專利名稱：一種治療心腦血管系統(tǒng)疾病的總黃酮及其制備方法與應用的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及一種植物藥提取的總黃酮及其制備方法與應用，具體涉及一種治療心腦血管系統(tǒng)疾病的總黃酮的制備、制劑的制備工藝。
本發(fā)明治療心腦血管系統(tǒng)疾病的總黃酮以巖青蘭地上干燥全草為原料，通過溶劑提取、醇沉或水沉、層析和純化制備而成，所得總黃酮中柚皮素-7-O-葡萄糖苷和北美圣草素-7-O-葡萄糖苷兩種二氫黃酮含量不低于70％，二者比例為0.50～0.80。
本發(fā)明治療心腦血管系統(tǒng)疾病的總黃酮制備方法包括如下步驟原植物經(jīng)過粉碎后，以水、甲醇、乙醇、30～95％含水甲醇、30～95％含水乙醇、丙酮、30～95％含水丙酮或醋酸乙酯為提取溶劑，加熱提取，所用溶劑量與原料重量比為8～15∶1，可重復提取1～3次，除去藥渣，濾液在常壓或減壓條件下濃縮至比重1.13～1.17后，通過醇沉或水沉方法，除去一些雜質(zhì)，上清液濃縮至比重1.10～1.15，進行柱層析，用洗脫液洗脫，蒸除溶劑，70～95％乙醇溶解，放置，析晶，結(jié)晶以70～95％乙醇重結(jié)晶，濾取結(jié)晶，即得。以上均為重量百分比。
本發(fā)明的治療心腦血管系統(tǒng)疾病的總黃酮制備方法具體步驟如下1.溶劑提取原植物經(jīng)過粉碎后，用水、甲醇、乙醇或含水甲、乙醇(30～95％)、丙酮、含水丙酮(30～95％)或醋酸乙酯，加熱提取(包括回流)，所用溶劑量與原植物重量比為8～15∶1，以12倍溶劑量最佳，可重復提取1～3次，除去藥渣，濾液在常壓或減壓條件下濃縮至比重1.13～1.17。
溶劑提取以60～95％含水醇或30％～50％含水丙酮回流提取，溶劑量為原料的12倍。
2.醇沉或水沉將上述濃縮液醇沉或水沉除去雜質(zhì)。用水提取的通過醇沉法，用有機溶劑提取的通過水沉的方法，除去雜質(zhì)。
醇沉法中所用含水甲、乙醇濃度為50％～80％，以70％最好3.柱層析將上述上清液濃縮至比重1.10～1.15，進行硅膠(柱層析用)、聚酰胺(1340目)或大孔樹脂柱層析。硅膠層析用氯仿-甲醇洗脫；聚酰胺和大孔樹脂層析用水-乙醇或甲醇梯度洗脫，收集氯仿-甲醇8∶2～6∶4洗脫部分或30％～50％乙醇或甲醇洗脫部分，蒸干溶劑。
4.純化將上述步驟所的產(chǎn)物用70～95％乙醇溶解，放置，析晶。結(jié)晶再以70～95％乙醇重結(jié)晶，濾取結(jié)晶，即得總黃酮。
本發(fā)明方法所得總黃酮中柚皮素-7-O-葡萄糖苷和北美圣草素-7-O-葡萄糖苷兩種二氫黃酮含量不低于70％，二者比例為0.30～0.80。
本發(fā)明的治療心腦血管系統(tǒng)疾病的總黃酮的應用如下在總黃酮中加入相關輔料，可制成片劑、膠囊劑及凍干注射劑。
具體應用方法如下1)片劑或膠囊劑的制作，均按總黃酮總量的重量百分比所述總黃酮，加入2～5重量倍的稀釋劑，如淀粉、糖粉、糊精、微晶纖維素，5％～10％構(gòu)潤濕劑如水、乙醇，4％～15％的崩解劑，如羧甲基淀粉鈉，按常規(guī)濕法制粒，干燥后整粒，再加入0.5％～3％的潤滑劑，如硬脂酸鎂、滑石粉，壓片或裝入膠囊殼。
2)注射用凍干制品的制作，均按總黃酮總量的重量百分比所述總黃酮，加入甘露醇作為骨架劑，2-羥丙基-β-環(huán)糊精作為增溶劑，溶于2～3倍量(重量/體積)注射用水，分裝，冷凍干燥。
上述甘露醇與總黃酮重量比為1～3∶1，2-羥丙基-β-環(huán)糊精與總黃酮重量比為1～5∶1。
本發(fā)明的治療心腦血管系統(tǒng)疾病的總黃酮及其制劑用于治療缺血性心腦血管疾病、心絞痛、心肌梗塞、腦梗塞。
本發(fā)明的治療心腦血管系統(tǒng)疾病構(gòu)總黃酮的藥效如下對離體大鼠冠脈流量的影響取大鼠擊頭致昏，剪開胸腔，暴露心臟，剪開心包膜，輕提心臟，剪斷與心臟相連的血管組織，取出心臟，立即放入4℃氧飽和的任洛氏液中，擠出心臟余血，找到主動脈殘端，將主動脈套在主動脈插管上，結(jié)扎固定后，穩(wěn)定10分鐘，灌流液溫度37±1℃，壓力50mmH2O，充氧。測定每分鐘流量，連續(xù)3分鐘流量相近，其平均值可作為給藥前的基礎流量。自側(cè)管依次給注射用凍干品溶液0.2ml，測定每次給藥后連續(xù)6分鐘內(nèi)每分鐘的流量，找出最大值，計算藥后流量的最大增加值，計算冠脈流量增加率，結(jié)果顯示，總黃酮可顯著增加冠脈流量。
抗PAF作用觀察新西蘭兔，體重在2.5～3Kg之間，采集30ml耳緣靜脈血，用1∶9(V/V)3.8％枸櫞酸鈉防凝，離心法制備富含血小板血漿(PRP)，于PRP測定管中加入25μl總黃酮水溶液(1mg/ml)，37℃敷育1min，加入血小板聚集誘導劑PAF，采用Born比濁法，測定血小板聚集。結(jié)果顯示，總黃酮對PAF誘導的血小板聚集有明顯抑制作用。
本發(fā)明治療心腦血管系統(tǒng)疾病的總黃酮具有PAF拮抗作用，可抑制PAF誘導的血小板聚集，擴張冠脈，增加冠脈流量，具有抗氧化、清除自由基和抗蛋白質(zhì)糖化作用，用于治療缺血性心腦血管疾病、心絞痛、心肌梗塞、腦梗塞，具有療效好，成本低的優(yōu)點。
具體實施方式
實施例1巖青蘭干燥地上全草，加12倍量水，沸騰提取2小時，共提取2次，提取液濃縮至比重1.15，加乙醇至醇濃度70％，沉淀24小時，上清液濃縮至粘稠膏狀，加入2倍量柱層析硅膠拌勻，真空干燥，研細，裝入層析柱，氯仿-甲醇9∶1洗睨至洗脫液蒸干后無殘留物，氯仿-甲醇6∶4洗脫，洗脫至洗脫液TLC(薄層層析)檢測無被測斑點，洗脫液蒸除溶劑，95％乙醇溶解，析晶，濾出結(jié)晶，乙醇重結(jié)晶，得巖青蘭總黃酮。
總黃酮中柚皮素-7-O-葡萄糖苷和北美圣草素-7-O-葡萄糖苷兩種二氫黃酮含量不低于75％，二者比例為0.70。
實施例2巖青蘭干燥地上全草，加12倍量水，沸騰提取2小時，共提取2次，提取液濃縮至比重1.15，加乙醇至醇濃度70％，沉淀24小時，上清液濃縮至流浸膏狀，加入預先裝好的聚酰胺柱(聚酰胺與原藥材重量比為1∶2)的頂端，水洗脫至洗脫液無色，30％乙醇洗脫，洗脫至洗脫液TLC(薄層層析)檢測無被測斑點，洗脫液減壓蒸除溶劑后用95％乙醇溶解，析晶，濾出結(jié)晶，乙醇重結(jié)晶，得巖青蘭總黃酮。
總黃酮中柚皮素-7-O-葡萄糖苷和北美圣草素-7-O-葡萄糖苷兩種二氫黃酮含量不低于73％，二者比例為0.55。
實施例3巖青蘭干燥地上全草，加12倍量水，沸騰提取2小時，共提取2次，提取液濃縮至比重1.15，加乙醇至醇濃度70％，沉淀24小時，上清液濃縮至流浸膏狀，加入預先裝好的大孔樹脂柱(大孔樹脂與原藥材重量比為1∶1)的頂端，水洗脫至洗脫液無色，30％乙醇洗脫，洗脫至洗脫液TLC(薄層層析)檢測無被測斑點，洗脫液減壓蒸除溶劑后用95％乙醇溶解，析晶，濾出結(jié)晶，乙醇重結(jié)晶，得巖青蘭總黃酮。
總黃酮中柚皮素-7-O-葡萄糖苷和北美圣草素-7-O-葡萄糖苷兩種二氫黃酮含量不低于78％，二者比例為0.55。
實施例4
巖青蘭干燥地上全草，加12倍量70％乙醇，回流提取2小時，共提取2次，提取液濃縮至流浸膏狀，加入與藥材重量等量的水，沉淀24小時，上清液濃縮至流浸膏狀，加入預先裝好的聚酰胺柱(聚酰胺與藥材重量比為1∶2)的頂端，水洗脫至洗脫液無色，30％乙醇洗脫，洗脫至洗脫液TLC(薄層層析)檢測無被測斑點，洗脫液減壓蒸除溶劑后用95％乙醇溶解，析晶，濾出結(jié)晶，乙醇重結(jié)晶，得巖青蘭總黃酮。
總黃酮中柚皮素-7-O-葡萄糖苷和北美圣草素-7-O-葡萄糖苷兩種二氫黃酮含量不低于71％，二者比例為0.58。
實施例5巖青蘭干燥地上全草，加12倍量50％丙酮，回流提取2小時，共提取2次，提取液濃縮至流浸膏狀，加入與藥材重量等量的水，沉淀24小時，上清液濃縮至粘稠膏狀，加入2倍量柱層析硅膠拌勻，真空干燥，研細，裝入層析柱，氯仿-甲醇9∶1洗脫至洗脫液蒸干后無殘留物，氯仿-甲醇6∶4洗脫，洗脫至洗脫液TLC檢測無被測斑點，洗脫液蒸除溶劑，95％乙醇溶解，析晶，濾出結(jié)晶，乙醇重結(jié)晶，得巖青蘭總黃酮。
總黃酮中柚皮素-7-O-葡萄糖苷和北美圣草素-7-O-葡萄糖苷兩種二氫黃酮含量不低于76％，二者比例為0.70。
實施例6巖青蘭干燥地上全草，加12倍量70％乙醇或50％丙酮，回流提取2小時，共提取2次，提取液濃縮至流浸膏狀，加入與藥材重量等量的水，沉淀24小時，上清液濃縮至流浸膏狀，加入預先裝好的大孔樹脂柱(大孔樹脂與藥材重量比為1∶1)的頂端，水洗脫至洗脫液無色，30％乙醇洗脫，洗脫至洗脫液TLC檢測無被測斑點，洗脫液減壓蒸除溶劑后用95％乙醇溶解，析晶，濾出結(jié)晶，乙醇重結(jié)晶，得巖青蘭總黃酮。
總黃酮中柚皮素-7-O-葡萄糖苷和北美圣草素-7-O-葡萄糖苷兩種二氫黃酮含量不低于79％，二者比例為0.78。
實施例7總黃酮用于片劑實施例1所得的總黃酮20g，加入淀粉40g，糊精25g，蔗糖粉10g，混勻，制成顆粒，60℃以下干燥，整粒，加入滑石粉0.3g，混勻，壓制成1000片，即得。
實施例8總黃酮用于膠囊劑實施例3所得的總黃酮20g，加入淀粉40g，糊精25g，微晶纖維素10g，混勻，制成顆粒，60℃以下干燥，整粒，加入硬脂酸鎂0.2g，混勻，裝入膠囊殼，即得。
實施例9總黃酮用于注射用凍干制品實施例4所得的總黃酮10g，與等量甘露醇混勻，加注射用水100ml，80℃加熱使成混懸液，備用；稱取20g2-羥丙基-β-環(huán)糊精，加注射用水100ml溶解，80℃攪拌條件下將混懸液緩慢加入2-羥丙基-β-環(huán)糊精中，加活性炭0.05％80℃攪拌30分鐘，微孔濾膜過濾，濾液定容至300ml，分裝，裝量3ml/支，冷凍干燥即得。
權利要求
1.一種治療心腦血管系統(tǒng)疾病的總黃酮，其特征在于，由巖青蘭為原料，通過溶劑提取、醇沉或水沉、層析和純化制備而成，所得總黃酮主要成分為柚皮素-7-O-葡萄糖苷、北美圣草素-7-O-葡萄糖苷兩種二氫黃酮類成分，其總量大于70％，其比例為0.30～0.80。
2.一種權利要求1所述的治療心腦血管系統(tǒng)疾病的總黃酮的制備方法，包括如下步驟原植物經(jīng)過粉碎后，以水、甲醇、乙醇、30～95％含水甲醇、30～95％含水乙醇、丙酮、30～95％含水丙酮或醋酸乙酯為提取溶劑，加熱提取，所用溶劑量與原料重量比為8～15∶1，重復提取1～3次，除去藥渣，濾液在常壓或減壓條件下濃縮至比重1.13～1.17后，通過醇沉或水沉方法，除雜質(zhì)，上清液濃縮至比重1.10～1.15，進行柱層析，洗脫液洗脫，蒸除溶劑，70～95％乙醇溶解，放置，析晶，結(jié)晶以70～95％乙醇重結(jié)晶，濾取結(jié)晶，即得。
3.根據(jù)權利要求2所述的一種治療心腦血管系統(tǒng)疾病的總黃酮的制備方法，其特征在于提取溶劑是60～95％含水醇或30％～50％丙酮回流提取，溶劑量為原料的12倍。
4.根據(jù)權利要求2所述的一種治療心腦血管系統(tǒng)疾病的總黃酮的制備方法，其特征在于醇沉用含水甲醇、乙醇濃度為50％～80％。
5.根據(jù)權利要求2所述的一種治療心腦血管系統(tǒng)疾病的總黃酮的制備方法，其特征在于柱層析可用硅膠柱層析、大孔樹脂柱層析或聚酰胺柱層析中的一種。
6.根據(jù)權利要求2或5所述的一種治療心腦血管系統(tǒng)疾病的總黃酮的制備方法，其特征在于硅膠柱層析采用氯仿-甲醇梯度洗脫，收集氯仿-甲醇8∶2～6∶4洗脫部分，大孔樹脂和聚酰胺采用水-乙醇或甲醇梯度洗脫，收集30％～50％乙醇或甲醇洗脫部分。
7.權利要求1所述的治療心腦血管系統(tǒng)疾病的總黃酮的應用，在總黃酮中加入相關制藥輔料，制成片劑、膠囊劑及注射劑。
8.根據(jù)權利要求7所述的一種治療心腦血管系統(tǒng)疾病的總黃酮的應用，其特征在于片劑或膠囊劑的制作，均按總黃酮總量的重量百分比所述總黃酮，加入2～5重量倍的稀釋劑，如淀粉、糖粉、糊精、微晶纖維素，5％～10％的潤濕劑如水、乙醇，4％～15％的崩解劑，如羧甲基淀粉鈉，按常規(guī)濕法制粒，干燥后整粒，再加入0.5％～3％的潤滑劑，如硬脂酸鎂、滑石粉，壓片或裝入膠囊殼。
9.根據(jù)權利要求7所述的一種治療心腦血管系統(tǒng)疾病的總黃酮的應用，其特征在于注射用凍干制品的制作，均按總黃酮總量的重量百分比所述總黃酮，加入甘露醇作為骨架劑，2-羥丙基-β-環(huán)糊精作為增溶劑，溶于2～3倍量注射用水，重量/體積，分裝，冷凍干燥。
10.根據(jù)權利要求9所述的一種治療心腦血管系統(tǒng)疾病的總黃酮的應用，其特征在于甘露醇與總黃酮重量比為1～3∶1，2-羥丙基-β-環(huán)糊精與總黃酮重量比為1～5∶全文摘要
一種治療心腦血管系統(tǒng)疾病的總黃酮及其制備方法與應用，屬于植物藥提取技術領域。本發(fā)明的治療心腦血管系統(tǒng)疾病的總黃酮是從植物巖青蘭地上干燥全草經(jīng)提取、層析分離得到的，主要成分為兩種二氫黃酮類化合物柚皮素－7－O－葡萄糖苷和北美圣草素－7－O－葡萄糖苷，具有顯著的PAF拮抗作用，可抑制PAF誘導的血小板聚集，可擴張冠狀動脈，增加冠脈流量，做成口服或注射劑，用于治療缺血性心腦血管疾病，心絞痛、心肌梗塞、腦梗塞。
文檔編號A61P9/10GK1401326SQ0213557
公開日2003年3月12日 申請日期2002年9月26日 優(yōu)先權日2002年9月26日
發(fā)明者婁紅祥, 任冬梅, 翟光喜 申請人:山東大學