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一類海芒果苷衍生物、其制備方法及用途的制作方法

文檔序號:976050閱讀:276來源:國知局
專利名稱:一類海芒果苷衍生物、其制備方法及用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域
本發(fā)明涉及醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域,具體是一類從中國紅樹林植物海芒果中分離得到新的強心苷類衍生物和它們的制備方法和用途。該類化合物對多種腫瘤細(xì)胞株具有較強的抑制作用,可作為治療各種臨床常見多發(fā)癌癥的藥物,也可作為一類研制新的抗腫瘤藥物的先導(dǎo)化合物。
背景技術(shù)
海芒果(Cerbrta manghas L.)屬于夾竹桃科(Apocynaceae),海芒果屬(Cerbera),別名山樣子,為小喬木,高達(dá)6米,常生于海邊濕潤的地方,可作防潮樹種,分布于廣東和臺灣,亞洲和澳大利亞的熱帶地區(qū)。海芒果的果實有劇毒,以核仁最毒,含毒成分為氫氰酸和海芒果苷,樹皮、葉和乳汁有催吐、下瀉的藥用效果。
國內(nèi)外對海芒果化學(xué)成分的研究發(fā)現(xiàn)其主要含有強心苷、環(huán)烯醚萜苷、黃酮苷、木脂素及降單萜類成分。其中強心苷是治療心力衰竭不可缺少的重要藥物,臨床上用以治療心力衰竭及節(jié)律障礙等心臟疾患。但自海芒果中分離得到的強心苷未見有抑制腫瘤細(xì)胞活性的報道。
本發(fā)明從紅樹林植物海芒果中分離得到一個新的強心苷類衍生物海芒果苷,同時將海芒果苷經(jīng)乙?;蛯︿灞郊柞;磻?yīng)后分別得到其乙?;?、對溴苯甲?;飪蓚€衍生物,經(jīng)對多種腫瘤細(xì)胞株的測試,海芒果苷和此二種化合物均顯示有很好的活性。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于公開一類海芒果苷類衍生物;本發(fā)明的另一目的是提供一類海芒果苷類衍生物的制備方法;本發(fā)明的再一目的是提供一類海芒果苷類衍生物的醫(yī)藥用途。
本發(fā)明提供如下通式的海芒果苷類衍生物
其中R=OH、OAc或?qū)︿灞郊柞;?br> 本發(fā)明還提供上述通式化合物的制備方法,該方法包括如下步驟(1)將紅樹林植物海芒果莖桿干燥粉碎后用C1-C3低級醇浸提三次,每次浸提時間為7-10天,合并醇浸提液,減壓蒸去溶劑得醇浸提物,醇浸提物用H2O溶解,再分別用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取三次,分別蒸干溶劑得石油醚部分、乙酸乙酯部分、正丁醇部分和水溶部分。
(2)正丁醇部分經(jīng)過硅膠(100-200目)柱層析,用氯仿/甲醇95∶5-50∶50梯度洗脫,再經(jīng)過反復(fù)硅膠柱層析、吡啶/醋酐(1∶1)攪拌反應(yīng)12小時處理,上硅膠(200-300目)柱,用石油醚/乙酸乙酯洗脫,經(jīng)Sephadex LH-20凝膠柱層析,石油醚/氯仿/甲醇(1∶1∶1)為流動相分別收集Rf=0.5(展開劑petroleum/EtOAc 1∶1)部分得到R=OH的強心苷類衍生物海芒果苷。
(3)海芒果苷與吡啶/醋酐反應(yīng),得到R=OAc的強心苷乙?;铩:C⒐张c1∶1的無水吡啶和醋酐在攪拌器上攪拌10-30h,減壓除去吡啶和醋酐,得到R=OAc的通式化合物。
(4)海芒果苷與對溴苯甲酰氯反應(yīng),得到R為對溴苯甲酰的強心苷對溴苯甲酰化物。海芒果苷與對溴苯甲酰氯反應(yīng)(克分子比為1∶0.8-1.5)溶于重蒸二氯甲烷與等體積的三乙胺中,再加4-二甲氨基吡啶適量,于室溫下攪拌過夜即得到R為對溴苯甲?;耐ㄊ交衔?。
本發(fā)明對通式化合物進(jìn)行了抗腫瘤活性測試,經(jīng)試驗表明該類化合物具有明顯的抗腫瘤作用。
測試原理MTT法[徐叔云,卞如濂,陳修 主編。藥理試驗方法學(xué)(第三版)。北京人民衛(wèi)生出版社,2002,1785-1786]按不同腫瘤生成速率,將一定數(shù)量處于對數(shù)生長期的腫瘤細(xì)胞90μl/孔接種于96孔培養(yǎng)板內(nèi),培養(yǎng)24小時后加入藥液10μl/孔,對每個細(xì)胞株,每個濃度均為三個復(fù)孔。腫瘤細(xì)胞在37℃、5%CO2條件下培養(yǎng)48小時后,加MTT(Sigma)液(5mg/ml,用生理鹽水配制)20μl/孔,繼續(xù)培養(yǎng)4小時后,加入三聯(lián)液(10%SDS-5%異丁醇-0.01mol/L HCl)50μl/孔,于CO2培養(yǎng)箱中過夜。然后在570nm用酶標(biāo)儀測定OD值。
觀測指標(biāo)觀測指標(biāo)按下列公式計算被測物對癌細(xì)胞生長的抑制率,半數(shù)抑制量IC50值采用Logit法計算。

實驗結(jié)果的評判與解析

具體實施方式
下面結(jié)合具體實施實例對本發(fā)明作進(jìn)一步闡述,但不限制本發(fā)明。
NMR用Bruker-DRX400核磁共振儀測定。ESIMS用Finnigan-MAT-95質(zhì)譜儀測定。柱層析硅膠、薄層硅膠板均為青島海洋化工有限公司生產(chǎn)。所使用的Sephadex LH-20為E.Merk公司生產(chǎn),試劑均為上海振興化工一廠產(chǎn)品。
實施例一化合物海芒果苷的制備(1)提取采于我國廣西北海的海芒果莖桿3.0kg干燥粉碎后用甲醇浸提三次,每次浸提時間為7-10天,合并甲醇浸提液,減壓蒸去甲醇,得甲醇浸提物,甲醇浸提物用H2O溶解,再分別用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取三次,分別蒸干溶劑得石油醚部分、乙酸乙酯部分、正丁醇部分和水溶部分。
(2)正丁醇部分(100g)經(jīng)過硅膠(100-200目)柱層析,用氯仿/甲醇95∶5-50∶50梯度洗脫,500ml/份,共收集70份,經(jīng)薄層層析檢測后合并為8個部分,分別減壓濃縮,取第四個部分(7.5克)又經(jīng)硅膠(200-300目)柱層析,用氯仿/甲醇98∶2-90∶10梯度洗脫,分為F41-F45五個部分分別濃縮,F(xiàn)44部分(2.3g)又經(jīng)硅膠(200-300目)柱層析,用氯仿/甲醇95∶5-90∶10梯度洗脫,得F441-F443三個部分,F(xiàn)442(480mg)經(jīng)醋酐和吡啶(1∶1)攪拌反應(yīng)12小時后上硅膠(200-300目)柱,用石油醚/乙酸乙酯90∶10-50∶50梯度洗脫,將TLC測定顯示相同部分合并為三個組分,其中F4423(36mg)經(jīng)Sephadex LH-2柱層析流動相為石油醚/氯仿/甲醇(1∶1∶1)],減壓濃縮所得組分再經(jīng)硅膠柱層析,以CHCl3/MeOH 99∶1-98∶2梯度洗脫,展開CHCl3/MeOH 98∶2,得R=OH通式化合物15mg。該化合物為首次從我國廣西海芒果中提取分離得到,故命名為海芒果苷。
海芒果苷的理化性質(zhì)如下無色油狀物,易溶于氯仿、丙酮;ESIMS顯示分子離子峰901[M++Na];其1H NMR(CDCl3,400MHz)數(shù)據(jù),δ0.90(3H,s,H-18),0.96(3H,s,H-19),1.25(3H,d,J=6.2 Hz,H-6’),2.02,2.04,2.06,2.07(each 3H,s,4×OAc),2.80(1H,t,J=8.6Hz,H-17),3.20(1H,d,J=5.9Hz,H-7),3.33(1H,t,J=9.4Hz,H-4’),3.52(3H,s,3’-OMe),3.71(1H,t,J=9.4Hz,H-3’),4.10(1H,dd,J=12.3,2.3Hz,H-6”a),4.20(1H,dd,J=12.3,5.5Hz,H-6”b),4.55(1H,d,J=7.6Hz,H-1”),4.60(1H,dd,J=3.9,9.9Hz,H-2’),4.77(1H,dd,J=18.0,1.7Hz,H-21a),4.93(1H,dd,J=18.0,1.5Hz,H-21b),4.98(1H,t,J=9.9Hz,H-4”),5.02(1H,d,J=3.7Hz,H-1’),5.12(1H,t,J=9.6Hz,H-3”),5.87(1H,t,J=1.5Hz,H-22).13C NMR(CDCl3,100MHz)數(shù)據(jù),δ173.9(s,C-20),173.3(s,C-23),170.3,170.2,169.7,169.4(each s,4×OCOCH3),117.7(d,C-22),104.4(d,C-1”),93.4(d,C-1’),83.2(d,C-3’),80.9(s,C-14),80.4(d,C-3”),74.6(d,C-2”),74.3(d,C-4’),73.3(t,C-21),73.1(d,C-4”),72.1(d,C-21),71.8(d,C-3),68.5(d,C-5”),66.4(d,C-5’),63.9(s,C-8),62.3(t,C-6”),60.9(q,3’-OCH3),52.2(s,C-13),51.1(d,C-7),50.6(d,C-17),41.0(t,C-12),34.5(t,C-15),33.9(s,C-10),33.7(d,C-5),32.4(t,C-4),31.6(d,C-9),31.4(t,C-1),28.4(t,C-16),27.9(t,C-6),27.1(t,C-2),24.4(q,C-19),21.0,21.0,20.8,20.8(each q,4×OCOCH3),20.5(t,C-11),17.4(q,C-6’),17.2(q,C-18).
參照文獻(xiàn)[1,Abe F.,Yamauchi T.Chem.Pharm.Bull.,1977,25(10)2744-2748;2,Yamauchi T.,Abe F.,Wan A.S.C.Chem.Pharm.Bull.,1987,35(7)2744-2749]。不難發(fā)現(xiàn)本發(fā)明分離出的海芒果苷只比已知化合物17αH-tanghinigeninβ-L-thevetoside acetate少了一個乙?;?,經(jīng)仔細(xì)分析海芒果苷的1H NMR和13C NMR數(shù)據(jù),并與已知化合物比較,發(fā)現(xiàn)海芒果苷在2”位沒被乙?;〈?,為一強心苷類化合物的新的衍生物,化學(xué)名為17αH-tanghinigeninβ-L-thevetoside 2’,3”,4”,6”-four acetate。
實施例二 海芒果苷衍生物乙?;锏闹苽浞Q取海芒果苷5.0mg于25mL圓底燒瓶中,加入無水吡啶和醋酐各1.5ml,在磁力攪拌器上攪拌24h,減壓除去吡啶和醋酐,得到R=OAc的通式化合物(4.5mg)。
海芒果苷乙?;餅闊o色油狀物,易溶于氯仿、丙酮;ESIMS顯示分子離子峰943[M++Na];其1H NMR(CDCl3,400MHz)數(shù)據(jù),δ0.92(3H,s,H-18),0.95(3H,s,H-19),1.25(3H.d,J=6.2Hz,H-6’),2.02,2.04,2.05,2.06,2.07(each 3H,s,5×OAc),2.79(1H,t,J=8.5Hz,H-17),3.23(1H,d,J=6.0Hz,H-7),3.32(1H,t,J=9.5Hz,H-4’),3.55(3H,s,3’-OMe),3.68(1H,t,J=9.5Hz,H-3’),4.12(1H,dd,J=12.5,2.4Hz,H-6”a),4.21(1H,dd,J=12.5,5.7Hz,H-6”b),4.50(1H,d,J=7.8Hz,H-1”),4.58(1H,dd,J=3.9,9.9Hz,H-2’),4.75(1H,dd,J=17.6,1.8Hz,H-21a),4.93(1H,dd,J=17.6,1.5Hz,H-21b),4.96(1H,t,J=9.7Hz,H-4”),5.00(1H,d,J=3.7Hz,H-1’),5.10(1H,t,J=9.4Hz,H-3”),5.85(1H,t,J=1.8Hz,H-22)。
實施例三海芒果苷衍生物對溴苯甲?;锏闹苽浞Q取海芒果苷3.0mg于10ml圓底燒瓶中,分別加入2mg對溴苯甲酰氯,1ml重蒸二氯甲烷和1ml三乙胺,再加4-二甲氨基吡啶少許,于室溫下攪拌過夜即得到R=為對溴苯甲?;耐ㄊ交衔?2.3mg)。
海芒果苷對溴苯甲?;锏睦砘再|(zhì)如下無色油狀物,易溶于氯仿、丙酮;ESIMS顯示分子離子峰1083[M++Na];其1H NMR(CDCl3,400MHz)數(shù)據(jù),δ0.95(3H,s,H-18),0.96(3H,s,H-19),1.24(3H,d,J=6.5Hz,H-6’),2.03,2.04,2.05,2.07(each 3H,s,4×OAc),2.81(1H,t,J=8.6Hz,H-17),3.25(1H,d,J=6.3Hz,H-7),3.33(1H,t,J=9.4Hz,H-4’),3.50(3H,s,3’-OMe),3.74(1H,t,J=9.0Hz,H-3’),4.10(1H,dd,J=12.6,2.5Hz,H-6”a),4.18(1H,dd,J=12.5,5.5Hz,H-6”b),4.58(1H,d,J=7.7Hz,H-1”),4.61(1H,dd,J=4.1,9.7Hz,H-2’),4.77(1H,dd,J=18.2,1.5Hz,H-21a),4.95(1H,dd,J=18.2,1.5Hz,H-21b),4.99(1H,t,J=9.9Hz,H-4”),5.05(1H,d,J=3.5Hz,H-1’),5.11(1H,t,J=9.5Hz,H-3”),5.87(1H,t,J=1.5Hz,H-22),7.59(2H,br d,J=8.6Hz,H-4,6),7.93(2H,br d,J=8.6Hz,H-3,7)。
實施例四海芒果苷及其衍生物抗腫瘤活性測試實驗方法MTT法按不同腫瘤生成速率,將一定數(shù)量處于對數(shù)生長期的Hela,A-549,Bel-7402,HL-60腫瘤細(xì)胞90μl/孔分別接種于96孔培養(yǎng)板內(nèi),培養(yǎng)24小時后加入藥液10μl/孔,對每個細(xì)胞株,每個濃度均為三個復(fù)孔。腫瘤細(xì)胞在37℃、5%CO2條件下培養(yǎng)48小時后,加MTT(Sigma)液(5mg/ml,用生理鹽水配制)20μl/孔;繼續(xù)培養(yǎng)4小時后,加入三聯(lián)液(10%SDS-5%異丁醇-0.01mol/L HCl)50μl/孔,于CO2培養(yǎng)箱中過夜。然后在570nm用酶標(biāo)儀測定OD值。經(jīng)多次體外抗腫瘤活性實驗表明,該通式化合物具有顯著的抗腫瘤作用,實驗結(jié)果如下

權(quán)利要求
1.一類具有如下結(jié)構(gòu)的海芒果苷衍生物 其中R=OH、OAc或?qū)︿灞郊柞;?br> 2.如權(quán)利要求1所述的海芒果苷類衍生物的制備方法,其特征在于步驟如下a)以植物海芒果莖桿為原料,用C1-C3低級醇浸提、合并浸提液,濃縮,濃縮物溶于H2O分別用石油醚、乙酸乙酯和正丁醇萃取,減壓濃縮,得到石油醚提取物、乙酸乙酯提取物、正丁醇浸物以及水溶物;b)正丁醇浸提物連續(xù)硅膠柱層析,合并所得的第二個組分用醋酐/吡啶(1∶1)攪拌反應(yīng)12小時,再上硅膠(200-300目)柱,用石油醚/乙酸乙酯洗脫,然后又經(jīng)過Sephadex LH-20柱層析,以石油醚/氯仿/甲醇(1∶1∶1)洗脫,所得組分再經(jīng)硅膠柱層析,以CHCl3/MeOH洗脫,得到R=OH的海芒果苷;c)海芒果苷與1∶1的無水吡啶和醋酐在攪拌器上攪拌10-30小時,得到R=OAc的強心苷類衍生物;d)海芒果苷與對溴苯甲酰氯(克分子比為1∶0.8-1∶1.5)反應(yīng),溶于重蒸二氯甲烷與等體積的三乙胺中,再加4-二甲氨基吡啶適量,于室溫下攪拌過夜即得到R為對溴苯甲酰基的通式化合物。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的海芒果苷類衍生物的制備方法,其特征在于正丁醇部分經(jīng)硅膠柱層析的流動相依次為氯仿∶甲醇95∶5-50∶50梯度洗脫。
4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的海芒果苷類衍生物的制備方法,其特征在于反應(yīng)物用石油醚/乙酸乙酯90∶10-50∶50梯度洗脫。
5.如權(quán)利要求1所述的海芒果苷類衍生物的用途,其特征是該類化合物具有抗腫瘤活性,可以在制備治療各種臨床常見多發(fā)癌癥的藥物中得到應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明公開一類海芒果苷類衍生物、制備方法和用途。涉及醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域,具體是一類從紅樹林植物海芒果(Cerbera manghas L)中提取、分離獲得的新的具有顯著抗腫瘤活性的海芒果苷類衍生物,結(jié)構(gòu)如下其中R=OH、OAc、或?qū)︿灞郊柞;?jīng)多次體外抗腫瘤活性實驗表明,該類化合物具有明顯的抑制腫瘤細(xì)胞活性,可在制備抗癌癥藥物中應(yīng)用。本發(fā)明可為研制新的治療各種常見多發(fā)癌癥藥物提供先導(dǎo)化合物,對開發(fā)利用我國紅樹林植物資源具有重要意義。
文檔編號A61K31/7048GK1715292SQ200410025718
公開日2006年1月4日 申請日期2004年7月2日 優(yōu)先權(quán)日2004年7月2日
發(fā)明者郭躍偉, 王繼棟, 于嘉陵, 丁健 申請人:中國科學(xué)院上海藥物研究所
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