專利名稱：喜樹堿類抗腫瘤藥物的脂肪乳劑及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及藥物制劑領(lǐng)域，具體涉及喜樹堿類抗腫瘤藥物的脂肪乳劑及其制備方法背景技術(shù)喜樹堿(Campotothecin，CPT)是美國化學(xué)家Wall ME和Wani MC在1966年首先從中國珙桐科植物喜樹(Campotheca acuminata)中提取出來的一種生物堿。試驗(yàn)表明它對許多實(shí)體瘤有抗癌活性。然而喜樹堿水溶性極差，因此早期臨床用喜樹堿的水溶性鈉鹽，而要制備喜樹堿的鈉鹽必須使喜樹堿開環(huán)，遺憾的是喜樹堿開環(huán)形式產(chǎn)生嚴(yán)重的毒副作用且抗癌活性差，導(dǎo)致II期臨床中斷。腫瘤學(xué)家對喜樹堿的再一次興趣是源于它的作用機(jī)制，20世紀(jì)80年代后期的研究發(fā)現(xiàn)，喜樹堿的抗腫瘤活性是通過作用于拓樸異構(gòu)酶I抑制DNA的復(fù)制和轉(zhuǎn)錄，從而使喜樹堿的研究進(jìn)入了一個(gè)全新的階段。
近年來，相對于一些水溶性喜樹堿衍生物如伊立替康、拓?fù)涮婵档认群笊鲜?，對難溶的喜樹堿及其衍生物如10-羥基喜樹堿(10-Hydroxycampotothecin，HCPT)的研究卻是鮮有進(jìn)展。雖然10-羥基喜樹堿已在中國上市，但是制劑也是其水溶性鈉鹽，抗腫瘤活性較低且毒性較大。研究發(fā)現(xiàn)，喜樹堿E環(huán)上的α-羥基內(nèi)酯環(huán)是其抗腫瘤活性的關(guān)鍵部位，開環(huán)后(鈉鹽)的抗腫瘤活性僅為內(nèi)酯形式的1/10(天然抗腫瘤藥喜樹堿衍生物的研究進(jìn)展，藥學(xué)學(xué)報(bào)，2003，38(9)715-720)。因此，不制成鈉鹽而將難溶的喜樹堿及其衍生物制備注射制劑，對于喜樹堿的研究與開發(fā)具有十分重要的意義，不僅為廣大癌癥患者帶來了新的希望，而且具有十分廣闊的市場前景。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明公開了喜樹堿類抗腫瘤藥物的脂肪乳劑(亦稱乳劑)及其制備方法。本發(fā)明解決了喜樹堿類抗腫瘤藥物由于難溶于水而在制備其注射液時(shí)只能制備其鈉鹽致使活性降低的難題，將難溶性喜樹堿類抗腫瘤藥物制備成脂肪乳劑，以內(nèi)酯形式將喜樹堿及其衍生物制備成靜脈注射制劑，可提高這些藥物的抗腫瘤活性；另外，乳劑是微粒藥物傳遞系統(tǒng)，作為藥物載體具有明顯的淋巴系統(tǒng)和單核吞噬細(xì)胞系統(tǒng)(mononuclear phagocyte system，MPS)靶向性，即乳劑中的藥物隨著乳滴被轉(zhuǎn)運(yùn)到淋巴系統(tǒng)或被網(wǎng)狀內(nèi)皮細(xì)胞吞噬而在淋巴液及富含MPS的臟器組織濃集，利用這一特點(diǎn)，在靜脈注射用脂肪乳劑中加入抗癌藥物，注入體內(nèi)后可明顯增大抗癌藥物在肝、脾、肺及淋巴等部位的濃度，因而可提高療效，降低不良反應(yīng)；而且較高的淋巴藥物濃度可有效防止癌細(xì)胞從淋巴途徑轉(zhuǎn)移。
本發(fā)明的喜樹堿類抗腫瘤藥物的脂肪乳劑，由以下組分及重量組成喜樹堿類抗腫瘤藥物 0.001-1％注射用油0.5-50％表面活性劑 0.5-50％水相40-98％抗氧劑 0-0.01％以上各百分比均為重量/體積百分比。
優(yōu)選的組分及重量組成喜樹堿類抗腫瘤藥物 0.005-0.1％注射用油1-30％表面活性劑 1-10％水相70-95％維生素E或維生素C0-0.001％以上各百分比均為重量/體積百分比。
上述喜樹堿類抗腫瘤藥物的脂肪乳劑，其中喜樹堿類抗腫瘤藥物可以是喜樹堿、10-羥基喜樹堿、9-硝基喜樹堿、9-氨基喜樹堿或其它難溶性喜樹堿類抗腫瘤藥物。
上述喜樹堿類抗腫瘤藥物的脂肪乳劑，其中注射用油優(yōu)選注射用大豆油、注射用中鏈脂肪酸甘油酯或其混合物。中鏈脂肪酸甘油酯中脂肪酸優(yōu)選含有6到14個(gè)碳原子的中鏈脂肪酸。
上述喜樹堿類抗腫瘤藥物的脂肪乳劑，其中表面活性劑優(yōu)選磷脂、普朗尼克F-68、聚山梨酯80、聚氧乙烯蓖麻油、脫氧膽酸鈉中的一種或幾種。其中磷脂優(yōu)選豆磷脂或卵磷脂。
上述喜樹堿類抗腫瘤藥物的脂肪乳劑，其中水相為氯化鈉水溶液、乳酸鈉水溶液、甘油水溶液、甘露醇水溶液、山梨醇水溶液、右旋糖苷水溶液、HP-β-環(huán)糊精水溶液、淀粉衍生物水溶液、明膠水溶液、聚維酮水溶液。
本發(fā)明喜樹堿類抗腫瘤藥物的脂肪乳劑的制備方法稱取處方量藥物、乳化劑和油相，溶解得到油相；油相與水相渦旋或攪拌混合制得初乳；初乳經(jīng)高壓均質(zhì)制得乳劑。為了制備澄清油相可加熱溶解藥物，也可用有機(jī)溶劑溶解，然后減壓蒸發(fā)除去有機(jī)溶劑得澄清油相，所述有機(jī)溶劑優(yōu)選甲醇、乙醇、異丙醇、乙醚、氯仿、二氯甲烷或者它們的混合物。
本發(fā)明的喜樹堿類抗腫瘤藥物乳劑質(zhì)量穩(wěn)定，無需添加穩(wěn)定劑和助溶劑，這樣不僅有效降低了成本，而且也去除了另加穩(wěn)定劑和助溶劑所產(chǎn)生的毒性，療效更好。為減少磷脂及油脂的氧化，可添加抗氧劑，抗氧劑優(yōu)選維生素E和/或維生素C，用量為乳劑的0-0.01％(w/v)。本發(fā)明羥基喜樹堿脂肪乳劑可直接用于靜脈注射。
用本發(fā)明所制備的喜樹堿類抗腫瘤藥物乳劑與市售制劑(羥基喜樹堿水針)相比可顯著提高藥效，下面是部分藥理學(xué)試驗(yàn)數(shù)據(jù)。
1羥基喜樹堿乳劑與市售普通水針對S180癌細(xì)胞抑制作用的比較采用MTT法。對數(shù)生長期的S180細(xì)胞按每孔2×104接種于96孔板，5％CO2，37℃培養(yǎng)12小時(shí)后分為3組，分別加入羥基喜樹堿(HCPT)普通水針和微乳稀釋液(濃度分別為0.125，0.5，2，8，32，128μg/ml)各50μl，陰性對照組加等體積無血清1640培養(yǎng)基50μl，每一濃度設(shè)6個(gè)復(fù)孔，5％CO2，37℃培養(yǎng)36小時(shí)后，加MTT溶液(5mg/ml)20μl繼續(xù)培養(yǎng)，4小時(shí)后每孔加入酸化的SDS溶液(10％SDS-0.01MHCl)，將細(xì)胞與MTT的作用產(chǎn)物甲臢溶解，混勻后立即用酶聯(lián)免疫檢測儀于570nm處測定吸光度，計(jì)算細(xì)胞生長率。
細(xì)胞生長曲線見附圖1。計(jì)算HCPT乳劑與市售制劑的IC50分別為1.31和45.5μmol/L。由此可見，制備成乳劑后大大提高了其抑制癌細(xì)胞的能力。
2羥基喜樹堿乳劑與市售制劑對小鼠移植瘤Heps抑制作用的比較取昆明小鼠30只，按移植性腫瘤研究法接種Heps實(shí)體型(在無菌操作下取瘤塊，稱重，用玻璃組織勻漿器研磨，磨勻后放人無菌容器內(nèi)，加生理鹽水稀釋成1∶3的細(xì)胞懸液，容器置冰塊上，用空針抽吸，每次抽吸前將細(xì)胞混勻，每只小鼠右前肢液窩皮下接種0.2ml)，接種后24小時(shí)稱鼠重，并隨機(jī)分為3組，空白對照組與羥基喜樹堿水針組分別為陰、陽性對照組，羥基喜樹堿乳劑組。iv給藥，每2天一次，共給藥4次，停藥后第2天處死稱重，并分離瘤塊稱重，所得數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理(t檢驗(yàn))。
表1 羥基喜樹堿乳劑iv對小鼠移植瘤Heps的抑制作用(X±SD)(n＝10)劑量 體重(g)瘤重 抑瘤率組別(mg/kg)給藥前 給藥后 (g) (％)對照組 19.6±1.425.2±1.01.70±0.23HCPT水針3 19.4±1.225.4±1.21.02±0.23a40.1HCPT乳劑3 19.7±1.325.2±1.00.77±0.18a，b54.6aP＜0.01與生理鹽水對照組比較；bP＜0.05與羥基喜樹堿水針組比較試驗(yàn)結(jié)果見表1。結(jié)果表明，與生理鹽水對照組相比，羥基喜樹堿乳劑組及羥基喜樹堿水針組皆有顯著地抑制Heps的腫瘤生長作用(P＜0.01)，兩者對小鼠體重增長皆無明顯影響；與羥基喜樹堿水針組相比，羥基喜樹堿乳劑抑制Heps的腫瘤生長作用可顯著增加(P＜0.05)，增加了14.5％。


圖1是羥基喜樹堿乳劑與市售羥基喜樹堿水針制劑對S180癌細(xì)胞抑制作用的比較。其中▲表示空白乳劑，■表示市售制劑，●表示含藥乳劑。
具體實(shí)施例方式
實(shí)施例1按表2所列質(zhì)量百分比稱取HCPT、注射用大豆油和注射用豆磷脂，60℃加熱溶解得油相；稱取處方量甘油溶于水得水相。將水相加熱至60℃，水相倒入油相，高速攪拌制得初乳。初乳經(jīng)高壓均質(zhì)機(jī)(Microfluidics Corp.，Newton，MA，U.S.A.)乳勻得亞微乳，0.45μm濾膜過濾，罐裝于安瓿，2ml/安瓿。
表2成分 重量(g)HCPT 0.1注射用大豆油 10注射用豆磷脂 2甘油 2.25注射用水 85.65以馬爾文粒度測定儀測定乳劑粒徑，以高效液相熒光檢測法測定乳劑中藥物含量。所得乳劑4℃留樣檢測結(jié)果見表3。
表3 乳劑4℃留樣觀察結(jié)果時(shí)間(月)0 1 2 3 6粒徑223220230 232235含量100.4 100.5 99.8 100.0 99.5實(shí)施例2按表4所列重量百分比稱取HCPT、注射用大豆油和注射用豆磷脂，以無水乙醇溶解，60℃減壓蒸發(fā)除去無水乙醇得油相；稱取處方量普朗尼克F-68和山梨醇溶于水得水相。將水相加熱至60℃，水相倒入油相，高速攪拌制得初乳。初乳經(jīng)高壓均質(zhì)機(jī)乳勻得亞微乳，0.22m濾膜過濾，罐裝于安瓿，5ml/安瓿。
表4成分 重量(g)
HCPT 0.1注射用大豆油 5注射用豆磷脂 2普朗尼克F-68 1山梨醇5注射用水 86.9以馬爾文粒度測定儀測定乳劑粒徑，以高效液相熒光監(jiān)檢測法測定乳劑中藥物含量。所得乳劑4℃留樣檢測結(jié)果見表5。
表5 乳劑4℃留樣觀察結(jié)果時(shí)間(月)0 1 2 3 6粒徑89 9491 95 97含量100.3 99.7 99.999.399.5實(shí)施例3按表6所列重量百分比稱取HCPT、注射用大豆油、維生素E、注射用中鏈脂肪酸甘油酯、維生素E和注射用豆磷脂，60℃加熱溶解得油相；稱取處方量甘油溶于水得水相。將水相加熱至60℃，水相倒入油相，高速攪拌制得初乳。初乳經(jīng)高壓均質(zhì)機(jī)乳勻得亞微乳，0.45μm濾膜過濾，罐裝于100ml輸液瓶中。
表6成分 重量(g)HCPT 0.005注射用大豆油∶注射用中鏈脂肪酸甘油酯(1∶1) 10注射用豆磷脂 2維生素E0.005甘油 2.25注射用水 85.74以馬爾文粒度測定儀測定乳劑粒徑，以高效液相熒光檢測法測定乳劑中藥物含量。所得乳劑4℃留樣檢測結(jié)果見表7。
表7 乳劑4℃留樣觀察結(jié)果時(shí)間(月)01236
粒徑 189191 195 196203含量 100.1 99.9 100.2 99.7 99.5實(shí)施例4按表8所列重量百分比稱取HCPT、注射用大豆油、維生素E、注射用中鏈脂肪酸甘油酯、維生素E和注射用豆磷脂，以無水乙醇溶解，60℃減壓蒸發(fā)除去無水乙醇得油相；稱取處方量普朗尼克F-68和甘油溶于水得水相。將水相加熱至60℃，水相倒入油相，高速攪拌制得初乳。初乳經(jīng)高壓均質(zhì)機(jī)乳勻得微乳，0.22μm濾膜過濾，罐裝于100ml輸液瓶中。
表8成分重量(g)HCPT0.005注射用大豆油∶注射用中鏈脂肪酸甘油酯(1∶1)5注射用豆磷脂2維生素E 0.005普朗尼克F-680.5HP-β-環(huán)糊精1甘油2.25注射用水89.69以馬爾文粒度測定儀測定乳劑粒徑，以高效液相熒光監(jiān)測法測定乳劑中藥物含量。所得乳劑4℃留樣檢測結(jié)果見表9。
表9 乳劑4℃留樣觀察結(jié)果時(shí)間(月) 0 1 2 36粒徑 79 83 85 84 89含量 100.1 99.799.8100.099.8
權(quán)利要求
1.喜樹堿類抗腫瘤藥物的脂肪乳劑，由以下組分及重量組成喜樹堿類抗腫瘤藥物 0.001-1％注射用油0.5-50％表面活性劑 0.5-50％水相40-98％抗氧劑 0-0.01％以上各百分比均為重量/體積百分比。
2.權(quán)利要求1所述的喜樹堿類抗腫瘤藥物的脂肪乳劑，由以下組分及重量組成喜樹堿類抗腫瘤藥物 0.005-0.1％注射用油1-30％表面活性劑 1-10％水相70-95％維生素E或維生素C0-0.001％以上各百分比均為重量/體積百分比。
3.權(quán)利要求1或2所述的喜樹堿類抗腫瘤藥物的脂肪乳劑，其中喜樹堿類抗腫瘤藥物是喜樹堿、10-羥基喜樹堿、9-硝基喜樹堿、9-氨基喜樹堿或其它難溶性喜樹堿類抗腫瘤藥物。
4.權(quán)利要求1或2所述的喜樹堿類抗腫瘤藥物的脂肪乳劑，其中注射用油是注射用大豆油、注射用中鏈脂肪酸甘油酯或其混合物。
5.權(quán)利要求4所述的喜樹堿類抗腫瘤藥物的脂肪乳劑，其中中鏈脂肪酸甘油酯中脂肪酸為含有6到14個(gè)碳原子的中鏈脂肪酸。
6.權(quán)利要求1或2所述的喜樹堿類抗腫瘤藥物的脂肪乳劑，其中表面活性劑選自磷脂、普朗尼克F-68、聚山梨酯80、聚氧乙烯蓖麻油、脫氧膽酸鈉中的一種或幾種。
7.權(quán)利要求6所述的喜樹堿類抗腫瘤藥物的脂肪乳劑，其中磷脂是豆磷脂或卵磷脂。
8.權(quán)利要求1或2所述的喜樹堿類抗腫瘤藥物的脂肪乳劑，其中水相是氯化鈉水溶液、乳酸鈉水溶液、甘油水溶液、甘露醇水溶液、山梨醇水溶液、右旋糖苷水溶液、HP-β-環(huán)糊精水溶液、淀粉衍生物水溶液、明膠水溶液或聚維酮水溶液。
9.權(quán)利要求1至8中任一項(xiàng)所述的喜樹堿類抗腫瘤藥物的脂肪乳劑的制備方法稱取處方量藥物、乳化劑和油相，溶解得到油相；油相與水相渦旋或攪拌混合制得初乳；初乳經(jīng)高壓均質(zhì)制得乳劑。
10.權(quán)利要求9所述的制備方法，其中為了制備澄清油相可加熱溶解藥物或用有機(jī)溶劑溶解，然后減壓蒸發(fā)除去有機(jī)溶劑得澄清油相，所述有機(jī)溶劑是甲醇、乙醇、異丙醇、乙醚、氯仿、二氯甲烷或者它們的混合物。
全文摘要
本發(fā)明涉及藥物制劑領(lǐng)域，具體涉及喜樹堿類抗腫瘤藥物的脂肪乳劑及其制備方法。其特征是該乳劑由藥物、注射用油、表面活性劑和水相等組成，粒徑大小可在10－1000nm之間，質(zhì)量穩(wěn)定。本發(fā)明乳劑不用再加穩(wěn)定劑和助溶劑，不僅有效降低了成本，而且也去除了另加穩(wěn)定劑和助溶劑所產(chǎn)生的毒性，療效更好。比較乳劑和市售水針制劑對S180癌細(xì)胞的抑制作用及小鼠移植瘤Heps的抑制作用，結(jié)果表明，乳劑可顯著提高藥物的抗腫瘤活性。
文檔編號A61K9/107GK1555799SQ20031011281
公開日2004年12月22日 申請日期2003年12月30日 優(yōu)先權(quán)日2003年12月30日
發(fā)明者張鈞壽, 龔明濤 申請人:張鈞壽