專利名稱：有絲分裂驅(qū)動蛋白抑制劑的制作方法
背景技術：
本發(fā)明涉及2，2-二取代2，5-二氫吡咯衍生物，它們是有絲分裂驅(qū)動蛋白、特別是有絲分裂驅(qū)動蛋白KSP的抑制劑，并且有效治療細胞增殖性疾病，例如癌癥，增生，再狹窄，心臟肥大，免疫疾病和炎癥。
在治療劑中用于治療癌癥的有紫杉烷類和長春花堿類。紫杉烷和長春花堿作用于存在于多種細胞結(jié)構(gòu)內(nèi)的微管。微管是有絲分裂紡錘體的重要結(jié)構(gòu)組件。有絲分裂紡錘體負責將染色體組的復制版本分布到由細胞分裂得到的兩個子細胞的每個細胞內(nèi)。推定這些藥物對有絲分裂紡錘體的破壞作用會導致對癌細胞分裂的抑制，并且誘導癌細胞死亡。然而，微管也構(gòu)成其他類型的細胞結(jié)構(gòu)，包括神經(jīng)過程中細胞內(nèi)傳導的通道。由于這些藥物不特異性地以有絲分裂紡錘體為靶向，它們具有副作用，由此限制了它們的應用。
人們非常感興趣改進用于治療癌癥的藥物的特異性，因為如果與這些藥物的給藥有關的副作用能夠被減小，其治療效益將能夠得以實現(xiàn)。傳統(tǒng)上，癌癥治療中的顯著改善與鑒定出具有新作用機理的治療劑有關。這種實例不但包括紫杉烷類化合物，而且包括發(fā)現(xiàn)了喜樹堿類的拓撲異構(gòu)酶I抑制劑。從這兩個角度可見，有絲分裂驅(qū)動蛋白是新抗癌藥的有吸引力的靶向。
有絲分裂驅(qū)動蛋白是有絲分裂紡錘體裝配和功能所必需的酶，但不是其他微管結(jié)構(gòu)的通用部分。有絲分裂驅(qū)動蛋白在有絲分裂的所有階段中發(fā)揮重要作用。這些酶是″分子發(fā)動機″，它們將通過ATP水解釋放出的能量轉(zhuǎn)化為機械力，這樣的機械力推動細胞貨柜沿著微管定向運動。勝任這種任務的催化結(jié)構(gòu)域是約340氨基酸的致密結(jié)構(gòu)。有絲分裂過程，驅(qū)動蛋白使微管組構(gòu)成為雙極結(jié)構(gòu)，該結(jié)構(gòu)就是有絲分裂紡錘體。驅(qū)動蛋白介導染色體沿著紡錘體微管運動，并且與有絲分裂的特定階段有關的有絲分裂紡錘體出現(xiàn)結(jié)構(gòu)改變。有絲分裂驅(qū)動蛋白功能的實驗性微擾會引起有絲分裂紡錘體的畸形或機能障礙，隨后導致細胞周期停止和死亡。
在有絲分裂驅(qū)動蛋白中已經(jīng)被鑒定的是KSP。KSP屬于正末端方向微管發(fā)動機的進化保守驅(qū)動蛋白質(zhì)亞族，其裝配為由反平行同型二聚體組成的雙極同型四聚體。在有絲分裂過程中KSP與有絲分裂紡錘體的微管締合。給人體細胞微量注射抗KSP的抗體可以防止前中期的紡錘極分離，得到單極紡錘體并引起有絲分裂停止和誘導編程性細胞死亡。其他非人的生物體中，KSP和有關的驅(qū)動蛋白使反平行微管扎成束并使它們相對于另一者滑動，由此迫使兩個紡錘極分開。KSP也可以介導后期B紡錘體的伸長和紡錘極上微管的聚集。
人KSP(也稱作HsEg5)已經(jīng)公開[Blangy等，Cell，831159-69(1995)；Whitehead等，Arthritis Rheum.，391635-42(1996)；Galgio等，J.Cell Biol.，135339-414(1996)；Blangy等，J Biol.Chem.，27219418-24(1997)；Blangy，等，Cell Motil Cytoskeleton，40174-82(1998)；Whitehead和Rattner，J.Cell Sci.，1112551-61(1998)；Kaiser，等，JBC27418925-31(1999)；GenBank注冊號X85137，NM004523和U37426]，并且KSP基因的片段(TRIP5)已經(jīng)被公開[Lee，等，Mol Endocrinol.，9243-54(1995)；GenBank注冊號L40372]。非洲蟾蜍屬KSP同系物(Eg5)以及Drosophila K-LP61F/KRP 130已經(jīng)有報導。
目前喹唑啉酮類化合物已經(jīng)被認為是KSP的抑制劑(PCT公報WO01/30768，2001年5月3日)。
有絲分裂驅(qū)動蛋白是發(fā)現(xiàn)和開發(fā)新的有絲分裂化療劑的有吸引力的靶向。所以，本發(fā)明的一個目的在于提供用于抑制一種有絲分裂驅(qū)動蛋白KSP的化合物、方法和組合物。
發(fā)明概述本發(fā)明涉及二氫吡咯衍生物，它們用于治療細胞增殖性疾病，用于治療與KSP驅(qū)動蛋白活性有關的障礙，和用于抑制KSP驅(qū)動蛋白。本發(fā)明的化合物可以由式I的化合物表示
附圖簡述

圖1化合物2-5的ORTE2化合物3-1的ORTEP圖。為了鍵合圖示，大多數(shù)的氫原子未表示。
發(fā)明詳述本發(fā)明的化合物有效抑制有絲分裂驅(qū)動蛋白并如式I的化合物所示 或其藥學可接受鹽或立體異構(gòu)體，其中a是0或1；b是D或1；
m是0，1或2；n是0，1，2或3；r是0或1；s是0或1；t是0，1或2；u是0或1；R1和R2獨立地選自H，(C1-C6)烷基，芳基，雜環(huán)基和(C3-C6)環(huán)烷基，任選地被1、2或3個選自R7的取代基取代；R3選自1)氫；2)C1-C10烷基；3)C1-C10烷基-O-Rd，4)C2-C10鏈烯基-O-Rd，5)C2-C10鏈炔基-O-Rd，6)(C1-C6-亞烷基)nC3-C8環(huán)烷基-O-Rd，7)C1-C10烷基-(C＝O)b-NRcRc′，8)C2-C10鏈烯基-(C＝O)bNRcRc′，9)C2-C10鏈炔基-(C＝O)bNRcRc′，10)(C1-C6-亞烷基)nC3-C8環(huán)烷基-(C＝O)bNRcRc′，11)C1-C10烷基-S(O)m-Rd，12)C2-C10鏈烯基-S(O)m-Rd，13)C2-C10鏈炔基-S(O)m-Rd，14)(C1-C6-亞烷基)nC3-C8環(huán)烷基-S(O)m-Rd，該烷基，鏈烯基，鏈炔基和環(huán)烷基任選地被一個或多個選自R6的取代基取代；R4獨立地選自1)(C＝O)aObC1-C10烷基，2)(C＝O)aOb芳基，3)CO2H，4)鹵素，5)CN，6)OH，
7)ObC1-C6全氟烷基，8)Oa(C＝O)bNR8R9，9)S(O)mRa，10)S(O)2NR8R9，和11)-OPO(OH)2；該烷基，芳基，鏈烯基，鏈炔基，雜環(huán)基和環(huán)烷基任選地被1、2和3個選自R7的取代基取代；R5選自1)氫；2)(C＝O)aObC1-C10烷基，3)(C＝O)aOb芳基，4)CO2H，5)鹵素，6)CN，7)OH，8)ObC1-C6全氟烷基，9)Oa(C＝O)bNR8R9，10)S(O)mRa，11)S(O)2NR8R9，和12)-OPO(OH)2；該烷基，芳基，鏈烯基，鏈炔基，雜環(huán)基和環(huán)烷基任選地被1、2和3個選自R7的取代基取代；R6獨立地選自1)(C＝O)aObC1-C10烷基，2)(C＝O)aOb芳基，3)C2-C10鏈烯基，4)C2-C10鏈炔基，5)(C＝O)aOb雜環(huán)基，6)CO2H，7)鹵素，8)CN，9)OH，
10)bC1-C6全氟烷基，11)Oa(C＝O)bNR8R9，12)S(O)mRa，13)S(O)2NR8R9，14)氧代，15)CHO，16)(N＝O)R8R9，17)(C＝O)aObC3-C8環(huán)烷基，和18)-OPO(OH)2；該烷基，芳基，鏈烯基，鏈炔基，雜環(huán)基和環(huán)烷基任選地被1、2和3個選自R7的取代基取代；R7選自1)(C＝O)rOs(C1-C10)烷基，2)Or(C1-C3)全氟烷基，3)氧代，4)OH，5)鹵素，6)CN，7)(C2-C10)鏈烯基，8)(C2-C10)鏈炔基，9)(C＝O)rOs(C3-C6)環(huán)烷基，10)(C＝O)rOs(C0-C6)亞烷基-芳基，11)(C＝O)rOs(C0-C6)亞烷基-雜環(huán)基，12)(C＝O)rOs(C0-C6)亞烷基-N(Rb)2，13)C(O)Ra，14)(C0-C6)亞烷基-CO2Ra，15)C(O)H，16)(C0-C6)亞烷基-CO2H，和17)(C＝O)rN(Rb)2，18)S(O)mRa，19)S(O)2N(Rb)2；和20)-OPO(OH)2；
該烷基，鏈烯基，鏈炔基，環(huán)烷基，芳基，亞烷基和雜環(huán)基任選地被至多3個選自Rb，OH，(C1-C6)烷氧基，鹵素，CO2H，CN，O(C＝O)C1-C6烷基，氧代，NO2和N(Rb)2的取代基取代；R8和R9獨立地選自1)H，2)(C＝O)ObC1-C10烷基，3)(C＝O)ObC3-C8環(huán)烷基，4)(C＝O)Ob芳基，5)(C＝O)Ob雜環(huán)基，6)C1-C10烷基，7)芳基，8)C2-C10鏈烯基，9)C2-C10鏈炔基，10)雜環(huán)基，11)C3-C8環(huán)烷基，12)SO2Ra，和13)(C＝O)NRb2，該烷基，環(huán)烷基，芳基，雜環(huán)基，鏈烯基，和鏈炔基任選地被1、2和3個選自R7的取代基取代，或R8和R9可以與其所連的氮一起構(gòu)成單環(huán)或雙環(huán)雜環(huán)同時各環(huán)具有3-7員和除該氮以外，任選地含有1或2個選自N、O或S的附加雜原子，該單環(huán)或雙環(huán)雜環(huán)任選地被1、2或3個選自R7的取代基取代；R10和R11獨立地選自F和-CH2F；R12和R13獨立地選自H和-CH2F；Rox不存在或是氧代；Ra獨立地選自(C1-C6)烷基，(C3-C6)環(huán)烷基，芳基或雜環(huán)基，任選地被1、2或3個選自R7的取代基取代；Rb獨立地選自H，(C1-C6)烷基，芳基，雜環(huán)基，(C3-C6)環(huán)烷基，(C＝O)OC1-C6烷基，(C＝O)C1-C6烷基，(C＝O)芳基，(C＝O)雜環(huán)基，(C＝O)NReRe′或S(O)2Ra，任選地被1、2或3個選自R7的取代基取代；Rc和Rc′獨立地選自H，(C1-C6)烷基，芳基，NH2，OH，ORa，-烷基-OH，-(C1-C6)烷基-O-(C1-C6)烷基，(C＝O)OC1-C6烷基，(C＝O)C1-C6烷基，(C＝O)芳基，(C＝O)雜環(huán)基，(C＝O)NReRe′，S(O)2Ra和-烷基-N(Rb)2，其中該烷基任選地被1、2或3個選自R7的取代基取代；或Rc和Rc′可以與其所連的氮一起構(gòu)成單環(huán)或雙環(huán)雜環(huán)同時各環(huán)具有3-7員和除該氮以外，任選地含有1或2個選自N、O或S的附加雜原子，該單環(huán)或雙環(huán)雜環(huán)任選地被1、2或3個選自R7的取代基取代；Rd選自H，(C1-C6)烷基，-(C2-C6)烷基-OH，-(C1-C6)烷基-O-(C1-C6)烷基和-(C1-C6)烷基-N(Rb)2，其中該烷基任選地被1、2或3個選自R7的取代基取代；Re和Re′獨立地選自H，(C1-C6)烷基，芳基，雜環(huán)基和(C3-C6)環(huán)烷基，任選地被1、2或3個選自R7的取代基取代；或Re和Re′可以與其所連的氮一起構(gòu)成單環(huán)或雙環(huán)雜環(huán)同時各環(huán)具有3-7員和除該氮以外，任選地含有1或2個選自N、O或S的附加雜原子，該單環(huán)或雙環(huán)雜環(huán)任選地被1、2和3個選自R7的取代基取代。
本發(fā)明的化合物有效抑制有絲分裂驅(qū)動蛋白并如式II的化合物所示 或其藥學可接受鹽或立體異構(gòu)體，其中a是0或1；b是0或1；m是0，1，或2；n是0，1，2或3；
r是0或1；s是0或1；t是0或1；R1和R2獨立地選自H，(C1-C6)烷基，芳基，雜環(huán)基和(C3-C6)環(huán)烷基，任選地被1、2或3個選自R7的取代基取代；R3選自1)氫；2)C1-C10烷基；3)C1-C10烷基-O-Rd，4)C2-C10鏈烯基-O-Rd，5)C2-C10鏈炔基-O-Rd，6)(C1-C6-亞烷基)nC3-C8環(huán)烷基-O-Rd，7)C1-C10烷基-(C＝O)b-NRcRc′，8)C2-C10鏈烯基-(C＝O)bNRCRc′，9)C2-C10鏈炔基-(C＝O)bNRcRc′，10)(C1-C6-亞烷基)nC3-C8環(huán)烷基-(C＝O)bNRcRc′，11)C1-C10烷基-S(O)m-Rd，12)C2-C10鏈烯基-S(O)mRd，13)C2-C10鏈炔基-S(O)m-Rd，14)(C1-C6-亞烷基)nC3-C8環(huán)烷基-S(O)mRd，該烷基，鏈烯基，鏈炔基和環(huán)烷基任選地被一個或多個選自R6的取代基取代；R4獨立地選自1)(C＝O)aObC1-C10烷基，2)(C＝O)aOb芳基，3)CO2H，4)鹵素，5)CN，6)OH，7)ObC1-C6全氟烷基，8)Oa(C＝O)bNR8R9，9)S(O)mRa，
10)S(O)2NR8R9，該烷基，芳基，鏈烯基，鏈炔基，雜環(huán)基和環(huán)烷基任選地被1、2和3個選自R7的取代基取代；R5選自1)氫；2)(C＝O)aObC1-C10烷基，3)(C＝O)aOb芳基，4)CO2H，5)鹵素，6)CN，7)OH，ObC1-C6全氟烷基，9)Oa(C＝O)bNR8R9，10)S(O)mRa，11)S(O)2NR8R9，和12)-OPO(OH)2；該烷基，芳基，鏈烯基，鏈炔基，雜環(huán)基和環(huán)烷基任選地被1、2和3個選自R7的取代基取代；R6獨立地選自1)(C＝O)aObC1-C10烷基，2)(C＝O)aOb芳基，3)C2-C10鏈烯基，4)C2-C10鏈炔基，5)(C＝O)aOb雜環(huán)基，6)CO2H，7)鹵素，8)CN，9)OH，10)ObC1-C6全氟烷基，11)Oa(C＝O)bNR8R9，12)S(O)mRa，13)S(O)2NR8R9，
14)氧代，15)CHO，16)(N＝O)R8R9，17)(C＝O)aObC3-C8環(huán)烷基，和18)-OPO(OH)2；該烷基，芳基，鏈烯基，鏈炔基，雜環(huán)基和環(huán)烷基任選地被1、2或3個選自R7的取代基取代；R7選自1)(C＝O)rOs(C1-C10)烷基，2)Or(C1-C3)全氟烷基，3)氧代，4)OH，5)鹵素，6)CN，7)(C2-C10)鏈烯基，8)(C2-C10)鏈炔基，9)(C＝O)rOs(C3-C6)環(huán)烷基，10)(C＝O)rOs(C0-C6)亞烷基-芳基，11)(C＝O)rOs(C0-C6)亞烷基-雜環(huán)基，12)(C＝O)rOs(C0-C6)亞烷基-N(Rb)2，13)C(O)Ra，14)(C0-C6)亞烷基-CO2Ra，15)C(O)H，16)(C0-C6)亞烷基-CO2H，17)C(O)N(Rb)2，18)S(O)mRa，19)S(O)2N(Rb)2；和20)-OPO(OH)2；該烷基，鏈烯基，鏈炔基，環(huán)烷基，芳基，亞烷基和雜環(huán)基任選地被至多3個選自Rb，OH，(C1-C6)烷氧基，鹵素，CO2H，CN，O(C＝O)C1-C6烷基，氧代，NO2和N(Rb)2的取代基取代；R8和R9獨立地選自
1)H，2)(C＝O)ObC1-C10烷基，3)(C＝O)ObC3-C8環(huán)烷基，4)(C＝O)Ob芳基，5)(C＝O)Ob雜環(huán)基，6)C1-C10烷基，7)芳基，8)C2-C10鏈烯基，9)C2-C10鏈炔基，10)雜環(huán)基，11)C3-C8環(huán)烷基，12)SO2Ra，和13)(C＝O)NRb2，該烷基，環(huán)烷基，芳基，雜環(huán)基，鏈烯基和鏈炔基任選地被1、2或3個選自R7的取代基取代，或R8和R9可以與其所連的氮一起構(gòu)成單環(huán)或雙環(huán)雜環(huán)同時各環(huán)具有3-7員和除該氮以外，任選地含有1或2個選自N、O或S的附加雜原子，該單環(huán)或雙環(huán)雜環(huán)任選地被1、2或3個選自R7的取代基取代；R10選自F和-CH2F；R13選自H和-CH2F，條件是如果t是1，則R13是H；Rox不存在或是氧代；Ra獨立地選自(C1-C6)烷基，(C3-C6)環(huán)烷基，芳基或雜環(huán)基，任選地被1、2或3個選自R7的取代基取代；Rb獨立地選自H，(C1-C6)烷基，芳基，雜環(huán)基，(C3-C6)環(huán)烷基，(C＝O)OC1-C6烷基，(C＝O)C1-C6烷基，(C＝O)芳基，(C＝O)雜環(huán)基，(C＝O)NReRe′或S(O)2Ra，任選地被1、2或3個選自R7的取代基取代；Rc和Rc′獨立地選自H，(C1-C6)烷基，芳基，NH2，OH，ORa，.-(C1-C6)烷基-OH，-(C1-C6)烷基-O-(C1-C6)烷基，(C＝O)OC1-C6烷基，(C＝O)C1-C6烷基，(C＝O)芳基，(C＝O)雜環(huán)基，(C＝O)NReRe′，S(O)2Ra和-(C1-C6)烷基-N(Rb)2，其中該烷基任選地被1、2或3個選自R7的取代基取代；或Rc和Rc′可以與其所連的氮一起構(gòu)成單環(huán)或雙環(huán)雜環(huán)同時各環(huán)內(nèi)具有3-7員和除該氮以外，任選地含有1或2個選自N、O或S的附加雜原子，該單環(huán)或雙環(huán)雜環(huán)任選地被1、2和3個選自R7的取代基取代；Rd選自H，(C1-C6)烷基，-(C2-C6)烷基-OH，-(C1-C6)烷基-O-(C1-C6)烷基和-(C1-C6)烷基-N(Rb)2，其中該烷基任選地被1、2或3個選自R7的取代基取代；Re和Re′獨立地選自H，(C1-C6)烷基，芳基，雜環(huán)基和(C3-C6)環(huán)烷基，任選地被1、2和3個選自R7的取代基取代；或Re和Re′可以與其所連的氮一起構(gòu)成單環(huán)或雙環(huán)雜環(huán)同時各環(huán)具有3-7員和除該氮以外，任選地含有1或2個選自N、O或S的附加雜原子，該單環(huán)或雙環(huán)雜環(huán)任選地被1、2和3個選自R7的取代基取代。
在本發(fā)明的實施方式中該化合物如式III的化合物所示 或其藥學可接受鹽或立體異構(gòu)體，其中a是0或1；b是0或1；m是0，1或2；n是0，1或2；r是0或1；s是0或1；R1和R2獨立地選自H，(C1-C6)烷基，芳基和(C3-C6)環(huán)烷基，任選地被1、2或3個選自R7的取代基取代；R4獨立地選自
1)鹵素，2)OH，3)ObC1-C6全氟烷基，R5選自1)氫，2)鹵素，3)OH，4)ObC1-C6全氟烷基，R7選自1)(C＝O)rOs(C1-C10)烷基，2)Or(C1-C3)全氟烷基，3)氧代，4)OH，5)鹵素，6)CN，7)(C2-C10)鏈烯基，8)(C2-C10)鏈炔基，9)(C＝O)rOs(C3-C6)環(huán)烷基，10)(C＝O)rOs(C0-C6)亞烷基-芳基，11)(C＝O)rOs(C0-C6)亞烷基-雜環(huán)基，12)(C＝O)rOs(C0-C6)亞烷基-N(Rb)2，13)C(O)Ra，14)(C0-C6)亞烷基-CO2Ra，15)C(O)H，16)(C0-C6)亞烷基-CO2H，和17)C(O)N(Rb)2，18)S(O)mRa，和19)S(O)2N(Rb)2；該烷基，鏈烯基，鏈炔基，環(huán)烷基，芳基，亞烷基和雜環(huán)基任選地被至多3個選自Rb，OH，(C1-C6)烷氧基，鹵素，CO2H，CN，O(C＝O)C1-C6烷基，氧代，NO2和N(Rb)2的取代基取代；R8和R9獨立地選自
1)H，2)(C＝O)ObC1-C10烷基，3)(C＝O)ObC3-C8環(huán)烷基，4)(C＝O)Ob芳基，5)(C＝O)Ob雜環(huán)基，6)C1-C10烷基，7)芳基，8)C2-C10鏈烯基，9)C2-C10鏈炔基，10)雜環(huán)基，11)C3-C8環(huán)烷基，12)SO2Ra，和13)(C＝O)NRb2，該烷基，環(huán)烷基，芳基，雜環(huán)基，鏈烯基和鏈炔基任選地被1、2和3個選自R7的取代基取代，或R8和R9可以與其所連的氮一起構(gòu)成單環(huán)或雙環(huán)雜環(huán)同時各環(huán)具有3-7員和除該氮以外，任選地含有1或2個選自N、O或S的附加雜原子，該單環(huán)或雙環(huán)雜環(huán)任選地被1、2和3個選自R7的取代基取代；Ra獨立地選自(C1-C6)烷基，(C3-C6)環(huán)烷基，芳基或雜環(huán)基，任選地被1、2或3個選自R7的取代基取代；Rb獨立地選自H，(C1-C6)烷基，芳基，雜環(huán)基，(C3-C6)環(huán)烷基，(C＝O)OC1-C6烷基，(C＝O)C1-C6烷基，(C＝O)芳基，(C＝O)雜環(huán)基，(C＝O)NReRe′或S(O)2Ra，任選地被1、2或3個選自R7的取代基取代；Rc和Rc′獨立地選自H，(C1-C6)烷基，芳基，NH2，OH，ORa，-烷基-OH，-(C1-C6)烷基-O-(C1-C6)烷基，(C＝O)OC1-C6烷基，(C＝O)C1-C6烷基，(C＝O)芳基，(C＝O)雜環(huán)基，(C＝O)NReRe′，S(O)2Ra和-(C1-C6)烷基-N(Rb)2，其中該烷基任選地被1、2或3個選自R7的取代基取代；或Rc和Rc′可以與其所連的氮一起構(gòu)成單環(huán)或雙環(huán)雜環(huán)同時各環(huán)具有3-7員和除該氮以外，任選地含有1或2個選自N、O或S的附加雜原子，該單環(huán)或雙環(huán)雜環(huán)任選地被1、2或3個選自R7的取代基取代；Re和Re′獨立地選自H，(C1-C6)烷基，芳基，雜環(huán)基和(C3-C6)環(huán)烷基，任選地被1、2或3個選自R7的取代基取代；或
Re和Re′可以與其所連的氮一起構(gòu)成單環(huán)或雙環(huán)雜環(huán)同時各環(huán)具有3-7員和除該氮以外，任選地含有1或2個選自N、O或S的附加雜原子，該單環(huán)或雙環(huán)雜環(huán)任選地被1、2和3個選自R7的取代基取代。
本發(fā)明的另一實施方式是如式IV的化合物所示 或其藥學可接受鹽或立體異構(gòu)體，其中a是0或1；b是0或1；m是0，1或2；r是0或1；s是0或1；R1和R2獨立地選自H和(C1-C6)烷基，任選地被1、2或3個選自R7的取代基取代；R4獨立地選自1)鹵素，2)OH，3)ObC1-C6全氟烷基，R7選自1)(C＝O)rOs(C1-C10)烷基，2)Or(C1-C3)全氟烷基，3)氧代，4)OH，5)鹵素，6)CN，
7)(C2-C10)鏈烯基，8)(C2-C10)鏈炔基，9)(C＝O)rOs(C3-C6)環(huán)烷基，10)(C＝O)rOs(C0-C6)亞烷基-芳基，11)(C＝O)rOs(C0-C6)亞烷基-雜環(huán)基，12)(C＝O)rOs(C0-C6)亞烷基-N(Rb)2，13)C(O)Ra，14)(C0-C6)亞烷基-CO2Ra，15)C(O)H，16)(C0-C6)亞烷基-CO2H，和17)C(O)N(Rb)2，18)S(O)mRa，和19)S(O)2N(Rb)2；該烷基，鏈烯基，鏈炔基，環(huán)烷基，芳基，亞烷基和雜環(huán)基任選地被至多3個選自Rb，OH，(C1-C6)烷氧基，鹵素，CO2H，CN，O(C＝O)C1-C6烷基，氧代，NO2和N(Rb)2的取代基取代；R8和R9獨立地選自1)H，2)(C＝O)ObC1-C10烷基，3)(C＝O)ObC3-C8環(huán)烷基，4)(C＝O)Ob芳基，5)(C＝O)Ob雜環(huán)基，6)C1-C10烷基，7)芳基，8)C2-C10鏈烯基，9)C2-C10鏈炔基，10)雜環(huán)基，11)C3-C8環(huán)烷基，12)SO2Ra，和13)(C＝O)NRb2，該烷基，環(huán)烷基，芳基，雜環(huán)基，鏈烯基和鏈炔基任選地被1、2或3個選自R7的取代基取代，或
R8和R9可以與其所連的氮一起構(gòu)成單環(huán)或雙環(huán)雜環(huán)同時各環(huán)具有3-7員和除該氮以外，任選地含有1或2個選自N、O或S的附加雜原子，該單環(huán)或雙環(huán)雜環(huán)任選地被1、2和3個選自R7的取代基取代；Ra獨立地選自(C1-C6)烷基，(C3-C6)環(huán)烷基，芳基或雜環(huán)基，任選地被1、2或3個選自R7的取代基取代；Rb獨立地選自H，(C1-C6)烷基，芳基，雜環(huán)基，(C3-C6)環(huán)烷基，(C＝O)OC1-C6烷基，(C＝O)C1-C6烷基，(C＝O)芳基，(C＝O)雜環(huán)基，(C＝O)NReRe′或S(O)2Ra，任選地被1、2或3個選自R7的取代基取代；Rc和Rc′獨立地選自H，(C1-C6)烷基，芳基，NH2，OH，ORa，-(C1-C6)烷基-OH，-(C1-C6)烷基-O-(C1-C6)烷基，(C＝O)OC1-C6烷基，(C＝O)C1-C6烷基，(C＝O)芳基，(C＝O)雜環(huán)基，(C＝O)NReRe′，S(O)2Ra和-(C1-C6)烷基-N(Rb)2，其中該烷基任選地被1、2或3個選自R7的取代基取代；或Rc和Rc′可以與其所連的氮一起構(gòu)成單環(huán)或雙環(huán)雜環(huán)同時各環(huán)具有3-7員和除該氮以外，任選地含有1或2個選自N、O或S的附加雜原子，該單環(huán)或雙環(huán)雜環(huán)任選地被1、2或3個選自R7的取代基取代；Re和Re′獨立地選自H，(C1-C6)烷基，芳基，雜環(huán)基和(C3-C6)環(huán)烷基，任選地被1、2或3個選自R7的取代基取代；或Re和Re′可以與其所連的氮一起構(gòu)成單環(huán)或雙環(huán)雜環(huán)同時各環(huán)具有3-7員和除該氮以外，任選地含有1或2個選自N、O或S的附加雜原子，該單環(huán)或雙環(huán)雜環(huán)任選地被1、2和3個選自R7的取代基取代。
本發(fā)明的另一實施方式如式V的化合物所示 或其藥學可接受鹽或立體異構(gòu)體，其中
R1和R2獨立地選自H和(C1-C6)烷基。
本發(fā)明的另一實施方式如式VI的化合物所示 或其藥學可接受鹽或立體異構(gòu)體，其中R1和R2獨立地選自H和(C1-C6)烷基。
本發(fā)明的化合物的具體實例包括(2S)-4-(2，5-二氟苯基)-N-[(3S，4R)-3-氟-1-甲基哌啶-4-基]-2-(羥基甲基)-N-甲基-2-苯基-2，5-二氫-1H-吡咯-1-羧酰胺(2S)-4-(2，5-二氟苯基)-N-[(3R，4S)-3-氟-1-甲基哌啶-4-基]-2-(羥基甲基)-N-甲基-2-苯基-2，5-二氫-1H-吡咯-1-羧酰胺(2S)-4-(2，5-二氟苯基)-N-[(3R，4R)-3-氟-1-甲基哌啶-4-基]-2-(羥基甲基)-N-甲基-2-苯基-2，5-二氫-1H-吡咯-1-羧酰胺(2S)-4-(2，5-二氟苯基)-N-[(3S，4S)-3-氟-1-甲基哌啶-4-基]-2-(羥基甲基)-N-甲基-2苯基-2，5-二氫-1H-吡咯-1-羧酰胺(2S)-4-(2，5-二氟苯基)-N-[(3S，4R)-3-氟-1-甲基哌啶-4-基]-N-甲基-2-苯基-2，5-二氫-1H-吡咯-1-羧酰胺(2S)-4-(2，5-二氟苯基)-N-[(3R，4S)-3-氟-1-甲基哌啶-4-基]-N-甲基-2-苯基-2，5-二氫-1H-吡咯-1-羧酰胺(2S)-4-(2，5-二氟苯基)-N-[(3R，4R)-3-氟-1-甲基哌啶-4-基]-N-甲基-2-苯基-2，5-二氫-1H吡咯-1-羧酰胺(2S)-4-(2，5-二氟苯基)-N-[(2R，4R)-2-(氟甲基)-1-甲基哌啶-4-基]-2-(羥基甲基)-N-甲基-2-苯基-2，5-二氫-1H-吡咯-1-羧酰胺(2-4-(2，5-二氟苯基)-N-[(2S，4S)-2-(氟甲基)-1-甲基哌啶-4-基]-2-(羥基甲基)-N-甲基-2-苯基-2，5-二氫-1H-吡咯-1-羧酰胺(2S)-4-(2，5-二氟苯基)-N-[(3S，4R)-3-氟-1-甲基-1-橋氧哌啶-4-基]-2-(羥基甲基)-N-甲基-2-苯基-2，5-二氫-1H-吡咯-1-羧酰胺(2S)-4-(2，5-二氟苯基)-N-[(3S，4R)-3-氟哌啶-4-基]-2-(羥基甲基)-N-甲基-2-苯基-2，5-二氫-1H-吡咯-1-羧酰胺(2S)-4-(2，5-二氟苯基)-N-[(3S，4R)-3-氟-1-異丙基哌啶4-基]-2-(羥基甲基)-N-甲基-2-苯基-2，5-二氫-1H-吡咯-羧酰胺(2S)-4-(2，5-二氟苯基)-N-[(3S，4S)-3-氟哌啶-4-基]-2-(羥基甲基)-N-甲基-2-苯基-2，5-二氫-1H-吡咯-1-羧酰胺或其藥學可接受鹽或立體異構(gòu)體。
本發(fā)明的化合物的特定實例是 (2S)-4-(2，5-二氟苯基)-N-[(3S，4S)-3-氟-1-甲基哌啶-4-基]-2-(羥基甲基)-N-甲基-2-苯基-2，5-二氫-1H-吡咯-1-羧酰胺
(2S)-4-(2，5-二氟苯基)-N-[(3S，4R)-3-氟-1-甲基哌啶-4-基]-2-(羥基甲基)-N-甲基-2-苯基-2，5-二氫-1H-吡咯-1-羧酰胺 (2S)-4-(2，5-二氟苯基)-N-[(3R，4S)-3-氟-1-甲基哌啶-4-基]-2-(羥基甲基)-N-甲基-2苯基-2，5-二氫-1H-吡咯-1-羧酰胺 (2S)-4-(2，5-二氟苯基)-N-[(2R，4R)-2-(氟甲基)-1-甲基哌啶-4-基]-2-(羥基甲基)-N-甲基-2-苯基-2，5-二氫-1H-吡咯-1-羧酰胺
(2S)-4-(2，5-二氟苯基)-N-[(3R，4S)-3-氟-1-甲基哌啶-4-基]-N-甲基-2-苯基-2，5-二氫-1H-吡咯-1-羧酰胺或其藥學可接受鹽或立體異構(gòu)體。
本發(fā)明的化合物本發(fā)明的化合物可以具有不對稱中心、手性軸和手性平面(如E.L.Eliel和S.H.Wilen，Stereochemistry of CarbonCompounds，John Wiley & Sons，New York，1994，1119-1190頁所述)，并且出現(xiàn)外消旋體、外消旋混和物和單獨的非對映異構(gòu)體，并且所有可能的異構(gòu)體和混和物，包括光學異構(gòu)體，這些立體異構(gòu)體均屬于本發(fā)明。此外，本文公開的化合物可以存在互變異構(gòu)體并且兩種互變異構(gòu)體屬于本發(fā)明的范圍內(nèi)，即使只表現(xiàn)出一種互變異構(gòu)結(jié)構(gòu)。
當任何可變部分(例如R4，R7，R10等)在任何結(jié)構(gòu)只出現(xiàn)一次以上時，其在各種情況中的定義彼此獨立存在。另外，取代基和可變部分的組合也是允許的，只要這樣的組合能夠得到穩(wěn)定化合物。從取代基延伸到環(huán)系內(nèi)的線條代表可以與任意可取代環(huán)原子相連的鍵。如果該環(huán)系是多元環(huán)，該鍵應只與鄰近環(huán)的任何適當碳原子相連。
應理解本發(fā)明化合物上的取代基和取代方式可以由本領域普通技術人員選擇，從而提供化學上穩(wěn)定且可以很容易利用本領域已知技術以及下文所述的那些方法、從容易獲得的起始原料合成的化合物。如果取代基本身被一個以上的基團取代，應理解這樣的多個基團可以位于同一碳上或在不同的碳上，只要得到穩(wěn)定的結(jié)構(gòu)即可。短語″任選地被一個或多個取代基取代″應當?shù)韧诙陶Z″任選地被至少一個取代基取代″，并且在此類情況中優(yōu)選的實施方式應是具有0-3個取代基。
在此使用的″烷基″包括具有特定數(shù)目的碳原子的支鏈或直鏈飽和脂族烴基。例如，C1-C10，如″C1-C10烷基″中定義為包括直鏈或支鏈排列的具有1，2，3，4，5，6，7，8，9或10個碳的基團。例如，″C1-C10烷基″具體包括甲基，乙基，正丙基，異丙基，正丁基，叔丁基，異丁基，戊基，己基，庚基，辛基，壬基，癸基等。術語″環(huán)烷基″是指具有特定數(shù)目的碳原子的單環(huán)飽和脂族烴基。例如，″環(huán)烷基″包括環(huán)丙基，甲基-環(huán)丙基，2，2-二甲基-環(huán)丁基，2-乙基-環(huán)戊基，環(huán)己基等。在本發(fā)明的實施方式中，術語″環(huán)烷基″包括上述的基團并且進一步包括單環(huán)不飽和脂族烴基。例如，″環(huán)烷基″在該實施方式中被定義為包括環(huán)丙基，甲基-環(huán)丙基，2，2-二甲基-環(huán)丁基，2-乙基-環(huán)戊基，環(huán)己基，環(huán)戊烯基，環(huán)丁烯基等。
術語″亞烷基″是指具有特定數(shù)目的碳原子的烴二基。例如，″亞烷基″包括-CH2-，-CH2CH2-等。
當在短語″C1-C6芳烷基″和″C1-C6雜芳烷基″中使用時，術語″C1-C6″是指該基團的烷基部分而不包括該基團的芳基和雜芳基部分中的原子數(shù)目。
″烷氧基″代表經(jīng)氧橋連接的具有指定數(shù)目碳原子的環(huán)狀或非環(huán)狀烷基。所以″烷氧基″包括上述烷基和環(huán)烷基的定義。
如果沒有規(guī)定碳原子的數(shù)目，術語″鏈烯基″是指含有2-10個碳原子和至少一個碳-碳雙鍵的直鏈、支鏈或環(huán)狀的非芳族烴基。優(yōu)選存在一個碳-碳雙鍵，并且可以存在至多四個非芳族碳-碳雙鍵。所以，″C2-C6鏈烯基″是指具有2-6個碳原子的鏈烯基。鏈烯基包括乙烯基，丙烯基，丁烯基，2-甲基丁烯基和環(huán)己烯基。鏈烯基的直鏈、支鏈或環(huán)狀部分可以含有雙鍵，并且如果圖示出被取代鏈烯基，它可以被取代。
術語″鏈炔基″是指含有2-10個碳原子和至少一個碳-碳叁鍵的直鏈、支鏈或環(huán)狀的非芳族烴基。可以存在至多碳-碳叁鍵。所以，″C2-C6鏈炔基″是指具有2-6個碳原子的鏈炔基。鏈炔基包括乙炔基，丙炔基，丁炔基，3-甲基丁炔基等。鏈炔基的直鏈、支鏈或環(huán)狀部分可以含有叁鍵，并且如果劃出被取代鏈炔基，它可以被取代。
在某些情況中，取代基可以用一定范圍的碳原子定義，該范圍包括0，例如(C0-C6)亞烷基-芳基。如果芳基是苯基，該定義應包括苯基本身以及-CH2Ph，-CH2CH2Ph，CH(CH3)CH2CH(CH3)Ph等。
在此使用的″芳基″是指任何各環(huán)含有至多7個原子的穩(wěn)定單環(huán)或雙環(huán)碳環(huán)，其中至少一個環(huán)是芳族的。此類芳基組成的實例包括苯基，萘基，四氫萘基，二氫茚基和聯(lián)苯。在其中芳基取代基是雙環(huán)且一個環(huán)是非芳族的情況中，應理解連接應當通過該芳環(huán)。
在此使用的術語雜芳基表示各環(huán)含有至多7個原子的穩(wěn)定單環(huán)或雙環(huán)環(huán)，其中至少一個環(huán)是芳族的且含有1-4個選自O、N和S的雜原子。該定義范圍內(nèi)的雜芳基包括但不限于吖啶基，咔唑基，噌啉基，喹喔啉基，吡唑基，吲哚基，苯并三唑基，呋喃基，噻吩基，苯并噻吩基，苯并呋喃基，喹啉基，異喹啉基，惡唑基，異惡唑基，吲哚基，吡嗪基，噠嗪基，吡啶基，嘧啶基，吡咯基，四氫喹啉。如下面雜環(huán)的定義，″雜芳基″還被理解為包括任何含氮雜芳基的N-氧化物衍生物。在其中雜芳基取代基是雙環(huán)且一個環(huán)是非芳族或不含雜原子時，理解為分別通過芳環(huán)或通過含雜原子的環(huán)連接。
在此使用的術語″雜環(huán)″或″雜環(huán)基″是指含有1-4個選自O、N和S的雜原子的5-至10-員芳族或非芳族雜環(huán)，并且包括雙環(huán)基團?！咫s環(huán)基″包括上述提及的雜芳基，以及其二氫和四氫類似物。″雜環(huán)基″的其他實例包括，但不限于下列苯并咪唑基，苯并呋喃基，苯并呋咱基，苯并吡唑基，苯并三唑基，苯并噻吩基，苯并惡唑基，咔唑基，咔啉基，噌啉基，呋喃基，咪唑基，吲哚啉基，吲哚基，吲嗪基，吲唑基，異苯并呋喃基，異吲哚基，異喹啉基，異噻唑基，異惡唑基，萘吡啶基，惡二唑基，惡唑基，惡唑啉基，異惡唑啉基，氧雜環(huán)丁烷基，吡喃基，吡嗪基，吡唑基，噠嗪基，吡啶并吡啶基，噠嗪基，吡啶基，嘧啶基，吡咯基，喹唑啉基，喹啉基，喹喔啉基，四氫吡喃基，四氫噻喃基，四氫異喹啉基，四唑基，四唑并吡啶基，噻二唑基，噻唑基，噻吩基，三唑基，氮雜環(huán)丁烷基，1，4-二惡烷基，六氫氮雜卓基，哌嗪基，哌啶基，吡啶-2-酮基，吡咯烷基，嗎啉基，硫代嗎啉基，二氫苯并咪唑基，二氫苯并呋喃基，二氫苯并噻吩基，二氫苯并惡唑基，二氫呋喃基，二氫咪唑基，二氫吲哚基，二氫異惡唑基，二氫異噻唑基，二氫惡二唑基，二氫惡唑基，二氫吡嗪基，二氫吡唑基，二氫吡啶基，二氫嘧啶基，二氫吡咯基，二氫喹啉基，二氫四唑基，二氫噻二唑基，二氫噻唑基，二氫噻吩基，二氫三唑基，二氫氮雜環(huán)丁烷基，亞甲基二氧基苯甲?；?，四氫呋喃基和四氫噻吩基，和其N-氧化物。雜環(huán)基取代基的連接可以通過碳原子或雜原子實現(xiàn)。
優(yōu)選地，雜環(huán)選自2-氮雜卓酮，苯并咪唑基，2-二氮雜卓酮，咪唑基，2-咪唑烷酮，吲哚基，異喹啉基，嗎啉基，哌啶基，哌嗪基，吡啶基，吡咯烷基，2-哌啶酮(piperidinone)，2-嘧啶酮，2-吡咯烷酮，喹啉基，四氫呋喃基，四氫異喹啉基和噻吩基。
本領域技術人員應理解，在此使用的″鹵代″或″鹵素″包括氯，氟，溴和碘。
該烷基，鏈烯基，鏈炔基，環(huán)烷基，芳基，雜芳基和雜環(huán)基取代基可以被取代或未取代，除非另外定義。例如，(C1-C6)烷基可以被1、2或3個選自OH，氧代，鹵素，烷氧基，二烷基氨基，或雜環(huán)基如嗎啉基，哌啶基等取代。在這樣的情況中，如果一個取代基是氧代并且其他取代基是OH時，則定義中包括下列-C＝O)CH2CH(OH)CH3，-(C＝O)OH，-CH2(OH)CH2CH(O)等。
在某些情況中，R8和R9，Rc和Rc′和Rf和Rf’被定義為它們可以與其所連的氮一起構(gòu)成單環(huán)或雙環(huán)雜環(huán)同時各環(huán)具有5-7員，并且除該氮以外任選地含有1或2個選自N、O或S的附加雜原子，該雜環(huán)任選地被一個或多個選自R7的取代基取代。由此可以形成的雜環(huán)的實例包括，但不限于，記住該雜環(huán)任選地被一個或多個(并且在一實施方式中，是1、2或3個)選自R7的取代基取代 在某些情況中，Rd和Rd′被定義為它們可以與其所連的磷一起構(gòu)成單環(huán)雜環(huán)同時該環(huán)內(nèi)具有5-7員，并且除該氮以外任選地含有1或2個選自N、O或S的附加雜原子，該雜環(huán)任選地被一個或多個選自R7的取代基取代。由此可以形成的雜環(huán)的實例包括，但不限于，記住該雜環(huán)任選地被一個或多個(并且在一實施方式中，是1、2或3個)選自R7的取代基取代 在一實施方式中，R1選自H和C1-C6烷基。
在一實施方式中，R2選自H和C1-C6烷基。
在一實施方式中，R12是H。
在一實施方式中，R3選自-C1-C10烷基-O-Rg和-C1-C10烷基-NRfRf′，任選地被1-2個選自R10的取代基取代。
在一實施方式中，R4獨立地選自鹵素和OH。
在另一實施方式中，n是2和R4獨立地選自鹵素。
在一實施方式中，R5獨立地選自H，鹵素和OH。
在一實施方式中，u是0。
在一實施方式中，t是1，R10是氟和R13是H。
在另一實施方式中，t是0和R13是氟甲基。
在一實施方式中，Rox不存在。
本發(fā)明包括游離形式的式I的化合物，以及其藥學可接受鹽和立體異構(gòu)體。本文例舉的一些特定化合物是胺化合物的質(zhì)子化鹽。術語“游離形式”是指非鹽形式的胺類化合物。所述的藥學可接受鹽不但包括特定化合物例舉的鹽，而且包括所有游離形式的式I化合物的典型藥學可接受鹽。特定鹽化合物的游離形式可以通過本領域已知方法分離。例如，游離形式可以通過用適當稀釋的堿水溶液如稀釋的NaOH、碳酸鉀、氨和碳酸氫鈉水溶液處理來制成。游離形式在某些物理性質(zhì)，如在極性溶劑中的溶解度上，可以不同于其各自的鹽形式，但基于本發(fā)明的目的該酸和堿鹽在藥學上等同于其各自的游離形式。
本發(fā)明化合物的藥學可接受鹽可以從含有堿性或酸性部分的本發(fā)明化合物、通過常規(guī)方法合成。通常，堿性化合物的鹽或者通過離子交換色譜制備，或者通過游離堿與化學計量量或過量的所需成鹽無機酸或有機酸、在適當溶劑或溶劑的不同組合中反應來制成。同樣地，酸性化合物的鹽通過與適當無機堿或有機堿反應來制成。
所以，本發(fā)明化合物的藥學可接受鹽包括通過本發(fā)明堿性化合物與無機酸或有機酸反應生成的本發(fā)明化合物的常規(guī)無毒鹽。例如，常規(guī)無毒鹽包括衍生自無機酸的那些，無機酸例如鹽酸、氫溴酸、硫酸、氨基磺酸、磷酸、硝酸等，以及從有機酸制備的鹽，例如乙酸、丙酸、琥珀酸、羥基乙酸、硬脂酸、乳酸、蘋果酸、酒石酸、檸檬酸、抗壞血酸、撲酸、馬來酸、羥基馬來酸、苯基乙酸、谷氨酸、苯甲酸、水楊酸、對氨基苯磺酸、2-乙酰氧基-苯甲酸、富馬酸、甲苯磺酸、甲磺酸、乙二磺酸、草酸、羥乙磺酸、三氟乙酸等。
當本發(fā)明的化合物是酸性時，適當?shù)摹逅帉W可接受鹽″是指從藥學可接受無毒堿制備的鹽，包括無機堿和有機堿。衍生自無機堿的鹽包括鋁、銨、鈣、銅、鐵、亞鐵、鋰、鎂、錳鹽、亞錳、鉀、鈉和鋅等。特別優(yōu)選銨、鈣、鋰、鎂、鉀和鈉鹽。從藥學可接受有機無毒堿制備的鹽包括一級、二級和三級胺的鹽，包括得自天然取代的胺，環(huán)胺，和堿性離子交換樹脂，例如精氨酸，甜菜堿，咖啡因，膽堿，N，N1-二芐基亞乙基二胺，二乙胺，2-二乙基氨基乙醇，2-二甲基氨基乙醇，乙醇胺，乙二胺，N-乙基-嗎啉，N-乙基哌啶，葡糖胺，氨基葡萄糖，組氨酸，hydrabamine，異丙胺，二環(huán)己基胺，賴氨酸，甲基葡糖胺，嗎啉，哌嗪，哌啶，聚胺樹脂，普魯卡因，嘌呤類，可可堿，三乙胺，三甲胺，三丙胺，氨丁三醇等。當本發(fā)明的化合物是酸性時，術語″游離形式″是指其非鹽形式的化合物，其酸性官能團仍然呈質(zhì)子化。
上述藥學可接受鹽和其他典型藥學可接受鹽的制備較全面地公開在Berg等的″Pharmaceutical Salts″J.Pham.Sci.，1977661-19中。
還注意，本發(fā)明的化合物可能內(nèi)鹽或兩性離子，因為在生理條件下化合物中的脫質(zhì)子酸性部分例如羧基可以是陰離子，并且該電荷可能被質(zhì)子化或烷基化的堿性部分例如季氮原子的陽離子電荷在內(nèi)部平衡掉。
除了文獻中已知的或試驗方法中例舉的標準處理方法以外，本發(fā)明的化合物可以利用下列路線所示的反應制備。下列示例路線不限于所列的化合物或任何舉例目的所使用的特定取代基。路線中所示的取代基編號不一定與權利要求書中所用的有關，并且常常是為了清楚，表示為一個取代基與化合物相連，其中在上式I的定義中允許多個取代基。
路線如路線A所示，關鍵的2，2-二取代二氫吡咯中間體A-8可以得自容易獲得的適當取代的苯基甘氨酸。按照Van Betsbrugge等(Tetrahedron，1997，53，9233-9240)所述的方法制備α-烯丙基-α-苯基甘氨酸A-3。酯的還原和用羰基二咪唑環(huán)化得到中間體A-4。烯丙型烯烴的釕氧化、隨后酯的形成和氮的烷基化作用得到中間體A-5。環(huán)化和脫羧反應得到中間體A-6。環(huán)羰基隨后可以用于摻入適當取代的苯基部分。后續(xù)皂化和氧化保護反應得到飽和的中間體A-8。A-8的對映異構(gòu)體可以經(jīng)常利用手性色譜技術分離。環(huán)氮隨后可以與光氣反應制備活化羰基氯化物A-9。
路線B舉例說明氟化氨基哌啶B-5的制備，從N-飽和的哌啶酮。該cis和trans非對映異構(gòu)體對通?？梢酝ㄟ^硅膠色譜分離，并且該對映異構(gòu)體經(jīng)?？梢岳檬中陨V技術分離。
如路線C所示，該氟化氨基哌啶隨后與二氫吡咯中間體A-9反應得到本發(fā)明化合物C-1。
路線D舉例說明2-氟甲基-4-氨基哌啶化合物的制備和那些基團引入到本發(fā)明的化合物。應當注意，中間體D-3的側(cè)鏈羥基的復合物置換常常得到兩種預期的中間體D-4和環(huán)同系化合物D-5。這些中間體化合物可以通過硅膠色譜分離。
路線E舉例說明2-氟甲基-3-氨基哌啶化合物的另一種制備方法，其中不生成7員環(huán)立體異構(gòu)體。
如路線F和G所示，A-9的羥基部分可以用多種試劑進行烷基化。
如路線H所示，化合物C-1的羥基用適當取代的胺的置換反應經(jīng)過相應的醛H-1，隨后還原烷基化，得到本發(fā)明化合物H-2。
路線I舉例說明本發(fā)明化合物的2-一取代二氫吡咯的合成。中間體I-7的甲基咪唑部分與氨基哌啶的制備和置換得到I-8。
路線J舉例說明2-烷基側(cè)鏈的同系化反應得到本發(fā)明化合物J-3和J-4。
路線K-M進一步舉例說明從C-2烷基側(cè)鏈和中間體醛H-1開始的修飾。所以在路線K中，醛H-1用格氏試劑例如烷基格氏試劑處理，得到羥基化合物K-1。
路線L舉例說明C-2側(cè)鏈的同系化。醛H-1用膦基乙酸酯處理并且偶聯(lián)鍵隨后還原生成酯L-1。后續(xù)酯的還原和醇的氧化得到醛L-3，其可以還原烷基化適當取代的胺生成本發(fā)明化合物L-4。L-4的進一步烷基化反應也如圖所示。
路線M舉例說明C-2側(cè)鏈的轉(zhuǎn)化并且羥基部分隨后經(jīng)過用疊氮化鈉置換相應的三氟甲磺酸酯轉(zhuǎn)化為胺和。
路線N舉例說明將二氟甲基部分引入到C-2側(cè)鏈。
路線A
路線B 路線C
路線D
路線E 路線F
路線G
路線H
路線I
路線J
路線K
路線L
路線M
路線N 實用性發(fā)現(xiàn)本發(fā)明的化合物可在不同的應用中使用。本領域技術人員應懂得，可以以多種方式改變有絲分裂；也就是說，通過提高或降低有絲分裂途徑中組分的活性可以影響有絲分裂。換種說法，通過干擾平衡，或通過抑制或激活某些組分可以影響(例如中斷)有絲分裂。類似方法可以用于改變有絲分裂。
在一優(yōu)選實施方式中，本發(fā)明的化合物用于調(diào)節(jié)有絲分裂紡錘體的形成，由此導致長時間的細胞周期停止在有絲分裂。此處所謂的″調(diào)節(jié)″是指改變有絲分裂紡錘體的形成，包括增加和減少紡錘體的形成。此處所謂的″有絲分裂紡錘體形成″是指通過有絲分裂驅(qū)動蛋白作用下微管組構(gòu)為兩極結(jié)構(gòu)的組構(gòu)化。此處所謂的″有絲分裂紡錘體功能障礙″是指有絲分裂停止且單極紡錘體的形成。
本發(fā)明的化合物有效結(jié)合和/或調(diào)節(jié)有絲分裂驅(qū)動蛋白的活性。在一優(yōu)選實施方式中，該有絲分裂驅(qū)動蛋白是bimC亞族的有絲分裂驅(qū)動蛋白的一員(如美國專利號6,284,480，第5欄所述)。在另一優(yōu)選實施方式中，所述的有絲分裂驅(qū)動蛋白是人體KSP，盡管來源于其他生物的有絲分裂驅(qū)動蛋白的活性也可以通過本發(fā)明化合物調(diào)節(jié)。本文中，調(diào)節(jié)是指增加或減少紡錘極分離，導致有絲分裂紡錘極的變性，即展開，或另外引起有絲分裂紡錘體的形態(tài)紊亂。出于這樣的目的，KSP的定義中還包括KSP的變體和/或片段。此外，其他有絲分裂驅(qū)動蛋白可以用本發(fā)明的化合物抑制。
本發(fā)明的化合物可有效治療細胞增殖性疾病。可以利用本發(fā)明提供的方法和組合物治療的疾病狀態(tài)包括，但不限于，癌癥(在下文中討論)，自身免疫性疾病，關節(jié)炎，移植排斥，炎性腸病，醫(yī)學處理(包括外科手術、血管成形術等)后引起的增生。在某些情況中應理解，細胞可能不處于過度-或低下-增殖狀態(tài)(異常狀態(tài))，但仍然需要治療。例如，在傷口愈合過程中，細胞可能“正?！痹鲋?，但可能希望增殖作用增強。同樣地，如上所述，在農(nóng)業(yè)領域中，細胞可能處于″正?！鍫顟B(tài)，但可以希望增殖性調(diào)節(jié)，通過直接提高農(nóng)作物的生長，或者通過抑制對農(nóng)作物存在不利影響的植物或生物的生長來增加作物的產(chǎn)量。所以，在一實施方式中，本發(fā)明包括應用于患有或即將患有上述任一疾病或病癥的細胞或個體。
本文提供的化合物、組合物和方法特別適合于治療癌癥，包括實體瘤例如皮膚、乳腺、腦部、子宮頸癌、睪丸癌等。更加具體地，可以通過本發(fā)明的化合物、組合物和方法治療的癌癥包括，但不限于心血管肉瘤(血管肉瘤，纖維肉瘤，橫紋肌肉瘤，脂肉瘤)，粘液瘤，橫紋肌瘤，纖維瘤，脂肪瘤和畸胎瘤；肺部支氣管原癌(鱗狀細胞，未分化小細胞，未分化大細胞，腺癌)，肺泡(細支氣管)癌，支氣管性腺瘤，肉瘤，淋巴瘤，軟骨瘤錯構(gòu)瘤，間皮瘤；胃腸道食道(鱗狀細胞癌，腺癌，平滑肌肉瘤，淋巴瘤)，胃(癌，淋巴瘤，平滑肌肉瘤)，胰腺(導管腺癌，胰島瘤，glucagonoma，胃瘤，類癌瘤，vipoma)，小腸(腺癌，淋巴瘤，類癌瘤，卡波齊氏肉瘤，平滑肌瘤，血管瘤，脂肪瘤，神經(jīng)纖維瘤，纖維瘤)，大腸(腺癌，管狀腺瘤，絨毛狀腺瘤，錯構(gòu)瘤，平滑肌瘤)；泌尿生殖道腎臟(腺癌，Wilm氏瘤[腎胚細胞瘤]，淋巴瘤，白血病)，膀胱和尿道(鱗狀細胞癌，過渡型細胞癌，腺癌)，前列腺(腺癌，肉瘤)，睪丸(精原細胞瘤，畸胎瘤，絨毛膜癌，肉瘤，間質(zhì)細胞癌，纖維瘤，纖維腺瘤，腺瘤樣腫瘤，脂肪瘤)；肝臟肝細胞瘤(肝細胞癌)，膽管癌，肝胚細胞瘤，血管肉瘤，肝細胞腺瘤，血管瘤；骨骼骨原性肉瘤(骨肉瘤)，纖維肉瘤，惡性纖維組織細胞瘤，軟骨肉瘤，尤因氏肉瘤，惡性淋巴瘤(網(wǎng)狀細胞肉瘤)，多發(fā)性骨髓瘤，惡性巨細胞瘤脊索瘤，osteochronfroma，骨樣骨瘤和巨細胞瘤；神經(jīng)系統(tǒng)頭顱(骨瘤，血管瘤，肉芽腫，黃瘤，畸形性骨炎)，腦脊膜(腦脊膜瘤，腦脊膜肉瘤，神經(jīng)膠質(zhì)瘤)，腦(星形細胞瘤，成神經(jīng)管細胞瘤，神經(jīng)膠質(zhì)瘤，室管膜瘤，germinoma[松果體瘤]，多形性成膠質(zhì)細胞瘤，間膠質(zhì)瘤，神經(jīng)鞘瘤，成視網(wǎng)膜細胞瘤，先天性腫瘤)，脊髓神經(jīng)纖維瘤，腦脊膜瘤，肉瘤)；婦科學子宮(子宮內(nèi)膜癌)，子宮頸(子宮頸癌，腫瘤前子宮頸發(fā)育異常)，卵巢(卵巢癌[漿液囊腺癌，粘液囊腺癌，未分類癌]，粒層-卵巢泡膜細胞瘤，男性細胞瘤，無性細胞瘤，惡性畸胎瘤)，外陰(扁平細胞癌，上皮癌，腺癌，纖維肉瘤，黑素瘤)，陰道(明細胞癌，扁平細胞癌，葡萄樣肉瘤(胚胎橫紋肌肉瘤)，輸卵管(癌)；血液學血液(骨髓白血病[急性和慢性]，急性成淋巴細胞性白血病，慢性成淋巴細胞性白血病，脊髓增殖性疾病，多發(fā)性骨髓瘤，脊髓發(fā)育不良綜合征)，何杰金氏病，非何杰金氏淋巴瘤[惡性淋巴瘤]；皮膚惡性黑素瘤，基底細胞癌，鱗狀細胞癌，卡波齊氏肉瘤，moles dysplastic nevi，脂肪瘤，血管瘤，皮膚纖維瘤，瘢痕瘤，牛皮癬；和腎上腺成神經(jīng)細胞瘤。所以，在此使用的術語″癌細胞″包括患有上述任一確定病癥的細胞。
本發(fā)明的化合物還可以通過調(diào)節(jié)bimC驅(qū)動蛋白亞組的真菌成員的活性用作抗鎮(zhèn)靜劑，如美國專利號6,284,480所述。
本發(fā)明的化合物可以單獨或者優(yōu)選與藥學可接受載體、賦形劑或稀釋劑組合，以藥物組合物，按照標準藥學實踐施用給哺乳動物，優(yōu)選人體。該化合物可以經(jīng)口服或非腸道給藥，包括靜脈內(nèi)，肌肉內(nèi)，腹膜內(nèi)，皮下，直腸和局部的給藥途徑。
在此使用的術語″組合物″包括含有特定量的特定組分的產(chǎn)品，以及任何直接或間接從特定量的特定組分的組合獲得的產(chǎn)品。
含有活性成分的藥物組合物可以是適合口服使用的形式，例如，成為片劑，菱形錠劑，水或油混懸液，可分散散劑或顆粒劑，乳劑，硬或軟膠囊，或糖漿劑或酏劑。用于口服使用的組合物可以按照制造藥物組合物采用的已知方法來制備，并且所述的組合物可以含有一種或多種選自甜味劑、矯味劑、著色劑和防腐劑的試劑從而提供藥學上美觀和可口的制劑。片劑含有與適合制備片劑的藥學可接受賦形劑相互混和的活性成分。這些賦形劑可以例如，惰性稀釋劑，例如碳酸鈣，碳酸鈉，乳糖、磷酸鈣或磷酸鈉；造粒劑和崩解劑，例如，微晶纖維素，交聯(lián)羧甲基纖維素鈉，玉米淀粉或藻酸；粘合劑，例如淀粉，明膠，聚乙烯吡咯烷酮或阿拉伯膠，和潤滑劑，例如，硬脂酸鎂，硬脂酸或滑石粉。片劑可以未包衣，或者它們可以通過已知技術將其包衣以掩蔽藥物的不快味道或者延遲在胃腸道內(nèi)的崩解和吸收并由此獲得更長時間的緩釋作用。例如，可以采用水溶性味覺掩蔽材料例如羥丙基-甲基纖維素或羥丙基-纖維素，或者延時材料例如乙基纖維素，醋酸纖維素buryrate。
口服使用的制劑也可以作為硬明膠膠囊存在，其中活性成分與惰性固體稀釋劑混和，該惰性固體稀釋劑是例如碳酸鈣、磷酸鈣或高嶺土，或作為軟明膠膠囊存在，其中該活性成分與水或油性介質(zhì)如花生油、液體石蠟或橄欖油混和。
含水混懸液含有與適合制備水混懸液的賦形劑混和在一起的活性物質(zhì)。該賦形劑為助懸劑，例如羧甲基纖維素鈉，甲基纖維素，羥丙基甲基-纖維素，藻酸鈉，聚乙烯-吡咯烷酮，黃芪膠和阿拉伯膠；分散或濕潤劑可以是天然磷脂，例如卵磷脂，或烯化氧與脂肪酸的縮合產(chǎn)物，例如聚氧乙烯硬脂酸酯，或環(huán)氧乙烷和長鏈脂肪醇例如十七碳乙烯-氧基鯨蠟醇的縮合產(chǎn)物，或環(huán)氧乙烷與衍生自脂肪酸和己糖醇的偏酯的縮合產(chǎn)物，例如聚氧乙烯山梨糖醇一油酸酯，或環(huán)氧乙烷與衍生自脂肪酸和己糖醇酐的偏酯的縮合產(chǎn)物，例如聚氧乙烯脫水山梨糖醇一油酸酯。含水混懸液還可以含有一種或多種防腐劑，例如對羥基苯甲酸乙酯或正丙酯，一種或多種著色劑，一種或多種矯味劑，和一種或多種甜味劑，例如蔗糖，糖精或天冬甜素。
油性混懸液可以通過將活性成分懸浮在植物油如花生油、橄欖油、芝麻油或椰子油或礦物油例如液體石蠟中來配制。油性混懸液可以含有增稠劑，例如蜂蠟，硬石蠟或鯨蠟醇。可以加入甜味劑例如上述那些，并加入矯味劑以提供可口的口服制劑。這些組合物可以通過加入抗氧劑例如丁基羥基苯甲醚或α-生育酚來防腐。
適合通過加入水制成水混懸液的可分散粉末劑和顆粒劑是將活性成分與分散或濕潤劑、混懸劑和一種或多種防腐劑混和。適當?shù)姆稚⒒驖駶檮┖椭鷳覄├缡巧鲜鲆呀?jīng)提及的那些。其他賦形劑例如甜味劑、矯味劑和著色劑也可以存在。這些組合物可以通過加入抗氧劑例如抗壞血酸來防腐本發(fā)明的藥物組合物還可以是水包油乳液的形式。油相可以是植物油，例如橄欖油或花生油，或礦物油，例如液體石蠟和這些的混和物。適當?shù)臐櫥瑒┛梢允翘烊粯淠z，例如阿拉伯膠或黃芪膠，天然磷脂，例如大豆卵磷脂，和衍生自脂肪酸和己糖醇酐的酯或偏酯，例如脫水山梨糖醇一油酸酯，該偏酯與環(huán)氧乙烷的縮合產(chǎn)物，例如聚氧化乙烯脫水山梨糖醇一油酸酯。乳液還可以含有甜味劑、矯味劑、防腐劑和抗氧劑。
糖漿劑和酏劑可以用甜味劑配制，例如甘油，丙二醇，山梨糖醇或蔗糖。此類制劑還可以含有緩和劑、防腐劑、矯味劑和著色劑和抗氧劑。
該藥物組合物可以是滅菌可注射水溶液的形式。在可接受載體和溶劑中可以使用的是水、林格氏溶液和等滲氯化鈉溶液。
滅菌可注射制劑還可以是一種滅菌可注射水包油微乳液，其中該活性成分溶于油相內(nèi)。例如，活性成分首先可以溶解在大豆油和卵磷脂的混和物中。該油溶液隨后被加入到水和甘油混和物中并處理形成微乳液。
可注射溶液或微乳液可以通過局部快速濃注被引入到患者的血液內(nèi)?；蛘?，可以優(yōu)選將溶液或微乳液以維持本發(fā)明化合物恒定循環(huán)濃度的方式給藥。為了維持恒定濃度，可以采用連續(xù)靜脈內(nèi)給藥裝置。該裝置的實例是Deltec CADD-PLUSTM5400型靜脈內(nèi)輸送泵。
該藥物組合物可以是用于肌肉內(nèi)和皮下給藥的滅菌可注射水或油性混懸液的形式。該混懸液可以按照已知技術、利用適當?shù)姆稚┗蛩芤汉椭鷳覄﹣砼渲?，如上所述。滅菌可注射制劑還可以是存在于無毒非腸道可接受的稀釋劑或溶劑中的滅菌溶液或混懸液，例如存在于1，3-丁二醇中的溶液。此外，滅菌、非揮發(fā)性油通常用作溶劑或助懸介質(zhì)。出于此目的，可以使用任何系列的非揮發(fā)性油，包括合成甘油一-或二酯。此外，脂肪酸例如油酸可以用于可注射劑的制備中。
式I的化合物還可以以栓劑的形式用于藥物的直腸給藥。這些組合物可以通過將藥物與適當無刺激賦形劑混和制成，所述的無刺激賦形劑在常溫下為固體而在直腸溫度下為液體并由此在直腸內(nèi)融化釋放藥物。該物質(zhì)包括可可脂，甘油化明膠，氫化植物油，不同分子量的聚乙二醇和聚乙二醇的脂肪酸酯的混和物。
為了局部使用，可以采用含有式I化合物的霜劑、軟膏、凝膠、溶液或混懸液等。(出于本申請的目的，局部施用應包括口腔清洗劑和含漱劑)。
本發(fā)明的化合物可以以鼻內(nèi)形式經(jīng)局部使用適當?shù)谋莾?nèi)載體和給藥裝置進行給藥，或者經(jīng)透皮途徑給藥，采用本領域普通技術人員熟知的透皮貼劑的形式給藥。為了以透皮給藥體系的形式給藥，顯然，在給藥方案中劑量的施用應當連續(xù)而不是間斷的。本發(fā)明的化合物還可以作為栓劑采用基質(zhì)如可可脂、甘油化明膠、氫化植物油、不同分子量的聚乙二醇和聚乙二醇的脂肪酸酯的混和物給藥。
當本發(fā)明的化合物施用到人體對象中時，日劑量一般可以由主治醫(yī)生決定，并且該劑量一般根據(jù)患者個體的年齡、體重和反應以及患者癥狀的嚴重性來決定。
在一個舉例應用中，將適量的化合物施用給經(jīng)受癌癥治療的哺乳動物。給藥的量在約0.1mg/kg體重-約60mg/kg體重/天的范圍內(nèi)，優(yōu)選0.5mg/kg體重-約40mg/kg體重/天。
本發(fā)明的化合物還可以與已知的治療劑和抗癌藥聯(lián)合使用。例如，本發(fā)明的化合物與已知抗癌藥聯(lián)合使用。本文公開的化合物與其他抗癌藥或化療劑的聯(lián)合藥物形式屬于本發(fā)明的范圍內(nèi)。此類藥物的實例可以參見V.T.Devita和S.Hellman(編輯)Cancer Principles和Practiceof Oncology，第6版(2001年2月15日)，Lippincott Williams & WilkinsPublishers。本領域普通技術人員應能夠懂得藥物的聯(lián)合形式應基于藥物的具體特性和所針對的癌癥來使用。此類抗癌藥包括，但不限于，下列藥物雌激素受體調(diào)節(jié)劑，雄激素受體調(diào)制劑，視黃酸(retinoid)受體調(diào)節(jié)劑，細胞毒性/細胞抑制劑，抗增殖藥，異戊烯基蛋白轉(zhuǎn)移酶抑制劑，HMG-CoA還原酶抑制劑和其他血管生成抑制劑，細胞增殖和存活信號的抑制劑，細胞凋亡誘導劑和細胞周期關卡干擾劑。當與放療聯(lián)合施用時，本發(fā)明的化合物特別有效。
在一實施方式中，本發(fā)明的化合物也有效地與已知的抗癌藥聯(lián)合，包括下列藥物雌激素受體調(diào)節(jié)劑，雄激素受體調(diào)節(jié)劑，視黃酸受體調(diào)節(jié)劑，細胞毒性劑，抗增殖藥，異戊烯基蛋白轉(zhuǎn)移酶抑制劑，HMG-CoA還原酶抑制劑，HIV蛋白酶抑制劑，反轉(zhuǎn)錄酶抑制劑，和其他血管生成抑制劑。
″雌激素受體調(diào)制劑″是指無論其機理如何的能夠干擾或抑制雌激素與受體結(jié)合的化合物。雌激素受體調(diào)制劑的實例包括，但不限于，他莫昔芬(tamoxifen)，雷洛昔芬(raloxifene)，艾多昔芬，LY353381，LY117081，托瑞米芬，fulvestrant，4-[7-(2，2-二甲基-1-氧代丙氧基-4-甲基-2-[4-[2-(1-哌啶基)乙氧基]苯基]-2H-1-苯并吡喃-3-基]-苯基-2，2-二甲基丙酸酯，4，4′-二羥基二苯酮-2，4-二硝基苯基-腙和SH646。
″雄激素受體調(diào)制劑″是指無論其機理如何的能夠干擾或抑制雄激素結(jié)合受體的化合物。雄激素受體調(diào)制劑的實例包括非那雄胺和其他5α-還原酶抑制劑，尼魯米特，氟他胺，比卡米特，利阿唑，和abiraterone acetate。
″視黃酸受體調(diào)制劑″是指無論其機理如何的能夠干擾或抑制視黃酸結(jié)合受體的化合物。視黃酸受體調(diào)制劑的實例包括維生素A酸，13-順式(cis)-視黃酸，9-cis-視黃酸，α-二氟甲基鳥氨酸，ILX23-7553，反式-N-(4′-羥基苯基)雷替米特(retinamide)，和N-4-羧基苯基雷替米特。
″細胞毒性/細胞抑制劑″是指主要通過直接干擾細胞活動或者抑制或干擾細胞減數(shù)分裂引起細胞死亡或抑制細胞增殖的化合物，包括烷化劑，腫瘤壞死因子，嵌入劑，低氧可激活化合物，微管蛋白抑制劑/微管穩(wěn)定劑，有絲分裂驅(qū)動蛋白的抑制劑，參與有絲分裂進程的激酶的抑制劑，抗代謝藥；生物反應改進劑；激素/抗激素治療劑，造血生長因子，單克隆抗體靶向治療劑，拓撲異構(gòu)酶抑制劑，蛋白體抑制劑和泛素連接酶抑制劑。
細胞毒性劑的實例包括，但不限于，sertenef，腫瘤壞死因子，異環(huán)磷酰胺，tasonermin，氯尼達明，卡鉑，六甲蜜胺，潑尼莫司汀，二溴衛(wèi)矛醇，雷諾氮芥，福泰氮芥，奈達鉑，奧沙利鉑，泰莫佐羅，heptaplatin，雌莫司汀，二丙胺磺酯，氯乙環(huán)磷酰胺，尼莫司汀，螺溴丙酰胺，嘌米舌泊，樂鉑，satraplatin，profiromycin，順鉑，irofulven，dexifosfamide，順式-胺二氯(2-甲基-吡啶)鉑，芐基鳥嘌呤，glufosfamide，GPX100，(反式，反式，反式)-二-mu-(己烷-1，6-二胺)-mu-[二胺-鉑(II)]二[二胺(氯)鉑(n)]四氯化物，二氮雜環(huán)丁烷基精胺，三氧化砷，1-(11-十二烷基氨基-10-羥基十一氨基)-3，7-二甲基黃嘌呤，佐柔比星，伊達比星，柔紅霉素，比桑那，米托蒽醌，吡喃阿霉素，pinafide，戊柔比星，amrubicin，抗酮瘤，3′-脫氨基-3′-嗎啉代-13-脫氧-10-羥基洋紅霉素，安那霉素，galarubicin，elinafide，MEN10755，和4-脫甲氧基-3-脫氨基-3-氮雜環(huán)丙烷基-4-甲基磺?；?柔紅霉素(參見WO00/50032)。
低氧可激活化合物的一個實例是替拉扎明。
蛋白體抑制劑的實例包括但不限于lactacystin和MLN-341(Velcade)。
微管抑制劑/微管穩(wěn)定劑的實例包括紫杉醇，硫酸長春地辛，3′，4′-二氫-4′-脫氧-8′-去甲長春花鹼，多西紫杉，根霉素，dolastatin，mivobulin羥乙基磺酸鹽，auristatin，cemadotin，RPR109881，BMS184476，vinflunine，cryptophycin，2，3，4，5，6-五氟-N-(3-氟-4-甲氧基苯基)苯磺酰胺，脫水長春堿，N，N-二甲基-L-纈氨?；?L-纈氨?；?N-甲基-L-纈氨酰基-L-脯氨?；?L-脯氨酸-t-丁基酰胺，TDX258，環(huán)氧硫酮類(epothilones)(參見例如美國專利6,284,781和6,288,237)和BMS188797。
拓撲異構(gòu)酶抑制劑的一些實例是拓撲替康，hycaptamine，伊立替康，rubitecan，6-乙氧基丙?；?3′，4′-O-外型-亞芐基-教酒菌素，9-甲氧基-N，N-二甲基-5-硝基吡唑并[3，4，5-kl]吖啶-2-(6H)丙胺，1-氨基-9-乙基-5-氟-2，3-二氫-9-羥基-4-甲基-1H，12H-苯并[de]吡喃并[3′，4′b，7]吲嗪并[1，2b]喹啉-10，13(9H，15H)二酮，lurtotecan，7-[2-(N-異丙基氨基)乙基]-(20S)喜樹堿，BNP1350，BNPI1100，BN80915，BN80942，磷酸依托泊甙，替尼泊甙，sobuzoxane，2′-二甲基氨基-2′-脫氧-依托泊甙，GL331，N-[2-(二甲基氨基)乙基]-9-羥基-5，6-二甲基-6H-吡啶并[4，3-b]咔唑-1-羧酰胺，asulacrine，(5a，5aB，8aa，9b)-9-[2-[N-[2-(二甲基氨基)乙基]-N-甲基氨基]乙基]-5-[4-羥基-3，5-二甲氧基苯基]-5，5a，6，8，8a，9-六氫呋(3′，4′6，7)萘并(2，3-d)-1，3-二氧雜環(huán)戊烯-6-酮，2，3-(亞甲基二氧基)-5-甲基-7-羥基-8-甲氧基苯并[c]-菲啶鎓，6，9-二[(2-氨基乙基)氨基]苯并[g]異喹啉-5，10-二酮，5-(3-氨基丙基氨基)-7，10-二羥基-2-(2-羥基乙基氨基甲基)-6H-吡唑并[4，5，1-de]吖啶-6-酮，N-[1-[2(二乙基氨基)乙基氨基]-7-甲氧基-9-氧代-9H-噻噸-4-基甲基]甲酰胺，N-(2-(二甲基氨基)乙基)吖啶-4-羧酰胺，6-[[2-(二甲基氨基)乙基]氨基]-3-羥基-7H-茚[2，1-c]喹啉-7-酮，和dimesna。
有絲分裂驅(qū)動蛋白，并且特別是人有絲分裂驅(qū)動蛋白KSP的抑制劑的實例公開在PCT公報WO 01/30768和WO 01/98278，WO03/050,064(6月19日，2003)，WO 03/050,122(6月19日，2003)，WO03/049,527(6月19日，2003)，WO 03/049,679(6月19日，2003)，WO03/049,678(6月19日，2003)和WO 03/39460(5月15日，2003)和待決PCT申請US 03/06403(2003年5月4日提交)，US 03/15861(2003年5月19日提交)，US 03/15810(2003年5月19日提交)，USO3/18482(2003年6月12日提交)和US 03/18694(2003年6月12日提交)。在一實施方式中，有絲分裂驅(qū)動蛋白的抑制劑包括，但不限于KSP的抑制劑，MKLP1的抑制劑，CENP-E的抑制劑，MCAK的抑制劑，Kifl4的抑制劑，Mphosphl的抑制劑和Rab6-KIFL的抑制劑。
″參與有絲分裂進程的激酶的抑制劑″包括，但不限于，極光型(aurora)激酶的抑制劑，Polo樣激酶(PLK)的抑制劑(特別是PLK-1的抑制劑)，bub-1的抑制劑和bub-R1的抑制劑。
″抗增殖藥″包括反義RNA和DNA低聚核苷酸，例如G3139，ODN698，RVASKRAS，GEM231和INX3001，和抗代謝藥，例如依諾他濱，卡莫氟，替加氟，噴托他丁，多西氟尿啶，曲麥克特，氟達拉賓，卡培他濱，galocitabine，阿糖胞苷酯，fosteabine鈉水合物，raltitrexed，paltitrexid，emitefur，噻唑呋林，脫氧氮雜胞苷，nolatrexed，pemetrexed，nelzarabine，2′-脫氧-2′-亞甲基胞苷，2′-氟亞甲基-2′-脫氧胞苷，N-[5-(2，3-二氫-苯并呋喃基)磺?；鵠-N′-(3，4-二氯苯基)脲，N6-[4-脫氧-4-[N2-[2(E)，4(E)-十四坦二烯?；鵠甘氨?；被鵠-L-甘油-B-L-甘露-吡喃庚糖基]腺嘌呤，aplidine，ecteinascidin，troxacitabine，4-[2-氨基4-氧代-4，6，7，8-四氫-3H-嘧啶并[5，4-b][1，4]噻嗪-6-基-(S)-乙基]-2，5-噻吩基-L-谷氨酸，氨基蝶呤，5-flurouracil，丙氨菌素，11-乙酰基-8-(氨基甲酰氧基甲基)4-甲?；?6-甲氧基-14-氧雜-1，11-二氮雜四環(huán)丙(7.4.1.0.0)-十四碳-2，4，6-三烯-9-基乙酸酯，swainsonine，洛美曲索，右丙亞胺，methioninase，2′-氰基-2′-脫氧-N4-棕櫚?；?1-B-D-呋喃阿拉伯糖基胞嘧啶，和3-氨基吡啶-2-羧醛縮氨基硫脲。
單克隆抗體靶向的治療劑的實例包括那些含有與癌細胞特異性或靶向細胞特異性單克隆抗體相連的細胞毒性劑或放射性同位素的治療劑。實例包括Bexxar。
″HMG-CoA還原酶抑制劑″是指3-羥基-3-甲基戊二醛-CoA還原酶的抑制劑。對HMG-CoA還原酶具有抑制活性的化合物可以很容易地通過本領域熟知的分析方法來鑒定。例如，參見美國專利4,231,938第6欄和WO 84/02131第30-33頁中所述或引用的分析試驗。術語″HMG-CoA還原酶抑制劑″和″HMG-CoA還原酶的抑制劑″在本文使用時具有相同含義。
可以使用的HMG-CoA還原酶抑制劑的實例包括但不限于洛伐他汀(lovastatin)(MEVACOR_，參見美國專利4,231,938、4,294,926和4,319,039)；辛伐他汀(辛伐他汀)(ZOCORO_，參見美國專利4,444,784、4,820,850和4,916,239)；普伐他汀(pravastatin)(PRAVACHOLO_，參見美國專利4,346,227、4,537,859、4,410,629、5,030,447和5,180,589)；氟伐他汀(LESCOLO_，參見美國專利5,354,772、4,911,165、4,929,437、5,189,164、5,118,853、5,290,946和5,356,896)和阿伐他汀(LIPITOR_)，參見美國專利5,273,995、4,681,893、5,489,691和5,342,952)。本發(fā)明方法中可以使用的這些和其他HMG-CoA還原酶抑制劑的結(jié)構(gòu)式公開在M.Yalpani，″Cholesterol Lowering Drugs″，Chemistry & Industry，pp.85-89(52月1996)的第97頁和美國專利4,782,084和4,885,314中。本文使用的術語HMG-CoA還原酶抑制劑包括所述化合物的具有HMG-CoA還原酶抑制活性的所有藥學可接受內(nèi)酯和開環(huán)酸形式(即，其中內(nèi)酯環(huán)打開形成游離酸)以及鹽和酯，而且這些鹽、酯、開環(huán)酸和內(nèi)酯形式的應用屬于本發(fā)明的范圍內(nèi)。內(nèi)酯部分及其相應開環(huán)酸形式的示例如結(jié)構(gòu)I和II所示。
在其中開環(huán)酸形式可能存在的HMG-CoA還原酶抑制劑中，從開環(huán)酸可優(yōu)先生成鹽和酯形式，并且所有的形式歸屬于在本文使用的術語″HMG-CoA還原酶抑制劑″的含義內(nèi)。優(yōu)選地，該HMG-CoA還原酶抑制劑選自洛伐他汀和辛伐他汀，并且最優(yōu)選辛伐他汀。文中，有關HMG-CoA還原酶抑制劑的術語″藥學可接受鹽″應是指本發(fā)明所用化合物的無毒鹽，它們一般是通過游離酸與適當有機或無機堿反應來制備的，特別是那些形成陽離子的鹽，例如鈉、鉀、鋁、鈣、鋰、鎂、鋅和四甲基銨，以及那些從胺形成的鹽，例如氨、乙二胺、N-甲基葡糖胺，賴氨酸，精氨酸，鳥氨酸，膽堿，N，N′-聯(lián)芐基乙二胺，氯普魯卡因，二乙醇胺，普魯卡因，N-芐基苯乙基胺，1-p-氯芐基-2-吡咯烷-1′-基-甲基苯并咪唑，二乙胺，哌嗪和三(羥基甲基)氨基甲烷。HMG-CoA還原酶抑制劑的鹽形式的其他實例可以包括，但不限于，乙酸鹽，苯磺酸鹽，苯甲酸鹽，碳酸氫鹽，硫酸氫鹽，酒石酸氫鹽，硼酸鹽，溴化物，乙底酸鈣，camsylate，碳酸鹽，氯化物，棒酸鹽，檸檬酸鹽，二氫氯化物，乙底酸鹽，edisylate，estolate，esylate，富馬酸鹽，gluceptate，葡糖酸鹽，谷氨酸鹽，乙醇?；鶎Π彼岜诫纤猁}，己基間苯二酚，hydrabamine，氫溴化物，鹽酸鹽，羥基萘甲酸鹽，碘化物，isothionate，乳酸鹽，乳糖酸鹽，月桂酸鹽，蘋果酸鹽，馬來酸鹽，扁桃酸鹽，甲磺酸鹽，甲基硫酸鹽，粘酸鹽，napsylate，硝酸鹽，油酸鹽，草酸鹽，撲酸鹽，棕櫚酸鹽，panthothenate，磷酸鹽/磷酸氫鹽，聚半乳糖醛酸鹽，水楊酸鹽，硬脂酸鹽，堿式醋酸鹽，琥珀酸鹽，鞣酸鹽，酒石酸鹽，teoclate，甲苯磺酸鹽，triethiodide和戊酸鹽。
所述HMG-CoA還原酶抑制劑化合物的酯衍生物可以用作前藥，當它們被吸收道溫血動物的血液中時，可以裂解釋放藥物形式并允許藥物產(chǎn)生改進的治療功效。
″異戊烯基蛋白轉(zhuǎn)移酶抑制劑″是指抑制異戊烯基蛋白轉(zhuǎn)移酶的一種或任意組合的化合物，包括法呢基-蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)移酶(FPTase)，香葉基香葉基-蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)移酶I型(GGPTase-I)和香葉基香葉基-蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)移酶II型(GPTase-II，也稱作RabGGPTase)。異戊烯基-蛋白轉(zhuǎn)移酶抑制化合物的實例包括(±)-6-[氨基(4-氯苯基)(1-甲基-1H-咪唑-5-基)甲基]-4-(3-氯苯基)-1-甲基-2(1H)-喹啉酮，(-)-6-[氨基(4-氯苯基)(1-甲基-1H-咪唑-5-基)甲基]-4-(3-氯苯基)-1-甲基-2(1H)-喹啉酮，(+)-6-[氨基(4-氯苯基)(1-甲基-1H-咪唑-5-基)甲基]-4-(3-氯苯基)-1-甲基-2(1H)-喹啉酮，5(S)-正丁基-(2，3-二甲基苯基)-4-[1-(4-氰基芐基)-5-咪唑基甲基]-2-哌嗪酮，(S)-1-(3-氯苯基)-4-[1-(4-氰基芐基)-5-咪唑基甲基]-5-[2-(乙磺?；?甲基]-2-哌嗪酮，5(S)-正丁基-(2-甲基苯基)-4-[1-(4-氰基芐基)-5-咪唑基甲基]-2-哌嗪酮，1-(3-氯苯基)-4-[1-(4-氰基芐基)-2-甲基-5-咪唑基甲基]-2-哌嗪酮，1-(2，2-聯(lián)苯基乙基)-3-[N-(1-(4-氰基芐基)-1H-咪唑-5-基乙基)氨基甲?；鵠哌啶，4-{5-[4-羥甲基-4-(4-氯吡啶-2-基甲基)-哌啶-1-基甲基]-2-甲基咪唑-1-基甲基}苯甲腈，4-{5-[4-羥甲基-4-(3-氯芐基)-哌啶-1-基甲基]-2-甲基咪唑-1-基甲基}苯甲腈，4-{3-[4-(2-氧代-2H-吡啶-1-基)芐基]-3H-咪唑-4-基甲基}苯甲腈，4-{3-[4-(5-氯-2-氧代-2H-[1，2’]聯(lián)吡啶-5’-基)-3H-咪唑-4-基甲基}苯甲腈，4-{3-[4-2-氧代-2H-[1，2’]聯(lián)吡啶-5’-基)-3H-咪唑-4-基甲基}苯甲腈，4-[3-(2-氧代-1-二氫吡啶-4-基甲基)-3H-咪唑-4-基甲基]苯甲腈，18，19-二氫-19-氧代-5H，17H-6，10，12，16-二甲雄烯(dimetheno)-1H-咪唑[4，3-c][1，11，4]二氧雜氮雜環(huán)-nonadecine-9-甲腈，(±)-19，20-二氫-19-氧代-5H-18，21-乙烷并(ethano)-12，14-乙烯并(etheno)-6，10-甲烯-22H-苯并[d]咪唑并[4，3-k][1，6，9，12]氧雜三氮雜-環(huán)octadecine-9-甲腈，19，20-二氫-19-氧代-5H，17H-18，21-乙烷并(ethano)-6，1012，16-二甲烯-22H-咪唑并[3，4-h][1，8，11，14]氧雜三氮雜-環(huán)eicosine-9-甲腈，和(±)-19，20-二氫-3-甲基-19-氧代-5H-18，21-乙烷并(ethano)-12，14-乙烯并(etheno)-6，10-甲烯-22H-苯并[d]咪唑并[4，3-k][1，6，9，12]氧雜-三氮雜環(huán)octadecine-9-甲腈。
異戊烯基蛋白轉(zhuǎn)移酶抑制劑的其他實例可以參見下列文獻和專利WO 96/30343，WO 97/18813，WO 97/21701，WO 97/23478，WO97/38665，WO 98/28980，WO 98/29119，WO 95/32987，美國專利號5,420,245，美國專利號5,523,430，美國專利號5,532,359，美國專利號5,510,510，美國專利號5,589,485，美國專利號5,602,098，歐洲專利公報0 618 221，歐洲專利公報0 675 112，歐洲專利公報0 604181，歐洲專利公報0696593，WO 94/19357，WO 95/08542，WO 95/11917，WO95/12612；WO95/12572，WO 95/10514，美國專利號5,661,152，WO95/10515，WO 95/10516，WO 95/24612，WO 95/34535，WO95/25086，WO96/05529，WO 96/06138，WO 96/06193，WO 96/16443，WO 96/21701，WO96/21456，WO 96/22278，WO 96/24611，WO 96/24612，WO96/05168，WO 96/05169，WO 96/00736，美國專利號5,571,792，WO 96/17861，WO96/33159，WO96/34850，WO 96/34851，WO 96/30017，WO 96/30018，WO 96/30362，WO96/30363，WO 96/31111，WO 96/31477，WO96/31478，WO 96/31501，WO 97/00252，WO 97/03047，WO 97/03050，WO97/04785，WO 97/02920，WO 97/17070，WO 97/23478，WO 97/26246，WO 97/30053，WO 97/44350，WO 98/02436，和美國專利號5,532,359。異戊烯基蛋白轉(zhuǎn)移酶抑制劑作用于血管生成的實例參見European J.ofCancer，Vol.35，No.9，pp.1394-1401(1999)。
″血管生成抑制劑″是指無論機理如何的能夠抑制新血管形成的化合物。血管生成抑制劑的化合物包括，但不限于，酪氨酸激酶抑制劑，例如酪氨酸激酶受體Flt-1(VEGFR1)和Flk-1/KDR(VEGFR20)的抑制劑，表皮衍化的、成纖維細胞衍化的或血小板衍化的生長因子的抑制劑，MMP(基質(zhì)金屬蛋白酶)抑制劑，整聯(lián)蛋白阻斷劑，干擾素-α，白介素-12，戊聚糖多硫酸酯，環(huán)加氧酶抑制劑，包括非甾類抗炎藥物(NSAIDs)如阿司匹林和布洛芬以及選擇性環(huán)加氧酶-2抑制劑如塞來昔布和洛芬昔布(PNAS，Vol.89，p.7384(1992)；JNCI，Vol.69，p.475(1982)；Arch.Opthalmol.，Vol.108，p.573(1990)；Anat.Rec.，Vol.238，p.68(1994)；FEBS Letters，Vol.372，p.83(1995)；Clin，Orthop.Vol.313，p.76(1995)；J.Mol.Endocrinol.，Vol.16，p.107(1996)；Jpn.J.Pharmacol.，Vol.75，p.105(1997)；癌癥Res.，Vol.57，p.1625(1997)；Cell，Vol.93，p.705(1998)；Intl.J.Mol.Med.，Vol.2，p.715(1998)；J.Biol.Chem.，Vol.274，p.9116(1999))，甾族抗炎藥(例如皮質(zhì)類固醇，鹽皮質(zhì)類固醇，地塞米松，強的松，強的松龍，甲強龍，倍他米松)，羧酰氨基三唑，combretastatin A-4，squalamine，6-O-氯乙?；?羰基)-煙曲霉醇，沙利度胺，制管張素，肌鈣蛋白-1，血管緊張素II拮抗劑(參見Fernandez等，J.Lab.Clin.Med.105141-145(1985))，和VEGF的抗體(參見，Nature Biotechnology，Vol.17，pp.963-968(October 1999)；Kim等，Nature，362，841-844(1993)；WO 00/44777；和WO 00/61186)。
其他調(diào)節(jié)或抑制血管生成并且也可以與本發(fā)明的化合物聯(lián)合的治療劑包括調(diào)節(jié)或抑制凝集和纖維蛋白溶解系統(tǒng)的藥物(參見Clin.Chem.La.Med.38679-692(2000)的綜述)。此類調(diào)節(jié)或抑制凝集和纖維蛋白溶解途徑的藥物的實例包括，但不限于，肝素(參見Thromb.Haemost.8010-23(1998))，低分子量肝素和羧肽酶U抑制劑(也稱作活性凝血酶可活化纖維蛋白溶解[TAFIa]抑制劑的抑制劑)(參見Thrombosis Res.101329-354(2001))。TAFIa抑制劑已經(jīng)公開在PCT公報WO 03/013,526和美國專利系列號60/349,925(2002年2月18日提交)中。
″干擾細胞周期關卡的藥物″是指抑制轉(zhuǎn)導細胞周期關卡信號的蛋白激酶致使癌細胞對DNA破壞劑敏感的化合物。此類藥物包括ATR、ATM的抑制劑，Chk1和Chk2激酶和cdk和cdc激酶的抑制劑并且特別例如使7-羥基staurosporin，flavopiridol，CYC202(Cyclacel)和BMS-387032。
″細胞增殖和存活信號途徑的抑制劑″是指抑制細胞表面受體和那些表面受體的信號轉(zhuǎn)導級聯(lián)下游的藥物。此外藥物包括EGFR的抑制劑的抑制劑(例如gefitinib和erlotinib)，ERB-2的抑制劑(例如司徒曼布)，IGFR的抑制劑，細胞因子受體的抑制劑，MET的抑制劑，PI3K的抑制劑(例如LY294002)，絲氨酸/蘇氨酸激酶(包括但不限于Akt的抑制劑，例如WO 02/083064，WO 02/083139，WO 02/083140和WO02/083138中所述的)，Raf激酶的抑制劑(例如BAY-43-9006)，MEK的抑制劑(例如CI-1040和PD-098059)和mTOR的抑制劑(例如Wyeth CCI-779)。此類藥物包括小分子抑制劑化合物和抗體拮抗劑。
″細胞凋亡誘導劑″包括TNF受體家族成員(包括TRAIL受體)的激活劑。
與NSAID類的組合涉及成為有效COX-2抑制劑的NSAID的應用。出于本文的目的，如果一種NSAID在細胞或微粒體試驗中抑制COX-2的IC50小于或等于1μM時，該NSAID被認為是有效的。
本發(fā)明還包括與是選擇性COX-2抑制劑的NSAID的組合。出于本說明書的目的，作為COX-2的選擇性抑制劑的NSAID被定義為具有對COX-2的抑制作用高于對COX-1至少100倍的特異性化合物，這是通過下文所述的細胞或微粒體試驗中所評估的對COX-2的IC50與對COX-2的IC50的比率測定的。此類化合物包括，但不限于下列公開的那些美國專利5,474,995，授權于1995年12月12日；美國專利5,861,419，授權于1999年1月19日；美國專利6,001,843，授權于1999年12月14日；美國專利6,020,343，授權于2000年2月1日；美國專利5,409,944，授權于1995年4月25日；美國專利5,436,265，授權于1995年7月25日；美國專利5,536,752，授權于1996年7月16；美國專利5,550,142，授權于1996年8月27日；美國專利5,604,260，授權于1997年2月18日；美國專利5,698,584，授權于1997年12月16日；美國專利5,710,140，授權于1998年1月20日；WO94/15932，公開于1994年7月21；美國專利5,344,991，授權于1994年6月6日；美國專利5,134,142，授權于1992年6月28日；美國專利5,380,738，授權于1995年1月10日；美國專利5,393,790，授權于1995年2月20；美國專利5,466,823，授權于1995年11月14日；美國專利5,633,272，授權于1997年5月27日，和美國專利5,932,598，授權于1999年8月3日，上述文獻均在此引入作為參考。
特別適用于本發(fā)明的治療方法中的COX-2的抑制劑是3-苯基-4-(4-(甲基磺酰基)苯基)-2-(5H)-呋喃酮；和 5-氯-3-(4-甲基磺酰基)苯基-2-(2-甲基-5-吡啶基)吡啶； 或其藥學可接受鹽。
制備上述COX-2抑制劑化合物的通用和具體合成方法參見美國專利5,474,995(授權于1995年12月12日)，美國專利5,861,419(授權于1999年1月19日)和美國專利6,001,843(授權于1999年12月14日)，上述文獻均引入作為參考。
已經(jīng)被認為是COX-2的特異性抑制劑并因此適用于本發(fā)明的化合物包括，但不限于，下列 或其藥學可接受鹽。
已經(jīng)被認為是COX-2的特異性抑制劑并因此適用于本發(fā)明的化合物，及其合成方法，可以參見下列專利、待決申請和文獻中，其在此引入作為參考WO 94/15932，公開于1994年6月21日；美國專利5,344,991，授權于1994年7月6日；美國專利5,134,142，授權于1992年6月28日；美國專利5,380,738，授權于1995年1月10日；美國專利5,393,790，授權于1995年2月20日；美國專利5,466,823，授權于1995年11月14日；美國專利5,633,272，授權于1997年5月27日；和美國專利5,932,598，授權于1999年8月3日。
被認為是COX-2的特異性抑制劑并因此適用于本發(fā)明的化合物，及其合成方法，可以參見下列專利、待決申請和文獻中，其在此引入作為參考美國專利5,474,995，授權于1995年12月12日；美國專利5,861,419，授權于1999年1月19日；美國專利6,001,843，授權于1999年12月14日；美國專利6,020,343，授權于2000年2月1日；美國專利5,409,944，授權于1995年4月25日；美國專利5,436,265，授權于1995年6月25日；美國專利5,536,752，授權于1996年6月16日；美國專利5,550,142，授權于1996年8月27日；美國專利5,604,260，授權于1997年2月18日；美國專利5,698,584，授權于1997年12月16日；和美國專利5,710,140，授權于1998年1月20日。
血管生成抑制劑的其他實例包括，但不限于，endostation，ukrain，ranpirnase，IM862，5-甲氧基-4-[2-甲基-3-(3-甲基-2-丁烯基)環(huán)氧乙烷基]-1-氧雜螺[2，5]辛-6-基(氯乙酰基)氨基甲酸酯，乙酰基dinanaline，5-氨基-1-[[3，5-二氯-4-(4-氯苯甲?；?苯基]甲基]-1H-1，2，3-三唑-4-甲酰胺，CM101，squalamine，combretastatin，RPI4610，NX31838，硫酸化甘露戊糖磷酸鹽，7，7-(羰基-二[亞氨基-N-甲基-4，2-吡咯并羰基-亞氨基[N-甲基-4，2-吡咯]-羰基亞氨基]-二-(1，3-萘二磺酸酯)，和3-[(2，4-二甲基吡咯基-5-基)亞甲基]-2-二氫吲哚酮(SU5416)。
如上所述，″整聯(lián)蛋白阻斷劑″是指選擇性拮抗、抑制或阻礙生理配體與αvβ3整聯(lián)蛋白結(jié)合的化合物，是指選擇性拮抗、抑制或阻礙生理配體與αvβ5整聯(lián)蛋白結(jié)合的化合物，是指選擇性拮抗、抑制或阻礙生理配體與αvβ3整聯(lián)蛋白和αvβ5整聯(lián)蛋白兩者結(jié)合的化合物，并且是指拮抗、抑制或阻礙表達在毛細管內(nèi)皮細胞上的特定整聯(lián)蛋白的活性的化合物。該術語還是指αvβ6，αvβ8，α1β1，α2β1，α5β1，α6β1和α6β4整聯(lián)蛋白。術語還是指αvβ3，αvβ5，αvβ6，αvβ8，α1β1，α2β1，α5β1，α6β1和α6β4整聯(lián)蛋白的任意組合。
酪氨酸激酶抑制劑的一些具體實例包括N-(三氟甲基苯基)-5-甲基異惡唑-4-甲酰胺，3-[(2，4-二甲基吡咯基-5-劑)亞甲基)吲哚啉-2-酮，17-(烯丙基氨基)-17-脫甲氧基格爾德霉素，4-(3-氯-4-氟苯基氨基)-7-甲氧基-6-[3-(4-嗎啉基)丙氧基]喹唑啉，N-(3-乙炔基苯基)-6，7-二(2-甲氧基乙氧基)-4-喹唑啉胺，BIBX1382，2，3，9，10，11，12-六氫-10-(羥基甲基)-10-羥基-9-甲基-9，12-環(huán)氧-1H-二吲哚并[1，2，3-fg3′，2′，1′-kl]吡咯并[3，4-i][1，6]苯并二氮雜環(huán)辛間四烯-1-酮，SH268，染料木素，STI571，CEP2563，4-(3-氯苯基氨基)-5，6-二甲基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶甲磺酸酯，4-(3-溴-4-羥基苯基)氨基-6，7-二甲氧基喹唑啉e，4-(4′-羥基苯基)氨基-6，7-二甲氧基喹唑啉，SU6668，STI571A，N-4-氯苯基-4-(4-吡啶基甲基)-1-酞嗪胺，和EMD121974。
與除抗癌化合物之外的化合物的聯(lián)合藥物形式也屬于本發(fā)明的方法內(nèi)。例如，本發(fā)明所述的化合物與PPAR-γ(即PPAR-gamma)激動劑和PPAR-δ(即PPAR-delta)激動劑的組合適用于治療某些惡性疾病。PPAR-γ和PPAR-δ是核過氧物酶體增殖子(proliferator)活化受體γ和δ。PPAR-γ在內(nèi)皮細胞上的表達及其在血管生成中的參與作用已有文獻報導(參見J.Cardiovasc.Phannacol.1998；31909-913；J.Biol.Chem.1999；2749116-9121；Invest.Ophthalnzol Vis.Sci.2000；412309-2317)。最近，PPAR-γ激動劑已經(jīng)被證實在體外抑制對VEGF的血管生成反應；曲格列酮(rosiglitazone)和羅格列酮(rosiglitazone)馬來酸鹽抑制小鼠中視黃醛新血管形成的惡化(Arch.Ophthamol.2001；119709-717)。PPAR-γ激動劑和PPAR-γ/α激動劑的實例包括，但不限于，噻唑烷二酮類(例如DRF2725，CS-011，曲格列酮，羅格列酮，和吡格列酮)，非諾貝特，吉非貝齊，氯貝特，GW2570，SB219994，AR-H039242，JTT-501，MCC-555，GW2331，GW409544，NN2344，KRP297，NP0110，DRF4158，NN622，GI262570，PNU182716，DRF552926，2-[(5，7-二丙基-3-三氟甲基-1，2-苯并異惡唑-6-基)氧基]-2-甲基丙酸(公開在USSN09/782,856)，和2(R)-7-(3-(2-氯-4-(4-福苯氧基)苯氧基)丙氧基)-2-乙基色滿-2-羧酸(公開在USSN 60/235,708和60/244,697中)。
本發(fā)明的另一實施方式是此處所公開的化合物與基因療法聯(lián)合在治療癌癥中的應用。有關治療癌癥的基因策略的綜述參見Hall等(Am JHum Genet 61785-789，1997)和Kufe等(Cancer Medicine，5th Ed，pp876-889，BC Decker，Hamilton 2000)。基因療法可以用于施加任何腫瘤抑制基因。此類基因的實例包括，但不限于，p53，它可以經(jīng)重組病毒介導的基因傳遞來輸送(參見例如美國專利號6,069,134)，uPA/uPAR拮抗劑(″Adenovirus-Mediated Delivery of a uPA/uPAR AntagonistSuppresses Angiogenesis-Dependent Tumor Growth和Dissemination inMice，″Gene Therapy，August 1998；5(8)1105-13)，和干擾素γ(J Immunol2000；164217-222)。
本發(fā)明的化合物還可以與固有多藥耐藥性(MDR)，特別是與轉(zhuǎn)運蛋白的高水平表達有關的NOR的抑制劑聯(lián)合使用。此類MDR抑制劑包括p-糖蛋白(P-gp)，例如LY335979，XR9576，OC144-093，R101922，VX853和PSC833(valspodar)。
本發(fā)明的化合物可以與止吐劑聯(lián)合使用來治療惡心或嘔吐，包括急性，延遲型，晚期和早發(fā)性嘔吐，這些嘔吐可能是由本發(fā)明化合物單用或與放療合用所導致的。為了預防或治療嘔吐，本發(fā)明的化合物可以于其他止吐劑合用，尤其是神經(jīng)激肽-1受體拮抗劑，5HT3受體拮抗劑，例如奧丹西隆，格雷西隆，托吡西隆，和zatisetron，GABAB受體激動劑，例如巴氯芬，皮質(zhì)類固醇例如甲氟烯索(地塞米松)，曲安奈德，去炎舒松，氟尼縮松，布地奈德，Benecorten或其他藥物，例如公開在美國專利號2,789,118、2,990,401、3,048,581、3,126,375、3,929,768、3,996,359、3,928,326和3,749,712中的，抗多巴胺能藥物，例如吩噻嗪類(例如普魯氯嗪，氟非那嗪，硫利噠嗪和美索噠嗪)，甲氧氯普胺或屈大麻酚。為了治療或預防施用本發(fā)明化合物可能導致的嘔吐，優(yōu)選采用與選自神經(jīng)激肽-1受體拮抗劑、5HT3受體拮抗劑和皮質(zhì)類固醇的止吐劑的聯(lián)合療法。
和本發(fā)明化合物聯(lián)合施用的神經(jīng)激肽-1受體拮抗劑全面公開在，例如美國專利號5,162,339、5,232,929、5,242,930、5,373,003、5,387,595、5,459,270、5,494,926、5,496,833、5,637,699、5,719,147；歐洲專利公報號EP 0 360 390、0 394 989、0428 434、0 429 366、0 430 771、0 436 334、0 443 132、0 482 539、0 498 069、0 499 313、0 512 901、0 512 902、0 514273、0 514 274、0 514 275、0 514 276、0 515 681、0 517 589、0 520 555、0 522 808、0 528 495、0 532 456、0 533 280、0 536 817、0 545 478、0 558156、0 577 394、0 585 913、0 590 152，0 599 538、0 610 793、0 634 402、0 686 629、0 693 489、0 694 535、0 699 655、0 699 674、0 707 006、0 708101、0 709 375、0 709 376、0 714891、0 723 959、0 733 632和0 776 893；PCT國際專利公報號WO 90/05525、90/05729、91/09844、91/18899、92/01688、92/06079、92/12151、92/15585、92/17449、92/20661、92/20676、92/21677、92/22569、93/00330、93/00331、93/01159、93/01165、93/01169、93/01170、93/06099，93/09116、93/10073、93/14084、93/14113、93/18023、93/19064、93/21155、93/21181、93/23380、93/24465、94/00440、94/01402、94/02461、94/02595、94/03429、94/03445、94/04494、94/04496、94/05625、94/07843、94/08997、94/10165、94/10167、94/10168、94/10170，94/11368、94/13639、94/13663、94/14767、94/15903、94/19320、94/19323、94/20500、94/26735、94/26740、94/29309、95/02595、95/04040、95/04042，95/06645、95/07886、95/07908、95/08549、95/11880、95/14017、95/15311、95/16679、95/17382、95/18124、95/18129、95/19344、95/20575、95/21819、95/22525、95/23798、95/26338、95/28418、95/30674、95/30687、95/33744、96/05181、96/05193、96/05203、96/06094、96/07649、96/10562、96/16939、96/18643、96/20197、96/21661、96/29304、96/29317、96/29326、96/29328、96/31214、96/32385、96/37489、97/01553、97/01554、97/03066、97/08144、97/14671、97/17362、97/18206、97/19084、97/19942和97/21702；英國專利公報號2266529、2268931、2269170、2269590、2271774、2292144、2293168、2293169和2302689。這些化合物的制備全面公開在上述專利和公告中，其內(nèi)容在此引入作為參考。
在一實施方式中，與本發(fā)明化合物聯(lián)合使用的神經(jīng)激肽-1受體拮抗劑選自2-(R)-(1-(R)-(3，5-二(三氟甲基)苯基)乙氧基)-3-(S)-(4-氟苯基)-4-(3-(5-氧代-1H，4H-1，2，4-三唑并)甲基)嗎啉，或其藥學可接受鹽，其公開在美國專利號5,719,147中。
本發(fā)明的化合物還可以與治療貧血的藥物聯(lián)合給藥。此類貧血治療藥例如是連續(xù)eythropoiesis受體激活劑(例如紅細胞生成素α)。
本發(fā)明的化合物還可以與治療嗜中性粒細胞減少癥的藥物聯(lián)合給藥。此類嗜中性粒細胞治療劑例如是調(diào)節(jié)嗜中性粒細胞的生成和功能的造血生長因子，例如人粒細胞集落刺激因子(G-CSF)。G-CSF的實例包括非格司亭。
本發(fā)明的化合物還可以與免疫增強藥聯(lián)合給藥，例如左旋咪唑，異丙肌苷和胸腺肽。
所以，本發(fā)明的范圍內(nèi)包括本發(fā)明所述化合物與選自下列的第二化合物的聯(lián)合應用1)雌激素受體調(diào)節(jié)劑，2)雄激素受體調(diào)節(jié)劑，3)視黃酸受體調(diào)節(jié)劑，4)細胞毒性/細胞抑制劑，5)抗增殖劑，6)異戊烯基蛋白轉(zhuǎn)移酶抑制劑，7)HMG-CoA還原酶抑制劑，8)HIV蛋白酶抑制劑，9)反轉(zhuǎn)錄酶抑制劑，10)血管生成抑制劑，11)PPAR-γ激動劑，12)PPAR-δ激動劑，13)固有多藥耐藥性的抑制劑，14)止吐劑，15)貧血治療劑，16)嗜中性粒細胞減少癥治療劑，17)免疫增強藥，18)細胞增殖和存活信號的抑制劑，19)細胞周期關卡干擾劑，和20)細胞凋亡誘導劑。
在本發(fā)明化合物的引用中術語″給藥″和其變化形式(例如″施用″化合物)是指將所述化合物或該化合物的前藥引入到需要治療的動物體系中。當本發(fā)明的化合物或其前藥與一種或多種其他活性劑(例如，細胞毒性劑等)聯(lián)合提供時，″給藥″及其變化形式各自理解為包括將所述化合物或其前藥和其他藥物并行和順序引入。
在此使用的術語″組合物″包括含有特定量的特定組分的產(chǎn)品，以及任何直接或間接由特定量的特定組分的組合獲得的產(chǎn)品。
在此使用的術語″治療有效量″是指由研究人員、獸醫(yī)、臨床醫(yī)生和其他臨床工作者尋找到的活性化合物或藥劑在組織、系統(tǒng)、動物或人體中產(chǎn)生生物或醫(yī)學反應的量。
術語″治療癌癥″或″癌癥的治療″是指向患有癌性病癥的哺乳動物給藥并且通過殺死癌細胞來減輕癌性病癥，而且產(chǎn)生抑制癌癥生長和/或遷移的結(jié)果。
在一實施方式中，用作第二化合物的血管生成抑制劑選自酪氨酸激酶抑制劑，表皮衍生生長因子的抑制劑，成纖維細胞衍生生長因子的抑制劑，血小板鹽水生長因子的抑制劑，MMP(基質(zhì)金屬蛋白酶)抑制劑，整聯(lián)蛋白阻斷劑，干擾素-α，白介素-12，戊聚糖多硫酸酯，環(huán)加氧酶抑制劑，羧酰胺基三唑，combretastatin A-4，squalamine，6-O-氯乙?；?羰基)-煙曲霉醇，沙利度胺，制管張素，肌鈣蛋白-1，或VEGF的抗體。在一實施方式中，該雌激素受體調(diào)制劑為他莫昔芬或雷洛昔芬。
權利要求書的范圍內(nèi)還包括一種治療癌癥的方法，該方法包括將治療有效量的式I的化合物與放療和/或與選自下列的化合物聯(lián)合施用1)雌激素受體調(diào)節(jié)劑，2)雄激素受體調(diào)節(jié)劑，3)視黃酸受體調(diào)節(jié)劑，4)細胞毒性/細胞抑制劑，5)抗增殖劑，6)異戊烯基蛋白轉(zhuǎn)移酶抑制劑，7)HMG-CoA還原酶抑制劑，8)HIV蛋白酶抑制劑，9)反轉(zhuǎn)錄酶抑制劑，10)血管生成抑制劑，11)PPAR-γ激動劑，12)PPAR-δ激動劑，13)固有多藥耐藥性的抑制劑，14)止吐劑，15)貧血治療劑，16)嗜中性粒細胞減少癥治療劑，17)免疫增強藥，18)細胞增殖和存活信號的抑制劑，19)細胞周期關卡干擾劑和20)細胞凋亡誘導劑。
本發(fā)明的另一實施方式涉及一種治療癌癥的方法，該方法包括將治療有效量的式I的化合物與紫杉醇或司徒曼布聯(lián)合給藥。
本發(fā)明進一步包括一種治療或預防癌癥的方法，該方法包括將治療有效量的式I的化合物與COX-2抑制劑聯(lián)合給藥。
本發(fā)明還包括一種用于治療或預防癌癥的藥物組合物，其中含有治療有效量的式I的化合物和選自下列的化合物1)雌激素受體調(diào)節(jié)劑，2)雄激素受體調(diào)節(jié)劑，3)視黃酸受體調(diào)節(jié)劑，4)細胞毒性/細胞抑制劑，5)抗增殖劑，6)異戊烯基蛋白轉(zhuǎn)移酶抑制劑，7)HMG-CoA還原酶抑制劑，8)HTV蛋白酶抑制劑，9)反轉(zhuǎn)錄酶抑制劑，10)血管生成抑制劑，11)PPAR-γ激動劑，12)PPAR-δ激動劑；13)細胞增殖和存活信號的抑制劑，14)細胞周期關卡干擾劑，和15)細胞凋亡誘導劑。
本發(fā)明進一步涉及本發(fā)明的化合物在篩選其他結(jié)合KSP的化合物的方法中的應用。為了將本發(fā)明的化合物用于篩選結(jié)合KSP驅(qū)動蛋白的化合物的方法中，令KSP與支持體連接，并且在試驗中加入本發(fā)明的化合物(它是有絲分裂試劑)?；蛘?，將本發(fā)明的化合物與支持體連接并加入KSP?？梢詮钠渲袑ふ业匠蔀樾陆Y(jié)合劑的化合物類型包括特異性抗體，在化學文庫篩選中鑒定的非天然結(jié)合劑，肽類似物等。特別感興趣的是用于篩選對人體細胞具有低毒性的候選試劑的篩選試驗。多種試驗可以用于此目的，包括標記的體內(nèi)蛋白-蛋白結(jié)合分析，電泳遷移率變動分析，蛋白結(jié)合的免疫分析，功能分析(磷酸化試驗等)等對有絲分裂劑和KSP的結(jié)合作用的測定可以采取多種方式。在一優(yōu)選實施方式中，將有絲分裂劑(本發(fā)明的化合物)標記，例如，用熒光素或放射性基團并直接測定結(jié)合作用。譬如，這可通過將全部或一部分KSP與固體支持體相連，加入標記的有絲分裂劑(例如本發(fā)明的化合物，其中至少一個原子已被可檢測的同位素置換)，洗滌除去過量的試劑，并且測定固體支持體上存在的標記物的量從而實現(xiàn)。如本領域所知，已知可以采用不同的封阻和洗滌步驟。
所謂″標記的″是指化合物直接或者間接被標記物標記，由此產(chǎn)生可檢測的信號，例如，放射性同位素，熒光素標記，酶，抗體，微粒例如磁性微粒，化學發(fā)光標記或特異結(jié)合分子等。特異結(jié)合性分子對，例如生物素和鏈親和素，地高辛和抗地高辛等。就特異性結(jié)合成員而言，補體成員一般用能夠被供檢測的分子、按照已知方法標記，如上所列。標記物可以直接或間接產(chǎn)生可檢測信號。
在某些實施方式中，只標記一種組分。例如，在酪氨酸位置上的驅(qū)動蛋白可以用125I或用熒光團標記。另外，可以用不同的標記物標記一種以上的組分；例如，用125I標記蛋白，并且用熒光團標記有絲分裂劑。
本發(fā)明的化合物還可以用作篩選其他藥物候選物的競爭劑?！搴蜻x生物活性劑″或″藥物候選物″或等同文字是指任何被測定生物活性的分子，例如蛋白質(zhì)，低聚肽，有機小分子，多糖，聚核苷酸等。它們可能直接或間接改變細胞增殖表型或細胞增殖序列的表達，包括核酸序列和蛋白質(zhì)序列兩者。在其他情況中，篩選細胞增殖蛋白質(zhì)結(jié)合作用和/或活性的變化。此類的篩選可以在微管存在或不存在下進行。在篩選蛋白質(zhì)的結(jié)合作用或活性的情況中，優(yōu)選的實施方式不包括結(jié)合特定蛋白質(zhì)的已知分子，例如聚合結(jié)構(gòu)如微管，和能源如ATP。本文分析的優(yōu)選實施方式包括其內(nèi)源性天然狀態(tài)不與細胞增殖蛋白質(zhì)結(jié)合的候選劑，此處稱作″外源性″試劑。在另一優(yōu)選實施方式中，外源性試劑也不包括KSP的抗體。
盡管通常它們是有機分子，但候選劑可以包括多種化學類型，優(yōu)選是具有大于100并小于約2,500道爾頓分子量的小有機化合物。候選劑含有與蛋白質(zhì)在結(jié)構(gòu)上相互作用、特別是氫鍵和親脂性結(jié)合所必需的官能團，通常包括至少一個胺、羰基、羥基、醚或羧基，優(yōu)選至少含有兩個化學官能團。候選劑經(jīng)常含有被一個或多個上述官能團取代的環(huán)碳或雜環(huán)結(jié)構(gòu)和/或芳族或聚芳族結(jié)構(gòu)。候選劑也可以在生物分子中發(fā)現(xiàn)，該生物分子包括肽，糖類，脂肪酸，甾族化合物，嘌呤，嘧啶，它們的衍生物、結(jié)構(gòu)類似物或其組合。特別優(yōu)選是肽。
候選劑得自多種來源，包括合成或天然化合物的文庫。例如，許多方式可以用于隨機和直接合成多種不同的有機化合物和生物分子，包括隨機低聚核苷酸的表達。另外，細菌、真菌、植物和底物萃取物形式的天然化合物的文庫可以獲得或者很容易生產(chǎn)。另外，天然或合成生成的文庫和化合物很容易通過常規(guī)的化學、物理和生物活性方法改性。已知的藥理學試劑可以直接或隨機進行化學改性，例如?；榛?，酯化，酰胺化生成結(jié)構(gòu)類似物。
競爭性篩選分析可以通過將KSP和第一樣本中的藥物候選物混和來完成。第二樣本含有有絲分裂劑、KSP和藥物候選物?？梢栽谖⒐艽嬖诨虿淮嬖诘臈l件下進行。測定上述兩種樣本的藥物候選物的結(jié)合作用，兩種樣本之間結(jié)合作用的變化或差異意味著存在能夠結(jié)合KSP且可能調(diào)節(jié)其活性的試劑。也就是說，如果在第二樣本中的藥物候選物的結(jié)合作用不同于第一樣本中的，則該藥物候選物能夠結(jié)合KSP。
在一優(yōu)選實施方式中，候選劑的結(jié)合作用是通過競爭性結(jié)合分析來測定的。在該實施方式中，競爭劑是已知的KSP結(jié)合部分，例如抗體，肽，結(jié)合配偶體，配體等。在某些情況下，該候選劑和該結(jié)合部分之間可能存在競爭性結(jié)合作用，并且該結(jié)合部分替換該候選劑。
在一實施方式中，標記該候選劑。將候選劑或競爭劑，或這兩者首先加入到KSP中達到足以允許結(jié)合反應的時間，如果存在結(jié)合的話?？梢栽谌魏螠囟认屡囵B(yǎng)，從而促使活性最佳，通常為約4℃-約40℃。
選擇培養(yǎng)周期以達到最佳活性，但也可以優(yōu)化達到促進快速的高通量篩選。通常0.1-1小時應該足夠。過量的試劑一般被除去或洗掉。隨后加入第二組分，隨后是存在或不存在的標記組分，以證實結(jié)合作用。
在一優(yōu)選實施方式中，首先加入競爭劑，隨后加入候選劑。競爭性的替換反應表明該候選劑與KSP結(jié)合，并由此能夠結(jié)合并可能調(diào)節(jié)KSP的活性。在該實施方式中，可將兩種組分標記。例如，如果標記競爭劑，標記物在洗滌溶液中的存在象征著試劑發(fā)生了替換反應。另外，如果標記候選劑，標記物在支持體上的存在象征著發(fā)生了替換反應。
在另一實施方式中，首先加入候選劑，并且培養(yǎng)和洗滌，隨后加入競爭劑。競爭劑結(jié)合作用的不存在可以表示該候選劑以更高的親和力結(jié)合KSP。由此，如果標記候選劑，標記物在支持體上的存在，同時競爭劑結(jié)合作用的不存在，可以象征著該候選劑能夠結(jié)合KSP。
鑒定KSP的結(jié)合位點可能具有價值。這可以以多種方式進行。在一實施方式中，一旦鑒定KSP可結(jié)合有絲分裂劑，則將該KSP片段化或改性，并且重復試驗以鑒定結(jié)合所必需的組成。
通過篩選能夠調(diào)節(jié)KSP活性的候選劑可以測試出調(diào)節(jié)作用，包括將候選劑與KSP混和，如上所述，并且測定KSP的生物活性的變化。由此，在該實施方式中，候選劑應在結(jié)合KSP(雖然這可能不必要)的同時，還改變?nèi)绫疚亩x的生物或生物化學活性。該方法包括對改變細胞周期分布、細胞生存力的細胞或?qū)τ薪z分裂紡錘體的存在、形態(tài)、活性、分布或含量的體外篩選方法和體內(nèi)篩選方法，一般如下文所述。
另外，不同的篩選法可以用于鑒定結(jié)合天然KSP而可以不結(jié)合改性KSP的藥物候選物。
分析中可以采用陽性對照和陰性對照。優(yōu)選所有對照和試驗樣本一式三份進行以得到統(tǒng)計學意義的結(jié)果。所有樣本的培養(yǎng)達到足以與蛋白質(zhì)結(jié)合的時間。培養(yǎng)后，洗滌所有樣本除去非特異結(jié)合的物質(zhì)，并且測定結(jié)合的、一般是標記了的試劑的量。例如，當采用放射性標記時，樣本可以在閃爍計數(shù)器中計數(shù)以測定結(jié)合了的化合物的量。
篩選分析中可以采用多種其他試劑。其中包括例如鹽，中性蛋白(例如白蛋白)，洗滌劑等，它們可以用來促進最佳的蛋白-蛋白結(jié)合作用和/或減少非特異或背景相互作用?？梢允褂闷渌商岣咴囼炐实脑噭绲鞍酌敢种苿?，核酶抑制劑，抗微生物劑等?？梢砸匀魏文軌蛱峁┍匾Y(jié)合作用的順序加入組分的混和物。
本發(fā)明的這些和其他方面將從本文的教導中更加清楚。
分析實施例中描述的本發(fā)明化合物通過下述試驗測試并且發(fā)現(xiàn)具有驅(qū)動蛋白抑制活性。其他試驗從文獻中獲知并很容易為本領域技術人員實施。
1.驅(qū)動蛋白ATPase體外試驗人聚組氨酸標記的KSP運動結(jié)構(gòu)域(KSP(367H))的克隆和表達表達人體KSP運動結(jié)構(gòu)域構(gòu)造的質(zhì)粒通過PCR用pBluescript全長人KSP構(gòu)造(Blangy等，Cell，vol.83，ppl 159-1169，1995)作為模板進行克隆。用N-末端引物5′-GCAACGATTAATATGGCGTCGCAGCCAAATTCGTCTGCGAAG(SEQ.ID.NO.1)和C-末端引物5′-GCAACGCTCGAGTCAGTGATGATGGTGGTGATGCTGATTCACTTCAGGCTTATTCAATAT(SEQ.ID.NO.2)來擴增該運動結(jié)構(gòu)域和頸連接區(qū)。PCR產(chǎn)物用AseI和XhoI消化，連接到pRSETa(Invitrogen)的NdeI/XhoI消化產(chǎn)物且轉(zhuǎn)化到E.coli BL21(DE3)中。
細胞在37℃下生長至OD600為0.5。將培養(yǎng)物冷卻至室溫后，KSP的表達用100μM IPTG誘導且持續(xù)培養(yǎng)過夜。細胞通過離心沉淀且用冰冷的PBS洗滌1次。將沉淀速凍且儲存在-80℃。
蛋白純化在冰上融合細胞沉淀團冰再次懸浮在溶胞緩沖液(50mM K-HEPES，pH8.0，250mM KCl，0.1％吐溫，10mM咪唑，0.5mM Mg-ATP，1mM PMSF，2mM benzimidine，1x完全蛋白酶抑制劑雞尾酒(Roche))中。細胞混懸液與1mg/ml溶菌酶和5mM巰基乙醇在冰上培養(yǎng)10分鐘，隨后超聲(3×30秒)。所有后續(xù)處理在4℃下進行。溶胞產(chǎn)物在40,000xg下離心40分鐘。稀釋上清液且加載在SP瓊脂糖柱(Pharmacia，5ml藥筒)上的緩沖液A(50mMK-HEPES，pH6.8，1mM MgCl2，1mM EGTA，10μM Mg-ATP，1mM DTT)中并用緩沖液A中的0-750mM KCl梯度洗脫。合并含有KSP的餾分且與Ni-NTA樹脂(Qiagen)保溫1小時。樹脂用緩沖液B(溶胞緩沖液減少PMSF和蛋白酶抑制劑雞尾酒)洗滌3次，隨后培養(yǎng)15分鐘3次并用緩沖液B洗滌。最后，將該熟知培養(yǎng)且用緩沖液C(除pH6.0之外與緩沖液B洗脫)洗滌15分鐘共3次并傾入柱內(nèi)。KSP用洗脫緩沖液(除150mM KCl和250mM咪唑之外與緩沖液B相同)洗脫。合并含KSP的餾分，在蔗糖中達到10％，和儲存在-80℃。
從油牛腦分離的微管蛋白制備微管。1mg/ml的純化微管蛋白(＞97％無MAP)在37℃下在10μM紫杉醇、1mM DTT、1mM GTP的存在下于BRB80緩沖液(80mM K-PIPES，1mM EGTA，1mMMgCl2，pH6.8)中聚合。通過超速離心將所得微管與未聚合的微管蛋白分離并除去上清液。將含有微管的沉淀團輕輕再懸浮含在BRB80中的10μM紫杉醇，1mM DTT，50g/ml氨芐西林和5ug/ml氯霉素酯內(nèi)。
將該驅(qū)動蛋白運動結(jié)構(gòu)域與微管、1mM ATP(1∶1 MgCl2∶Na-ATP)和化合物在23℃下于含有80mM K-HEPES(pH7.0)、1mM EGTA、1mMDTT、1mM MgCl2和50mM KCl的緩沖液中培養(yǎng)。用80mM HEPES和50mM EDTA的最終緩沖組合物稀釋2-10倍來終止該反應(或者，向終止緩沖液(1.8M KCl和50mM EDTA)1∶1增加的溶液體積)。利用喹哪啶紅/鉬酸銨試驗、通過加入1.5倍體積的猝滅劑C測定ATP水解反應得到的游離磷酸鹽(例如，40μl反應體積+40μl終止緩沖液的混和物加入120μl猝滅劑C)。猝滅劑A含有0.1mg/ml喹哪啶紅和0.14％聚乙烯醇；猝滅劑B在1.15M硫酸中含有12.3mM鉬酸銨四水合物。猝滅劑C是2∶1比例的猝滅劑A猝滅劑B。該反應在23℃下保溫5-10分鐘，在540nm下測定磷-鉬酸鹽復合物的吸光度。
實施例中的化合物3-1，4-2，5-3，5-4，7-1，7-2，7-3，8-6a/8-6b，9-1，10-2，11-1，12-1，12-2和12-3在上述試驗測定且發(fā)現(xiàn)IC50≤50μM。
II.細胞增殖試驗將細胞鋪板在96孔組織培養(yǎng)皿中，使其密度能夠在24、48和72小時期間呈對數(shù)生長且允許過夜附著。次日，化合物以10個點的半數(shù)log滴定度加入到所有平板內(nèi)。各滴定系列按照一式三份進行，并且在整個試驗過程中維持0.1％的恒定DMSO濃度。也包括0.1％DMSO單用的對照。各化合物稀釋系列是在無血清培養(yǎng)基中進行。試驗中在200μl體積的培養(yǎng)基中血清的終濃度是5％。在24、48和72小時時向滴定平板上的各樣本和對照孔內(nèi)加入20微升的Alamar藍染色劑，隨后加入藥物并再次在37℃培養(yǎng)。在CytoFluorII平板讀取器上用530-560納米波長激發(fā)、590納米發(fā)射在6-12小時后分析Alamar藍色熒光度。
通過繪制X軸向上的化合物濃度和Y軸上的各滴定點時細胞生長的平均百分抑制率來獲得細胞毒性EC50。單獨用載體處理的對照孔內(nèi)的細胞生長被定義為該試驗的100％生長率，而將用化合物處理的細胞的生長與該值對比。采用內(nèi)部專有軟件計算百分細胞毒性值并且用邏輯4參數(shù)曲線擬合計算拐點。細胞毒性百分率被定義為％細胞毒性率(熒光度對照)-(熒光度樣本)×100×(熒光度對照)-1。
拐點報告為細胞毒性EC50。
III.FACS的有絲分裂停止和細胞凋亡的評估FACS分析通過測定被處理的細胞群的DNA含量來評估一種化合物抑制細胞有絲分裂并引起細胞凋亡的性能。將細胞以1.4×106個細胞/6cm2組織培養(yǎng)皿的密度接種并令其粘附過夜。隨后細胞用載體(0.1％DMSO)或滴定系列的化合物處理8-16小時。處理后，通過胰蛋白酶在指定時間內(nèi)作用并離心沉淀收獲細胞。細胞沉淀團在PBS中漂洗并固定在70％乙醇中，儲存在4℃下過夜或更長時間。
對于FACS分析，沉淀至少500,000個固定細胞并通過抽吸除去70％乙醇。隨后該細胞在4℃下與RNase A(50Kunitz單位/ml)和碘化丙錠(50pg/ml)培養(yǎng)30分鐘，并且用Becton Dickinson FACSCaliber分析。用Modfit細胞周期分析模型軟件(Verity Inc.)分析數(shù)據(jù)(得自10,000個細胞)。
是通過繪制X軸上的化合物濃度和Y軸上的各滴定點的細胞周期的G2/M相中的細胞百分率(通過測定碘化丙錠熒光)來獲得有絲分裂停止的EC50。利用SigmaPlot程序分析數(shù)據(jù)，用邏輯4參數(shù)曲線擬合計算拐點。拐點報告為有絲分裂停止的EC50。采用類似方法測定化合物細胞凋亡的EC50。所以，各滴定點處凋亡細胞的百分率(由碘化丙錠熒光測定)繪制在Y軸上，并且按照上述方法進行類似的分析。
IV.檢測單極紡錘體的免疫熒光顯微鏡檢查法用于DNA、微管蛋白和旁中心蛋白(pericentrin)的免疫熒光染色的方法基本上如同Kapoor等(2000)J.Cell Biol.150975-988所述。為了細胞培養(yǎng)的研究，將細胞鋪板在組織培養(yǎng)物處理的玻璃隔室玻片上且令其粘附過夜。隨后細胞與感興趣的化合物一起培養(yǎng)4-16小時。培養(yǎng)完畢后，抽吸培養(yǎng)基和藥物并且從玻片除去隔室和墊圈。隨后按照參考方案使細胞滲透，固定，洗滌和封阻用于非特異性抗體結(jié)合。用二甲苯將石蠟鑲嵌的腫瘤切片脫蠟并且在封阻之前用乙醇系列液在水化。玻片在初級抗體(小鼠單克隆抗-α-微管蛋白抗體，得自Sigma的1∶500稀釋的克隆DM1A；得自Covance的兔多克隆抗pericentrin抗體，1∶2000稀釋)中4℃下培養(yǎng)過夜。洗滌后，室溫下該玻片用稀釋至15μg/ml的偶聯(lián)二級抗體(微管蛋白的FITC偶聯(lián)猴抗小鼠IgG；用于pericentrin的Texas紅偶聯(lián)猴抗兔IgG)培養(yǎng)1小時。隨后洗滌玻片且用Hoechst 33342復染色以顯示DNA。免疫染色樣本用100x油浸漬物鏡在Nikon落射熒光顯微鏡上用Metamorph去卷曲和成像軟件進行成像。
實施例給出的實施例有助于進一步理解本發(fā)明。使用的起始原理、種類和條件僅是舉例說明本發(fā)明而不限定其合理的范圍。
路線1
步驟14-烯丙基-4-苯基-1，3-惡唑烷-2-酮(1-4)向15.8g(416mmol)LAH粉在600mL乙醚中的混懸液內(nèi)加入18.3g(90mmol)存在于75mL乙醚中的α-烯丙基-α-苯基甘氨酸乙酯(1-3)(按照Van Betsbrugge等，Tetrahedron，1997，53，9233-9240)并使加入速率維持在輕度回流。室溫下攪拌過夜后，該反應小心地用27mL水猝滅，隨后加入27mL的15％NaOH并且最后加入82mL的水。加入一定量的NaSO4，將該混合物攪拌1小時。過濾出固體且濃縮該溶液。將殘余物溶于300mL的CH2Cl2，用Na2SO4干燥并濃縮得到氨基醇，其為無色油。將該氨基醇(4.5g，25mmol)溶于50mLCH2Cl2并冷卻至0℃。隨后加入5.4mL(53mmol)三乙胺和4.5g(28mmol)1，1′-羰基二咪唑，該混和物加熱至室溫并攪拌4小時。該反應隨后加入到分液漏斗，用1M HCl、水洗滌2次，用Na2SO4干燥和濃縮得到惡唑烷酮1-4，其為無色油。1-4的數(shù)據(jù)1H NMR(500MHz，CDCl3)δ7.4-7.2(m，5H)，6.6(s，1H)，5.6-5.5(m，1H)，5.2(m，2H)，4.5(d，1H)，4.35(d，1H)，2.8(m，1H)，2.6(m，1H)ppm。
步驟2二酯(1-5)將68g(334.6mmol)的1-4在500mL CH2Cl2中的溶液冷卻至-78℃和將臭氧吹入該溶液直至保持淺藍色。隨后將O2向該溶液內(nèi)吹入15分鐘，此后通入30分鐘N2。此時，加入491mL(6.7moles)二甲基化硫，將該溶液攪拌過夜同時緩慢升至室溫。揮發(fā)物通過旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去得到褐色油。將該物質(zhì)懸浮在1L tBuOH中，并且加入200mL(1.9moles)的2-甲基-2-丁烯。隨后向該溶液滴加160g(1.33moles)NaH2PO4和70g(774mmol)NaClO2在800mL H2O中的混和物內(nèi)。加料完畢后，該混和物繼續(xù)攪拌4小時。分離各層后，通過旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮有機物，將殘余物溶于EtOAc并置于分液漏斗，并從該反應分離水相。分離后，水相用3xEtOAc萃取，用Na2SO4干燥，和濃縮得到～90g的黃色樹膠。將該殘余物懸浮在500mL MeOH，并且將和HCl氣體吹入該溶液直至接近回流。將該燒瓶加蓋并允許攪拌過夜，同時冷卻至室溫。通過旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去揮發(fā)物，將該殘余物加載在硅膠柱上的CH2Cl2中并用EtOAc/己烷洗脫得到該甲酯，其為淺橙色樹膠。將該殘余物溶于500mL的THF，冷卻至0℃，加入32.6mL(220.5mmol)的溴乙酸叔丁酯，隨后加入10.6g的NaH(264.6mmol的60％混懸液)。令該混和物升至室溫且攪拌過夜，用飽和NH4Cl溶液猝滅，并用EtOAc萃取2次。合并的有機層隨后用鹽水洗滌，用Na2SO4干燥，濃縮和殘余物通過硅膠色譜用EtOAc/己烷純化得到1-5，其為稠的淺黃色樹膠。1-5的數(shù)據(jù)1H NMR(500MHz，CDCl3)δ7.4-7.3(m，5H)，4.65(d，1H)，4.55(d，1H)，3.9(d，1H)，3.65(s，3H)，3.5(d，1H)，3.35(d，1H)，3.2(d，1H)，1.4(s，9H)ppm.HRMS(ES)C18H23NO6的M+Na計算值372.1423.實測值372.1412。
步驟37a-苯基二氫-1H-吡咯并[1，2-c][1，3]惡唑-3，6(5H)-二酮(1-6)向18.6g(53mmol)1-5在150mL THF中的溶液內(nèi)于-78℃下滴加58.6mL(58.6mmol)的LiHMDS的1M THF溶液。此溫度下攪拌1小時后，撤去冷卻浴并令反應升至室溫并攪拌過夜。該混和物用飽和NH4Cl溶液猝滅，用EtOAc萃取2次，用鹽水洗滌2次，用Na2SO4干燥并濃縮。將殘余物溶于60mL甲酸和在100℃下加熱24小時。真空下除去揮發(fā)物并且殘余物用CH2Cl2/己烷/Et2O研制得到1-6，其為米色固體。1-6的數(shù)據(jù)1HNMR(500MHz，CDCl)δ7.5-7.3(m，5H)，4.7(d，1H)，4.3(d，1H)，4.2(d，1H)，3.5(d，1H)，3.1(d，1H)，2.95(d，1H)，2.9(d，1H)ppm。
步驟46-(2，5-二氟苯基)-7a-苯基-5，7a-二氫-1H-吡咯并[1，2-c][1，3]惡唑-3-酮(1-7)向2.2g(10mmol)1-7在150mL THF中的混懸液內(nèi)于-78℃下滴加12.2mL(12.2mmol)NaHMDS在THF中的1M溶液。攪拌30分鐘后，該溶液升溫至0℃且保持1小時。該溶液隨后冷卻至-78℃并加入4.35g(12.2mmol)N-苯基二(三氟甲磺酰胺)在10mL THF至的溶液。撤去冷卻浴并使該混和物升至室溫并攪拌過夜。該混和物用飽和NH4Cl溶液猝滅，用EtOAc萃取2次，用鹽水洗滌2次，用Na2SO4干燥并濃縮。將殘余物溶于75mL的DME和18mL的水中。向該化合物加入1.29g(30mmol)LiCl，3.2g(30mmol)Na2CO3，和4.8g(30mmol)的2，5-二氟苯基硼酸。該溶液用N2脫氣1分鐘，隨后將愛人630mg(0.5mmol)的四(三苯基膦)鈀(0)。將該反應在90℃下加熱3小時，冷卻至室溫，用飽和NaHCO3稀釋和用EtOAc萃取2次。合并的有機層用鹽水洗滌，用Na2SO4干燥，濃縮和殘余物通過硅膠色譜用CH2Cl2/己烷純化得到1-7，其為白色固體。1-7的數(shù)據(jù)1H NMR(500MHz，CDCl3)δ7.5-7.3(m，5H)，7.1-6.9(m，3H)，6.8(s，1H)，4.9(d，1H)，4.75(d，1H)，4.5(d，1H)，4.25(d，1H)ppm.HRMS(ES)C18H13F2NO2的M+H計算值314.0987.實測值314.0993。
步驟52-({[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基}甲基)-4-(2，5-二氟苯基)-2-苯基-2，5-二氫-1H-吡咯(1-8)將1.75g(5.6mmol)1-7在15mL EtOH和10mL 3MnaOH中的混懸液在60℃加熱3小時，冷卻至室溫并轉(zhuǎn)移到含EtOAc和鹽水的分液漏斗。分離各層，水相用EtOAc萃取2次，合并的有機相用鹽水洗滌2次，用Na2SO4干燥和濃縮得到白色固體。向燒瓶內(nèi)加入30mL CH2Cl2，1.5g(22.3mmol)咪唑和1.76g(11.7mmol)TBSC1，并且將所得混懸液攪拌過夜。該反應用CH2Cl2稀釋，用水洗滌2次，用Na2SO4干燥，濃縮和殘余物通過硅膠色譜用EtOAc/己烷純化得到1-8，其為白色固體。1-8的數(shù)據(jù)1H NMR(500MHz，CDCl3)δ7.6-7.3(m，5H)，7.1-6.9(m，3H)，6.75(s，1H)，4.25(d，1H)，4.1(d，1H)，3.95(d，1H)，3.75(d，1H)，0.9(s，9H)，0.1(s，3H)，0.05(s，3H)ppm。
步驟6中間體1-8的對映異構(gòu)體拆分對映異構(gòu)體的拆分在色譜上用ChiralpakADO 10×50cm柱和含1％異丙醇的己烷(含0.1％二乙胺)以150mL/min拆分。洗脫劑在4×250mmChiralpakAD5柱上用含1％異丙醇的己烷(含0.1％二乙胺)以1mL/分鐘的分析HPLC試驗證實第一洗脫的、活性對映異構(gòu)體具有Rt＝5.5分鐘且第二對映異構(gòu)體具有Rt＝6.9分鐘。
步驟7(2S)-2-({[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基}甲基)-4-(2，5-二氟苯基)-2-苯基-2，5-二氫-1H-吡咯-1-羰基氯1-9將1.95g(6.6mmol)三光氣在25mL THF中的溶液內(nèi)于0℃下加入1.31g(3.3mmol)的第一洗脫對映異構(gòu)體1-8和915μL(6.6mmol)三乙胺在10mL THF中的溶液內(nèi)。撤去冰浴并且令該反應升至室溫并攪拌3小時。該反應在水和EtOAc之間分配，有機溶液用Na2SO4干燥和濃縮得到1-9，其為褐色油。1-9的數(shù)據(jù)HRMS(ES)M+H的C24H2SClF2NO2Si計算值464.1619.實測值464.1625。
路線1A 二酯1-5的另一合成向14.8g(73mmol)1-4和110mL CH2Cl2、110mL CH3CN和320mL水的兩相混和物內(nèi)加入約200mg的氯化釕(III)水合物。隨后在1小時內(nèi)分次加入高碘酸鈉(85.6g，400mmol)同時劇烈攪拌。加料完全后，將該反應室溫下攪拌4小時。該混和物用500mL水和1.5L EtOAc稀釋，該固體通過過濾除去。將濾液置于分液漏斗，分離相，水相用EtOAc萃取2次，合并的有機相用鹽水洗滌2次和用Na2SO4干燥。濃縮后，將深褐色固體溶于250mL的MeOH并緩慢將HCl(g)吹入該溶液并且吹入速度不能使該溶液的溫度高于35℃。5分鐘后，將該反應加蓋并在室溫下攪拌過夜。在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器上除去揮發(fā)物，殘余物通過硅膠色譜用EtOAc/己烷純化得到13.6g(58mmol)的甲酯，其為粘性油。該殘余物隨后被溶于200mL THE，冷卻至0℃和加入10.3mL(70mmol)的溴乙酸叔丁酯，隨后加入2.8g NaH(70mmol的60％混懸液)。該混和物升至室溫并攪拌過夜后，用飽和NH4Cl溶液猝滅和用EtOAc萃取2次。合并的有機層用鹽水洗滌，用Na2SO4干燥，濃縮和殘余物通過硅膠色譜用EtOAc/己烷純化得到1-5，其為無色油。
路線1B 步驟14-亞甲基-2-苯基脯氨酸甲酯(1B-2)將苯基甘氨酸甲酯-HCl(100g)的水溶液(300mL)用10N NaOH中和至pH8。水溶液用EtOAc(3×200mL)萃取。合并的有機萃取液用MgSO4干燥，過濾并濃縮。殘余物(56.7g，344mmol)溶于原甲酸三甲酯(100mL)并用苯甲醛(34.9mL，36.4g，344mmol)處理。攪拌2小時后，該反應用Et2O(200mL)稀釋并用水(3×50mL)洗滌。該有機溶液用MgSO4干燥，過濾并濃縮。將一部分的亞胺殘余物(26.8g，100mmol)溶于二氯甲烷(240mL)并用160mL的10N NaOH、甲基烯丙基二氯(50.0g，400mmol和Bu4NHSO4(3.59g)處理。室溫下攪拌10小時后，該反應用二氯甲烷稀釋且分離該有機溶液，用MgSO4干燥，過濾并濃縮。該殘余物再溶于Et2O/1N HCl(200mL/200mL)并攪拌2小時。分離水相并用10NNaOH中和(至pH8)。該水混合物用EtOAc(3×200mL)萃取。合并的有機溶液用MgSO4干燥，過濾并濃縮。將殘余物溶于水并中和(至pH8)。該混合物用EtOAc(X3)萃取，隨后用MgSO4干燥，過濾和濃縮得到粗1B-2。該殘余物通過快速色譜純化(SiO2；30％EtOAc/己烷)得到純1B-2。
1B-2的數(shù)據(jù)1H NMR(500MHz，CDCl3)δ7.51(m，2H)，7.42(m，3H)，5.03(s，1H)，4.95(s，1H)，3.71(m，5H)，3.41(m，1H)，2.80(m，1H)ppm。
步驟27a-苯基二氫-1H-吡咯并[1，2-c][1.3]惡唑-3，6(5H)-二酮(1-6)將LiAlH4(7.14g，188mmol)在THF(500mL)中的混懸液冷卻至0℃且用酯1B-2(10.2g，47mmol)在THF(50mL)中的溶液處理約20分鐘。0℃下攪拌30分鐘后，該反應小心通過加入水(7.1mL)、15％NaOH水溶液(7.1mL)和H2O(21.3mL)猝滅。加入固體Na2SO4且將該混和物攪拌40分鐘。過濾該混和物并濃縮。將該殘余物(8.2g，43.3mmol)溶于二氯甲烷(300mL)并用三乙胺(9.0mL，6.5g，65.0mmol)和羰基二咪唑(9.14g，56.4mmol)處理。室溫下攪拌攪拌48小時后，該反應用二氯甲烷稀釋且用1N HCl和鹽水洗滌。將該有機溶液濃縮且無需進一步純化。將殘余物1B-3(9.2g，42.8mmol)在二氯甲烷(200mL)中的溶液冷卻至-78℃并將臭氧通入該溶液直至保持藍色為止。純化該溶液并用二甲基硫(35mL)處理。逐漸升至室溫過夜后，該溶液濃縮為黃色固體。該固體用Et2O研制得到純的1-6。1-6的數(shù)據(jù)1H NMR(500MHz，CDCl3)δ7.5-7.3(m，5H)，4.7(d，1H)，4.3(d，1H)，4.2(d，1H)，3.5(d，1H)，3.1(d，1H)，2.95(d，1H)，2.9(d，1H)ppm。
路線1C 步驟1(2R)-[(乙氧基羰基)氨基](苯基)乙酸(1C-2)1小時內(nèi)向(R)-(-)-2-苯基甘氨酸(1C-1，4kg)在THF和5NNaOH(10.6L)中的0℃混合物內(nèi)加入氯甲酸乙酯并維持內(nèi)溫低于10℃。加料完畢后，0-10℃下該反應陳化15分鐘且分析達到完全。該反應用37％HCl猝滅(至pH＝1，2.3L)并且保持內(nèi)溫＜25℃。加入甲苯(20L)且在攪拌/放置后，分離水層。分析有機層的收率并將溶劑換為甲苯，分離水層。分析有機層的收率并將溶劑換為甲苯。1C-2的漿液直接用于下一步反應。(2R)-[(乙氧基羰基)氨基]-(苯基)乙酸mp154-156℃；1HNMR(CDCl3，400MHz)表明旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體的～1.1∶1混合物δ＝12.12(bs，2H)，7.99(d，J＝5.3Hz，1H)，7.45-7.32(m，10H)，5.78(d，J＝6.2Hz，1H)，5.41(d，J＝7.1Hz，1H)，5.25(d，J＝5.7Hz，1H)，4.12(m，2H)，4.05(m，2H)，1.24(t，J＝6.9Hz，3H)，1.06(t，J＝7.0Hz，3H)；13C NMR(CDCl3，100MHz)δ＝175.1，173.6，157.3，155.8，137.4，136.1，129.0，128.7，128.6，128.2，127.2，127.1，62.1，61.5，58.3，57.7，14.4，14.1；MS m/z 224([M+H]+，C11H14NO4，計算值224.09)。
步驟2(2S，4R)-5-氧代-24-二苯基-13-惡唑烷-3-羧酸乙酯(1C-3)在1-2小時中向1C-2和PhSO3H(42.7gm)在甲苯中的85℃溶液內(nèi)在減壓(350torr)下加入苯甲醛二甲基縮醛(3L)在甲苯(5mL/g)中的溶液。反應過程中蒸餾除去甲苯/MeOH。反應完全后，該溶液冷卻至室溫且用THF(36L)稀釋直至均勻為止。該有機溶液用10％NaHSO3(7.5L)洗滌，隨后用飽和NaHCO3(9L)洗滌。完畢后溶劑換為甲苯并用甲苯稀釋至7.5mL/g總體積(相對于試驗收率)。將該漿液加熱至75℃且陳化至均勻。緩慢冷卻后，1C-3結(jié)晶。但該漿液達到40℃時，加入庚烷(2.5mL/g)。將該漿液冷卻至室溫并過濾收集固體。該固體用1∶1甲苯/庚烷(5mL/g)洗滌且在在氮氣下干燥至重量恒定。(2S，4R)-5-氧代-2，4-二苯基-1，3-惡唑烷-3-羧酸乙酯mp197-199℃；1H NMR(CDCl3，400Hz)δ＝7.46-7.37(m，10H)，6.77(bs，1H)，5.45(bs，1H)，3.96(m，2H)，3.86(m，2H)，0.84(t，J＝7.1Hz，3H)；13C NMR(CDCl3，100MHz)δ＝130.2，129.1，129.0，218.8，126.7，90.3，61.9，60.3，13.8；MS m/z 312([M+H]+，C18H18NO4，計算值312.12)。
步驟3(2S，4S)-4-烯丙基-5-氧代-2，4-二苯基-1，3-惡唑烷-3-羧酸乙酯(1C-4)1小時中向1C-3和烯丙基-Br(1.67L)在THF(40L)中的-10℃溶液內(nèi)加入二(三甲基甲硅烷基)氨化鈉在THF(7L)中的溶液，并且維持溫度＜5℃。5分鐘后，分析該反應達到完全。該反應用1N HCl(22.5L)猝滅且用庚烷(20L)稀釋。分離水層并有機層用飽和鹽水(12L)洗滌。溶劑換為MeOH并共沸蒸發(fā)除去水直至達到KF＜900ppm。1C-4的溶液直接用于下一反應。(2S，4S)-4-烯丙基-5-氧代-2，4-二苯基-1，3-惡唑烷-3-羧酸乙酯1H NMR(CDCl3，400Hz)δ＝7.60-7.52(m，2H)，7.39-7.33(m，8H)，6.55(m，1H)，5.84(m，1H)，5.38(m，2H)，4.16(m，2H)，3.72-3.12(m，2H)，1.17(t，J＝7.0Hz，3H)；13C NMR(CDCl3，100MHz)δ＝172.5，164.0，137.5，131.0，130.5，129.7，128.3，128.1，127.4，126.2，122.0，89.5，62.0，42.2，40.4，14.2；MSm/z 352([M+H]+，C21H22NO4，計算值352.15)。
步驟4(2S)-2-[(乙氧基羰基)氨基1-2-苯基戊-4-烯酸甲酯(1C-5)0.25小時內(nèi)向1C-4在MeOH(20L)中的23℃溶液內(nèi)加入含在MeOH(535mL)中的30％NaOMe，并且維持溫度＜30℃。4小時后，分析該反應達到完全。該反應用5％NaHSO3(40L)猝滅且用IPAc(20L)稀釋。分離水層且有機層用10％KH2PO4(12L).洗滌。溶劑換為MeCN且直接用于下面的反應。(2S)-2-[(乙氧基羰基)氨基]-2-苯基戊-4-烯酸甲酯1H NMR(CDCl，400Hz)δ＝7.46-7.43(m，2H)，7.39-7.27(m，3H)，6.23(bs，1H)，5.76-5.66(m，1H)，5.20-5.14(m，2H)，4.10-4.00(m，2H)，3.68(s，3H)，3.53(bs，1H)，3.20(dd，J＝13.7，7.6Hz，1H)1.27-1.15(m，3H)；13C NMR(CDCl3，100MHz)δ＝172.6，154.3，139.8，132.3，128.4，127.8，125.9，119.4，65.0，60.6，53.1，37.8，14.4；MS m/z300([M+Na]+，C15H19NNaO4，計算值300.12)。
步驟54-[(乙氧基羰基)苯基-D-脯氨酸甲酯(1C-6)向1C-5在MeCN(42L)中的23℃溶液內(nèi)加入水(12L)，隨后加入I2(8kg)。6小時后，分析該反應達到完全。該反應用10％Na2SO3(35L)猝滅，用50wt％NaOH(4L)堿化且用IPAc(35L)萃取。分離水層且棄除，有機層用6N HCl(35L)萃取。分離有機層。將水層冷卻至-10℃，加入IPAc(35L)，并且緩慢用22L的10N NaOH中和。分離水層且棄除并儲存1C-6的溶液。4-[(乙氧基羰基)氧基]-2-苯基-D-脯氨酸甲酯1HNMR(CDCl3，400Hz)表明，非對映異構(gòu)體的2∶1混合物δ＝7.55-7.47(m，5H)，7.34-7.22(m，5H)，5.18-5.11(m，2H)，4.22-4.11(m，4H)，3.68(s，6H)，3.33-3.24(m，4H)，3.10(d，J＝14.1Hz，2H)，3.05(b，2H)，2.34(dd J＝14.3，5.5Hz，1H)，2.22(dd J＝14.3，4.1Hz，1H)，1.31-1.23(m，6H)；13CNMR(CDCl3，100MHz)δ＝175.2，175.1，154.7，154.4，142.0，141.5，128.3，128.2，127.5，127.4，126.0，125.7，78.5，77.6，71.7，71.0，63.8，52.9，52.8，52.7，52.0，51.8，43.2，42.9，14.1，14.0；MS m/z 294([M+H]+，C15H20NO5，計算值294.13)。
步驟6(5S)-5-(羥基甲基)-5-苯基吡咯烷-3-醇(1C-7)-50℃下向碳酸鹽1C-6(5.0g，17.0mmol)在THF(50mL)中的溶液內(nèi)加入Red-Al的3.5M甲苯溶液(17.0mL，59.7mmol，3.5mole.)。該反應混合物升至室溫并陳化2小時。0℃下該反應用2.0M Rochelle鹽溶液猝滅(45mL，等同于約1.5mole的Red-Al)且在5小時內(nèi)室溫下充分陳化。分離水相后，通過減壓下共沸蒸餾(約20torr，60℃)使混合的有機溶液換為n-BuOAc。加入200mL的n-BuOAc后，GC中檢測出THF、甲苯和甲氧基乙醇少于0.1％且KF為0.11％.MS m/z 194([M+H]+，C11H15NO2，計算值193.11)。
步驟7(7aS)-6-羥基-7a-苯基四氫-H-吡咯并[1，2-c][1，3]惡唑-3-酮(1C-8)向步驟6所述的n-BuOAc溶液內(nèi)滴加CDI(3.46g，21.3mmol，1.25moleq.)并室溫下陳化1小時。將30mL的2N HCl溶液加入到該反應混合物中且陳化1小時。分離水相且用30mL n-BuOAc萃取，之后加入6.0g的NaCl。向合并的有機層加入150mg的活性炭(Darco KB)，使該混和物陳化過夜。經(jīng)Solka-Floc墊過濾出炭。數(shù)據(jù)1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.47-7.28(m，7H)，4.65(d，J＝8.3Hz，1H)，4.64-4.59(m，0.4H)，4.57-4.51(m，1H)，4.51(d，J＝8.8Hz，0.4H)，4.33(d，J＝8.3Hz，1H)，4.28(dd，J＝13.1，6.7Hz，0.4H)，4.15(d，J＝8.8Hz，0.4H)，3.92(d，J＝12.7Hz，1H)，3.28(dd，J＝12.7，3.9Hz，1H)，3.18(dd，J＝13.1，2.7Hz，0.4H)，2.63(d，J＝13.6Hz，0.4H)，2.50(dd，J＝13.7，5.1Hz，1H)，2.40(brd，J＝13.7Hz，1H)，2.25(dd，J＝13.6，6.8Hz，0.4H)。
步驟8(7aS)-7a-苯基二氫-1H-吡咯并[1，2-c][1，3]惡唑-3，6(5H)-二酮(1C-9)將含在n-BuOAc中的IC-8(粗，一部分的上述溶液1.40g分析，6.38mmol)減壓下濃縮并向粗結(jié)晶中加入14mL MeCN。GC中溶劑比為n-BuOAc∶MeCN＝8∶92。向該溶液滴加AcOH(1.10mL，19.2mmol，3.0mole.)，室溫下在30分鐘內(nèi)滴加TPAP(33.6mg，0.095mmol，1.5mol％)和NaOCl(9.SmL，19.2mmol，3.0mole.)的2.0M溶液(可在HPLC中發(fā)現(xiàn)約5％的氯化產(chǎn)物)。30分鐘后，該反應混合物用12mL的AcOEt稀釋并分離水相。有機相用飽和Na2S2O3水溶液和鹽水洗滌。有機溶劑換為MTBE且過濾出沉淀，用MTBE洗滌。得到的酮1C-9；78％(1.08g，4.97mmol，99.4％面積，97.0w/w％，0.5％的氯化產(chǎn)物面積)。
路線1D(2S)-2-({[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基}甲基)-4-(2，5-二氟苯基)-2-苯基-2，5-二氫-1H-吡咯-1-羰基氯1-9在帶有頂部攪拌器、溫差電偶和氮氣/真空入口的燒瓶內(nèi)加入S-TBS吡咯啉固體1-8(180gms)且加入IPAC(1.26L)。連續(xù)攪拌該溶液約30分鐘至變均勻。
在另一帶有頂部攪拌器、溫差電偶和氮氣/真空入口的燒瓶內(nèi)加入IPAC(1.26L)且將該溶液冷卻至-5℃。加入三光氣(67gms)且隨后緩慢加入二甲基吡啶(173ml)。將S-TBS吡咯啉的溶液隨后緩慢加入到該溶液內(nèi)。該反應通過HPLC監(jiān)測且200nm下通過HPLC分析當胺轉(zhuǎn)化為產(chǎn)物的轉(zhuǎn)化率＞99A％時則被視為反應完全。該反應通過相反應混合物內(nèi)加入1.8L的10wt％檸檬酸水溶液猝滅。分離各層且有機層用水(240mL)洗滌2次。有機層隨后濃縮至900ml(水含量為105ug/ml)且直接用于偶聯(lián)反應。HPLC分析證實99.96％轉(zhuǎn)化為氨基甲酰氯。
路線1E2-({[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基}甲基)-4-(2，5-二氟苯基)-2-苯基-2，5-二氫-1H-吡咯(1-8)步驟16-(2，5-二氟苯基)-7a-苯基-57a-二氫-1H-吡咯并[1，2-c][1，3]惡唑-3-酮(1-7)在20L夾套中將231g(1.06moles)1-6在11L THF中的溶液頂部劇烈攪拌1小時，隨后冷卻至-70℃。向該混懸液滴加1.28L(1.28moles)的NaHMDS在THF中的溶液。攪拌3小時后，加入478.9g(1.28moles)固體N-苯基二(三氟甲磺酰胺)，隨后繼續(xù)攪拌1.5小時，之后通過加入2L的飽和NH4Cl水溶液猝滅。該溶液達到室溫后，加入2L的水和2L的EtOAc，分離各層并且水層用2L的EtOAc萃取。合并的有機層用鹽水洗滌，用Na2SO4干燥和通過旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮。在20L帶有頂部攪拌的夾套反應器中將殘余物溶于6L的DME和1.2L水，該溶液用N2的強氣流脫氣1小時。向該反應器內(nèi)加入201.6g(1.28moles)2，5-二氟苯基硼酸、134g(3.19moles)LiCl、338g(3.19moles)Na2CO3和24.6g(21mmol)四(三苯基膦)鈀(0)，并且該反應在90℃下加熱2小時。該階段后，蒸餾除去約4.5L的DME，殘余溶液冷卻至室溫并且加入到6L水和8L CH2Cl2中。分離各層，水層用2L的CH2Cl2萃取，合并有機層，用4L水洗滌，用Na2SO4干燥和通過旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮得到深紅色固體決。該殘余物用500mL的CHCl3處理，并且過濾得到棕色固體。濃縮濾液至～300mL且收集第二批固體。與第一批合并，并且合并的物質(zhì)與500mL的EtOAc處理過夜。過濾該混懸液得到米色固體，將濾液濃縮至～250mL并且收集第二批，與第一批合并，合并的物質(zhì)(～205g)從1.6L的EtOAc重結(jié)晶得到1-7，其為白色固體。1-7的數(shù)據(jù)1H NMR(500MHz，CDCl)δ7.5-7.3(m，5H)，7.1-6.9(m，3H)，6.8(s，1H)，4.9(d，1H)，4.75(d，1H)，4.5(d，1H)，4.25(d，1H)ppm.HRMS(ES)C18H13F2NO2的M+H計算值314.0987.
實測值314.0993。
步驟22-({[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基}甲基)-4-(2，5-二氟苯基)-2-苯基-2，5-二氫-1H-吡咯(1-8)在10L圓底燒瓶內(nèi)將109.4g(349mmol)1-7在2.2L EtOH和105mL(1.05moles)10M NaOH中的混懸液于60℃下加熱4小時，冷卻至室溫并陳化過夜。向此混合物內(nèi)加入90.2mL(1.08moles)的濃HCl且通過旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去溶劑。殘余物懸浮在2L乙腈內(nèi)并且再次通過旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)干燥。將該固體懸浮在3.8L的CH2Cl2和200mL DMF中，加入118.7g(1.75moles)咪唑，隨后加入110.5(733mmol)TBSCI。在N2的輕氣流下攪拌15小時后，該反應加入到4L的水和2LCH2Cl2中，分離各層，并且水層用2L的CH2Cl2萃取。合并的有機萃取液隨后用4×4L的水洗滌，用Na2SO4干燥和通過旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮。將殘余物溶于500mL的MeOH和500mL的2M MeNH2的MeOH溶液，攪拌4小時，隨后通過旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮。該殘余物置于高真空下直至重量達到恒定，將物質(zhì)用研缽壓碎且搗磨得到1-8，其為米色固體。1-8的數(shù)據(jù)1H NMR(500MHz，CDCl3)δ7.6-7.3(m，5H)，7.1-6.9(m，3H)，6.75(s，1H)，4.25(d，1H)，4.1(d，1H)，3.95(d，1H)，3.75(d，1H)，0.9(s，9H)，0.1(s，3H)，0.05(s，3H)ppm。
路線2 步驟13-氟-4-氧代哌啶-1-羧酸芐酯(2-2)向10.0g(43mmol)4-氧代-1-哌啶羧酸芐酯在25mL DMF中的溶液內(nèi)加入14.3mL(103mmol)的三乙胺且隨后加入6.53mL(52mmol)TMSCl。該反應在80℃下加熱過夜，冷卻至室溫和隨后加入到含己烷的分液漏斗內(nèi)。該混和物在飽和NaHCO3水溶液中分配，分離，用鹽水洗滌，用MgSO4干燥和通過旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮。將殘余物溶于500mL的CH3CN且用16.7g(47mmol)Selectfluor處理。90分鐘后，將該反應濃縮至約半數(shù)原體積，在EtOAc和鹽水之間分配，分離，用MgSO4干燥，過濾和通過旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮。將該殘余物加載在硅膠柱上并用EtOAc/己烷洗脫得到2-2，其為無色油。
步驟23-氟-4-(甲基氨基)哌啶-1-羧酸芐酯(2-2a)向9.4g(37.5mmol)2-2 在150mL 1，2-二氯乙烷中的溶液內(nèi)加入37.5mL(74.9mmol)甲基胺在THF中的溶液和11.9g(56.2mmol)Na(OAc)3BH。攪拌2小時后，該反應用飽和K2CO3水溶液猝滅，用EtOAc分配，分離，水相萃取3x EtOAc。合并的有機萃取液用鹽水洗滌，用MgSO4干燥，過濾和通過旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮。殘余物加載在硅膠柱上且用80∶10∶10CHCl3/EtOAc/MeOH洗脫得到2-2a的cis和trans兩種異構(gòu)體，其為無色油。2-2a的trans異構(gòu)體的數(shù)據(jù)，首先被洗脫出來(通過NOE分析法證實)1H NMR(600MHz，CD2Cl2)δ7.4-7.3(m，5H)，5.1(m，2H)，4.4-4.1(m，2H)，3.9(m，1H)，3.15-3.05(m，2H)，2.75(m，1H)，2.4(s，3H)，2.0(m，1H)，1.25(m，1H)ppm。2-2a的cis異構(gòu)體的數(shù)據(jù)，第二被洗脫出來(通過NOE分析法證實)1H NMR(600MHz，CD2Cl2)δ7.4-7.2(m，5H)，5.1(m，2H)，4.9-4.7(m 1H)，4.4(m，1H)，4.15(m，1H)，3.1-2.9(m，2H)，2.6(m，1H)，2.4(s，3H)，1.8(m，1H)，1.6(m，1H)ppm。HRMS(ES)C14H19F1N2O2的M+H計算值267.1504.實測值267.1500。
步驟3(3R，45)-4-[(叔丁氧基羰基)(甲基)氨基]-3-氟哌啶-1-羧酸芐酯(2-3)向7.67g(28.8mmol)cis-2-2a在150mL CH2Cl2中的溶液內(nèi)加入12.1mL(86.5mmol)三乙胺和9.44g(43.3mmol)二碳酸二叔丁酯。攪拌1小時后，該反應在CH2Cl2和H2O之間分配，有機相用鹽水洗滌，用MgSO4干燥，過濾和通過旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮。將殘余物加載在硅膠柱上且用EtOAc/己烷洗脫得到外消旋cis-2-3，其為白色固體。該對映異構(gòu)體的拆分通過色譜法用ChiralpakAd 10×50cm柱和含20％異丙醇的己烷(含0.1％二乙胺)在150mL/min下進行。洗脫液在4×250mm Chiralpak ADo柱上用含20％異丙醇的己烷(含0.1％二乙胺)在1mL/min下的分析型HPLC分析試驗表明，第一洗脫的對映異構(gòu)體(2-3的對映異構(gòu)體)具有Rt＝5.90分鐘，并且第二對映異構(gòu)體(2-3)具有Rt＝6.74分鐘。2-3的數(shù)據(jù)HRMS(ES)C19H27F1N2O4的M+Na計算值389.1847.實測值389.1852。
步驟4(3R，4S)-3-氟-1-甲基哌啶-4-基甲基氨基甲酸叔丁酯(2-4)向4.6g(12.6mmol)第二洗脫對映異構(gòu)體2-3在150mL EtOH中的溶液內(nèi)加入29.7mL(314mmol)的1，4-環(huán)己二烯和催化量的10％碳載Pd。攪拌過夜后，該反應經(jīng)硅藻土過濾和通過旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮。將殘余物溶于75mL的MeOH，加入2mL的AcOH和3.1mL(38mmol)的37％甲醛水溶液，將該混和物攪拌1小時。此時，加入1.58g(25.1mmol)存在于10mLMeOH中的NaCNBH3并且使該反應陳化2小時，之后加入到飽和NaHCO3水溶液。萃取3×CH2Cl2后，有機相用水洗滌，用MgSO4干燥，過濾和通過旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮得到2-4，其為無色油。2-4的數(shù)據(jù)HRMS(ES)C12H23FN2O2的M+H計算值247.1817.實測值247.1810。
步驟5(3R，4S)-3-氟-N，1-二甲基哌啶-4-胺(2-5)向3.0g(12.2mmol)2-4在100mL EtOAc中的溶液內(nèi)吹入HCl氣體直至該溶液升至可觸摸。隨后將該燒瓶加蓋且攪拌4小時。通過旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去揮發(fā)物，殘余物用Et2O研制且置于高真空下得到白色固體。將該物質(zhì)與25mL的15％Na2CO3水溶液混合并用5×50mL 2∶1CHCl3/EtOH萃取。有機物通過旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)和非常溫和的加熱濃縮，將殘余物溶于200mL的CHCl3，用Na2SO4干燥，濃縮得到2-5，其為無色油。2-5的數(shù)據(jù)1HNMR(500MHz，CDCl3)δ4.8(m，1H)，3.15(m，1H)，2.85(m，1H)，2.5(s，3H)，2.45(m，1H)，2.3(s，3H)，2.2-2.0(m，2H)，1.9-1.7(m，2H)ppm.HRMS(ES)C7H15FN2的M+H計算值147.1292.實測值147.1300。
路線2A步驟13-氟-4-氧代哌啶-1-羧酸芐酯(2-2)向帶有機械攪拌器的22-L圓底燒瓶內(nèi)加入Cbz-酮2-1(2.5kg，10.7mol)、5.0L的二甲基乙酰胺、三乙胺(3.0L，21.5mol)。加入三甲基甲硅烷基氯(2.0L，15.7mol)。將該混和物加熱至60℃且陳化4小時。冷卻至10℃后，該混和物在10L的5％碳酸氫鈉和10L正-庚烷中猝滅并維持內(nèi)溫低于20℃。有機層用10L的2.5％碳酸氫鈉水溶液洗滌。最終的有機層用硫酸鈉干燥，過濾和減壓下濃縮，并且將溶劑換為10L MeCN。
向50-L夾套容器內(nèi)加入7.5L的MeCN和Selectfluor(4.1kg，11.5mol)。該漿液冷卻至10℃且加入碳酸鉀(0.37kg，2.68mol)。分次轉(zhuǎn)移甲硅烷醚在MeCN中的溶液并保持內(nèi)溫為10-15□。使最終的漿液在10-15℃下陳化2小時。該反應在具有20L的2N鹽酸和30L的乙酸乙酯的100L萃取器中猝滅。有機層用20L的2N鹽酸、10L的20wt％氯化鈉洗滌，用硫酸鈉干燥和過濾。濾液濃縮并用干燥EtOAc在減壓下洗滌達到KF＝16000gg/mL，隨后溶劑在減壓下?lián)Q為～10L THF。
步驟23-氟-4-(甲基氨基)哌啶-1-羧酸芐酯(2-2a)向圓底燒瓶內(nèi)，將Cbz氟酮(10.3mol)溶于四氫呋喃(30L)中。加入甲胺在四氫呋喃中的2M溶液(2.00當量；20.6moles；10.3L)內(nèi)，將該混和物室溫下攪拌30分鐘。該混和物冷卻至0℃，加入乙酸(20.6moles；1.17L；1.236kg)，隨后在0℃下繼續(xù)攪拌30分鐘。將三乙酰氧基硼氫化鈉(12.36moles；2.62kg)在15分鐘內(nèi)分次加入到該溶液，該反應混合物在0℃下陳化直至通過HPLC分析判斷反應完全。將該反應混和物緩慢轉(zhuǎn)移到100L圓柱形萃取器中，該萃取器含有12M的鹽酸水溶液(30.9moles，2.575L)，水(30L)和甲苯(140mol，15L)。劇烈攪拌15分鐘后，分離各層且甲苯層進一步用水(10L)洗滌。合并的水層轉(zhuǎn)移回萃取器。加入10M的氫氧化鈉水溶液(82.4mole，8.24L)，并且該混和物用IPAC(30L)萃取1次。
有機層用硫酸鈉(3kg)干燥并濃縮。將殘余物溶于8∶2(vol∶vol)乙醇∶水(23kg乙醇和7.2kg水)，將85％磷酸(9.83mol，952g，667mL)加入到該溶液且加入晶種。室溫下攪拌該混和物過夜。沉淀結(jié)晶固體且通過過濾收集。該固體用8∶2乙醇∶水洗滌且真空箱內(nèi)干燥得到2.1kg固體。
將該固體懸浮在36L EtOH和4L水混和物中且該混和物加熱至70℃-80℃直至所有固體溶解。撤去熱源且澄清的溶液用cis異構(gòu)體混和物2-2a接種。室溫下攪拌過夜后，沉淀結(jié)晶固體且通過過濾收集。該固體產(chǎn)物在真空箱內(nèi)干燥得到白色固體。
步驟3(3R，4S)-4-[(叔丁氧基羰基)(甲基)氨基]-3-氟哌啶-1-羧酸芐酯2-3在50L的萃取器內(nèi)加入20L水和1.06kgNa2CO3，攪拌混和物直至所有固體溶解。加入IPAC(20L)和CBZ胺羧酸鹽(1.85kg，5.3mol)?；旌秃蠓蛛x各層。水層用另外的5L IPAC萃取。合并的有機層用硫酸鈉干燥。過濾出干燥劑后，將該批次加入到72L圓底燒瓶內(nèi)，并且加入Boc2O溶液(1.0M，4.8L)。45分鐘后HPLC試驗證實轉(zhuǎn)化率為98％。加入附加的Boc2O溶液(50mL)。該批次陳化15小時后，真空下濃縮達到最小體積，用MeOH(10L-15L)純化。該批次用甲醇稀釋至總重量為約14.3kg。HPLC試驗證實約1.9kg的所需產(chǎn)物。
氟哌啶通過色譜分離在20微米Chiralpak AD(Diacel ChemicalIndustries，Ltd.)手性固相柱(30ID×25cm)上拆分。每次注射54g量的外消旋體用甲醇洗脫。收集最低保留時間對映異構(gòu)體得到45g(85％回收率)的所需(3R，4S)對映異構(gòu)體，98％ee。重復該分離方法且將不同次注射的所需餾分合并和濃縮。
步驟4[(3R，4S)-3-氟-1-甲基哌啶-4-基甲基氨基甲酸叔丁酯(2-4)從手性分離步驟得到的濃縮溶液(4L)被證實含有489.5g(1.3mol)的Cbz-Boc-二胺2-3。向該溶液中，加入甲醛(37％在水中，430mL，5.3mol)且該混和物在氫氣壓和5％Pd/C(183g)下4小時。過濾該反應混合物除去催化劑且在8L的EtOAc和8L的0.5M碳酸氫鈉之間分配。有機層用8L的0.5M碳酸氫鈉洗滌。合并的水層用8L EtOAc萃取。合并的有機層用硫酸鈉干燥和過濾。濾液直接用于下面步驟。
步驟6(3R，4S)-3-氟-N，1-二甲基哌啶-4-胺(2-5)將含有Boc保護的二胺2-4(327g，通過HPLC分析鑒定)的乙酸乙酯溶液加入到12L燒瓶中并且在28℃下濃縮。當該批次具有1.5L的總體積時，該批次隨后將溶劑換為加入8L的乙醇，同時恒定體積下蒸餾。
向另一12L圓底燒瓶內(nèi)加入1.5L乙醇(200檢驗，精制)。隨后將436mL乙酰氯加入到乙醇中并借助于水浴維持溫度低于35℃。將該溶液攪拌1小時。含有302g Boc保護二胺2-4的乙醇溶液隨后緩慢加入到HCl，維持溫度＜30℃。當加料完畢時，固體開始從該溶液結(jié)晶出來。該反應通過GC監(jiān)測且將該漿液攪拌過夜。該固體通過過濾分離且濾餅用2L的85％乙醇、15％乙酸乙酯洗滌。濾餅隨后真空下用N2的氣流干燥過夜得到243g的所需產(chǎn)物2-5，其為二鹽酸鹽。GC分析表面該批次為99.3％ee。
向瓶內(nèi)加入約200mg 2-5(氟哌啶2HCl)且懸浮在甲醇(＜500μL)中。用加熱槍將該樣本加熱至溶解。2小時后，發(fā)現(xiàn)出現(xiàn)大的三維結(jié)晶。通過除去剩余溶劑分離結(jié)晶。選擇單一結(jié)晶進行單向結(jié)晶x-射線。數(shù)據(jù)收集在Bruker Smart Apex系統(tǒng)。該結(jié)晶為無色片并且0.24mm×0.22mm×0.14mm的大小。單位晶胞在5秒掃描率收集且自動指標將晶胞確定為單斜晶系。
用5秒掃描率在象限數(shù)據(jù)收集后該結(jié)構(gòu)解析為單斜晶P21空間群。參見表1-5用于將有關解析結(jié)構(gòu)的最終說明的信息制成表格。2-5的結(jié)構(gòu)的計算機繪圖如圖1所示。
表1.2-5的晶體數(shù)據(jù)和結(jié)構(gòu)精修經(jīng)驗式C8H21Cl2FN2O式重251.17溫度298(2)K波長0.71073_晶系，空間群單斜晶，P2(1)單位晶胞大小a＝7.286(2)_ α＝90°.
b＝7.637(2)_ β＝105.295(5)°c＝12.378(4)_ γ＝90°體積 664.3(4)O3Z，計算的密度2，1.256Mg/m3吸收系數(shù) 0.477mm-1F(000) 268微晶大小0.24×0.22×0.14mm數(shù)據(jù)收集的θ范圍 1.71-26.35°臨界指數(shù)(Limiting indices)-9＜＝h＜＝9，-9＜＝k＜＝9，-15＜＝1＜＝15集合/獨特的反射5309/2674[R(int)＝0.0227]θ完全度＝26.35 99.7％
吸收校正 無精修方法 于F2上全矩陣(Full-matrix)少正方形數(shù)據(jù)/限制/參數(shù) 2674/1/135F2上的擬合優(yōu)度 1.055最終的R指數(shù) [I＞2sigma(I)] R1＝0.0383，wR2＝0.0939R指數(shù)(所有數(shù)據(jù)) R1＝0.0409，wR2＝0.0959絕對結(jié)構(gòu)參數(shù)0.02(6)最大差峰和谷0.310和-0.135e_-3表2.2-5的原子配位(×104)和等量各向同性位移參數(shù)(_2×103)。U(eq)定義為正交Uij張量的第三痕跡。
表3.2-5的鍵長[_]和鍵角[°]。
表4.2-5的各相異性位移參數(shù)(_2×103)各向異性位移因子指數(shù)為-2pi2[h2a*2U11+...+2h ka*b*U12]
表5.2-5的氫配位(×104)和各向同性位移參數(shù)(2×103).
路線3 (2S)-4-(2，5-二氟苯基)-N-[(3R，4S)-3-氟-1-甲基哌啶-4-基]-2-(羥基甲基)-N-甲基-2-苯基-2，5-二氫-1H-吡咯-1-羧酰胺(3-1)向1.6g(3.45mmol)氨基甲酰氯1-9在25mL THF中的溶液那加入630mg(4.31mmol)的胺2-5，1.44mL(10.3mmol)三乙胺和催化量的DMAP。室溫下攪拌24小時后，該反應在EtOAc和飽和NaHCO3水溶液之間分配，有機物用鹽水吸毒，用Na2SO4干燥，和通過旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮。殘余物通過硅膠色譜用EtOAc/己烷純化得到-1.7g的淺黃色膠狀物。將其溶于75mL的CH3CN，加入3mL三乙胺三氟化氫，將該混和物室溫下攪拌24小時。再次加入3mL三乙胺三氟化氫且該反應在37℃下加熱24小時。該反映隨后加入到飽和NaHCO3水溶液，用3x EtOAc萃取，用鹽水洗滌，用Na2SO4干燥和通過旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮。該殘余物通過硅膠色譜用EtOAc-20∶1∶1EtOH/NH4OH/H2O純化得到3-1，其為白色固體。3-1的數(shù)據(jù)1H NMR(500MHz，CDCl3)δ7.4-7.2(m，5H)，7.1-6.9(m，3H)，6.3(s，1H)，5.25(m，1H)，4.9(d，1H)，4.8(d，1H)，4.6(d，1H)，4.45(m，1H)，4.1-4.0(m，2H)，3.2-3.1(m，1H)，3.1(s，3H)，3.0(m，1H)，2.4-2.3(m，1H)，2.3(s，3H)，2.3-2.2(m，2H)，1.7(m，1H)ppm.HRMS(ES)C25H2F3N3O2的M+H460.2207.實測值460.2213。
路線3A(2S)-4-(2，5-二氟苯基)-N-[(3R，4S)-3-氟-1-甲基哌啶-4-基]-2-(羥基甲基)-N-甲基-2-苯基-2，5-二氫-1H-吡咯-1-羧酰胺(3-1)在帶有頂部攪拌器、溫差電偶和氮氣/真空入口的燒瓶內(nèi)在IPAC(0.9L)中加入氨基甲酰氯1-9。向該溶液加入0.9L DMF，111gms氟二胺2-5和540ml二異丙基乙基。該溶液在60℃下加熱15小時且分析氨基甲酰氯的產(chǎn)物轉(zhuǎn)化率。當氨基甲酰氯的產(chǎn)物轉(zhuǎn)化率通過HPLC在200nm下＞98％時該反映被視為完全。使該反應冷卻至5℃和加入450ml6N HCl。使該溶液陳化直至托甲硅烷基化反應達到完全(＞99A％，在200nm下)，約2小時。
乙酸異丙基酯(3L)并且隨后將8wt％碳酸氫鈉水溶液(2L)加入到該反應混合物中，將其升溫至15-20℃。分離各層且隨后水草用3L IPAC萃取1次。合并的有機層用1L水洗滌2次。洗滌的有機溶液濃縮至5升，并且在35-40℃下經(jīng)1μm聚丙烯濾膜轉(zhuǎn)移到另一燒瓶內(nèi)。持續(xù)蒸餾直至達到1L的體積，隨后該反應在2小時內(nèi)冷卻至室溫。在2小時內(nèi)緩慢加入庚烷(1L)。所得的漿液被過濾至燒結(jié)玻璃漏斗上且結(jié)晶產(chǎn)物用500ml的2∶1庚烷∶乙酸異丙酯洗滌3次，作為替換洗滌。該固體3-1用氮氣流干燥過夜。該固體的1H NMR和HRMS數(shù)據(jù)相當于路線3的產(chǎn)物的數(shù)據(jù)。
選擇一種上述制備方法得到的單一晶體在Bruker Smart Apex系統(tǒng)上進行單晶X射線數(shù)據(jù)收集。晶體為無色多面體并且大小為0.14mm×0.13mm×0.13mm。該單位晶胞以30秒掃描率收集且自動指數(shù)得出該晶胞確定為斜方晶。在象限數(shù)據(jù)收集喉用30秒掃描率解析該結(jié)構(gòu)為斜方晶P212121空間群。
參見表6-10用于將有關解析結(jié)構(gòu)的最終說明的信息制成表格。3-1的結(jié)構(gòu)的計算機繪圖如圖2所示。
表6.3-1的晶體數(shù)據(jù)和結(jié)構(gòu)精修經(jīng)驗式C25H28F3N3O2式重459.50溫度298(2)K波長0.71073_晶系，空間群單斜晶，P2(1)2(1)2(1)
單位晶胞大小a＝11.3916(14)_ α＝90°.
b＝11.4808(14)_ β＝90°c＝17.718(2)_ γ＝90°體積 2317.3(5)O3Z，計算的密度 4，1.317Mg/m3吸收系數(shù) 0.101mm-1F(000)968微晶大小0.14×0.13×0.13mm數(shù)據(jù)收集的θ范圍2.11-26435O臨界指數(shù)(Limiting indices)-14＜＝h＜＝14，-14＜＝k＜＝14，-22＜＝l＜＝22集合/獨特的反射22539/2698[R(int)＝0.0405]θ完全度＝26.35 99.8％吸收校正 無精修方法 于F2上全矩陣(Full-matrix)少正方形數(shù)據(jù)/限制/參數(shù) 2698/0/301F2上的擬合優(yōu)度 1.157最終的R指數(shù) [I＞2sigma(I)] R1＝0.0429，wR2＝0.0993R指數(shù)(所有數(shù)據(jù)) R1＝0.0550，wR2＝0.1047絕對結(jié)構(gòu)參數(shù)0(10)最大差峰和谷 0.165和-0.120e_-3表7.化合物3-1的原子配位(×104)和等量各向同性位移參數(shù)(_2×103)U(eq)定義為正交Uij張量的第三痕跡
表8.3-1的鍵長[_]和鍵角[°]。

表9.3-1的各相異性位移參數(shù)(_2×103)各向異性位移因子指數(shù)為-2pi2[h2a*2U11+...+2h ka*b*U12]
表10.3-1的氫原子配位(×104)和各向同性位移參數(shù)(_2×103)
路線4
(2S)-4-(2，5-二氟苯基)-N-[(3S，4R)-3-氟-1-甲基哌啶-4-基]-2-(羥基甲基)-N-甲基-2-苯基-2，5-二氫-1H-吡咯-1-羧酰胺(4-2)該化合物以與制備3-1相同的方式制備，但除了從手性柱按照路線2步驟3所述摻入2-3的第一洗脫對映異構(gòu)體之外。4-2的數(shù)據(jù)1HNMR(500MHz，CDCl3)δ7.4-7.2(m，5H)，7.1-6.9(m，3H)，6.3(s，1H)，5.4(bs，1H)，5.2(d，1H)，4.9(m，1H)，4.6(m，1H)，4.4(m，1H)，4.0(m，1H)，3.8(m，1H)，3.2(s，3H)，3.0(m，1H)，2.5-2.2(m，3H)，2.4(s，3H)，1.8-1.6(m，2H)ppm.HRMS(ES)C25H28F3N3O2的M+H計算值460.2207.實測值460.2229。
路線5
路線5(連續(xù)) (2S)-4-(2，5-二氟苯基)-N-[(3R，4R)-3-氟-1-甲基哌啶-4-基]-2-(羥基甲基)-N-甲基-2-苯基-2，5-二氫-1H-吡咯-1-羧酰胺(5-3)本化合物以和制備3-1相同的方式制成，但處理將2-2a的trans異構(gòu)體摻入道合成中之外?！錿rans-2-3″的對映異構(gòu)體的拆分通過色譜法用Chiralpak AD_10×50cm柱和含15％EtOH的己烷(含0.1％二乙胺)在150mL/min下進行。洗脫液在4×250mm Chiralpak AD_柱和含15％EtOH的己烷(含0.1％二乙胺)在1mL/min下的分析HPLC試驗表明第一洗脫對映異構(gòu)體具有Rt＝7.30分鐘并且第二對映異構(gòu)體具有Rt＝11.59分鐘。將第一洗脫對映異構(gòu)體(具有未知的絕對立體化學)進一步處理得到trans胺5-1，將其增加到按照與路線2所述的相同路線中5-3的合成。5-3的合成1H NMR(500MHz，CDCl3)δ7.4-7.2(m，5H)，7.1-6.9(m，3H)，6.3(s，1H)，5.0-4.7(m，4H)，4.5(m，1H)，4.0(m，1H)，3.8(m，1H)，3.3(m，1H)，2.9(s，3H)，2.85(m，1H)，2.35(s，3H)，2.2-1.9(m，3H)，1.7(m，1H)ppm.HRMS(ES)C25H28F3N3O2的M+H計算值460.2207。實測值460.2231。化合物5-3和5-4的哌啶的絕對立體化學還為測定且所示的立體化學表明已經(jīng)得到試驗確定。
(2S)-4-(2，5-二氟苯基)-N-[(3S，4S)-3-氟-1-甲基哌啶-4-基]-2-(羥基甲基)-N-甲基-2-苯基-2，5-二氫-1H-吡咯-1-羧酰胺(5-4)該化合物以與5-3相同的方式制成，但處理增加從手性柱分離trans-2-3的第二洗脫異構(gòu)體。5-4的數(shù)據(jù)1H NMR(500MHz，CDCl3)δ7.4-7.2(m，5H)，7.1-6.9(m，3H)，6.3(s，1H)，5.4(m，1H)，4.9-4.6(m，3H)，4.4(m，1H)，4.0(m，1H)，3.85(m，1H)，3.25(m，1H)，3.0(s，3H)，2.85(m，1H)，2.35(s，3H)，2.2-1.9(m，4H)ppm。HRMS(ES)C25H28F3N3O2的M+H460.2207.實測值460.2229。
路線6 步驟1(2S，4S)-4-羥基-2-苯基吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(6-2)向帶有攪拌棒的火焰干燥的燒瓶內(nèi)加入(2S，4S)-4-{[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基}-2-苯基吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(6-1，從(S)-(-)-4-氯-3-羥基丁腈通過Maeda等Synlett 2001，1808-1810的方法制備，7.8g，20.7mmol)和無水乙腈(20.0mL)。所得溶液用三乙胺三氟化氫(10.1mL，62.0mmol)處理且在N2下攪拌。該反應在40℃下攪拌12小時。該反應隨后用EtOAc(100mL)稀釋且傾入5％NaHCO3水溶液。停止放出氣體后，有機層再用5％NaHCO3水溶液洗滌3次。有機層用硫酸鎂干燥，過濾和濃縮得到粗產(chǎn)物。從EtOAc/己烷重結(jié)晶得到(2S，4S)-4-羥基-2-苯基吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(6-2)，其為白色晶體固體。1H NMR(300MHz，CDCl3)旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體δ7.38-7.18(m，5H)，4.90(m，1H)，4.42(m，1H)，3.88(m，1H)，3.56(dd，J＝11.5，4.0Hz，1H)，2.60(m，1H)，2.03(m，1H)，1.50和1.20(br s，9H)；MS實測值208.0，理論值208.1(M-C(CH3)3)。
步驟2(2S)-4-氧代-2-苯基吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(6-3)向帶有攪拌棒的火焰干燥的燒瓶內(nèi)加入150mL無水二氯甲烷，將其冷卻至-78℃。依次加入草酰氯(3.8mL，44mmol)和DMSO(4.8mL，61mmol)。并且將該反應攪拌10分鐘。滴加存在于10mL無水二氯甲烷中的(2S，4S)-4-羥基-2-苯基吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(6-2，2.28g，8.73mmol)并在-78℃下攪拌1小時。加入三乙胺(12mL，87mmol)和使該反應在1小時內(nèi)升至室溫。完成后，該反應用5％NaHCO3、鹽水洗滌并用MgSO4干燥。有機層濃縮得到粗(2S)-4-氧代-2-苯基吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(6-3)。用EtOAc/己烷重結(jié)晶。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ7.35(m，3H)，7.17(m，2H)，5.38(m，1H)，4.08(d，J＝19.5Hz，1H)，3.90(d，J＝19.3Hz，1H)，3.13(dd，J＝18.8，9.8Hz，1H)，2.58(dd，J＝18.6，2.4Hz，1H)，1.40(br s，9H)；MS實測值206.0，理論值206.1(M-C(CH3)3)。
步驟3(2S)-2-苯基-4-{[(三氟甲基)磺酰基]氧基}-2，5-二氫-1H-吡咯-1-羧酸叔丁酯(6-4)向帶有攪拌棒的火焰干燥的燒瓶內(nèi)加入酮(2S)-4-氧代-2-苯基吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(6-3，0.16g，0.62mmol)和無水THF(2mL)。所得溶液冷卻至-78℃和用滴加的六甲基二甲硅烷基氨化鋰(LHMDS，0.68mL，1M在THF中，0.68mmoL)處理。該反應在-78℃下攪拌1小時并且依次加入N-(5-氯吡啶-2-基)-1，1，1-三氟-N-[(三氟甲基)磺?；鵠甲磺酰胺(0.27g，068mmol)。該反應升溫至0℃且共攪拌4小時。該反應用Et2O(10mL)稀釋且連續(xù)用H2O(IOmL)和鹽水(10mL)洗滌。有機層用MgSO4干燥，過濾并濃縮。粗殘余物通過快速柱色譜純化(0-20％EtOAc/己烷梯度，15分鐘)得到(2S)-2-苯基-4-{[(三氟甲基)磺?；鵠氧基}-2，5-二氫-1H-吡咯-1-羧酸叔丁酯(6-4)。1H NMR(300MHz，CDCl3)主要的旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體δ7.30(m，5H)，5.72(m，1H)，5.48(m，1H)，4.42(m，2H)，1.18(s，9H)；MS實測值379.0理論值379.1(M-CH3)。
步驟4(2S)-4-(2，5-二氟苯基)-2-苯基-N，N-二甲基-2，5-二氫-1H-吡咯-1-羧酰胺(6-5)向帶有攪拌棒的火焰干燥的燒瓶內(nèi)加入(2S)-2-苯基-4-{[(三氟甲基)磺?；鵠氧基}-2，5-二氫-1H-吡咯-1-羧酸叔丁酯(6-4，0.250g，0.636mmoD，2，5-二氟苯基硼酸(0.251g，1.59mmol)，Na2CO3(0.202g，1.91mmol)和LiCl(0.081g，1.91mmol)。將該固體溶于20mL 4∶1DME/H2O并且用氮氣脫氣。加入Pd(PPh3)4(0.037g，0.032mmol)且將該反應密封在氮氣下并加熱至90℃2小時。完成后，該反應在5％NaHCO3水溶液和EtOAc(3×50mL)之間分配，并且合并的有機層用MgSO4干燥。過濾后，有機層濃縮且腈快速柱色譜純化(SiO2，0-20％EtOAc/己烷梯度)得到(2S)-4-(2，5-二氟苯基)-2-苯基-2，5-二氫-1H-吡咯-1-羧酸叔丁酯(6-5)。
步驟51-{[(2S)-4-(2，5-二氟苯基)-2-苯基-2，5-二氫-1H-吡咯-1-基]羰基}-3-甲基-1H-咪唑-3-鎓(6-6)向帶有攪拌棒的火焰干燥的燒瓶內(nèi)在氮氣下加入6-5(0.63g，1.75mmol)和無水CH2Cl2(10mL)。所得溶液用三氟乙酸(5mL)處理且在25℃下攪拌1.5小時。完成后，該反應濃縮，溶于CH2Cl2(50mL)并用5％NaHCO3(50mL)洗滌。干燥有機層(MgSO4)，過濾和減壓下濃縮。將所得游離胺溶于無水的THF(10mL)且用羰基二咪唑(0.31g，1.93mmol)處理。所得溶液回流小時直至完成。濃縮該反應，溶于EtOAc(50mL)和用H2O和鹽水洗滌。干燥合并的有機層(MgSO4)并濃縮。將粗?；溥蛉苡跓o水CH3CN且用MeI(2.2mL，36mmol)處理。所得溶液在25℃下攪拌過夜。完成后，該反應濃縮得到6-6，其為橙色固體LRMSm/z(M+H) 實測值365.9，理論值366.1。
路線7 (2S)-4-(2，5-二氟苯基)-N[(3R，4S)-3-氟-1-甲基哌啶-4-基]-N-甲基-2-苯基-2，5-二氫-1H-吡咯-1-羧酰胺(7-1)向75mg(0.15mmol)6-6在1mL THF中的溶液內(nèi)加入40mg(0.18mmol)胺2-5的二-HCl鹽和106L(0.76mmol)三乙胺。室溫下攪拌72小時，該反應在CH2Cl2和飽和NaHCO3水溶液之間分配，有機物用鹽水洗滌，用MgSO4干燥和通過旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮。殘余物通過硅膠色譜用80∶10∶10CHCl3/EtOAc/MeOH純化得到7-1，其為白色固體。7-1的數(shù)據(jù)HRMS(ES) C24H26F3N3O的M+H計算值430.2101.實測值430.2116。
(2S)-4-(2，5-二氟苯基)-N-[(3S，4R)-3-氟-1-甲基哌啶-4-基]-N-甲基-2-苯基-2，5-二氫-1H-吡咯-1-羧酰胺(7-2)
該化合物按照類似于7-1的方式制備，用4-1替代作為起始原料。7-2的數(shù)據(jù)HRMS(ES) C24H26F3N3O的M+H計算值430.2101.實測值430.2119。
(2S)-4-(2，5-二氟苯基)-N-[(3R，4R)-3-氟-1-甲基哌啶-4-基]-N-甲基-2-苯基-2，5-二氫-1H-吡咯-1-羧酰胺(7-3)該化合物按照類似于7-1的方式制備，用5-1替代作為起始原料。7-3的數(shù)據(jù)RMS(ES)C24H26F3N3O的M+H計算值2101.實測值430.2115?；衔?-3的哌啶的絕對立體化學還未測定但所示的立體化學已經(jīng)通過試驗確定。
下列化合物通過路線1-7和路線G-N所示的方法的簡單改進來制備，但用適當取代的試劑替換上述路線所使用的那些時間。






路線8 4-[(叔丁氧基羰基)(甲基)氨基1-2-(羥基甲基)哌啶-1-羧酸芐酯(8-2)向2.0g(6.8mmol)8-1(報告在S.J.Hayes，T.C.Malone，G.Johnson J.Org.Chem.1991，56，4084-4086)在100mL CH2Cl2中的溶液內(nèi)加入3.33mL(23.9mmol)三乙胺，隨后滴加存在于50mL DMSO中的2.44g(15.4mmol)SO3-吡啶。室溫下攪拌5小時后，該混和物在CH2Cl2和H2O之間分配，分離各相，用2×1M HCl、飽和NaHCO3水溶液、鹽水洗滌，用MgSO4干燥并濃縮得到酮。向2.1g(7.2mmol)溶于35mLMeOH中的該酮內(nèi)加入1mL AcOH和14.4mL(28.9mmol)的MeNH2在MeOH中的2M溶液。攪拌1小時后，加入910mg(14.4mmol)5mL MeOH中的NaCNBH3并且將該反應攪拌過夜。該反應用飽和NH4C1水溶液猝滅，用CH2Cl2萃取，用NaHCO3、H2O、鹽水洗滌，用MgSO4干燥和濃縮得到2.0g(7.2mmol)胺。將該物質(zhì)溶于25mL CH2Cl2，加入1.78g(8.2mmol)的二碳酸二叔丁酯和1.8mL(12.9mmol)三乙胺，并且將所得混和物攪拌72小時。該反應隨后在CH2Cl2和飽和NaHCO3水溶液分配，分離，用H2O洗滌，鹽水，用MgSO4干燥并濃縮。殘余物通過硅膠色譜用EtOAc/己烷純化得到1.85g(4.6mmol)非對映異構(gòu)體的混和物。將其溶于20mL THF和1mL of MeOH，冷卻至0℃且加入496mg(22.8mmol)LiBH4。升至室溫并攪拌過夜后，該反應用飽和NH4C1水溶液猝滅，用EtOAc萃取，用H2O、鹽水洗滌，用MgSO4干燥和濃縮得到8-2，其為無色膠。8-2的數(shù)據(jù)LRMS(ES)C20H30N2O5的M+H計算值379.實測值379。甲基氨基甲酸叔丁酯(8-3)向1.08g(2.9mmol)存在于30mL EtOH中的8-2加入7mL(74mmol)的1，4-換己二烯和催化量的10％碳載Pd。攪拌過夜后，該反應經(jīng)硅藻土過濾，通過旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮，并溶于25mL MeOH。向其中加入2mLAcOH和700μL(8.6mmol)37％甲醛水溶液。攪拌過夜后，加入540mg(8.6mmol)存在于5mL MeOH中的NaCNBH3且將該反應攪拌1小時。通過旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去溶劑，殘余物在EtOAc和NaHCO3水溶液之間分配，有機相用鹽水洗滌，用Na2SO4干燥并濃縮。殘余物溶于CH2Cl2，過濾和濃縮得到8-3，其為無色油。8-3的數(shù)據(jù)LRMS(ES)C13H26N2O3的M+H計算值259.實測值259.甲基氨基甲酸叔丁酯(8-4)和(6-氟-1-甲基氮雜環(huán)庚胺-4-基)甲基氨基甲酸叔丁酯(8-5)向350μL(2.6mmol)(二乙基氨基)三氟化硫(DAST)在15mL CH2Cl2中的溶液內(nèi)在-78℃下加入存在于5mL CH2Cl2中的520mg(2.0mmol)。令該反應緩慢升至室溫且攪拌過夜和隨后用冰水猝滅。該混和物在另外的CH2Cl2和少量3M KOH之間分配，有機相用水洗滌，用Na2SO4干燥并濃縮。將殘余物加載在硅膠柱上且用EtOAc-20∶1∶1EtOH/NH4OH/H2O。洗脫的第一產(chǎn)物是擴環(huán)產(chǎn)物8-5，其為無色油，并且洗脫的第二產(chǎn)物是8-4，其為無色油。8-5和8-4兩者分離為trans非對映異構(gòu)體的對映異構(gòu)體混和物。該結(jié)構(gòu)通過大量1D和2D NMR光譜來確定的。8-5的數(shù)據(jù)1H NMR(600MHz，CD2Cl2)δ4.75(m，1H)，4.1-3.9(m，1H)，2.9-2.7(m，3H)，2.75(s，3H)，2.4(s，3H)，2.35(m，1H)，2.1-1.7(m，4H)，1.4(s，9H)ppm。8-4的數(shù)據(jù)1H NMR(500MHz，CD2Cl2)δ4.8-4.5(m，2H)，4.1-4.0(m，1H)，3.2(m，1H)，2.75(m，2H)，2.7(s，3H)，2.45(s，3H)，1.9-1.5(m，4H)，1.45(s，9H)ppm。
(25)-4-(2，5-二氟苯基)-N-[(2R，4R)-2-(氟甲基)-1-甲基哌啶-4-基]-2-(羥基甲基)-N-甲基-2-苯基-2，5-二氫-1H-吡咯-1-羧酰胺(8-6a)和(2S)-4-(2，5-二氟苯基)-N-[(2S，4S)-2-(氟甲基)-1-甲基哌啶-4-基]-2-(羥基甲基)-N-甲基-2-苯基-2，5-二氫-1H-吡咯-1-羧酰胺(8-6b)將80mg(0.31mmol)8-4在30mL EtOAc中的溶液用HCl氣體保護且在室溫下攪拌1小時。該反應隨后通過旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮且所得白色固體懸浮在1mL THF中。向其中加入156mg(0.34mmol)的1-9，268L(1.54mmol)二異丙基乙基胺和催化量的DMAP。50℃下加熱過夜后，加入500μL三氟乙酸且在室溫下持續(xù)攪拌，之后用飽和NaHCO3水溶液猝滅。該混和物在CH2Cl2之間分配，有機相用鹽水洗滌，用MgSO4干燥，并濃縮。將殘余物加載在硅膠柱上且用CHCl3-80∶10∶10CHCl3/EtOAc/MeOH洗脫得到8-6a和8-6b，其為不可分混和物-無色膠。8-6a/8-6b的數(shù)據(jù)HRMS(ES)C26H30F3N3O2的M+H計算值474.2363.實測值474.2374。
下列化合物通過路線1-8和路線G-N所示的方法的簡單改進來制備，但用適當取代的試劑替換該路線所使用的那些試劑。






路線9 (2S)-4-(2，5-二氟苯基)-N-[(3R，4S)-3-氟-1-甲基-1-氧橋哌啶-4-基]-2-(羥基甲基)-N-甲基-2-苯基-2，5-二氫-1H-吡咯-1-羧酰胺(9-1)向20mg(0.044mmol)3-1在1mL CH2Cl2中的溶液內(nèi)于0℃下加入11mg(～0.048mmol)的mCPBA。撤去冰浴且將該反應攪拌30分鐘。該混和物在EtOAc和飽和NaHCO3水溶液之間分配，分離，用H2O、鹽水洗滌，用Na2SO4干燥和通過旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮。將殘余物加載在硅膠柱上且用EtOAc-20∶1∶1 EtOH/NH4OH/H2O洗脫得到9-1，其為白色泡沫。9-1的數(shù)據(jù)1H NMR(500MHz，CDCl3)δ7.4-7.2(m，5H)，7.1-6.9(m，3H)，6.25(s，1H)，5.0-4.9(m，2H)，4.7(m，1H)，4.5(m，1H)，4.3-4.2(m，1H)，4.0(m，2H)，3.7(m，1H)，3.4-3.3(m，2H)，3.3(s，3H)，3.2(s，3H)，2.5-1.9(bs，2H)，1.8(m，1H)ppm.HRMS(ES)C25H28F3N3O3的M+H計算值476.2156；實測值476.2165。
路線10 步驟1(3R，4S)-4-[{[(2S)-4-(2，5-二氟苯基)-2-(羥甲基)-2-苯基-2，5-二氫-1H-吡咯-1-基]羰基}(甲基)氨基]-3-氟哌啶-1-羧酸芐酯(10-1)向885mg(2.4mmol)2-3(從色譜洗脫的第一異構(gòu)體)在12mLEtOAc中的溶液內(nèi)于0℃下加入12mL(48mmol)HCl在二惡烷中的4M溶液。撤去冰浴，持續(xù)攪拌2小時，并且隨后通過旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去揮發(fā)物。殘余物在EtOAc和含5mL 1M NaOH的飽和NaHCO3水溶液之間分配，分離并且水相用2x EtOAc萃取。合并的有機萃取液再次用NaHCO3、鹽水處理，用Na2SO4干燥并且濃縮得到590mg(2.2mmol)的胺。向215mg(0.81mmol)存在于5mL THF中的該物質(zhì)內(nèi)加入340mg(0.73mmol)1-9，306μL(2.2mmol)三乙胺和催化量的DMAP。攪拌過夜后，該反應通過LC/MS判斷完成～40％，加入另一部分的DMAP。該反應隨后在EtOAc和飽和NaHCO3之間分配，有機相用NaHCO3、H2O、鹽水洗滌，用Na2SO4干燥且濃縮。殘余物通過硅膠色譜用EtOAc/己烷純化得到10-1，其為無色油。10-1的數(shù)據(jù)LRMS(ES)C38H46F3N3O4Si的M+H計算值694.4.實測值694.3.
步驟2(2S)-4-(2，5-二氟苯基)-N-[(3R，4S)-3-氟哌啶-4-基]-2-羥甲基)-N-甲基-2-苯基-2，5-二氫-1H-吡咯-1-羧酰胺(10-2)向405mg(0.58mmol)10-1在4mL EtOH中的溶液內(nèi)加入1.38mL(14.6mmol)1，4-環(huán)己二烯、100mg 10％碳載鈀，并且隨后攪拌過夜。該反應經(jīng)硅藻土過濾，濃縮且將殘余物溶于3mL CH2Cl2。向其中加入3mL三氟乙酸，持續(xù)攪拌1小時，并且隨后該混和物在EtOAc和飽和NaHCO3+25mL的5％Na2CO3水溶液之間分配。有機相用NaHCO3洗滌，再用H2O、鹽水洗滌，用Na2SO4干燥且通過旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮。殘余物加載在硅膠柱上且用EtOAc-20∶1∶1EtOH/NH4OH/H2O洗脫得到10-2，其為白色固體。-5％的雜質(zhì)隨后通過反相色譜用95∶5-5∶95H2O/CH3CN(兩者含有0.1％TFA)除去。餾分用NaHCO3堿化得到純的B-2，其為白色固體。10-2的數(shù)據(jù)1H NMR(500MHz，CDCl3)δ7.4-7.2(m，5H)，7.1-6.9(m，3H)，6.3(s，1H)，5.2(bs，1H)，4.9(m，1H)，4.8-4.6(m，2H)，4.45(m，1H)，4.2-4.1(m，1H)，4.0(m，1H)，3.3-3.2(m，2H)，3.1(s，3H)，2.85-2.7(m，2H)，2.1(m，1H)，1.7(m，2H)ppm.HRMS(ES)C24H26F3N3O2的M+H計算值446.2050.實測值446.2059.
路線11 (2S)-4-(2，5-二氟苯基)-N-[(3R，4S)-3-氟-1-異丙基哌啶-4-基]-2-(羥基甲基)-N-甲基-2-苯基-2.5-二氫-1H-吡咯-1-羧酰胺(11-1)向38mg(0.085mmol)10-2在1mL 1，2-二氯乙烷中的溶液內(nèi)加入20ml(0.34mmol)的乙酸、25L(0.34mmol)丙酮和27mg(0.13mmol)Na(OAc)3BH。攪拌過夜后，該反應在EtOAc和飽和NaHCO3水溶液之間分配，有機相再次用NaHCO3、H2O、鹽水洗滌，用Na2SO4干燥和通過旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮。殘余物通過反相色譜用95∶5-5∶95H2O/CH3CN(兩者含有0.1％TFA)純化。餾分用NaHCO3堿化得到11-1，其為無色莫。11-1的數(shù)據(jù)1H NMR(500MHz，CDCl3)δ7.4-7.2(m，5H)，7.1-6.9(m，3H)，6.3(s，1H)，5.3(m，1H)，4.95-4.8(m，2H)，4.6(m，1H)，4.45(m，1H)，4.1-4.0(m，2H)，3.2(m，1H)，3.15(s，3H)，3.0(m，1H)，2.8(m，1H)，2.45-2.25(m，3H)，1.75(m，1H)，1.1-1.0(m，6H)ppm.HRMS(ES) C27H32F3N3O2的M+H488.2519.實測值488.2517。
路線12
(2S)-4-(2，5-二氟苯基)-N-[(3S，4R)-3-氟哌啶-4-基]-2-(羥基甲基)-N-甲基-2-苯基-2，5-二氫-1H-吡咯-1-羧酰胺(12-1)該化合物以與10-2相同的方式制備，但除了增加2-3的對映異構(gòu)體之外。12-1的數(shù)據(jù)HRMS(ES) C24H26F3N3O2的M+H計算值446.2050.實測值446.2069。
(2S)-4-(2，5-二氟苯基)-N-[(3R，4R)-3-氟哌啶-4-基]-2-(羥基甲基)-N-甲基-2-苯基-2，5-二氫-1H-吡咯-1-羧酰胺(12-2)該化合物以與10-2相同的方式制備，但除了合成中增加2-2a的trans異構(gòu)體之外?！錿rans-2-3″的對映異構(gòu)體通過色譜利用Chiralpak AD_10×50cm柱和含15％EtOH的己烷(含0.1％二乙胺)以150mL/min進行拆分。洗脫液在4×250mm Chiralpak AD_柱和含15％EtOH的己烷(含0.1％二乙胺)以1mL/min的分析HPLC施用證實，第一洗脫的對映異構(gòu)體具有Rt＝7.30分鐘和第二對映異構(gòu)體具有Rt＝11.59分鐘。該第一洗脫的對映異構(gòu)體(具有未知的絕對立體化學)進一步經(jīng)過處理得到trans胺，將其增加到12-2的合成中按照與路線10所示的相同路線。12-2的數(shù)據(jù)HRMS(ES)C24H26F3N3O2的M+H計算值446.2050.實測值446.2069。
化合物12-2和12-3的哌啶的絕對立體化學未經(jīng)測定但所示的立體化學已經(jīng)通過施用確定。
(2S)-4-(2，5-二氟苯基)-N-[(3S，4S)-3-氟哌啶4-基]-2-(羥基甲基)-N-甲基-2-苯基-2，5-二氫-1H-吡咯-1-羧酰胺(12-3)本化合物以與10-2相同的方式制成，并且除了增加從手性柱分離″trans-2-3″的第二洗脫異構(gòu)體。12-3的數(shù)據(jù)HRMS(ES)C24H26F3N3O2的M+H計算值446.2050.實測值446.2068。
序列表<110>Merck&Co.，Inc.
Coleman，Paul J.
Cox，Christopher D.
Garbaccio，Robert M.
Hartman，George D.
<120>有絲分裂驅(qū)動蛋白抑制劑<130>21481Y<150>60/495,637<151>2003-08-15<150>60/563,580<151>2004-04-19<160>2<170>FastSEQ視窗第4.0版<210>1<211>42<212>DNA<213>人工序列<220>
<223>全合成核苷酸序列<400>1gcaacgatta atatggcgtc gcagccaaat tcgtctgcga ag42<210>2<211>60<212>DNA<213>人工序列<220>
<223>全合成核苷酸序列<400>2
gcaacgctcg agtcagtgat gatggtggtg atgctgattc acttcaggct tattcaatat 60
權利要求
1.式I的化合物 或其藥學可接受鹽或立體異構(gòu)體，其中a是0或1；b是0或1；m是0，1或2；n是0，1，2或3；r是0或1；s是0或1；t是0，1或2；u是0或1；R1和R2獨立地選自H，(C1-C6)烷基，芳基，雜環(huán)基和(C3-C6)環(huán)烷基，任選地被1、2或3個選自R7的取代基取代；R3選自1)氫；2)C1-C10烷基；3)C1-C10烷基-O-Rd，4)C2-C10鏈烯基-O-Rd，5)C2-C10鏈炔基-O-Rd，6)(C1-C6-亞烷基)nC3-C8環(huán)烷基-O-Rd，7)C1-C10烷基-(C＝O)b-NRcRc′，8)C2-C10鏈烯基-(C＝O)bNRcRc′，9)C2-C10鏈炔基-(C＝O)bNRcRc′，10)(C1-C6-亞烷基)nC3-C8環(huán)烷基-(C＝O)bNRcRc′，11)C1-C10烷基-S(O)m-Rd，12)C2-C10鏈烯基-S(O)m-Rd，13)C2-C10鏈炔基-S(O)m-Rd，14)(C1-C6-亞烷基)nC3-C8環(huán)烷基-S(O)m-Rd，該烷基，鏈烯基，鏈炔基和環(huán)烷基任選地被一個或多個選自R6的取代基取代；R4獨立地選自1)(C＝O)aObC1-C10烷基，2)(C＝O)aOb芳基，3)CO2H，4)鹵素，5)CN，6)OH，7)ObC1-C6全氟烷基，8)Oa(C＝O)bNR8R9，9)S(O)mRa，10)S(O)2NR8R9，和11)-OPO(OH)2；該烷基，芳基，鏈烯基，鏈炔基，雜環(huán)基和環(huán)烷基任選地被1、2和3個選自R7的取代基取代；R5選自1)氫；2)(C＝O)aObC1-C10烷基，3)(C＝O)aOb芳基，4)CO2H，5)鹵素，6)CN，7)OH，8)ObC1-C6全氟烷基，9)Oa(C＝O)bNR8R9，10)S(O)mRa，11)S(O)2NR8R9，和12)-OPO(OH)2；該烷基，芳基，鏈烯基，鏈炔基，雜環(huán)基和環(huán)烷基任選地被1、2和3個選自R7的取代基取代；R6獨立地選自1)(C＝O)aObC1-C10烷基，2)(C＝O)aOb芳基，3)C2-C10鏈烯基，4)C2-C10鏈炔基，5)(C＝O)aOb雜環(huán)基，6)CO2H，7)鹵素，8)CN，9)OH，10)bC1-C6全氟烷基，11)Oa(C＝O)bNR8R9，12)S(O)mRa，13)S(O)2NR8R9，14)氧代，15)CHO，16)(N＝O)R8R9，17)(C＝O)aObC3-C8環(huán)烷基，和18)-OPO(OH)2；該烷基，芳基，鏈烯基，鏈炔基，雜環(huán)基和環(huán)烷基任選地被1、2和3個選自R7的取代基取代；R7選自1)(C＝O)rOs(C1-C10)烷基，2)Or(C1-C3)全氟烷基，3)氧代，4)OH，5)鹵素，6)CN，7)(C2-C10)鏈烯基，8)(C2-C10)鏈炔基，9)(C＝O)rOs(C3-C6)環(huán)烷基，10)(C＝O)rOs(C0-C6)亞烷基-芳基，11)(C＝O)rOs(C0-C6)亞烷基-雜環(huán)基，12)(C＝O)rOs(C0-C6)亞烷基-N(Rb)2，13)C(O)Ra，14)(C0-C6)亞烷基-CO2Ra，15)C(O)H，16)(C0-C6)亞烷基-CO2H，和17)(C＝O)rN(Rb)2，18)S(O)mRa，19)S(O)2N(Rb)2；和20)-OPO(OH)2；該烷基，鏈烯基，鏈炔基，環(huán)烷基，芳基，亞烷基和雜環(huán)基任選地被至多3個選自Rb，OH，(C1-C6)烷氧基，鹵素，CO2H，CN，O(C＝O)C1-C6烷基，氧代，NO2和N(Rb)2的取代基取代；R8和R9獨立地選自1)H，2)(C＝O)ObC1-C10烷基，3)(C＝O)ObC3-C8環(huán)烷基，4)(C＝O)Ob芳基，5)(C＝O)Ob雜環(huán)基，6)C1-C10烷基，7)芳基，8)C2-C10鏈烯基，9)C2-C10鏈炔基，10)雜環(huán)基，11)C3-C8環(huán)烷基，12)SO2Ra，和13)(C＝O)NRb2，該烷基，環(huán)烷基，芳基，雜環(huán)基，鏈烯基，和鏈炔基任選地被1、2和3個選自R7的取代基取代，或R8和R9可以與其所連的氮一起構(gòu)成單環(huán)或雙環(huán)雜環(huán)同時各環(huán)具有3-7員和除該氮以外，任選地含有1或2個選自N、O或S的附加雜原子，該單環(huán)或雙環(huán)雜環(huán)任選地被1、2或3個選自R7的取代基取代；R10和R11獨立地選自F和-CH2F；R12和R13獨立地選自H和-CH2F；Rox不存在或是氧代；Ra獨立地選自(C1-C6)烷基，(C3-C6)環(huán)烷基，芳基或雜環(huán)基，任選地被1、2或3個選自R7的取代基取代；Rb獨立地選自H，(C1-C6)烷基，芳基，雜環(huán)基，(C3-C6)環(huán)烷基，(C＝O)OC1-C6烷基，(C＝O)C1-C6烷基，(C＝O)芳基，(C＝O)雜環(huán)基，(C＝O)NReRe′或S(O)2Ra，任選地被1、2或3個選自R7的取代基取代；Rc和Rc′獨立地選自H，(C1-C6)烷基，芳基，NH2，OH，ORa，-烷基-OH，-(C1-C6)烷基-O-(C1-C6)烷基，(C＝O)OC1-C6烷基，(C＝O)C1-C6烷基，(C＝O)芳基，(C＝O)雜環(huán)基，(C＝O)NReRe′，S(O)2Ra和-烷基-N(Rb)2，其中該烷基任選地被1、2或3個選自R7的取代基取代；或Rc和Rc′可以與其所連的氮一起構(gòu)成單環(huán)或雙環(huán)雜環(huán)同時各環(huán)具有3-7員和除該氮以外，任選地含有1或2個選自N、O或S的附加雜原子，該單環(huán)或雙環(huán)雜環(huán)任選地被1、2或3個選自R7的取代基取代；Rd選自H，(C1-C6)烷基，-(C2-C6)烷基-OH，-(C1-C6)烷基-O-(C1-C6)烷基和-(C1-C6)烷基-N(Rb)2，其中該烷基任選地被1、2或3個選自R7的取代基取代；Re和Re′獨立地選自H，(C1-C6)烷基，芳基，雜環(huán)基和(C3-C6)環(huán)烷基，任選地被1、2或3個選自R7的取代基取代；或Re和Re′可以與其所連的氮一起構(gòu)成單環(huán)或雙環(huán)雜環(huán)同時各環(huán)具有3-7員和除該氮以外，任選地含有1或2個選自N、O或S的附加雜原子，該單環(huán)或雙環(huán)雜環(huán)任選地被1、2和3個選自R7的取代基取代。
2.權利要求1的式II的化合物 或其藥學可接受鹽或立體異構(gòu)體，其中a是0或1；b是0或1；m是0，1，或2；n是0，1，2或3；r是0或1；s是0或1；t是0或1；R1和R2獨立地選自H，(C1-C6)烷基，芳基，雜環(huán)基和(C3-C6)環(huán)烷基，任選地被1、2或3個選自R7的取代基取代；R3選自1)氫；2)C1-C10烷基；3)C1-C10烷基-O-Rd，4)C2-C10鏈烯基-O-Rd，5)C2-C10鏈炔基-O-Rd，6)(C1-C6-亞烷基)nC3-C8環(huán)烷基-O-Rd，7)C1-C10烷基-(C＝O)b-NRcRc′，8)C2-C10鏈烯基-(C＝O)bNRCRc′，9)C2-C10鏈炔基-(C＝O)bNRcRc′，10)(C1-C6-亞烷基)nC3-C8環(huán)烷基-(C＝O)bNRcRc′，11)C1-C10烷基-S(O)m-Rd，12)C2-C10鏈烯基-S(O)mRd，13)C2-C10鏈炔基-S(O)m-Rd，14)(C1-C6-亞烷基)nC3-C8環(huán)烷基-S(O)mRd，該烷基，鏈烯基，鏈炔基和環(huán)烷基任選地被一個或多個選自R6的取代基取代；R4獨立地選自1)(C＝O)aObC1-C10烷基，2)(C＝O)aOb芳基，3)CO2H，4)鹵素，5)CN，6)OH，7)ObC1-C6全氟烷基，8)Oa(C＝O)bNR8R9，9)S(O)mRa，10)S(O)2NR8R9，該烷基，芳基，鏈烯基，鏈炔基，雜環(huán)基和環(huán)烷基任選地被1、2和3個選自R7的取代基取代；R5選自1)氫；2)(C＝O)aObC1-C10烷基，3)(C＝O)aOb芳基，4)CO2H，5)鹵素，6)CN，7)OH，ObC1-C6全氟烷基，9)Oa(C＝O)bNR8R9，10)S(O)mRa，11)S(O)2NR8R9，和12)-OPO(OH)2；該烷基，芳基，鏈烯基，鏈炔基，雜環(huán)基和環(huán)烷基任選地被1、2和3個選自R7的取代基取代；R6獨立地選自1)(C＝O)aObC1-C10烷基，2)(C＝O)aOb芳基，3)C2-C10鏈烯基，4)C2-C10鏈炔基，5)(C＝O)aOb雜環(huán)基，6)CO2H，7)鹵素，8)CN，9)OH，10)ObC1-C6全氟烷基，11)Oa(C＝O)bNR8R9，12)S(O)mRa，13)S(O)2NR8R9，14)氧代，15)CHO，16)(N＝O)R8R9，17)(C＝O)aObC3-C8環(huán)烷基，和18)-OPO(OH)2；該烷基，芳基，鏈烯基，鏈炔基，雜環(huán)基和環(huán)烷基任選地被1、2或3個選自R7的取代基取代；R7選自1)(C＝O)rOs(C1-C10)烷基，2)Or(C1-C3)全氟烷基，3)氧代，4)OH，5)鹵素，6)CN，7)(C2-C10)鏈烯基，8)(C2-C10)鏈炔基，9)(C＝O)rOs(C3-C6)環(huán)烷基，10)(C＝O)rOs(C0-C6)亞烷基-芳基，11)(C＝O)rOs(C0-C6)亞烷基-雜環(huán)基，12)(C＝O)rOs(C0-C6)亞烷基-N(Rb)2，13)C(O)Ra，14)(C0-C6)亞烷基-CO2Ra，15)C(O)H，16)(C0-C6)亞烷基-CO2H，17)C(O)N(Rb)2，18)S(O)mRa，19)S(O)2N(Rb)2；和20)-OPO(OH)2；該烷基，鏈烯基，鏈炔基，環(huán)烷基，芳基，亞烷基和雜環(huán)基任選地被至多3個選自Rb，OH，(C1-C6)烷氧基，鹵素，CO2H，CN，O(C＝O)C1-C6烷基，氧代，NO2和N(Rb)2的取代基取代；R8和R9獨立地選自1)H，2)(C＝O)ObC1-C10烷基，3)(C＝O)ObC3-C8環(huán)烷基，4)(C＝O)Ob芳基，5)(C＝O)Ob雜環(huán)基，6)C1-C10烷基，7)芳基，8)C2-C10鏈烯基，9)C2-C10鏈炔基，10)雜環(huán)基，11)C3-C8環(huán)烷基，12)SO2Ra，和13)(C＝O)NRb2，該烷基，環(huán)烷基，芳基，雜環(huán)基，鏈烯基和鏈炔基任選地被1、2或3個選自R7的取代基取代，或R8和R9可以與其所連的氮一起構(gòu)成單環(huán)或雙環(huán)雜環(huán)同時各環(huán)具有3-7員和除該氮以外，任選地含有1或2個選自N、O或S的附加雜原子，該單環(huán)或雙環(huán)雜環(huán)任選地被1、2或3個選自R7的取代基取代；R10選自F和-CH2F；R13選自H和-CH2F，條件是如果t是1，則R13是H；Rox不存在或是氧代；Ra獨立地選自(C1-C6)烷基，(C3-C6)環(huán)烷基，芳基或雜環(huán)基，任選地被1、2或3個選自R7的取代基取代；Rb獨立地選自H，(C1-C6)烷基，芳基，雜環(huán)基，(C3-C6)環(huán)烷基，(C＝O)OC1-C6烷基，(C＝O)C1-C6烷基，(C＝O)芳基，(C＝O)雜環(huán)基，(C＝O)NReRe′或S(O)2Ra，任選地被1、2或3個選自R7的取代基取代；Rc和Rc′獨立地選自H，(C1-C6)烷基，芳基，NH2，OH，ORa，.-(C1-C6)烷基-OH，-(C1-C6)烷基-O-(C1-C6)烷基，(C＝O)OC1-C6烷基，(C＝O)C1-C6烷基，(C＝O)芳基，(C＝O)雜環(huán)基，(C＝O)NReRe′，S(O)2Ra和-(C1-C6)烷基-N(Rb)2，其中該烷基任選地被1、2或3個選自R7的取代基取代；或Rc和Rc′可以與其所連的氮一起構(gòu)成單環(huán)或雙環(huán)雜環(huán)同時各環(huán)內(nèi)具有3-7員和除該氮以外，任選地含有1或2個選自N、O或S的附加雜原子，該單環(huán)或雙環(huán)雜環(huán)任選地被1、2和3個選自R7的取代基取代；Rd選自H，(C1-C6)烷基，-(C2-C6)烷基-OH，-(C1-C6)烷基-O-(C1-C6)烷基和-(C1-C6)烷基-N(Rb)2，其中該烷基任選地被1、2或3個選自R7的取代基取代；Re和Re′獨立地選自H，(C1-C6)烷基，芳基，雜環(huán)基和(C3-C6)環(huán)烷基，任選地被1、2和3個選自R7的取代基取代；或Re和Re′可以與其所連的氮一起構(gòu)成單環(huán)或雙環(huán)雜環(huán)同時各環(huán)具有3-7員和除該氮以外，任選地含有1或2個選自N、O或S的附加雜原子，該單環(huán)或雙環(huán)雜環(huán)任選地被1、2和3個選自R7的取代基取代。
3.權利要求2的式III的化合物 或其藥學可接受鹽或立體異構(gòu)體，其中a是0或1；b是0或1；m是0，1或2；n是0，1或2；r是0或1；s是0或1；R1和R2獨立地選自H，(C1-C6)烷基，芳基和(C3-C6)環(huán)烷基，任選地被1、2或3個選自R7的取代基取代；R4獨立地選自1)鹵素，2)OH，3)ObC1-C6全氟烷基，R5選自1)氫，2)鹵素，3)OH，4)ObC1-C6全氟烷基，R7選自1)(C＝O)rOs(C1-C10)烷基，2)Or(C1-C3)全氟烷基，3)氧代，4)OH，5)鹵素，6)CN，7)(C2-C10)鏈烯基，8)(C2-C10)鏈炔基，9)(C＝O)rOs(C3-C6)環(huán)烷基，10)(C＝O)rOs(C0-C6)亞烷基-芳基，11)(C＝O)rOs(C0-C6)亞烷基-雜環(huán)基，12)(C＝O)rOs(C0-C6)亞烷基-N(Rb)2，13)C(O)Ra，14)(C0-C6)亞烷基-CO2Ra，15)C(O)H，16)(C0-C6)亞烷基-CO2H，和17)C(O)N(Rb)2，18)S(O)mRa，和19)S(O)2N(Rb)2；該烷基，鏈烯基，鏈炔基，環(huán)烷基，芳基，亞烷基和雜環(huán)基任選地被至多3個選自Rb，OH，(C1-C6)烷氧基，鹵素，CO2H，CN，O(C＝O)C1-C6烷基，氧代，NO2和N(Rb)2的取代基取代；R8和R9獨立地選自1)H，2)(C＝O)ObC1-C10烷基，3)(C＝O)ObC3-C8環(huán)烷基，4)(C＝O)Ob芳基，5)(C＝O)Ob雜環(huán)基，6)C1-C10烷基，7)芳基，8)C2-C10鏈烯基，9)C2-C10鏈炔基，10)雜環(huán)基，11)C3-C8環(huán)烷基，12)SO2Ra，和13)(C＝O)NRb2，該烷基，環(huán)烷基，芳基，雜環(huán)基，鏈烯基和鏈炔基任選地被1、2和3個選自R7的取代基取代，或R8和R9可以與其所連的氮一起構(gòu)成單環(huán)或雙環(huán)雜環(huán)同時各環(huán)具有3-7員和除該氮以外，任選地含有1或2個選自N、O或S的附加雜原子，該單環(huán)或雙環(huán)雜環(huán)任選地被1、2和3個選自R7的取代基取代；Ra獨立地選自(C1-C6)烷基，(C3-C6)環(huán)烷基，芳基或雜環(huán)基，任選地被1、2或3個選自R7的取代基取代；Rb獨立地選自H，(C1-C6)烷基，芳基，雜環(huán)基，(C3-C6)環(huán)烷基，(C＝O)OC1-C6烷基，(C＝O)C1-C6烷基，(C＝O)芳基，(C＝O)雜環(huán)基，(C＝O)NReRe′或S(O)2Ra，任選地被1、2或3個選自R7的取代基取代；Rc和Rc′獨立地選自H，(C1-C6)烷基，芳基，NH2，OH，ORa，-烷基-OH，-(C1-C6)烷基-O-(C1-C6)烷基，(C＝O)OC1-C6烷基，(C＝O)C1-C6烷基，(C＝O)芳基，(C＝O)雜環(huán)基，(C＝O)NReRe′，S(O)2Ra和-(C1-C6)烷基-N(Rb)2，其中該烷基任選地被1、2或3個選自R7的取代基取代；或Rc和Rc′可以與其所連的氮一起構(gòu)成單環(huán)或雙環(huán)雜環(huán)同時各環(huán)具有3-7員和除該氮以外，任選地含有1或2個選自N、O或S的附加雜原子，該單環(huán)或雙環(huán)雜環(huán)任選地被1、2或3個選自R7的取代基取代；Re和Re′獨立地選自H，(C1-C6)烷基，芳基，雜環(huán)基和(C3-C6)環(huán)烷基，任選地被1、2或3個選自R7的取代基取代；或Re和Re′可以與其所連的氮一起構(gòu)成單環(huán)或雙環(huán)雜環(huán)同時各環(huán)具有3-7員和除該氮以外，任選地含有1或2個選自N、O或S的附加雜原子，該單環(huán)或雙環(huán)雜環(huán)任選地被1、2和3個選自R7的取代基取代。
4.權利要求3的式IV的化合物 或其藥學可接受鹽或立體異構(gòu)體，其中a是0或1；b是0或1；m是0，1或2；r是0或1；s是0或1；R1和R2獨立地選自H和(C1-C6)烷基，任選地被1、2或3個選自R7的取代基取代；R4獨立地選自1)鹵素，2)OH，3)ObC1-C6全氟烷基，R7選自1)(C＝O)rOs(C1-C10)烷基，2)Or(C1-C3)全氟烷基，3)氧代，4)OH，5)鹵素，6)CN，7)(C2-C10)鏈烯基，8)(C2-C10)鏈炔基，9)(C＝O)rOs(C3-C6)環(huán)烷基，10)(C＝O)rOs(C0-C6)亞烷基-芳基，11)(C＝O)rOs(C0-C6)亞烷基-雜環(huán)基，12)(C＝O)rOs(C0-C6)亞烷基-N(Rb)2，13)C(O)Ra，14)(C0-C6)亞烷基-CO2Ra，15)C(O)H，16)(C0-C6)亞烷基-CO2H，和17)C(O)N(Rb)2，18)S(O)mRa，和19)S(O)2N(Rb)2；該烷基，鏈烯基，鏈炔基，環(huán)烷基，芳基，亞烷基和雜環(huán)基任選地被至多3個選自Rb，OH，(C1-C6)烷氧基，鹵素，CO2H，CN，O(C＝O)C1-C6烷基，氧代，NO2和N(Rb)2的取代基取代；R8和R9獨立地選自1)H，2)(C＝O)ObC1-C10烷基，3)(C＝O)ObC3-C8環(huán)烷基，4)(C＝O)Ob芳基，5)(C＝O)Ob雜環(huán)基，6)C1-C10烷基，7)芳基，8)C2-C10鏈烯基，9)C2-C10鏈炔基，10)雜環(huán)基，11)C3-C8環(huán)烷基，12)SO2Ra，和13)(C＝O)NRb2，該烷基，環(huán)烷基，芳基，雜環(huán)基，鏈烯基和鏈炔基任選地被1、2或3個選自R7的取代基取代，或R8和R9可以與其所連的氮一起構(gòu)成單環(huán)或雙環(huán)雜環(huán)同時各環(huán)具有3-7員和除該氮以外，任選地含有1或2個選自N、O或S的附加雜原子，該單環(huán)或雙環(huán)雜環(huán)任選地被1、2和3個選自R7的取代基取代；Ra獨立地選自(C1-C6)烷基，(C3-C6)環(huán)烷基，芳基或雜環(huán)基，任選地被1、2或3個選自R7的取代基取代；Rb獨立地選自H，(C1-C6)烷基，芳基，雜環(huán)基，(C3-C6)環(huán)烷基，(C＝O)OC1-C6烷基，(C＝O)C1-C6烷基，(C＝O)芳基，(C＝O)雜環(huán)基，(C＝O)NReRe′或S(O)2Ra，任選地被1、2或3個選自R7的取代基取代；Rc和Rc′獨立地選自H，(C1-C6)烷基，芳基，NH2，OH，ORa，-(C1-C6)烷基-OH，-(C1-C6)烷基-O-(C1-C6)烷基，(C＝O)OC1-C6烷基，(C＝O)C1-C6烷基，(C＝O)芳基，(C＝O)雜環(huán)基，(C＝O)NReRe′，S(O)2Ra和-(C1-C6)烷基-N(Rb)2，其中該烷基任選地被1、2或3個選自R7的取代基取代；或Rc和Rc′可以與其所連的氮一起構(gòu)成單環(huán)或雙環(huán)雜環(huán)同時各環(huán)具有3-7員和除該氮以外，任選地含有1或2個選自N、O或S的附加雜原子，該單環(huán)或雙環(huán)雜環(huán)任選地被1、2或3個選自R7的取代基取代；Re和Re′獨立地選自H，(C1-C6)烷基，芳基，雜環(huán)基和(C3-C6)環(huán)烷基，任選地被1、2或3個選自R7的取代基取代；或Re和Re′可以與其所連的氮一起構(gòu)成單環(huán)或雙環(huán)雜環(huán)同時各環(huán)具有3-7員和除該氮以外，任選地含有1或2個選自N、O或S的附加雜原子，該單環(huán)或雙環(huán)雜環(huán)任選地被1、2和3個選自R7的取代基取代。
5.權利要求4的式V的化合物 或其藥學可接受鹽或立體異構(gòu)體，其中R1和R2獨立地選自H和(C1-C6)烷基。
6.權利要求2的式VI的化合物 或其藥學可接受鹽或立體異構(gòu)體，其中R1和R2獨立地選自H和(C1-C6)烷基。
7.一種化合物(2S)-4-(2，5-二氟苯基)-N-[(3S，4R)-3-氟-1-甲基哌啶-4-基]-2-(羥基甲基)-N-甲基-2-苯基-2，5-二氫-1H-吡咯-1-羧酰胺(2S)-4-(2，5-二氟苯基)-N-[(3R，4S)-3-氟-1-甲基哌啶-4-基]-2-(羥基甲基)-N-甲基-2-苯基-2，5-二氫-1H-吡咯-1-羧酰胺(2S)-4-(2，5-二氟苯基)-N-[(3R，4R)-3-氟-1-甲基哌啶-4-基]-2-(羥基甲基)-N-甲基-2-苯基-2，5-二氫-1H-吡咯-1-羧酰胺(2S)-4-(2，5-二氟苯基)-N-[(3S，4S)-3-氟-1-甲基哌啶-4-基]-2-(羥基甲基)-N-甲基-2苯基-2，5-二氫-1H-吡咯-1-羧酰胺(2S)-4-(2，5-二氟苯基)-N-[(3S，4R)-3-氟-1-甲基哌啶-4-基]-N-甲基-2-苯基-2，5-二氫-1H-吡咯-1-羧酰胺(2S)-4-(2，5-二氟苯基)-N-[(3R，4S)-3-氟-1-甲基哌啶-4-基]-N-甲基-2-苯基-2，5-二氫-1H-吡咯-1-羧酰胺(2S)-4-(2，5-二氟苯基)-N-[(3R，4R)-3-氟-1-甲基哌啶-4-基]-N-甲基-2-苯基-2，5二氫-1H-吡咯-1-羧酰胺(2S)-4-(2，5-二氟苯基)-N-[(2R，4R)-2-(氟甲基)-1-甲基哌啶-4-基]-2-(羥基甲基)-N-甲基-2-苯基-2，5-二氫-1H-吡咯-1-羧酰胺(2S)-4-(2，5-二氟苯基)-N-[(2S，4S)-2-(氟甲基)-1-甲基哌啶-4-基]-2-(羥基甲基)-N-甲基-2-苯基-2，5-二氫-1H-吡咯-1-羧酰胺(2S)-4-(2，5-二氟苯基)-N-[(3S，4R)-3-氟-1-甲基-1-氧橋哌啶-4-基]-2-(羥基甲基)-N-甲基-2-苯基-2，5-二氫-1H-吡咯-1-羧酰胺(2S)-4-(2，5-二氟苯基)-N-[(3S，4R)-3-氟哌啶-4-基]-2-(羥基甲基)-N-甲基-2-苯基-2，5-二氫-1H-吡咯-1-羧酰胺(2S)-4-(2，5-二氟苯基)-N-[(3S，4R)-3-氟-1-異丙基哌啶-4-基]-2-(羥基甲基)-N-甲基-2-苯基-2，5-二氫-1H-吡咯-1-羧酰胺(2S)-4-(2，5-二氟苯基)-N-[(3S，4S)-3-氟哌啶-4-基]-2-(羥基甲基)-N-甲基-2-苯基-2，5-二氫-1H-吡咯-1-羧酰胺或其藥學可接受鹽。
8.一種化合物，它是 (2S)-4-(2，5-二氟苯基)-N-[(3S，4S)-3-氟-1-甲基哌啶-4-基]-2-(羥基甲基)-N-甲基-2-苯基-2，5-二氫-1H-吡咯-1-羧酰胺或其藥學可接受鹽。
9.一種化合物，它是 (2S)-4-(2，5-二氟苯基)-N-[(3S，4R)-3-氟-1-甲基哌啶-4-基]-2-(羥基甲基)-N-甲基-2-苯基-2，5-二氫-1H-吡咯-1-羧酰胺或其藥學可接受鹽。
10.一種化合物，它是 (2S)-4-(2，5-二氟苯基)-N-[(3R，4S)-3-氟-1-甲基哌啶-4-基]-2-(羥基甲基)-N-甲基-2-苯基-2，5-二氫-1H-吡咯-1-羧酰胺或其藥學可接受鹽。
11.一種化合物，它是 (2S)-4-(2，5-二氟苯基)-N-[(2R，4R)-2-(氟甲基)-1-甲基哌啶-4-基]-2-(羥基甲基)-N-甲基-2-苯基-2，5-二氫-1H-吡咯-1-羧酰胺或其藥學可接受鹽。
12.一種化合物，它是 (2S)-4-(2，5-二氟苯基)-N-[(3R，4S)-3-氟-1-甲基哌啶-4-基]-N-甲基-2-苯基-2，5-二氫-1H-吡咯-1-羧酰胺或其藥學可接受鹽。
13.權利要求1的化合物選自
或其藥學可接受鹽或立體異構(gòu)體。
14.一種藥物組合物，它含有權利要求1的化合物和藥學可接受載體。
15.一種在需要該治療的哺乳動物中治療或預防癌癥的方法，該方法包括給該哺乳動物施用治療有效量的權利要求1的化合物。
16權利要求15的一種治療癌癥或預防癌癥的方法，其中該癌癥選自腦部、生殖泌尿道、淋巴系統(tǒng)、胃、喉和肺。
17.權利要求15的一種治療或預防癌癥的方法，其中該癌癥選自組織細胞淋巴瘤、肺腺癌、小細胞肺癌、gioblastomas和乳腺癌。
18.一種制備含有權利要求1的化合物和藥學可接受載體的藥物組合物的方法。
19.權利要求14的組合物進一步含有選自下列的第二化合物1)雌激素受體調(diào)節(jié)劑，2)雄激素受體調(diào)節(jié)劑，3)視黃酸受體調(diào)節(jié)劑，4)細胞毒性/細胞抑制基，5)抗增殖劑，6)異戊烯基蛋白轉(zhuǎn)移酶抑制劑，7)HMG-CoA還原酶抑制劑，8)HIV蛋白酶抑制劑，9)反轉(zhuǎn)錄酶抑制劑，10)血管生成抑制劑，和11)PPAR-γ激動劑，12)PPAR-δ激動劑；13)細胞增殖和存活信號的抑制劑，14)細胞周期關卡干擾劑，和15)細胞凋亡誘導劑。
20.權利要求20的組合物，其中該第二化合物是血管生成抑制劑選自酪氨酸激酶抑制劑，表皮衍生生長因子的抑制劑，成纖維細胞衍生生長因子的抑制劑，血小板鹽水生長因子的抑制劑，MMP抑制劑，整聯(lián)蛋白阻斷劑，干擾素-α，白介素-12，戊聚糖多硫酸酯，環(huán)加氧酶抑制劑，羧酰胺基三唑，combretastatin A-4，squalamine，6-O-氯乙?；?羰基)-煙曲霉醇(fumagillol)，沙利度胺，制管張素，肌鈣蛋白-1或VEGF的抗體。
21.權利要求14的組合物進一步含有蛋白體抑制劑。
22.權利要求14的組合物進一步極光型激酶抑制劑。
23.權利要求14的組合物進一步含有Raf激酶抑制劑。
24.權利要求14的組合物進一步含有絲氨酸/蘇氨酸激酶抑制劑。
25.權利要求14的組合物進一步含有不是KSP的另一種有絲分裂驅(qū)動蛋白的抑制劑。
26.權利要求20的組合物，其中該第二化合物是選自他莫昔芬和雷洛昔芬的雌激素受體調(diào)節(jié)劑。
27.一種治療癌癥的方法，該方法包括聯(lián)合施用治療有效量的權利要求1的化合物和放療。
28.一種治療或預防癌癥的方法，該方法包括聯(lián)合施用治療有效量的權利要求1的化合物和選自下列的化合物1)雌激素受體調(diào)節(jié)劑，2)雄激素受體調(diào)節(jié)劑，3)視黃酸受體調(diào)節(jié)劑，4)細胞毒性/細胞抑制劑，5)抗增殖劑，6)異戊烯基蛋白轉(zhuǎn)移酶抑制劑，7)HMG-CoA還原酶抑制劑，8)HTV蛋白酶抑制劑，9)反轉(zhuǎn)錄酶抑制劑，10)血管生成抑制劑，11)PPAR-γ激動劑，12)PPAR-δ激動劑，13)固有多藥耐藥性的抑制劑，14)止吐劑，15)貧血治療劑，16)嗜中性粒細胞減少癥治療劑，17)免疫增強藥，18)細胞增殖和存活信號的抑制劑，19)細胞周期關卡干擾劑，和20)細胞凋亡誘導劑。
29.一種治療癌癥的方法，該方法包括治療有效量的權利要求1的化合物與放療和選自下列的化合物聯(lián)合施用1)雌激素受體調(diào)節(jié)劑，2)雄激素受體調(diào)節(jié)劑，3)視黃酸受體調(diào)節(jié)劑，4)細胞毒性/細胞抑制劑，5)抗增殖劑，6)異戊烯基蛋白轉(zhuǎn)移酶抑制劑，7)HMG-CoA還原酶抑制劑，8)HIV蛋白酶抑制劑，9)反轉(zhuǎn)錄酶抑制劑，10)血管生成抑制劑，11)PPAR-γ激動劑，12)PPAR-δ激動劑，13)固有多藥耐藥性的抑制劑，14)止吐劑，15)貧血治療劑，16)嗜中性粒細胞減少癥治療劑，17)免疫增強藥，18)細胞增殖和存活信號的抑制劑，19)細胞周期關卡干擾劑，和20)細胞凋亡誘導劑。
30.一種治療或預防癌癥的方法，該方法包括施用治療有效量的權利要求1的化合物和紫杉醇或司徒曼布。
31.一種治療或預防癌癥的方法，該方法包括施用治療有效量的權利要求1的化合物和GPIIb/IIIa拮抗劑。
32.權利要求31的方法，其中該GPIIb/IIIa拮抗劑是替羅非班。
33.一種治療或預防癌癥的方法，該方法包括聯(lián)合施用治療有效量的權利要求1的化合物與COX-2抑制劑。
34.一種治療或預防癌癥的方法，該方法包括聯(lián)合施用治療有效量的權利要求1的化合物與蛋白體抑制劑。
35.一種治療或預防癌癥的方法，該方法包括聯(lián)合施用治療有效量的權利要求1的化合物與極光型激酶抑制。
36.一種治療或預防癌癥的方法，該方法包括聯(lián)合施用治療有效量的權利要求1的化合物與Raf激酶抑制劑。
37.一種治療或預防癌癥的方法，該方法包括聯(lián)合施用治療有效量的權利要求1的化合物與絲氨酸/蘇氨酸激酶抑制劑。
38.一種治療或預防癌癥的方法，該方法包括聯(lián)合施用治療有效量的權利要求1的化合物與非KSP的有絲分裂驅(qū)動蛋白的抑制劑。
39.一種調(diào)節(jié)有絲分裂紡錘體形成的方法，該方法包括施用治療有效量的權利要求1的化合物。
40.一種抑制有絲分裂驅(qū)動蛋白KSP的方法，該方法包括施用治療有效量的權利要求1的化合物。
全文摘要
本發(fā)明涉及有效用于治療細胞增殖性疾病、用于治療與KSP驅(qū)動蛋白活性有關的障礙和抑制KSP驅(qū)動蛋白的式(I)的二氫吡咯類化合物。本發(fā)明還涉及含有這些化合物的組合物，和利用它們治療哺乳動物的癌癥的方法。
文檔編號A61K31/497GK1839128SQ200480023309
公開日2006年9月27日 申請日期2004年8月11日 優(yōu)先權日2003年8月15日
發(fā)明者P·J·科爾曼, C·D·科克斯, R·M·加巴喬, G·D·哈特曼 申請人:默克公司