專(zhuān)利名稱(chēng)：(反式)－2－脫氧－2－(氟亞甲基)－4－r酰胞苷化合物及其制備方法和用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種能有效地抑制和殺傷荷瘤動(dòng)物的腫瘤細(xì)胞，并且不伴有明顯的毒副作用，因此有可能改變傳統(tǒng)的化療藥物對(duì)所有快速分裂的細(xì)胞進(jìn)行全面打擊的作用方式，即能夠主要針對(duì)腫瘤細(xì)胞的基因突變或基因表達(dá)異常來(lái)發(fā)揮其有效作用，而對(duì)正常細(xì)胞沒(méi)有影響的(反式)-2-脫氧-2-(氟亞甲基)-4-R酰胞苷化合物及其制備方法和用途。
背景技術(shù)：
癌癥是世界公認(rèn)的人類(lèi)現(xiàn)代疾病中的重大殺手，據(jù)世界衛(wèi)生組織國(guó)際癌癥研究中心的研究報(bào)告表明，根據(jù)癌癥的發(fā)病趨勢(shì)，2020年全世界的癌癥發(fā)病率將比現(xiàn)在增加50％，全球每年新增的癌癥患者人數(shù)將達(dá)到1500萬(wàn)人。據(jù)統(tǒng)計(jì)，我國(guó)自20世紀(jì)70年代以來(lái)，癌癥發(fā)病率一直呈上升趨勢(shì)，因患癌癥致死已經(jīng)成為城鎮(zhèn)居民諸多死因中的第一位，我國(guó)目前每年癌癥發(fā)病的人數(shù)已經(jīng)高達(dá)200萬(wàn)，死于癌癥的人數(shù)已經(jīng)超過(guò)140萬(wàn)。農(nóng)村及西部地區(qū)癌癥的上升速度已經(jīng)明顯高于城市及全國(guó)的平均水平，這不僅嚴(yán)重的影響了公民的身體的健康，而且已成為我國(guó)醫(yī)療費(fèi)用上漲的重要因素。據(jù)有關(guān)部門(mén)估算，每年用于癌癥病人的醫(yī)療費(fèi)用高達(dá)數(shù)百億元。此外，由于中晚期癌癥患者的治療效果普遍不佳，其不良的預(yù)后往往波及親友和家庭，影響社會(huì)的安全和穩(wěn)定。因此，尋找有效的抗腫瘤藥物和治療方法一直是一個(gè)受到社會(huì)和政府高度重視的重大課題。
隨著科技的進(jìn)步，惡性腫瘤對(duì)人類(lèi)已不再是“不治之癥”，藥物治療作為癌癥治療的主要手段之一，近年來(lái)進(jìn)展迅速。據(jù)Scrip最新報(bào)道，美國(guó)正在加緊抗腫瘤新藥的開(kāi)發(fā)，目前正在研究開(kāi)發(fā)的有315個(gè)，其中皮膚癌60個(gè)，乳腺癌58個(gè)，結(jié)腸癌35個(gè)，淋巴癌33個(gè)，實(shí)體瘤33個(gè)，與腫瘤有關(guān)的疾病32個(gè)，卵巢癌24個(gè)，頭頸癌18個(gè)，肺癌16個(gè)，腎癌13個(gè)，胃癌10個(gè)，膀胱癌9個(gè)，多發(fā)性骨髓瘤8個(gè)，肉瘤8個(gè)，肝癌7個(gè)，宮頸癌7個(gè)，成神經(jīng)細(xì)胞瘤5個(gè)和其他癌40個(gè)。其中，(反式)-2-脫氧-2-(氟亞甲基)-胞苷作為一種核糖核苷酸二磷酸還原酶抑制劑，具有潛在的抗腫瘤作用，目前在美國(guó)已經(jīng)進(jìn)入了臨床III期試驗(yàn)。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是為提高和改善(反式)-2-脫氧-2-(氟亞甲基)-胞苷化合物的效用和價(jià)值，從改善其脂溶性出發(fā)，設(shè)計(jì)合成了(反式)-2-脫氧-2-(氟亞甲基)-4-R酰胞苷化合物。
本發(fā)明是在(反式)-2-脫氧-2-(氟亞甲基)-胞苷化合物的基礎(chǔ)上增加R?；鶄?cè)鏈后所形成的新化合物，使其能夠更加迅速地通過(guò)生物膜進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)，它不僅具有良好的水溶性，而且還具有良好的脂溶性。
本發(fā)明提出的(反式)-2-脫氧-2-(氟亞甲基)-4-R酰胞苷化合物(FMdc)的化學(xué)結(jié)構(gòu)分子式是； R＝(CH2)nCH3n＝0-21該化合物的制備方法化學(xué)反應(yīng)式
其中a:TIPDS-pyridine；(四異丙基二硅氧烷-吡啶)b:(Me)2NCH(OMe)2；(N，N-二甲基甲瞇二甲縮醛)c:Swernn oxidation；(斯沃納氧化反應(yīng))d:PhSO2CH2F/(EtO)2P(O)Cl/LiHMDS；(苯氟甲基砜/二乙氧基磷酰氯)eNH3/CH3OH；(氨/甲醇)；f:BU3SnH/AlBN；(氫化三丁基錫/偶氮二異丁氰)；gCsF/MeOH；(氟化銫/甲醇)；合成路線①、N-[(二甲氨基)甲稀]-3’-5’-O-[1，1，3，3-四(1-甲基乙基)-1，3-二硅氧烷二]-胞嘧啶核)苷(2)的合成。
在由胞苷203.8g，0.84mol和吡啶1.6L組成的漿狀液中，在N2保護(hù)下緩緩加入1，3-二氯-1，1，3，3-四異丙基二硅氧烷(TIPDS-Cl2)268ml，0.84mol，0.5小時(shí)后變成溶液，溫度上升到34℃，4小時(shí)后開(kāi)始形成固體，18小時(shí)后，將N，N-二甲基甲瞇二甲縮醛加入，374ml，2.82mol，約0.3小時(shí)左右加畢，溫度升至37℃，溶液呈黃色，4小時(shí)后，減壓除去溶劑，剩余物用乙酸乙脂1L，500ml，50ml加熱提取三次，合并提取液，用無(wú)水硫酸鎂(MgSO4)干燥，過(guò)濾，加入己烷6L，混合液于水蒸汽浴上加熱，再加乙酸乙脂500ml以溶解剩余之固體，然后乘熱過(guò)濾，冷卻后，析出白色結(jié)晶得到276.3gN-[(二甲氨基)甲稀]-3’-5’-O-[1，1，3，3-四(1-甲基乙基)-1，3-二硅氧烷二]-胞嘧啶核)苷(2)，濾液濃縮，加入500ml乙酸乙酯/1.5L己烷重結(jié)晶，又得(2)83.0g，濾液再濃縮，重結(jié)晶，又得(2)22.6g，總計(jì)可得到(2)381.9g，85％，m.p137-138℃。
②、N[(二甲氨基)甲稀]-2-’氧合-3-5-O[1，1，3，3-四(1-甲基乙基)-1，3-二硅氧烷二]-胞苷(3)的合成。
在氮?dú)獗Ｗo(hù)下，在一個(gè)裝有攪拌器，溫度計(jì)和滴液漏斗的2L的三口瓶?jī)?nèi)放入草酰氯13.1ml，0.15mol及干燥的二氯甲烷(CH2CL2)750ml，將溶液冷至-75℃，將21.3ml 0.3mol二甲基亞砜滴入，并控制反應(yīng)溫度-55℃以下，繼續(xù)攪拌5分鐘，再將純(2)54g，0.1mol于CH2CL2750ml的溶液加入，約10分鐘，加畢，繼續(xù)攪拌30分鐘，于-75℃，將(Et3N)75.5ml.0.54mol加入，除去冰浴，讓反應(yīng)溫?zé)嶂潦覝兀?小時(shí)后在室溫下，混合物用等體積乙醚稀釋?zhuān)^續(xù)攪拌1小時(shí)，將混合物倒入裝有硅膠500ml的玻璃漏斗內(nèi)先用乙醚(Et2O)1L，再用二氯甲烷(CH2Cl2)洗脫，乙醚洗下部分濃縮后用10％氯仿/己烷300ml處理，濾集固體，干燥，得到白色粉狀物36.1gN[(二甲氨基)甲稀]-2-’氧合-3-5-O[1，1，3，3-四(1-甲基乙基)-1，3-二硅氧烷二]-胞苷(3)，二氯甲烷(CH2Cl2)洗脫部分濃縮后用10％氯仿/己烷300ml重結(jié)晶，另又得到(3)12.5g，總共可得到(3)48.6g(90％)，mp 169.5-171℃。
③、2’-脫氧-[氟(苯磺?；?甲烯]-3’-5’-O-1，1，3，3-四(1-甲基乙基)1，3-二硅氧烷＝]-(2’-z)胞苷(4)的合成。
將氟甲基苯砜19.4g，0.11mol放入干燥的四氫呋喃800ml，氮?dú)獗Ｗo(hù)，冷卻至-70℃，用注射器將16ml，0.11mol，的二乙基磷酰氯加到上溶液中，稱(chēng)取1mol的六甲基二硅氮鋰放入200ml四氫呋喃，用滴液漏斗緩緩滴加到上反應(yīng)瓶?jī)?nèi)，加畢，溫度升至-65℃，1小時(shí)，用少量飽和氯化銨/乙酸乙脂，終止反應(yīng)，薄層板檢測(cè)，用(3)的溶液40g，0.074mol溶于200ml四氫呋喃于-60℃滴加到上反應(yīng)液中，將反應(yīng)液升溫至0℃，0.5小時(shí)，然后再升至室溫25小時(shí)，用飽和氯化銨100ml終止反應(yīng)，用600ml乙醚稀釋?zhuān)偌舆m量水去溶解無(wú)機(jī)鹽，將反應(yīng)液倒入分液漏斗內(nèi)，水層用200ml乙醚提取，醚層再用冰鹽水洗，有機(jī)層用無(wú)水硫酸鎂干燥，濃縮，得到71.8g，黑色粘狀油狀物，將此粗品溶解在甲醇中，用氨氣飽和，攪拌過(guò)夜，濃縮，剩余物用柱層析分離，1.4L硅膠5％正己烷——乙酸乙脂，收集每200ml1瓶，含純產(chǎn)品濃縮，干燥，得20g 2’-脫氧-[氟(苯磺?；?甲烯]-3’-5’-O-1，1，3，3-四(1-甲基乙基)1，3-二硅氧烷＝]-(2’-z)胞苷(4)純品，不純部分16g可用高效液相乙酸乙脂溶劑純化得到純品11.4g，共計(jì)為31.4g，以上產(chǎn)品用正己烷重結(jié)晶，可得到白色粉末狀固體，熔點(diǎn)135-145℃。
④、2’-脫氧-2’-[氟(三丁基甲錫烷基)甲烯]-3’-5’-O-[1，1，3，3-四(1-甲基乙基)-1，3-二硅氧烷二]-(2’z)-胞苷(5)的合成。
將樣品(4)26g，0.0406mol放入500ml圓底燒瓶?jī)?nèi)，加300ml環(huán)己烷，未放冷凝管回流15分鐘，冷至室溫，加32.6g0.122mol的氫化三丁基錫(BU3SnH)和500mg的偶氮二異丁氰(AIBN)回流18小時(shí)，薄層層析檢測(cè)，15％甲醇/乙酸乙脂，已沒(méi)有起始原料，濃縮反應(yīng)液，用14L硅膠柱層析分離，洗脫劑比例為4％甲醇/二氯甲烷4L，然后用6％甲醇/二氯甲烷，可得到265g(82.8％)2’-脫氧-2’-[氟(三丁基甲錫烷基)甲烯]-3’-5’-O-[1，1，3，3-四(1-甲基乙基)-1，3-二硅氧烷二]-(2’z)-胞苷(5)，其為黃色泡沫狀。
⑤、(2E)-4氨基-1-[2-(氟烯基)-赤型-戊呋喃]-胞苷(6)的合成。
將(5)26g，0.033mol和氟化銫25g，0.165mol溶解在甲醇300ml中，回流24小時(shí)，待冷卻后，溶液被部分濃縮，加75ml硅膠，此粘稠物進(jìn)一步濃縮至松散流動(dòng)的固體，用1L硅膠柱層析分離，純化，洗脫劑首先用1∶1乙酸乙脂∶己烷2L然后依次用10％甲醇/乙酸乙脂8L含產(chǎn)品部分濃縮得到9.3g的白色固體，用甲醇-乙酸乙脂20ml，重結(jié)晶得到4.16g的(2E)-4氨基-1-[2-(氟烯基)-赤型-戊呋喃]-胞苷(6)，其為白色晶體，另從母液中可得到1.66g，總計(jì)為5.82g，熔點(diǎn)167-169℃。
⑥、(反式)-2-脫氧-2-甲基)-4-R酰胞苷(1)的合成。
在反應(yīng)瓶中，加入二氧六環(huán)30ml，酸酐2.47mmol，室溫加入(6)300mg，1.23mmol，和水的溶液，于80℃攪拌5小時(shí)，反應(yīng)畢，于60℃減壓濃縮至干，剩余物可用苯洗滌除去生成的酸，得粗品(反式)-2-脫氧-2-甲基)-4-R酰胞苷，用二甲基亞砜重結(jié)晶，最終得到(1)。
該化合物的用途生物體內(nèi)的細(xì)胞是由蛋白質(zhì)所組成，蛋白質(zhì)是生命活動(dòng)的基礎(chǔ)。執(zhí)行生命功能、表現(xiàn)生命特征的主要物質(zhì)是蛋白質(zhì)分子。而有著特定排列順序的氨基酸是構(gòu)成蛋白質(zhì)分子的基本單位。細(xì)胞不停地利用氨基酸合成蛋白質(zhì)和分解蛋白質(zhì)成為氨基酸。
核酸是由核苷酸聚合而成的高分子化合物，是所有生物遺傳信息的攜帶者。核苷酸是組成核酸的基本單位，其由磷酸基、戊糖和含氮堿基組成。根據(jù)核苷酸分子中戊糖的類(lèi)型，核酸被分為脫氧核糖核酸(DNA)和核糖核酸(RNA)兩大類(lèi)。組成DNA的核苷酸是脫氧核糖核苷酸，組成RNA的是核糖核苷酸。
脫氧核糖核酸(DNA)是生物界遺傳的主要物質(zhì)基礎(chǔ)。生物有機(jī)體的遺傳特征以密碼(code)的形式編碼在DNA分子上，表現(xiàn)為特定的核苷酸排列順序----即遺傳信息，在細(xì)胞分裂前通過(guò)DNA的復(fù)制，將遺傳信息由親代傳遞給子代，在后代的個(gè)體發(fā)育過(guò)程中，遺傳信息自DNA轉(zhuǎn)錄給RNA，并指導(dǎo)蛋白質(zhì)合成，以執(zhí)行各種生命功能，使后代表現(xiàn)出與親代相似的遺傳性狀，這種遺傳信息的傳遞方向，是從DNA到RNA再到蛋白質(zhì)，即所謂的生物學(xué)“中心法則”。
被稱(chēng)為生物催化劑的酶，就是在活細(xì)胞內(nèi)產(chǎn)生的具有高度專(zhuān)-性和催化效率的蛋白質(zhì)。生物體的新陳代謝幾乎都是在酶的催化下進(jìn)行化學(xué)反應(yīng)的。催化脫氧核糖核苷酸生成的酶被稱(chēng)為核糖核苷酸還原酶(RNR)。
研究表明，腫瘤細(xì)胞的快速繁殖主要表現(xiàn)在脫氧核糖核酸(DNA)的復(fù)制，然而脫氧核糖核酸(DNA)的復(fù)制則是受核糖核苷酸還原酶(RNR)所控制。正是由于RNR催化所產(chǎn)生的脫氧核塘核苷酸，為合成DNA提供了足夠的原材料。
(反式)-2-脫氧-2-(氟亞甲基)-4-R酰胞苷化合物是一種不可逆的核糖核苷酸二磷酸還原酶抑制劑，它主要參與細(xì)胞內(nèi)的磷酸化過(guò)程，從而干擾了DNA的合成，使腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)得到抑制。動(dòng)物試驗(yàn)結(jié)果表明，該化合物能有效地抑制和殺傷荷瘤動(dòng)物的腫瘤細(xì)胞，并且不伴有明顯的毒副作用，因此有可能改變傳統(tǒng)的化療藥物對(duì)所有快速分裂的細(xì)胞進(jìn)行全面打擊的作用方式，即能夠針對(duì)腫瘤細(xì)胞的基因突變或基因表達(dá)異常來(lái)發(fā)揮其有效作用，而對(duì)正常細(xì)胞的影響較小，該化合物適應(yīng)于肺癌，直腸癌，乳腺癌，前列腺癌，胃癌，胰腺癌，卵巢癌，腦瘤等的治療，由于增強(qiáng)了對(duì)細(xì)胞膜的滲透，明顯提高和改善了藥物的療效，尤其是對(duì)耐藥的腫瘤具有較好的治療效果，對(duì)裸鼠移植人結(jié)腸癌HCT-8和人肺癌A549均顯示出顯著的生長(zhǎng)抑制作用，使用途徑是靜脈點(diǎn)滴或口服。
具體實(shí)施例方式
實(shí)施例1(反式)-2-脫氧-2-甲基)-4丁酰胞苷的合成①、N-[(二甲氨基)甲稀]-3’-5’-O-[1，1，3，3-四(1-甲基乙基)-1，3-二硅氧烷二]-胞嘧啶核)苷(2)的合成。
在由胞苷203.8g，0.84mol和吡啶1.6L組成的漿狀液中，在N2保護(hù)下緩緩加入1，3-二氯-1，1，3，3-四異丙基二硅氧烷(TIPDS-Cl2)268ml，0.84mol，0.5小時(shí)后變成溶液，溫度上升到34℃，4小時(shí)后開(kāi)始形成固體，18小時(shí)后，將N，N-二甲基甲瞇二甲縮醛加入，374ml，2.82mol，約0.3小時(shí)左右加畢，溫度升至37℃，溶液呈黃色，4小時(shí)后，減壓除去溶劑，剩余物用乙酸乙脂1L，500ml，50ml加熱提取三次，合并提取液，用無(wú)水硫酸鎂(MgSO4)干燥，過(guò)濾，加入己烷6L，混合液于水蒸汽浴上加熱，再加乙酸乙脂500ml以溶解剩余之固體，然后乘熱過(guò)濾，冷卻后，析出白色結(jié)晶得到276.3gN-[(二甲氨基)甲稀]-3’-5’-O-[1，1，3，3-四(1-甲基乙基)-1，3-二硅氧烷二]-胞嘧啶核)苷(2)，濾液濃縮，加入500ml乙酸乙酯/1.5L己烷重結(jié)晶，又得(2)83.0g，濾液再濃縮，重結(jié)晶，又得(2)22.6g，總計(jì)可得到(2)381.9g，85％，m.p137-138℃。
②、N[(二甲氨基)甲稀]-2-’氧合-3-5-O[1，1，3，3-四(1-甲基乙基)-1，3-二硅氧烷二]-胞苷(3)的合成。
在氮?dú)獗Ｗo(hù)下，在一個(gè)裝有攪拌器，溫度計(jì)和滴液漏斗的2L的三口瓶?jī)?nèi)放入草酰氯13.1ml，0.15mol及干燥的二氯甲烷(CH2CL2)750ml，將溶液冷至-75℃，將21.3ml 0.3mol二甲基亞砜滴入，并控制反應(yīng)溫度-55℃以下，繼續(xù)攪拌5分鐘，再將純(2)54g，0.1mol于CH2CL2750ml的溶液加入，約10分鐘，加畢，繼續(xù)攪拌30分鐘，于-75℃，將(Et3N)75.5ml.0.54mol加入，除去冰浴，讓反應(yīng)溫?zé)嶂潦覝兀?小時(shí)后在室溫下，混合物用等體積乙醚稀釋?zhuān)^續(xù)攪拌1小時(shí)，將混合物倒入裝有硅膠500ml的玻璃漏斗內(nèi)先用乙醚(Et2O)1L，再用二氯甲烷(CH2Cl2)洗脫，乙醚洗下部分濃縮后用10％氯仿/己烷300ml處理，濾集固體，干燥，得到白色粉狀物36.1gN[(二甲氨基)甲稀]-2-’氧合-3-5-O[1，1，3，3-四(1-甲基乙基)-1，3-二硅氧烷二]-胞苷(3)，二氯甲烷(CH2Cl2)洗脫部分濃縮后用10％氯仿/己烷300ml重結(jié)晶，另又得到(3)12.5g，總共可得到(3)48.6g(90％)，mp 169.5-171℃。
③、2’-脫氧-[氟(苯磺?；?甲烯]-3’-5’-O-1，1，3，3-四(1-甲基乙基)1，3-二硅氧烷＝]-(2’-z)胞苷(4)的合成。
將氟甲基苯砜19.4g，0.11mol放入干燥的四氫呋喃800ml，氮?dú)獗Ｗo(hù)，冷卻至-70℃，用注射器將16ml，0.11mol，的二乙基磷酰氯加到上溶液中，稱(chēng)取1mol的六甲基二硅氮鋰放入200ml四氫呋喃，用滴液漏斗緩緩滴加到上反應(yīng)瓶?jī)?nèi)，加畢，溫度升至-65℃，1小時(shí)，用少量飽和氯化銨/乙酸乙脂，終止反應(yīng)，薄層板檢測(cè)，用(3)的溶液40g，0.074mol溶于200ml四氫呋喃于-60℃滴加到上反應(yīng)液中，將反應(yīng)液升溫至0℃，0.5小時(shí)，然后再升至室溫25小時(shí)，用飽和氯化銨100ml終止反應(yīng)，用600ml乙醚稀釋?zhuān)偌舆m量水去溶解無(wú)機(jī)鹽，將反應(yīng)液倒入分液漏斗內(nèi)，水層用200ml乙醚提取，醚層再用冰鹽水洗，有機(jī)層用無(wú)水硫酸鎂干燥，濃縮，得到71.8g，黑色粘狀油狀物，將此粗品溶解在甲醇中，用氨氣飽和，攪拌過(guò)夜，濃縮，剩余物用柱層析分離，1.4L硅膠5％正己烷——乙酸乙脂，收集每200ml1瓶，含純產(chǎn)品濃縮，干燥，得20g 2’-脫氧-[氟(苯磺?；?甲烯]-3’-5’-O-1，1，3，3-四(1-甲基乙基)1，3-二硅氧烷＝]-(2’-z)胞苷(4)純品，不純部分16g可用高效液相乙酸乙脂溶劑純化得到純品11.4g，共計(jì)為31.4g，以上產(chǎn)品用正己烷重結(jié)晶，可得到白色粉末狀固體，熔點(diǎn)135-145℃。
④、2’-脫氧-2’-[氟(三丁基甲錫烷基)甲烯]-3’-5’-O-[1，1，3，3-四(1-甲基乙基)-1，3-二硅氧烷二]-(2’z)-胞苷(5)的合成。
將樣品(4)26g，0.0406mol放入500ml圓底燒瓶?jī)?nèi)，加300ml環(huán)己烷，未放冷凝管回流15分鐘，冷至室溫，加32.6g0.122mol的氫化三丁基錫(BU3SnH)和500mg的偶氮二異丁氰(AIBN)回流18小時(shí)，薄層層析檢測(cè)，15％甲醇/乙酸乙脂，已沒(méi)有起始原料，濃縮反應(yīng)液，用14L硅膠柱層析分離，洗脫劑比例為4％甲醇/二氯甲烷4L，然后用6％甲醇/二氯甲烷，可得到265g(82.8％)2’-脫氧-2’-[氟(三丁基甲錫烷基)甲烯]-3’-5’-O-[1，1，3，3-四(1-甲基乙基)-1，3-二硅氧烷二]-(2’z)-胞苷(5)，其為黃色泡沫狀。
⑤、(2E)-4氨基-1-[2-(氟烯基)-赤型-戊呋喃]-胞苷(6)的合成。
將(5)26g，0.033mol和氟化銫25g，0.165mol溶解在甲醇300ml中，回流24小時(shí)，待冷卻后，溶液被部分濃縮，加75ml硅膠，此粘稠物進(jìn)一步濃縮至松散流動(dòng)的固體，用1L硅膠柱層析分離，純化，洗脫劑首先用1∶1乙酸乙脂∶己烷2L然后依次用10％甲醇/乙酸乙脂8L含產(chǎn)品部分濃縮得到9.3g的白色固體，用甲醇-乙酸乙脂20ml，重結(jié)晶得到4.16g的(2E)-4氨基-1-[2-(氟烯基)-赤型-戊呋喃]-胞苷(6)，其為白色晶體，另從母液中可得到1.66g，總計(jì)為5.82g，熔點(diǎn)167-169℃。
⑥、(反式)-2-脫氧-2-甲基)-4-丁酰胞苷(1)的合成。在反應(yīng)瓶中，加入二氧六環(huán)30ml，丁酸酐391mg，2.47mmol，在室溫下加入(6)300mg，1.23mmol和水的溶液。于80℃攪拌5小時(shí)。反應(yīng)畢，于60℃減壓濃縮至干，剩余物用苯洗滌，除去生成的丁酸，得粗品(反式)2-脫氧-2-甲基)-4-丁酰胞苷，然后用二甲基亞砜重結(jié)晶，可得(反式)-2-脫氧-2-甲基)-4丁酰胞苷305mg。
實(shí)施例2(反式)-2-脫氧-2-甲基)-4乙酰胞苷的合成同實(shí)施例1，首先需制備得到(2E)-4氨基-1-[2-(氟烯基)-赤型-戊呋喃]-胞苷(6)，然后在反應(yīng)瓶中，加入二氧六環(huán)30ml，醋酐255mg(2.47mmol)，室溫加入(6)300mg(1.23mmol)和水的溶液。于80℃攪拌5小時(shí)。反應(yīng)畢，于60℃減壓濃縮至干，剩余物用苯洗滌(可除去生成的乙酸)，得粗品((反式)-2-脫氧-2-甲基)-4-乙酰胞苷，然后用二甲基亞砜重結(jié)晶，可得(反式)-2-脫氧-2-甲基)-4乙酰胞苷285mg。
實(shí)施例3(反式)-2-脫氧-2-甲基)-4丙酰胞苷的合成同實(shí)施例1，首先應(yīng)制備得到(2E)-4氨基-1-[2-(氟烯基)-赤型-戊呋喃]-胞苷(6)，然后在反應(yīng)瓶中，加入二氧六環(huán)30ml，丙酐321mg，2.47mmol，室溫加入(6)300mg，1.23mmol和水的溶液，于80℃攪拌5小時(shí)。反應(yīng)畢，于60℃減壓濃縮至干，剩余物可用苯洗滌，除去丙酸，得粗品(反式)-2-脫氧-2-甲基)-4-丙酰胞苷，然后用二甲基亞砜重結(jié)晶，可得(反式)-2-脫氧-2-甲基)-4丙酰胞苷290mg。
實(shí)施例4用實(shí)施例1所制備的(反式)-2-脫氧-2-甲基)-4-丁酰胞苷，對(duì)不同組織來(lái)源的腫瘤細(xì)胞系的增殖抑制作用(見(jiàn)表1)。
實(shí)施例5用實(shí)施例1所制備的(反式)-2-脫氧-2-甲基)-4-丁酰胞苷，對(duì)小鼠種植性乳腺癌EMT-6的抑制作用(見(jiàn)表2)。
實(shí)施例6用實(shí)施例1所制備的(反式)-2-脫氧-2-甲基)-4-丁酰胞苷，對(duì)小鼠種植性Lewis肺癌的抑制作用(見(jiàn)表3)。
實(shí)施例7用實(shí)施例1所制備的(反式)-2-脫氧-2-甲基)-4-丁酰胞苷，對(duì)裸鼠移植人結(jié)腸癌HCT-8的生長(zhǎng)抑制(見(jiàn)表4)。




權(quán)利要求
1.一種(反式)-2-脫氧-2-(氟亞甲基)-4-R酰胞苷化合物及其制備方法，其特征在于該化合物采用以下的合成路線①、N-[(二甲氨基)甲稀]-3’-5’-0-[1，1，3，3-四(1-甲基乙基)-1，3-二硅氧烷二]-胞嘧啶核)苷(2)的合成在由胞苷203.8g，0.84mol和吡啶1.6L組成的漿狀液中，在N2保護(hù)下緩緩加入1，3-二氯-1，1，3，3-四異丙基二硅氧烷(TIPDS-Cl2)268ml，0.84mol，0.5小時(shí)后變成溶液，溫度上升到34℃，4小時(shí)后開(kāi)始形成固體，18小時(shí)后，將N，N-二甲基甲瞇二甲縮醛加入，374ml，2.82mol，約0.3小時(shí)左右加畢，溫度升至37℃，溶液呈黃色，4小時(shí)后，減壓除去溶劑，剩余物用乙酸乙脂1L，500ml，50ml加熱提取三次，合并提取液，用無(wú)水硫酸鎂(MgSO4)干燥，過(guò)濾，加入己烷6L，混合液于水蒸汽浴上加熱，再加乙酸乙脂500ml以溶解剩余之固體，然后乘熱過(guò)濾，冷卻后，析出白色結(jié)晶得到276.3gN-[(二甲氨基)甲稀]-3’-5’-0-[1，1，3，3-四(1-甲基乙基)-1，3-二硅氧烷二]-胞嘧啶核)苷(2)，濾液濃縮，加入500ml乙酸乙酯/1.5L己烷重結(jié)晶，又得(2)83.0g，濾液再濃縮，重結(jié)晶，又得(2)22.6g，總計(jì)得到381.9g，85％，m.p137-138℃；②、N[(二甲氨基)甲稀]-2-’氧合-3-5-0[1，1，3，3-四(1-甲基乙基)-1，3-二硅氧烷二]-胞苷(3)的合成在氮?dú)獗Ｗo(hù)下，在-個(gè)裝有攪拌器，溫度計(jì)和滴液漏斗的2L的三口瓶?jī)?nèi)放入草酰氯13.1ml，0.15mol及干燥的二氯甲烷(CH2CL2)750ml，將溶液冷至-75℃，將21.3ml 0.3mol二甲基亞砜滴入，并控制反應(yīng)溫度-55℃以下，繼續(xù)攪拌5分鐘，再將純(2)54g，0.1mol于CH2CL2750ml的溶液加入，約10分鐘，加畢，繼續(xù)攪拌30分鐘，于-75℃，將(Et3N)75.5ml.0.54mol加入，除去冰浴，讓反應(yīng)溫?zé)嶂潦覝兀?小時(shí)后在室溫下，混合物用等體積乙醚稀釋?zhuān)^續(xù)攪拌1小時(shí)，將混合物倒入裝有硅膠500ml的玻璃漏斗內(nèi)先用乙醚(Et2O)1L，再用二氯甲烷(CH2Cl2)洗脫，乙醚洗下部分濃縮后用10％氯仿/己烷300ml處理，濾集固體，干燥，得到白色粉狀物36.1gN[(二甲氨基)甲稀]-2-’氧合-3-5-0[1，1，3，3-四(1-甲基乙基)-1，3-二硅氧烷二]-胞苷(3)，二氯甲烷(CH2Cl2)洗脫部分濃縮后用10％氯仿/己烷300ml重結(jié)晶，另又得到(3)12.5g，總共可得到(3)48.6g(90％)，mp169.5-171℃；③、2’-脫氧-[氟(苯磺酰基)甲烯]-3’-5’-0-1，1，3，3-四(1-甲基乙基)1，3-二硅氧烷＝]-(2’-z)胞苷(4)的合成將氟甲基苯砜19.4g，0.11mol放入干燥的四氫呋喃800ml，氮?dú)獗Ｗo(hù)，冷卻至-70℃，用注射器將16ml，0.11mol，的二乙基磷酰氯加到上溶液中，稱(chēng)取1mol的六甲基二硅氮鋰放入200ml四氫呋喃，用滴液漏斗緩緩滴加到上反應(yīng)瓶?jī)?nèi)，加畢，溫度升至-65℃，1小時(shí)，用少量飽和氯化銨/乙酸乙脂，終止反應(yīng)，薄層板檢測(cè)，用(3)的溶液40g，0.074mol溶于200ml四氫呋喃于-60℃滴加到上反應(yīng)液中，將反應(yīng)液升溫至0℃，0.5小時(shí)，然后再升至室溫25小時(shí)，用飽和氯化銨100ml終止反應(yīng)，用600ml乙醚稀釋?zhuān)偌舆m量水去溶解無(wú)機(jī)鹽，將反應(yīng)液倒入分液漏斗內(nèi)，水層用200ml乙醚提取，醚層再用冰鹽水洗，有機(jī)層用無(wú)水硫酸鎂干燥，濃縮，得到71.8g，黑色粘狀油狀物，將此粗品溶解在甲醇中，用氨氣飽和，攪拌過(guò)夜，濃縮，剩余物用柱層析分離，1.4L硅膠5％正己烷——乙酸乙脂，收集每200ml1瓶，含純產(chǎn)品濃縮，干燥，得20g 2’-脫氧-[氟(苯磺?；?甲烯]-3’-5’-0-1，1，3，3-四(1-甲基乙基)1，3-二硅氧烷＝]-(2’-z)胞苷(4)純品，不純部分16g用高效液相乙酸乙脂溶劑純化得到純品11.4g，共計(jì)31.4g，以上產(chǎn)品用正己烷重結(jié)晶得到白色粉末狀固體，熔點(diǎn)135-145℃；④、2’-脫氧-2’-[氟(三丁基甲錫烷基)甲烯]-3’-5’-0-[1，1，3，3-四(1-甲基乙基)-1，3-二硅氧烷二]-(2’z)-胞苷(5)的合成將樣品(4)26g，0.0406mol放入500ml圓底燒瓶?jī)?nèi)，加300ml環(huán)己烷，回流15分鐘，冷至室溫，加32.6g0.122mol的氫化三丁基錫(BU3SnH)和500mg的偶氮二異丁氰(AIBN)回流18小時(shí)，薄層層析檢測(cè)，15％甲醇/乙酸乙脂，已沒(méi)有起始原料，濃縮反應(yīng)液，用14L硅膠柱層析分離，洗脫劑比例為4％甲醇/二氯甲烷4L，然后用6％甲醇/二氯甲烷，得到265g(82.8％)2’-脫氧-2’-[氟(三丁基甲錫烷基)甲烯]-3’-5’-0-[1，1，3，3-四(1-甲基乙基)-1，3-二硅氧烷二]-(2’z)-胞苷(5)，為黃色泡沫狀；⑤、(2E)-4氨基-1-[2-(氟烯基)-赤型-戊呋喃]-胞苷(6)的合成將(5)26g，0.033mol和氟化銫25g，0.165mol溶解在甲醇300ml中，回流24小時(shí)，待冷卻后，溶液被部分濃縮，加75ml硅膠，此粘稠物進(jìn)一步濃縮至松散流動(dòng)的固體，用1L硅膠柱層析分離，純化，洗脫劑首先用1∶1乙酸乙脂∶己烷2L然后依次用10％甲醇/乙酸乙脂8L含產(chǎn)品部分濃縮得到9.3g的白色固體，用甲醇-乙酸乙脂20ml，重結(jié)晶得到4.16g的(2E)-4氨基-1-[2-(氟烯基)-赤型-戊呋喃]-胞苷(6)白色晶體，另從母液中得到1.66g，總計(jì)為5.82g，熔點(diǎn)167-169℃；⑥、(反式)-2-脫氧-2-甲基)-4-R酰胞苷(1)的合成在反應(yīng)瓶中，加入二氧六環(huán)30ml，酸酐2.47mmol，室溫加入(6)300mg，1.23mmol，和水的溶液，于80℃攪拌5小時(shí)，反應(yīng)畢，于60℃減壓濃縮至干，剩余物可用苯洗滌除去生成的丁酸，得到粗品(反式)-2-脫氧-2-甲基)-4-R酰胞苷，然后用二甲基亞砜重結(jié)晶，最終得到(反式)-2-脫氧-2-(氟亞甲基)-4-R酰胞苷化合物。
2.一種(反式)-2-脫氧-2-(氟亞甲基)-4-R酰胞苷化合物，其特征在于它是由權(quán)利要求1所述方法制備的，其化學(xué)結(jié)構(gòu)分子式是 R＝(CH2)nCH3n＝0-21
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的(反式)-2-脫氧-2-(氟亞甲基)-4-R酰胞苷化合物的用途，其特征在于它用于抑制和殺傷荷瘤動(dòng)物的腫瘤細(xì)胞。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種(反式)－2－脫氧－2－(氟亞甲基)－4－R酰胞苷化合物及其制備方法和用途，其特點(diǎn)是在(反式)－2－脫氧－2－(氟亞甲基)－胞苷的化學(xué)結(jié)構(gòu)上增加了R?；鶄?cè)鏈，它能夠有效地提高化合物的脂溶性，幫助更易、更快地進(jìn)入生物細(xì)胞內(nèi)，有效的抑制和殺傷荷瘤動(dòng)物的腫瘤細(xì)胞，并且不伴有明顯的毒副作用。因此，有可能改變傳統(tǒng)的化療藥物對(duì)所有快速分裂的細(xì)胞進(jìn)行全面打擊的作用方式，即能夠主要針對(duì)腫瘤細(xì)胞的基因突變或基因表達(dá)異常發(fā)揮作用，而對(duì)正常細(xì)胞沒(méi)有影響，它適應(yīng)于肺癌，直腸癌，乳腺癌，前列腺癌，胃癌，胰腺癌，卵巢癌，腦瘤等的治療，尤其是對(duì)耐藥的腫瘤具有較好的治療效果。
文檔編號(hào)A61P35/00GK1629177SQ20041000971
公開(kāi)日2005年6月22日 申請(qǐng)日期2004年10月27日 優(yōu)先權(quán)日2004年10月27日
發(fā)明者孫薇, 陳肖華, 高月, 李魯, 熊曉鏗 申請(qǐng)人:北京東華康明生物科技有限公司