專利名稱：Gsk－3抑制劑及其用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及通過(guò)向人或動(dòng)物受試對(duì)象施用抑制糖原合成酶激酶3(GSK3)活性的嘧啶和吡啶衍生物來(lái)治療或預(yù)防骨損失的方法。本發(fā)明還涉及含有這些化合物的藥物組合物以及這些化合物與組合物的單獨(dú)使用或與其它藥學(xué)活性試劑組合使用在促進(jìn)骨形成中的用途。
2.現(xiàn)有技術(shù)參考文獻(xiàn)以下文獻(xiàn)出版物引用于在此部分。所有已鑒定的出版物全文納入作為參考，每個(gè)單獨(dú)的出版物也特異并獨(dú)立地全文納入作為參考。
A.Asakura，M.Komaki，M.Rudnicki，Differentiation 68，245-53(2001)。
A.I.Caplan，S.P.Bruder，Trends.Mol.Med.7，259-64(2001)。
M.E.Nuttall，J.M.Gimble，Bone 27，177-84(2000)。
J.L.Kirkland，T.Tchkonia，T.Pirtskhalava，J.Han，I.Karagiannides，Exp.Gerontol.37，757-67(2002)。
S.E.Ross等，Science 289，950-953(2000)。
C.N.Bennett等，J.Biol.Chem.277，30998-1004(2002)。
R.T.Moon，B.Bowerman，M.Boutros，N.Perrimon，Science 296，1644-6(2002)。
X.He，Dev.Cell 4，791-7(2003)。
E.Smith，G.A.Coetzee，B.Frenkel，J.Biol.Chem.，27720，18191-18197頁(yè)(2002)。
B.B.Kahn，J.S.Flier，J.Clin.Invest.106，473-481(2000)。
J.M.Taylor-Jones等，Mech.Ageing Dev.123，649-61(2002)。
G.K.Pavlath等，Dev.Dyn.212，495-508(1998)。
B.B.Lowell，B.M.Spiegelman，Nature 404，652-60(2000)。
S.Enerback等，Nature 387，90-4(1997)。
S.A.Thomas，R.D.Pahniter，Nature 387，94-7(1997)。
J.Moitra等，Genes Dev.12，3168-3181(1998)。
I.Shimomura等，Genes & Devel.12，3182-3194(1998)。
E.D.Rosen，C.J.Walkey，P.Puigserver，B.M.Spiegelman，Genes Dev.14，1293-307(2000)。
G.Bain，T.Muller，X.Wang，J.Papkoff，Biochem.Biophys.Res.Commun.301，84-91(2003)。
Y.Gong等，Cell 107，513-23(2001)。
L.M.Boyden等，N.Engl.J Med.346，1513-21(2002)。
S.Takeda等，Cell 111，305-17(2002)。
K.D.Hankenson等，J.Bone Miner.Res.15，851-62(2000)。
O.A.MacDougald，C.-S.Hwang，H.Fan，M.D.Lane，Proc.Natl.Acad.Sci.美國(guó)，92，9034-9037(1995)。
K.D.Hankenson，P.Bornstein，J Bone Miner.Res.17，415-25(2002)。
W.J.Boyle，W.S.Simonet，D.L.Lacey，Nature，423，337-342頁(yè)(2003)。
骨的更新或改造是骨組織中時(shí)刻發(fā)生的過(guò)程，其涉及分別由造血細(xì)胞衍生的成骨細(xì)胞和破骨細(xì)胞實(shí)現(xiàn)的骨形成與骨吸收。打破這種平衡化有利于骨吸收和破骨活性會(huì)涉及許多疾病，包括骨質(zhì)減少、骨質(zhì)疏松、甾體誘導(dǎo)的骨質(zhì)疏松、牙周疾病、風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎和佩吉特病。用于治療這些疾病的常規(guī)藥物是抗吸收藥物，包括肽降鈣素和二磷酸阿來(lái)屈酯(bisphosphatealendronate)、氯屈膦酸鈉(clodronate)、羥乙磷酸鹽(etidronate)、帕米膦酸鈉(pamidronate)、替魯膦酸鹽(tiludronate)和利塞膦酸鹽(risedronate)。然而，促進(jìn)骨生成或骨形成的有效藥物依然缺乏。直接刺激骨形成的潛在藥物現(xiàn)處于臨床試驗(yàn)。特立帕肽，一種甲狀旁腺激素重組體是唯一具有原骨形成機(jī)制的藥物，其作用已證明可用于治療骨質(zhì)疏松。成骨促進(jìn)藥物特別可用于由于腫瘤或癌癥導(dǎo)致的急性骨損失的疾病中促使骨形成。
成骨作用依賴于間充質(zhì)祖細(xì)胞。這些細(xì)胞不僅可分化為成骨細(xì)胞，也可分化為脂肪細(xì)胞、肌細(xì)胞(myocte)和其它細(xì)胞類型(Asakura等，2001和Caplan等，2001)。Wnt是調(diào)節(jié)許多細(xì)胞現(xiàn)象的分泌信號(hào)蛋白，包括發(fā)育過(guò)程。體內(nèi)和體外的脂肪形成與分化成其它譜系之間存在相反關(guān)系，例如骨或肌肉的損失與那些組織中脂肪細(xì)胞的數(shù)量增加有關(guān)(Nuttall等，2000和Kirkland等，2002)。一種強(qiáng)有力的控制多功能間充質(zhì)祖細(xì)胞的細(xì)胞命運(yùn)的調(diào)節(jié)劑是能在體外抑制脂肪形成的Wntl0b(Ross等，2000和Bennet等，2002)。在規(guī)范的信號(hào)途徑中，分泌的Wnt通過(guò)卷曲受體和LRP共受體來(lái)抑制糖原合成酶激酶3、穩(wěn)定β-聯(lián)蛋白并影響T-細(xì)胞因子TCF/淋巴-增強(qiáng)因子LEF轉(zhuǎn)錄因子的活性(Moon等，2002和He 2003)。典型Wnt信號(hào)的激活抑制脂肪細(xì)胞轉(zhuǎn)換，在前成脂肪細(xì)胞中抑制Wnt信號(hào)導(dǎo)致脂肪自發(fā)形成。最好的內(nèi)源性Wnt抑制劑的候選者是阻斷脂肪細(xì)胞轉(zhuǎn)換并在前體細(xì)胞而非脂肪細(xì)胞中表達(dá)的Wntl0b。披露于WO 99/65897的GSK3抑制劑CHIR99021，6-[(2-{[4-(2，4-二氯苯基)-5-(4-甲基咪唑-2-基)嘧啶-2-基]氨基}乙基)氨基]吡啶-3-腈發(fā)現(xiàn)可通過(guò)激活Wnt、然后阻斷脂肪細(xì)胞轉(zhuǎn)換在體外3T3-L1前成脂肪細(xì)胞中模擬Wnt信號(hào)(Bennett等，2002)。
對(duì)糖皮質(zhì)激素甾體在促進(jìn)甾體誘導(dǎo)的骨質(zhì)疏松中的作用的研究表明激酶GSK3β通過(guò)激活GSK3β來(lái)破壞成骨細(xì)胞循環(huán)從而在該疾病中起關(guān)鍵作用(Smith等，2002)。GSK3也是已知的糖原合成酶激酶3，已鑒定了兩種同種型，α和β的絲氨酸/蘇氨酸激酶。由于GSK3β自身參與了影響廣泛細(xì)胞功能的Wnt和生長(zhǎng)因子途徑，糖皮質(zhì)激素對(duì)GSK施加影響的機(jī)制和特異性途徑尚不清楚，所述細(xì)胞功能包括蛋白質(zhì)合成、細(xì)胞增殖、細(xì)胞分化和針對(duì)免疫強(qiáng)化的凋亡。
附圖簡(jiǎn)述參考以下的總結(jié)和詳述并結(jié)合附圖可更容易地理解以上本發(fā)明的各方面及其優(yōu)點(diǎn)。


圖1A.增加小梁骨和成骨作用。按所述(Hankenson等，2000)進(jìn)行野生型和FABP4-WntlOb小鼠的股骨的微機(jī)化斷層顯影(上面一幅)。加亮有框區(qū)域的干骺端小梁的三維重建(下面一幅)。
圖1B.誘導(dǎo)多潛能ST2細(xì)胞進(jìn)行所述的成骨作用(Hankenson和Bornstein 2002)。在0天和第2天，用DMSO(對(duì)照)或3μM CHIR990216-[(2-{[4-(2，4-二氯苯基)-5-(4-甲基咪唑-2-基)嘧啶-2-基]氨基}乙基)氨基]吡啶-3-腈(Chiron Corporation，Emeryville，CA)處理細(xì)胞。在第10天，用礦化作用的Alizarin Red-S對(duì)細(xì)胞染色。
發(fā)明概述本發(fā)明提供治療或預(yù)防人或動(dòng)物受試對(duì)象骨損失的組合物和方法。本發(fā)明的一個(gè)方面是提供式(I)所示的化合物 其中W是任選取代的碳或氮；X和Y獨(dú)立選自氮、氧和任選取代的碳；A是任選取代的芳基或雜芳基；R1、R2、R3和R4獨(dú)立選自氫、羥基和任選取代的低級(jí)烷基、環(huán)狀的低級(jí)烷基(cycloloweralkyl)、烷基氨基烷基、低級(jí)烷氧基、氨基、烷基氨基、烷基羰基、芳基羰基、芳烷基羰基、雜芳基羰基、雜芳烷基羰基、芳基和雜芳基；R′1、R′2、R′3和R′4獨(dú)立地選自氫和任選取代的低級(jí)烷基；
R5和R7獨(dú)立選自氫、鹵素和任選取代的低級(jí)烷基、環(huán)烷基、烷氧基、氨基、氨基烷氧基、烷基羰基氨基、芳基羰基氨基、芳烷基羰基氨基、雜芳基羰基氨基、雜芳烷基羰基氨基、環(huán)亞氨基、雜環(huán)亞氨基、脒基、環(huán)脒基、雜環(huán)脒基、胍基、芳基、聯(lián)芳基、雜芳基、雜聯(lián)芳基、雜環(huán)烷基和芳基亞磺酰氨基；R6選自氫、羥基、鹵素、羧基、硝基、氨基、酰氨基、脒基、亞氨基、氰基，和取代或未取代的低級(jí)烷基、低級(jí)烷氧基、烷基羰基、芳基羰基、芳烷基羰基、雜芳基羰基、雜芳烷基羰基、烷基羰氧基(alkylcarbonyloxy)、芳基羰氧基(arylcarbonyloxy)、芳烷基羰氧基(aralkylcarbonyloxy)、雜芳基羰氧基(heteroarylcarbonyloxy)、雜芳烷基羰氧基(heteroaralkylcarbonyloxy)、烷基氨基羰氧基(alkylaminocarbonyloxy)、芳基氨基羰氧基(arylaminocarbonyloxy)、甲?；⒌图?jí)烷基羰基、低級(jí)烷氧基羰基、氨基羰基、氨基芳基、烷基磺?；?、亞磺酰氨基、氨基烷氧基、烷基氨基、雜芳基氨基、烷基羰基氨基、烷基氨基羰基氨基、芳基氨基羰基氨基、芳烷基羰基氨基、雜芳基羰基氨基、芳基羰基氨基、雜芳基羰基氨基、環(huán)酰氨基、環(huán)硫代酰氨基(cyclothioamido)、環(huán)脒基、雜環(huán)脒基、環(huán)亞氨基、雜環(huán)亞氨基、胍基、芳基、雜芳基、雜環(huán)基(heterocyclo)、雜環(huán)烷基、芳基磺?；头蓟鶃喕酋０被?；或其藥學(xué)上可接受的鹽，其立體異構(gòu)體、其互變異構(gòu)體、其水合物或其溶劑化物。
本發(fā)明的一些實(shí)施方案提供了式(IV)和(V)所示化合物
其中X、R1-R6、和R8-R14具有上述意義，R15選自氫、硝基、氰基，氨基、烷基、鹵素、鹵代低級(jí)烷基、烷基氧羰基(alkyloxycarbonyl)、氨基羰基、烷基磺酰基和芳基磺?；?，或其藥學(xué)上可接受的鹽，其立體異構(gòu)體、其互變異構(gòu)體、其水合物或其溶劑化物。
本發(fā)明另一方面提供了治療或預(yù)防人或動(dòng)物受試對(duì)象骨損失的方法，所述方法包括向人或動(dòng)物受試對(duì)象施用本文披露的化合物，包括化合物(VI)，或其藥學(xué)上可接受的鹽，其立體異構(gòu)體、其互變異構(gòu)體、其水合物或其溶劑化物，其中化合物(VI)是6-[(2-{[4-(2，4-二氯苯基)-5-(4-甲基咪唑-2-基)嘧啶-2-基]氨基}乙基)氨基]吡啶-3-腈并具有下式 施用本發(fā)明的化合物來(lái)治療或預(yù)防的骨損失包括(但不限于)與以下相關(guān)的骨損失骨質(zhì)減少、骨質(zhì)疏松、藥物治療、絕經(jīng)后骨損失、老化、廢用、節(jié)食、風(fēng)濕病、風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、佩吉特病、牙周疾病、癌癥、癌癥治療或骨折。在作為藥物治療方案一部分的甾體施用期間或在癌癥治療期間使用細(xì)胞毒性藥物引起的骨損失也可通過(guò)施用本發(fā)明的化合物來(lái)治療或預(yù)防。涉及本發(fā)明考慮的骨損失的癌癥和癌癥治療包括多發(fā)性骨髓瘤、乳腺癌、前列腺癌或肺癌。
本發(fā)明還提供通過(guò)向人或動(dòng)物受試對(duì)象施用式(I)、(IV)、(V)或(VI)所示的本發(fā)明化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽，其立體異構(gòu)體、其互變異構(gòu)體、其水合物或其溶劑化物來(lái)增加或促進(jìn)骨形成或骨生長(zhǎng)的方法。
本發(fā)明還提供通過(guò)向人或動(dòng)物受試對(duì)象施用式(I)、(IV)、(V)或(VI)所示化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽，其立體異構(gòu)體、其互變異構(gòu)體、其水合物或其溶劑化物來(lái)治愈骨折的方法。任何骨折，包括髖部或脊柱骨折，可通過(guò)施用本文披露的化合物來(lái)治療。
本發(fā)明也提供治療或預(yù)防人或動(dòng)物受試對(duì)象的骨損失的方法，所述方法包括向人或動(dòng)物受試對(duì)象施用至少結(jié)合了一種用于治療或預(yù)防骨損失的其它藥物的式(I)、(IV)、(V)或(VI)所示化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽，其立體異構(gòu)體、其互變異構(gòu)體、其水合物或其溶劑化物。
本發(fā)明還提供含有式(I)、(IV)、(V)或(VI)所示化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽，其立體異構(gòu)體、其互變異構(gòu)體、其水合物或其溶劑化物和至少一種用于治療或預(yù)防骨損失的其它藥物的組合物。
本文提供的用于該方法和組合物中的其它藥物包括雌激素、鈣、抗吸收藥物、雷洛昔芬(raloxifene)、降鈣素、阿來(lái)屈酯、氯屈膦酸鈉、羥乙磷酸鹽、帕米膦酸鈉、伊班膦酸鹽(ibandronate)、唑來(lái)酸(zoledronic acid)、利塞膦酸鹽(risedronate)和替魯膦酸鹽(tiludronate)。也包括成骨促進(jìn)藥物，例如甲狀旁腺激素或重組或合成甲狀旁腺激素。
本發(fā)明也提供式(I)、(IV)、(V)或(VI)所示化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽，其立體異構(gòu)體、其互變異構(gòu)體、其水合物或其溶劑化物在生產(chǎn)用于治療或預(yù)防骨損失的藥物中的用途。
本發(fā)明的方法、化合物和組合物可單獨(dú)使用，或結(jié)合用于預(yù)防或治療GSK3活性介導(dǎo)疾病的其它藥學(xué)活性的藥物，例如用于治療糖尿病、早老性癡呆和其它神經(jīng)變性疾病、肥胖、動(dòng)脈粥樣硬化心血管疾病、原發(fā)性高血壓、多囊卵巢綜合征、X綜合癥、局部缺血、特別是腦部缺血、外傷性腦損傷、雙相性精神障礙、免疫缺陷或癌癥。
發(fā)明詳述本發(fā)明提供用于治療或預(yù)防人或動(dòng)物受試對(duì)象骨損失的、抑制糖原合成酶激酶3(GSK3)活性的化合物、組合物和方法。本發(fā)明的一個(gè)方面是提供式(I)所示的化合物
其中W是任選取代的碳或氮；X和Y獨(dú)立選自氮、氧和任選取代的碳；A是任選取代的芳基或雜芳基；R1、R2、R3和R4獨(dú)立選自氫、羥基和任選取代的低級(jí)烷基、環(huán)狀的低級(jí)烷基(cycloloweralkyl)、烷基氨基烷基、低級(jí)烷氧基、氨基、烷基氨基、烷基羰基、芳基羰基、芳烷基羰基、雜芳基羰基、雜芳烷基羰基、芳基和雜芳基；R′1、R′2、R′3和R′4獨(dú)立地選自氫和任選取代的低級(jí)烷基；R5和R7獨(dú)立選自氫、鹵素和任選取代的低級(jí)烷基、環(huán)烷基、烷氧基、氨基、氨基烷氧基、烷基氨基、芳烷基氨基、雜芳烷基氨基、芳基氨基、雜芳基氨基、環(huán)亞氨基、雜環(huán)亞氨基、脒基、環(huán)脒基、雜環(huán)脒基、胍基、芳基、聯(lián)芳基、雜芳基、雜聯(lián)芳基、雜環(huán)烷基和芳基亞磺酰氨基；R6選自氫、羥基、鹵素、羧基、硝基、氨基、酰氨基、脒基、亞氨基、氰基，和取代或未取代的低級(jí)烷基、低級(jí)烷氧基、烷基羰基、芳基羰基、芳烷基羰基、雜芳基羰基、雜芳烷基羰基、烷基羰氧基(alkylcarbonyloxy)、芳基羰氧基(arylcarbonyloxy)、芳烷基羰氧基(aralkylcarbonyloxy)、烷基氨基羰氧基(alkylaminocarbonyloxy)、芳基氨基羰氧基(arylaminocarbonyloxy)、甲?；⒌图?jí)烷基羰基、低級(jí)烷氧基羰基、氨基羰基、氨基芳基、烷基磺?；?、亞磺酰氨基、氨基烷氧基、烷基氨基、雜芳基氨基、烷基羰基氨基、烷基氨基羰基氨基、芳基氨基羰基氨基、芳烷基羰基氨基、雜芳烷基羰基氨基、芳基羰基氨基、雜芳基羰基氨基、環(huán)酰氨基、環(huán)硫代酰氨基(cyclothioamido)、環(huán)脒基、雜環(huán)脒基、環(huán)亞氨基、雜環(huán)亞氨基、胍基、芳基、雜芳基、雜環(huán)基(heterocyclo)、雜環(huán)烷基、芳基磺酰基和芳基亞磺酰氨基；或其藥學(xué)上可接受的鹽，其立體異構(gòu)體、其互變異構(gòu)體、其水合物或其溶劑化物。
目前。在一個(gè)本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方案中，X和Y中至少有一個(gè)是氮。該組中代表性的化合物包括那些其中X和Y中有一個(gè)是氮并且另一個(gè)是氧或任選取代的碳。優(yōu)選X和Y均是氮。
組分A可是具有3到10個(gè)碳環(huán)原子的芳環(huán)和任選1個(gè)或更多個(gè)環(huán)雜原子。因此，在一個(gè)實(shí)施方案中，A可是任選取代的碳環(huán)芳基?；蛘?，A是任選取代的雜芳基，例如取代或未取代的吡啶基、嘧啶基、噻唑基、吲哚基、咪唑基、噁二唑基、四唑基、吡嗪基、三唑基、苯硫基、呋喃基、喹啉基、嘌呤基、萘基、苯并噻唑基、苯并吡啶基和苯并咪唑基，它們可用至少一個(gè)且不多于3個(gè)取代基團(tuán)取代。代表性的取代基團(tuán)可獨(dú)立地選自，例如硝基、氨基、氰基、鹵素、硫代酰氨基、脒基、氧雜脒基(oxamidino)、烷氧基脒基、亞脒基(imidino)、胍基、亞磺酰氨基、羧基、甲?；?、低級(jí)烷基、鹵代低級(jí)烷基、低級(jí)烷氧基、鹵代低級(jí)烷氧基、低級(jí)烷氧基烷基、低級(jí)烷基氨基低級(jí)烷氧基、低級(jí)烷基羰基、低級(jí)芳烷基羰基、低級(jí)雜芳烷基羰基、烷硫基、氨基烷基和氰基烷基。
在本發(fā)明的一些實(shí)施方案中，A如下式所示 其中R8和R9獨(dú)立選自氫、硝基、氨基、氰基、鹵素、硫代酰氨基、脒基、氧雜脒基、烷氧基脒基、亞脒基(imidino)、胍基、亞磺酰氨基、羧基、甲?；⒌图?jí)烷基、鹵代低級(jí)烷基、低級(jí)烷氧基、鹵代低級(jí)烷氧基、低級(jí)烷氧基烷基、低級(jí)烷基氨基低級(jí)烷氧基、低級(jí)烷基羰基、低級(jí)芳烷基羰基、低級(jí)雜芳烷基羰基、烷硫基、芳基和芳烷基。A最優(yōu)選是選自硝基吡啶基、氨基硝基吡啶基、氰基吡啶基、氰基噻唑基、氨基氰基吡啶基、三氟甲基吡啶基、甲氧基吡啶基、甲氧基硝基吡啶基、甲氧基氰基吡啶基和硝基噻唑基。
在本發(fā)明的其它實(shí)施方案中，R1、R2、R3和R4中的至少一個(gè)可是氫，或是選自以下的未取代或取代的低級(jí)烷基鹵代低級(jí)烷基、雜環(huán)氨基烷基(heterocycloaminoalkyl)和低級(jí)烷基氨基低級(jí)烷基；或低級(jí)烷基氨基低級(jí)烷基。當(dāng)前本發(fā)明優(yōu)選的實(shí)施方案包括的化合物是，其中R1、R2和R3是氫，R4選自氫、甲基、乙基、氨乙基、二甲基氨乙基、吡啶基乙基、哌啶基、吡咯烷基乙基、哌嗪基乙基和嗎啉基乙基。
本發(fā)明的其它實(shí)施方案包括式(I)所示的化合物，其中R5和R7中至少一個(gè)選自取代和未取代的芳基、雜芳基和聯(lián)芳基。在一些實(shí)施方案中，R5和R7中至少一個(gè)是式(III)所示的取代和未取代的部分 其中R10、R11、R12、R13和R14獨(dú)立地選自氫、硝基、氨基、氰基、鹵素、硫代酰氨基、羧基、羥基，和任選取代的低級(jí)烷基、低級(jí)烷氧基、低級(jí)烷氧基烷基、鹵代低級(jí)烷基、鹵代低級(jí)烷氧基、氨基烷基、烷基氨基、烷硫基、烷基羰基氨基、芳烷基羰基氨基、雜芳烷基羰基氨基、芳基羰基氨基、雜芳基羰基氨基、氨基羰基、低級(jí)烷基氨基羰基、氨基芳烷基、低級(jí)烷基氨基烷基、芳基、雜芳基、環(huán)雜烷基、芳烷基、烷基羰氧基、芳基羰氧基、芳烷基羰氧基、芳基羰氧基烷基(arylcarbonyloxyalkyl)、烷基羰氧基烷基(alkylcarbonyloxyalkyl)、雜芳基羰氧基烷基(heteroarylcarbonyloxyalkyl)、芳烷基羰氧基烷基(arakylcarbonyloxyalkyl)和雜芳烷基羰氧基烷基(heteroarakylcarbonyloxyalkyl)。
在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明提供的化合物是其中R10、R11、R13和R14是氫，R12選自鹵素、低級(jí)烷基、羥基、低級(jí)烷氧基、鹵代低級(jí)烷基、氨基羰基、烷基氨基羰基和氰基；R11、R13和R14是氫，R10和R12獨(dú)立地選自鹵素、低級(jí)烷基、羥基、低級(jí)烷氧基、鹵代低級(jí)烷基和氰基；R10、R11、R13和R14是氫，R12是雜芳基；R10、R11、R13和R14是氫，R12是雜環(huán)烷基；和其中R10、R11、R12、R13和R14中至少一個(gè)是鹵素，而R10、R11、R12、R13和R14中剩余的是氫。R5和R7中至少一個(gè)優(yōu)選選自二氯苯基、二氟苯基、三氟甲基苯基、氯氟苯基(chlorofluorophenyl)、溴氯苯基(bromochlorophenyl)、乙基苯基、甲基氯苯基(methylchlorophenyl)、咪唑基苯基、氰基苯基、嗎啉基苯基和氰基氯苯基(cyanochlorophenyl).
在本發(fā)明的其它代表性實(shí)施方案中，式(I)所示R6可是取代的烷基，例如芳烷基、羥基烷基、氨基烷基、氨基芳烷基、羰基氨基烷基、烷基羰基氨基烷基、芳基羰基氨基烷基、芳烷基羰基氨基烷基、氨基烷氧基烷基和芳基氨基烷基；取代的氨基，例如烷基氨基、烷基羰基氨基、烷氧基羰基氨基、芳基烷基氨基、芳基羰基氨基、烷硫基羰基氨基、芳基磺?；被?、雜芳基氨基、烷基羰基氨基、芳基羰基氨基、雜芳基羰基氨基、芳烷基羰基氨基和雜芳烷基羰基氨基；或取代的羰基，例如取代或未取代的氨基羰基、烷基氧羰基、芳基氧羰基、芳烷基氧羰基和烷基氨基烷基氧羰基。在其它實(shí)施方案中，R6可選自脒基、胍基、環(huán)酰亞氨基、雜環(huán)酰亞氨基、環(huán)氨基、雜環(huán)氨基、環(huán)硫代氨基和雜環(huán)低級(jí)烷基。在還有其它的實(shí)施方案中，R6可是芳基或雜芳基，例如取代或未取代的吡啶基、嘧啶基、噻唑基、吲哚基、咪唑基、噁二唑基、四唑基、吡嗪基、三唑基、噻吩基、呋喃基、喹啉基、吡咯烷基吡啶基、苯并噻唑基、苯并吡啶基、苯并三唑基和苯并咪唑基。
本文使用的雜環(huán)基團(tuán)例如包括以下所示的(其中取代基團(tuán)和其它以下所示的取代基團(tuán)的連接位置通過(guò)左上鍵)。有機(jī)和醫(yī)藥領(lǐng)域的普通技術(shù)人員應(yīng)該明白，這些雜環(huán)基團(tuán)還可進(jìn)一步取代并可連接于本文披露的物質(zhì)的各種位置。
代表性的雜環(huán)基團(tuán)例如包括以下所示的。有機(jī)和醫(yī)藥領(lǐng)域的普通技術(shù)人員應(yīng)該明白，這些雜環(huán)基團(tuán)還可進(jìn)一步取代并可連接于本文披露的物質(zhì)的各種位置。
代表性的環(huán)亞氨基和雜環(huán)亞氨基例如包括以下所示的。有機(jī)和醫(yī)藥領(lǐng)域的普通技術(shù)人員應(yīng)該明白，這些環(huán)亞氨基和雜環(huán)亞氨基還可進(jìn)一步取代并可連接于本文披露的物質(zhì)的各種位置。
代表性的取代的脒基和雜環(huán)脒基例如包括以下所示的。有機(jī)和醫(yī)藥領(lǐng)域的普通技術(shù)人員應(yīng)該明白，這些脒基和雜環(huán)脒基還可進(jìn)一步取代并可連接于本文披露的物質(zhì)的各種位置。
代表性的取代的烷基羰基氨基、烷基氧羰基氨基、氨基烷基氧羰基氨基和芳基羰基氨基例如包括以下所示的。有機(jī)和醫(yī)藥領(lǐng)域的普通技術(shù)人員應(yīng)該明白，這些基團(tuán)還可進(jìn)一步取代并可連接于本文披露的物質(zhì)的各種位置。
代表性的取代的氨基羰基例如包括以下所示的。有機(jī)和醫(yī)藥領(lǐng)域的普通技術(shù)人員應(yīng)該明白，這些雜環(huán)基團(tuán)還可進(jìn)一步取代并可連接于本文披露的物質(zhì)的各種位置。
代表性的取代的烷氧基羰基例如包括以下所示的。有機(jī)和醫(yī)藥領(lǐng)域的普通技術(shù)人員應(yīng)該明白，這些烷氧基羰基還可進(jìn)一步取代并可連接于本文披露的物質(zhì)的各種位置。
在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明的化合物包括具有以下結(jié)構(gòu)的化合物 其中X、R1-R6和R8-R14具有上述意義及其藥學(xué)上可接受的鹽。本發(fā)明優(yōu)選的該組的代表性化合物包括，例如[4-(4-咪唑基苯基)嘧啶-2-基]{2-[(5-硝基(2-吡啶基))氨基]乙基}胺、4-[5-咪唑基-2-({2-[(5-硝基(2-吡啶基))氨基]乙基}氨基)嘧啶-4-基]苯甲腈、4-[2-({2-[(6-氨基-5-硝基(2-吡啶基))氨基]乙基}氨基)-5-咪唑基嘧啶-4-基]苯甲腈、[4-(2，4-二氯苯基)-5-咪唑基嘧啶-2-基]{2-[(5-硝基(2-吡啶基))氨基]乙基}胺、4-[2-({2-[(5-硝基-2-吡啶基)氨基]乙基}氨基)-7a-氫-1，2，4-三唑并[1，5-a]嘧啶-7-基]苯甲腈、{2-[(6-氨基-5-硝基-(2-吡啶基))氨基]乙基}[4-(2，4-二氯苯基)-5-咪唑基嘧啶-2-基]胺、[4-(2，4-二氯苯基)-5-咪唑基-2-基嘧啶-2-基]{2-[(5-硝基(2-吡啶基))氨基]乙基}胺、6-[2-{[4-(2，4-二氯苯基)-5-咪唑基吡啶-2-基]氨基}乙基]氨基}吡啶-3-甲腈、[5-苯并三唑基-4-(2，4-二氯苯基)嘧啶-2-基]{2-[(5-硝基(2-吡啶基))氨基]乙基}胺、[2-({2-[(6-氨基-5-硝基(2-吡啶基)氨基)乙基]氨基}-4-(2，4-二氯苯基)嘧啶-5-基)-1-甲醇、[4-(2，4-二氯苯基)-2-({2-[(5-硝基(2-吡啶基))氨基]乙基}氨基)嘧啶-5-基]-1-甲醇、2-[2-({2-[(6-氨基-5-硝基(2-吡啶基))氨基]乙基}氨基)-4-(2，4-二氯苯基)嘧啶-5-基]異吲哚啉-1，3-二酮、[5-氨基-4-(2，4-二氯苯基)嘧啶-2-基]{2-[(6-氨基-5-硝基(2-吡啶基))氨基]乙基}胺、{2-[(6-氨基-5-硝基(2-吡啶基))氨基]乙基}[4-(2，4-二氯苯基)-5-嗎啉-4-基嘧啶-2-基]胺、{2-[(6-氨基-5-硝基(2-吡啶基))氨基]乙基}{4-(2，4-二氯苯基)-5-[5-(三氟甲基)(1，2，3，4-四唑基)]嘧啶-2-基}胺、1-[2-({2-[(6-氨基-5-硝基(2-吡啶基))氨基]-乙基}氨基)-4-(2，4-二氯苯基)嘧啶-5-基]吡咯烷-2，5-二酮、[4-(2，4-二氯苯基)-5-吡唑基嘧啶-2-基]{2-[(5-硝基(2-吡啶基))氨基]乙基}-胺、[4-(2，4-二氯苯基)-5-(4-甲基咪唑基)嘧啶-2-基]{2-[(5-硝基(2-吡啶基))氨基]乙基}胺、[4-(2，4-二氯苯基)-5-(2，4-二甲基-咪唑基)嘧啶-2-基]{2-[5-硝基(2-吡啶基)氨基]乙基}胺、6-[(2-{[4-(2，4-二氯苯基)-5-咪唑-2-基嘧啶-2-基]氨基}乙基)氨基]吡啶-3-甲腈、{2-[(6-氨基-5-硝基(2-吡啶基))氨基]乙基}[4-(2，4-二氯苯基)-5-(嗎啉-4-基甲基)嘧啶-2-基]胺、{2-[(6-氨基-5-硝基(2-吡啶基))氨基]乙基}[4-(2，4-二氯苯基)-5-哌嗪基嘧啶-2-基]胺、{2-[(6-氨基-5-硝基(2-吡啶基))氨基]乙基}[4-(4-乙基苯基)-5-咪唑基嘧啶-2-基]胺、1-[4-(2，4-二氯苯基)-2-({2-[(5-硝基(2-吡啶基)氨基)]乙基}氨基)-嘧啶-5-基]-2-氫吡酮、[5-苯并咪唑基-4-(2，4-二氯苯基)-嘧啶-2-基]{2-[(5-硝基(2-吡啶基)氨基)乙基]胺、{2-[(6-氨基-5-硝基(2-吡啶基))氨基]乙基}[4-(2，4-二氯苯基)-5-咪唑基嘧啶-2-基]甲胺、{2-[(6-氨基-5-硝基(2-吡啶基))氨基]乙基}[4-(2，4-二氯苯基)-5-(4-吡啶基)嘧啶-2-基]胺、{2-[(6-氨基-5-硝基(2-吡啶基))氨基]乙基}[4-(2，4-二氯苯基)-5-(4-甲基哌嗪基)嘧啶-2-基]胺、[4-(2，4-二氯苯基)-5-(2-甲基咪唑基)嘧啶-2-基]{2-[(5-硝基(2-吡啶基))氨基]乙基}胺、{2-[(6-氨基-5-硝基(2-吡啶基))氨基]乙基}[4-(2，4-二氯苯基)-5-(2-甲基咪唑基)嘧啶-2-基]胺、{2-[(6-氨基-5-硝基(2-吡啶基))氨基]乙基}[4-(2，4-二氯苯基)-5-(4-苯基咪唑基)嘧啶-2-基]胺、{2-[(6-氨基-5-硝基(2-吡啶基))氨基]乙基}[4-(2，4-二氯苯基)-5-(2，4-二甲基-咪唑基)嘧啶-2-基]胺、[4-(2，4-二氯苯基)-5-咪唑基-2-基嘧啶-2-基]{2-{[5-(三氟甲基)(2-吡啶基)]氨基}乙基}胺、[4-(2，4-二氯苯基)-5-哌嗪基嘧啶-2-基]{2-[(5-硝基(2-吡啶基))氨基]乙基}胺、[4-(2，4-二氯苯基)-5-咪唑基嘧啶-2-基][2-(二甲氨基)乙基]{2-[(5-硝基(2-吡啶基))氨基]乙基}胺、1-[2-({2-[(6-氨基-5-硝基(2-吡啶基))氨基]乙基}氨基)-4-(2，4-二氯苯基)嘧啶-5-基]-3-嗎啉-4-甲基哌嗪-2，6-二酮、[4-(2，4-二氯苯基)-5-(1-甲基咪唑-2-基)嘧啶-2-基]{2-[(5-硝基(2-吡啶基))-氨基]乙基}胺、1-[2-({2-[(6-氨基-5-硝基(2-吡啶基))氨基]乙基}氨基)-4-(2，4-二氯苯基)嘧啶-5-基]-4-基吡咯烷-2，5-二酮、1-[4-(2，4-二氯苯基)-2-({2-[(5-硝基(2-吡啶基))氨基]乙基}氨基)嘧啶-5-基]-4-甲基哌嗪-2，6-二酮、1-[2-({2-[(6-氨基-5-硝基(2-吡啶基))氨基]乙基}-氨基)-4-(2，4-二氯苯基)嘧啶-5-基]-3-(二甲氨基)吡咯烷-2，5-二酮、{5-咪唑-2-基-4-[4-(三氟甲基)苯基]嘧啶-2-基}{2-[(5-硝基(2-吡啶基))氨基]乙基}胺、{2-[(6-氨基-5-硝基(2-吡啶基))氨基]乙基}{4-(2，4-二氯苯基)-5-(1-甲基咪唑-2-基)嘧啶-2-基}胺、[4-(2，4-二氯苯基)-5-(4-甲基哌嗪基)嘧啶-2-基]{2-[(5-硝基(2-吡啶基))氨基]乙基}胺、[4-(2，4-二氯苯基)-5-(嗎啉-4-基甲基)嘧啶-2-基]{2-[(5-硝基(2-吡啶基))氨基]乙基}胺、[4-(2，4-二氯苯基)-5-(4-甲基咪唑-2-基)嘧啶-2-基]{2-[(5-硝基(2-吡啶基))氨基]乙基}胺、{2-[(6-氨基-5-硝基(2-吡啶基))氨基]乙基}[4-(2，4-二氯苯基)-5-(4-甲基咪唑-2-基)嘧啶-2-基]胺、{2-[(6-氨基-5-硝基(2-吡啶基))氨基]乙基}[4-(2-氯苯基)-5-咪唑-2-基嘧啶-2-基]胺、[4-(2-氯-4-氟苯基)-5-咪唑-2-基嘧啶-2-基]{2-[(5-硝基(2-吡啶基))氨基]乙基}胺、[4-(2，4-二氯苯基)-5-咪唑基嘧啶-2-基]{2-[(5-硝基(2-吡啶基))氨基]乙基}(2-吡咯烷基乙基)胺、[4-(2，4-二氯苯基)-5-咪唑基嘧啶-2-基](2-嗎啉-4-基乙基){2-[(5-硝基(2-吡啶基))氨基]乙基}胺、6-[(2-{[4-(2，4-二氯苯基)-5-(4-甲基咪唑-2-基)嘧啶-2-基]氨基}乙基)氨基]吡啶-3-甲腈、{2-[(6-氨基-5-硝基(2-吡啶基))氨基]乙基}[4-(2-氯-4-氟苯基)-5-咪唑-2-基嘧啶-2-基]胺、[4-(4-乙基苯基)-5-咪唑-2-基嘧啶-2-基]{2-[(5-硝基(2-吡啶基))氨基]乙基}胺、[5-((1E)-1-氮雜-2-嗎啉-4-基丙烯-1-基)-4-(2，4-二氯苯基)-嘧啶-2-基]{2-[(6-氨基-5-硝基(2-吡啶基))氨基]乙基}胺、N-[4-(2，4-二氯苯基)-2-({2-[(5-硝基(2-吡啶基))氨基]乙基}氨基)嘧啶-5-基]乙酰胺、[4-(2，4-二氯苯基)-5-咪唑-2-基嘧啶-2-基]{2-[(6-甲氧基-5-硝基(2-吡啶基))氨基]乙基}胺、6-[(2-{[4-(2，4-二氯苯基)-5-咪唑基嘧啶-2-基]甲氨基}乙基)氨基]吡啶-3-甲腈、6-[(2-{[4-(2，4-二氯苯基)-5-咪唑-2-基嘧啶-2-基]甲氨基}乙基)氨基]-吡啶-3-甲腈、[4-(2，4-二氯苯基)-5-咪唑-2-基嘧啶-2-基]甲基{2-[(5-硝基(2-吡啶基))氨基]乙基}胺、6-[(2-{[4-(2-氯-4-氟-苯基)-5-咪唑-2-基嘧啶-2-基]氨基}乙基)氨基]吡啶-3-甲腈、[4-(4-氯苯基)-5-咪唑-2-基嘧啶-2-基]{2-[(5-硝基(2-吡啶基))氨基]乙基}胺、{2-[(6-氨基-5-硝基(2-吡啶基))氨基]乙基}[4-(4-氯-2-甲基-苯基)-5-咪唑-2-基嘧啶-2-基]胺、{2-[(6-氨基-5-硝基(2-吡啶基))-氨基]乙基}[4-(4-溴-2-氯苯基)-5-咪唑-2-基嘧啶-2-基]胺、6-[(2-{[4-(4-溴-2-氯苯基)-5-咪唑-2-基嘧啶-2-基]氨基}乙基)-氨基]吡啶-3-甲腈、6-[2-({2-[(6-氨基-5-硝基(2-吡啶基))氨基]乙基}氨基)-4-(2，4-二氯苯基)嘧啶-5-基]-3-吡咯烷[3，4-b]吡啶-5，7-二酮、N-[2-({2-[(6-氨基-5-硝基(2-吡啶基))氨基]乙基}氨基)-4-(2，4-二氯苯基)-嘧啶-5-基]-2-(甲氨基)乙酰胺、{2-[(6-氨基-5-硝基(2-吡啶基))氨基]-乙基}[4-(4-溴-2-氯苯基)-5-(4-甲基咪唑-2-基)嘧啶-2-基]胺、6-[(2-{[4-(4-溴-2-氯苯基)-5-(4-甲基咪唑-2-基)嘧啶-2-基]-氨基}乙基)氨基]吡啶-3-甲腈、{2-[(6-氨基-5-硝基(2-吡啶基))氨基]-乙基}[4-(2-氯-4-氟苯基)-5-(4-甲基咪唑-2-基)嘧啶-2-基]胺和6-[(2-{[4-(2，4-二氯苯基)-5-(5-氯-2-氧代氫吡啶基(oxohydropyridyl))嘧啶-2-基]氨基}乙基)氨基]吡啶-3-甲腈。
在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明提供具有以下結(jié)構(gòu)的化合物
其中X、R1-R6和R8-R14具有上述意義，而R15選自氫、硝基、氰基、氨基、烷基、鹵素、鹵代低級(jí)烷基、烷基氧羰基、氨基羰基、烷基磺?；⒑头蓟酋；捌渌帉W(xué)上可接受的鹽。本發(fā)明優(yōu)選的該組代表性化合物包括，例如[6-(2，4-二氯苯基)-5-咪唑基(2-吡啶基)]{2-[(5-硝基(2-吡啶基))氨基]乙基}胺、{2-[(6-氨基-5-硝基(2-吡啶基))氨基]乙基}[6-(2，4-二氯苯基)-5-咪唑基(2-吡啶基)]胺、6-[(2-{[6-(2，4-二氯苯基)-5-咪唑基-2-吡啶基]氨基}乙基)氨基]吡啶-3-甲腈、{2-[(6-氨基-5-硝基(2-吡啶基))氨基]乙基}[6-(2，4-二氯苯基)-5-硝基(2-吡啶基)]胺、{2-[(6-氨基-5-硝基(2-吡啶基))氨基]乙基}[6-(2，4-二氯苯基)-5-(4-甲基咪唑基)(2-吡啶基)]胺、6-[(2-{[6-(2，4二氯苯基)-5-(4-甲基咪唑基)-2-吡啶基]氨基}乙基)氨基]吡啶-3-腈和[4-(4-溴-2-氯苯基)-5-咪唑-2-基嘧啶-2-基]{2-[(5-硝基(2-吡啶基))氨基]乙基}胺。
優(yōu)選的式(I)所示的化合物是化合物下式所示的化合物(VI)6-[(2-{[4-(2，4-二氯苯基)-5-(4-甲基咪唑-2-基)嘧啶-2-基]氨基}乙基)氨基]吡啶-3-甲腈 本發(fā)明的另一方面提供了含有式I所示化合物和藥學(xué)上可接受的載體的組合物，其中化合物的量可有效地調(diào)制所施用至的人或動(dòng)物受試對(duì)象的GSK3活性。
在還有的實(shí)施方案中，本發(fā)明提供抑制人或動(dòng)物受試對(duì)象的GSK3活性的方法，所述方法包括向人或動(dòng)物受試對(duì)象施用GSK3抑制量的式(I)所示化合物。
本發(fā)明還提供在人和動(dòng)物受試對(duì)象中治療患有GSK-3介導(dǎo)疾病的人或動(dòng)物受試對(duì)象的方法，所述方法包括向人或動(dòng)物受試對(duì)象單獨(dú)或與其它治療活性藥物組合物施用治療有效量的上述式(I)所示化合物。
上述使用的以及本文其它地方使用的術(shù)語(yǔ)定義如下“糖原合成酶激酶3”和“GSK3”在本文可互換使用來(lái)表示與人GSK3β氨基酸序列(Genbank登錄號(hào)L33801)的56和340位之間的氨基酸具有大于60％的序列同源性的任何蛋白。為確定兩條氨基酸序列或兩條核酸的同源性百分比，出于最佳比較的目的排列對(duì)比這些序列(例如，在一條多肽或核酸的序列中可引入空格來(lái)與另一條多肽或核酸進(jìn)行最佳對(duì)比)。然后比較位于對(duì)應(yīng)的氨基酸或核苷酸位置的氨基酸殘基或核苷酸。當(dāng)某條序列中的位置被對(duì)應(yīng)另一條序列中的對(duì)應(yīng)位置的相同氨基酸殘基或核苷酸占據(jù)，則該分子在此位置是同源的(即，本文使用的氨基酸或核酸的“同源性”等價(jià)于氨基酸或核酸的“相同性”)。兩條序列之間的同源性百分比是序列之間相同位置數(shù)目的函數(shù)(即，同源性％＝相同位置的數(shù)目/位置總數(shù)×100)。如Woodgett等所述，Trends Biochem.Sci.，16177-81(1991)，GSK3最初通過(guò)其糖原合成酶的磷酸化作用得到鑒定，該文獻(xiàn)引為參考。通過(guò)抑制GSK3激酶活性，可抑制或者刺激GSK3活性的下游活性。例如，當(dāng)抑制GSK3活性時(shí)，可激活糖原合成酶，增加糖原生產(chǎn)。也已知GSK3在各種其它環(huán)境中可起到激酶作用，例如包括c-jun、β-聯(lián)蛋白和τ蛋白的磷酸化。應(yīng)該理解的是，抑制GSK3激酶活性可在各種生物環(huán)境中導(dǎo)致各種效應(yīng)。然而，本發(fā)明不受限于任何本發(fā)明是如何起作用的機(jī)制理論。
“GSK3抑制劑”在本文用于表示GSK3相關(guān)的IC50約低于100μM、更常見(jiàn)的是約低于50μM的化合物，該IC50通常在下述GSK3抑制活性的無(wú)細(xì)胞測(cè)定中測(cè)量。“IC50”表示將酶(例如，GSK3)活性降低至最大水平的一半時(shí)抑制劑的濃度。本發(fā)明代表性的化合物均顯示具有抗GSK3的抑制活性。本發(fā)明的化合物的GSK3IC50在無(wú)細(xì)胞GSK3激酶測(cè)定中優(yōu)選顯示約低于10μM、更優(yōu)選約低于5μM、還要優(yōu)選約低于1μM、最優(yōu)選約低于200nM。
“任選取代”表示用單價(jià)或二價(jià)基團(tuán)取代氫。合適的取代基團(tuán)包括，例如羥基、硝基、氨基、亞氨基、氰基、鹵素、硫代、硫代氨基、脒基、亞脒基(imidino)、氧代、氧代脒基(oxamidino)、甲氧基脒基(methoxamidino)、亞脒基(imidino)、胍基、亞磺酰氨基、羧基、甲酰基、低級(jí)烷基、鹵代低級(jí)烷基、低級(jí)烷氧基、鹵代低級(jí)烷氧基、低級(jí)烷氧基烷基、烷基羰基、芳基羰基、芳烷基羰基、雜芳基羰基、雜芳烷基羰基、烷硫基、氨基烷基、氰基烷基等。
這些取代基團(tuán)自身可被取代。取代基上被取代的基團(tuán)可是羧基、鹵素、硝基、氨基、氰基、羥基、低級(jí)烷基、低級(jí)烷氧基、氨基羰基、-SR、硫代酰氨基、-SO3H、-SO2R或環(huán)烷基，其中R通常是氫、羥基或低級(jí)烷基。
當(dāng)有取代的取代基含有直鏈基團(tuán)時(shí)，取代可發(fā)生在鏈內(nèi)(例如，2-羥丙基、2-氨基丁基)或位于鏈的末端(例如，2-羥乙基、3-氰基丙基等)。有取代的取代基可是共價(jià)結(jié)合的碳或雜原子的直鏈、支鏈或環(huán)形排列。
本文使用的“低級(jí)烷基”表示被取代或未取代的含有1到10個(gè)碳原子的支鏈或直鏈烷基，例如用一個(gè)或多個(gè)鹵素、羥基或其它基團(tuán)，如甲基、乙基、丙基異丙基、正丁基、叔丁基、新戊基、三氟甲基、五氟乙基等取代。
“亞烷基”表示具有1到20個(gè)碳原子的二價(jià)直鏈或支鏈飽和脂肪族基團(tuán)。用于本發(fā)明化合物中的亞烷基通常是在其骨架中具有1到約6個(gè)碳原子的低級(jí)亞烷基。本文的“鏈烯基”表示具有一個(gè)或多個(gè)雙鍵和2到20個(gè)碳原子的直鏈、支鏈或環(huán)形基團(tuán)。本文的“炔基”表示具有一個(gè)或多個(gè)三鍵和2到20個(gè)碳原子的直鏈、支鏈或環(huán)形基團(tuán)。
本文使用的“低級(jí)烷氧基”表示RO-，其中R是低級(jí)烷基。低級(jí)烷氧基的代表性例子包括甲氧基、乙氧基、叔-丁氧基、三氟甲氧基等。
“環(huán)烷基”表示單環(huán)或多環(huán)、雜環(huán)或碳環(huán)烷基取代基。環(huán)烷基取代基通常具有3到8個(gè)骨架(即，環(huán))原子，其中每個(gè)骨架原子是碳或雜原子。文治使用的術(shù)語(yǔ)“雜環(huán)烷基”表示在環(huán)結(jié)構(gòu)上具有1到5，更常見(jiàn)是1到4個(gè)雜原子的環(huán)烷基取代基。用于本發(fā)明化合物中的合適的雜原子是氮、氧和硫。代表性雜環(huán)烷基部分包括，例如嗎啉基、哌嗪基、哌啶基(piperadinyl)等。碳環(huán)烷基是環(huán)原子為碳的環(huán)烷基。當(dāng)本文使用的術(shù)語(yǔ)“多環(huán)的”與環(huán)烷基取代基聯(lián)用時(shí)，該術(shù)語(yǔ)表示稠合與非稠合的烷基環(huán)結(jié)構(gòu)。
本文的術(shù)語(yǔ)“鹵素”表示鹵素基團(tuán)、例如氟、氯、溴或碘?！胞u代烷基”表示用一個(gè)或多個(gè)鹵素原子取代的烷基。術(shù)語(yǔ)“鹵代低級(jí)烷基”表示用一個(gè)或多個(gè)鹵素原子取代的低級(jí)烷基。術(shù)語(yǔ)“鹵代烷氧基”表示用一個(gè)或多個(gè)鹵素原子取代的烷氧基。術(shù)語(yǔ)“鹵代低級(jí)烷氧基”表示用一個(gè)或多個(gè)鹵素原子取代的低級(jí)烷氧基。
“芳基”表示具有3到14個(gè)骨架碳或雜原子的單環(huán)或多環(huán)雜原子基團(tuán)，并且同時(shí)含有碳環(huán)芳基和雜環(huán)芳基。碳環(huán)芳基是所有芳環(huán)上的環(huán)原子芳基均是碳的芳基。本文的術(shù)語(yǔ)“雜芳基”表示在芳環(huán)中具有1到4個(gè)雜原子作為環(huán)原子，而余下的環(huán)原子是碳原子的芳基。當(dāng)本文使用的術(shù)語(yǔ)“多環(huán)的”與芳基取代基聯(lián)用時(shí)，該術(shù)語(yǔ)表示稠合與非稠合的環(huán)結(jié)構(gòu)，其中至少一個(gè)環(huán)結(jié)構(gòu)是芳環(huán)，例如具有和苯基稠合的雜環(huán)結(jié)構(gòu)的苯并間二氧雜環(huán)戊烯基，即， 萘基等。本發(fā)明化合物中用作取代基的示范性芳基部分包括苯基、吡啶基、嘧啶基、噻唑基、吲哚基、咪唑基、氧雜二唑基、四唑基、哌嗪基、三唑基、苯硫基、呋喃基、喹啉基、嘌呤基、萘基、苯并噻唑基、苯并吡啶基和苯并咪唑基等。
“芳烷基”表示用芳基取代的烷基。用于本發(fā)明化合物中的芳烷基通常在芳烷基的烷基部分中具有1到6個(gè)碳原子。用于本發(fā)明化合物中的合適的芳烷基包括，例芐基、吡啶甲基等。
本文的術(shù)語(yǔ)“氨基”表示-NH2基團(tuán)。本文的術(shù)語(yǔ)“烷基氨基”表示-NRR′基團(tuán)，其中R和R′各自獨(dú)立地選自氫或低級(jí)烷基。本文的術(shù)語(yǔ)“芳基氨基”表示-NRR′基團(tuán)，其中R是芳基，R′是氫、低級(jí)烷基或芳基。本文的術(shù)語(yǔ)“芳烷基氨基”表示-NRR′基團(tuán)，其中R是低級(jí)芳烷基，R′是氫、低級(jí)烷基、芳基或低級(jí)芳烷基。
本文的術(shù)語(yǔ)“芳基環(huán)烷基氨基”表示芳基-環(huán)烷基-NH-基團(tuán)，其中環(huán)烷基環(huán)烷基是二價(jià)環(huán)烷基。環(huán)烷基通常具有3到6個(gè)骨架原子，其中任選具有1到約4個(gè)雜原子。術(shù)語(yǔ)“氨基烷基”表示用氨基末端取代的烷基。
術(shù)語(yǔ)“烷氧基烷基”表示alk1-O-alk2，其中alk1是亞烷基或鏈烯基，alk2是烷基或鏈烯基。術(shù)語(yǔ)“低級(jí)烷氧基烷基”表示alk1是低級(jí)亞烷基或低級(jí)鏈烯基，alk2是低級(jí)烷基或低級(jí)鏈烯基的烷氧基烷基。術(shù)語(yǔ)“芳氧基烷基”表示亞烷基-O-芳基基團(tuán)。術(shù)語(yǔ)“芳烷基氧烷基”表示亞烷基-O-芳烷基基團(tuán)，其中芳烷基是低級(jí)芳烷基。
本文的術(shù)語(yǔ)“烷氧基烷基氨基”表示-NR-(烷氧基烷基)基團(tuán)，其中R通常是氫、低級(jí)芳烷基或低級(jí)烷基。本文的術(shù)語(yǔ)“氨基低級(jí)烷氧基烷基”表示烷氧基烷基是低級(jí)烷氧基烷基的氨基烷氧基烷基。
本文的術(shù)語(yǔ)“氨基羰基”表示-C(O)-NH2基團(tuán)。本文的術(shù)語(yǔ)“取代的氨基羰基”表示-C(O)-NRR′基團(tuán)，其中R是低級(jí)烷基，R’是氫或低級(jí)烷基。文中術(shù)語(yǔ)“芳基氨基羰基”表示-C(O)-NRR′基團(tuán)，其中R是芳基，R’是氫、低級(jí)烷基或芳基。文中“芳烷基氨基羰基”表示-C(O)-NRR′基團(tuán)，其中R是低級(jí)芳烷基，R’是氫、低級(jí)烷基、芳基或低級(jí)芳烷基。
文中“氨基磺?；北硎?S(O)2-NH2基團(tuán)?！叭〈陌被酋；北硎?S(O)2-NRR′基團(tuán)，其中R是低級(jí)烷基，R′是氫或低級(jí)烷基。本文的術(shù)語(yǔ)“芳烷基氨基磺酰基芳基”表示-芳基-S(O)2-NH-芳烷基基團(tuán)，其中芳烷基是低級(jí)芳烷基。
“羰基”表示二價(jià)基團(tuán)-C(O)-。
“羰氧基”通常表示-C(O)-O-基團(tuán)。這種基團(tuán)包括酯、-C(O)-O-R，其中R是低級(jí)烷基、環(huán)烷基、芳基或低級(jí)芳烷基。本文的術(shù)語(yǔ)“羰氧基環(huán)烷基”通常同時(shí)表示“羰氧基碳環(huán)烷基”和“羰氧基雜環(huán)烷基”，即，其中R分別是是碳環(huán)烷基或雜環(huán)烷基。本文的術(shù)語(yǔ)“芳基羰氧基”表示-C(O)-O-芳基基團(tuán)，其中芳基是單環(huán)或多環(huán)、碳環(huán)或雜環(huán)芳基。本文的術(shù)語(yǔ)“芳烷基羰氧基”表示-C(O)-O-芳烷基基團(tuán)，其中芳烷基是低級(jí)芳烷基。
本文的術(shù)語(yǔ)“磺?；北硎?SO2-基團(tuán)?！巴榛酋；北硎?SO2R-的結(jié)構(gòu)，其中R是烷基。用于本發(fā)明化合物的烷基磺?；ǔＪ窃谄涔羌芙Y(jié)構(gòu)中具有1到6個(gè)碳原子的低級(jí)烷基磺?；Ｒ虼?，用于本發(fā)明化合物的烷基磺酰基通常包括，例如甲基磺酰基(即，其中R是甲基)、乙基磺?；?即，其中R是乙基)、丙基磺?；?即，其中R是丙基)等。本文的術(shù)語(yǔ)“芳基磺酰基”表示-SO2-芳基基團(tuán)。本文的術(shù)語(yǔ)“芳烷基磺酰基”表示-SO2-芳烷基基團(tuán)，其中芳烷基是低級(jí)芳烷基。本文的術(shù)語(yǔ)“亞磺酰氨基”表示-SO2NH2。
本文使用的術(shù)語(yǔ)“羰基氨基”表示二價(jià)基團(tuán)-NH-C(O)-，其中羰基氨基的酰胺氮的氫原子可為低級(jí)烷基、芳基或低級(jí)芳烷基所取代。這種基團(tuán)包括，例如氨基甲酸酯(-NH-C(O)-O-R)和酰胺-NH-C(O)-O-R，其中R是直鏈或支鏈低級(jí)烷基、環(huán)烷基或芳基或低級(jí)芳烷基。術(shù)語(yǔ)“低級(jí)烷基羰基氨基”表示烷基羰基氨基，其中R是在其骨架結(jié)構(gòu)中具有1到約6個(gè)碳原子的低級(jí)烷基。術(shù)語(yǔ)“芳基羰基氨基”表示-NH-C(O)-R基團(tuán)，其中R是芳基。類似地，術(shù)語(yǔ)“芳烷基羰基氨基”表示羰基氨基，其中R是低級(jí)芳烷基。
本文使用的術(shù)語(yǔ)“胍基”表示衍生自胍，H2N-C(＝NH)-NH2的部分。這種部分包括結(jié)合于帶有正式雙鍵的氮原子(胍的“2”位置，例如二氨基甲基烯氨基，(H2N)2C＝NH-)和結(jié)合于帶有正式單鍵的各個(gè)氮原子的(胍的“1”和/或“3”位置，例如，H2N-C(＝NH)-NH-)。任何氮原子的氫原子可用合適的取代基取代，例如低級(jí)烷基、芳基或低級(jí)芳烷基。
本文使用的術(shù)語(yǔ)“脒基”表示R-C(＝N)-NR′-(該基團(tuán)位于“N1”氮上)和R(NR′)C＝N-(該基團(tuán)位于“N2”氮上)部分，R和R′可是氫、低級(jí)烷基、芳基或低級(jí)芳烷基。
術(shù)語(yǔ)“骨損失”表示其中骨礦物密度損失的任何疾病。
術(shù)語(yǔ)“抗吸收藥物”表示吸收抑制劑，例如二膦酸酯、選擇性雌激素受體調(diào)制劑(SERM)、雌激素、RANKL(核因子NF-KB配體的受體活化劑)拮抗劑、αγβ3拮抗劑、scr抑制劑、組織蛋白酶K抑制劑和降鈣素。
術(shù)語(yǔ)“成骨促進(jìn)藥物”表示刺激成骨作用的化合物和肽。成骨促進(jìn)藥物包括重組甲狀旁腺激素，例如特立帕肽。
本發(fā)明的化合物可使用本文所述方法或本領(lǐng)域熟知的其它方法容易地合成。本發(fā)明的化合物可按照美國(guó)專利號(hào)6,417,185；6,489,344和PCT WO99/65897和WO 02/20495所述的方法合成。
例如，D.J.Brown，《嘧啶》(The Pyrimidines)，54卷，Wiley(1994)總結(jié)了易于理解的具有多種取代基的嘧啶的合成方法，該文獻(xiàn)引為參考。液相和基于樹脂(即，固相)的技術(shù)均可用于合成本文所述的化合物。
本發(fā)明的基于嘧啶的化合物可通過(guò)使含有羰基的衍生物與N，N-二甲基甲酰胺二甲基乙縮醛(DEFDMA)反應(yīng)來(lái)容易地合成。然后將得到的中間體，烯氨基酮(enaminoketone)與在有機(jī)溶劑的條件下與胍和合適的堿(例如，乙醇鈉、甲醇鈉、氫氧化鈉或碳酸銫)在各種溫度反應(yīng)得到嘧啶。該方法通常描述于Menozzi等，J.Heterocyclic Chem.，241669(1987)；P.Schenone等，J.Heterocyclic Chem.，27295(1990)；R.Paul等，J.Med.Chem.，362716(1993)和J.Zimmermann等，Arch.Pharm.，329371(1996)，所有文獻(xiàn)均引為參考。
適用于該反應(yīng)方案的含有羰基的起始試劑包括，例如β-酮酯、烷基芳基酮、β-酮砜、α-硝基酮、β-酮腈、脫氧苯偶姻、芳基雜芳基甲基酮等。含有羰基的起始試劑可購(gòu)得或使用已知的方法合成，例如，β-酮酯可按照R.J.Clay等，Synthesis，1992290(1992)所述方法使鹽酸或其它活化羧酸與乙基丙二酸鉀在有三乙胺的條件下反應(yīng)來(lái)容易地合成，該文獻(xiàn)引為參考?；蛘?，可按照所述Sircar等，J.Med.Chem.，281405(1985)方法通過(guò)用合適的堿(例如氫氧化鉀)使合適的甲基酮去質(zhì)子化、然后與二乙基碳酸酯縮合來(lái)合成所需的β-酮酯，該文獻(xiàn)引為參考。
類似地，β-酮砜和α-硝基酮可使用已知的方法制備，例如描述于N.S.Simpkins，“有機(jī)合成中的砜”(Sulphones in Organic Synthesis)，Pergamon(1993)(β-酮砜)和M.Jung等，J.Org.Chem.，524570(1987)(α-硝基酮)的方法，二者均引為參考。β-酮腈可通過(guò)使α-鹵代酮與氰化鈉或氰化鉀反應(yīng)容易地制備。
當(dāng)?shù)孜锸请p重活化的羰基化合物(例如，β-酮酯、β-酮砜、β-酮腈等)時(shí)，第一次縮合反應(yīng)通常于70-80℃在用例如THF溶劑中配制的少許過(guò)量的DMFDMA中反應(yīng)幾小時(shí)。
當(dāng)使用單活化底物，例如甲基酮時(shí)，DMFDMA經(jīng)常用作溶劑于較高溫度(90-100℃)反應(yīng)更長(zhǎng)的時(shí)間(例如。過(guò)夜)。縮合反應(yīng)完成后，減壓除去溶劑與剩余的DMFDMA。得到的固體或油狀物溶解于合適的溶劑并與等摩爾量的胍和堿一起加熱。
形成酯后，得到的嘧啶進(jìn)行堿或酸水解產(chǎn)生對(duì)應(yīng)的羧酸。然后該酸可進(jìn)一步與各種醇或胺偶合來(lái)提供各種酯或胺的衍生物。
用于合成本發(fā)明化合物的胍可購(gòu)得或者通過(guò)將對(duì)應(yīng)的胺與胍基轉(zhuǎn)移試劑(例如，苯并三唑甲咪鎓4-甲基苯磺酸鹽(benzotriazolecarboxamidinium4-methylbenzenesulfonate))反應(yīng)來(lái)合成。這種胍基轉(zhuǎn)移試劑描述于A.R.Katritzky等，1995，Synthetic Communications，251173(1995)，該文獻(xiàn)引為參考。因此，例如苯并三唑甲咪鎓4-甲基苯磺酸鹽可在加入二乙醚后與等摩爾量的胺和等量的二異丙基乙胺(DIEA)在乙腈中于室溫反應(yīng)過(guò)夜來(lái)產(chǎn)生胍鎓4-苯磺酸甲酯(guanidinium 4-methylbenzenesulfonate)。含有氮雜環(huán)芳基的胺可用合適的二胺(例如，乙二胺或丙二胺)對(duì)鹵素取代的氮雜環(huán)芳基進(jìn)行親核取代來(lái)制備。這些二胺特別適用于在反應(yīng)溫度是約25℃-125℃時(shí)作為反應(yīng)溶劑。具體胺的制備示于本文提供的實(shí)施例中。
其它已知的合成方法可用于制備本發(fā)明的化合物。例如5-芳基2-氨基嘧啶可按照R.M.Wagner和C.Jutz，Chem.Berichte，2975頁(yè)(1971)所述的方法可通過(guò)將胍與長(zhǎng)春米鎓鹽(vinamidinium salt)反應(yīng)來(lái)制備，該文獻(xiàn)引為參考。
類似地，可通過(guò)將苯胺與2，4-二氯嘧啶反應(yīng)來(lái)制備4-苯胺-2-氯嘧啶(4-anilo-2-chloropyrimidine)。同樣，可用2，4-二氯嘧啶處理苯胺得到4-苯胺-2-氯嘧啶。此外，用第二種胺取代可得到2-氨基-4-苯胺嘧啶(2-amino-4-anilinopyrimidine)。
除了液相合成方法，固相支持(包括基于樹脂的)的合成方法也可用于合成本發(fā)明的化合物，特別是用于平行和組合合成的方法。例如，四取代嘧啶的合成可始于將芳香羧酸醛(例如，4-甲?；郊姿?加載于合適樹脂(例如Rink酰胺樹脂(Novabiochem，圣迭戈，加利福尼亞))的氨基上(“樹脂法A”)。β-酮酯的Knoevenagel縮合得到可在有合適的堿(例如，碳酸鉀)時(shí)與1H-吡唑-1-鹽酸羧脒(carboxamidine)(Aldrich)縮合的未飽和中間體。然后，中間體二氫嘧啶可在苯中用2，3-二氯-5，6-二氰基-1，4-苯醌(DDQ)氧化至結(jié)合于樹脂上的嘧啶。最后，通過(guò)在1-甲基吡咯烷酮(NMP)或其它合適的溶劑中與胺一起加熱，然后用酸解切割取代吡唑部分得到所需嘧啶。該合成方法可用于產(chǎn)生在嘧啶環(huán)的4-位置具有取代基的嘧啶。
樹脂方法B可用于合成6-位置未取代的嘧啶。如K.Ngu等，TetrahedronLetters，38973(1997)所述(該文獻(xiàn)引為參考)，用二溴化三苯膦在二氯甲烷中處理羥甲基樹脂，例如市售可得的Sasrin樹脂(Bachem Biosciences，Kingof Prussia，賓夕法尼亞)將樹脂的羥甲基轉(zhuǎn)化為溴甲基。然后與伯胺在NMP中反應(yīng)(室溫或70-80℃)以取代溴。然后胺與含有乙酰基的合適芳香化合物偶聯(lián)。該偶聯(lián)反應(yīng)可用PyBOP(Novabiochem，圣迭戈，加利福尼亞)和4-甲基嗎啡啉在NMP中進(jìn)行。
樹脂方法B也可用于將氨基酸殘基引入得到的嘧啶。例如，可使用標(biāo)準(zhǔn)的肽合成條件與方法將氨基樹脂與9-芴基-甲氧基羰基(FMOC)-保護(hù)的氨基酸相偶聯(lián)。進(jìn)一步與4-乙酰苯甲酸偶聯(lián)后，然后與N，N-二甲基甲酰胺二甲基乙縮醛反應(yīng)并與胍環(huán)化來(lái)產(chǎn)生其中含有氨基酸殘基的嘧啶衍生物。
具有，例如位于6位的酰胺苯基和5位的氫的嘧啶可從含有氨基(即，-NH2)的樹脂制備，例如Rink酰胺樹脂(Novabiochem，圣迭戈，加利福尼亞)(“樹脂方法C”)。
本發(fā)明的化合物也可按照用于產(chǎn)生2，4-二氨基嘧啶的樹脂方法D來(lái)制備。用2，4-二氯嘧啶與結(jié)合于樹脂的胺反應(yīng)得到結(jié)合于樹脂的6-氨基-2-氯嘧啶。結(jié)合于樹脂的胺可衍生自任何合適的伯胺；然而，苯胺通常是不適合的。用第二種胺取代并從樹脂切下產(chǎn)物得到2，4-二氨基嘧啶。就第二次取代而言，含有其它官能團(tuán)(例如未保護(hù)的羥基)的伯胺或仲胺是合適的。得到的二氯嘧啶可進(jìn)一步取代，例如用酯基團(tuán)在5-位反應(yīng)。可用2，6-二氯吡啶代替2，4-二氯嘧啶來(lái)產(chǎn)生2，6-二氨基吡啶。
樹脂方法E可用于產(chǎn)生2，6-二氨基吡啶。除了2，6-二氯吡啶用作親電試劑并且最終的產(chǎn)物是2，6-二氨基吡啶外，該方法類似于樹脂方法D。
樹脂方法F可用于合成5-氨基取代的本發(fā)明化合物。結(jié)合于樹脂的胺與鹵代甲基芳基酮反應(yīng)。然后用DMFDMA(純的)處理得到的結(jié)合于樹脂的氨基甲基酮，之后用胍環(huán)化得到2，5-二氨基-6-芳基嘧啶。
樹脂方法G可用于合成在5-位具有羧基的本發(fā)明化合物。
本發(fā)明的GSK3抑制劑化合物可使用已知的方法純化，例如層析、結(jié)晶等。
與至少一種其它類型的激酶相比，本發(fā)明的化合物優(yōu)選顯示基本上對(duì)GSK3具有選擇性抑制活性。本文使用的術(shù)語(yǔ)“選擇性”表示相等于至少一種其它類型的激酶，較高的抗GSK3的抑制能力。與至少兩種其它類型的激酶相比，本發(fā)明的GSK3抑制劑優(yōu)選對(duì)GSK3具有選擇性。測(cè)定除GSK3以外激酶的激酶活性試驗(yàn)是常規(guī)已知的。參見(jiàn)，例如Havlicek等，J.Med.Chem.，40408-12(1997)，該文獻(xiàn)引為參考。GSK3選擇性可按照以下標(biāo)準(zhǔn)定量GSK3選擇性＝IC50(其它激酶)/IC50(GSK3)，當(dāng)IC50(其它激酶)＞IC50(GSK3)時(shí)，GSK3抑制劑對(duì)GSK3具有選擇性。因此，對(duì)GSK具有選擇性的抑制劑顯示比抑制除GSK3以外其它激酶高1倍的GSK3有效抑制。本文使用的術(shù)語(yǔ)“其它激酶”表示除GSK3以外的激酶。這種選擇性通常在無(wú)細(xì)胞試驗(yàn)中測(cè)量。
與其它激酶相比，本發(fā)明的GSK3抑制劑通常顯示至少約2倍(即，IC50(其它激酶)/IC50(GSK3))的GSK3選擇性，更常見(jiàn)的是顯示至少約5倍的選擇性。與至少一種其它激酶相比，本發(fā)明的GSK3抑制劑一般顯示至少約10倍、優(yōu)選至少約100倍，更優(yōu)選至少約1000倍的GSK3選擇性。
GSK3抑制活性可使用本文所述試驗(yàn)以及本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員常規(guī)已知的試驗(yàn)容易地測(cè)定。鑒定具體GSK3抑制劑的示范性方法包括無(wú)細(xì)胞和基于細(xì)胞的GSK3激酶試驗(yàn)。無(wú)細(xì)胞的GSK3激酶試驗(yàn)檢測(cè)通過(guò)直接與多肽GSK3相互作用起作用的抑制劑，而基于細(xì)胞的GSK3激酶試驗(yàn)可鑒定其功能為直接與GSK3自身相互作用或干擾GSK3表達(dá)或產(chǎn)生成熟的活性GSK3所需的翻譯后處理的抑制劑。
總體上，可按照以下步驟進(jìn)行無(wú)細(xì)胞GSK3激酶試驗(yàn)(1)使GSK3與肽底物、放射性標(biāo)記的ATP(例如，γ33P-或γ32P-ATP，二者均購(gòu)自Amersham，Arlington Heights，Illinois)、鎂離子和任選的一種或多種候選抑制劑孵育；(2)該混合物孵育一段時(shí)間以使放射性標(biāo)記的磷酸鹽通過(guò)GSK3活化摻入肽底物；(3)將全部或部分酶反應(yīng)混合物轉(zhuǎn)移至獨(dú)立的容器，所述容器通常是微滴度孔，其中含有統(tǒng)一量的能與肽底物上的錨定配體結(jié)合的捕捉配體；(4)洗滌以除去未反應(yīng)的放射性標(biāo)記的ATP；然后(5)測(cè)定保留于每孔中的33P或32P的量。該量代表?yè)饺腚牡孜锏姆派湫詷?biāo)記的磷酸鹽的量。摻入肽底物的放射性標(biāo)記的磷酸鹽降低表示有抑制。
適用于無(wú)細(xì)胞試驗(yàn)的肽底物可是在有合適量的ATP時(shí)可被GSK3磷酸化的任何肽、多肽或合成的肽衍生物。合適的肽底物可是基于GSK3的各種天然蛋白底物的序列的一部分，并且也可含有包括有間隔序列和錨定配體的N末端或C末端修飾或延伸。因此，肽底物可存在于較大的多肽中，或者是設(shè)計(jì)為可被GSK3磷酸化的分離的肽。
例如，肽底物可基于DNA結(jié)合蛋白CREB的子序列來(lái)設(shè)計(jì)，例如描述于Wang等，Anal.Biochem.，220397-402(1994)(該文獻(xiàn)引為參考)中的CREBDNA結(jié)合蛋白中的SGSG-連接的CREB肽序列。在Wang等報(bào)道的測(cè)試試驗(yàn)中，用cAMP-依賴型蛋白激酶(PKA)使CREB肽的SXXXS基序的C末端絲氨酸用酶催化預(yù)磷酸化，該步驟是賦予基序上可被GSK3磷酸化的N末端絲氨酸所需的?；蛘?，可使用具有相同SXXXS基序并且也含有N末端錨定配體的修飾的CREB肽底物，但該底物合成為其C末端絲氨酸預(yù)磷酸化(這種底物購(gòu)自Chiron Technologies PTY Ltd.，Clayton，Australia)。肽合成期間磷酸化SXXXS基序的第二個(gè)絲氨酸就無(wú)需采取作為獨(dú)立步驟的PKA酶磷酸化該殘基，并且摻入錨定配體有助于在其與GSK3反應(yīng)后捕捉肽底物。
總體上，用于激酶活性試驗(yàn)的肽底物可含有一個(gè)或多個(gè)被GSK3磷酸化的位點(diǎn)，和一個(gè)或多個(gè)可被其它激酶而非GSK3磷酸化的其它位點(diǎn)。因此，可磷酸化這些位點(diǎn)以產(chǎn)生可被GSK3磷酸化的基序。本文的術(shù)語(yǔ)“預(yù)磷酸化的”表示在使用底物肽進(jìn)行激酶試驗(yàn)之前用非放射性標(biāo)記的磷酸鹽磷酸化該底物肽。這種磷酸化容易地在合成肽底物期間進(jìn)行。
SGSG-連接的CREB肽可與錨定配體相連(例如生物素)，其中P和Y之間接近C末端的絲氨酸被預(yù)磷酸化。本文使用的術(shù)語(yǔ)“錨定配體”表示連接于肽底物以協(xié)助用捕捉配體捕捉肽底物的配體，并且該配體可在洗滌步驟中將肽底物維持于原處而除去未反應(yīng)的放射性標(biāo)記的ATP。示范性錨定配體是生物素。本文的術(shù)語(yǔ)“捕捉配體”表示能高親和力地結(jié)合錨定配體并連接于固體結(jié)構(gòu)上的分子。結(jié)合的捕捉配體的例子包括，例如抗生物素蛋白或鏈霉抗生物素蛋白包衣的微滴度板或瓊脂糖珠。攜帶有捕捉配體的珠還可與閃爍體組合來(lái)提供測(cè)定捕捉到的放射性標(biāo)記底物肽的方法，或者閃爍體可在以后步驟中加入到捕捉到的肽中。
捕捉到的放射性標(biāo)記的肽底物可使用已知方法在閃爍計(jì)數(shù)儀中定量。如果酶反應(yīng)在僅有限部分的肽(例如，少于20％)被磷酸化的條件下進(jìn)行，閃爍計(jì)數(shù)儀中檢測(cè)到的信號(hào)與GSK3活性成比例。如果反應(yīng)過(guò)程中存在某種抑制劑，GSK3活性降低，因此較少量的放射性標(biāo)記磷酸鹽被摻入肽底物。所以，檢測(cè)到的閃爍信號(hào)較低。因此，與在反應(yīng)過(guò)程中無(wú)抑制劑的陰性對(duì)照中觀察到的結(jié)果相比，觀察到GSK3抑制活性的閃爍信號(hào)降低。
基于細(xì)胞的GSK3激酶活性試驗(yàn)通常使用可表達(dá)GSK3與GSK3底物的細(xì)胞，例如用編碼GSK3及其底物的基因(包括基因表達(dá)的調(diào)控序列)轉(zhuǎn)化的細(xì)胞。在進(jìn)行基于細(xì)胞的試驗(yàn)中，能表達(dá)基因的細(xì)胞與本發(fā)明的化合物一起孵育。裂解細(xì)胞并通過(guò)，例如在SDS PAGE上觀察其相對(duì)于未磷酸化形式的遷移率或通過(guò)用對(duì)底物的磷酸化形式特異的抗體檢測(cè)底物的量來(lái)檢測(cè)磷酸化形式的底物的部分。底物磷酸化的量是化合物的抑制活性的表征，即，與無(wú)抑制劑時(shí)進(jìn)行的試驗(yàn)相比，檢測(cè)到磷酸化程度降低表示得到抑制。基于細(xì)胞的試驗(yàn)中檢測(cè)到的GSK3抑制活性可能是由于，例如抑制了GSK3表達(dá)或抑制了GSK3激酶的活性。
因此，基于細(xì)胞的試驗(yàn)也可特異性地用于涉及GSK3抑制的活性的試驗(yàn)，例如抑制τ蛋白磷酸化、增強(qiáng)胰島素信號(hào)等。例如，為評(píng)價(jià)GSK3抑制劑抑制微管相關(guān)τ蛋白的阿爾茨海默氏樣磷酸化的能力，用人GSK3β和人τ蛋白共同轉(zhuǎn)染細(xì)胞，然后與一種或多種候選抑制劑孵育。各種哺乳動(dòng)物細(xì)胞系與表達(dá)載體可用于這種類型的試驗(yàn)。例如，可按照Stambolic等，1996，Current Biology 61664-68所述(該文獻(xiàn)引為參考)用人GSK3β表達(dá)質(zhì)粒與含有在早期SV40啟動(dòng)子控制下的人τ蛋白編碼序列的表達(dá)質(zhì)粒，例如pSG5共同轉(zhuǎn)染COS細(xì)胞。也參見(jiàn)，Goedert等，EMBO J.，8393-399(1989)，該文獻(xiàn)引為參考。τ蛋白的阿爾茨海默氏樣磷酸化可在細(xì)胞裂解后用特異性抗體，例如得自Polymedco Inc.(Cortlandt Manor，紐約)的AT8容易地檢測(cè)。
類似地，GSK3抑制劑化合物通過(guò)激活糖原合成酶來(lái)加強(qiáng)胰島素信號(hào)的能力可使用基于細(xì)胞的糖原合成酶活性試驗(yàn)容易地確定。該試驗(yàn)利用通過(guò)增加糖原合成酶活性響應(yīng)胰島素信號(hào)的細(xì)胞，例如CHO-HIRC細(xì)胞系，該細(xì)胞超量表達(dá)野生型胰島素受體(～100,000個(gè)結(jié)合位點(diǎn)/細(xì)胞)。CHO-HIRC細(xì)胞系可按照Moller等，J.Biol.Chem.，26514979-14985(1990)和Moller等，Mol.Endocrinol.，41183-1191(1990)所述產(chǎn)生，二者均引為參考。該試驗(yàn)可通過(guò)在培養(yǎng)基中有各種濃度的本發(fā)明化合物時(shí)孵育血清缺乏CHO-HIRC細(xì)胞，然后在孵育結(jié)束時(shí)裂解細(xì)胞來(lái)進(jìn)行。裂解物中的糖原合成酶活性可如Thomas等，Anal.Biochem.，25486-499(1968)所述檢測(cè)。如Thomas等(同上)所述，將每個(gè)樣品的糖原合成酶活性計(jì)算為最大糖原合成酶活性的百分比，并作活性與候選GSK3抑制劑濃度的函數(shù)圖。將糖原合成酶活性增至其最大水平的一半(即，EC50)的候選GSK3抑制劑的濃度可使用本領(lǐng)域普通技術(shù)人員熟知的常規(guī)曲線擬合方法通過(guò)擬合4參數(shù)的S形曲線來(lái)計(jì)算。
可使用，例如本領(lǐng)域普通技術(shù)人員熟知的方法容易地篩選GSK3抑制劑的體內(nèi)活性。例如，在治療2型糖尿病中具有加強(qiáng)治療活性的候選化合物可通過(guò)在2型糖尿病動(dòng)物模型中檢測(cè)提高葡萄糖耐受性的能力來(lái)容易地鑒定。具體說(shuō)，在糖尿病小鼠(例如，KK、db/db、ob/ob)或糖尿病大鼠(例如，Zucker Fa/Fa或GK)中施用葡萄糖丸劑之前，使用幾種常規(guī)途徑之一給藥候選化合物。施用候選化合物和葡萄糖之后，于預(yù)定的時(shí)間間隔抽取血液樣品并評(píng)價(jià)血清葡萄糖和胰島素水平。內(nèi)源性胰島素分泌水平未增加而葡萄糖消除得到提高可認(rèn)為是胰島素敏感的和化合物效力的指標(biāo)。
本發(fā)明的化合物可以衍生自無(wú)機(jī)或有機(jī)酸的鹽形式使用。這些鹽包括(但不限于)乙酸鹽、己二酸鹽、海藻酸鹽、檸檬酸鹽、天冬氨酸鹽、苯甲酸鹽、苯磺酸鹽、硫酸氫鹽、丁酸鹽、樟腦酸鹽、樟腦磺酸鹽、二葡糖酸鹽、環(huán)戊烷丙酸鹽(cyclopentanepropionate)、十二烷基硫酸鹽、乙磺酸鹽、葡庚酸鹽、甘油磷酸鹽、半硫酸鹽(hemisulfate)、庚酸鹽、己酸鹽、延胡索酸鹽、鹽酸鹽、氫溴酸鹽、氫碘酸鹽、2-羥基乙磺酸鹽、乳酸鹽、馬來(lái)酸鹽、甲磺酸鹽、煙酸鹽、2-萘磺酸鹽、草酸鹽、雙羥萘酸鹽、果膠酸鹽、硫酸鹽、3-苯基丙酸鹽、苦味酸鹽、新戊酸鹽、丙酸鹽琥珀酸鹽、酒石酸鹽、硫代氰酸鹽、對(duì)-甲苯磺酸鹽和十一烷酸鹽。同樣，含氮堿性基團(tuán)可用以下試劑季胺化例如低級(jí)烷基鹵化物，如甲基、乙基、丙基和丁基氯、溴和碘；二烷基硫酸鹽，如二甲基、二乙基、二丁基和二戊基硫酸鹽；長(zhǎng)鏈鹵化物，如癸基、十二烷基、十四烷基和十八烷基氯、溴和碘；芳烷基鹵化物，如芐基和苯乙基溴等。藉此獲得水溶或脂溶性或可分散產(chǎn)物。
用于形成藥學(xué)上可接受的酸加成鹽的酸的例子包括無(wú)機(jī)酸，例如鹽酸、硫酸和磷酸；有機(jī)酸，例如草酸、馬來(lái)酸、琥珀酸和檸檬酸。堿加成鹽可在式(I)所示化合物的最終分離與純化期間原處制備，或者可獨(dú)立地通過(guò)使羧酸部分與合適的堿反應(yīng)制備，例如藥學(xué)上可接受的金屬陽(yáng)離子或銨的氫氧化物、碳酸鹽或碳酸氫鹽，或有機(jī)伯胺、仲胺或叔胺。藥學(xué)上可接受的鹽包括(但不限于)基于堿金屬和堿土金屬的陽(yáng)離子，例如鈉、鋰、鉀、鈣、鎂、鋁鹽等；以及無(wú)毒銨、季銨和胺陽(yáng)離子，包括(但不限于)銨、四甲銨、四乙銨、甲胺、二甲胺、三甲銨、三乙胺、乙胺等。其它用于形成堿加成鹽的代表性的有機(jī)胺包括二乙胺、乙二胺、乙醇胺、二乙醇胺、哌嗪等。
本發(fā)明的化合物可以各種途徑施用，包括腸內(nèi)、胃腸外、吸入和局部施用途徑。例如，合適的施用方式包括口服、皮下、透皮、透內(nèi)膜、離子電滲(iontophoretic)、腦內(nèi)、靜脈內(nèi)、動(dòng)脈內(nèi)、肌肉內(nèi)、腹膜內(nèi)、鼻內(nèi)、腱鞘內(nèi)、硬膜下、直腸等。
本發(fā)明的其它實(shí)施方案提供了含有本發(fā)明的GSK3-抑制劑化合物以及藥學(xué)上可接受的運(yùn)載體或賦形劑的組合物。
合適的藥學(xué)上可接受的賦形劑包括加工試劑和藥物傳遞修飾物和增效劑，例如磷酸鈣、硬脂酸鎂、滑石粉、單糖、二糖、淀粉、明膠、纖維素、甲基纖維素、羧甲基纖維素鈉、右旋糖、羥丙基-β-環(huán)糊精、聚乙烯吡咯烷酮、低熔點(diǎn)蠟、離子交換樹脂等，以及其中任意兩種或多種的組合。其它合適的藥學(xué)上可接受的賦形劑描述于《雷明頓藥物科學(xué)》(Remington′sPharmaceutical Sciences)，Mack Pub.Co.，新澤西(1991)，該文獻(xiàn)引為參考。
含有本發(fā)明的GSK-3抑制劑化合物的藥物組合物可采用適合于所需施用方法的任何形式，包括，例如溶液、懸浮液或乳劑。液體運(yùn)載體通常用于制備溶液、懸浮液和乳劑。考慮用于實(shí)踐本發(fā)明的液體運(yùn)載體包括，例如水、鹽水、藥學(xué)上可接受的有機(jī)溶劑、藥學(xué)上可接受的油或脂肪等，以及其中兩種或多種的組合。液體運(yùn)載體可含有其它合適的藥學(xué)上可接受的添加劑，例如增溶劑、乳化劑、營(yíng)養(yǎng)劑、緩沖液、防腐劑、懸浮劑、增稠劑、粘度調(diào)節(jié)劑、穩(wěn)定劑等。合適的有機(jī)溶劑包括，例如一元醇(如乙醇)和多元醇(如二醇)。合適的油包括，例如大豆油、可可油、橄欖油、紅花油、棉籽油等。就胃腸外施用而言，該運(yùn)載體也可是油性的酯，例如油酸乙酯、硬脂酸異丙酯等。本發(fā)明的組合物的形式也可是微粒、微膠囊、脂質(zhì)體膠囊等，以及其中兩種或多種組合。
本發(fā)明的化合物可以單位劑量制劑經(jīng)口服、胃腸外、舌下、吸入噴霧、直腸或局部施用，所述制劑含有所需常規(guī)的無(wú)毒藥學(xué)上可接受的運(yùn)載體、佐劑和載體。局部施用也涉及使用透皮施用方式，例如透皮插片或離子電泳裝置。本文使用的術(shù)語(yǔ)“胃腸外”包括皮下注射、靜脈內(nèi)、肌肉內(nèi)、膜內(nèi)注射或輸注技術(shù)。
可注射制劑，例如無(wú)菌可注射水性或油性懸浮劑可按照已知技術(shù)使用合適的分散劑或濕潤(rùn)劑和懸浮劑配制。無(wú)菌可注射制劑也可是無(wú)毒胃腸外可接受的稀釋劑或溶劑配制的無(wú)菌可注射溶液或懸浮液，例如1，3-丙二醇配制的溶液。合適的可接受運(yùn)載體和溶劑中可用的是水、Ringer氏溶液和等滲氯化鈉溶液。此外，無(wú)菌且不易揮發(fā)的油宜于用作溶劑或懸浮介質(zhì)。出于此目的，任何無(wú)刺激性的不揮發(fā)油均可使用，包括合成的單或二甘油酯。另外，脂肪酸(例如油酸)可用于制備注射劑。
藥物的直腸施用的栓劑可通過(guò)將藥物與合適的無(wú)刺激性賦形劑，例如可可油和聚乙二醇混合來(lái)制備，這些賦形劑在常溫下是固體，但在直腸溫度下是液體，因此可在直腸中融化并釋放出藥物。
口服施用的固體劑型可包括膠囊、片劑、丸劑、粉末、和顆粒劑。在這種固體劑型中，活性化合物可與至少一種惰性稀釋劑(例如蔗糖、乳糖或淀粉)混合。作為常規(guī)實(shí)踐，這種劑型也可含有除惰性稀釋劑之外的其它物質(zhì)，例如潤(rùn)滑劑(如硬脂酸鎂)。就膠囊、片劑和丸劑而言，這種劑型也可含有緩沖試劑。片劑和丸劑還可用腸包衣制備。
口服施用的液體劑型可包括藥學(xué)上可接受的含有本領(lǐng)域常規(guī)使用的惰性稀釋劑(例如水)的溶劑、溶液、懸浮劑、糖漿和酏劑。這種組合物也可含有佐劑，例如濕潤(rùn)劑、乳化劑、懸浮劑、環(huán)糊精、甜味劑、調(diào)味劑和香料試劑。
在其它實(shí)施方案中，本發(fā)明提供抑制人或動(dòng)物受試對(duì)象的GSK3活性的方法，所述方法包括向受試對(duì)象施用一定量的具有結(jié)構(gòu)(I)、(IV)、(V)或(VI)(或含有這種化合物的組合物)的GSK3抑制劑化合物，該量可有效抑制受試對(duì)象的GSK3活性。其它實(shí)施方案提供治療細(xì)胞或人或動(dòng)物受試對(duì)象的GSK3介導(dǎo)疾病的方法，所述方法包括向細(xì)胞或人或動(dòng)物受試對(duì)象施用可有效抑制細(xì)胞或受試對(duì)象的GSK3活性的量的本發(fā)明化合物或組合物。受試對(duì)象優(yōu)選是人或非人動(dòng)物受試對(duì)象。GSK3活性的抑制指相比于對(duì)照或預(yù)計(jì)的GSK3活性，可檢測(cè)到的對(duì)GSK3活性的抑制。
本發(fā)明化合物的有效量通常包括足以可檢測(cè)地抑制GSK3活性的任何量，所述抑制的檢測(cè)可通過(guò)本文所述的任何試驗(yàn)、本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員已知的其它GSK3激酶活性試驗(yàn)或檢測(cè)罹患GSK3介導(dǎo)疾病的受試對(duì)象的癥狀緩解進(jìn)行。
可按照本發(fā)明治療的GSK-3介導(dǎo)的疾病包括任何生物或醫(yī)學(xué)疾病，這些疾病涉及GSK3活性或抑制GSK3強(qiáng)化了通過(guò)待治療疾病中特征性缺乏的途徑的信號(hào)。異常的GSK3活性可是病癥或疾病的原因或其特征。代表性的GSK3-介導(dǎo)的疾病包括，例如2型糖尿病、早老性癡呆和其它神經(jīng)變性疾病、肥胖、動(dòng)脈粥樣硬化心血管疾病、原發(fā)性高血壓、多囊卵巢綜合征、X綜合癥、局部缺血、特別是腦部缺血、腦外傷、雙相性精神障礙、免疫缺陷、癌癥等。
按照本發(fā)明成功地治療受試對(duì)象可誘導(dǎo)罹患醫(yī)學(xué)或生物疾病的受試對(duì)象的癥狀降低或緩解至，例如阻止該疾病的進(jìn)一步發(fā)展或預(yù)防該疾病。因此，例如治療糖尿病可降低患者的葡萄糖或HbAlc水平。類似地，治療早老性癡呆可降低疾病的發(fā)展速度，所述疾病的發(fā)展速度可通過(guò)，例如測(cè)量癡呆增速的降低檢測(cè)。
可與運(yùn)載體材料組合來(lái)生產(chǎn)單一劑型的活性成分的量可取決有待治療的宿主和具體施用方式而變。然而，應(yīng)該理解的是，任何特定患者的具體劑量水平取決于各種因素，包括具體使用的化合物的活性、年齡、體重、總體健康狀況、性別、飲食、施用時(shí)間、施用途徑、排出速率、藥物組合與進(jìn)行治療的具體疾病的嚴(yán)重性。給定疾病的治療有效量可通過(guò)常規(guī)實(shí)驗(yàn)容易地確定并且這是在普通臨床醫(yī)師的能力與判斷范圍內(nèi)。
出于本發(fā)明的目的，本發(fā)明的GSK3抑制劑化合物的治療有效劑量通常約為0.1mg/kg/天-100mg/kg/天、優(yōu)選約1mg/kg/天-20mg/kg/天、最優(yōu)選約2mg/kg/天-10mg/kg/天，可一劑量或多劑量施用。
本發(fā)明的化合物也可以脂質(zhì)體的形式施用。如同本領(lǐng)域已知的脂質(zhì)體一般衍生自磷脂或其它脂類物質(zhì)。脂質(zhì)體通過(guò)分散在水性介質(zhì)中的單層或多層水合液體晶體形成。任何能形成脂質(zhì)體的、無(wú)毒、生理上可接受的和可代謝的脂類均可用。脂質(zhì)體形式的本發(fā)明組合物可含有除了本發(fā)明的化合物以外的穩(wěn)定劑、防腐劑、賦形劑等。優(yōu)選的脂類是天然與合成的磷脂和磷脂酰膽堿(卵磷脂)。形成脂質(zhì)體的方法是本領(lǐng)域已知的。參見(jiàn)，例如Prescott編，《細(xì)胞生物學(xué)方法》(Methods in Cell Biology)，XIV卷，AcademicPress，紐約，N.W.，33頁(yè)及其后面的(1976)。
盡管本發(fā)明的化合物可以作為單一活性藥物制劑施用，它們也可與一種或多種用于治療疾病的其它藥物組合使用。用于和本發(fā)明的化合物組合來(lái)治療2型糖尿病的代表性藥物包括，例如胰島素、曲格列酮(troglitazone)、羅格列酮(rosiglitazone)、匹格列酮(pioglitazone)、格列吡嗪(glipizide)、甲福明(metformin)、阿卡波糖等。用于和本發(fā)明的化合物組合來(lái)治療早老性癡呆的代表性藥物包括，例如冬尼培唑(donepezil)、他克林(tacrine)等。用于和本發(fā)明的化合物組合來(lái)治療雙相性精神障礙的代表性藥物包括，例如鋰鹽、2-新戊酸酯(valproate)、卡馬西平(carbamazepine)等。用于和本發(fā)明的化合物組合來(lái)治療中風(fēng)的代表性藥物包括，例如組織血纖維蛋白溶酶原激活劑。
當(dāng)其它活性藥物用于和本發(fā)明的化合物組合使用時(shí)，其它活性藥物通常可以《醫(yī)師手冊(cè)》(Physicians′Desk Reference)(PDR)第53版(1999)所列的治療量使用，該文獻(xiàn)引為參考；或者該治療有用量可是本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員已知的。
本發(fā)明的化合物和其它治療活性藥物可以推薦的最大臨床劑量或以較低劑量施用。本發(fā)明組合物中的活性化合物的劑量水平可依施用途徑、疾病的嚴(yán)重性和患者的應(yīng)答反應(yīng)調(diào)整以獲得所需的治療性應(yīng)答。這種組合可以含有兩種藥物的獨(dú)立組合物或以單一劑型施用。當(dāng)組合施用時(shí)，治療性藥物可配制為在相同或不同時(shí)間給藥的獨(dú)立組合物，或者治療性藥物可以單一組合物給藥。
結(jié)合以下代表性實(shí)施例可更好地理解本發(fā)明的前述和其它方面。
實(shí)施例1為確定Wntl0b是否在體內(nèi)抑制脂肪生成，我們制造了在脂肪酸結(jié)合蛋白-4(FABP4)啟動(dòng)子控制下表達(dá)Wntl0b的轉(zhuǎn)基因小鼠。在3種建立者譜系(founder line)中觀察到類似的表型。FABP4-Wntl0b建立者和(C57BL/6×SJL)F2回交至C57BL/6，N2到N4代的后代用于實(shí)驗(yàn)。FABP4啟動(dòng)子的Wntl0b選擇性表達(dá)于白色和棕色脂肪組織以及骨髓中。與同窩出生的野生型小鼠相比，雄性和雌性FABP4-WntlOb小鼠體重增加。代謝分析證實(shí)野生型與FABP4-Wntl0b小鼠之間的食物攝入類似；然而FABP4-Wntl0b小鼠消耗的氧少7.4％。組織重量的測(cè)量證實(shí)增加的體重幾乎全是由于較大的皮膚面積，包括毛發(fā)(8周齡時(shí)轉(zhuǎn)基因雄性小鼠中是6.0±0.6g對(duì)野生型雄性小鼠的3.9±0.3g)。雖然皮膚中的表皮和肌肉層總得看上去是正常的，但在FABP4-Wntl0b小鼠的真皮層中觀察到極大擴(kuò)展，這缺乏脂肪細(xì)胞與降低的皮下層(subcutaneum)一致。因此，在真皮內(nèi)，Wntl0b刺激膠原分泌細(xì)胞增殖并抑制脂肪生成。
除了降低皮膚中的脂肪細(xì)胞數(shù)目以外，通過(guò)雙重能量X-射線吸光分析法估計(jì)的，當(dāng)喂以低脂(降低44％、P＜0.05)或高脂(降低46％、P＜0.01)飲食時(shí)，F(xiàn)ABP4-Wntl0b小鼠的身體總脂肪較低。類似地，喂以低脂(降低40％，P＜0.06)或高脂(降低47％，P＜0.001)飲食的B FABP4-Wntl0b譜系的小鼠的附睪脂肪層(pad)較小，并且類似的結(jié)果也在腎周脂肪組織中觀察到。野生型和FABP4-Wntl0b小鼠之間脂肪細(xì)胞標(biāo)記(例如C/EBPα、PPARγ)的表達(dá)顯示類似。然而，與野生型小鼠相比，伴隨著降低的脂肪組織，小鼠具有較低的血清瘦蛋白(2.0對(duì)3.9ng/ml，P＜0.01)。盡管脂肪組織的發(fā)展被阻斷，但在兩個(gè)月或六個(gè)月的FABP4-Wntl0b小鼠的肝臟、肌肉或胰腺β-細(xì)胞中未觀察到脂質(zhì)累積。與脂肪組織和全身胰島素抗性之間已良好確定的關(guān)系(Kahn等，2000)一致的是，8周齡的FABP4-Wntl0b小鼠葡萄糖耐受性和胰島素敏感性提高了。此外，F(xiàn)ABP4-Wntl0b小鼠對(duì)喂以20周高脂飲食導(dǎo)致的葡萄糖不耐受的抗性提高。因此，Wntl0b抑制白色脂肪組織的發(fā)展并保護(hù)抵御飲食誘導(dǎo)的肥胖和葡萄糖不耐受。
為研究Wntl0b在發(fā)育中的其它作用，我們制造了缺失Wntl0b開放讀框的小鼠。按照預(yù)計(jì)的孟德?tīng)栴l率產(chǎn)生新生Wntl0b裸鼠并且該小鼠未顯示明顯的生長(zhǎng)或生殖缺陷。在同類系FVB背景上，Wntl0b-/-和野生型小鼠具有相似量的附睪脂肪組織，這表明脂肪組織擴(kuò)展是食物攝取增加和/或總的身體能量消耗降低的結(jié)果，而非未調(diào)節(jié)的脂肪生成。然而，抑制C2C1成肌細(xì)胞中的Wnt信號(hào)導(dǎo)致自發(fā)脂肪生成并且成肌細(xì)胞中Wntl0b mRNA隨著年齡增加而降低是與脂肪細(xì)胞分化增加一致的(Taylor-Jones等，2002)，我們觀察到Wntl0b作為脂肪生成和肌生成之間的開關(guān)。我們使用了凍傷模型，其中衛(wèi)星細(xì)胞被激活并且在野生型小鼠中快速增殖并分化再生肌纖維(Pavlath等，1998)。然而，在Wntl0b-/-小鼠中，激活的成肌細(xì)胞積累脂質(zhì)并表達(dá)脂肪細(xì)胞標(biāo)記，F(xiàn)ABP4。當(dāng)心臟毒素傷害了脛骨肌肉時(shí)觀察到了類似的結(jié)果。僅當(dāng)Wntl0-/-小鼠被喂以高脂飲食時(shí)才觀察到衛(wèi)星細(xì)胞的脂肪生成作用，這表明進(jìn)行脂肪生成也需要刺激。
我們也檢查了Wntl0b在棕色脂肪組織(BAT)發(fā)育中的作用。BAT對(duì)嚙齒類動(dòng)物、人類嬰兒并且可能是成年人適應(yīng)性生熱作用至關(guān)重要(Lowell和Spiegelman 2000)。在野生型小鼠的肩胛間區(qū)域、脊柱背面觀察到染成暗紅色的葉狀組織的大BAT沉積。棕色脂肪細(xì)胞富集于線粒體并且含有多腔充滿甘油三酯的液泡。相反，小鼠的肩胛間組織含有組織學(xué)上類似于白色脂肪細(xì)胞、單腔充滿甘油三酯的液泡和取代的核的細(xì)胞。在其它BAT的發(fā)育或功能受損的小鼠模型中觀察到脂滴增大(Enerback等，1997；Thomas等，1997；Moitra等，1998和Shimomura等，1998)。為進(jìn)一步鑒定FABP4-Wntl0b小鼠的肩胛間組織的性質(zhì)，我們檢查了各種脂肪細(xì)胞標(biāo)記的表達(dá)情況。雖然FABP4-Wntl0b小鼠具有類似于白色脂肪組織的肩胛間組織，脂肪生成轉(zhuǎn)錄因子、C/EBPα和PPARγ、脂肪細(xì)胞脂肪酸結(jié)合蛋白、FABP-4未見(jiàn)表達(dá)。此外，重要的棕色脂肪細(xì)胞基因(Lowell和Spiegelman 2000；Rosen等，2000)的表達(dá)，例如PGC-1α、PGC-1β、UCP-1和β3-腎上腺素受體也大大降低。最后，當(dāng)將小鼠置于4℃時(shí)，其未能維持核心體溫并在72小時(shí)內(nèi)喪失體溫調(diào)節(jié)控制?？傊?，這些數(shù)據(jù)表明Wntl0b阻斷BAT的發(fā)育和功能。
在骨髓中，Wnt信號(hào)可確定間充質(zhì)前體是否分化為脂肪細(xì)胞或成骨細(xì)胞。盡管Wntl0b抑制脂肪生成和脂肪組織發(fā)育，激活典型的Wnt信號(hào)刺激成骨細(xì)胞發(fā)生和骨形成(Bain等，2003；Gong等，2001；Boyden等，2002)。然而，涉及骨發(fā)育的內(nèi)源性Wnt還未鑒定到。因此，我們檢查了FABP4-Wntl0b和Wntl0b裸鼠的骨骼表型。
用微機(jī)化斷層顯影分析FABP4-Wntl0b小鼠顯示小梁骨延伸至整個(gè)內(nèi)皮骨腔(bonecomparment)。該骨表型存在于兩種性別并早在10周齡大就觀察到。與野生型對(duì)照相比，遠(yuǎn)端股骨的小梁骨體積比(BV/TV)增加了約4倍(15.8對(duì)3.7％，P＜0.001)，遠(yuǎn)端的干骺端小梁的數(shù)量(Tb.N.；4.71對(duì)1.43，P＜0.001)、厚度(Tb.Th.；0.033對(duì)0.024mm，P＜0.05)均增加并且更緊密地排列(Tb.Sp.；0.19對(duì)0.95mm，P＜0.001)(表1)。對(duì)3cm的皮層間片段分析表明骨橫截面、皮層厚度和彎曲力矩均增加；然而，高的小梁含量使骨干分析復(fù)雜化。與野生型同窩出生的小鼠相比，4點(diǎn)彎曲的機(jī)械測(cè)試表明FABP4-Wntl0b小鼠的股骨的極限載荷(42.8對(duì)32.0N，P＜0.01)與剛性(326.6對(duì)235.4N/mm，P＜0.01)均增加。由于FABP4-Wntl0b小鼠的脛骨、肱骨和脊柱的骨頭均增加了，Wntl0b的作用不限于股骨。小鼠的增加的小梁骨強(qiáng)烈支持Wntl0b將間充質(zhì)前體發(fā)育從脂肪生成改變至成骨細(xì)胞發(fā)生的假設(shè)。雖然骨發(fā)育增加可能部分是由于血清瘦蛋白的降低(Takeda等，2002)，Wnt信號(hào)的直接作用可能是用糖原合成酶激酶3抑制劑激活Wnt信號(hào)增加了成骨細(xì)胞發(fā)生和雙電位ST2細(xì)胞的礦化(圖1B)。
表1.Wntl0b增加FABP4-Wntl0b小鼠的骨形成和骨強(qiáng)度。
按Hankenson等，2000所述進(jìn)行野生型(n＝6)和FABP4-Wntl0b(n＝6)小鼠的遠(yuǎn)端股骨的微機(jī)化斷層顯影并用GE Medical Systems Microview軟件的立體學(xué)功能進(jìn)行分析。分析了對(duì)應(yīng)于圖1A中下面一幅的加亮區(qū)域的1mm3的區(qū)域。按Hankenson等，2000所述用Servohydraulic測(cè)試器(810材料測(cè)試系統(tǒng)；Eden Prairie，MN)分析股骨的材料性能。
形態(tài)計(jì)量性能野生型FABP4-Wntl0bP值小梁厚度0.0244±0.00430.0329±0.0055 P＜0.05(Tb.Th.；mm)小梁間距0.95±0.360.188±0.035P＜0.001(Tb.Sp.；mm)小梁數(shù)目(Tb.N.) 1.43±0.594.71±0.55 P＜10-5材料性能骨礦物密度108±63293±85P＜0.01(mg/cc)極限載荷(N) 32.1±2.9 42.8±5.9 P＜0.01剛性(N/mm)235±19327±66P＜0.01屈服載荷(N) 21.0±3.9 25.6±7.6 NS能量(Nmm) 11.5±6.2 9.8±3.6 NS取代率2.90±0.5 3.33±2.0 NS為確定內(nèi)源性Wntl0b是否刺激成骨細(xì)胞發(fā)生，我們檢查了Wntl0b-/-小鼠的骨發(fā)育情況。雄性Wntl0b-/-小鼠的遠(yuǎn)端干骺端股骨分析表明骨體積百分比降低了30％(表2)。骨礦物密度和小梁數(shù)目同等降低(表2)。相似的結(jié)果也在雌性Wntl0b-/-小鼠中觀察到?？傊?，Wntl0b轉(zhuǎn)基因和裸鼠提供了Wntl0b調(diào)節(jié)骨發(fā)育的有力證據(jù)。
表2.Wntl0b-/-小鼠的骨重量和小梁數(shù)目均降低。按Hankenson等，2000所述進(jìn)行野生型(n＝8)和Wntl0b-/-(n＝8)小鼠的遠(yuǎn)端股骨的微機(jī)化斷層顯影并用GE Medical Systems Microview軟件的立體學(xué)功能進(jìn)行分析。
形態(tài)計(jì)量性能野生型Wntl0b-/-變化％P值骨礦物密度(mg/cc)212±15164±23 -23＜0.001骨體積百分比(BV/TV；％) 9.23±1.9 6.45±1.85 -30＜0.01骨表面積/體積(BS/BV；mm-1) 71.6±474.5±8.2 +4 NS小梁厚度(Tb.Th.；mm) 0.030±0.002 0.029±0.003-6 NS小梁數(shù)目(Tb.N) 2.91±0.5 2.15±0.51 -26＜0.01小梁間距(Tb.Sp.；mm) 0.343±0.082 0.559±0.272+63＜0.05從FAB4啟動(dòng)子表達(dá)Wntl0b抑制了脂肪組織的發(fā)育并增加了骨形成和骨強(qiáng)度。小鼠對(duì)飲食誘導(dǎo)的肥胖具有抗性并顯示葡萄糖耐受性提高。Wntl0b缺陷降低小梁骨體積并使活化的成肌細(xì)胞傾向于生成脂肪而非肌肉。這些結(jié)果表明就多功能間充質(zhì)前體而言，Wntl0b控制脂肪生成和另一種細(xì)胞結(jié)局之間的轉(zhuǎn)換，例如成骨細(xì)胞或肌細(xì)胞分化。
實(shí)施例2制備式(VI)所示化合物6-[(2-{[4-(2，4-二氯苯基)-5-(4-甲基咪唑-2-基)嘧啶-2-基]氨基}乙基)氨基]吡啶-3-甲腈 1.制備1-(2，4-二氯苯基)-2-(4-甲基咪唑-2-基)乙-1-酮二氯甲烷(25ml)配制的2，4-二氯苯甲酰氯(7.24M)溶液在20分鐘滴加至以二氯甲烷(75ml)和N，N-二異丙基乙胺(Hunig堿)(34ml)配制的攪拌中的2，4-二甲基咪唑(0.80M)溶液。加入期間使用水浴冷卻反應(yīng)混合物。然后將反應(yīng)混合物加熱回流5分鐘。反應(yīng)液變成更暗的顏色。減壓除去產(chǎn)物中的溶劑并將得到的產(chǎn)物于真空中干燥1小時(shí)。
向干燥的固體(上述)加入冰醋酸和濃鹽酸水溶液組成的溶液(2∶1v/v，120ml)?；旌衔锶缓髷嚢杌亓鞔蠹s90分鐘。使用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀除去乙酸。冷卻后，向固體殘留物加入蒸餾水(200ml)和甲苯(100ml)，劇烈攪拌30分鐘。過(guò)濾固體，用50ml蒸餾水洗滌，棄去固體。濾液轉(zhuǎn)移至分液漏斗。棄去有機(jī)相后，用甲苯(2×100ml)洗滌水相。水相轉(zhuǎn)移至大燒杯(2l)并用異丙醚(50ml)稀釋。通過(guò)小心地加入碳酸氫鈉對(duì)攪拌的混合物堿化(pH7-8)，形成粘性的白色固體。加入二氯甲烷(200ml)并繼續(xù)攪拌10分鐘。分離掉有機(jī)相并再次用二氯甲烷(100ml)萃取水相。合并有機(jī)相并用飽和的NaHCO3水溶液(100ml)、蒸餾水(100ml)、鹽水(100ml)洗滌，Na2SO4干燥，過(guò)濾，濃縮并在真空中干燥得到產(chǎn)率為46％的1-(2，4-二氯苯基)-2-(4-甲基咪唑-2-基)-1-乙酮。
2.制備(2Z)-1-(2，4-二氯苯基)-3-(二甲氨基)-2-(4-甲基咪唑-2-基)丙-2-烯-1-酮1-(2，4-二氯苯基)-2-(4-甲基咪唑-2-基)-1-乙酮(0.33M)和N，N-二甲基甲酰胺-二甲基乙縮醛(DMFDMA)(25ml)的混合物于70-75℃攪拌2.5小時(shí)。然后減壓除去DMFDMA并于高真空中干燥幾小時(shí)得到定量產(chǎn)率的淺橙色固體。烯胺酮(enaminone)產(chǎn)物(2Z)-1-(2，4-二氯苯基)-3-(二甲氨基)-2-(4-甲基咪唑-2-基)丙-2-烯-1-酮通常無(wú)需進(jìn)一步純化就可使用。
3.制備6-[(2-氨基乙基)氨基]吡啶-3-甲腈乙腈(120ml)配制的2-氯-5-氰基吡啶(0.60M)和乙二胺(85ml)的混合物于75-80℃在氬氣氣氛中攪拌過(guò)夜(約16小時(shí))。減壓除去乙二胺，然后在真空中干燥2-3小時(shí)。殘留的溶液用1M氫氧化鈉溶液(～100ml)堿化。水溶液用氯化鈉飽和并用95％乙酸乙酯和5％甲醇(3×150ml)的溶液與95％乙腈和5％甲醇(3×150ml)的溶液萃取。合并有機(jī)萃取相并用飽和的氯化鈉溶液(2×70ml)萃取。硫酸鈉干燥有機(jī)相，過(guò)濾并減壓濃縮。白色至棕褐色的粗固體與醚(2×50ml)一起研磨并在真空中干燥過(guò)夜得到產(chǎn)率為78％的6-[(2-氨基乙基)氨基]吡啶-3-腈。
4.制備氨基{2-[(5-氰基(2-吡啶基))氨基]乙基}鹽酸羧脒6-[(2氨基乙基)氨基]吡啶-3-腈(0.47M)、1H-吡唑-1-鹽酸羧脒(0.47M)和乙腈(120ml)的混合物于75-80℃攪拌大約24小時(shí)。冷卻后，過(guò)濾收集沉淀物。用乙腈(2×100ml)、乙醚(3×100ml)徹底洗滌白色固體并在真空中干燥得到產(chǎn)率為82％的鹽酸鹽形式的氨基{2-[(5-氰基(2-吡啶基))氨基]乙基}羧脒。
5.制備6-[(2-{[4-(2，4-二氯苯基)-5-(4-甲基咪唑-2-基)嘧啶-2-基]氨基}乙基)氨基]吡啶-3-腈溶解于純(abs.)乙醇(15ml)的乙醇鈉(0.58M)溶液加入攪拌的(2Z)-1-(2，4-二氯苯基)-3-(二甲氨基)-2-(4-甲基咪唑-2-基)丙-2-烯-1-酮(0.41M)、氨基{2-[(5-氰基(2-吡啶基))氨基]乙基}鹽酸羧脒(0.43M)和純乙醇(20ml)混合物。然后將反應(yīng)液加熱至75-80℃2.5小時(shí)。冷卻后，反應(yīng)液用乙酸乙酯(400ml)稀釋，用飽和的NaHCO3(100ml)水溶液、蒸餾水(2×100ml)、鹽水(100ml)洗滌，Na2SO4干燥，過(guò)濾并濃縮。粗產(chǎn)物(～50％純)通過(guò)硅膠的快速層析純化。柱的展開劑始于1∶1的乙酸乙酯比己烷，然后用乙酸乙酯直至除去所有快速流出的雜質(zhì)。產(chǎn)物用含1.5％甲醇的乙酸乙酯洗脫。使用含5％甲醇的乙酸乙酯作為溶劑系統(tǒng)進(jìn)行TLC來(lái)檢測(cè)柱。產(chǎn)物在長(zhǎng)波區(qū)域具有紫外活性并且在未染色的TLC板上“發(fā)出”藍(lán)光。濃縮合適的組分。真空過(guò)夜干燥灰白色的固體得到產(chǎn)率為28％的6-[(2-{[4-(2，4-二氯苯基)-5-(4-甲基咪唑-2-基)嘧啶-2-基]氨基}乙基)氨基]吡啶-3-腈。
HPLC20.7分鐘(＞99％純)MSM+H＝465.3(C22H18C12N8+H＝465)
權(quán)利要求
1.一種治療或預(yù)防人或動(dòng)物受試對(duì)象骨損失的方法，所述方法包括向人或動(dòng)物受試對(duì)象施用式(I)所示的化合物 其中W是任選取代的碳或氮；X和Y獨(dú)立選自氮、氧和任選取代的碳；A是任選取代的芳基或雜芳基；R1、R2、R3和R4獨(dú)立選自氫、羥基和任選取代的低級(jí)烷基、環(huán)狀低級(jí)烷基、烷基氨基烷基、低級(jí)烷氧基、氨基、烷基氨基、烷基羰基、芳基羰基、芳烷基羰基、雜芳基羰基、雜芳烷基羰基、芳基和雜芳基；R′1、R′2、R′3和R′4獨(dú)立選自氫和任選取代的低級(jí)烷基；R5和R7獨(dú)立選自氫、鹵素和任選取代的低級(jí)烷基、環(huán)烷基、烷氧基、氨基、氨基烷氧基、烷基羰基氨基、芳基羰基氨基、芳烷基羰基氨基、雜芳基羰基氨基、雜芳烷基羰基氨基、環(huán)亞氨基、雜環(huán)亞氨基、脒基、環(huán)脒基、雜環(huán)脒基、胍基、芳基、聯(lián)芳基、雜芳基、雜聯(lián)芳基、雜環(huán)烷基和芳基亞磺酰氨基；R6選自氫、羥基、鹵素、羧基、硝基、氨基、酰氨基、脒基、亞氨基、氰基，以及取代或未取代的低級(jí)烷基、低級(jí)烷氧基、烷基羰基、芳基羰基、芳烷基羰基、雜芳基羰基、雜芳烷基羰基、烷基羰氧基、芳基羰氧基、芳烷基羰氧基、雜芳基羰氧基、雜芳烷基羰氧基、烷基氨基羰氧基、芳基氨基羰氧基、甲?；?、低級(jí)烷基羰基、低級(jí)烷氧基羰基、氨基羰基、氨基芳基、烷基磺酰基、亞磺酰氨基、氨基烷氧基、烷基氨基、雜芳基氨基、烷基羰基氨基、烷基氨基羰基氨基、芳基氨基羰基氨基、芳烷基羰基氨基、雜芳基羰基氨基、芳基羰基氨基、雜芳基羰基氨基環(huán)酰氨基、環(huán)硫代酰氨基、環(huán)脒基、雜環(huán)脒基、環(huán)亞氨基、雜環(huán)亞氨基、胍基、芳基、雜芳基、雜環(huán)基、雜環(huán)烷基、芳基磺酰基和芳基亞磺酰氨基；或其藥學(xué)上可接受的鹽，其立體異構(gòu)體、其互變異構(gòu)體、其水合物或其溶劑化物。
2.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述化合物是
3.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述骨損失涉及骨質(zhì)減少、骨質(zhì)疏松、藥物治療、絕經(jīng)后骨損失、老化、廢用、節(jié)食、風(fēng)濕病、風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、佩吉特病、牙周疾病、癌癥、癌癥治療或骨折。
4.如權(quán)利要求3所述的方法，其特征在于，所述骨折是髖部或脊柱骨折。
5.如權(quán)利要求3所述的方法，其特征在于，所述藥物治療是施用甾體。
6.如權(quán)利要求3所述的方法，其特征在于，所述癌癥是多發(fā)性骨髓瘤、乳腺癌、前列腺癌或肺癌。
7.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述化合物還與至少一種治療或預(yù)防骨損失的其它藥物聯(lián)合施用。
8.如權(quán)利要求7所述的方法，其特征在于，所述其它藥物是雌激素或鈣。
9.如權(quán)利要求7所述的方法，其特征在于，所述其它藥物是抗吸收藥物。
10如權(quán)利要求9所述的方法，其特征在于，所述抗吸收藥物選自雷洛昔芬、降鈣素、阿來(lái)屈酯、氯屈膦酸鈉、羥乙磷酸鹽、帕米膦酸鈉、伊班膦酸鹽、唑來(lái)膦酸、利塞膦酸鹽和替魯膦酸鹽。
11.如權(quán)利要求7所述的方法，其特征在于，所述其它藥物是成骨促進(jìn)藥物。
12.如權(quán)利要求11所述的方法，其特征在于，所述成骨促進(jìn)藥物是甲狀旁腺激素。
13.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述治療方法促進(jìn)骨形成。
14.一種含有式(I)所示化合物和至少一種治療或預(yù)防骨損失的其它藥物的組合物，其中 W是任選取代的碳或氮；X和Y獨(dú)立選自氮、氧和任選取代的碳；A是任選取代的芳基或雜芳基；R1、R2、R3和R4獨(dú)立選自氫、羥基和任選取代的低級(jí)烷基、環(huán)狀低級(jí)烷基、烷基氨基烷基、低級(jí)烷氧基、氨基、烷基氨基、烷基羰基、芳基羰基、芳烷基羰基、雜芳基羰基、雜芳烷基羰基、芳基和雜芳基；R′1、R′2、R′3和R′4獨(dú)立選自氫和任選取代的低級(jí)烷基；R5和R7獨(dú)立選自氫、鹵素和任選取代的低級(jí)烷基、環(huán)烷基、烷氧基、氨基、氨基烷氧基、烷基羰基氨基、芳基羰基氨基、芳烷基羰基氨基、雜芳基羰基氨基、雜芳烷基羰基氨基、環(huán)亞氨基、雜環(huán)亞氨基、脒基、環(huán)脒基、雜環(huán)脒基、胍基、芳基、聯(lián)芳基、雜芳基、雜聯(lián)芳基、雜環(huán)烷基和芳基亞磺酰氨基；R6選自氫、羥基、鹵素、羧基、硝基、氨基、酰氨基、脒基、亞氨基、氰基，以及取代或未取代的低級(jí)烷基、低級(jí)烷氧基、烷基羰基、芳基羰基、芳烷基羰基、雜芳基羰基、雜芳烷基羰基、烷基羰氧基、芳基羰氧基、芳烷基羰氧基、雜芳基羰氧基、雜芳烷基羰氧基、烷基氨基羰氧基、芳基氨基羰氧基、甲酰基、低級(jí)烷基羰基、低級(jí)烷氧基羰基、氨基羰基、氨基芳基、烷基磺酰基、亞磺酰氨基、氨基烷氧基、烷基氨基、雜芳基氨基、烷基羰基氨基、烷基氨基羰基氨基、芳基氨基羰基氨基、芳烷基羰基氨基、雜芳基羰基氨基、芳基羰基氨基、雜芳基羰基氨基、環(huán)酰氨基、環(huán)硫代酰氨基、環(huán)脒基、雜環(huán)脒基、環(huán)亞氨基、雜環(huán)亞氨基、胍基、芳基、雜芳基、雜環(huán)基、雜環(huán)烷基、芳基磺酰基和芳基亞磺酰氨基；或其藥學(xué)上可接受的鹽，其立體異構(gòu)體、其互變異構(gòu)體、其水合物或其溶劑化物。
15.如權(quán)利要求14所述的組合物，其特征在于，所述其它藥物是雌激素或鈣。
16.如權(quán)利要求14所述的方法，其特征在于，所述其它藥物是抗吸收藥物。
17.如權(quán)利要求16所述的方法，其特征在于，所述抗吸收藥物選自雷洛昔芬、降鈣素、阿來(lái)屈酯、氯屈膦酸鈉、羥乙磷酸鹽、帕米膦酸鈉、伊班膦酸鹽、唑來(lái)膦酸、利塞膦酸鹽和替魯膦酸鹽。
18.如權(quán)利要求14所述的方法，其特征在于，所述其它藥物是成骨促進(jìn)藥物。
19.如權(quán)利要求18所述的方法，其特征在于，所述成骨促進(jìn)藥物是甲狀旁腺激素。
20.如權(quán)利要求14所述的組合物，其特征在于，所述化合物是
21.一種化合物在制造用于治療或預(yù)防骨損失的藥物中的應(yīng)用，所述化合物如式(I)所示 其中，W是任選取代的碳或氮；X和Y獨(dú)立選自氮、氧和任選取代的碳；A是任選取代的芳基或雜芳基；R1、R2、R3和R4獨(dú)立選自氫、羥基和任選取代的低級(jí)烷基、環(huán)狀低級(jí)烷基、烷基氨基烷基、低級(jí)烷氧基、氨基、烷基氨基、烷基羰基、芳基羰基、芳烷基羰基、雜芳基羰基、雜芳烷基羰基、芳基和雜芳基；R′1、R′2、R′3和R′4獨(dú)立選自氫和任選取代的低級(jí)烷基；R5和R7獨(dú)立選自氫、鹵素和任選取代的低級(jí)烷基、環(huán)烷基、烷氧基、氨基、氨基烷氧基、烷基羰基氨基、芳基羰基氨基、芳烷基羰基氨基、雜芳基羰基氨基、雜芳烷基羰基氨基、環(huán)亞氨基、雜環(huán)亞氨基、脒基、環(huán)脒基、雜環(huán)脒基、胍基、芳基、聯(lián)芳基、雜芳基、雜聯(lián)芳基、雜環(huán)烷基和芳基亞磺酰氨基；R6選自氫、羥基、鹵素、羧基、硝基、氨基、酰氨基、脒基、亞氨基、氰基，以及取代或未取代的低級(jí)烷基、低級(jí)烷氧基、烷基羰基、芳基羰基、芳烷基羰基、雜芳基羰基、雜芳烷基羰基、烷基羰氧基、芳基羰氧基、芳烷基羰氧基、雜芳基羰氧基、雜芳烷基羰氧基、烷基氨基羰氧基、芳基氨基羰氧基、甲?；⒌图?jí)烷基羰基、低級(jí)烷氧基羰基、氨基羰基、氨基芳基、烷基磺?；喕酋０被?、氨基烷氧基、烷基氨基、雜芳基氨基、烷基羰基氨基、烷基氨基羰基氨基、芳基氨基羰基氨基、芳烷基羰基氨基、雜芳基羰基氨基、芳基羰基氨基、雜芳基羰基氨基、環(huán)酰氨基、環(huán)硫代酰氨基、環(huán)脒基、雜環(huán)脒基、環(huán)亞氨基、雜環(huán)亞氨基、胍基、芳基、雜芳基、雜環(huán)基、雜環(huán)烷基、芳基磺?；头蓟鶃喕酋０被换蚱渌帉W(xué)上可接受的鹽，其立體異構(gòu)體、其互變異構(gòu)體、其水合物或其溶劑化物。
22.如權(quán)利要求21所述的化合物的應(yīng)用，其特征在于，所述化合物是
全文摘要
本發(fā)明涉及通過(guò)向人或動(dòng)物受試對(duì)象施用嘧啶和吡啶衍生物來(lái)治療或預(yù)防骨損失的方法，含有這些化合物的藥物組合物以及這些化合物與單獨(dú)使用或和其它藥學(xué)活性制劑組合使用的組合物的用途，其中所述衍生物能抑制糖原合成酶激酶3(GSK3)的活性。
文檔編號(hào)A61K31/505GK1835755SQ200480023161
公開日2006年9月20日 申請(qǐng)日期2004年8月13日 優(yōu)先權(quán)日2003年8月13日
發(fā)明者C·N·貝內(nèi)特, K·D·漢肯森, S·D·哈里森, K·A·隆哥, O·A·麥克唐納, A·S·瓦格曼 申請(qǐng)人:希龍公司, 密執(zhí)安州立大學(xué)董事會(huì)