本發(fā)明屬于中藥技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種預(yù)防和/或治療心腦血管疾病的中藥組合物及其制備方法。

背景技術(shù)：

心腦血管疾病是當(dāng)今世界上對(duì)人體威脅最大的疾病之一，其發(fā)病率和死亡率已超過(guò)癌癥躍居世界第一。心腦血管疾病是我國(guó)發(fā)病率和死亡率最高的疾病，每年患者已高達(dá)一億六千萬(wàn)人，每年大約有260萬(wàn)人死于心腦血管疾病。且發(fā)病人群有年輕化(35-55歲)趨勢(shì)。其具有“發(fā)病率高、致殘率高、死亡率高、復(fù)發(fā)率高,并發(fā)癥多”，即“四高一多”的特點(diǎn)。

心腦血管疾病最常見的疾病有：冠心病、缺血性中風(fēng)、出血性中風(fēng)等。其中，冠心病，是冠狀動(dòng)脈血管發(fā)生動(dòng)脈粥樣硬化病變而引起血管腔狹窄或阻塞，造成心肌缺血、缺氧或壞死而導(dǎo)致的心臟病。中醫(yī)認(rèn)為冠心病的基本病機(jī)為“陽(yáng)微陰弦”，證屬本虛標(biāo)實(shí)，而氣虛血淤證為最常見證型之一。

近年來(lái)，運(yùn)用中藥來(lái)治療冠心病的越來(lái)越多。中國(guó)專利申請(qǐng)cn102210835b公開了一種治療冠心病的中藥。其是由熟地、山茱萸、肉蓯蓉、炮附子、人參、麥冬、桂枝、當(dāng)歸、黃芪、丹參、檀香、川芎、玄參、生地、山楂、銀花、砂仁等植物中草藥為原料制成。中國(guó)專利申請(qǐng)cn103919910b公開了一種治療冠心病的藥物，由丹參、西洋參、醋炙延胡索、熟地、山茱萸、山楂、炮附子、五味子、桂枝、當(dāng)歸、黃芪、甘草、川穹、銀花按照一定比例配制而成。上述中藥用于治療冠心病具有較好的成效，但對(duì)于出血性中風(fēng)無(wú)治療作用，且中藥具有服用周期長(zhǎng)的特性，需要長(zhǎng)期服用。一般地講，中藥的副作用比人工合成的西藥要小些，但中藥多是天然藥物，有效成分比較復(fù)雜，若要長(zhǎng)期服用，則會(huì)對(duì)肝腎造成較大的負(fù)擔(dān)，甚至不可避免地會(huì)對(duì)人體的肝腎造成損壞。

此外，目前對(duì)于治療冠心病的中藥組合物的制備方法仍舊停留在傳統(tǒng)的浸漬法、煎煮法、醇提法等階段。煎煮法操作溫度較高，容易對(duì)熱敏性有效成分影響較大，且提取液中雜質(zhì)較多，不利于后續(xù)工作的進(jìn)行。醇提法，操作溫度較低，但有效成分提取率較低。近年來(lái)出現(xiàn)了一些新的提取方法，如微波、超臨界提取劑超聲波等，由于強(qiáng)化內(nèi)部傳遞過(guò)程，可在較低溫度下進(jìn)行提取，但其需要大型的設(shè)備，不適用于大面積工業(yè)化應(yīng)用。

因此，有必要提供一種有效治療冠心病，并可用于治療或緩解出血性中風(fēng)疾病癥狀的藥物，此外，還有必要提供一種切實(shí)可行的中藥制備方法。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明旨在提供一種預(yù)防和/或治療心腦血管疾病的中藥組合物及其制備方法。該藥物可用于治療冠心病及出血性中風(fēng)病，其療效確切，毒性小。

為了達(dá)到上述目的，本發(fā)明采用以下技術(shù)方案：一種預(yù)防和/或治療心腦血管疾病的中藥組合物，由以下重量的制備原料制備而成：黃芩5～20克、夏枯草6～30克、槐米3～12克、牛膝3～12克、當(dāng)歸5～20克、地黃6～30克、丹參6～30克、地龍5～20克、鉤藤6～24克、決明子5～20克、煅燒珍珠母6～30克、煅燒磁石6～30克、三七5～20克、水蛭2～10克以及大黃1～6克。

進(jìn)一步地，所述中藥組合物由以下重量的制備原料制備而成：黃芩8～15克、夏枯草10～18克、槐米3～10克、牛膝3～10克、當(dāng)歸5～15克、地黃10～20克、丹參10～20克、地龍5～15克、鉤藤10～20克、決明子8～15克、煅燒珍珠母12～25克、煅燒磁石10～20克、三七8～15克、水蛭2～8克以及大黃2～5克。

進(jìn)一步地，所述中藥組合物由以下重量的制備原料制備而成：黃芩10克、夏枯草15克、槐米6克、牛膝6克、當(dāng)歸10克、地黃15克、丹參15克、地龍10克、鉤藤12克、決明子10克、煅燒珍珠母15克、煅燒磁石15克、三七10克、水蛭5克以及大黃3克。

進(jìn)一步地，所述中藥組合物由以下重量的制備原料制備而成：黃芩8克、夏枯草10克、槐米3克、牛膝3克、當(dāng)歸5克、地黃10克、丹參10克、地龍5克、鉤藤10克、決明子8克、煅燒珍珠母12克、煅燒磁石10克、三七8克、水蛭2克以及大黃2克。

進(jìn)一步地，所述中藥組合物由以下重量的制備原料制備而成：黃芩15克、夏枯草18克、槐米10克、牛膝10克、當(dāng)歸15克、地黃20克、丹參20克、地龍15克、鉤藤20克、決明子15克、煅燒珍珠母25克、煅燒磁石20克、三七15克、水蛭8克以及大黃5克。

相應(yīng)地，本發(fā)明還提供了一種制備上述的中藥組合物的方法，包括以下步驟：

a)預(yù)處理：取黃芩、夏枯草、槐米、牛膝、當(dāng)歸、地黃、丹參、地龍、鉤藤、決明子、三七和大黃，洗凈，晾干，粉碎成粗粉，備用；

b)一次輻照處理：往上述粗粉中加入粗粉3～6倍量的65～85％的乙醇，得混合液，加入0.3～0.5wt％的硫酸亞鐵，在室溫下用60co-γ射線輻照處理5～10min，得中藥粗提取物；其中輻照劑量為0.3～0.8kgy；

c)脈沖電磁場(chǎng)處理：將上述中藥粗提取物于常溫下暴露于高壓脈沖電磁場(chǎng)中處理5～12min，得中藥提取物；其中，脈沖電磁場(chǎng)場(chǎng)強(qiáng)控制在10～15kv/cm，頻率為10～20hz；

d)二次輻照處理：往上述中藥提取物加入核酸，于室溫下用60co-γ射線輻照處理30～60min，其中輻照劑量為3～5kgy；

e)將上述輻照處理過(guò)后的中藥提取物過(guò)濾1～2次，合并濾液，將濾液濃縮至30～40℃下測(cè)相對(duì)密度為1.15～1.25g/ml的浸膏，噴霧干燥后加入粉碎過(guò)后的煅燒珍珠母、磁石，得中藥組合物。

進(jìn)一步地，所述步驟b)中所述輻照劑量為0.5kgy；

進(jìn)一步地，所述步驟d)中所述輻照劑量為5kgy。

本發(fā)明另一目的在于提供上述中藥組合物或通過(guò)上述方法制備得到的中藥組合物用于制備預(yù)防和/或治療心腦血管疾病藥物中的用途。

進(jìn)一步地，所述的用途，所述心腦血管疾病為冠心病或出血性中風(fēng)病。

本發(fā)明另一目的在于提供一種藥物，包含上述的中藥組合物或通過(guò)上述方法制備得到的中藥組合物。

進(jìn)一步地，所述藥物還包括藥學(xué)上可接受的載體。

進(jìn)一步地，所述藥物的劑型為口服劑。

脈沖電磁場(chǎng)是一項(xiàng)高效、節(jié)能的新技術(shù)，發(fā)明人發(fā)現(xiàn)將其與有機(jī)溶劑提取結(jié)合能夠有效的破碎植物細(xì)胞壁，促進(jìn)生物活性物質(zhì)的溶出，且能使提取時(shí)間從原來(lái)的3～6h縮短到1～1.5h，并且總黃酮的得率也有明顯上升(能使總黃酮的含量提高152.1％)。但也存在一個(gè)缺陷，需要控制電磁場(chǎng)場(chǎng)強(qiáng)在較高的幅度(30～45kv/cm)和較高的頻率(100～200hz)才能達(dá)到效果。為了克服上述缺陷，發(fā)明人經(jīng)過(guò)大量的資料調(diào)研和試驗(yàn)研究，終于發(fā)現(xiàn)，在進(jìn)行脈沖電磁場(chǎng)處理前先進(jìn)行輻照處理，以較低幅度的電磁場(chǎng)場(chǎng)強(qiáng)和較低的頻率仍然能夠達(dá)到需要的效果，并且提取時(shí)間也進(jìn)一步縮短至30min內(nèi)，得率能夠提高65.2％。需要特別說(shuō)明的是，在輻照處理過(guò)程中需要加入催化劑硫酸亞鐵，如果不加入硫酸亞鐵，其會(huì)導(dǎo)致總黃酮的得率下降37.1％。上述特殊效果產(chǎn)生的機(jī)制尚未清楚，發(fā)明人認(rèn)為，可能是輻照處理，并且在催化劑硫酸亞鐵的作用下，使水分子分解成了大量具有較高反應(yīng)活性的粒子，如e^-aq、·oh等，這些活性粒子的存在提高了脈沖電磁場(chǎng)對(duì)細(xì)胞壁的破壞率，從而即使以較低幅度的電磁場(chǎng)場(chǎng)強(qiáng)和較低的頻率仍然能夠?qū)崿F(xiàn)快速提取，且得率有顯著提高。

另外值得提出的是，由于本發(fā)明配方含藥材較多，長(zhǎng)期服用，容易對(duì)肝臟產(chǎn)生較大的負(fù)擔(dān)。而神奇的是，利用再一次的輻照處理，可以明顯降低本發(fā)明藥物的毒性，通過(guò)試驗(yàn)二證明，加入本發(fā)明藥物共培養(yǎng)后，正常肝細(xì)胞的存活率仍然高達(dá)98％，而加入不經(jīng)二次輻照處理得到的中藥組合物共培養(yǎng)后，正常肝細(xì)胞的存活率下降至60％。上述特殊效果的實(shí)現(xiàn)，發(fā)明人認(rèn)為可能是輻照處理能夠使中藥組合物中的一些毒性物質(zhì)，如黃曲霉素，降解成無(wú)害的小分子。需要說(shuō)明的，在二次輻照處理過(guò)程中需要加入核酸，有利于防止二次輻照對(duì)中藥組合物中的有效成分的破壞。

內(nèi)皮素-1(et-1)和一氧化氮是一對(duì)反映血管內(nèi)皮細(xì)胞功能的常用指標(biāo)，兩者的比例失衡導(dǎo)致冠脈張力增高，管腔変窄，加重心肌缺血缺氧從，從而促進(jìn)冠心病心絞痛的病情發(fā)展。血管緊張素轉(zhuǎn)換酶(ace)的主要作用是催化血管緊張素ⅰ轉(zhuǎn)化為血管緊張素ⅱ以及滅活緩激肽，ace的活性與冠心病有關(guān)。通過(guò)試驗(yàn)證明：本發(fā)明藥物能顯著降低冠心病模型小鼠血清內(nèi)et-1和ace的濃度，升高no的濃度，差異具有顯著性。

本發(fā)明具有以下優(yōu)點(diǎn)：

1)本發(fā)明提供的中藥組合物，對(duì)防治冠心病具有確切的作用，可顯著降低冠心病模型小鼠血清內(nèi)et-1和ace的濃度，升高no的濃度，差異具有顯著性，

2)本發(fā)明提供的中藥組合物，對(duì)防治或緩解出血性中風(fēng)具有顯著的療效，可顯著改善出血性中風(fēng)小鼠的癥狀，降低小鼠大腦出血量。

3)本發(fā)明可用于防治冠心病以及出血性中風(fēng)疾病，且其對(duì)肝功能影響小，可長(zhǎng)期服用，在治療或預(yù)防心腦血管疾病方面具有良好的應(yīng)用前景。

具體實(shí)施方式

以下通過(guò)實(shí)施例形式的具體實(shí)施方式，對(duì)本發(fā)明的上述內(nèi)容作進(jìn)一步的詳細(xì)說(shuō)明。但不應(yīng)將此理解為本發(fā)明上述主題的范圍僅限于以下實(shí)施例。

核酸為食品級(jí)核酸，購(gòu)自山東康勤生物科技有限公司，cas號(hào):63231-63-0。

實(shí)施例1一種預(yù)防和/或治療心腦血管疾病的中藥組合物

本發(fā)明所述實(shí)施例1由以下重量的制備原料制備而成：黃芩10克、夏枯草15克、槐米6克、牛膝6克、當(dāng)歸10克、地黃15克、丹參15克、地龍10克、鉤藤12克、決明子10克、煅燒珍珠母15克、煅燒磁石15克、三七10克、水蛭5克以及大黃3克。

實(shí)施例2一種預(yù)防和/或治療心腦血管疾病的中藥組合物

本發(fā)明所述實(shí)施例2由以下重量的制備原料制備而成：黃芩8克、夏枯草10克、槐米3克、牛膝3克、當(dāng)歸5克、地黃10克、丹參10克、地龍5克、鉤藤10克、決明子8克、煅燒珍珠母12克、煅燒磁石10克、三七8克、水蛭2克以及大黃2克。

實(shí)施例3一種預(yù)防和/或治療心腦血管疾病的中藥組合物

本發(fā)明所述實(shí)施例3由以下重量的制備原料制備而成：黃芩15克、夏枯草18克、槐米10克、牛膝10克、當(dāng)歸15克、地黃20克、丹參20克、地龍15克、鉤藤20克、決明子15克、煅燒珍珠母25克、煅燒磁石20克、三七15克、水蛭8克以及大黃5克。

實(shí)施例4本發(fā)明預(yù)防和/或治療心腦血管疾病的中藥組合物的制備

a)預(yù)處理：取實(shí)施例1所述原料，洗凈，晾干，粉碎成粗粉，備用；

b)一次輻照處理：往上述粗粉中加入粗粉5倍量的75％的乙醇，得混合液，加入0.4wt％的硫酸亞鐵，在室溫下用60co-γ射線輻照處理8min，得中藥粗提取物；其中輻照劑量為0.5kgy；

c)脈沖電磁場(chǎng)處理：將上述中藥粗提取物于常溫下暴露于高壓脈沖電磁場(chǎng)中處理10min，得中藥提取物；其中，脈沖電磁場(chǎng)場(chǎng)強(qiáng)控制在12kv/cm，頻率為15hz；

d)二次輻照處理：往上述中藥提取物加入核酸，于室溫下用60co-γ射線輻照處理45min，其中輻照劑量為5kgy；

e)將上述輻照處理過(guò)后的中藥提取物過(guò)濾2次，合并濾液，將濾液濃縮至35℃下測(cè)相對(duì)密度為1.20g/ml的浸膏，噴霧干燥后加入粉碎過(guò)后的煅燒珍珠母、磁石，得中藥組合物。

對(duì)比例1預(yù)防和/或治療心腦血管疾病的中藥組合物的制備

對(duì)比例1與實(shí)施例4的區(qū)別在于，去掉b)一次輻照處理步驟，其余參數(shù)與操作參考實(shí)施例4。

對(duì)比例2、預(yù)防和/或治療心腦血管疾病的中藥組合物的制備

對(duì)比例2與實(shí)施例4的區(qū)別在于，b)一次輻照處理步驟中，不加入催化劑硫酸亞鐵，其余參數(shù)與操作參考實(shí)施例4。

對(duì)比例3、預(yù)防和/或治療心腦血管疾病的中藥組合物的制備

s1、預(yù)處理：取實(shí)施例1所述原料，分別洗凈，晾干，粉碎成粗粉，備用；

s2、乙醇提取：往上述粗粉中加入粗粉5倍量的75％的乙醇，在室溫下回流提取3次，每次3h，合并提取液，過(guò)濾，將濾液濃縮至35℃下測(cè)相對(duì)密度為1.20g/ml的浸膏，噴霧干燥后加入粉碎過(guò)后的煅燒珍珠母、磁石，得中藥組合物。

對(duì)比例4、預(yù)防和/或治療心腦血管疾病的中藥組合物的制備

對(duì)比例4與實(shí)施例4的區(qū)別在于，去掉d)二次輻照處理步驟，其余參數(shù)與操作參考實(shí)施例4。

對(duì)比例5、預(yù)防和/或治療心腦血管疾病的中藥組合物的制備

對(duì)比例5與實(shí)施例4的區(qū)別在于，d)二次輻照處理步驟中不加入核酸，其余參數(shù)與操作參考實(shí)施例4。

試驗(yàn)例一、不同制備方法對(duì)中藥組合物中總黃酮含量的影響

1.1材料

本發(fā)明實(shí)施例4以及對(duì)比例1～3制備得到的中藥組合物。試驗(yàn)分析用蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品，購(gòu)于中國(guó)醫(yī)藥集團(tuán)上海化學(xué)試劑公司，所有分析用試劑均為分析純。

1.2試驗(yàn)方法

1.2.1標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

準(zhǔn)確稱取于120℃干燥至恒重的無(wú)水蘆丁(作黃酮標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照)9.5mg，用60％的乙醇定容于50ml容量瓶中，搖勻，得到濃度為0.19mg/ml的標(biāo)準(zhǔn)品溶液，作為貯備液備用。準(zhǔn)確量取此液0.0、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0、7.0ml于25ml容量瓶中，分別加5％亞硝酸鈉和10％硝酸鋁溶液各0.3ml，放置6min。加1mol/ml氫氧化鈉溶液4.0ml，分別用30％的乙醇稀釋至刻度，混勻，放置16min，并根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線求出總黃酮濃度-吸光度回歸方程，得出總黃酮濃度計(jì)算公式。

1.2.2樣品中總黃酮含量的測(cè)定

1.2.2.1樣品液的制備

準(zhǔn)確稱取實(shí)施例4和對(duì)比例1～3制備得到的中藥組合物樣品各5g，用95％乙醇回流提取5h(溫度恒定于70℃)，過(guò)濾，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀減壓濃縮至近干，加10ml蒸餾水溶解后，用20ml正丁醇萃取至水液無(wú)黃酮反應(yīng)為止。減壓回收正丁醇至近干，加適量30％乙醇溶解，過(guò)濾，移至250ml容量瓶中，再用30％乙醇稀釋至刻度，搖勻，此即為樣品提取液。精密吸取此溶液5ml，置于25ml容量瓶中，加30％乙醇稀釋至刻度，得各待測(cè)樣品液。

1.2.2.2樣品液的測(cè)定

準(zhǔn)確吸取各待測(cè)樣品液5ml，其余操作同標(biāo)準(zhǔn)曲線制作的測(cè)定方法。測(cè)定吸光度后，用公式計(jì)算總黃酮的含量，每組重復(fù)測(cè)定3次，取平均值。

2.結(jié)果分析

樣品中總黃酮的含量

表1樣品中總黃酮含量

結(jié)果分析：結(jié)果表明，在乙醇回流提取的基礎(chǔ)上結(jié)合脈沖電磁場(chǎng)，能夠使提取物中總黃酮的含量提高152.1％；從對(duì)比例1和對(duì)比例2的試驗(yàn)結(jié)果可以明顯看出，在進(jìn)行脈沖電磁場(chǎng)處理前，增加輻照處理步驟，能夠使總黃酮的得率提高65.2％，而如果在輻照過(guò)程中不加入催化劑硫酸亞鐵，則會(huì)導(dǎo)致總黃酮的得率下降37.1％。

試驗(yàn)例二、二次輻照處理對(duì)中藥組合物毒性的影響

2.1材料

取實(shí)施例4以及對(duì)比例4制備得到的中藥組合物各5g，用10ml蒸餾水溶解，得各樣品待測(cè)液，人正常肝細(xì)胞hl-7702(l02)，購(gòu)自上海君瑞生物技術(shù)有限公司。

2.2方法

將人正常肝細(xì)胞hl-7702(l02)以每孔3000～6000個(gè)細(xì)胞的數(shù)量接種到96孔板，待細(xì)胞貼壁后，加入上述各樣品待測(cè)液，培養(yǎng)48h，每孔加入10μl濃度為5mg/ml的mtt溶液，繼續(xù)培養(yǎng)4h，然后棄去培養(yǎng)液每孔加入100μl的dmso，于恒速搖床上避光搖晃。待結(jié)晶物充分溶解后，在酶標(biāo)儀上讀取od值(波長(zhǎng)570nm，參考波長(zhǎng)630nm)，讀取每孔的吸光值，計(jì)算各組細(xì)胞存活率。

2.3結(jié)果

表2二次輻照處理對(duì)中藥組合物毒性影響的結(jié)果

2.4結(jié)果分析

加入經(jīng)二次輻照處理后制備得到的中藥組合物共培養(yǎng)后，肝細(xì)胞的存活率仍然高達(dá)98％，而去掉二次輻照處理制備得到的中藥組合物，其與肝細(xì)胞共培養(yǎng)后，細(xì)胞存活率有了顯著的下降，這說(shuō)明，二次輻照處理能夠有效降低中藥組合物的毒性。

試驗(yàn)例三、中藥組合物對(duì)冠心病小鼠血管內(nèi)et-1、no、ace的影響

3.1試驗(yàn)動(dòng)物昆明小鼠50只，雄性，5～8周齡，體質(zhì)量18～20克，spf級(jí)。

3.2試驗(yàn)方法

3.2.1造模第一階段(氣虛血淤證模型)，采用“游泳+饑餓+高脂飲食”的復(fù)合方法誘導(dǎo)小鼠氣虛血淤證模型?？瞻讓?duì)照組給予正常飲食，模型對(duì)照組、實(shí)施例4組(實(shí)施例4制備得到的中藥組合物)、對(duì)比例5組(對(duì)比例5制備得到的中藥組合物)以及陽(yáng)性對(duì)照組(中國(guó)專利申請(qǐng)cn102210835b所述中藥組合物)運(yùn)動(dòng)游泳法使小鼠達(dá)到力竭狀態(tài)，給予饑餓喂養(yǎng)，食量為正常小鼠每日攝食量的60％，飼料尾高脂飼料(市售精面50％、基礎(chǔ)飼料0％、豬油20％、蔗糖10％、蛋黃7％、膽固醇25％、牛膽鹽0.5％，充分混合，烤熟后備用)，造模周期為6周。

3.2.2造模第二階段(心肌缺血模型)氣虛血淤證造模結(jié)束后，進(jìn)行心肌缺血模型的復(fù)制。除空白對(duì)照組外，各組按20單位/kg劑量腹腔注射垂體后葉素，空白對(duì)照組注射等體積蒸餾水，每日注射一次。2周后，從5組內(nèi)分別隨機(jī)抓取小鼠，烏拉坦1μg/g麻醉后用心電圖記錄小鼠的心電圖，通過(guò)軟件記錄數(shù)據(jù)，觀察心率和t波高度變化來(lái)判斷心肌缺血模型是否成功。

3.2.3驗(yàn)證模型造模組小鼠與對(duì)照組小鼠對(duì)比具有以上特征，即為造模成功：①行為學(xué)特征：造模組小鼠表現(xiàn)出倦怠少動(dòng)，活動(dòng)無(wú)力，毛發(fā)枯槁，稀疏脫發(fā)等，對(duì)照組小鼠則活動(dòng)自如，毛色潔白光澤，未見其他異樣；②血液流變學(xué)：造模組小鼠高、中、低切變率的全血粘度均顯著高于或低于對(duì)照組，造模組的血漿粘度高于對(duì)照組；③心肌缺血模型驗(yàn)證：造模組的小鼠心率增快，心電圖顯示t波低平或倒置。

3.3給藥方法造模小鼠每日以藥液灌胃，給藥劑量按人鼠體表面積折算法計(jì)算，本發(fā)明是實(shí)施例4組、對(duì)比例5組和陽(yáng)性對(duì)照組藥量均為1.5g/(kg.d)，每日予懸濁液灌胃；模型組和空白對(duì)照組小鼠給予蒸餾水灌胃，連續(xù)給藥4周。

3.4指標(biāo)檢測(cè)給藥4周后，立即行小鼠眶周靜脈取血，血液不經(jīng)任何處理，予室溫放置。低溫下3000r/min離心15min，取上層血清檢測(cè)et-1、no和ace含量，操作嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明進(jìn)行。

3.4統(tǒng)計(jì)學(xué)分析用spss軟件包進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。

4.結(jié)果如表3所示。

表3各組小鼠血管內(nèi)皮細(xì)胞功能相關(guān)指標(biāo)et-1、no和ace濃度比較

注：與空白對(duì)照組相比，^*p＜0.05，^**p＜0.01，與模型組相比，^#p＜0.05，^##p＜0.01。

結(jié)果顯示：與空白對(duì)照組相比，模型組小鼠血清e(cuò)t-1和ace濃度極顯著升高，no的濃度極顯著降低，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。與模型組相比，本發(fā)明實(shí)施例4組和陽(yáng)性對(duì)照組均能顯著降低冠心病模型小鼠血清內(nèi)et-1和ace的濃度，升高no的濃度，差異具有顯著性。對(duì)比例5組與模型組相比，能顯著降低冠心病模型小鼠血清內(nèi)ace的濃度和顯著升高no濃度，同時(shí)，et-1的濃度也有小幅度的降低，但差異不顯著，不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。這可能是因?yàn)?，核酸的加入能夠降低了二次輻照處理?duì)中藥有效成分的破壞。

試驗(yàn)四、本發(fā)明中藥組合物治療出血性中風(fēng)急性期的臨床研究

4.1臨床資料

4.1.1診斷標(biāo)準(zhǔn)：滿分為30分，≥10分即可診斷為瘀熱阻竅證。

①神情：a、心煩(2分)；b、躁擾不寧(3分)；c、神昏譫語(yǔ)(4分)；②發(fā)熱類型：a、頭面烘熱(2分)；b、潮熱(3分)；c、煩熱(4分)；③面唇：a、面唇深紅(3分)；b、面唇暗紅(4分)；c、面唇深紫或紫暗紅(5分)；④腹癥：a、腹脹(1分)；b、腹?jié)M(2分)；c、腹痛(3分)；⑤大便：a、便干或難解(1分)；b、便干3日未解(2分)；c、便干3日以上未解(3分)；⑥舌質(zhì)：a、暗紅(3分)；b、瘀點(diǎn)或瘀斑(4分)；c、絳或紫或舌下脈絡(luò)青紫(5分)；⑦口中感覺(jué)：口干(2分)；⑧脈象：弦或滑或澀或結(jié)(2分)；⑨舌苔：黃或灰黑(2分)。

4.2納入標(biāo)準(zhǔn)：

①符合腦出血西醫(yī)診斷標(biāo)準(zhǔn)；②符合出血性中風(fēng)急性期瘀熱阻竅證診斷標(biāo)準(zhǔn)；③年齡≤90歲；④發(fā)病72h以內(nèi)入院且患者知情同意。

排除標(biāo)準(zhǔn)：①短暫性腦缺血發(fā)作、腦梗死、蛛網(wǎng)膜下腔出血及由血液病、腫瘤或外傷等引起的顱內(nèi)出血；②腦疝或深度昏迷者；③有嚴(yán)重心、肺、肝、腎并發(fā)癥者。

4.3一般資料

出血性中風(fēng)患者共100例，其中男73例，女27例，年齡32～88歲，平均年齡55±2歲。

4.4治療方法

治療組：本發(fā)明實(shí)施例4制備得到的中藥組合物，加100ml水，口服，每日1次，21天為1療程；

陽(yáng)性對(duì)照組：中國(guó)專利申請(qǐng)cn102210835b所述中藥組合物，加100ml水，口服，每日1次，21天為1療程。

4.5觀察指標(biāo)及方法

①神志、語(yǔ)言、運(yùn)動(dòng)功能及神經(jīng)系統(tǒng)體征等改善情況參照《中風(fēng)病診斷與療效評(píng)定標(biāo)準(zhǔn)》中的“中風(fēng)病類診斷評(píng)分”評(píng)價(jià)，于治療前后各評(píng)價(jià)1次。中風(fēng)病類診斷評(píng)分主要從患者的神志、語(yǔ)言、運(yùn)動(dòng)功能及神經(jīng)系統(tǒng)體征等方面評(píng)定，采用計(jì)分法，滿分為52分。評(píng)分越高，表明病情越重，神經(jīng)功能損傷越嚴(yán)重。②瘀熱阻竅證證候評(píng)，于治療前、治療后11天及21天各評(píng)價(jià)1次；③頭部ct掃描腦出血量吸收情況，于治療前、治療后11天及21天各檢查1次。

4.6統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用spss進(jìn)行數(shù)據(jù)處理。

4.7結(jié)果如表4～6所示。

表4兩組患者治療前后中風(fēng)病類診斷評(píng)分比較

注：與治療前相比，^*p＜0.05，^**p＜0.01，與陽(yáng)性對(duì)照組同項(xiàng)目相比，^#p＜0.05，^##p＜0.01。

表5兩組患者治療前后瘀熱阻竅證候診斷評(píng)分比較

注：與本組治療前相比，^*p＜0.05，^**p＜0.01，與本組治療后11天相比，^#p＜0.05，^##p＜0.01；與對(duì)照組同項(xiàng)目比較，^△p＜0.05，^△△p＜0.01。

表6兩組患者治療前后腦出血量的比較

注：與本組治療前相比，^*p＜0.05，^**p＜0.01，與本組治療后11天相比，^#p＜0.05，^##p＜0.01；與對(duì)照組同項(xiàng)目比較，^△p＜0.05，^△△p＜0.01。

結(jié)果：

表4顯示，采用本發(fā)明實(shí)施例4制備得到的中藥組合物治療后中風(fēng)病類診斷評(píng)分明顯下降，與治療前比較差異極顯著，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.01)；且治療前后差值明顯大于陽(yáng)性對(duì)照組(p＜0.01)。

表5顯示，采用本發(fā)明實(shí)施例4制備得到的中藥組合物治療后11天、21天后瘀熱阻竅證候診斷評(píng)分與治療前相比差異極顯著，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.01)，與對(duì)照組同組項(xiàng)目相比，差異明顯(p＜0.01)。

表6顯示，采用本發(fā)明實(shí)施例4制備得到的中藥組合物治療后11天、21天后腦出血量較治療前下降明顯，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.01)；且治療21天后較治療11天后，評(píng)分亦下降明顯(p＜0.01)；與對(duì)照組同組項(xiàng)目相比，差異明顯(p＜0.01)。

綜上所述，本發(fā)明提供的中藥組合物除了可以用于治療冠心病外，對(duì)出血性中風(fēng)也具有顯著的療效。

上述實(shí)施例僅例示性說(shuō)明本發(fā)明的原理及其功效，而非用于限制本發(fā)明。任何熟悉此技術(shù)的人士皆可在不違背本發(fā)明的精神及范疇下，對(duì)上述實(shí)施例進(jìn)行修飾或改變。因此，舉凡所屬技術(shù)領(lǐng)域中具有通常知識(shí)者在未脫離本發(fā)明所揭示的精神與技術(shù)思想下所完成的一切等效修飾或改變，仍應(yīng)由本發(fā)明的權(quán)利要求所涵蓋。