(diǎn)，選擇不同的工藝，在此水溶性成分選用丹參素，脂溶性成分選用丹 參酮IIA為指標(biāo)來衡量。丹參水溶性成分提取方法取丹參加12倍量水，煎煮2次，每次1. 5h的煎煮方法， 提取后其水溶性成份丹參素和原兒茶醛含量較高，脂溶性成份丹參酮IIA含量較低。丹參脂溶性成分提取方法取丹參加95%乙醇(3倍量)回流提取兩次，第一次 2h，第二次1.5h，過濾，濾液回收乙醇，濃縮。丹參醇提后藥渣水溶液(8倍量)煮提3次，第 一次、第二次1. 5h，第三次lh，過濾，濾液濃縮，加乙醇使含醇量達(dá)50%，醇沉，過濾，濾液濃 縮，與乙醇提取液合并，其脂溶性成份丹參酮IIA含量較高。實(shí)施例1將乳酸和聚乙二醇按重量比m (PLA) m(PEG) = 9 1，PEG分子量為600進(jìn)行聚 合得PPLA。稱取20mg PPLA，溶于2mL四氫呋喃(THF)中，經(jīng)超聲分散后，滴加20mL丹參水 性溶液中，在室溫下以300r/min的速率磁力攪拌lh，待THF揮發(fā)完全，得到PPLA納米微球 乳液。實(shí)施例2將乳酸和聚乙二醇按m(PLA) m(PEG) = 10 2，PEG分子量為1000進(jìn)行聚合 得PPLA。稱取20mg PPLA，溶于2mL四氫呋喃(THF)中，經(jīng)超聲分散后，滴加25mL丹參水性 溶液中，在室溫下以300r/min的速率磁力攪拌lh，待THF揮發(fā)完全，得到PPLA納米微球乳液。實(shí)施例3將乳酸和聚乙二醇按m (PLA) m(PEG) = 8. 5 1. 5，PEG分子量為4000進(jìn)行聚 合得PPLA。稱取20mg PPLA,溶于20mL水中，經(jīng)超聲分散后，滴加IOmg丹參脂溶性成分，在 室溫下以300r/min的速率磁力攪拌2h，得到PPLA納米微球乳液。實(shí)施例4將乳酸和聚乙二醇按m (PLA) m(PEG) =8.5 1. 5，PEG分子量為900進(jìn)行聚合 得PPLA。稱取20mg PPLA,溶于20mL水中，經(jīng)超聲分散后，滴加IOmg丹參脂溶性成分，在室溫下以300r/min的速率磁力攪拌1. 5h，得到PPLA納米微球乳液。實(shí)施例5將乳酸和聚乙二醇按m(PLA) m(PEG) =8 2，PEG分子量為900進(jìn)行聚合得 PPLA0稱取20mg PPLA，溶于20mL水中，經(jīng)超聲分散后，滴加12mg丹參脂溶性成分，在室溫 下以300r/min的速率磁力攪拌lh，得到PPLA納米微球乳液。實(shí)施例6 動(dòng)物體內(nèi)的代謝性對(duì)比分析將實(shí)施例1制取的納米顆粒在大鼠禁食8_12h后，灌服，灌胃后10.0，20.0，30.0， 45. 0,60. 0, 75. 0,90. 0,120. 0，180. 0，300. 0,480. 0，720. Omin 取血，按最佳的樣品處理?xiàng)l件
制備空白及含藥血漿樣品，進(jìn)行高效液相色譜分析，以丹參素為對(duì)象研究藥代動(dòng)力學(xué)及血 漿樣品中相關(guān)物質(zhì)，測(cè)定其變化。發(fā)現(xiàn)納米丹參中有效成分丹參素的溶出量與原粉相比增 加了 21. 32%，丹參在大鼠體內(nèi)的藥代動(dòng)力學(xué)研究表明大鼠服用丹參原粉和納米粉后，丹參 素在體內(nèi)的達(dá)峰時(shí)間明顯小于丹參原粉組的達(dá)峰時(shí)間，且峰濃度也明顯增高，表明納米粉 在體內(nèi)能夠更快更多地被吸收，從而藥物的生物利用度也得到了提高。實(shí)施例7 動(dòng)物體內(nèi)的代謝性對(duì)比分析在大鼠禁食8_12h后，灌服實(shí)施例5制取的納米顆粒，灌胃后10. 0，20. 0,30.0, 45. 0,60. 0, 75. 0,90. 0,120. 0，180. 0，300. 0,480. 0，720. Omin 取血，按最佳的樣品處理?xiàng)l件
制備空白及含藥血漿樣品，進(jìn)行高效液相色譜分析，以丹參酮IIA為對(duì)象研究藥代動(dòng)力學(xué) 及血漿樣品中相關(guān)物質(zhì)，測(cè)定其變化。發(fā)現(xiàn)納米顆粒中有效成分丹參酮IIA的溶出量與原 粉相比增加了 27. 83 %，丹參在大鼠體內(nèi)的藥代動(dòng)力學(xué)研究表明大鼠服用丹參原粉和納米 粉后，丹參酮IIA在體內(nèi)的達(dá)峰時(shí)間明顯小于丹參原粉組的達(dá)峰時(shí)間，且峰濃度也明顯增 高，表明納米粉在體內(nèi)能夠更快更多地被吸收，從而藥物的生物利用度也得到了提高。
權(quán)利要求
一種丹參提取物納米顆粒，其特征在于聚乙二醇接枝聚乳酸共聚物與丹參水溶性成分或丹參脂溶性成分重量比為(4～9)∶(1～5)。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的丹參提取物納米顆粒，其特征在于聚乙二醇接枝聚乳酸共 聚物與丹參水溶性成分或丹參脂溶性成分重量比為(5 8) (2 4)。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的丹參提取物納米顆粒，其特征在于聚乙二醇接枝聚乳 酸共聚物中乳酸與聚乙二醇的重量比為(7 10) (1 3)。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的丹參提取物納米顆粒，其特征在于聚乙二醇的分子量為 400 8000。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的丹參提取物納米顆粒，其特征在于所述的丹參提取物納米 顆粒尺度為20-500納米。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的丹參提取物納米顆粒，其特征在于顆粒尺度為100-300納米。
7.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的丹參提取物納米顆粒，其特征在于所述的丹參水溶性 成分選自丹參酸A、B、C，丹參酚酸A、B、C、D、E、G，丹參素，迷迭香酸，原兒茶醛，咖啡酸，紫草酸。
8.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的丹參提取物納米顆粒，其特征在于所述的丹參脂溶性 成分選自丹參酮I、IIA、IIB，隱丹參酮，異丹參酮Ι、ΙΙΑ，異隱丹參酮，羥基丹參酮ΙΙΑ，左旋 二氫丹參酮I，丹參新醌甲、乙、丙，丹參酸甲酯、紫丹參素。
9.權(quán)利要求1所述的丹參提取物納米顆粒的制備方法，其特征在于將聚乙二醇接枝 聚乳酸共聚物溶于四氫呋喃或水中，向其中相應(yīng)的加入丹參水溶性成分或丹參脂溶性成 分，室溫?cái)嚢栊纬杉{米膠束，揮發(fā)溶劑得到聚乙二醇接枝聚乳酸共聚物包裹的丹參提取物 納米顆粒。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種利用聚乙二醇接枝聚乳酸共聚物包裹丹參提取物制備得到的納米顆粒及其制備方法，其中聚乙二醇接枝聚乳酸共聚物與丹參水溶性成分或丹參脂溶性成分重量比為(4～9)∶(1～5)，聚乙二醇接枝聚乳酸共聚物中乳酸與聚乙二醇的重量比為(7～10)∶(1～3)。具體制備方法為將聚乙二醇接枝聚乳酸共聚物溶于四氫呋喃或水中，向其中相應(yīng)的加入丹參水溶性成分或丹參脂溶性成分，室溫?cái)嚢栊纬杉{米膠束，揮發(fā)溶劑得到聚乙二醇接枝聚乳酸共聚物包裹的丹參提取物納米顆粒。本發(fā)明制備得到的納米顆粒具有能夠穿透血腦屏障、進(jìn)入腦組織，增強(qiáng)其療效的特點(diǎn)，為丹參臨床應(yīng)用和心腦血管病的治療開辟新的更為廣闊的途徑。
文檔編號(hào)A61K47/34GK101919907SQ20101022671
公開日2010年12月22日 申請(qǐng)日期2010年7月15日 優(yōu)先權(quán)日2010年7月15日
發(fā)明者于潔, 王世祥, 趙新鋒, 鄭曉暉 申請(qǐng)人:西北大學(xué)