專利名稱：藁本內酯用于防治動脈粥樣硬化的用途的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及醫(yī)藥技術領域，是藳本內酯用于制備防治動脈粥樣硬化藥物或保健食品的用途。
背景技術：
動脈粥樣硬化(Atherosclerosis，AS)是心腦血管疾病的主要病理基礎，導致血管壁形成大小不一的斑塊，妨礙相應組織器官的血流供應。AS是一種侵犯全身動脈系統(tǒng)的疾病，導致的各種心腦血管病是重要的致殘性和致死性疾病，它嚴重威脅著人類的健康。因此，廣泛尋找預防和治療藥物具有深遠的理論和實際意義。
藳本內酯(Ligustilide)是從川芎、當歸等傘型科植物的根部提取的一種揮發(fā)油成分，其化學結構式如下 根據(jù)有關報道，藳本內酯一直被認為是川芎、當歸等傳統(tǒng)活血化瘀類中藥的主要活性成分之一，其易揮發(fā)，能聚合為二聚體。但至今未見藳本內酯對動脈粥樣硬化有防治作用的報道。

發(fā)明內容
本發(fā)明從川芎等植物中提取藳本內酯，經(jīng)動物實驗，證明藳本內酯及其二聚體對動脈粥樣硬化有防治作用，因而可用于制備防治動脈粥樣硬化的藥物或保健食品。
藳本內酯的制備方法通常采用超臨界萃取技術，將川芎或當歸等植物干燥粉碎后用液態(tài)CO2進行萃取并富集。(詳見《超臨界流體萃取》，化學工業(yè)出版社，2002年出版)一.藳本內酯防治動脈粥樣硬化實驗本發(fā)明采用動脈粥樣硬化大鼠模型，證明藳本內酯對動脈粥樣硬化病變有防治作用。方法如下雄性Wistar大鼠40只，體重300±10g，購自中科院上海實驗動物中心(合格證號SCXK滬2002-0010)，飼養(yǎng)于清潔級動物房。正常飼料喂養(yǎng)后，隨機分成4組，即空白對照組、模型組、藳本內酯低劑量組及藳本內酯高劑量組，每組10只。除空白對照組外，其余各組均先給大鼠腹腔注射維生素D360萬單位/kg，再喂食高脂飼料8周。所述高脂飼料配方為，3％膽固醇，0.5％膽酸鈉，0.2％丙基硫氧嘧啶，5％白糖，10％豬油，81.3％基礎飼料，攪拌均勻后，壓制成顆粒，烘干成高脂飼料?？瞻讓φ战M則先腹腔注射生理鹽水，再喂食正常飼料8周。
藳本內酯低劑量組在喂食高脂飼料的同時，每日灌胃給予2.5mg/kg藳本內酯；藳本內酯高劑量組在喂食高脂飼料的同時，每日灌胃給予25mg/kg藳本內酯；空白對照組與模型組則每日灌胃等量生理鹽水。各組于8周后處死，取主動脈、心臟進行病理觀測。模型組大鼠可觀測到全身性的動脈粥樣硬化病理改變。說明注射維生素D360萬單位/kg后再喂食高脂飼料8周，就可形成動脈粥樣硬化。詳見專利申請《一種動脈粥樣硬化大鼠模型的制備方法》(申請?zhí)?00310108363)。然而藳本內酯低劑量組和高劑量組的大鼠，其病理指標明顯輕于模型組，有的甚至不發(fā)生動脈粥樣硬化。詳見如下指標
1.主動脈病變程度觀測 沿主動脈瓣至髂動脈分支處取出主動脈，縱向剪開，在10％福爾馬林溶液中固定，大體觀察，結合油紅O染色。
通過大體觀察，參照《藥理學實驗方法學》(人民衛(wèi)生出版社，2002出版)，病變分級如下0級內膜表面光滑，無斑塊，評0分；0.5級內膜有輕度奶油色變化，但無凸出于表面的斑塊，評0.5分；1級有明顯的奶油色斑塊，面積小于3mm2，評1分；2級斑塊面積大于3mm2，評2分；3級斑塊融合成片，大部分斑塊面積大于3mm2，評3分；4級斑塊幾乎覆蓋整個動脈內膜，評4分。
2.冠狀動脈病理觀測 心臟在冠狀溝下方和距心尖0.5cm處橫斷，取其間組織塊，石蠟包埋，連續(xù)切片，作HE染色。另外，每組取3只大鼠在心臟相同部位作冰凍切片，進行油紅O染色。
參照《藥理學實驗方法學》(人民衛(wèi)生出版社，2002出版)，每只動物觀察10個動脈斷面，冠狀動脈病變程度分級采用以下標準分級0級動脈內膜無脂質浸潤，評0分；0.5級內膜有輕度脂質浸潤，評0.5分；1級內膜斑塊占血管腔面積的1/4，評1分；2級內膜斑塊占血管腔面積的1/2，評2分；3級內膜斑塊占血管腔面積的1/2以上，評3分；4級斑塊幾乎堵塞整個管腔，評4分。
實驗結果1.主動脈形態(tài)觀察 經(jīng)油紅O大體染色后，空白對照組未出現(xiàn)陽性。模型組大鼠主動脈出現(xiàn)大量斑塊，病變評分達2.5±1.4，斑塊區(qū)域主要分布于主動脈弓、腹主動脈及髂動脈分叉處。經(jīng)石蠟包埋切片后，HE染色光鏡下觀察，空白對照組血管細胞排列整齊而完整；模型組病變部位內膜明顯增厚，血管內皮細胞排列不完整，平滑肌細胞在內膜增生顯著，與大量堆積的泡沫細胞形成動脈粥樣硬化斑塊，呈典型的動脈粥樣硬化病變。藳本內酯的低、高劑量組均可顯著降低主動脈的斑塊面積，病變評分分別為1.5±1.1和0.45±0.50，其中高劑量組有5只未檢測到動脈粥樣硬化病變。結果見表1。
表1 藳本內酯對大鼠主動脈粥樣硬化病變影響結果評分(x±s)組別動物數(shù)(只)病變評分(分)空白對照組 10 0模型組 102.5±1.4低劑量藳本內酯組101.3±0.67*高劑量藳本內酯組100.45±0.50**與模型組比較*P＜0.05，**P＜0.01由表1可見，藳本內酯能夠顯著降低主動脈粥樣硬化病變程度。
2.心臟病理觀察 空白對照組大鼠心臟冠狀動脈經(jīng)油紅O染色后未發(fā)現(xiàn)陽性區(qū)域。模型組大鼠出現(xiàn)典型的冠狀血管AS病變，病變程度評分為1.9±0.8。病變區(qū)主要為內膜增厚，管腔嚴重狹窄；內皮和平滑肌層細胞排列紊亂，平滑肌增生明顯。經(jīng)冰凍切片、油紅O染色后，AS病變區(qū)血管壁染色陽性，血管內膜堆積大量泡沫細胞。高劑量的藳本內酯可顯著減輕大鼠冠狀動脈病變程度，病變評分為0.95±0.50。結果見表2。
表2 藳本內酯對大鼠冠狀動脈粥樣硬化病變影響結果評分(x±s)組別動物數(shù)(只)病變評分(分)空白對照組 10 0模型組 101.9±0.8低劑量藳本內酯組101.05±0.72高劑量藳本內酯組100.95±0.50*與模型組比較*P＜0.05由表2可見，藳本內酯能夠顯著降低冠狀動脈粥樣硬化病變程度。因此，藳本內酯可用于制備防治動脈粥樣硬化的藥物或保健食品。
二、實施例一 制備藳本內酯從中藥川芎中提取藳本內酯的提取方法(參見《超臨界流體萃取》，化學工業(yè)出版社，2002年出版)1.原料將干燥的中藥川芎粉碎成20目粗粉17.5kg，分兩鍋進料，投入萃取釜(杭州華黎泵業(yè)有限公司出品)中。
2.萃取流程為CO2鋼瓶-冷卻系統(tǒng)萃取釜-解析釜1-解析釜2-儲罐-循環(huán)。
3.條件萃取釜壓力29MPa，溫度35℃；解析釜1壓力7～8MPa，溫度40℃；解析釜2壓力6～7MPa，溫度40℃；流速165~180kg/小時。提取3小時，共提兩鍋，第1鍋進料10kg，第2鍋進料7.5kg，從解析釜1收集到具有強烈川芎香氣的油狀物900ml。
4.分離富集將該油狀物分次上硅膠柱，按常規(guī)以環(huán)己烷丙酮進行梯度洗脫，收集含有藳本內酯的部分，減壓濃縮即得藳本內酯。
三、實施例二 制備藳本內酯軟膠囊劑1.配方與配比藳本內酯 20g蜂蠟 10g叔丁基對羥基茴香醚(BHA) 0.10g大豆油加至500g共壓制成1000粒囊殼配方明膠 200g甘油 60g水 305.2g2.制備工藝①取蜂蠟，加大豆油250g，80℃水浴下熔融混勻，冷卻至室溫(25℃)。
②加入叔丁基對羥基茴香醚，充分混勻。
③加入藳本內酯，再加大豆油至500g，充分混勻，待用。
④取明膠，加入適量的水使明膠吸水膨脹。另將甘油及余下的水置煮膠鍋中加熱至70-80℃，混合均勻，加入膨脹的明膠，攪拌，熔融，保溫1小時，真空抽氣以除去氣泡，以潔凈白布過濾，混勻，保溫待用。
⑤將已制好的明膠甘油液和囊心藥液裝入自動旋轉軋囊機中，膠帶溫度控制在40-50℃，囊心藥液溫度控制在25℃，壓制出每粒含500mg藥液的軟膠囊，在30-32℃、相對濕度28％條件下烘干24小時即可。
四、實施例三 制備藳本內酯復方制劑將藳本內酯和普羅布考(Probucol)組方，制成復方藥1.配方與配比藳本內酯 20g普羅布考 250g淀粉 400g糊精 100g硬脂酸鎂 6g乙醇 適量共壓制成1000片2.制備方法①將藳本內酯、普羅布考、淀粉、糊精混勻，加乙醇適量制軟材。
②過20目篩。
③60℃烘干2小時。
④加硬脂酸鎂，18目篩整粒，混勻。
⑤壓片，每片0.77g。
權利要求
1.藁本內酯及其二聚體在制備防治動脈粥樣硬化藥物或保健食品中的應用。
全文摘要
本發(fā)明涉及醫(yī)藥技術領域，是藁本內酯用于制備防治動脈粥樣硬化藥物或保健食品的用途。藁本內酯是從川芎、當歸等傘型科植物中提取的一種揮發(fā)油成分。經(jīng)動物實驗，藁本內酯及其二聚體對動脈粥樣硬化有防治作用，因而可用于制備防治動脈粥樣硬化藥物或保健食品。
文檔編號A61K31/365GK1543859SQ200310108859
公開日2004年11月10日 申請日期2003年11月25日 優(yōu)先權日2003年11月25日
發(fā)明者楊鵬遠, 張衛(wèi)東, 芮耀誠, 蘇娟, 張川 申請人:中國人民解放軍第二軍醫(yī)大學