專利名稱：一種從芒果果皮中分離純化芒果苷的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于天然化合物的提取分離純化技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及以芒果果皮為原料， 采用液液萃取，大孔樹脂和HSCCC的聯(lián)用技術(shù)分離純化芒果苷的方法
背景技術(shù)：
芒果苷(mangiferin)，別名芒果素，莞知母寧，分子式C19H180n，分子量422. 34， CAS號4773-96-0，是一種四羥基吡啶的碳糖苷，屬于雙苯吡酮類化合物。芒果苷存在于漆樹科植物芒果iMangifera indica L.)的果實(shí)、葉、樹皮,百合科植物知母iAnemarrhena asphodeloides Bge.)的根莖、地上部分，鳶尾科植物射干 \_Belamcanda chinensis (L.) DC.]的花、葉等植物中。芒果苷結(jié)構(gòu)式如下
HO^OH O
近年研究表明，芒果苷具有較強(qiáng)的抗氧化，消炎，抑菌，免疫調(diào)節(jié)，抑制腫瘤以及降血糖等活性，受到人們的廣泛關(guān)注。現(xiàn)有提取純化芒果苷的原料大多集中于藥材和芒果葉中，技術(shù)手段多采用堿液提取或一定濃度的醇提取結(jié)合結(jié)晶獲取芒果苷，但這些工藝比較粗放， 得到的芒果苷產(chǎn)品純度不能保證。近年來，大孔樹脂結(jié)合高速逆流色譜技術(shù)提取純化高純度天然產(chǎn)物已在很多方面取得成功，但利用芒果果皮采用大孔樹脂和高速逆流色譜聯(lián)用技術(shù)純化獲得高純度芒果苷 (98%以上)的研究未見報道。芒果作為一種美味的熱帶水果深受人們喜愛，然而，芒果果皮占果實(shí)10%左右(重量)，在果實(shí)加工或鮮食過程中都成為廢棄物，研究從芒果果皮中提取高純度的芒果苷不僅可以變廢為寶，在一定程度上還可以給芒果的深加工提供思路，并可為芒果苷藥理作用及其相關(guān)功能活性的研究提供技術(shù)支撐和工作基礎(chǔ)，最大程度地提高芒果的附加值。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種從芒果果皮分離純化芒果苷的方法，通過以下步驟實(shí)現(xiàn)
(1)粗提物的準(zhǔn)備一定質(zhì)量干燥的芒果果皮粉末，用石油醚(固液比1:20)浸泡2h， 超聲30 min，過濾去掉石油醚，濾渣45°C減壓蒸干石油醚后再用提取液(甲醇乙醇丙酮 1:1:1, v/v/v)超聲提取兩次(固液比1:20)，過濾，合并兩次濾液，濃縮蒸干得浸膏，然后溶于ddH20中；
(2)乙酸乙酯萃取將步驟(I)得到的粗提水溶液經(jīng)過乙酸乙酯等體積萃取兩次，上相合并后再經(jīng)水等體積萃取一次后，合并下相溶液45°C減壓蒸出溶液中殘留的乙酸乙酯；
(3)將(2)步驟得到的提取液上樣HPD100大孔樹脂，上樣流速2ml/min。上樣后的HPDlOO大孔樹脂先用水和5%乙醇各10 BV(柱床體積)洗脫以去掉極性較高的雜質(zhì)，然后用 10 BV 30%乙醇洗脫芒果苷，洗脫流速為2 ml/min，收集30%洗脫液，在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上45°C 蒸干得大孔樹脂粗提物粉末；
(4)分離純化芒果苷配制乙酸乙酯-正丁醇-水(4:1:5)溶劑體系，充分搖勻過夜后， 將上下相分開，超聲脫氣，上相為固定相，下相為流動相，將固定相以20 ml/min流速泵入高速逆流色譜儀(HSCCC)，穩(wěn)定后，調(diào)節(jié)逆流色譜儀轉(zhuǎn)速800 rpm，同時流動相以2 ml/min流速泵入HSCCC，待流出液分層后進(jìn)樣大孔樹脂粗提物粉末，根據(jù)HSCCC圖譜收集出峰處各組分(每管1.8 ml)，并對各管樣品進(jìn)行HPLC檢測，合并含有單一芒果苷的各管樣品，在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上蒸干即得到高純度的芒果苷，回收率> 70%，產(chǎn)品純度均> 98%。本發(fā)明純化得到的芒果苷經(jīng)過高效液相色譜(HPLC)和質(zhì)譜(MS)鑒定，與文獻(xiàn)報道一致?，F(xiàn)有提取純化芒果苷的原料大多集中于藥材和芒果葉中，且技術(shù)手段多采用堿液提取或一定濃度的醇提取大孔樹脂純化后結(jié)晶獲取的芒果苷，利用芒果果皮采用大孔樹脂和高速逆流色譜聯(lián)用技術(shù)純化獲得高純度芒果苷(98%以上)的研究未見報道。本發(fā)明采用液液萃取，大孔樹脂和HSCCC的聯(lián)用技術(shù)，以芒果果皮干燥粉末為原料分離純化得到高純度的芒果苷。本發(fā)明相對于過去的工藝有如下優(yōu)點(diǎn)(1)生產(chǎn)流程安全易操作；(2)生產(chǎn)周期短；(3)純化產(chǎn)物回收率高，純度高；(4)整個純化過程通過HPLC進(jìn)行精確定量，準(zhǔn)確度高；(5) HSCCC所用的溶劑可回收后重復(fù)利用，成本較低。


圖I為本發(fā)明的工藝流程圖。圖2為‘綠皮芒’果皮粗提液HPLC色譜圖。圖3為乙酸乙酯萃取后下相HPLC色譜圖。圖4為HPD100大孔樹脂純化所得樣品的HPLC色譜圖。圖5為HSCCC進(jìn)一步純化得到芒果苷單體HPLC色譜圖。圖6為來自‘綠皮芒’果皮HPD100粗提物20 mg進(jìn)樣HSCCC分離純化圖譜。圖7為來自‘留香芒’果皮HPD100粗提物20 mg進(jìn)樣HSCCC分離純化圖譜。圖8為來自‘綠皮芒’果皮HPD100粗提物連續(xù)兩次進(jìn)樣(20 mg和30 mg) HSCCC 分離純化圖譜。圖9為純化得到芒果苷單體的質(zhì)譜鑒定圖。
具體實(shí)施例方式本發(fā)明結(jié)合附圖和實(shí)施例作進(jìn)一步的說明。實(shí)施例I本發(fā)明通過以下試驗(yàn)進(jìn)行影響因素的篩選確定
I、純化材料的選擇
經(jīng)冷凍干燥的‘馬切蘇’芒果果實(shí)材料，包括果皮，果肉，種皮，種仁，用磨樣機(jī)粉碎打成細(xì)小的粉末。精確稱取一定量的冷凍干燥粉末，用提取液(甲醇乙醇丙酮1:1:1，v/v/ V)浸泡2h (固液比1:20)，超聲提取兩次，10000 rpm離心10 min，合并上清液用于芒果苷的HPLC分析。HPLC流動相包括2%乙酸(A)和0.5%乙酸色譜乙腈(1:1，v/v) (B)，采用 0-2 min: 95% A, 2-10 min: 95—75% A, 10—40 min: 75—45% A, 40—45 min: 45—10% A,45-50min: 10-45% A, 50-55 min: 45-95% A, 55-60 min: 95% A 梯度洗脫，流速為 0.6 ml/min，固定相為Waters C18色譜柱，柱溫25°C，檢測波長258 nm。結(jié)果表明‘馬切蘇’芒果果實(shí)四個部位中，果皮中含有的芒果苷最高(表I)。表I
權(quán)利要求
1.一種從芒果果皮分離純化芒果苷的方法，通過以下步驟實(shí)現(xiàn) (1)粗提物的準(zhǔn)備取干燥的芒果果皮粉末，用固液比1:20的石油醚浸泡2小時，超聲30分鐘，過濾去掉石油醚，濾渣45°C減壓蒸干石油醚后再用提取液超聲提取兩次(固液比1:20)，過濾，合并兩次濾液，濃縮蒸干得浸膏，然后溶于ddH20中； (2)乙酸乙酯萃取將步驟(I)得到的粗提水溶液經(jīng)過乙酸乙酯等體積萃取兩次，上相合并后再經(jīng)水等體積萃取一次后，合并下相溶液45°C減壓蒸出溶液中殘留的乙酸乙酯； (3)將(2)步驟得到的提取液上樣HPD100大孔樹脂，上樣流速2ml/min，上樣后的HPD100大孔樹脂先用水和5%乙醇各10柱床體積洗脫，然后用10柱床體積30%乙醇洗脫芒果苷，洗脫流速為2 ml/min,收集30%洗脫液，在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上45°C蒸干得大孔樹脂粗提物粉末； (4)分離純化芒果苷配制4:1:5的乙酸乙酯-正丁醇-水溶劑體系，充分搖勻過夜后，將上下相分開，超聲脫氣，上相為固定相，下相為流動相，將固定相以20 ml/min流速泵入高速逆流色譜儀，穩(wěn)定后，調(diào)節(jié)逆流色譜儀轉(zhuǎn)速800 rpm，同時流動相以2 ml/min流速泵入高速逆流色譜儀，待流出液分層后進(jìn)樣大孔樹脂粗提物粉末，根據(jù)HSCCC圖譜收集出峰處各組分，并對各管樣品進(jìn)行HPLC檢測，合并含有單一芒果苷的各管樣品，在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上蒸干即得到芒果苷。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的一種從芒果果皮分離純化芒果苷的方法，其特征在于，步驟(1)所述提取液為體積為1:1:1的甲醇乙醇丙酮溶液。
全文摘要
本發(fā)明提供一種有效的從芒果果皮中分離純化芒果苷的方法，采用液液萃取，大孔樹脂和HSCCC的聯(lián)用技術(shù)，以芒果果皮干燥粉末為原料，經(jīng)乙酸乙酯萃取，HPD100大孔樹脂、HSCCC分離純化得到高純度的芒果苷。本發(fā)明方法設(shè)計(jì)合理，操作簡單，生產(chǎn)流程安全易操作，生產(chǎn)周期短，樣品用量少，設(shè)備投入少，整個純化過程通過HPLC進(jìn)行精確定量，準(zhǔn)確度高，條件穩(wěn)定容易控制，HSCCC所用的溶劑可回收后重復(fù)利用，成本較低。本發(fā)明方法純化產(chǎn)物回收率高，純度高，最終純化的芒果苷純度≥98%，適用于工業(yè)化生產(chǎn)。
文檔編號C07H17/04GK102617669SQ20121005338
公開日2012年8月1日 申請日期2012年3月3日 優(yōu)先權(quán)日2012年3月3日
發(fā)明者孫崇德, 李鮮, 羅豐雷, 陳昆松 申請人:浙江大學(xué)