專(zhuān)利名稱(chēng)：用于血糖控制的聯(lián)合治療的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及用于血糖控制的治療，具體地涉及糖尿病尤其是非胰島素依賴(lài)型糖尿病(NIDDM)或2型糖尿病和糖尿病相關(guān)病癥、前驅(qū)糖尿病狀態(tài)和/或肥胖的治療方法，并涉及用于這種方法的組合物。
背景技術(shù)：
血糖控制在諸如糖尿病及相關(guān)病癥的病癥治療中具有治療學(xué)上的重要性。臨床糖尿病可分為四種基本亞型，包括(1)1型或胰島素依賴(lài)型糖尿病(IDDM)(由β細(xì)胞破壞所致并以絕對(duì)胰島素缺乏為特征)，(2)2型或非胰島素依賴(lài)型糖尿病(NIDDM)(以胰島素抵抗和相對(duì)胰島素缺乏為特征)，(3)其它特殊類(lèi)型糖尿病(與各種可確認(rèn)的臨床病癥或綜合征例如β細(xì)胞功能的遺傳缺陷和線(xiàn)粒體DNA點(diǎn)突變相關(guān)，其中與β細(xì)胞功能的遺傳缺陷相關(guān)的糖尿病例如青春晚期糖尿病[MODY]1-3型)，及(4)妊娠糖尿病。
2型糖尿病是至今該病最常見(jiàn)的形式，發(fā)現(xiàn)其占糖尿病患者人群的90％以上。這些患者保持顯著水平的內(nèi)源性胰島素分泌能力。不過(guò)，胰島素水平相對(duì)于胰島素抵抗的量和環(huán)境葡萄糖水平是低的。2型患者近期生存不依賴(lài)于胰島素且酮癥很少發(fā)生，除非是在重大機(jī)體應(yīng)激情況下。盡管如此，這些患者可能需要胰島素治療以控制高血糖。2型糖尿病一般起病于40歲以后，具有與特異性免疫應(yīng)答(HLA)基因不相關(guān)的高遺傳外顯率，且與肥胖有關(guān)。
除了這些臨床類(lèi)型，其它病癥即葡萄糖耐受不良和空腹葡萄糖不良是介于正常葡萄糖穩(wěn)態(tài)平衡和顯性糖尿病(分別在進(jìn)食和空腹情況下)之間的代謝狀態(tài)。這些病癥顯著增加后期糖尿病危險(xiǎn)，在一些情況下可能是其自然病史的一部分。
另一個(gè)相關(guān)病癥是以高于正常范圍但未高至符合2型糖尿病診斷標(biāo)準(zhǔn)的血糖水平來(lái)定義的葡萄糖代謝不良(IGM)。IGM的發(fā)生率各國(guó)不同，但通常以高于顯性糖尿病2-3倍的頻率發(fā)生?；加蠭GM的個(gè)體中，大約58％患有葡萄糖耐受不良(IGT)，另外29％患有空腹葡萄糖不良(IFG)，還有13％同時(shí)患有該兩種異常(IFG/IGT)。
多年來(lái)沒(méi)有實(shí)質(zhì)性變化的對(duì)2型糖尿病的現(xiàn)有治療中的許多已經(jīng)有局限性，例如它們可能具有不希望的副作用、低效或在長(zhǎng)期治療中隨時(shí)間功效降低。
通過(guò)給予刺激胰腺β細(xì)胞分泌更多胰島素的磺酰脲類(lèi)(例如甲苯磺丁脲和格列吡嗪)或格列奈類(lèi)，和/或當(dāng)磺酰脲類(lèi)或格列奈類(lèi)變得無(wú)效時(shí)通過(guò)注射胰島素以增加胰島素的血漿水平，可導(dǎo)致胰島素濃度高至足以刺激胰島素抵抗組織。不過(guò)，引起危險(xiǎn)的低血漿葡萄糖水平可由給予胰島素或胰島素促分泌劑(磺酰脲類(lèi)或格列奈類(lèi))導(dǎo)致，而且由于甚至更高的血漿胰島素水平可發(fā)生增加的胰島素抵抗水平。增加胰島素敏感性使得高血糖得到一些矯正的α葡糖苷酶抑制劑抗高血糖藥(或α葡糖苷酶抑制劑)和雙胍類(lèi)抗高血糖藥(或雙胍類(lèi))通常用于2型糖尿病的治療。阿卡波糖、伏格列波糖、乙格列酯、米格列醇為α葡糖苷酶抑制劑的實(shí)例。1，1-二甲基雙胍(或二甲雙胍)和苯乙雙胍為雙胍類(lèi)的具體實(shí)例，二甲雙胍具有比苯乙雙胍小的副作用。
格列酮(即5-芐基噻唑烷-2，4-二酮)為最近描述的具有改善2型糖尿病多種癥狀潛能的一類(lèi)化合物。這些活性劑在幾種2型糖尿病動(dòng)物模型中顯著地增加肌肉、肝和脂肪組織的胰島素敏感性，導(dǎo)致部分或完全矯正升高的血漿葡萄糖水平而不發(fā)生低血糖。目前市售的格列酮類(lèi)為過(guò)氧化物酶體增殖物激活受體(PPAR)主要是PPAR-γ亞型的激動(dòng)劑。通常認(rèn)為PPAR-γ激動(dòng)是在格列酮的情況中觀察到的胰島素增敏改善的原因。正在試驗(yàn)的用于治療2型糖尿病的新的PPAR激動(dòng)劑是α、γ或δ亞型的激動(dòng)劑或它們的組合，且在許多情況下化學(xué)上不同于格列酮類(lèi)。一些格列酮例如曲格列酮已經(jīng)出現(xiàn)副作用(例如肝毒性)。
最近介紹的或仍處在開(kāi)發(fā)中的治療2型糖尿病的新方法包括使用α葡糖苷酶抑制劑(例如阿卡波糖)和蛋白酪氨酸磷酸酶-1B(PTP-1B)抑制劑進(jìn)行治療。
胰島素促分泌劑為通過(guò)胰腺β細(xì)胞促進(jìn)胰島素分泌增加的化合物?；酋ｋ孱?lèi)為胰島素促分泌劑的公知實(shí)例?；酋ｋ孱?lèi)作為降血糖藥并用于2型糖尿病的治療?；酋ｋ孱?lèi)的實(shí)例包括格列本脲(或優(yōu)降糖)、格列吡嗪、格列齊特、格列美脲、妥拉磺脲和甲苯磺丁脲。
歐洲專(zhuān)利申請(qǐng)0306228公開(kāi)了某些噻唑烷二酮衍生物，其作為具有抗高血糖和降血脂活性公開(kāi)，例如5-[4-[2-(N-甲基-N-(2-吡啶基)氨基)乙氧基]芐基]噻唑烷-2，4-二酮(羅格列酮)。WO 94/05659公開(kāi)了該化合物的某些鹽，包括其馬來(lái)酸鹽。5-[4-[2-(N-甲基-N-(2-吡啶基)氨基)乙氧基]芐基]噻唑烷-2，4-二酮是稱(chēng)作“胰島素增敏劑”的一類(lèi)抗高血糖藥的實(shí)例。具體地，該化合物為噻唑烷二酮胰島素增敏劑。5-[4-[2-(N-甲基-N-(2-吡啶基)氨基)乙氧基]芐基]噻唑烷-2，4-二酮也是過(guò)氧化物酶體增殖物激活受體(PPARy)激動(dòng)劑型胰島素增敏劑。
歐洲專(zhuān)利申請(qǐng)0008203、0139421、0032128、0428312、0489663、0155845、0257781、0208420、0177353、0319189、0332331、0332332、0528734和0508740；國(guó)際專(zhuān)利申請(qǐng)WO 92/18501、WO 93/02079和WO 93/22445和美國(guó)專(zhuān)利5,104,888和5,478,852也公開(kāi)了某些噻唑烷二酮胰島素增敏劑。
另一系列一般認(rèn)為具有胰島素增敏劑活性的化合物是以國(guó)際專(zhuān)利申請(qǐng)WO 93/21166和WO 94/01420中公開(kāi)的化合物為代表的那些化合物。這些化合物在本文中稱(chēng)作“無(wú)環(huán)胰島素增敏劑”。無(wú)環(huán)胰島素增敏劑的其它實(shí)例在美國(guó)專(zhuān)利5,232,945和國(guó)際專(zhuān)利申請(qǐng)WO92/03425和WO 91/19702中公開(kāi)。其它胰島素增敏劑的實(shí)例在歐洲專(zhuān)利申請(qǐng)0533933、日本專(zhuān)利申請(qǐng)05271204和美國(guó)專(zhuān)利5,264,451中公開(kāi)。
二肽基肽酶IV(DP IV)是一種從肽鏈中切割N-末端二肽的絲氨酸蛋白酶，該肽鏈優(yōu)選在次末端位含有脯氨酸殘基。盡管DP IV在哺乳動(dòng)物系統(tǒng)中的生物作用尚未完全確定，但認(rèn)為它在神經(jīng)肽代謝、T細(xì)胞活化、癌細(xì)胞附著于內(nèi)皮和HIV進(jìn)入淋巴樣細(xì)胞中發(fā)揮重要作用。
另外，發(fā)現(xiàn)DP IV是胰高血糖素樣肽-1(GLP-1)和也稱(chēng)為腸抑胃肽(GIP)的葡萄糖依賴(lài)性促胰島素肽失活的原因。由于GLP-1為胰腺胰島素分泌的主要刺激物且對(duì)葡萄糖處置具有直接有益的作用，因此表明WO 97/40832和US 6,303,661中DP IV和DP IV樣酶活性的抑制代表一種有吸引力的例如用于治療非胰島素依賴(lài)型糖尿病(NIDDM)的方法。
已知DP IV抑制劑可以用于治療葡萄糖耐受不良和糖尿病(國(guó)際專(zhuān)利申請(qǐng)WO 99/61431，Pederson RA等，Diabetes.1998 Aug；47(8)1253-8和Pauly RP等，Metabolism 1999 Mar；48(3)385-9)。
WO 99/61431公開(kāi)了包含氨基酸殘基和噻唑烷或吡咯烷基團(tuán)的DP IV抑制劑及其鹽特別是L-蘇-異亮氨酰噻唑烷、L-別-異亮氨酰噻唑烷、L-蘇-異亮氨酰吡咯烷、L-別-異亮氨酰噻唑烷、L-別-異亮氨酰吡咯烷及其藥學(xué)可接受的鹽。WO 03/072556公開(kāi)了DP IV抑制劑谷氨酰胺酰噻唑烷和谷氨酰胺酰吡咯烷及其藥學(xué)可接受的鹽。
本發(fā)明的目的是提供例如在糖尿病尤其是非胰島素依賴(lài)型糖尿病(NIDDM)或2型糖尿病、糖尿病相關(guān)病癥、前驅(qū)糖尿病狀態(tài)和/或肥胖的治療中用于血糖控制的新療法，該療法可表現(xiàn)更好的功效和/或安全性。具體地，本發(fā)明提供DP IV抑制劑谷氨酰胺酰噻唑烷和谷氨酰胺酰吡咯烷和其它抗糖尿病藥(antidiabetic agent)聯(lián)合，例如在糖尿病尤其是非胰島素依賴(lài)型糖尿病(NIDDM)或2型糖尿病、糖尿病相關(guān)病癥、前驅(qū)糖尿病狀態(tài)和/或肥胖的治療中用于血糖控制的用途。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明提供一種用于哺乳動(dòng)物例如人的血糖控制的方法，該方法包括給予需要其的哺乳動(dòng)物有效量的谷氨酰胺酰噻唑烷或谷氨酰胺酰吡咯烷或其藥學(xué)可接受的鹽和另一種抗糖尿病藥。
本發(fā)明還提供谷氨酰胺酰噻唑烷或谷氨酰胺酰吡咯烷或其藥學(xué)可接受的鹽和另一種抗糖尿病藥用于血糖控制的用途。
本發(fā)明還提供谷氨酰胺酰噻唑烷或谷氨酰胺酰吡咯烷或其藥學(xué)可接受的鹽在藥物生產(chǎn)中的用途，所述藥物用于與另一種抗糖尿病藥聯(lián)合用于血糖控制。
谷氨酰胺酰噻唑烷和谷氨酰胺酰吡咯烷具有如下結(jié)構(gòu) 其中對(duì)于谷氨酰胺酰噻唑烷X＝S，而對(duì)于谷氨酰胺酰吡咯烷X＝CH2。
這些化合物在下文中稱(chēng)為式(I)的化合物。
上述組合用于治療糖尿病尤其是2型糖尿病和糖尿病相關(guān)病癥、前驅(qū)糖尿病狀態(tài)和/或肥胖特別有用。特別地，治療2型糖尿病。
附圖簡(jiǎn)述

圖1是對(duì)于安慰劑和谷氨酰胺酰吡咯烷的三種給藥水平，血糖水平隨時(shí)間變化的曲線(xiàn)。
圖2是對(duì)于安慰劑和谷氨酰胺酰噻唑烷的三種給藥水平，血糖水平隨時(shí)間變化的曲線(xiàn)。
圖3為谷氨酰胺酰噻唑烷的化學(xué)結(jié)構(gòu)。
圖4為谷氨酰胺酰吡咯烷的化學(xué)結(jié)構(gòu)。
圖5為谷氨酰胺酰噻唑烷和焦谷氨酸噻唑烷的每秒計(jì)數(shù)隨時(shí)間變化的曲線(xiàn)。
圖6顯示不同給藥組合物的葡萄糖AUC。
圖7顯示不同給藥組合物的葡萄糖AUC。
具體實(shí)施例方式
本發(fā)明提供一種用于哺乳動(dòng)物例如人的血糖控制的方法，該方法包括給予需要其的哺乳動(dòng)物有效量的谷氨酰胺酰噻唑烷或谷氨酰胺酰吡咯烷或其藥學(xué)可接受的鹽和另一種抗糖尿病藥。
該組合對(duì)于治療糖尿病尤其是2型糖尿病和糖尿病相關(guān)病癥、前驅(qū)糖尿病狀態(tài)和/或肥胖特別有用。特別地，治療2型糖尿病。
這些組合提供對(duì)血糖控制尤其有益的作用，且優(yōu)選提供改善的血糖調(diào)節(jié)而不引入不可接受的副作用。
本發(fā)明還提供用于治療哺乳動(dòng)物例如人的糖尿病尤其是2型糖尿病和糖尿病相關(guān)病癥、前驅(qū)糖尿病狀態(tài)和/或肥胖的方法，特別是2型糖尿病的治療方法，該方法包括給予需要其的哺乳動(dòng)物有效量的谷氨酰胺酰噻唑烷或谷氨酰胺酰吡咯烷或其藥學(xué)可接受的鹽和另一種抗糖尿病藥。
本發(fā)明還提供谷氨酰胺酰噻唑烷或谷氨酰胺酰吡咯烷或其藥學(xué)可接受的鹽和另一種抗糖尿病藥用于治療糖尿病尤其是2型糖尿病和糖尿病相關(guān)病癥、前驅(qū)糖尿病狀態(tài)和/或肥胖的用途，特別是治療2型糖尿病的用途。
本發(fā)明還提供谷氨酰胺酰噻唑烷或谷氨酰胺酰吡咯烷或其藥學(xué)可接受的鹽在藥物生產(chǎn)中的用途，所述藥物用于與另一種抗糖尿病藥聯(lián)合用于治療糖尿病尤其是2型糖尿病和糖尿病相關(guān)病癥、前驅(qū)糖尿病狀態(tài)和/或肥胖，特別是治療2型糖尿病。
式(I)的化合物和所述另一種抗糖尿病藥可聯(lián)合給藥或序慣或單獨(dú)給藥。
聯(lián)合給藥包括給予包含式(I)的化合物或其藥學(xué)可接受的鹽和所述另一種抗糖尿病藥的制劑，或基本上同時(shí)給予每種活性劑的單獨(dú)制劑。在式(I)的化合物或其藥學(xué)可接受的鹽和所述另一種抗糖尿病藥的藥理學(xué)特征(profile)允許的情況下，優(yōu)選兩種活性劑聯(lián)合給藥。
本發(fā)明還提供谷氨酰胺酰噻唑烷或谷氨酰胺酰吡咯烷或其藥學(xué)可接受的鹽和另一種抗糖尿病藥在藥物生產(chǎn)中的用途，所述藥物用于血糖控制。
本發(fā)明還提供谷氨酰胺酰噻唑烷或谷氨酰胺酰吡咯烷或其藥學(xué)可接受的鹽和另一種抗糖尿病藥在藥物生產(chǎn)中的用途，所述藥物用于治療糖尿病尤其是2型糖尿病和糖尿病相關(guān)病癥、前驅(qū)糖尿病狀態(tài)和/或肥胖，特別是治療2型糖尿病。
本發(fā)明還提供一種藥物組合物，所述藥物組合物包含谷氨酰胺酰噻唑烷或谷氨酰胺酰吡咯烷或其藥學(xué)可接受的鹽和另一種抗糖尿病藥以及藥學(xué)可接受的載體。本發(fā)明還包括這些組合物在上述方法中的用途。
本發(fā)明包括根據(jù)本發(fā)明的任一實(shí)施方案的式(I)的化合物及其藥學(xué)可接受的鹽和下述物質(zhì)聯(lián)合的用途-胰島素增敏劑，其選自PPAR激動(dòng)劑、雙胍類(lèi)和蛋白酪氨酸磷酸酶-1B(PTP-1B)抑制劑；-胰島素和胰島素模擬物；
-磺酰脲類(lèi)和其它胰島素促分泌劑；-α葡糖苷酶抑制劑；-胰高血糖素受體激動(dòng)劑；-GLP-1；GLP-1模擬物例如NN-2211(來(lái)自Novo Nordisk的liraglutide)和GLP-1受體激動(dòng)劑；-GLP-2；GLP-2模擬物例如ALX-0600(來(lái)自NPS Allelix Corp.的teduglutide)和GLP-2受體激動(dòng)劑；-exendin-4和exendin-4模擬物例如exenatide(AC-2993，來(lái)自Amylin/Eli Lilly的合成exendin-4)；-GIP、GIP模擬物和GIP受體激動(dòng)劑；-PACAP、PACAP模擬物和PACAP受體3激動(dòng)劑；-降膽固醇藥，其選自HMG-CoA還原酶抑制劑、螯合劑、煙醇、煙酸及其鹽、PPARα激動(dòng)劑、PPARα/γ雙重激動(dòng)劑、膽固醇吸收抑制劑、脂酰輔酶A膽固醇酰基轉(zhuǎn)移酶抑制劑和抗氧化劑；和-PPARδ激動(dòng)劑；以及任選的其它活性劑，例如-抗肥胖化合物；-回腸膽汁酸轉(zhuǎn)運(yùn)體抑制劑；和-抗炎藥。
合適地，所述另一種抗糖尿病藥包含α葡糖苷酶抑制劑、雙胍類(lèi)、胰島素促分泌劑或胰島素增敏劑中的一種或多種，通常一種或兩種，尤其是一種。
另一合適的抗糖尿病藥為胰島素。
合適的α葡糖苷酶抑制劑為阿卡波糖。
其它合適的α葡糖苷酶抑制劑為乙格列酯和米格列醇。另一合適的α葡糖苷酶抑制劑為伏格列波糖。
合適的雙胍類(lèi)包括二甲雙胍、丁福明或苯乙雙胍，尤其是二甲雙胍。
合適的胰島素促分泌劑包括磺酰脲類(lèi)。
合適的磺酰脲類(lèi)包括格列本脲、格列吡嗪、格列齊特、格列美脲、妥拉磺脲和甲苯磺丁脲。其它磺酰脲類(lèi)包括醋磺己脲、氨磺丁脲、氯磺丙脲、格列波脲、格列喹酮、格列生脲、格列索脲、格列派特、格列吡脲和格列環(huán)脲。還包括的有磺酰脲類(lèi)格列戊脲。
另一合適的胰島素促分泌劑為瑞格列奈。另外的胰島素促分泌劑為那替格列。
胰島素增敏劑包括PPARy激動(dòng)劑型胰島素增敏劑，其包括WO97/31907中公開(kāi)的化合物，尤其是2-(1-羧基-2-{4-[2-(5-甲基-2-苯基噁唑-4-基)乙氧基]苯基乙氨基}苯甲酸甲酯和2(S)-(2-苯甲酰基苯氨基)-3-{4-[2-(5-甲基-2-苯基-噁唑-4-基)乙氧基]苯基}丙酸。
胰島素增敏劑還包括噻唑烷二酮胰島素增敏劑。
其它合適的噻唑烷二酮胰島素增敏劑包括(+)-5-[[4-[(3，4-二氫-6-羥基-2，5，7，8-四甲基-2H-1-苯并吡喃-2-基)甲氧基]苯基]甲基]-2，4-噻唑烷二酮(或曲格列酮)、5-[4-[(1-甲基環(huán)己基)甲氧基]芐基]噻唑烷-2，4-二酮(或環(huán)格列酮)、5-[4-[2-(5-乙基吡啶-2-基)乙氧基]芐基噻唑烷-2，4-二酮(或匹格列酮)或5-[(2-芐基-2，3-二氫苯并吡喃)-5-基甲基]噻唑烷2，4-二酮(或恩格列酮)。
特別的噻唑烷二酮胰島素增敏劑為5-[4-[2-(5-乙基吡啶-2-基)乙氧基]芐基]噻唑烷-2，4-二酮(或匹格列酮)和(+)-5-[[4-[(3，4-二氫-6-羥基-2，5，7，8-四甲基-2H-1-苯并吡喃-2-基)甲氧基]苯基]甲基]-2，4-噻唑烷二酮(或曲格列酮)。
優(yōu)選的噻唑烷胰島素增敏劑為5-[4-[2-(N-甲基-N-(2-吡啶基)氨基)乙氧基]芐基]噻唑烷-2，4-二酮(或羅格列酮)及其鹽。
另外的抗糖尿病藥包括其它的DP IV抑制劑。特別的DP IV抑制劑包括WO 99/61431中公開(kāi)的特定實(shí)例，例如L-蘇-異亮氨酰吡咯烷化物(pyrrolidide)、L-別-異亮氨酰噻唑烷化物(thiazolidide)、L-別異亮氨酰吡咯烷化物及其鹽。特別的DP IV抑制劑為異亮氨酸噻唑烷化物及其鹽。
另外的DP IV抑制劑包括纈氨酸吡咯烷化物(Novo Nordisk)、Hughes等，Biochemistry，38(36)，11597-11603，1999公開(kāi)的NVP-DPP728A(1-[[[2-[{5-氰基吡啶-2-基}氨基]乙基]氨基]乙?；鵠-2-氰基-(S)-吡咯烷)(Novartis)、Hughes等，Meeting of the AmericanDiabetes Association 2002，Abstract no.272或(Novartis)公開(kāi)的LAF-237(1-[(3-羥基-金剛烷-1-基氨基)乙?；鵠吡咯烷-2(S)-腈、Yamada等，Bioorg.& Med.Chem.Lett.8(1998)，1537-1540公開(kāi)的TSL-225(色氨酰-1，2，3，4-四氫異喹啉-3-羧酸)、Asworth等，Bioorg.&Med.Chem.Lett.，6，No.22，pp 1163-1166和2745-2748(1996)公開(kāi)的2-氰基吡咯烷化物和4-氰基吡咯烷化物、Sudre等，Diabetes 51(5)，pp1461-1469(2002)(Ferring)公開(kāi)的FE-999011([(2S)-1-([2’S]-2’-氨基-3’，3’二甲基丁酰基)吡咯烷-2-腈])和WO 01/34594(Guilford)中公開(kāi)的化合物，使用上述參考文獻(xiàn)中列出的劑量。
為避免疑問(wèn)，上述每個(gè)出版物中公開(kāi)的實(shí)例均明確地以其全部?jī)?nèi)容引入本文作為參考，對(duì)于單個(gè)公開(kāi)的化合物，特別涉及它們的結(jié)構(gòu)、它們的定義、用途以及它們的生產(chǎn)。
本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方案包括根據(jù)本發(fā)明任一實(shí)施方案的式(I)的化合物或其藥學(xué)可接受的鹽與下述物質(zhì)聯(lián)合的用途-與阿卡波糖聯(lián)合，或-與二甲雙胍聯(lián)合；或-與阿卡波糖和二甲雙胍聯(lián)合；或-與胰島素增敏劑例如PPARy激動(dòng)劑型胰島素增敏劑聯(lián)合。
根據(jù)本發(fā)明尤其優(yōu)選式(I)的化合物或其藥學(xué)可接受的鹽特別是谷氨酰胺酰噻唑烷鹽酸鹽與二甲雙胍聯(lián)合例如用于治療糖尿病、糖尿病相關(guān)病癥和前驅(qū)糖尿病狀態(tài)相關(guān)病癥的用途。優(yōu)選式(I)的化合物或其藥學(xué)可接受的鹽和二甲雙胍聯(lián)合給藥。
本發(fā)明另一優(yōu)選方面是包含谷氨酰胺酰噻唑烷或谷氨酰胺酰吡咯烷或其藥學(xué)可接受的鹽特別是谷氨酰胺酰噻唑烷鹽酸鹽和二甲雙胍以及藥學(xué)可接受的載體的藥物組合物。藥物制劑優(yōu)選適于口服給藥，且特別是適于每日給藥一次、兩次或三次，優(yōu)選兩次或三次的單元?jiǎng)┬汀?br> 式(I)的化合物或其藥學(xué)可接受的鹽特別是谷氨酰胺酰噻唑烷鹽酸鹽與胰島素增敏劑例如PPARy激動(dòng)劑型胰島素增敏劑聯(lián)合的用途代表了本發(fā)明另一優(yōu)選方面。特別的胰島素增敏劑包括格列酮類(lèi)如曲格列酮、環(huán)格列酮、匹格列酮、恩格列酮和羅格列酮，尤其是羅格列酮。
應(yīng)理解式(I)的化合物或其藥學(xué)可接受的鹽和其它抗糖尿病藥各自以藥學(xué)可接受的形式包括其藥學(xué)可接受的衍生物如藥學(xué)可接受的鹽、酯和溶劑合物形式作為合適的相應(yīng)藥物活性劑給予。在本文的某些實(shí)例中，所述另一種抗糖尿病藥所用的名稱(chēng)可能涉及該相關(guān)活性劑的具體藥物形式。應(yīng)理解這些活性劑本身的所有藥學(xué)可接受形式的用途均包括在本發(fā)明之中。
式(I)的化合物及其藥學(xué)可接受的鹽與現(xiàn)有技術(shù)中已知的其它DP IV抑制劑相比具有一些意想不到的特征，當(dāng)根據(jù)本發(fā)明與其它抗糖尿病藥聯(lián)合給予時(shí)，其可為它們提供某些優(yōu)勢(shì)。這些特征包括例如-針對(duì)非DP IV和非DP IV樣酶，例如DP I、脯氨酰寡肽酶、氨?；彼岫拿笡](méi)有活性(參見(jiàn)實(shí)施例12)；-體外在分離人血漿中具有高穩(wěn)定性(參見(jiàn)實(shí)施例13)；-體內(nèi)谷氨酰胺部分失活/代謝為相應(yīng)的焦谷氨?；衔锏娜潞涂煽貦C(jī)制，導(dǎo)致比其它DP IV抑制劑更短的半衰期(參見(jiàn)實(shí)施例8)；和
-推測(cè)的體內(nèi)非肝依賴(lài)性半衰期。
式(I)的化合物的藥學(xué)可接受的鹽包括酸加成鹽，即其中氨基酸堿性側(cè)鏈被無(wú)機(jī)或有機(jī)酸質(zhì)子化。代表性的有機(jī)或無(wú)機(jī)酸包括鹽酸、氫溴酸、高氯酸、硫酸、硝酸、磷酸、乙酸、丙酸、羥基乙酸、乳酸、琥珀酸、馬來(lái)酸、富馬酸、蘋(píng)果酸、酒石酸、檸檬酸、苯甲酸、扁桃酸、甲磺酸、羥基乙磺酸、苯磺酸、草酸、雙羥萘酸、2-萘磺酸、對(duì)甲苯磺酸、環(huán)己烷氨基磺酸、水楊酸、糖精酸、三氟乙酸、亞磺酸和3，5-二-叔丁基苯甲酸。式(I)的化合物的所有藥學(xué)可接受的酸加成鹽形式的用途均包括在本發(fā)明的范圍內(nèi)。
式(I)的化合物的優(yōu)選酸加成鹽為富馬酸鹽、苯甲酸鹽、馬來(lái)酸鹽、草酸鹽、3，5-二-叔丁基苯甲酸鹽、水楊酸鹽、乙酸鹽和鹽酸鹽(參見(jiàn)實(shí)施例14)。式(I)的化合物的最優(yōu)選酸加成鹽為鹽酸鹽。優(yōu)選的式(I)的化合物為谷氨酰胺酰噻唑烷鹽酸鹽。
為避免疑問(wèn)，不管本文中何時(shí)提到式(I)的化合物，應(yīng)理解它指游離堿和相應(yīng)的鹽，條件是它們?cè)谶@些情況下是可能或合適的。
本發(fā)明在其范圍內(nèi)進(jìn)一步包括式(I)的化合物的前藥的用途。通常，這些前藥應(yīng)是在體內(nèi)容易轉(zhuǎn)化為所需治療活性化合物的化合物的功能性衍生物。因而，在這些情況，本發(fā)明的治療方法中，術(shù)語(yǔ)“給藥”應(yīng)包括用式(I)的化合物的前藥形式治療所述的各種疾病，該前藥在給予個(gè)體后在體內(nèi)轉(zhuǎn)化為所述化合物。用于選擇和制備合適的前藥衍生物的方法在例如“Design of Prodrugs”，ed.H.Bundgaard，Elsevier，1985中有描述。具體的前藥在專(zhuān)利申請(qǐng)DE 198 28 113、DE198 28 114、WO 99/67228和WO 99/67279中有描述。
當(dāng)式(I)的化合物具有至少一個(gè)手性中心時(shí)，它們可以相應(yīng)地以對(duì)映異構(gòu)體存在。在這些化合物例如前藥具有兩個(gè)或更多個(gè)手性中心的情況下，它們還可以以非對(duì)映異構(gòu)體存在。應(yīng)理解所有這些異構(gòu)體及其混合物均包含在本發(fā)明的范圍之內(nèi)。
當(dāng)式(I)的化合物的制備方法產(chǎn)生立體異構(gòu)體混合物時(shí)，這些異構(gòu)體可通過(guò)常規(guī)技術(shù)例如制備色譜分離。這些化合物可以以外消旋形式制備，或者單個(gè)對(duì)映異構(gòu)體可以通過(guò)對(duì)映特異性合成或通過(guò)拆分來(lái)制備。例如，可以通過(guò)例如以下的標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)將所述化合物拆分成它們的成分對(duì)映體通過(guò)與旋光酸例如(-)-二對(duì)甲苯酰-d-酒石酸和/或(+)-二對(duì)甲苯酰-l-酒石酸形成鹽而形成非對(duì)映異構(gòu)體，之后分步結(jié)晶和再生游離堿。所述化合物還可以通過(guò)形成非對(duì)映體酯或酰胺，然后進(jìn)行色譜分離并除去手性輔劑來(lái)拆分?；蛘?，所述化合物可使用手性HPLC柱拆分。
其中式(I)的化合物優(yōu)選具有L-α-谷氨酰胺衍生物。
在制備式(I)的化合物的任何方法中，可能需要和/或期望保護(hù)相關(guān)的任何分子上的敏感基團(tuán)或活性基團(tuán)。這可通過(guò)例如ProtectiveGroups in Organic Chemistry，ed.J.F.W.McOmie，Plenum Press，1973和T.W.Greene & P.G.M.Wuts，Protective Groups in Organic Synthesis，John Wiley & Sons，1971中所述的常規(guī)保護(hù)基的方法實(shí)現(xiàn)。保護(hù)基可在方便的后續(xù)階段使用本領(lǐng)域已知的常規(guī)方法除去。
另外，式(I)的化合物的一些結(jié)晶形式可以以多晶型物存在并同樣包括在本發(fā)明內(nèi)。另外，一些化合物可與水(即水合物)或常見(jiàn)有機(jī)溶劑形成溶劑合物，且這些溶劑合物也包括在本發(fā)明的范圍之內(nèi)。
式(I)的化合物及其藥學(xué)可接受的鹽也可以以其水合物形式得到，或包含用于其結(jié)晶的其它溶劑。
如上所述，式(I)的化合物及其藥學(xué)可接受的鹽可用于抑制DPIV和DP IV樣酶活性。式(I)的化合物及其藥學(xué)可接受的鹽抑制DPIV和DP IV樣酶活性的能力可采用DP IV活性測(cè)定法測(cè)定體外和人血漿中的Ki值來(lái)證明，如實(shí)施例4和5所述。本發(fā)明化合物針對(duì)豬腎DP IV的Ki值測(cè)定為對(duì)于谷氨酰胺酰噻唑烷，Ki＝3.12*10-7M±5.11*10-10M，而對(duì)于谷氨酰胺酰吡咯烷，Ki＝1.30*10-6M±8.49*10-8M。本發(fā)明化合物在人血漿中Ki值測(cè)定為對(duì)于谷氨酰胺酰噻唑烷預(yù)，預(yù)溫育5分鐘后Ki＝4.03*10-7M±2.19*10-10M、22小時(shí)后Ki＝5.13*10-7M±1.26*10-8M，而對(duì)于谷氨酰胺酰吡咯烷，預(yù)溫育5分鐘后Ki＝1.30*10-6M±4.89*10-8M、22小時(shí)后Ki＝1.36*10-6M±3.21*10-8M。
式(I)的化合物及其藥學(xué)可接受的鹽體內(nèi)抑制DP IV的能力可通過(guò)口服或血管內(nèi)給予Wistar大鼠來(lái)證明，如實(shí)施例9所述。所述化合物在口服和血管內(nèi)給予Wistar大鼠后均抑制DP IV活性。
式(I)的化合物及其藥學(xué)可接受的鹽在體內(nèi)能夠抑制DP IV。
式(I)的化合物及其藥學(xué)可接受的鹽通過(guò)降低對(duì)口服葡萄糖攻擊反應(yīng)而升高的血糖水平來(lái)改善葡萄糖耐量，因而用于治療非胰島素依賴(lài)型糖尿病。式(I)的化合物及其藥學(xué)可接受的鹽改善對(duì)口服葡萄糖攻擊反應(yīng)的葡萄糖耐量的能力可在糖尿病Zucker大鼠中測(cè)定。該方法在實(shí)施例6和7中描述?？诜o予5mg/kg b.w.、15mg/kg和50mg/kg b.w.的谷氨酰胺酰噻唑烷或谷氨酰胺酰吡咯烷導(dǎo)致升高的血糖水平劑量依賴(lài)性降低，從而改善糖尿病Zucker大鼠的葡萄糖耐量。
令人驚奇地，式(I)的化合物及其藥學(xué)可接受的鹽給予哺乳動(dòng)物后在體內(nèi)以可控的方式降解。式(I)的化合物及其藥學(xué)可接受的鹽在體內(nèi)被降解的能力可使用Wistar大鼠模型和隨后的LC/MS分析來(lái)測(cè)定(參見(jiàn)實(shí)施例8)。發(fā)現(xiàn)谷氨酰胺酰噻唑烷和谷氨酰胺酰吡咯烷在口服給予Wistar大鼠后分別被降解為焦谷氨酰胺酰噻唑烷(圖3)和焦谷氨酰胺酰吡咯烷(圖4)。
本發(fā)明的另一實(shí)施方案包括根據(jù)上述的本發(fā)明的任一實(shí)施方案的式(I)的化合物及其藥學(xué)可接受的鹽與如下物質(zhì)聯(lián)合的用途-與包含病毒載體的GLP-1基因治療表達(dá)系統(tǒng)聯(lián)合，所述病毒載體包含a)編碼GLP-1(胰高血糖素樣肽-1)的多核苷酸序列；和
b)編碼(a)的信號(hào)序列上游的多核苷酸序列；和c)(a)的多腺苷酸化信號(hào)下游；和d)位于編碼GLP-1的多核苷酸序列和編碼該信號(hào)序列的多核苷酸序列之間的編碼蛋白酶切割位點(diǎn)的多核苷酸序列；和e)其中GLP-1的表達(dá)在組成型啟動(dòng)子的控制下或由可調(diào)節(jié)型啟動(dòng)子控制；f)其中任選地，病毒載體包含編碼GIP(葡萄糖依賴(lài)性促胰島素肽)的多核苷酸序列；g)其中任選地，病毒載體由哺乳動(dòng)物細(xì)胞包裹。和/或-與包含病毒載體的GIP基因治療表達(dá)系統(tǒng)聯(lián)合，所述病毒載體包含a)編碼GIP(葡萄糖依賴(lài)性促胰島素肽)的多核苷酸序列；和b)編碼(a)的信號(hào)序列上游的多核苷酸序列；和c)(a)的多腺苷酸化信號(hào)下游；和d)位于編碼GIP的多核苷酸序列和編碼該信號(hào)序列的多核苷酸序列之間的編碼蛋白酶切割位點(diǎn)的多核苷酸序列；和e)其中GIP的表達(dá)在組成型啟動(dòng)子的控制下或由可調(diào)節(jié)型啟動(dòng)子控制；f)其中任選地，病毒載體包含編碼GLP-1(胰高血糖素樣肽-1)的多核苷酸序列；g)其中任選地，病毒載體由哺乳動(dòng)物細(xì)胞包裹。
本發(fā)明的另一實(shí)施方案包括根據(jù)上述的本發(fā)明的任一實(shí)施方案式(I)的化合物及其藥學(xué)可接受的鹽與GIP和/或GIP基因治療表達(dá)系統(tǒng)聯(lián)合的用途，其中-目標(biāo)(GLP-1；GIP)基因的信號(hào)序列上游為鼠免疫球蛋白κ信號(hào)序列或glia monster exendin信號(hào)序列；和/或
-目標(biāo)(GLP-1；GIP)基因的多腺苷酸化信號(hào)下游源于猿猴病毒40(SV 40)；和/或蛋白酶切割位點(diǎn)被furin蛋白酶(preotease)切割；和/或-用于目標(biāo)基因表達(dá)的基因傳輸載體為腺病毒、逆轉(zhuǎn)錄病毒、leniviral、腺相關(guān)病毒載體；和/或-組成型啟動(dòng)子為巨細(xì)胞病毒(CMV)啟動(dòng)子或勞斯肉瘤長(zhǎng)末端重復(fù)(LTR)序列和SV 40早期基因基因啟動(dòng)子；且誘導(dǎo)型啟動(dòng)子為可購(gòu)自Clontech的Tet-OnTM/Tet-OffTM系統(tǒng)；和/或-哺乳動(dòng)物細(xì)胞為靈長(zhǎng)類(lèi)動(dòng)物或嚙齒類(lèi)動(dòng)物細(xì)胞，優(yōu)選人細(xì)胞，更優(yōu)選人肝細(xì)胞。
本文所用的術(shù)語(yǔ)“個(gè)體”指作為治療、觀察或?qū)嶒?yàn)的對(duì)象的動(dòng)物，優(yōu)選哺乳動(dòng)物，最優(yōu)選人。
本文所用的術(shù)語(yǔ)“治療有效量”指研究員、獸醫(yī)、醫(yī)生或其它臨床人員尋求的在組織系統(tǒng)、動(dòng)物或人中引起生物或藥物反應(yīng)包括正在治療的疾病或病癥的緩解的活性化合物或藥物活性劑的量。
本文所用的術(shù)語(yǔ)“糖尿病相關(guān)病癥”包括前驅(qū)糖尿病狀態(tài)相關(guān)病癥、糖尿病本身相關(guān)病癥和糖尿病相關(guān)并發(fā)癥。
本文所用的術(shù)語(yǔ)“前驅(qū)糖尿病狀態(tài)相關(guān)病癥”包括諸如胰島素抵抗、葡萄糖耐受不良和高胰島素血癥的病癥，所述胰島素抵抗包括遺傳性胰島素抵抗。
“糖尿病相關(guān)病癥”本身包括高血糖癥、包括獲得性胰島素抵抗在內(nèi)的胰島素抵抗和肥胖。其它糖尿病本身相關(guān)病癥包括高血壓和心血管疾病尤其是動(dòng)脈粥樣硬化以及胰島素抵抗相關(guān)病癥。胰島素抵抗相關(guān)病癥包括多囊卵巢綜合征和類(lèi)固醇誘導(dǎo)的胰島素抵抗和妊娠糖尿病。
“糖尿病相關(guān)并發(fā)癥”包括腎病尤其是2型糖尿病相關(guān)腎病、神經(jīng)病變和視網(wǎng)膜病變。
2型糖尿病相關(guān)腎病包括腎病、腎小球性腎炎、腎小球硬化、腎病綜合征、高血壓腎硬化和末期腎病。
如本文所用，術(shù)語(yǔ)“藥學(xué)可接受的”包括人和獸醫(yī)使用例如術(shù)語(yǔ)“藥學(xué)可接受的”包括獸醫(yī)可接受的化合物或人醫(yī)藥衛(wèi)生保健中可接受的化合物。
為了制備本發(fā)明的藥物組合物，式(I)的化合物及其藥學(xué)可接受的鹽，任選地與至少一種其它抗糖尿病藥聯(lián)合，可用作活性成分。根據(jù)常規(guī)藥物復(fù)合技術(shù)，將該活性成分與藥物載體充分混合，所述載體可根據(jù)給藥所需的制劑形式例如口服或腸胃外如肌內(nèi)而采用多種形式。在制備口服劑型的組合物中，任何常用的藥物介質(zhì)均可使用。因此，對(duì)于液體口服制劑例如混懸劑、酏劑和溶液劑，合適的載體和添加劑包括水、乙二醇、油、醇、調(diào)味劑、防腐劑、著色劑等；對(duì)于固體口服制劑例如散劑、膠囊劑、膠囊錠(gelcap)和片劑，合適的載體和添加劑包括淀粉、糖、稀釋劑、造粒劑、潤(rùn)滑劑、粘合劑、崩解劑等。由于片劑和膠囊劑易于給藥，因此它們代表最有利的口服單元?jiǎng)┬?，在這種情況下顯然使用固體藥物載體。如果需要，片劑可通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)進(jìn)行包糖衣或包腸溶衣。對(duì)于腸胃外給藥，載體通常包含無(wú)菌水，不過(guò)也可包含其它成分例如為例如有助于溶解或用于保存的目的。
也可制備注射用混懸劑，在這種情況下可使用合適的液體載體、助懸劑等。本文的藥物組合物每劑量單元如每片、每粒膠囊、每包散劑、每支注射劑、每茶匙量等包含遞送上述有效劑量所需的活性成分量。本文的藥物組合物每劑量單元例如每片、每粒膠囊、每包散劑、每支注射劑、每茶匙量等包含約0.03mg-100mg/kg(優(yōu)選0.1-30mg/kg)的每種活性成分或其組合，且可以以約0.1-300mg/kg/日(優(yōu)選1-50mg/kg/日)的劑量給予。不過(guò)，劑量可根據(jù)患者需要、治療病癥的嚴(yán)重程度和使用的化合物而改變?？刹捎妹咳战o藥或周期后(post-periodic)給藥。
優(yōu)選地，這些組合物為例如以下的單元?jiǎng)┬推瑒?、丸劑、膠囊劑、散劑、顆粒劑、無(wú)菌腸胃外溶液或混懸劑、計(jì)量氣霧劑或液體噴霧劑、滴劑、安瓿、自我注射器裝置或栓劑；用于口服、腸胃外、鼻內(nèi)、舌下或直腸給藥，或用于吸入或吹入給藥?；蛘撸摻M合物可以以適于每周一次或每月一次給藥的形式存在；例如活性化合物的不溶鹽如癸酸鹽可適于提供用于肌內(nèi)注射的貯存制劑。對(duì)于制備固體組合物例如片劑，將主要活性成分與藥物載體例如常規(guī)制片成分如玉米淀粉、乳糖、蔗糖、山梨糖醇、滑石、硬脂酸、硬脂酸鎂、磷酸二鈣或樹(shù)膠和其它藥物稀釋劑如水相混合，以形成包含本發(fā)明的化合物或其藥學(xué)可接受的鹽的均勻混合物的固體預(yù)制劑組合物。當(dāng)提及這些預(yù)制劑組合物為均一時(shí)，其意指活性成分均勻分散于組合物中使得該組合物易于細(xì)分成等效劑型如片劑、丸劑和膠囊劑。然后該固體預(yù)制劑組合物細(xì)分為上述類(lèi)型的單元?jiǎng)┬停繂卧獎(jiǎng)┬椭邪?.1-約500mg的本發(fā)明的每種成分或其組合物。
本發(fā)明組合物的片劑或丸劑可被包衣或復(fù)合以提供具有長(zhǎng)效作用優(yōu)點(diǎn)的劑型。例如，片劑或丸劑可包含內(nèi)部劑量和外部劑量成分，后者為前者上的包膜形式。這兩種成分可由腸溶衣層分開(kāi)，該腸溶衣層用以抵抗胃中崩解并允許內(nèi)部成分完整地進(jìn)入十二指腸或延遲釋放。多種材料可用于這種腸溶衣層或包衣，這些材料包括許多聚合酸和如蟲(chóng)膠、鯨蠟醇和乙酸纖維素的材料。
可引入本發(fā)明的組合物以用于口服或注射給藥的液體劑型包括水溶液劑、合適的調(diào)味糖漿劑、含水或油混懸劑和用可食用油如棉籽油、芝麻油、椰子油或花生油調(diào)味的乳劑，以及酏劑和類(lèi)似的藥物載體。用于含水混懸劑的合適的分散劑或助懸劑包括合成和天然樹(shù)膠如黃蓍膠、阿拉伯樹(shù)膠、藻酸鹽、葡聚糖、羧甲基纖維素鈉、甲基纖維素、聚乙烯吡咯烷酮或明膠。
如本發(fā)明所述，治療糖尿病、糖尿病相關(guān)病癥和前驅(qū)糖尿病狀態(tài)相關(guān)病癥的方法還可使用包含式(I)的化合物或其藥學(xué)可接受的鹽和任選地至少一種其它抗糖尿病藥或本文所定義的任何其它化合物以及藥學(xué)可接受的載體的藥物組合物來(lái)進(jìn)行。該藥物組合物可包含約0.01mg-100mg，優(yōu)選約5-50mg的每種化合物，并可組成任何適于所選的給藥形式的劑型。載體包括必要的和惰性的藥物賦形劑，包括但不限于粘合劑、助懸劑、潤(rùn)滑劑、食用香料、甜味劑、防腐劑、染料和包衣。適于口服給藥的組合物包括固體形式例如丸劑、片劑、囊片、膠囊劑(每種包括速釋、定時(shí)釋放和緩釋制劑)、顆粒劑和散劑，液體形式例如溶液劑、糖漿劑、酏劑、乳劑和混懸劑。適于腸胃外給藥的形式包括無(wú)菌溶液劑、乳劑和混懸劑。
有利地，式(I)的化合物及其藥學(xué)可接受的鹽可以單次日劑量給藥，或總?cè)談┝恳悦咳諆?、三或四次分開(kāi)的劑量給藥。此外，所述化合物可通過(guò)局部使用合適的鼻內(nèi)載體以鼻內(nèi)形式或通過(guò)本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的透皮藥貼給藥。為以透皮遞送系統(tǒng)的形式給藥，在整個(gè)給藥方案中，劑量的給藥當(dāng)然應(yīng)是連續(xù)的而非間斷的。
例如，對(duì)于以片劑或膠囊形式的口服給藥，可以將活性藥物成分與口服、無(wú)毒的藥學(xué)可接受的惰性載體如乙醇、甘油、水等組合。而且，當(dāng)期望或必需時(shí)，還可以將合適的粘合劑、潤(rùn)滑劑、崩解劑和著色劑引入該混合物中。合適的粘合劑包括但不限于淀粉、明膠、天然糖類(lèi)如葡萄糖或β乳糖、玉米甜味劑、天然和合成樹(shù)膠如阿拉伯樹(shù)膠、黃蓍膠或油酸鈉、硬脂酸鈉、硬脂酸鎂、苯甲酸鈉、乙酸鈉、氯化鈉等。崩解劑包括但不限于淀粉、甲基纖維素、瓊脂、膨潤(rùn)土、黃原膠等。
液體形式在合適的調(diào)味助懸劑或分散劑例如合成和天然樹(shù)膠如黃蓍膠、阿拉伯樹(shù)膠、甲基纖維素等中。對(duì)于腸胃外給藥，需要無(wú)菌懸浮液和溶液。當(dāng)需要靜脈給藥時(shí)，使用一般含有合適的防腐劑的等滲制劑。
本發(fā)明的式(I)的化合物和組合還可以以脂質(zhì)體遞送系統(tǒng)例如小單層囊泡、大單層囊泡和多層囊泡的形式給予。脂質(zhì)體可由多種磷脂如膽固醇、硬脂酰胺或磷脂酰膽堿形成。
本發(fā)明的式(I)的化合物和組合還可通過(guò)使用單克隆抗體作為該化合物分子偶聯(lián)的單獨(dú)載體來(lái)遞送。本發(fā)明的化合物還可以與作為靶向藥物載體的可溶性聚合物相偶聯(lián)。這些聚合物可包括聚乙烯吡咯烷酮、吡喃共聚物、聚羥丙基甲基丙烯酰胺酚、聚羥乙基天冬酰胺酚或棕櫚酸殘基取代的聚環(huán)氧乙烷聚賴(lài)氨酸。另外，本發(fā)明的化合物可與一類(lèi)用于實(shí)現(xiàn)藥物控釋的可生物降解的聚合物偶聯(lián)，這些聚合物例如聚乳酸(polyactic acid)、聚ε己內(nèi)酯、聚羥基丁酸、聚原酸酯、聚縮醛、聚二氫吡喃、聚氰基丙烯酸酯以及水凝膠交聯(lián)或兩親嵌段共聚物。
在所述疾病需要治療的任何時(shí)候，式(I)的化合物和本發(fā)明的組合可以以任何前述組合物的形式并根據(jù)本領(lǐng)域確定的給藥方案給予。
產(chǎn)品的日劑量可以在0.01-1.000mg/哺乳動(dòng)物/日的大范圍內(nèi)變化。對(duì)于口服給藥，所述組合物優(yōu)選以片劑形式提供，所述片劑包含0.01、0.05、0.1、0.5、1.0、2.5、5.0、10.0、15.0、25.0、50.0、100、150、200、250和500毫克的每種活性成分或其組合以用于根據(jù)癥狀調(diào)整患者的劑量。藥物的有效量通常以約0.1mg/kg-約300mg/kg體重/日的劑量水平提供。優(yōu)選地，該范圍是約1-約50mg/kg體重/日。這些化合物或組合可按每日1-4次的方案給藥。
給藥的最佳劑量可由本領(lǐng)域技術(shù)人員容易地確定，且根據(jù)所用的具體化合物、給藥方式、制劑強(qiáng)度、給藥方式和病癥的進(jìn)展而改變。另外，治療的具體患者的相關(guān)因素，包括患者年齡、體重、飲食和給藥時(shí)間將導(dǎo)致需要調(diào)整劑量。
式(I)的化合物及其藥學(xué)可接受的鹽和其它抗糖尿病藥優(yōu)選口服給藥。
合適地，本發(fā)明的治療提供的對(duì)血糖控制的尤其有益作用是與單獨(dú)且以提供與本發(fā)明的組合等效的劑量使用所述組合中的一種化合物的治療比率相比，本發(fā)明的組合的治療比率改善。
優(yōu)選方面，本發(fā)明的治療提供的對(duì)血糖控制的尤其有益作用可顯示為與單個(gè)活性劑作用預(yù)期的對(duì)照相比有協(xié)同作用。
本發(fā)明的另一方面，式(I)的化合物及其藥學(xué)可接受的鹽和其它抗糖尿病藥的組合劑量可產(chǎn)生比以所述組合中所用活性劑的兩倍劑量單獨(dú)使用的任何該活性劑所獲得的更有益的作用。
血糖控制可采用常規(guī)方法例如通過(guò)測(cè)量通常使用的血糖控制指數(shù)如口服血漿葡萄糖或糖基化血紅蛋白(HbA1c)來(lái)表征。這些指數(shù)可采用標(biāo)準(zhǔn)方法例如Tuescher A，Richterich P.，Schweiz.med.Wschr.101(1971)，345和390和Frank P.，‘Monitoring the Diabetic Patent withGlycosolated Hemoglobin Measurements’，Clinical Products 1988中所述的那些進(jìn)行測(cè)定。
根據(jù)本發(fā)明的方法使用的每種活性劑的劑量水平可以少于血糖控制的純相加作用所需的劑量水平。
本發(fā)明的方法相對(duì)于單個(gè)活性劑而言還實(shí)現(xiàn)對(duì)晚期糖基化終末產(chǎn)物(AGE)和血清脂質(zhì)包括總膽固醇、HDL-膽固醇、LDL-膽固醇水平的改善，包括其比率的改善，特別是血清脂質(zhì)包括總膽固醇、HDL-膽固醇、LDL-膽固醇的改善，包括其比率的改善。
另一方面，本發(fā)明還提供了制備包含式(I)的化合物或其藥學(xué)可接受的鹽、另一種抗糖尿病藥和其藥學(xué)可接受的載體的藥物組合物的方法，所述方法包括混合式(I)的化合物或其藥學(xué)可接受的鹽、另一種抗糖尿病藥和藥學(xué)可接受的載體。
該組合物優(yōu)選為適于相應(yīng)日劑量的量的單元?jiǎng)┬汀?br> 式(I)的化合物或其它抗糖尿病藥的合適劑量尤其包括單元?jiǎng)┝?，包括已知的劑量，該已知?jiǎng)┝堪▍⒖嘉墨I(xiàn)例如英國(guó)和美國(guó)藥典、Remington’s Pharmaceutical Sciences(Mack Publishing Co.)、Martindale The Extra Pharmacopoeia(London，The Pharmaceutical Press)(例如參見(jiàn)第31版341頁(yè)和本文引用頁(yè))或上述的出版物中描述或提及的那些化合物的單元?jiǎng)┝俊?br> 因而，式(I)的化合物的合適劑量包括其中所公開(kāi)的那些，例如0.01-30mg/日或0.01-10mg/千克體重。另外，本文所述的DP IV抑制劑的合適劑量包括上述相關(guān)出版物提及的那些。
對(duì)于α糖苷酶抑制劑，阿卡波糖的合適量為25-600mg，包括50-600mg，例如100mg或200mg。
對(duì)于雙胍類(lèi)，二甲雙胍的合適劑量為100-3000mg，例如250、500mg、850mg或1000mg。
對(duì)于胰島素促分泌劑，格列本脲的合適劑量為2.5-20mg，例如10mg或20mg；格列吡嗪的合適劑量為2.5-40mg；格列齊特的合適劑量為40-320mg；妥拉磺脲的合適劑量為100-1000mg；甲苯磺丁脲的合適劑量為1000-3000mg；氯磺丙脲的合適劑量為100-500mg；格列喹酮的合適劑量為15-180mg。另外格列美脲的合適劑量為1-6mg，格列戊脲的合適劑量為2.5-20mg。
瑞格列奈的合適劑量為0.5mg-20mg，例如16mg。另外那替格列的合適劑量為90-360mg，例如270mg。
在一具體方面，該組合物包含2-12mg的5-[4-[2-(N-甲基-N-(2-吡啶基)氨基)乙氧基]芐基]噻唑烷-2，4-二酮。
其它胰島素增敏劑的合適單元?jiǎng)┝堪?00-800mg的曲格列酮，例如200、400、600或800mg或5-50mg的匹格列酮，包括10-40mg例如20、30或40mg，還包括15、30和45mg的匹格列酮。
其它PPARy激動(dòng)劑型胰島素增敏劑的合適劑量包括上述的申請(qǐng)中對(duì)相應(yīng)的激動(dòng)劑所公開(kāi)的那些劑量，例如根據(jù)WO 97/31907公開(kāi)的劑量合適地給予2-(1-羧基-2-{4-{2-(5-甲基-2-苯基噁唑-4-基)乙氧基}苯基}乙氨基)苯甲酸甲酯和2(S)-(2-苯甲?；桨被?-3-{4-[2-(5-甲基-2-苯基噁唑-4-基)乙氧基]苯基}丙酸的劑量。
另外，任何給定組合物中的每種具體活性劑的劑量可在就對(duì)于該化合物接受的給藥方案方面已知的所要求的劑量范圍內(nèi)根據(jù)需要改變。每種活性劑的劑量也可根據(jù)需要加以改變以考慮與本文所述活性劑組合的有利作用。
式(I)的化合物或本發(fā)明的組合物可于飯前、飯時(shí)或飯后服用。
當(dāng)飯前服用時(shí)，式(I)的化合物或本發(fā)明的組合物可于飯前1小時(shí)，優(yōu)選30或甚至15或5分鐘服用。
當(dāng)飯時(shí)服用時(shí)，式(I)的化合物或本發(fā)明的組合物可混于飯中或以上述的單獨(dú)劑型服用。
當(dāng)飯后服用時(shí)，式(I)的化合物或本發(fā)明的組合物可于飯后5、15或30分鐘或甚至1小時(shí)服用。
預(yù)期本發(fā)明的組合物或方法在上述的劑量范圍內(nèi)無(wú)副性毒性反應(yīng)。
本說(shuō)明書(shū)中所引用的包括但不限于專(zhuān)利和專(zhuān)利申請(qǐng)的所有出版物均引入本文作為參考，如同每個(gè)單獨(dú)的出版物如本文中全部闡述的那樣被明確且單個(gè)地指出引入本文作為參考。
實(shí)施例實(shí)施例1谷氨酰胺酰吡咯烷游離堿的合成將N-芐氧羰基谷氨酰胺(2.02g，7.21mmol)溶于35mL THF中，冷卻至-15℃。加入CAIBE(氯甲酸異丁酯)(0.937mL，7.21mmol)和4-甲基嗎啉(0.795mL，7.21mmol)，并將溶液攪拌15分鐘。將所形成的混合酸酐用TLC(洗脫液氯仿/甲醇9/1)檢測(cè)。暖至-10℃后加入吡咯烷(0.596mL，7.21mmol)。將混合物置于室溫，攪拌過(guò)夜。濾去所形成的沉淀并蒸發(fā)溶劑。所得油狀物用乙酸乙酯(20mL)吸收，并用飽和硫酸氫鈉溶液、之后用飽和碳酸氫鈉溶液、水和鹽水洗滌。分離有機(jī)層，干燥并蒸發(fā)。所得產(chǎn)物用TLC(洗脫液氯仿/甲醇9/1)檢測(cè)純度。產(chǎn)量1.18g。將該產(chǎn)物溶于無(wú)水乙醇(40mL)中。向溶液中加入約20mg炭載鈀(10％，F(xiàn)LUKA)，在氫氣氛下振搖該懸浮液3小時(shí)。反應(yīng)進(jìn)程用TLC(洗脫液氯仿/甲醇9/1)監(jiān)測(cè)。反應(yīng)完成后除去催化劑和溶劑，得到標(biāo)題化合物。用TLC檢測(cè)純度正丁醇/乙醇/水/乙酸乙酯1/1/1/1，Rf＝0.4。反應(yīng)產(chǎn)物用NMR分析鑒定。
實(shí)施例2谷氨酰胺酰噻唑烷鹽酸鹽的合成將N-叔丁氧羰基谷氨酰胺(2.0g，8.12mmol)溶于THF(5mL)中，冷卻至-15℃。加入CAIBE(氯甲酸異丁酯)(1.06mL，8.12mmol)和4-甲基嗎啉(0.895mL，8.12mmol)，并將溶液攪拌15分鐘。將所形成的混合酸酐用TLC(洗脫液氯仿/甲醇9/1)檢測(cè)。暖至-10℃后加入另一當(dāng)量的4-甲基嗎啉(0.895mL，8.12mmol)與噻唑烷鹽酸鹽(1.02g，8.12mmol)。將混合物置于室溫，攪拌過(guò)夜。濾去所形成的沉淀并蒸發(fā)溶劑。所得油狀物用氯仿(20mL)吸收，并用飽和硫酸氫鈉溶液、之后用飽和碳酸氫鈉溶液、水和鹽水洗滌。分離有機(jī)層，干燥并蒸發(fā)。所得產(chǎn)物用TLC(洗脫液氯仿/甲醇9/1)檢測(cè)純度。產(chǎn)量1.64g。將部分該產(chǎn)物(640mg)溶于在二噁烷(12.98M，20當(dāng)量)中的3.1mL冰HCl中，并置于冰上。反應(yīng)進(jìn)程用TLC(洗脫液氯仿/甲醇9/1)監(jiān)測(cè)。反應(yīng)完成后除去溶劑，將所得的殘余物用甲醇吸收并再次蒸發(fā)。將所得油狀物通過(guò)五氧化二磷干燥并用乙醚研磨2次，得到標(biāo)題化合物(0.265g)。通過(guò)HPLC檢測(cè)純度。反應(yīng)產(chǎn)物用NMR分析鑒定。
實(shí)施例3谷氨酰胺酰吡咯烷鹽酸鹽的合成將N-叔丁氧羰基谷氨酰胺(3.0g，12.18mmol)溶于THF(7mL)中，冷卻至-15℃。加入CAIBE(氯甲酸異丁酯)(1.6mL，12.18mmol)和4-甲基嗎啉(1.3mL，12.18mmol)，并將溶液攪拌15分鐘。將所形成的混合酸酐用TLC(洗脫液氯仿/甲醇9/1)檢測(cè)。暖至-10℃后加入一當(dāng)量的吡咯烷(1.0mL，12.18mmol)。將混合物置于室溫，攪拌過(guò)夜。濾去所形成的沉淀并蒸發(fā)溶劑。所得殘余物用氯仿(20mL)吸收，并用飽和硫酸氫鈉溶液、之后用飽和碳酸氫鈉溶液、水和鹽水洗滌。分離有機(jī)層，干燥并蒸發(fā)。所得產(chǎn)物用TLC(洗脫液氯仿/甲醇9/1)檢測(cè)純度。將所得固體(2.7g)溶于在二噁烷(12.98M，20當(dāng)量)中的13.0mL冰HCl中，并置于冰上。反應(yīng)進(jìn)程用TLC(洗脫液氯仿/甲醇9/1)監(jiān)測(cè)。反應(yīng)完成后除去溶劑，將所得的殘余物用甲醇吸收并再次蒸發(fā)。將所得殘余物通過(guò)五氧化二磷干燥并用乙醚研磨2次，得到標(biāo)題化合物(980mg)。通過(guò)HPLC檢測(cè)純度。反應(yīng)產(chǎn)物用NMR分析鑒定。
實(shí)施例4Ki值的測(cè)定對(duì)于谷氨酰胺酰吡咯烷和谷氨酰胺酰噻唑烷的Ki值測(cè)定，使用37.5U/mg對(duì)甘氨酰脯氨酰-4-硝基苯胺有特異活性的豬腎二肽基肽酶IV，儲(chǔ)備液中酶濃度為1.41mg/ml。
將100μL濃度分別為1*10-5M-1*10-7M(谷氨酰胺酰吡咯烷)和1*10-6M-1*10-8M(谷氨酰胺酰噻唑烷)的谷氨酰胺酰吡咯烷或谷氨酰胺酰噻唑烷與50μL不同濃度(0.4mM、0.2mM、0.1mM、0.05mM)的甘氨酰脯氨酰-4-硝基苯胺及100μL HEPES(40mM，pH 7.6；離子強(qiáng)度＝0.125)混合。將該測(cè)試混合物在30℃下預(yù)溫育30分鐘。預(yù)溫育后，加入20μL DP IV(1∶600稀釋)，并使用平板讀數(shù)器(HTS7000 plus，Applied Biosystems，Weiterstadt，Germany)于30℃和λ＝405nm下測(cè)定10分鐘，檢測(cè)因4-硝基苯胺釋放產(chǎn)生的黃色顯色。使用Graphit4.0.15(Erithacus Software，Ltd，UK)基于谷氨酰胺酰吡咯烷或谷氨酰胺酰噻唑烷對(duì)DP IV競(jìng)爭(zhēng)性抑制來(lái)計(jì)算Ki值。對(duì)于谷氨酰胺酰噻唑烷它們測(cè)定為Ki＝3.12*10-7M±5.11*10-10M，而對(duì)于谷氨酰胺酰吡咯烷測(cè)定為Ki＝1.30*10-6M±8.49*10-8M。
實(shí)施例5人血漿Ki值的測(cè)定人血漿具有N-末端Xaa-Pro釋放活性。將70μL濃度分別為1*10-5M-1*10-7M(谷氨酰胺酰吡咯烷)和1*10-6M-1*10-8M(谷氨酰胺酰噻唑烷)的谷氨酰胺酰吡咯烷或谷氨酰胺酰噻唑烷與50μL不同濃度(0.4mM、0.2mM、0.1mM、0.05mM)的甘氨酰脯氨酰-4-硝基苯胺及100μL HEPES(40mM，pH 7.6)混合。將測(cè)試混合物在30℃下分別預(yù)溫育5分鐘和22小時(shí)。預(yù)溫育后，加入50μL人血漿，并使用平板讀數(shù)器(HTS7000plus，Applied Biosystems，Weiterstadt，Germany)于30℃和λ＝405nm下測(cè)定10分鐘，檢測(cè)因4-硝基苯胺釋放產(chǎn)生的黃色顯色。使用Graphit 4.0.15(Erithacus Software，Ltd，UK)基于谷氨酰胺酰吡咯烷或谷氨酰胺酰噻唑烷對(duì)DP IV競(jìng)爭(zhēng)性抑制來(lái)計(jì)算Ki值。對(duì)于谷氨酰胺酰噻唑烷，預(yù)溫育5分鐘后它們測(cè)定為Ki＝4.03*10-7M±2.19*10-10M、預(yù)溫育22小時(shí)后Ki＝5.13*10-7M±1.26*10-8M，而對(duì)于谷氨酰胺酰吡咯烷，預(yù)溫育5分鐘后測(cè)定為Ki＝1.30*10-6M±4.89*10-8M、預(yù)溫育22小時(shí)后Ki＝1.36*10-6M±3.21*10-8M。
實(shí)施例6口服給予谷氨酰胺酰吡咯烷后肥胖Zucker大鼠中的劑量漸增研究N＝30只平均年齡11周(5-12周)、平均體重350克(150-400g)的雄性Zucker大鼠(fa/fa)購(gòu)自Charles River(Sulzfeld，Germany)。送到后，飼養(yǎng)＞12周直至幾乎所有的肥胖Zucker大鼠具有明顯的糖尿病特征。使用N＝8只動(dòng)物測(cè)試3種漸增劑量的谷氨酰胺酰吡咯烷與安慰劑(鹽水)相比。動(dòng)物在控制溫度(22±2℃)，12/12小時(shí)光照/黑暗周期(光照自06:00AM開(kāi)始)的標(biāo)準(zhǔn)條件下單籠飼養(yǎng)。自由飲食無(wú)菌標(biāo)準(zhǔn)丸狀食糧(ssniff Soest，Germany)和HCl酸化的自來(lái)水。適應(yīng)飼養(yǎng)條件的24-31周齡(平均25周)的肥胖Zucker大鼠為該研究進(jìn)行充分的準(zhǔn)備。在全身麻醉(i.p.注射0.25mL/kg b.w.Rompun[2％]，BayerVital，Germany和0.5mg/kg b.w.Ketamin 10，Atarost GmbH & Co.，Twistringen，Germany)下將導(dǎo)管植入肥胖Zucker大鼠頸動(dòng)脈中。允許動(dòng)物恢復(fù)一周。導(dǎo)管用肝素-鹽水(100IU/ml)每周沖洗3次。
向N＝8只的肥胖Zucker大鼠給予安慰劑(1mL鹽水，0.154mol/l)或漸增劑量的谷氨酰胺酰吡咯烷(5、15和50mg/kg b.w.)。將375mg谷氨酰胺酰吡咯烷溶于1000μL DMSO(E.Merck，Darmstadt；Germany [Dimethyl sulfoxide p.a.]([二甲基亞砜p.a.]))中。加入10mL鹽水和1mL每份含有34.09mg谷氨酰胺酰吡咯烷的等分試樣儲(chǔ)存于-20℃下。為制備測(cè)試物質(zhì)，用鹽水稀釋劑量依賴(lài)性等分試樣。過(guò)夜禁食后，在-10分鐘時(shí)經(jīng)飼管(15G，75mm；Fine Science Tools，Heidelberg，Germany)向肥胖Zucker大鼠口服給予安慰劑或測(cè)試物質(zhì)。在±0分鐘時(shí)經(jīng)另一根飼管給予2g/kg b.w.葡萄糖(40％溶液，B.BraunMelsungen，Melsungen，Germany)進(jìn)行口服葡萄糖耐受測(cè)試(OGTT)。在-30分鐘、-15分鐘、±0分鐘以及在5、10、15、20、30、40、60、90及120分鐘時(shí)用20μL玻璃毛細(xì)管從尾靜脈采集靜脈血樣，將這些玻璃毛細(xì)管置于含有1mL用于測(cè)定血糖的溶液的標(biāo)準(zhǔn)試管中。所有的血樣均標(biāo)上編碼、動(dòng)物號(hào)、取樣日期和取樣時(shí)間。
用葡萄糖氧化酶方法(Super G Glucose analyzer；Dr.MüllerGertebau，F(xiàn)reital，Germany)測(cè)定葡萄糖水平。
使用PRISM3.02(GraphPad Software，Inc)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)評(píng)價(jià)及制圖。所有的參數(shù)以描述性方式包括均值和標(biāo)準(zhǔn)差進(jìn)行分析。
用安慰劑處理的糖尿病Zucker大鼠顯示出顯著增高的血糖偏移，表明具有明顯的糖尿病的葡萄糖耐受不良。給予5mg/kg b.w.谷氨酰胺酰吡咯烷使得糖尿病Zucker大鼠的葡萄糖耐受有限改善。給予15mg/kg和50mg/kg b.w.谷氨酰胺酰吡咯烷后獲得升高的血糖水平的顯著降低以及葡萄糖耐受的顯著改善(見(jiàn)圖3)。
實(shí)施例7口服給予谷氨酰胺酰噻唑烷后肥胖Zucker大鼠中的劑量漸增研究N＝30只平均年齡11周(5-12周)、平均體重350克(150-400g)的雄性Zucker大鼠(fa/fa)購(gòu)自Charles River(Sulzfeld，Germany)。送到后，飼養(yǎng)＞12周直至幾乎所有的肥胖Zucker大鼠具有明顯的糖尿病特征。使用N＝8只動(dòng)物測(cè)試3種漸增劑量的谷氨酰胺酰噻唑烷與安慰劑(鹽水)相比。動(dòng)物在控制溫度(22±2℃)，12/12小時(shí)光照/黑暗周期(光照自06:00AM開(kāi)始)的標(biāo)準(zhǔn)條件下單籠飼養(yǎng)。自由飲食無(wú)菌標(biāo)準(zhǔn)丸狀食糧(ssniffSoest，Germany)和HCl酸化的自來(lái)水。適應(yīng)飼養(yǎng)條件的24-31周齡(平均25周)的肥胖Zucker大鼠為該研究進(jìn)行充分的準(zhǔn)備。在全身麻醉(i.p.注射0.25mL/kg b.w.Rompun[2％]，BayerVital，Germany和0.5mg/kg b.w.Ketamin 10，Atarost GmbH & Co.，Twistringen，Germany)下將導(dǎo)管植入肥胖Zucker大鼠頸動(dòng)脈中。允許動(dòng)物恢復(fù)一周。導(dǎo)管用肝素-鹽水(100IU/ml)每周沖洗3次。
向N＝8只的肥胖Zucker大鼠給予安慰劑(1mL鹽水，0.154mol/l)或漸增劑量的谷氨酰胺酰噻唑烷(5、15和50mg/kg b.w.)。將各自量的谷氨酰胺酰噻唑烷溶于1000μL鹽水中。過(guò)夜禁食后，在-10分鐘時(shí)經(jīng)飼管(15G，75mm；Fine Science Tools，Heidelberg，Germany)向肥胖Zucker大鼠口服給予安慰劑或測(cè)試物質(zhì)。在±0分鐘時(shí)經(jīng)另一根飼管給予2g/kg b.w.葡萄糖(40％溶液，B.Braun Melsungen，Melsungen，Germany)進(jìn)行口服葡萄糖耐受測(cè)試(OGTT)。在-30分鐘、-15分鐘、±0分鐘以及在5、10、15、20、30、40、60、90及120分鐘時(shí)用20μL玻璃毛細(xì)管從尾靜脈采集靜脈血樣，將這些玻璃毛細(xì)管置于含有1mL用于測(cè)定血糖的溶液的標(biāo)準(zhǔn)試管中。所有的血樣均標(biāo)上編碼、動(dòng)物號(hào)、取樣日期和取樣時(shí)間。
用葡萄糖氧化酶方法(Super G Glucose analyzer；Dr.MüllerGertebau，F(xiàn)reital，Germany)測(cè)定葡萄糖水平。
使用PRISM3.02(GraphPad Software，Inc)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)評(píng)價(jià)及制圖。所有的參數(shù)以描述性方式包括均值和標(biāo)準(zhǔn)差進(jìn)行分析。
用安慰劑處理的糖尿病Zucker大鼠顯示出顯著增高的血糖偏移，表明具有明顯的糖尿病的葡萄糖耐受不良。給予5mg/kg b.w.、15mg/kg和50mg/kg b.w.谷氨酰胺酰噻唑烷導(dǎo)致糖尿病Zucker大鼠升高的血糖水平劑量依賴(lài)性降低并使葡萄糖耐受改善(見(jiàn)圖4)。
實(shí)施例8口服給予Wistar大鼠后谷氨酰胺酰噻唑烷的體內(nèi)滅活口服給予Wistar大鼠谷氨酰胺酰噻唑烷。在施用安慰劑或谷氨酰胺酰噻唑烷后，在2.5、5、7.5、10、15、20、40、60和120分鐘時(shí)從意識(shí)清醒無(wú)限制的大鼠的頸動(dòng)脈插管中采集動(dòng)脈血樣以測(cè)定谷氨酰胺酰噻唑烷降解產(chǎn)物的生成。為分析，采用C18柱以簡(jiǎn)單固相萃取法從血漿中分離所需化合物。萃取液用Lichrospher 60RP SelectB柱上反相液相色譜串連APCI正模式工作的質(zhì)譜進(jìn)行分析。采用內(nèi)標(biāo)法定量。
Wistar大鼠口服給予谷氨酰胺酰噻唑烷后，發(fā)現(xiàn)了化合物的降解。使用LC/MS，可確定該降解產(chǎn)物為焦谷氨酰胺酰噻唑烷。參見(jiàn)圖3和5。
實(shí)施例9谷氨酰胺酰吡咯烷和谷氨酰胺酰噻唑烷血管內(nèi)和口服給予Wistar大鼠后的DP IV抑制活性的測(cè)定體重250-350g的雄性Wistar大鼠(ShoeWist(Sho))購(gòu)自TierzuchtSchnwalde(Schnwalde，Germany)。在控制溫度(22±2℃)、12/12小時(shí)光照/黑暗周期(光照自06:00AM開(kāi)始)的常規(guī)條件下單籠飼養(yǎng)。允許自由飲食標(biāo)準(zhǔn)丸狀食糧(ssniffSoest，Germany)和HCl酸化的自來(lái)水。適應(yīng)飼養(yǎng)條件≥1周后，在全身麻醉(i.p.注射0.25mL/kg b.w.Rompun[2％]，Bayer Vital，Germany和0.5mg/kg b.w.Ketamin 10，Atarost GmbH & Co.，Twistringen，Germany)下將導(dǎo)管植入Wistar大鼠頸動(dòng)脈中。允許動(dòng)物恢復(fù)一周。導(dǎo)管用肝素-鹽水(100IU/ml)每周沖洗3次。如果導(dǎo)管功能不良，則在該大鼠的相反一側(cè)的頸動(dòng)脈第二次插管。術(shù)后恢復(fù)一周后，該動(dòng)物再參與研究。如果第二根導(dǎo)管功能不良，該動(dòng)物退出研究。補(bǔ)充一只新的動(dòng)物，并且按照計(jì)劃的順序繼續(xù)進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，實(shí)驗(yàn)在導(dǎo)管植入最少7天后開(kāi)始。
經(jīng)口服和血管內(nèi)(動(dòng)脈內(nèi))途徑向?qū)Ч芄δ芡旰玫拇笫蠼o予安慰劑(1mL鹽水，0.154mol/l)或100mg/kg b.w.谷氨酰胺酰吡咯烷或100mg/kg b.w.谷氨酰胺酰噻唑烷。過(guò)夜禁食后，在-30、-5和0分鐘時(shí)采集100μL肝素化動(dòng)脈血樣品。將測(cè)試物質(zhì)新鮮溶于1.0mL鹽水(0.154mol/l)中，并在0分鐘時(shí)經(jīng)飼管(75mm；Fine Science tools，Heidelberg，Germany)口服或經(jīng)血管內(nèi)途徑給予。在口服給藥的情況下，向頸動(dòng)脈插管中注射另外1mL體積的鹽水。在動(dòng)脈內(nèi)給藥的情況下，立即用30μL鹽水沖洗導(dǎo)管，并經(jīng)飼管口服給予另外1mL鹽水。在施用安慰劑或測(cè)試物質(zhì)后，在2.5、5、7.5、10、15、20、40、60和120分鐘時(shí)從意識(shí)清醒無(wú)限制的大鼠的頸動(dòng)脈插管中采集動(dòng)脈血樣。所有血樣收集在裝有10μL 1M檸檬酸鈉緩沖液(pH 3.0)的冰冷卻的Eppendorf管(Eppendorf-Netheler-Hinz，Hamburg，Germany)中用于測(cè)定血漿DP IV活性。將Eppendorf管立即離心(12000rpm，2分鐘，Hettich Zentrifuge EBA 12，Tuttlingen；Germany)。將血漿部分保存在冰上直至分析或凍存于-20℃下直至分析。所有的血漿樣本均標(biāo)上編碼、動(dòng)物號(hào)、取樣日期和取樣時(shí)間。
用于測(cè)定血漿DP IV活性的測(cè)定混合物由80μL試劑和20μL血漿樣品組成。30℃下預(yù)溫育2分鐘后，在相同的溫度下于309nm處進(jìn)行1分鐘從底物甘氨酰脯氨酰-4-硝基苯胺生成黃色產(chǎn)物4-硝基苯胺的動(dòng)力學(xué)測(cè)定。DP IV活性用mU/ml表示。
使用PRISM3.02(GraphPad Software，Inc)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)評(píng)價(jià)及制圖。所有的參數(shù)以描述性方式包括均值和標(biāo)準(zhǔn)差進(jìn)行分析。
與安慰劑相比，100mg/kg b.w.劑量的化合物谷氨酰胺酰吡咯烷和谷氨酰胺酰噻唑烷口服和血管內(nèi)給予后抑制血漿DP IV活性。
實(shí)施例10在患有葡萄糖耐受不良的飲食誘導(dǎo)的肥胖大鼠中谷氨酰胺酰噻唑烷鹽酸鹽和二甲雙胍單獨(dú)或組合對(duì)血糖控制的作用從繁殖群體中選出選擇性繁殖的、5-6周齡、顯示出增加的發(fā)生飲食誘導(dǎo)的肥胖(DIO)的可能性的雄性大鼠。該研究中總共包括40只DIO動(dòng)物。選擇DIO大鼠是因?yàn)樗鼈兒芸赡芊磻?yīng)人群體中接觸高熱能富含脂肪飲食時(shí)發(fā)生肥胖和遲發(fā)型糖尿病的那部分人群。
當(dāng)進(jìn)入實(shí)驗(yàn)后，大鼠在控制溫度條件(22-24℃)、12/12小時(shí)光照-黑暗周期(光照從06:00至18:00)下單個(gè)(1只大鼠/籠)飼養(yǎng)。在此時(shí)，給大鼠提供高脂肪(HF)飲食(4.41kcal/g-能量％碳水化合物51.4kcal％、脂肪31.8kcal％、蛋白質(zhì)16.8kcal％；飲食#12266B；ResearchDiets，New Jersey，USA；the HF-diet ensure sufficient intake of vitamins和trace elements))并自由飲食和飲水。適應(yīng)環(huán)境一周后，每周兩次重量分析測(cè)量24小時(shí)的食物和水的攝入量以及體重(在清晨8-10am之間進(jìn)行)。HF喂養(yǎng)三周后，計(jì)算全部大鼠的平均日食物消費(fèi)量。平均食物攝入量包括一個(gè)平臺(tái)(platform)，根據(jù)其實(shí)施計(jì)劃的喂養(yǎng)方案。從8:00-12:00AM給動(dòng)物提供日平均食物消耗量的75％，而從4:00PM-8:00PM給動(dòng)物提供日平均食物消耗量的25％。
計(jì)劃喂養(yǎng)三周后，將動(dòng)物按重量進(jìn)行分層。在第0日，將動(dòng)物隨機(jī)(每組n＝10)分配入下述藥物處理組之一中
A組載體(蒸餾水)B組谷氨酰胺酰噻唑烷鹽酸鹽(60mg/kg BID)C組二甲雙胍(125mg/kg BID)D組谷氨酰胺酰噻唑烷鹽酸鹽(60mg/kg BID)+二甲雙胍(125mg/kg BID)。
所有的藥物均通過(guò)管飼法口服給予。體積為200μl，每日兩次(8:00AM和4:00PM)。這種給藥方式保證所有的動(dòng)物不論是否進(jìn)食均接受相同量的藥物，從而確保食糧喂養(yǎng)組和高脂飲食喂養(yǎng)組之間更準(zhǔn)確的比較。動(dòng)物接受每日兩次劑量的每種化合物，總共42日(第1-第42日)。在第6日和第40日時(shí)，對(duì)動(dòng)物進(jìn)行口服葡萄糖耐量試驗(yàn)OGTT)。二天后，在第42日時(shí)，中止給藥且動(dòng)物再一日不給藥(仍遵循計(jì)劃的喂養(yǎng)方案)。在第43日，在半饑餓狀態(tài)下處死動(dòng)物，因?yàn)閺那耙蝗?2:AM它們僅可得到它們?nèi)漳芰啃枰康?5％。在早上時(shí)間(8-12AM)，通過(guò)CO2吸入麻醉動(dòng)物并采集血樣。任選地，取組織樣品，并迅速在液氮中冷凍以用于以后的組織特異性基因表達(dá)和脂質(zhì)含量的分析。血和組織取樣將在接近持久穩(wěn)定的房間進(jìn)行，以確保最小的可能應(yīng)激水平。稱(chēng)量脂肪樣品并凍存以使得可對(duì)脂肪庫(kù)進(jìn)行準(zhǔn)確的分析。脂肪庫(kù)分析可以通過(guò)去除隔膜、腹膜后、附睪和皮下腹股溝的脂肪來(lái)進(jìn)行。
分析方法口服葡萄糖耐量試驗(yàn)(GTT)在第6日和第42日的8:00AM進(jìn)行該試驗(yàn)。動(dòng)物輕度禁食，因?yàn)樗鼈冊(cè)谙惹暗?0小時(shí)(前一日的12:00AM開(kāi)始)內(nèi)僅可得到它們?nèi)漳芰啃枰康?5％?？诜?g/kg葡萄糖(使用1g/ml dH2O)后，在時(shí)間點(diǎn)-60、-30、0、15、30、60、120和180分鐘處從動(dòng)脈導(dǎo)管內(nèi)取得血樣，并在自動(dòng)分析儀(Roche Diagnostics)上測(cè)定P-葡萄糖。經(jīng)與注射器連接的置于十二指腸部位的管子經(jīng)管飼給予口服葡萄糖負(fù)荷，確保準(zhǔn)確的給藥劑量。在時(shí)間點(diǎn)0、15、30、60、120分鐘處使用ultra-sensitive ELISA(Shibayagi，Japan)測(cè)定P-胰島素。
采血和血漿測(cè)量在第-7日所有的大鼠均安裝動(dòng)脈內(nèi)導(dǎo)管。動(dòng)脈內(nèi)導(dǎo)管經(jīng)股動(dòng)脈置于腹主動(dòng)脈中，并在全部取樣過(guò)程末通過(guò)注射肝素化鹽水保持通暢。所有的血樣放在EDTA Vacutainer管中，血漿葡萄糖和總膽固醇以及甘油三酯一起測(cè)定。任選地，作為脂解的反映，我們可測(cè)定血漿中的甘油水平。在處死當(dāng)日，心臟穿刺取得的血收集在三個(gè)試管中vacutainer-EDTA；Vacutainer-EDTA+1％NaF；VacutainerEDTA+Aprotinin(750KIU)。
使用多種血樣“包裝”A)血糖特征(profile)禁食P-葡萄糖、P-胰島素和HbAlcB)24小時(shí)血糖特征每隔3小時(shí)(8:00、11:00、14:00、17:00、20:00、23:00、02:00、05:00)的B-葡萄糖?；蛘?，相同時(shí)間特征的P-葡萄糖和P-胰島素C)進(jìn)餐相關(guān)葡萄糖早餐前后(8:00AM和12:00AM的B-葡萄糖D)禁食葡萄糖&脂質(zhì)禁食-p-葡萄糖、P-甘油三酯、P-總膽固醇E)OGTT細(xì)節(jié)參見(jiàn)上述。
使用標(biāo)準(zhǔn)酶測(cè)定試劑盒在全自動(dòng)分析儀(Roche Diagnostics)上測(cè)定血漿-葡萄糖、HbAlc、血漿-總膽固醇、血漿-甘油三酯。通過(guò)分光光度計(jì)使用基于脂酰輔酶A氧化酶的比色試劑盒((NEFA-C，WAKOpure chemicals，Osaka，Japan)測(cè)定血漿非酯化游離脂肪酸(NEFA)。置于Vacuatiner-EDTA+1％NaF中的樣品用于FFA分析。
用基于ultra-sensitive ELISA的測(cè)定法(Shibayagi，Japan)測(cè)量血漿胰島素。用Linco multiple ELISA kit(Linco Research Immunoassay，St.Charles，MO)測(cè)定有生物活性的GLP-1(7-37)和總GLP-1的免疫反應(yīng)活性。
數(shù)據(jù)、報(bào)告和統(tǒng)計(jì)學(xué)評(píng)價(jià)全部數(shù)據(jù)輸入Excel 97或2000棋盤(pán)式分析表中，隨后進(jìn)行相關(guān)的統(tǒng)計(jì)學(xué)分析(Statview或Graph Pad software)。除非另有說(shuō)明，結(jié)果以均值±SEM(平均標(biāo)準(zhǔn)誤)表示。使用單因素方差分析(ANOVA)和適當(dāng)?shù)膒ost-hoc進(jìn)行數(shù)據(jù)的統(tǒng)計(jì)學(xué)評(píng)價(jià)，post-hoc分析在對(duì)照和處理組之間如果統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性被確定(p＜0.05)的情況下進(jìn)行。
使用谷氨酰胺酰噻唑烷和谷氨酰胺酰噻唑烷與二甲雙胍聯(lián)合這一類(lèi)型的實(shí)驗(yàn)方案均導(dǎo)致改善的口服葡糖耐量。
實(shí)施例11DP IV樣酶-二肽基肽酶II的抑制如果N-末端未被質(zhì)子化，則DP II(3.4.14.2)從寡肽釋放N-末端二肽(McDonald，J.K.，Ellis，S.&Reilly，T.J.，1966，J.Biol.Chem.，241，1494-1501)。P1位的Pro和Ala是優(yōu)選的殘基。該酶活性被描述為DP IV樣活性，不過(guò)DP II具有酸性最適pH值。所用的酶從豬腎中純化。將100μL濃度為1*1-4M-5*10-8M的谷氨酰胺酰吡咯烷或谷氨酰胺酰噻唑烷與100μL緩沖液(40mM HEPES，pH7.6，0.015％Brij，1mM DTT)、50μL賴(lài)氨酰丙氨酰氨基甲基香豆素溶液(5mM)以及20μL豬DP II(在緩沖液中稀釋250倍)混合。使用平板讀數(shù)器(HTS7000plus，Applied Biosystems，Weiterstadt，Germany)于30℃和λ激發(fā)＝380nm、λ發(fā)射＝465nm下進(jìn)行熒光測(cè)定25分鐘。使用Graphit4.0.15(Erithacus Software，Ltd.，UK)計(jì)算Ki值，對(duì)于谷氨酰胺酰吡咯烷測(cè)定為Ki＝8.52*10-5M±6.33*10-6M，而對(duì)于谷氨酰胺酰噻唑烷，Ki＝1.07*10-5M±3.81*10-7M。
實(shí)施例12交叉反應(yīng)酶測(cè)試谷氨酰胺酰吡咯烷或谷氨酰胺酰噻唑烷針對(duì)二肽基肽酶I、脯氨酰寡肽酶和氨?；彼岫拿傅慕徊娣磻?yīng)效能。
二肽基肽酶I(DP I，組織蛋白酶C)DP I或組織蛋白酶C是一種從其底物的N-末端切割二肽的溶酶體半胱氨酸蛋白酶(Gutman，H.R.& Fruton，J.S.，1948，J.Biol.Chem.，174，851-858)。它歸類(lèi)為半胱氨酸蛋白酶。所用的酶購(gòu)自Qiagen(Qiagen GmbH，Hilden，Germany)。為了得到完全活性的酶，將酶在pH5.6的MES緩沖液(40mM MES、4mM DTT、4mM KCl、2mMEDTA、0.015％Brij)中稀釋1000倍，并在30℃下預(yù)溫育30分鐘。將50μL濃度為1*10-5M-1*10-7M的谷氨酰胺酰吡咯烷或谷氨酰胺酰噻唑烷與110μL緩沖液-酶-混合物混合。將測(cè)試混合物于30℃下預(yù)溫育15分鐘。預(yù)溫育后，加入100μL組氨酰絲氨酰對(duì)硝基苯胺(2*10-5M)，并使用平板讀數(shù)器(HTS7000plus，Applied Biosystems，Weiterstadt，Germany)于30℃和λ激發(fā)＝380nm、λ發(fā)射＝465nm下測(cè)定因?qū)ο趸桨丰尫女a(chǎn)生的黃色10分鐘。使用Graphit 4.0.15(ErithacusSoftware，Ltd.，UK)計(jì)算IC50值。沒(méi)有發(fā)現(xiàn)谷氨酰胺酰吡咯烷或谷氨酰胺酰噻唑烷對(duì)DP I酶活性的抑制。
脯氨酰寡肽酶(POP)脯氨酰寡肽酶(EC 3.4.21.26)是一種在Xaa-Pro鍵的N-末端部分切割肽的絲氨酸型內(nèi)切蛋白酶(Walter，R.，Shlank，H.，Glass，J.D.，Schwartz，I.L.& Kerenyi，T.D.，1971，Science，173，827-829)。底物是分子量達(dá)到3000Da的肽。所用的酶是重組人脯氨酰寡肽酶。重組表達(dá)在標(biāo)準(zhǔn)條件下在大腸桿菌(E.coli)中進(jìn)行，如現(xiàn)有技術(shù)中其它地方所述。將100μL濃度為1*10-4M-5*10-8M的谷氨酰胺酰吡咯烷或谷氨酰胺酰噻唑烷與110μL緩沖液(40mM HEPES，pH 7.6，0.015％Brij，1mM DTT)和20μl POP溶液混合。將測(cè)試混合物在30℃下預(yù)溫育15分鐘。預(yù)溫育后，加入50μL甘氨酰脯氨酰脯氨酰-4-硝基苯胺溶液(0.29mM)，并使用平板讀數(shù)器(sunrise，Tecan，Crailsheim，Germany)在30℃和λ＝405nm下測(cè)定因4-硝基苯胺釋放產(chǎn)生的黃色10分鐘。使用Graphit 4.0.15(Erithacus Software，Ltd.，UK)計(jì)算IC50值。沒(méi)有發(fā)現(xiàn)谷氨酰胺酰吡咯烷或谷氨酰胺酰噻唑烷對(duì)POP活性的抑制。
氨?；彼岫拿?X-Pro二肽酶)氨酰基脯氨酸二肽酶(EC 3.4.13.9)首次被Bergmann & Fruton描述(Bergmann，M.& Fruton，JS，1937，J.Biol.Chem.189-202)。氨酰基脯氨酸二肽酶從Xaa-Pro二肽釋放N-末端氨基酸，最適pH值為6-9。將豬腎氨?；彼岫拿?ICN Biomedicals，Eschwege，Germany)溶于(1mg/mL)測(cè)試緩沖液(20mM NH4(CH3COO)2，3mMMnCl2，pH 7.6)中。為得到完全活性的酶，將溶液在室溫下預(yù)溫育60分鐘。將450μL濃度為5*10-3M-5*10-7M的谷氨酰胺酰吡咯烷或谷氨酰胺酰噻唑烷與500μL緩沖液(20mM NH4(CH3COO)2，pH 7.6)和250μl Ile-Pro-OH(0.5mM，在測(cè)試混合物中)混合。將測(cè)試混合物在30℃下預(yù)溫育5分鐘。預(yù)溫育后，加入75μL氨酰基脯氨酸二肽酶(在測(cè)試緩沖液中1∶10稀釋)，并使用UV/Vis光度計(jì)，UV1(ThermoSpectronic，Cambridge，UK)在30℃和λ＝220nm下測(cè)定20分鐘。使用Graphit 4.0.15(Erithacus Software，Ltd.，UK)計(jì)算IC50值。對(duì)于谷氨酰胺酰噻唑烷，測(cè)定為IC50＞3mM，而對(duì)于谷氨酰胺酰吡咯烷，測(cè)定為IC50＝3.4*10-4M±5.63*10-5。
實(shí)施例13血漿穩(wěn)定性為研究谷氨酰胺酰吡咯烷或谷氨酰胺酰噻唑烷在人血漿中的穩(wěn)定性，在確定的時(shí)間測(cè)定血漿中DP IV的活性。人血漿中的DP IV平均活性測(cè)定為43.69U/mL。在工作溶液中，血漿用0.9％NaCl稀釋以固定DP IV活性水平在25U/ml。血漿與不同濃度(5*10-5、2.5*10-5、1.25*10-5M，在血漿中)的谷氨酰胺酰吡咯烷或谷氨酰胺酰噻唑烷在37℃下溫育。在確定的時(shí)間點(diǎn)使用自動(dòng)移液器(pipette roboter)(Gilson215，Liquid handler，Gilson)取樣，并轉(zhuǎn)移至微量滴定板中，該微量滴定板每孔中含有5*10-5M于0.9％NaCl+0.15％Brjj中的甘氨酰脯氨酰氨基甲基香豆素。6分鐘后，加入異亮氨酰噻唑烷(5*10-5M，于0.9％NaCl溶液中)停止反應(yīng)。用平板讀數(shù)器(HTS7000 plus，AppliedBiosystems，Weiterstadt，Germany)針對(duì)0.9％于血漿中的NaCl(參比標(biāo)準(zhǔn))進(jìn)行熒光測(cè)定。谷氨酰胺酰吡咯烷或谷氨酰胺酰噻唑烷抑制活性的半衰期通過(guò)以酶活性對(duì)反應(yīng)時(shí)間作圖計(jì)算。對(duì)于這兩種化合物，半衰期都不能夠測(cè)出。認(rèn)為該物質(zhì)在人血漿中穩(wěn)定22小時(shí)以上。
實(shí)施例14谷氨酰胺酰噻唑烷其它鹽形式的合成將谷氨酰胺酰噻唑烷鹽酸鹽(1g，3.43mmol)施于強(qiáng)堿離子交換柱(DOWEX550A，10mL干物質(zhì)，如上所述預(yù)處理)。收集各部分并用1N HCl滴定對(duì)抗溴百里酚藍(lán)以估計(jì)游離堿的含量。之后加入相應(yīng)量的所需酸，并將溶液凍干。得到的物質(zhì)用甲醇/乙醚重結(jié)晶。
谷氨酰胺酰噻唑烷的3，5-二-叔丁基苯甲酸鹽和亞磺酸鹽是新的，并因此構(gòu)成本發(fā)明的另一方面。
谷氨酰胺酰噻唑烷的不同酸加成鹽的特征

PGT焦谷氨酰胺酰噻唑烷，面積％，通過(guò)HPLC分析測(cè)定MP熔點(diǎn)實(shí)施例15谷氨酰胺酰噻唑烷和二甲雙胍單獨(dú)或組合對(duì)糖尿病Zucker(fa/fa)大鼠血糖控制的作用10或11周齡雄性Zucker(fa/fa)大鼠購(gòu)自Charles River(Sulzfeld，Germany)。動(dòng)物在控制溫度(22±2℃)，12/12小時(shí)光照/黑暗周期(光照自06:00AM開(kāi)始)的標(biāo)準(zhǔn)半屏障條件下飼養(yǎng)。自由飲食標(biāo)準(zhǔn)丸狀食糧(ssniffSoest，Germany)和HCl酸化的自來(lái)水。在12周齡時(shí)將動(dòng)物(N＝42)隨機(jī)分成6個(gè)要給藥的實(shí)驗(yàn)組。各實(shí)驗(yàn)組的給藥定義如下(GT＝谷氨酰胺酰噻唑烷)CO組(N＝7) 安慰劑(蒸餾水)，b.i.d.，口服GT組(N＝7) 60mg/kg b.w.GT，b.i.d.，口服Met-低組(N＝7) 125mg/kg b.w.二甲雙胍，b.i.d.，口服Met-高組(N＝7) 300mg/kg b.w.二甲雙胍，b.i.d.，口服
GT+Met-低組(N＝7)60mg/kg b.w.GT+125mg二甲雙胍，b.i.d.，口服GT+Met-高組(N＝7)60mg/kg b.w.GT+300mg二甲雙胍，b.i.d.，口服每千克體重的單獨(dú)或聯(lián)合給藥量溶于5mL蒸餾水中用于口服給予。
實(shí)驗(yàn)步驟第一次OGTT使用12-13周齡Zucker(fa/fa)大鼠開(kāi)始該研究。開(kāi)始該研究時(shí)，禁食16小時(shí)后進(jìn)行OGTT(2g葡萄糖/kg體重(b.w.)；給藥體積5mL/kg的40％溶液；B.Braun Melsungen，Melsungen，Germany)。經(jīng)飼管(15g，75mm；Fine Science Tools，Heidelberg，Germany)給予葡萄糖。在進(jìn)行OGTT前t＝-5分鐘時(shí)通過(guò)管飼進(jìn)行給藥。
第一次和第二次OGTT的各組特征和所給藥物

相對(duì)于給予葡萄糖時(shí)間的-15、±0分鐘、15、30、60、90、120和180分鐘(后一時(shí)間沒(méi)有胰島素樣品)時(shí)從尾靜脈取血樣測(cè)定血糖和血漿胰島素。
第一次OGTT后，各組動(dòng)物每日兩次分別在08:00AM和04:00PM給予各自的藥物。
在給藥的兩周期間，在星期一、星期三和星期五的08:00AM給藥前測(cè)定清晨血糖。
在給藥期間每日測(cè)定食物攝入量。
所有的動(dòng)物于7:30AM每周稱(chēng)量體重三次。
在給藥兩周后(第15日)，進(jìn)行第二次OGTT。在其前一天04:00PM撤去食物(禁食16小時(shí))。OGTT在-5分鐘時(shí)進(jìn)行前驅(qū)給藥和在±0分鐘時(shí)給予口服葡萄糖負(fù)荷的情況下進(jìn)行。在-15、±0分鐘、15、30、60、90、120和180分鐘(后一時(shí)間沒(méi)有胰島素樣品)時(shí)從尾靜脈取血樣測(cè)定血糖和血漿胰島素。
在第18日和之前(第7日)測(cè)定糖基化血紅蛋白。
測(cè)定葡萄糖-為測(cè)定葡萄糖，在-15、±0分鐘(OGTT前)以及OGTT后15、30、60、90、120和180分鐘時(shí)采集20μL血。
胰島素-通過(guò)抗體RIA方法(Linco Research，Inc.St.Charles，Mo.，USA)測(cè)定胰島素濃度。
糖基化血紅蛋白-用″DCA 2000R Himoglobin Alc-Reagenz kit″(Bayer Vital GmbH，F(xiàn)emwald，Germany)評(píng)估糖基化血紅蛋白(HbAlc)的百分比。
使用臺(tái)秤(Scaltec，Heiligenstadt，Germany)測(cè)量體重。
將來(lái)自尾部的混合靜脈血樣品收集入20μL玻璃毛細(xì)管中，將毛細(xì)管置于裝有1mL溶血用溶液的標(biāo)準(zhǔn)管(血糖測(cè)定)中以及用于血漿胰島素的樣品管(50μL血)中。
盡快地將由IDK提供的葡萄糖分析原始數(shù)據(jù)以Excel格式提供給probiodrug。每種藥物和每個(gè)參數(shù)(葡萄糖、胰島素)的數(shù)據(jù)通過(guò)描述統(tǒng)計(jì)學(xué)(均值、SEM)總結(jié)。計(jì)算AUC和基線(xiàn)校正AUC(基線(xiàn)設(shè)定為t＝0分鐘時(shí)的y值)。通過(guò)描述統(tǒng)計(jì)學(xué)計(jì)算和總結(jié)相對(duì)于基線(xiàn)的變化。
結(jié)果谷氨酰胺酰噻唑烷單獨(dú)或與二甲雙胍聯(lián)合亞長(zhǎng)期(18天)b.i.d.給予糖尿病肥胖Zucker大鼠(fa/fa)導(dǎo)致改善的葡萄糖耐量。給藥在所有實(shí)驗(yàn)組中均沒(méi)有影響食物和水的攝入量。GT和Met-低組顯示在OGTT中顯著改善的葡萄糖耐量曲線(xiàn)，反應(yīng)性和絕對(duì)G-AUC顯著降低(p＜0.05 vs.對(duì)照)。Met-高、GT+Met-低和GT+Met-高組顯示葡萄糖耐量曲線(xiàn)進(jìn)一步改善，以及反應(yīng)性和絕對(duì)G-AUC再次降低(p＜0.05vs.對(duì)照)。圖6顯示給藥14日后在第一次OGTT期間安慰劑、Met-低、Met-高、GT+Met-低和GT+Met-高(在-5分鐘時(shí))以及OGTT(在0分鐘時(shí))負(fù)荷的禁食Zucker大鼠的基線(xiàn)校正葡萄糖AUC。
實(shí)施例16谷氨酰胺酰噻唑烷與其它口服抗糖尿病藥聯(lián)合治療的作用雄性8周齡雄性Zucker(falfa)大鼠在控制溫度(22±2℃)，12/12小時(shí)光照/黑暗周期(光照自06:00AM開(kāi)始)的標(biāo)準(zhǔn)半屏障條件下飼養(yǎng)。自由飲食標(biāo)準(zhǔn)丸狀食糧(ssniffSoest，Germany)和HCl酸化的自來(lái)水。在12周齡時(shí)將動(dòng)物(N＝42)隨機(jī)分成6個(gè)要給藥的實(shí)驗(yàn)組。兩周給藥的實(shí)驗(yàn)組如下(GT＝谷氨酰胺酰噻唑烷)CO組(N＝5)安慰劑(蒸餾水)，b.i.d.，在08.00AM和04.00PM口服GT組(N＝5)60mg/kg b.w.GT b.i.d.，在08.00AM和04.00PM口服羅格列酮+GT 3mg/kg b.w.羅格列酮，每日一次，在08.00AM口服組(N＝5) +60mg/kg b.w.GT，b.i.d.，在08.00AM和04.00PM口服阿卡波糖+GT 40mg阿卡波糖/100g食糧，自由飲食+60mg/kg組(N＝5) b.w.GT，b.i.d.，在08.00AM和04.00PM口服格列本脲+GT 5mg/kg b.w.格列本脲，b.i.d.，口服+60mg/kg b.w.
組(N＝5) GT，b.i.d.，在08.00AM和04.00PM口服胰島素+GT組 2IU長(zhǎng)效胰島素b.i.d.，SC+60mg/kg b.w.GT，(N＝5)b.i.d.，在08.00AM和04.00PM口服。
每千克體重的單獨(dú)和聯(lián)合口服給藥量溶于5mL 1％于鹽水中的甲基纖維素中。
使用12周齡Zucker(fa/fa)大鼠開(kāi)始該研究。開(kāi)始該研究時(shí)，禁食16小時(shí)和急性給藥后進(jìn)行OGTT(劑量2g葡萄糖/kg體重(b.w.)；給藥體積5mL/kg的40％溶液；B.Braun Melsungen，Melsungen，Germany)。經(jīng)飼管(15g，75mm；Fine Science Tools，Heidelberg，Germany)給予葡萄糖。各組相關(guān)藥物顯示如下第一次和第二次OGTT的各組特征和所給藥物


在-15、±0分鐘、15、30、60、90、120和180分鐘(后一時(shí)間沒(méi)有胰島素樣品)從尾靜脈取血樣以測(cè)定血糖和血漿胰島素。
第一次OGTT后，各組動(dòng)物每日分別在08:00AM和04:00PM給予各自的藥物。
在給藥的兩周期間，在星期一、星期三和星期五的08:00AM給藥前測(cè)定清晨血糖。
在給藥期間每日測(cè)定食物和水的攝入量。
所有的動(dòng)物于7:30AM每周稱(chēng)量體重三次。
在給藥兩周后(第15日)，進(jìn)行第二次OGTT。在前一天04:00PM撤去食物(禁食16小時(shí))。OGTT在給定的時(shí)間時(shí)進(jìn)行前驅(qū)給藥和在±0分鐘給予口服葡萄糖負(fù)荷的情況下進(jìn)行。在-15、±0分鐘、15、30、60、90、120和180分鐘(后一時(shí)間沒(méi)有胰島素樣品)從尾靜脈取血樣測(cè)定血糖和血漿胰島素。
一周的清除時(shí)間后，進(jìn)行最后的OGTT(＞22日)。在前一天04:00PM撤去食物(禁食16小時(shí))。OGTT在給定的時(shí)間時(shí)給予所有組安慰劑(其分別指1％甲基纖維素和SC鹽水)和在±0分鐘給予口服葡萄糖負(fù)荷的情況下進(jìn)行。在-15、±0分鐘、15、30、60、90、120和180分鐘(后一時(shí)間沒(méi)有胰島素樣品)從尾靜脈取血樣測(cè)定血糖和血漿胰島素。
在日兩次給藥＞兩周后(第18日)和之前(第-5日)測(cè)定糖基化血紅蛋白。
測(cè)定葡萄糖-為測(cè)定葡萄糖，在-15、±0分鐘(OGTT前)以及OGTT后15、30、60、90、120和180分鐘時(shí)采集20μL血。
胰島素-通過(guò)抗體RIA方法(Linco Research，Inc.St.Charles，Mo.，USA)測(cè)定胰島素濃度。
糖基化血紅蛋白-用″DCA 2000R Hmoglobin Alc-Reagenz kit″(Bayer Vital GmbH，F(xiàn)emwald，Germany)評(píng)估糖基化血紅蛋白(HbAlc)的百分比。
使用臺(tái)秤(Scaltec，Heiligenstadt，Germany)測(cè)量體重。
將來(lái)自尾部的混合靜脈血樣品收集入20μL玻璃毛細(xì)管中，將毛細(xì)管置于裝有1mL溶血用溶液的標(biāo)準(zhǔn)管(血糖測(cè)定)中以及用于血漿胰島素的樣品管(50μL血)中。將樣品管中的血樣立即離心(12000rpm，2分鐘)，而胰島素分析用血清將儲(chǔ)存于-20℃下直至分析。血樣上標(biāo)有方案號(hào)、樣品日期、取樣時(shí)間、動(dòng)物號(hào)以及樣品類(lèi)型。
結(jié)果給藥下的第一次OGTT在研究開(kāi)始時(shí)進(jìn)行。所有實(shí)驗(yàn)組的動(dòng)物在2g/kg葡萄糖的葡萄糖負(fù)荷后它們的糖耐量沒(méi)有顯示出差異。對(duì)于基線(xiàn)校正葡萄糖AUC1-180min獲得相同的結(jié)果?；€(xiàn)設(shè)定為時(shí)間t＝0時(shí)的葡萄糖值)。
14日亞長(zhǎng)期給藥后OGTT-2期間的血糖所有處理組與對(duì)照組相比，肥胖Zucker大鼠(fa/fa)14日亞長(zhǎng)期給藥導(dǎo)致改善的葡萄糖耐量。圖7顯示在第14日給予2g/kg葡萄糖的葡萄糖負(fù)荷后基線(xiàn)校正的葡萄糖時(shí)間曲線(xiàn)下面積。
總之，谷氨酰胺酰噻唑烷單獨(dú)或與羅格列酮、格列本脲、阿卡波糖或胰島素聯(lián)合亞長(zhǎng)期給藥均導(dǎo)致葡萄糖耐量改善。
權(quán)利要求
1.一種用于哺乳動(dòng)物如人的血糖控制的方法，該方法包括給予需要其的哺乳動(dòng)物有效量的谷氨酰胺酰噻唑烷或谷氨酰胺酰吡咯烷或其藥學(xué)可接受的鹽和另一種抗糖尿病藥。
2.谷氨酰胺酰噻唑烷或谷氨酰胺酰吡咯烷或其藥學(xué)可接受的鹽和另一種抗糖尿病藥用于血糖控制的用途。
3.谷氨酰胺酰噻唑烷或谷氨酰胺酰吡咯烷或其藥學(xué)可接受的鹽在藥物生產(chǎn)中的用途，所述藥物用于與另一種抗糖尿病藥聯(lián)合用于血糖控制。
4.谷氨酰胺酰噻唑烷或谷氨酰胺酰吡咯烷或其藥學(xué)可接受的鹽和另一種抗糖尿病藥在藥物生產(chǎn)中的用途，所述藥物用于血糖控制。
5.一種用于治療哺乳動(dòng)物中糖尿病和糖尿病相關(guān)病癥、前驅(qū)糖尿病狀態(tài)和/或肥胖的方法，該方法包括給予需要其的哺乳動(dòng)物有效量的谷氨酰胺酰噻唑烷或谷氨酰胺酰吡咯烷或其藥學(xué)可接受的鹽和另一種抗糖尿病藥。
6.谷氨酰胺酰噻唑烷或谷氨酰胺酰吡咯烷或其藥學(xué)可接受的鹽和另一種抗糖尿病藥用于治療糖尿病和糖尿病相關(guān)病癥、前驅(qū)糖尿病狀態(tài)和/或肥胖的用途。
7.谷氨酰胺酰噻唑烷或谷氨酰胺酰吡咯烷或其藥學(xué)可接受的鹽在藥物生產(chǎn)中的用途，所述藥物用于與另一種抗糖尿病藥聯(lián)合用于治療糖尿病和糖尿病相關(guān)病癥、前驅(qū)糖尿病狀態(tài)和/或肥胖。
8.根據(jù)前述權(quán)利要求之任一項(xiàng)的方法或用途，用于治療2型糖尿病。
9.根據(jù)前述權(quán)利要求之任一項(xiàng)的方法或用途，其中所述谷氨酰胺酰噻唑烷或谷氨酰胺酰吡咯烷或其藥學(xué)可接受的鹽和所述另一種抗糖尿病藥聯(lián)合給藥或序慣或單獨(dú)給藥。
10.根據(jù)前述權(quán)利要求之任一項(xiàng)的方法或用途，其中所述谷氨酰胺酰噻唑烷或谷氨酰胺酰吡咯烷或其藥學(xué)可接受的鹽和所述另一種抗糖尿病藥口服給予。
11.根據(jù)前述權(quán)利要求之任一項(xiàng)的方法或用途，其中所述谷氨酰胺酰噻唑烷或谷氨酰胺酰吡咯烷或其藥學(xué)可接受的鹽是谷氨酰胺酰噻唑烷鹽酸鹽。
12.根據(jù)前述權(quán)利要求之任一項(xiàng)的方法或用途，其中所述另一種抗糖尿病藥選自α葡糖苷酶抑制劑、雙胍類(lèi)、胰島素促分泌劑或胰島素增敏劑。
13.根據(jù)權(quán)利要求12的方法或用途，其中所述α葡糖苷酶抑制劑選自阿卡波糖、乙格列酯、米格列醇和伏格列波糖。
14.根據(jù)權(quán)利要求13的方法或用途，其中所述α葡糖苷酶抑制劑是阿卡波糖。
15.根據(jù)權(quán)利要求12的方法或用途，其中所述雙胍類(lèi)選自二甲雙胍、丁福明和苯乙雙胍。
16.根據(jù)權(quán)利要求15的方法或用途，其中所述雙胍類(lèi)是二甲雙胍。
17.根據(jù)權(quán)利要求12的方法或用途，其中所述胰島素促分泌劑選自格列本脲、格列吡嗪、格列齊特、格列美脲、妥拉磺脲和甲苯磺丁脲、醋磺己脲、氨磺丁脲、氯磺丙脲、格列波脲、格列喹酮、格列生脲、格列索脲、格列派特、格列吡脲、格列環(huán)脲、格列戊脲、瑞格列奈和那替格列。
18.根據(jù)權(quán)利要求12的方法或用途，其中所述胰島素增敏劑是PPARy激動(dòng)劑型胰島素增敏劑。
19.根據(jù)權(quán)利要求12的方法或用途，其中所述胰島素增敏劑選自曲格列酮、環(huán)格列酮、匹格列酮、恩格列酮和羅格列酮。
20.一種用于治療哺乳動(dòng)物中糖尿病和糖尿病相關(guān)病癥、前驅(qū)糖尿病狀態(tài)和/或肥胖的方法，該方法包括給予需要其的哺乳動(dòng)物有效量的谷氨酰胺酰噻唑烷鹽酸鹽和二甲雙胍。
21.谷氨酰胺酰噻唑烷鹽酸鹽和二甲雙胍用于治療糖尿病和糖尿病相關(guān)病癥、前驅(qū)糖尿病狀態(tài)和/或肥胖的用途。
22.谷氨酰胺噻唑烷鹽酸鹽在藥物生產(chǎn)中的用途，所述藥物用于與二甲雙胍聯(lián)合用于治療糖尿病和糖尿病相關(guān)病癥、前驅(qū)糖尿病狀態(tài)和/或肥胖。
23.一種藥物組合物，所述藥物組合物包含谷氨酰胺酰噻唑烷或谷氨酰胺酰吡咯烷或其藥學(xué)可接受的鹽和另一種抗糖尿病藥以及藥學(xué)可接受的載體。
24.根據(jù)權(quán)利要求23的藥物組合物，其中所述谷氨酰胺酰噻唑烷或谷氨酰胺酰吡咯烷或其藥學(xué)可接受的鹽是谷氨酰胺酰噻唑烷鹽酸鹽。
25.根據(jù)權(quán)利要求23或24的藥物組合物，其中所述另一種抗糖尿病藥是如權(quán)利要求12-19之任一項(xiàng)中定義的。
26.一種藥物組合物，所述藥物組合物包含谷氨酰胺酰噻唑烷鹽酸鹽和二甲雙胍。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種治療方法，具體地涉及糖尿病尤其是非胰島素依賴(lài)型糖尿病(NIDDM)或2型糖尿病和糖尿病相關(guān)病癥、前驅(qū)糖尿病狀態(tài)和/或肥胖的治療方法，并涉及用于這種方法的組合物。
文檔編號(hào)A61P3/10GK1845731SQ200480025194
公開(kāi)日2006年10月11日 申請(qǐng)日期2004年9月2日 優(yōu)先權(quán)日2003年9月2日
發(fā)明者漢斯-烏爾里?！さ履绿? 康拉德·格隆德, 馬蒂亞斯·霍夫曼 申請(qǐng)人:普羅西迪恩有限公司