專(zhuān)利名稱(chēng)：含核苷酸類(lèi)似物的組合物及其合成方法
背景技術(shù)：
本發(fā)明涉及9-[2-(R)-[[雙[[(異丙氧基羰基)氧基]甲氧基]膦?；鵠甲氧基]丙基]腺嘌呤(“雙(POC)PMPA”)和適合把(R)-9-[2-(膦?；籽趸?丙基]腺嘌呤(“PMPA”)口服給藥至人和動(dòng)物用作抗病毒試劑的組合物。
膦?；籽趸塑账犷?lèi)似物是已知物質(zhì)，已知有各種技術(shù)用于口服給藥。參見(jiàn)例如08/686,838號(hào)美國(guó)專(zhuān)利申請(qǐng)、US 5,208,221、US5,124,051、WO91/19721、WO94/03467、WO94/03466、WO92/13869、DE4138584A1、WO94/10539、WO94/10467、WO96/18605、WO95/07920、WO9579/07919、WO92/09611、WO92/01698、WO91/19721、WO88/05438、EP0 632 048、EP0 481 214、EP0 369 409、EP0 269 947、US3,524,846和US5,386,030。恩格耳化學(xué)綜述(Engel Chem.Rev.)77349-367頁(yè)，1977年，F(xiàn)aruquar等，藥理科學(xué)雜志(J.Pharm.Sci).72324-3251983，Starrett等，抗病毒研究(Antiviral Res)19267-273 1992，Safadi等，藥物研究(Pharmaceutical Research)10(9)1350-1355頁(yè)，1993；Sakamoto等化學(xué)藥物通報(bào)(Chem.Pharm.Bull)32(6)2241-2248，和Davidsen等.，藥物化學(xué)雜志(J.Med.Chem)37(26)4423-4429，1994年。雙(POC)PMPA公開(kāi)于WO98/04569中發(fā)明概述本發(fā)明提供式(1)的組合物，其包括9-[2-(R)-[[雙[[(異丙氧基羰基)氧基]甲氧基]膦?；鵠甲氧基]丙基]腺嘌呤·富馬酸(1∶1)(“雙(POC)PMPA富馬酸鹽”或“BPPF”) 其中B為腺嘌呤-9-基，R獨(dú)立地為-H或-CH2-O-C(O)-O-CH(CH3)2，但至少有一個(gè)R為-CH2-O-C(O)-O-CH(CH3)2。
本發(fā)明的其它實(shí)施方案包括把治療上有效量的式(1)組合物口服給藥至感染病毒或者具有病毒感染危險(xiǎn)性的患者。
在另一個(gè)實(shí)施方案中，式(1)化合物的制備方法，包括把富馬酸和雙(POC)PMPA接觸。
其它實(shí)施方案包括把烷氧基鋰與9-(2-羥丙基)腺嘌呤溶液接觸。
一種具體的實(shí)施方案包括一種pH約2.7-3.5的(R，S)-PMPA溶液，其中溶液具有小于約0.1g/mL的(R，S)-PMPA，并且約90-94％的PMPA是(R)-構(gòu)型。
附圖的簡(jiǎn)要描述

圖1顯示BPPF晶體的X-射線粉末衍射圖譜。圖2表示BPPF晶體的差示掃描量熱法獲得的差示熱分析圖。圖3表示BPPF晶體的傅里葉變換紅外吸收光譜圖。圖4顯示在100倍放大的光學(xué)顯微鏡下BPPF晶體實(shí)施方案的照片圖。圖5顯示在100倍放大的光學(xué)顯微鏡下BPPF晶體實(shí)施方案的照片圖。圖6顯示在200倍放大的光學(xué)顯微鏡下BPPF晶體實(shí)施方案的照片圖。圖7顯示在40倍放大的光學(xué)顯微鏡下BPPF晶體實(shí)施方案的照片圖。圖4-7是照片以132％放大后的復(fù)制品。
發(fā)明詳述此處所用的“烷基”，除非另有說(shuō)明，是指含1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11或12個(gè)碳原子的正、仲、叔或環(huán)式結(jié)構(gòu)的碳?xì)浠衔锘鶊F(tuán)。其例子有-CH3、-CH2CH3、-CH2CH2CH3、-CH(CH3)2、-CH2CH2CH2CH3、-CH2CH(CH3)2、-CH(CH3)CH2CH3、-C(CH3)3、-CH2CH2CH2CH2CH3、-CH(CH3)CH2CH2CH3、-CH(CH2CH3)2、-C(CH3)2CH2CH3、-CH(CH3)CH(CH3)2、-CH2CH2CH(CH3)2、-CH2CH(CH3)CH2CH3、-CH2CH2CH2CH2CH2CH3、-CH(CH3)CH2CH2CH2CH3、-CH(CH2CH3)CH2CH2CH3、-C(CH3)2CH2CH2CH3、-CH(CH3)CH(CH3)CH2CH3、-CH(CH3)CH2CH(CH3)2、-C(CH3)(CH2CH3)2、-CH(CH2CH3)CH(CH3)2、-C(CH3)2CH(CH3)2、-CH(CH3)C(CH3)3、環(huán)丙基、環(huán)丁基、環(huán)丙基甲基、環(huán)戊基、環(huán)丁基甲基、1-環(huán)丙基-1-乙基、2-環(huán)丙基-1-乙基、環(huán)己基、環(huán)戊基甲基、1-環(huán)丁基-1-乙基、2-環(huán)丁基-1-乙基、1-環(huán)丙基-1-丙基、2-環(huán)丙基-1-丙基、3-環(huán)丙基-1-丙基、2-環(huán)丙基-2-丙基和1-環(huán)丙基-2-丙基。
此處所述的“烷氧基”，除非另有說(shuō)明，指連有氧原子的含有1、2、3、4、5或6個(gè)碳原子的碳?xì)浠衔锘鶊F(tuán)(即此處所述的“烷”)。其例子為-OCH3、-OCH2CH3、-OCH2CH2CH3、-OCH(CH3)2、-OCH2CH2CH2CH3、-OCH2CH(CH3)2、-OCH(CH3)CH2CH3、-OC(CH3)3、-OCH2CH2CH2CH2CH3、-OCH(CH3)CH2CH2CH3、-OCH(CH2CH3)2、-OC(CH3)2CH2CH3、-OCH(CH3)CH(CH3)2、-OCH2CH2CH(CH3)2、-OCH2CH(CH3)CH2CH3、-OCH2C(CH3)3、-OCH(CH3)(CH2)3CH3、-O(CH3)2(CH2)2CH3、-OCH(C2H5)(CH2)2CH3、-O(CH2)3CH(CH3)2、-O(CH2)2C(CH3)3、-OCH2CH(CH3)(CH2)2CH3和-OCH2CH2CH2CH2CH2CH3。
除非有特別說(shuō)明，或者能從上下文明顯判斷，本文所述的百分比％是指重量百分比(w/w)。因此，含少于1％水份的BPPF制劑是指水含量小于1％重量的制劑。
除非另有說(shuō)明，當(dāng)本文提供取代基名單時(shí)，例如甲氧基、乙氧基、正丙氧基、異丙氧基或叔丁氧基來(lái)定義變量或組份，例如烷氧基時(shí)，該變量或組份包括列出的取代基所有可能的組合，例如烷氧基指甲氧基、乙氧基或正丙氧基，并且烷氧基也指異丙氧基或叔丁氧基。類(lèi)似地，列出的有機(jī)溶液被定義為含有1-甲基-2吡咯烷酮、三烷基氨基(C1-3烷基)、乙酸甲酯、乙酸乙酯、乙酸丙酯、乙酸異丙酯、C1-6烷基醇、吡啶、丙酮、甲苯、CH2Cl2、二甲基甲酰胺、二甲亞砜、四氫呋喃、乙腈或二甲苯，這些溶液可以排除丙酮、二甲苯或同時(shí)排除這兩種物質(zhì)。因此，本文給出定義變量或組份的取代基名單將包括或排除該名單中取代基的任何組合，其條件為不是所有可能的取代基被遺漏以及定義的變量被消除，如果給出的定義并沒(méi)有指明不存在該變量或組份。
根據(jù)以前的發(fā)現(xiàn)，最佳抗病毒活性經(jīng)常與(R)構(gòu)型有關(guān)，本發(fā)明的化合物任選富含(R)-構(gòu)型或拆分的碳原子手性中心為(R)-構(gòu)型。用(*)標(biāo)記的手性中心碳原子是任選的(R)或(S)構(gòu)型，并可以富含某一種構(gòu)型或發(fā)現(xiàn)兩種構(gòu)型以基本上相等的比例存在。一般甲基與PMPA的手性中心(*)相連，雙(POC)PMPA為(R)構(gòu)型。不管以何種方式描述，本發(fā)明的復(fù)合物包括組成組份的互變異構(gòu)物。
式(1)化合物可能含有BPPF，并含有少量、一般小于3％，和通常小于1％的單(POM)PMPA，即式(1)化合物中一個(gè)R為H，另一個(gè)R為-CH2-O-C(O)-O-CH(CH3)2。
雙(POC)PMPA富馬酸鹽的理化性質(zhì)與游離堿和其它鹽相比，晶體BPPF具有出人意料的最佳理化性質(zhì)的組合。晶體BPPF具有高熔點(diǎn)，不易吸濕，具有良好的固態(tài)穩(wěn)定性，良好的水溶性和水穩(wěn)定性。這些特性對(duì)于制備藥物是有用的，并且這些特性使藥物在人和動(dòng)物中具有良好的口服生物利用度。這些特性使BPPF或PMPA能夠有效地釋放至生物流體例如血漿或細(xì)胞質(zhì)中。例如，每天一次口服給藥75mg晶體BPPF時(shí)，其在人體中的生物利用度約為30-40％。
BPPF可以是晶體或非晶體形式。我們已經(jīng)獲得晶體形式的“BPPF”(“cBPPF”)，用若干方法描繪了其特征，包括X-射線粉末衍射和熔點(diǎn)。工作者通常用X-射線粉末衍射來(lái)描繪或鑒定晶體組成(參見(jiàn)，例如美國(guó)藥典，第23卷，1995年，方法941，第1843-1845頁(yè))；美國(guó)藥典Pharmacopeial Convention，Inc，Rockville，MD；Stout等，X-射線結(jié)構(gòu)測(cè)定實(shí)用指南(X-Ray Structure Determination；A PracticalGuide)，MacMillan公司，紐約，N.Y.1968)。從晶體化合物獲得的衍射圖譜經(jīng)常是晶體形式的診斷方法，盡管從隨后批量的晶體得到的衍射圖譜中，弱或很弱的衍射圖譜峰可能不會(huì)總是重現(xiàn)。如果樣品中存在顯著含量的其它晶體成分就更是這種情況。由于優(yōu)選的定向效應(yīng)、晶體生長(zhǎng)方向、粒子大小和其它測(cè)定條件，譜帶的相對(duì)強(qiáng)度，特別是在低X-射線入射角值(2θ)的譜帶相對(duì)強(qiáng)度可能變化。因此，相對(duì)衍射峰強(qiáng)度并不能對(duì)所討論的晶體形式的診斷下結(jié)論性意見(jiàn)。相反，應(yīng)該注意任選的峰位置包括其相對(duì)間隔和通常圖譜而不是其精確振幅來(lái)鑒定BPPF晶體。而且，對(duì)于鑒定，不必非要依賴(lài)于觀察到高度純化參考樣品的所有譜帶；甚至只需晶體形式的單個(gè)譜帶即可診斷，例如對(duì)于cBPPF為25.0。
可任選用于識(shí)別晶體BPPF的其它診斷技術(shù)包括差示掃描量熱法(DSC)和紅外吸收光譜(IR)。DSC測(cè)定熱吸收轉(zhuǎn)變溫度，在該溫度下，晶體結(jié)構(gòu)改變時(shí)吸熱。DSC提供一種供選擇的方式，使人們可根據(jù)其不同的吸收溫度來(lái)區(qū)分不同的晶體組成。IR測(cè)定與分子(該分子由于光的反應(yīng)而振動(dòng))中基團(tuán)相關(guān)的具體化學(xué)鍵的紅外光吸收。DSC和/或IR能夠提供一些物理信息，應(yīng)用這些信息可以描述BPPF晶體。
cBPPF x-射線粉末衍射圖譜通常在約25.0處顯示峰，典型地在約25.0和約20.0處顯示峰，或更典型地在約25.0、約20.0和約30.1處，一般至少在約25.0、20.0、約30.1和約21.9處顯示峰。cBPPF光譜的峰通常在約4.9、約10.2、約10.5、約18.2、約20.0、約21.9、約24.0、約25.0、約25.5、約27.8、約30.1處和約30.4處。cBPPFx-射線粉末衍射圖譜通常在約20.0和/或21.9和/或25.0和/或30.1中的任意一處(或組合)顯示峰。
cBPPF晶體顯示的DSC吸收峰在約118℃，起始處約116℃，IR光譜顯示吸收帶約在3224、3107-3052、2986-2939、1759、1678、1620、1269和1102cm-1。不同的cBPPF晶體產(chǎn)品的堆積密度約0.15-0.30g/ml、通常約0.2-0.25g/ml。如果從結(jié)晶浴中適當(dāng)?shù)鼗厥?，它們通?；旧喜缓軇行∮?％的溶劑，一般不含有可檢測(cè)出的晶格裹入的溶劑分子。
BPPF晶體一般是無(wú)水的和非吸濕的，幾乎不含水或不能檢測(cè)出來(lái)的水。一般來(lái)說(shuō)，BPPF晶體通常含有少于約1％、典型地小于約0.5％的水。而且，BPPF晶體一般含有小于約10％、典型地小于約5％、常常小于約1％和更常見(jiàn)地小于約0.5％的無(wú)定形BPPF。
干燥時(shí)，BPPF晶體通常呈不透明白色或灰白色晶體粉末。從給出的制備方法中得到的晶體通常在大小上是多分散的，其形狀范圍包括針狀、盤(pán)狀、不規(guī)則片狀和針狀、盤(pán)狀或片狀聚集體。典型地，BPPF晶體大小沿其最長(zhǎng)方向約1μm-500μm，典型地約5-170μm、通常約10-110μm。這些晶體可能具有破碎的邊或角形邊。圖4-7的照片表明cBPPF有各種形狀，包括片狀、棒狀、針狀、盤(pán)狀和聚集體。
應(yīng)用已知PMPA和雙(POC)PMPA用于治療或預(yù)防人或動(dòng)物的一種或多種病毒感染，尤其包括反轉(zhuǎn)錄病毒，HIV、SIV和GALV，和肝炎病毒例如HBV。用PMPA治療的其它感染包括MSV、RSV、FIV、MuLV以及嚙齒類(lèi)動(dòng)物和其它動(dòng)物的其它反轉(zhuǎn)錄病毒感染。現(xiàn)有技術(shù)記載了PMPA的抗病毒特異性，本發(fā)明化合物也具有這種特異性。
對(duì)于PMPA，感染部位的最佳攻擊的劑量和合適的給藥途徑是本領(lǐng)域熟知的。根據(jù)本發(fā)明配合物的分子量、口服時(shí)動(dòng)物的生物利用度或者根據(jù)用人作臨床試驗(yàn)對(duì)象的推導(dǎo)以及本領(lǐng)域熟知的其它因素，確定BPPF的正常劑量對(duì)臨床醫(yī)師來(lái)說(shuō)是一件簡(jiǎn)單直接的事情。
含有BPPF的本發(fā)明組合物通過(guò)適合于所治療疾病的任何合適途徑給藥，合適的途徑包括口服、直腸、鼻腔、肺、局部(包括透皮、眼睛、口腔、舌下)、陰道和非腸道(包括皮下、肌肉內(nèi)、靜脈內(nèi)、真皮內(nèi)、鞘內(nèi)和硬膜外)給藥。一般來(lái)說(shuō)，本發(fā)明組合物通過(guò)口服給藥，但含有BPPF的組合物可以通過(guò)上面記錄的任何其它途徑給藥。對(duì)人的抗病毒治療，本發(fā)明化合物的口服劑量約0.01-20mg/kg/天，通常地約0.3-5mg/kg/天。含有75mg cBPPF的片劑，對(duì)人每天口服給藥一次，在第1天，對(duì)于禁食者，PMPA的口服生物利用度約17-38％；對(duì)于進(jìn)食者，該值約27-60％。
雖然BPPF可以作為純化合物給藥，優(yōu)選其作為藥物制劑存在。本發(fā)明的制劑含有BPPF、一種或多種可藥用賦形劑或載體(“可接受的賦形劑”)，以及任選地其它治療成分。所述載體必須是“可接受的”，即能夠與制劑的其它成分相容，并且對(duì)患者無(wú)害。
本制劑包括那些適合局部或全身給藥的制劑，包括口服、直腸、透皮、肺、鼻腔、口腔、舌下、陰道或非腸道(包括皮下、肌肉內(nèi)、靜脈內(nèi)、真皮內(nèi)、鞘內(nèi)和硬膜外)給藥。這些制劑是單位劑量形式，可以通過(guò)藥劑學(xué)領(lǐng)域熟知的任何方法制備。這些方法包括的步驟有活性成分和組成一種或多種輔料成分的載體或賦形劑結(jié)合。這些制劑通常制備如下活性成分和液體載體或精細(xì)分散的固體載體或與這兩者結(jié)合，然后，如果有必要，對(duì)產(chǎn)品進(jìn)行干燥或成形。
適合口服給藥的本發(fā)明制劑可以是離散單元例如小藥囊、扁囊劑或片劑，均含有預(yù)定量的活性成分；可以是粉劑或粒劑；可以是水或非水液體中的溶液或懸浮液；或者水包油液體乳劑或油包水液體乳劑?；钚猿煞诌€可以作為大丸劑、藥糖劑或糊劑。
可以通過(guò)壓縮或模壓制備片劑，一般含有一種或多種輔助成分或賦形劑。片劑典型地含有約10-300mg BPPF/片，通常約10-100mg/片，例如約75mg/片。通常地，BPPF作為cBPPF的固體制劑存在。在非流動(dòng)形式例如粉劑或粒劑中的BPPF，任選地與粘合劑、潤(rùn)滑劑、惰性稀釋劑、表面活性劑或分散劑混合，通過(guò)在合適的機(jī)械中壓縮制備成壓縮片。模壓的片劑這樣制備應(yīng)用液體稀釋劑，典型地為惰性稀釋劑濕潤(rùn)粉末BPPF的混合物，在合適的機(jī)器中模壓該混合物制成模壓片。這些片劑可以任選地被包衣和涂層、壓印或刻痕，可以配制成提供緩釋或慢釋活性成分的形式。典型的片劑成分包括一種或多種粘合劑、稀釋劑、崩解劑或潤(rùn)滑劑，這些成分有助于片劑的制備或攝取后片劑的崩解。任選地，這些制劑制備如下一種或多種輔料和BPPF濕法制粒，干燥并研磨而得。任選地可存在粘合劑，其含量約1-10％。任選地可存在崩解劑例如交聯(lián)纖維素，用量約0.5-5％，以有助于片劑的溶解。任選地可存在稀釋劑例如單糖或雙糖，含量約50-60％，以掩蔽BPPF的物理性質(zhì)或有助于片劑的溶解。任選地可存在潤(rùn)滑劑，其含量約0.25-5％，以有助于制備過(guò)程中片劑的排出。實(shí)施方案包括的產(chǎn)品制備方法是壓縮含BPPF和可接受的賦形劑的混合物。
如果是眼睛或其它外部組織例如口和皮膚的感染，制劑優(yōu)選應(yīng)用含有活性成分的局部軟膏或膏霜，其含量例如0.01-10％w/w(含有活性成分范圍是0.1％-5％，0.1％w/w的增量，如0.6％、0.7％w/w等)，優(yōu)選0.2-3％w/w，最優(yōu)選0.5-2％w/w。當(dāng)制成軟膏時(shí)，例如，可以應(yīng)用石蠟混溶或水混溶的軟膏基質(zhì)?；蛘?，活性成分可制成含水包油膏霜基質(zhì)的膏霜。
如果需要，膏霜基質(zhì)的水相可以包括，例如至少30％w/w的多元醇，即具有兩個(gè)或多個(gè)羥基的醇，例如丙二醇、丁烷-1，3-二醇、甘露糖醇、山梨糖醇、甘油和聚乙二醇(包括PEG400)及其混合物。局部制劑可以按照需要包括在皮膚或其它感染區(qū)域增強(qiáng)活性成分吸收或滲透的化合物。這些透皮增強(qiáng)劑的實(shí)例包括二甲亞砜及其相關(guān)類(lèi)似物。
本發(fā)明乳劑的油相可以通過(guò)已知方式從已知成分制備。雖然該相可僅僅含有乳化劑，但是根據(jù)需要，其可包括至少一種乳化劑與脂肪或油或者同時(shí)含有這兩者的的混合物。優(yōu)選地，同時(shí)含有親水性乳化劑和作為穩(wěn)定劑的親脂性乳化劑。還優(yōu)選同時(shí)含有油和脂肪。含或不含穩(wěn)定劑的乳化劑組成乳化蠟，該蠟再和油或脂組成乳化軟膏基質(zhì)，再形成軟膏制劑的油分散相。
適合用于本發(fā)明制劑的乳化劑和乳化穩(wěn)定劑包括Tween60、Span80、鯨蠟硬脂醇、苯甲醇、肉豆蔻醇、甘油單硬脂酸酯和十二烷基硫酸鈉。
本制劑中合適的油或脂肪的選擇是基于達(dá)到預(yù)定的化妝特性為目的來(lái)進(jìn)行的。因此，該膏霜應(yīng)該優(yōu)選地為非脂性、非染色的和可洗的產(chǎn)品，該產(chǎn)品具有適當(dāng)稠度以避免從管或其它容器中漏出?？梢詰?yīng)用直鏈或支鏈的單或雙烷基酯例如己二酸二異酯、硬脂酸異鯨蠟酯、椰子脂肪酸丙二醇二酯、肉豆蔻酸異丙酯、油酸癸酯、棕櫚酸異丙酯、硬脂酸丁酯、棕櫚酸2-乙基己基酯或者稱(chēng)為Crodamol CAP的支鏈酯混合物，后三者是優(yōu)選的酯。取決于所需性質(zhì)，這些物質(zhì)可單獨(dú)應(yīng)用或聯(lián)合應(yīng)用?；蛘?，可以應(yīng)用高熔點(diǎn)脂類(lèi)例如白色軟石蠟和/或液體石蠟或其它礦物油。
適合眼睛局部給藥的制劑還包括滴眼劑，其中把活性成分溶解或懸浮在合適載體中，特別是把活性成分溶解在水溶劑中。在這種制劑中，活性成分的合適濃度為0.01-20％，在一些實(shí)施方案中為0.1-10％，在另一些實(shí)施方案中約1.0％w/w。
適合口腔局部給藥的制劑包括錠劑(含有在有味道的物質(zhì)如蔗糖和阿拉伯膠或黃芪膠中的活性成分)、軟錠劑(含有在惰性基質(zhì)例如明膠和甘油、或蔗糖和阿拉伯膠中的活性成分)和漱口劑(含有在合適液體中的活性成分)。
直腸給藥制劑可以是含合適基質(zhì)的栓劑，其含有例如椰子油或水楊酸酯。
對(duì)于適合鼻腔或吸入給藥的制劑，當(dāng)載體為固體時(shí)，其包括粒子大小例如為1-500微米(包括粒子大小為20-500微米，增量為5微米，例如30微米、35微米等)的粉末；當(dāng)載體為液體時(shí)，合適的稀釋劑作為例如鼻腔噴霧劑或滴鼻劑給藥，這些藥劑含有活性成分的油或水溶液。根據(jù)傳統(tǒng)方法可以制備適合氣霧劑給藥的制劑，并可以與其它治療試劑一起釋放。吸入治療容易通過(guò)定量吸入器給藥。
適合陰道給藥的制劑為陰道栓、棉塞、膏霜、凝膠、糊劑、泡沫劑或噴霧劑，除含有活性成分外，還含有例如合適的本領(lǐng)域已知的合適載體。
適合非胃腸道給藥的制劑是無(wú)菌的，包括水注射溶液和非水的注射溶液，可以含有抗氧化劑、緩沖劑、抑菌劑和使制劑與預(yù)定的接受者血液等滲的溶質(zhì)；水和非水無(wú)菌混懸劑，可以包括懸浮劑和增稠劑。這些制劑可以在單位劑量容器中或多劑量容器中，例如密封的安瓿和帶橡膠塞子的小瓶中，并且可以在凍干(冷凍-干燥)條件下儲(chǔ)存，只需要在使用前加入無(wú)菌液體載體例如注射用水即可?？梢詮那懊嫠龅臒o(wú)菌粉劑、粒劑或片劑制備即時(shí)的注射溶液或混懸液。優(yōu)選的單位劑量制劑是那些含有如上所述每日劑量或每日亞劑量單位、或者其合適比例的BPPF的制劑。
除上面具體提到的成分外，本發(fā)明制劑還可以含有在本領(lǐng)域有關(guān)類(lèi)型制劑中常規(guī)的其它試劑，例如適合口服給藥的制劑可能包括矯味劑。
本發(fā)明還提供含至少一種如上定義的活性成分和獸藥載體的獸藥組合物。
獸藥載體是為了把組合物給藥至貓、狗、馬、鼠、兔和其它動(dòng)物所用的物質(zhì)，其可以是惰性或獸藥領(lǐng)域可接受并且與活性成分相容的固體、液體或氣體物質(zhì)。這些獸藥組合物可以口服、非腸道或其它任意需要的途徑給藥。
可以應(yīng)用本發(fā)明化合物提供含有基質(zhì)或可吸收物質(zhì)和作為活性成分的一個(gè)或多個(gè)化合物的控釋藥物制劑，在該制劑中，可以控制和調(diào)節(jié)活性成分的釋放以減少給藥頻率，或者改善化合物的藥理活性或降低毒性。根據(jù)常規(guī)方法可以制備適合口服給藥的控釋制劑，制劑中的離散單元含有BPPF。
合成方法PMPA和富馬酸形成復(fù)合物或鹽，制備得到BPPF。PMPA是通過(guò)已知方法制備的已知化合物，或者通過(guò)下列步驟制備。
PMPA合成
BPPF合成通過(guò)下列方法，應(yīng)用(CH3)2CHOC(O)CH2Cl酯化PMPA，再使之與富馬酸絡(luò)合。
方法概述PMPA制備方法(S)-縮水甘油通過(guò)催化氫化還原成(R)-1，2-丙二醇，然后與碳酸二乙酯反應(yīng)得到碳酸(R)-1，2-丙二酯。該碳酸酯與腺嘌呤以及催化量的堿例如氫氧化鈉反應(yīng)得到(R)-9-[2-(二乙基膦?；籽趸?丙基]腺嘌呤，不經(jīng)分離，其與烷氧基鋰和對(duì)甲苯磺酰氧甲基膦酸二乙酯(由亞磷酸二乙酯和多聚甲醛反應(yīng)后就地甲苯磺酸化制備得到)。得到的(R)-9-[2-二乙基膦酰基甲氧基丙基]腺嘌呤用溴化三甲基硅烷脫酯得到PMPA粗產(chǎn)品，通過(guò)調(diào)節(jié)pH值使之從水中沉淀純化。該產(chǎn)品再用水重結(jié)晶純化得到PMPA單水合物。
該方法在步驟1中應(yīng)用小量堿例如NaOH，與不用堿的同樣反應(yīng)相比，應(yīng)用堿可以使反應(yīng)速率增加約10倍。步驟1還應(yīng)用氫氣代替用試劑如HCO2NH4就地產(chǎn)生氫氣。該方法在步驟4b中應(yīng)用烷氧基鋰，其加入到反應(yīng)混合物中時(shí)微微放熱。高活性堿例如NaH的應(yīng)用使產(chǎn)生氫氣的放熱反應(yīng)很難控制。因此，與應(yīng)用烷氧基鋰相比，應(yīng)用NaH的操作更難，需要更小心一些。與應(yīng)用NaH相比，應(yīng)用烷氧基鋰還使得到的產(chǎn)品具有改善的副產(chǎn)品特性，例如應(yīng)用烷氧基鋰通?？蓪?dǎo)致產(chǎn)物中含有較少量的起始物質(zhì)或過(guò)度烷基化的產(chǎn)品。
該方案和方法步驟描述了(R)-PMPA和(R)-雙(POC)PMPA的合成。實(shí)施該方法時(shí)，可以應(yīng)用手性混合物起始物質(zhì)例如(R，S)-縮水甘油得到中間體的手性混合物，例如碳酸1，2-丙二醇酯、PMPA或雙(POC)PMPA的手性混合物。
步驟1、(R)-1，2-丙二醇(S)-縮水甘油(1.0kg，13.5mol)加入到含有下列物質(zhì)的反應(yīng)器中，反應(yīng)器含有的物質(zhì)是(i)惰性氣體，如氮?dú)狻⒖諝夂?ii)5％鈀/活性碳(50％濕重)催化劑(100g)在含2％摩爾氫氧化鈉的變性乙醇溶液中(7.85kg乙醇和54g 16.7％氫氧化鈉溶液)的攪拌懸浮液。在加入(S)-縮水甘油前，含催化劑和乙醇溶液的惰性反應(yīng)器中的內(nèi)容物通常冷卻至約0℃(通常約-5至5℃)。然后將不高于20磅/平方英寸的氫氣加入到含有溫度不高于25℃的反應(yīng)試劑的惰性反應(yīng)物容器中。攪拌混合物約4-5小時(shí)，直至不再消耗氫氣。用TLC監(jiān)測(cè)反應(yīng)的完成情況(剩下微量或不剩下(S)-縮水甘油)。然后過(guò)濾混合物，例如通過(guò)硅藻土(約150g)以除掉固體，在不高于50℃的溫度下，真空濃縮濾液，直至很慢揮發(fā)或不再揮發(fā)時(shí)為止，得到含有粗產(chǎn)品的油。下一步驟中直接應(yīng)用粗產(chǎn)品。得到的標(biāo)題化合物產(chǎn)率約100％。
步驟2、(R)-碳酸1，2-丙二酯在變性乙醇(210g 21％w/w乙氧基鈉在乙醇中)中的碳酸二乙酯(1.78kg，15.1摩爾)和乙氧基鈉加入到(R)-1，2-丙二醇(基于上面步驟1所用(S)-縮水甘油的1.0kg理論量)，將溶液加熱至80-150℃以蒸發(fā)掉乙醇。如果必要，為使反應(yīng)完全，把另外的碳酸二乙酯(0.16kg)加入到反應(yīng)混合物中，再蒸發(fā)掉乙醇。用TLC監(jiān)測(cè)反應(yīng)的完成，顯示微量或不能檢測(cè)出(R)-1，2-丙二醇時(shí)為止。在120℃和10-17mmHg的條件下分餾剩余物，得到無(wú)色液體的標(biāo)題化合物。產(chǎn)品純度經(jīng)GC分析典型地為96％或更高的純度。
步驟3、對(duì)甲苯磺酰氧甲基膦酸二乙酯在含有惰性氣體例如氧氣的反應(yīng)器中，在甲苯(0.11kg)中的亞磷酸二乙酯(0.80kg)、多聚甲醛(0.22kg)和三乙胺(0.06kg)的混合物在87℃下加熱約2小時(shí)，然后回流約1小時(shí)，直至用TLC顯示微量或不能檢測(cè)出亞磷酸二乙酯時(shí)反應(yīng)結(jié)束。反應(yīng)期間維持惰性氣體。用甲苯調(diào)節(jié)反應(yīng)，否則會(huì)失去控制。任選地用1H NMR確證反應(yīng)完成為止(亞膦酸二乙酯的δ8.4-8.6ppm峰不再檢測(cè)出)。溶液冷卻至約1℃(典型地約-2至4℃)，加入對(duì)甲苯磺酰氯(1.0kg)，然后在約5℃下慢慢加入三乙胺(0.82kg)(放熱反應(yīng))并同時(shí)維持溫度不超過(guò)10℃(典型地為0-10℃)。反應(yīng)混合物溫?zé)嶂?2℃，攪拌至少約5小時(shí)(典型地約4.5-6.0小時(shí))，直至用TLC(顯示微量或不能檢測(cè)出對(duì)甲苯磺酰氯)和任選地用1H NMR確證反應(yīng)完成時(shí)(對(duì)甲苯磺酰氯的δ7.9ppm雙峰不再檢測(cè)出)為止。過(guò)濾除去固體，用甲苯洗滌(0.34kg)。洗滌液和濾液合并后要么用水洗滌兩次(1.15kg每次)，要么任選地用水(1.15kg)、5％NaCO3水溶液(3.38kg)依次洗滌，然后再用水洗滌兩次(1.15kg每次)。每次洗滌之后，微微攪拌反應(yīng)器中內(nèi)容物，靜置，棄掉下層水相。如果反應(yīng)得到乳液，可以在第一次有機(jī)/水混合物中加入鹽水(含0.08kg NaCl的0.23kg水)，然后攪拌反應(yīng)器中的物質(zhì)，使固體沉淀，棄去下層水相，加入1.15kg水，攪拌，使固體沉降，再棄去下層水相。不高于50℃的溫度下，真空蒸餾有機(jī)相(在110℃下不高于10％LOD和KF滴定水含量不高于0.3％)，得到產(chǎn)率約60-70％的油狀標(biāo)題化合物，純度約85-95％，不包括甲苯。
步驟4、(R)-9-[2-(二乙基膦酰甲氧基)丙基]腺嘌呤應(yīng)用含有烷氧基鋰和9-(2-羥丙基)腺嘌呤的組合物制備該化合物。合成期間可以把9-(2-羥丙基)腺嘌呤和烷氧基鋰接觸，典型地溫度約0-50℃，通常約20-45℃下進(jìn)行。在這些組合物和方法中，9-(2-羥丙基)腺嘌呤典型地存在于有機(jī)溶液中。有機(jī)溶液典型地含有有機(jī)溶劑例如二甲基甲酰胺、四氫呋喃、甲苯、乙腈、二氯甲烷或C1-6烷基醇，通常為二甲基甲酰胺或甲苯。這些組合物還任選地含有對(duì)甲苯磺酰氧甲基膦酸酯或腺嘌呤，這些物質(zhì)如果存在，則以低含量存在，典型地小于約15％(基于9-(2-羥丙基)腺嘌呤)，通常小于約10％。這些組合物和方法典型地應(yīng)用叔丁氧基鋰或異丙氧基鋰。它們通常還應(yīng)用約0.9-3.0摩爾當(dāng)量(相對(duì)于步驟4a中應(yīng)用的腺嘌呤堿)，典型地約1.2-1.8的對(duì)甲苯磺酰氧甲基膦酸酯作為反應(yīng)劑與烷氧基鋰和9-(2-羥丙基)腺嘌呤反應(yīng)。實(shí)施方案包括的產(chǎn)品制備方法是9-(2-羥丙基)腺嘌呤和烷氧基鋰接觸，在這些實(shí)施方案中，反應(yīng)物典型地存在于還含有對(duì)甲苯磺酰氧甲基膦酸酯的有機(jī)溶液中。
在一個(gè)實(shí)施方案中，上面步驟4所述的(R)-9-[2-(二乙基膦酰甲氧基)-丙基]腺嘌呤的合成描述如下。在含有惰性氣體如氮?dú)獾姆磻?yīng)器中，腺嘌呤(1.0kg)、氫氧化鈉(11.8g)、(R)-碳酸1，2-丙二酯(0.83kg)和N，N-二甲基甲酰胺(6.5kg)的混合物加熱至約130℃(典型地約125-138℃)共約18-30小時(shí)，直至反應(yīng)完全，可任選地由面積歸一化HPLC監(jiān)測(cè)，顯示剩余的腺嘌呤不高于約0.5％為止。得到的混合物冷卻至約25℃，典型地約20-30℃，含有第I階段的中間體，(R)-9-(2-羥丙基)腺嘌呤，在此時(shí)可能沉淀。冷卻后，叔丁氧基鋰(3.62kg)的2.0M四氫呋喃溶液加入到此I階段中間體中，在微微放熱的加成反應(yīng)中產(chǎn)生(R)-9-(2-羥丙基)腺嘌呤的鋰鹽。漿狀液用對(duì)甲苯磺酰氧甲基膦酸二乙酯(1.19kg)處理，混合物加熱至約32℃的溫度，典型地約30-45℃，攪拌至少約2小時(shí)(典型地約2-3小時(shí))，在此期間，混合物變成均相。加入另外的對(duì)甲苯磺酰氧甲基膦酸二乙酯(1.43kg)，混合物在約32℃(典型地約30-45℃)的溫度下攪拌至少約2小時(shí)(典型地約2-3小時(shí))。再兩次加入叔丁氧基鋰(0.66kg)的2.0M四氫呋喃溶液和對(duì)甲苯磺酰氧基甲基膦酸二乙酯(每次0.48kg)，每次加完后攪拌混合物，溫度約32℃，至少攪拌2小時(shí)。任選地由面積歸一化的HPLC顯示階段I中問(wèn)體剩余量不大于約10％時(shí)，表示反應(yīng)完成。如果反應(yīng)進(jìn)行不完全，加入額外的叔丁氧基鋰(0.33kg)的2.0M四氫呋喃溶液和對(duì)甲苯磺酰氧甲基膦酸二乙酯(0.24kg)，反應(yīng)混合物維持在約32℃的溫度至少約2小時(shí)以達(dá)到反應(yīng)完全?；旌衔锶缓罄鋮s至約25℃(典型地約20-40℃)，然后加入冰醋酸(0.5kg)，在約29Hg柱真空和約80℃的溫度下真空濃縮得到的混合物。殘余物冷卻至約50℃(典型地約40-60℃)，加入水(1.8kg)，再次加入水(1.8kg)。用二氯甲烷(約35kg)繼續(xù)提取溶液約12-48小時(shí)，并在約第5小時(shí)后把冰醋酸(0.2kg)加入到水相中，再連續(xù)提取約第10小時(shí)后加入上述量的冰醋酸。任選地用面積歸一化HPLC顯示水相中存在不高于約7％的(R)-9-[2-(二乙基膦酰甲氧基)丙基]腺嘌呤時(shí)，表示提取完全。合并二氯甲烷提取物，首先在常壓下濃縮提取物，然后在不高于約80℃的溫度下真空濃縮提取物，得到粘性橙色油狀的標(biāo)題化合物。通過(guò)重量歸一化HPLC分析，標(biāo)題化合物的產(chǎn)率約40-45％；經(jīng)面積歸一化HPLC分析，標(biāo)題化合物純度典型地為60-65％。濃縮后，標(biāo)題化合物的實(shí)際重量約1.6倍理論重量。這種多余的觀測(cè)到的重量可歸因于持續(xù)提取或濃縮后剩下的雜質(zhì)和/或溶劑。
步驟5、(R)-9-[2-(膦酰甲氧基)丙基]腺嘌呤粗品把(R)-PMPA二乙酯轉(zhuǎn)變成其游離酸制備(R)-PMPA粗品。在含有約90-94％(R)-PMPA和約6-10％(S)-PMPA的混合物中，(R)-異構(gòu)體的比例可提高至約97-99％。富含(R)-異構(gòu)體的混合物可以從含有(R，S)-PMPA組合物的溶液在pH約2.7-3.5時(shí)沉淀PMPA制備得到，其中的溶液含有小于約0.1g/ml、通常小于約0.08g/mL、典型地小于約0.07g/mL的(R，S)-PMPA，所述(R，S)-PMPA溶液的溫度約10-25℃，典型地約15-22℃。在約40-55℃的溫度下，將這種(R，S)-PMPA溶液調(diào)節(jié)pH至約2.4-3.5，然后任選地把溶液溫度調(diào)至約10-25℃，再任選地把pH調(diào)至約2.7-3.5，得到富集的(R)-PMPA異構(gòu)體。
在一個(gè)實(shí)施方案中，在上面步驟5顯示的(R)-PMPA粗品的合成描述如下。在含有(R)-9-[2-(二乙基膦酰甲氧基)丙基]-腺嘌呤粗品(按照上述步驟4記載的腺嘌呤加入量為基礎(chǔ)計(jì)算出1.0kg)和乙腈(0.9kg)的混合物中加入溴化三甲基硅烷，此間冷卻維持溫度不高于約50℃的溫度。用乙腈(0.3kg)漂洗，混合物在約60-75℃下回流約2-4小時(shí)，中度攪拌以避免反應(yīng)器中內(nèi)容物濺出。通過(guò)面積歸一化HPLC分析顯示剩下PMPA單乙酯和雙乙酯的總量不超過(guò)約3％時(shí)，表示反應(yīng)完全。如果反應(yīng)不完全，再次加入另外的溴化三甲基硅烷(0.04kg)到反應(yīng)器中，中度攪拌下，反應(yīng)回流至少約1小時(shí)。將內(nèi)容物加熱至不高于70℃的溫度，首先是常壓蒸餾然后是不高于約70℃的溫度下的真空(約24-27Hg柱)蒸餾除去揮發(fā)物。反應(yīng)器內(nèi)容物然后冷卻至約20℃(典型地約15-25℃)，把水(1.9kg)加入到殘余物中(放熱反應(yīng))，并維持內(nèi)容物的溫度不高于約50℃?；旌衔锢鋮s至20℃，用二氯甲烷(1.7kg)洗滌，攪拌約30分鐘。通過(guò)1μm的筒形過(guò)濾器過(guò)濾分離的水相，用水(3.2kg)稀釋?zhuān)訜嶂良s40℃(典型地約35-50℃)，用氫氧化鈉水溶液(大約0.15kg NaOH，濃度為50％的溶液)調(diào)節(jié)pH至約1.1(典型地約0.9-1.3)，期間維持溫度約45℃。把PMPA晶種加入到混合物中，用50％氫氧化鈉水溶液(約0.15kg NaOH)調(diào)節(jié)pH至約2.8(典型地約2.6-3.0)，期間維持溫度約45℃(典型地約35-50℃)。溶液冷卻至約22℃(典型地約15-25℃)維持約3-20小時(shí)，期間輕度至中等程度攪拌以避免內(nèi)容物濺出，期間產(chǎn)品應(yīng)該沉淀，在約35℃時(shí)開(kāi)始。漿狀液的pH調(diào)至約3.2(典型地約3.1-3.3)，一般應(yīng)用50％的氫氧化鈉水溶液或濃鹽酸(如果需要)。漿狀液冷卻至約5℃，典型地約0-10℃，在該溫度范圍緩慢攪拌至少約3小時(shí)。過(guò)濾收集固體，依續(xù)用冷水(0.35kg)和丙酮(0.3kg)洗滌，得到濕固體PMPA粗品，純度典型地約97％。產(chǎn)品加熱至約50℃，真空干燥至含水量小于10％。從合成的前面步驟中所用腺嘌呤的量計(jì)算出PMPA二乙酯的量(假設(shè)產(chǎn)率100％)，而不是從PMPA二乙酯粗品的純重量計(jì)算，因?yàn)樵诖制分锌赡芎衅渌衔铩?br> 步驟6、(R)-9-[2-(膦酰甲氧基)丙基]腺嘌呤純品PMPA粗品(1.00kg，對(duì)含水量進(jìn)行了校準(zhǔn))(步驟5產(chǎn)品)的水懸浮液加熱至約100℃(典型地約95-110℃)，中速至高速攪拌直至所有固體溶解時(shí)為止，得到的溶液趁熱過(guò)濾以澄清溶液，用額外的熱水(1kg，約95-110℃)洗滌。濾液加熱至100℃，然后冷卻，首先至約30℃(典型地約20-25℃)，慢速攪拌約3-5小時(shí)，然后繼續(xù)冷卻至約10℃(典型地約5-15℃)。維持在10℃至少約3小時(shí)，過(guò)濾收集固體，先用冷水(1.5kg，約0-10℃)再用丙酮(1kg)連續(xù)洗滌。在50℃(典型地約40-60℃)下真空干燥濕餅至水含量約5.9％(典型地約3.9-7.9％)，得到純凈的PMPA單水合物。通過(guò)面積歸一化和重量歸一化HPLC分析，產(chǎn)品純度典型地約98％或更高。如果化學(xué)純度不令人滿(mǎn)意，可以重復(fù)此步驟進(jìn)行再純化。
任選的重結(jié)晶加熱懸浮液至95-100℃，從水(11.3mL，15∶1重量比例)中重結(jié)晶出PMPA(0.75g)。冷卻至室溫，在冷凍器中冷卻結(jié)晶PMPA。3小時(shí)后，在帶TyvekTM的粗玻璃濾料上過(guò)濾晶體，濾餅用冰水和丙酮洗滌，空氣干燥至恒重，得到絨毛狀白色固體(制劑B)?；厥占s0.64g(85.3％)。HPLC典型地顯示98.5-98.9％純度的PMPA。
制劑B PMPA任選地從9.6mL(15∶1重量比)加熱至95-100℃的水中重結(jié)晶。冷卻至室溫，結(jié)晶PMPA在冷凍器中冷凍過(guò)夜。PMPA在帶TyvekTM的粗玻璃濾料上過(guò)濾，濾餅用冰水和丙酮洗滌，抽干至恒重，得到絨毛狀白色固體(制劑C)。PMPA回收率典型地約0.52g(81.3％)，純度約99.3-99.5％。
制劑C PMPA(0.50g)任選地從約7.5mL沸水(15∶1，重量比)中重結(jié)晶。冷卻至室溫，PMPA在帶TyvekTM的粗玻璃濾料上過(guò)濾，濾餅用冰水和丙酮洗滌，抽干得到絨毛狀白色固體。濾液還任選地濃縮得到白色固體。經(jīng)一次或多次重結(jié)晶制備的PMPA任選地用于制備PMPA衍生物。
步驟7、雙(POC)PMPA富馬酸鹽在合適的溶劑例如NMP中，PMPA、堿例如三烷基胺(TEA，二異丙基乙基胺)和碳酸氯甲基·2-丙基酯反應(yīng)得到雙(POC)PMPA。在約55-80℃的反應(yīng)溫度下，中速攪拌反應(yīng)物約1-6小時(shí)典型地得到高產(chǎn)率的雙(POC)PMPA。在這些時(shí)間和溫度范圍內(nèi)的各種條件下，該雙(POC)PMPA合成反應(yīng)得到良好的結(jié)果。例如，首先用高反應(yīng)溫度(約70-80℃，但不高于80℃)反應(yīng)一段短時(shí)間(約30-120分鐘)，再應(yīng)用低反應(yīng)溫度(約55-65℃)，反應(yīng)得到良好的結(jié)果。反應(yīng)的實(shí)例為(1)在80℃下反應(yīng)30分鐘，再在60-65℃下反應(yīng)2小時(shí)，(2)在60℃下反應(yīng)約4小時(shí)，和(3)在70-72℃下反應(yīng)2小時(shí)。
當(dāng)雙(POC)PMPA合成反應(yīng)完成后，可以任選地通過(guò)過(guò)濾從反應(yīng)混合物中除去固體，然后用乙酸烷基酯洗滌，通常應(yīng)用乙酸C1-4烷基酯，例如乙酸正丁酯、乙酸正丙酯、乙酸異丙酯或乙酸乙酯。之后，真空蒸餾除去有機(jī)溶劑至原反應(yīng)體積的約30％。富馬酸的加入形成固體BPPF，其經(jīng)常以cBPPF形式沉淀。BPPF或cBPPF可含有小量的、通常小于1％(約0.2-0.4％)的水或有機(jī)溶劑，例如1-甲基-2-吡咯烷酮、三烷基胺(例如C1-3烷基如三乙胺、甲基-二乙基胺、二異丙基乙基胺)或丙基二乙基胺)、乙酸甲酯、乙酸乙酯、乙酸丙酯、乙酸異丙酯、C1-6烷醇、吡啶、二甲基甲酰胺、二甲亞砜、丙酮、二氯甲烷、四氫呋喃、乙腈、甲苯、二甲苯、甲基乙基酮、1，2-二氯乙烷或氯仿。典型地，富馬酸溶解于C1-6烷醇例如正己醇、正戊醇、正丁醇、異丙醇、正丙醇、乙醇或甲醇中。
用來(lái)制備BPPF或cBPPF的方法和組成是應(yīng)用作為反應(yīng)劑接觸的雙(POC)PMPA和富馬酸。一般應(yīng)用含有約3-430mg/ml雙(POC)PMPA的溶液，其通常應(yīng)用的濃度約4-100mg/ml。一般應(yīng)用摩爾比約0.6∶1-1.4∶1的雙(POC)PMPA∶富馬酸，通常約0.9∶1.1或約1∶1。通常所用的溶液含有有機(jī)溶劑例如乙酸烷基酯、1-甲基-2-吡咯烷酮、三烷基胺、C1-6烷醇、吡啶、二甲基甲酰胺、二甲亞砜、丙酮、二氯甲烷、四氫呋喃、乙腈、甲苯、二甲苯、甲基乙基酮、1，2-二氯乙烷或氯仿。
在一個(gè)實(shí)施方案中，雙(POC)PMPA的合成和與富馬酸形成BPPF的結(jié)晶如上面步驟7所示，描述如下。在含惰性氣體例如氮?dú)獾姆磻?yīng)器中，將1-甲基-2-吡咯烷酮(4.12kg)、PMPA一水合物(1.00kg)和三乙胺(0.996kg)的混合物攪拌約15-45分鐘，典型地約30分鐘，然后加入碳酸氯甲基·2-丙基酯(2.50kg)，混合物加熱至約55-65℃，典型地約60℃，攪拌約3-6小時(shí)、典型地約4小時(shí)，直至反應(yīng)完全，任選地可由HPLC監(jiān)測(cè)(不高于15％的單(POC)PMPA存在)?；旌衔镉靡宜岙惐?10.72kg)稀釋?zhuān)M快冷卻至約15-30℃，典型地約25℃，維持反應(yīng)器內(nèi)容物在約15-30℃、典型地約25℃，攪拌混合物約20-60分鐘，典型地約30分鐘。過(guò)濾除掉固體，用乙酸異丙酯(4.44kg)洗滌。合并有機(jī)相，在約15-30℃、典型地約25℃的溫度下，用水提取兩次(每次用水3.28kg)，提取時(shí)中速攪拌約1-10分鐘以避免形成乳液，然后使各相分離。合并水相，用乙酸異丙酯反提取兩次(每次用量3.56kg)(約15-30℃，典型地約25℃)。合并所有有機(jī)相，用水洗滌(2.20kg)(約15-30℃，典型地約25℃)，提取時(shí)中速攪拌約1-10分鐘以避免形成乳液。合并有機(jī)相，在約25-43℃但不高于45℃的溫度下，真空濃縮(壓力約26.5-28″Hg)至約30％的起始體積(約10-12L/kg PMPA一水合物)。應(yīng)用在線1μm濾器過(guò)濾之后，在約20-38℃但不高于40℃的溫度下真空(約28″Hg)濃縮有機(jī)相，直至剩下灰黃色油。把該油溶解在溫?zé)?約45-55℃，典型地約50℃)的富馬酸(0.38kg)的2-丙醇(6.24kg)溶液中，劇烈攪拌直至固體溶解，約0.5-2.0小時(shí)。溫?zé)崛芤涸偃芜x地應(yīng)用在線1μm濾器過(guò)濾，期間使溶液冷卻程度最小化。在約34-50℃，典型地為40℃的溫度下攪拌濾液，為了得到均相溶液需要最小程度的攪拌。在最小程度的攪拌下，得到的溶液冷卻至約30-33℃，典型地約32℃約30分鐘，任選地加入少量雙(POC)PMPA富馬酸鹽晶種(約100mg)，冷卻至約12-18℃，典型地約15℃，維持時(shí)間約1-2小時(shí)，典型地約1小時(shí)。如果在加入晶種前已經(jīng)開(kāi)始形成晶體則不需要晶種。隨著溶液的冷卻，在約12-33℃的溫度下形成晶體。開(kāi)始形成晶體時(shí)停止攪拌。在15℃下讓混合物靜置至少約12小時(shí)，典型地約12-30小時(shí)。將得到的漿狀液過(guò)濾(TyvekTM)。用預(yù)混合的乙酸異丙酯(0.70kg)的丁醚(2.44kg)溶液(1∶4體積比)洗滌濾餅。該濾餅在不高于40℃的溫度下，真空干燥約1-10天，干燥的產(chǎn)品任選研磨(裝有0.050″篩子的Fitzmill M5A)，得到白色細(xì)粉末狀晶體雙(POC)PMPA富馬酸鹽，純度約97.0-99.5％。如果需要提高產(chǎn)品純度，可以任選地重結(jié)晶BPPF。
實(shí)施方案包括進(jìn)行方法步驟或操作時(shí)瞬時(shí)產(chǎn)生的組合物。例如，烷氧基鋰與9-(2-羥丙基)腺嘌呤溶液混合，開(kāi)始混合時(shí)，組合物含有可忽略量的烷氧基鋰。在充分?jǐn)嚢杌旌先芤呵?，該組合物通常為非均相混合物。這種組合物通常含有可忽略量的反應(yīng)產(chǎn)品，并主要含有反應(yīng)物。類(lèi)似地，隨著反應(yīng)的進(jìn)行，反應(yīng)物、產(chǎn)物和副產(chǎn)品之間的相互比例會(huì)改變。當(dāng)進(jìn)行方法步驟時(shí)，會(huì)產(chǎn)生過(guò)渡組合物，它們明顯地包含在本發(fā)明實(shí)施方案中。
此處所有的引用文獻(xiàn)在此并入本文作為本說(shuō)明書(shū)的一部分。
下列實(shí)施例更詳細(xì)地闡明本發(fā)明，但不限制本發(fā)明的范圍。
實(shí)施例實(shí)施例1雙(POC)PMPA富馬酸鹽的物理性質(zhì)用通用電器(GeneralElectric)XRD-5型X-射線衍射儀和西門(mén)子軟件系統(tǒng)界面測(cè)定了cBPPF的X-射線粉末衍射圖譜，以每分鐘2度2θ角的掃描速度按照公開(kāi)的方法進(jìn)行(美國(guó)藥典，第23卷，1995年，方法941，美國(guó)藥典Pharmacopeial Convention Inc，Rockville，MD)。應(yīng)用帶有石墨單色器(ES公司)和閃爍探測(cè)器的標(biāo)準(zhǔn)聚焦銅X-射線管(Varican CA-8)，在40KV和-20mA下操作X-射線發(fā)生器，用4-35°的2θ角照射來(lái)掃描BPPF晶體。用于計(jì)算X-射線波長(zhǎng)的重量平均值為CuKα 1.541838A。BPPF顯示X-射線粉末衍射峰特性，以2θ角表達(dá)在約4.9、10.2、10.5、18.2、20.0、21.9、24.0、25.0、25.5、27.8、30.1和30.4處。下面表示舉例性的X-射線粉末衍射圖譜。
還可以通過(guò)差示掃描量熱法分析BPPF晶體，其展示的熱分析圖在約118.3℃處有特征峰，起始處約116.1℃。在氮?dú)庀?，以每分?0℃的掃描速度得到熱分析圖。應(yīng)用差示掃描量熱計(jì)(TA儀器，帶2200型控制計(jì)的DSC2910型)進(jìn)行量熱掃描。應(yīng)用約5mgBPPF晶體獲得熱分析圖。對(duì)于差示掃描量熱計(jì)已有描述(美國(guó)藥典，第23卷，1995年，方法891，美國(guó)藥典Pharmacopeial Convention Inc，Rockville，MD)。
按照公開(kāi)的方法(美國(guó)藥典，第22卷，1994年，方法741、方法Ia，美國(guó)藥典Pharmacopeial Convention Inc，Rockville，MD)，應(yīng)用裝有FP90中央處理機(jī)的FP81測(cè)量池測(cè)定了BPPF的熔點(diǎn)，即其完全變成液體時(shí)的溫度。用精細(xì)研磨的BPPF填充毛細(xì)玻璃管底部。用該毛細(xì)管撞擊硬表面，使BPPF壓縮至4-6mm。把毛細(xì)管放入樣品槽中，以每分鐘1℃的速度升溫。熔點(diǎn)114.2-114.6℃的溫度是基于樣品熔化完全時(shí)的溫度。
按照公開(kāi)的方法(美國(guó)藥典，第23卷，1995年，方法921，美國(guó)藥典Pharmacopeial Convention Inc，Rockville，MD)和制造商的庫(kù)侖計(jì)說(shuō)明，應(yīng)用Metrohm 684KF庫(kù)侖計(jì)通過(guò)卡爾-費(fèi)歇爾滴定來(lái)測(cè)試BPPF的水含量。用于測(cè)試的BPPF量，約50-100mg，用分析天平測(cè)定(Sartorius，RC210D型，或者等價(jià)物)。典型批量含有小于1.0％w/w的水。
應(yīng)用PE 1650型FT-IR光譜儀按照制造商的說(shuō)明通過(guò)紅外光譜儀分析BPPF晶體。使用前，KBr(Aldrich，紅外用)在60℃的溫度下真空干燥過(guò)夜。通過(guò)研磨這兩種粉末以得到精細(xì)粉末制備含有約10％重量的BPPF晶體(約5mg)和約90％重量(約50mg)干KBr的透明小片。已有文獻(xiàn)描述了紅外光譜(參見(jiàn)美國(guó)藥典，第22卷，1994年，方法197，美國(guó)藥典Pharmacopeial Convention Inc，Rockville，MD；MorrisonR.T.等，有機(jī)化學(xué)(Organic Chemistry)，第3版，Allyn和Bacon，Inc.，Boston，第405-412頁(yè)，1973年)。在掃描樣品前，用約6磅/平方英寸的高純度氮?dú)鈨艋庾V儀樣品室至少5分鐘，從而把二氧化碳吸收干擾減少至≤背景掃描的3％。BPPF晶體顯示在溴化鉀中的特征峰吸收光譜，以cm-1表示為約3224(O-H)、3107-3152(N-H，C＝C-H)、2986-2939(脂肪C-H)、1759(烷基酯C＝O)、1678(芳基C＝N)、1620(芳基C＝C)、1269(膦酸酯P＝O)和1102(C-O-C)。
檢測(cè)BPPF在不同溶劑中的溶解性。發(fā)現(xiàn)BPPF通常非常容易溶于本發(fā)明方法和實(shí)施方案典型應(yīng)用的極性溶劑。在二甲基甲酰胺中，BPPF的溶解度為428mg/ml，在乙酸異丙酯-水(1∶1，v/v)、甲醇、乙醇、異丙醇、0.1N HCl和丙酮中，BPPF的溶解度約15-100mg/mL。在乙腈、乙酸異丙酯和去離子水(pH3.3)中，BPPF溶解度約3-15mg/mL。在二氯甲烷、二乙醚和己烷中，BPPF具有低溶解度。
應(yīng)用惠普8425A型二極管排列光譜儀，根據(jù)制造商的說(shuō)明，通過(guò)紫外光譜分析BPPF晶體。用于測(cè)試的BPPF量，約25mg，用分析天平(Sartorius，RC210D型，或者等價(jià)物)測(cè)量和HPLC或光譜用溶液測(cè)量。在pH6.0的0.01M磷酸鉀緩沖液中，10μg/mL BPPF的摩爾吸光度為14930M-1cm-1，在pH2.0的0.01N HCl中，濃度為15μg/ml時(shí)，摩爾吸光度為15010M-1cm-1。在甲醇中，BPPF(10μg/ml)的λmax約為260nm。
當(dāng)在92％的相對(duì)濕度并在室溫保存時(shí)，BPPF晶體可以在多達(dá)37天內(nèi)保持是非吸濕的。通過(guò)電位滴定確定BPPF的pKa為3.8。
實(shí)施例2(R)-PMPA的手性富集(R，S)-PMPA·H2O(2.5g，約93％R-異構(gòu)體)懸浮在含水(100mL)的燒瓶中，按照需要用HCl或NaOH把pH調(diào)至7.12。溶液溫?zé)嶂?0℃，pH調(diào)至約5.0。然后把pH調(diào)至3.1，在溶液中加入(R)-PMPA晶種。溶液冷卻至室溫，放置約2小時(shí)。在磨砂玻璃的多孔玻璃漏斗中收集固體，用冰水(10mL)洗滌，然后用丙酮(10ml)洗滌。得到的PMPA含有98.3％的(R)-異構(gòu)體。當(dāng)應(yīng)用2.5g(R，S)-PMPA(約93％(R)-異構(gòu)體)和25mL水進(jìn)行類(lèi)似的實(shí)驗(yàn)時(shí)，沒(méi)有觀察到(R)-異構(gòu)體的手性富集。當(dāng)應(yīng)用0.766g(R，S)-PMPA(約93％(R)-異構(gòu)體)和10mL水進(jìn)行類(lèi)似的實(shí)驗(yàn)時(shí)，觀察到(R)-異構(gòu)體的手性富集達(dá)到99.6％的(R)-異構(gòu)體。
實(shí)施例3通過(guò)在不同條件下儲(chǔ)存后進(jìn)行分析來(lái)比較cBPPF和雙(POC)PMP·檸檬酸鹽的固態(tài)化學(xué)穩(wěn)定性。其結(jié)果表明在溫度和相對(duì)濕度較高的條件下，BPPF粉末出人意外地更穩(wěn)定些。
條件 時(shí)間*BPPF％單(POC)PMPA雙(POC)PMPA單(POC)PMPA富馬酸鹽％ 檸檬酸鹽％ 檸檬酸鹽％40℃，099.0 1.099.0 1.075％**14 98.3 1.796.9 3.130 98.1 1.992.9 7.160 97.1 2.977.6 22.460℃ 099.0 1.099.0 1.075％ 396.9 3.124.0 58.9***7---- 6.776.2***11 90.4 9.6-- --15 81.3 18.7 -- --*天；**相對(duì)濕度；***除單(POC)PMPA檸檬酸鹽外還產(chǎn)生其它產(chǎn)品實(shí)施例4雙(POC)PMPA富馬酸鹽制劑用如下的幾種輔料配制晶體BPPF的制劑。
所配制的制劑含有9-[2-(R)-[[雙[[(異丙氧基羰基)氧基]甲氧基]膦?；鵠甲氧基]丙基]腺嘌呤·富馬酸(1∶1)、預(yù)膠化淀粉、交聯(lián)羧甲基纖維素鈉、乳糖一水合物和硬脂酸鎂。
組份 重量百分比 每單位含量(mg/片)BPPF 34.0 75乳糖一水合物，NF·顆粒內(nèi)部分 54.0 119.2·顆粒外部分 2.0 4.4預(yù)膠化淀粉，NF5.0 11.0交聯(lián)羧甲基纖維素鈉，NF·顆粒內(nèi)部分 2.0 4.4·顆粒外部分 2.0 4.4硬脂酸鎂，NF 1.0 2.2在該制劑中，預(yù)膠化淀粉NF用作壓片時(shí)的粘合劑和崩解劑。交聯(lián)羧甲基纖維素鈉NF，內(nèi)部為交聯(lián)羧甲基纖維素鈉，有助于片劑的崩解和溶解。乳糖一水合物NF用作稀釋劑來(lái)便于制備以及有助于片劑溶解。硬脂酸鎂NF用作潤(rùn)滑劑有助于片劑從壓片機(jī)中排出。
含有BPPF的片劑制備如下把預(yù)膠化淀粉、交聯(lián)羧甲基纖維素鈉和乳糖一水合物在混合器中混合，加入水直至形成合適的濕顆粒。研磨該濕顆粒，在流化床中干燥直至含濕量不高于3％，干燥后的顆粒進(jìn)行研磨，然后將該研磨后的顆粒與顆粒外輔料、交聯(lián)羧甲基纖維素鈉和乳糖一水合物組合，在混合器中混合得到粉末混合物。該粉末混合物然后與硬脂酸鎂混合，再壓成片劑。把片劑裝入高密度聚乙烯瓶或玻璃瓶中，并應(yīng)用聚酯包裝材料和任選的硅膠干燥劑。
權(quán)利要求
1.一種組合物，它含有烷氧基鋰和9-(2-羥丙基)腺嘌呤溶液。
2.一種組合物，它含有(R，S)-PMPA溶液，所述溶液pH約2.7-3.5，其中溶液含有約0.1g/mL的(R，S)-PMPA，并且其中約90-94％的PMPA為(R)-構(gòu)型。
3.一種制備權(quán)利要求1的組合物的方法，它包括把烷氧基鋰與9-(2-羥丙基)腺嘌呤溶液混合。
4.權(quán)利要求3的方法，其中在烷氧基鋰中的烷氧基選自甲氧基、乙氧基、正丙氧基、異丙氧基、正丁氧基、異丁氧基、叔丁氧基、新戊氧基、正戊氧基、異戊氧基或正己氧基、正庚氧基、2-庚氧基、正辛氧基、2-辛氧基，典型地為叔丁氧基或異丙氧基。
5.權(quán)利要求4的方法，其中烷氧基鋰為叔丁氧基鋰或異丙氧基鋰。
6.一種方法，它包括把含有小于約0.08g/ml(R，S)-PMPA的溶液的pH值調(diào)至約2.7-3.5，并且其中約90-94％的PMPA為(R)-構(gòu)型。
全文摘要
本發(fā)明提供含有雙(POC)PMPA和富馬酸(1∶1)的組合物。該組合物用作制備抗病毒化合物制劑的中間體，或者用于給藥至患者來(lái)進(jìn)行抗病毒治療或預(yù)防。當(dāng)口服時(shí)，該組合物是特別有用的。本發(fā)明還提供PMPA和用于PMPA合成的中間體的制備方法。實(shí)施方案包括在有機(jī)溶劑如DMF中的叔丁氧基鋰、9－(2－羥丙基)腺嘌呤和對(duì)甲苯磺酰甲氧基膦酸二乙酯。與以前的方法制備的二乙基PMPA相比，該反應(yīng)得到的二乙基PMPA含有改進(jìn)的副產(chǎn)品特性。
文檔編號(hào)A61P31/12GK1554350SQ200410046290
公開(kāi)日2004年12月15日 申請(qǐng)日期1998年7月23日 優(yōu)先權(quán)日1997年7月25日
發(fā)明者J·D·小蒙格, J·C·若羅夫, L·M·舒爾茲, J D 小蒙格, 舒爾茲, 若羅夫 申請(qǐng)人:吉里德科學(xué)公司