專利名稱：Dna甲基轉(zhuǎn)移酶抑制劑的制作方法
背景技術(shù)：
1.發(fā)明領(lǐng)域本發(fā)明涉及抗生素領(lǐng)域，尤其是抗菌化合物。特別是本發(fā)明涉及靶向DNA修飾酶的抗生素，尤其是腺嘌呤DNA甲基轉(zhuǎn)移酶，它是各種不同細(xì)菌病原體的成分，該細(xì)菌病原體包括那些為細(xì)菌細(xì)胞生長(zhǎng)所必需者。本發(fā)明特別提供了這種腺嘌呤DNA甲基轉(zhuǎn)移酶的抑制劑，其對(duì)胞嘧啶甲基轉(zhuǎn)移酶的抑制作用很小或沒(méi)有抑制作用，并因此對(duì)真核細(xì)胞尤其是哺乳動(dòng)物細(xì)胞的抗菌作用有限。本發(fā)明還提供了制備和使用本發(fā)明腺嘌呤DNA甲基轉(zhuǎn)移酶抑制劑的方法，以及它們的藥物組合物。
2.發(fā)明背景現(xiàn)代醫(yī)學(xué)發(fā)展的一個(gè)標(biāo)志是降低與細(xì)菌感染有關(guān)的發(fā)病率和死亡率。20世紀(jì)早期和中期各種抗生素藥物的開(kāi)發(fā)第一次為醫(yī)學(xué)從業(yè)人員提供了對(duì)各種感染性疾病的有效治療。
但是，濫用常規(guī)抗生素和感染性細(xì)菌群的自然選擇已導(dǎo)致了大多數(shù)細(xì)菌感染性藥劑的耐藥性發(fā)展為不同程度的大多數(shù)抗生素藥劑的耐藥性。嚴(yán)重情況下，諸如MRSA(耐多種藥物的StaphA)，目前只有一種或僅一些抗生素是有效的。另外，免疫缺陷綜合癥的存在導(dǎo)致另外發(fā)生需要抗生素加強(qiáng)治療的機(jī)會(huì)性致病感染。
因此，本領(lǐng)域越來(lái)越需要新的更有效的抗生素化合物來(lái)治療對(duì)現(xiàn)有的療法產(chǎn)生耐藥性的細(xì)菌感染。
大多數(shù)細(xì)菌通過(guò)使特定的核苷酸堿基甲基化來(lái)修飾它們的基因組DNA。DNA甲基化對(duì)于基因調(diào)節(jié)和突變損傷的修復(fù)很關(guān)鍵(見(jiàn)Jost和Soluz，1993，DNA甲基化，分子生物學(xué)和生物學(xué)顯著性，Birhauser VerlagBasel，Switzerland；Palmer和Marinus，1994，《基因》1431-12；Dryden，1999，“細(xì)菌DNA甲基轉(zhuǎn)移酶”，在《S-腺苷蛋氨酸依賴性甲基轉(zhuǎn)移酶結(jié)構(gòu)和功能》中，X.Cheng和R.M.Blumenthal(編)，World Scientific Publishing，p.283340，評(píng)論)。DNA甲基化是由一類具有不同序列特征的酶來(lái)催化的。有這樣一些DNA甲基轉(zhuǎn)移酶，例如(dam)，它們使GATC序列中的腺嘌呤殘基或者CCAGG或CCTGG序列中的胞嘧啶(dcm)殘基甲基化，這些序列不包含在關(guān)聯(lián)限制酶的識(shí)別部位。有這樣一些DNA甲基化轉(zhuǎn)移酶，它們使包含在關(guān)聯(lián)限制酶的識(shí)別部位的殘基甲基化(例如，ApaI，AvaII，BclI，ClaI，DpnII，EcoRI，HaeIII，HhaI，MboI，和MspI；見(jiàn)Marinus和Morris，1973，《細(xì)菌學(xué)雜志》(J.Bacteriol.)1141143-1150；May和Hatman，1975，《細(xì)菌學(xué)雜志》(J.Bacteriol.)123768-770；Heitman，1993，Genet.Eng.1557-108)。另外，本發(fā)明人已經(jīng)從新月柄桿菌中發(fā)現(xiàn)了一種腺嘌呤DNA甲基轉(zhuǎn)移酶，這種酶可使GANTC序列中的腺嘌呤殘基甲基化，這公開(kāi)在國(guó)際申請(qǐng)公開(kāi)號(hào)WO98/12206中。這種甲基轉(zhuǎn)移酶是細(xì)胞周期調(diào)節(jié)性的酶并且是成功的細(xì)菌細(xì)胞生長(zhǎng)所必需的；酶的抑制作用使得細(xì)菌不能生存。在流產(chǎn)布魯氏菌、幽門(mén)螺桿菌、根癌土壤桿菌和苜宿中華根瘤菌中也發(fā)現(xiàn)了相似的甲基轉(zhuǎn)移酶。與細(xì)菌細(xì)胞相比，真核細(xì)胞尤其是哺乳動(dòng)物細(xì)胞中的DNA甲基化限于包括序列CpG部位的胞嘧啶甲基化(Razin和Riggs，1980，《科學(xué)》210604-610；Jost和Bruhat，1997，Prog.NucleicAcid Res.Molec.Biol.57217-248)。
因此，DNA甲基化的存在，尤其是，本發(fā)明人在某些細(xì)菌種類中發(fā)現(xiàn)有細(xì)胞-周期調(diào)節(jié)的腺嘌呤DNA甲基轉(zhuǎn)移酶，表明本領(lǐng)域?qū)τ诳股鼗钚孕枰岢鲂碌难芯磕繕?biāo)。
發(fā)明概要本發(fā)明提供了能抑制細(xì)菌細(xì)胞中的腺嘌呤DNA甲基轉(zhuǎn)移酶的抗生素化合物。本發(fā)明的抗生素化合物特別抑制腺嘌呤特異性細(xì)菌DNA甲基轉(zhuǎn)移酶，而不抑制細(xì)菌的或真核細(xì)胞的，尤其是哺乳動(dòng)物和大多數(shù)特定的人的胞嘧啶特異性DNA甲基轉(zhuǎn)移酶。本發(fā)明化合物還抑制植物中的腺嘌呤特異性DNA甲基轉(zhuǎn)移酶。這種抗生素化合物也能以藥物組合物的形式給動(dòng)物尤其是人服用，用于治療細(xì)菌病原性疾病、或機(jī)會(huì)性感染，它是由免疫妥協(xié)或衰弱狀態(tài)的動(dòng)物(尤其是人)的一種細(xì)菌感染的。
本發(fā)明還提供了制備抗生素化合物及其藥物組合物的方法，和治療上使用所述抗生素的方法。還提供了本發(fā)明抗生素化合物和藥物組合物的試劑盒和包裝形式。
本發(fā)明特別優(yōu)選的實(shí)施方式體現(xiàn)在下列對(duì)某些優(yōu)選實(shí)施方式的更為詳細(xì)的說(shuō)明和權(quán)利要求書(shū)中。


圖1和2表示細(xì)菌腺嘌呤DNA甲基轉(zhuǎn)移酶的“活性部位”的示意圖。
優(yōu)選實(shí)施方式的詳細(xì)說(shuō)明本發(fā)明提供了作為細(xì)菌腺嘌呤DNA甲基轉(zhuǎn)移酶抑制劑的抗生素、尤其是抗細(xì)菌的化合物。本發(fā)明化合物對(duì)任何產(chǎn)生腺嘌呤DNA甲基轉(zhuǎn)移酶的細(xì)菌種類具有抗細(xì)菌特性、生長(zhǎng)抑制特性。這些酶包括屬于本領(lǐng)域已知的細(xì)菌限制/修飾體系成分的腺嘌呤DNA甲基轉(zhuǎn)移酶、以及細(xì)胞周期調(diào)節(jié)的腺嘌呤DNA甲基轉(zhuǎn)移酶(CcrM)，例如，公開(kāi)在國(guó)際申請(qǐng)公開(kāi)號(hào)W098/12206中的那些，引作參考。因此，本發(fā)明特別提供了腺嘌呤DNA甲基轉(zhuǎn)移酶抑制劑。
本發(fā)明的腺嘌呤DNA甲基轉(zhuǎn)移酶抑制劑包括一類新的廣譜抗生素。大多數(shù)細(xì)菌種類具有一種DNA甲基轉(zhuǎn)移酶，該轉(zhuǎn)移酶是修飾劑的部分，尤其與限制酶有關(guān)，它保持細(xì)胞DNA的完整性、同時(shí)防衛(wèi)外來(lái)的(特別是大多數(shù)病毒的)DNA。另外，某些細(xì)菌產(chǎn)生為細(xì)菌細(xì)胞生長(zhǎng)所必需的腺嘌呤DNA甲基轉(zhuǎn)移酶。為本發(fā)明抑制劑的抗細(xì)菌活性提供適當(dāng)目標(biāo)的醫(yī)學(xué)上重要的細(xì)菌種類包括革蘭氏陽(yáng)性細(xì)菌，包括球菌例如葡萄球菌類和鏈球菌類；桿菌，包括桿狀菌類、棒狀桿菌類和梭菌類；細(xì)絲狀細(xì)菌，包括防線菌類和鏈霉菌類；革蘭氏陰性細(xì)菌，包括球菌例如奈瑟氏菌屬類；桿菌，例如假單胞菌屬類、布魯氏桿菌屬類、植物肥大病菌屬類、博代氏桿菌屬類、埃希氏桿菌屬類、志賀氏菌屬類、耶爾森氏菌屬類、沙門(mén)氏菌屬類、克雷白氏桿菌屬類、水棲菌屬類、嗜血桿菌類、巴斯德氏菌屬類、和鏈桿菌屬類；螺旋體類、彎曲桿菌屬類、弧菌屬類；和細(xì)胞內(nèi)的細(xì)菌包括立克次氏體屬類和衣原體屬類。
作為本發(fā)明腺嘌呤DNA甲基轉(zhuǎn)移酶抑制劑的目標(biāo)物的特殊細(xì)菌種類包括金黃色葡萄球菌、腐生葡萄球菌、釀膿鏈球菌、無(wú)乳鏈球菌、肺炎鏈球菌、炭疽芽孢桿菌、白喉棒桿菌、產(chǎn)氣莢膜梭菌、肉毒梭菌、破傷風(fēng)梭菌、淋病奈瑟氏球菌、腦膜炎奈瑟氏球菌、銅綠假單胞菌、侵肺軍團(tuán)菌、大腸埃希氏菌、鼠疫耶爾森氏菌、流感嗜血桿菌、幽門(mén)螺桿菌、胚胎彎曲桿菌、霍亂弧菌、副溶血弧菌、徹白密螺旋體、衣氏放線菌、普氏立克次氏體、立氏立克次氏體、砂眼衣原體、鸚鵡熱衣原體、流產(chǎn)布魯氏菌或根癌土壤桿菌。
本發(fā)明腺嘌呤DNA甲基轉(zhuǎn)移酶抑制劑的一個(gè)重要特性在于含胞嘧啶特異性DNA甲基轉(zhuǎn)移酶的這些物質(zhì)的活性水平低。這是因?yàn)榘奏ぬ禺愋訢NA甲基轉(zhuǎn)移酶出現(xiàn)在哺乳動(dòng)物的(尤其是人的)細(xì)胞中，并且本發(fā)明腺嘌呤DNA甲基轉(zhuǎn)移酶的一個(gè)有用特性是對(duì)哺乳動(dòng)物的甲基轉(zhuǎn)移酶很少有或沒(méi)有抑制活性。這一特性使得這些分子具有本發(fā)明所提供的對(duì)細(xì)菌細(xì)胞特異性的有利特性、并且對(duì)哺乳動(dòng)物的(最優(yōu)選人的)細(xì)胞很少有抗生素活性。優(yōu)選的是，這些化合物對(duì)胞嘧啶特異性DNA甲基轉(zhuǎn)移酶的IC50大于500μM。
本發(fā)明所提供的抑制化合物可以式I表示 其中R1、R2和R2相同或不同、并且各自為氫、低級(jí)烷基、芳基或取代的芳基、低級(jí)烷氧基、低級(jí)烷氧烷基、或環(huán)烷基或環(huán)烷基烷氧基，其中每個(gè)環(huán)烷基基團(tuán)具有3-7個(gè)環(huán)原子，其中該環(huán)原子中至多兩個(gè)是或不是選自氧和氮的雜原子，且其中每個(gè)烷基、芳基或環(huán)烷基基團(tuán)均可被氫、低級(jí)烷基或低級(jí)烷氧基、芳基或取代的芳基取代或不取代，并且其中R3可以是核糖、脫氧核糖或其磷酸化衍生物，包括硫代磷酸酯、磷酰胺糖醇和本領(lǐng)域已知的相似衍生物，條件是R1、R2和R3不都是氫，當(dāng)R3是核糖、脫氧核糖或其磷酸化衍生物時(shí)，R1和R2不都是氫。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方式中，R1為H，R2為(2-二苯基硼酸酯)乙基或二苯基丙基，且R3為H、2-(4-嗎啉基)-乙基、3-(N-鄰苯二甲酰)-氨基丙基、2-(2-(2-羥基乙氧基)乙氧基)乙基、或乙基-2-(丙烯酸酯)-甲基。在另外優(yōu)選的實(shí)施方式中，R1為H，R2為(S-高胱氨酸基)甲基，R3為核糖、5’-磷?；颂恰⒚撗鹾颂腔?’-磷?；撗鹾颂?。在其它優(yōu)選的實(shí)施方式中，R2為H，R1和R2均為2-(二苯基甲基)環(huán)戊基或2-(二苯基羥基甲基)環(huán)戊基。在另外的優(yōu)選實(shí)施方式中，R1為H，R2為丙氨酰基丁基酯、2-羧基亞氨基-2-氨基乙基、2-氨基乙基或單-或二取代的2-氨基乙基、R3為2-(4-嗎啉基)-乙基。
本發(fā)明還提供了式II化合物 其中鍵1或2可以是雙鍵或單鍵，Ar1和Ar2可以相同或不同，并且各自為芳基或雜芳基、或者在一個(gè)或多個(gè)位置用鹵素、硝基、亞硝基、低級(jí)烷基、芳基或取代的芳基、低級(jí)烷氧基、低級(jí)烷氧基烷基、或環(huán)烷基或環(huán)烷基烷氧基取代的芳基或雜芳基，其中每個(gè)環(huán)烷基基團(tuán)具有3-7個(gè)環(huán)原子，其中該環(huán)原子中至多兩個(gè)是或不是選自硫、氧和氮的雜原子，且其中烷基、芳基或環(huán)烷基基團(tuán)均可被鹵素、低級(jí)烷基或低級(jí)烷氧基、芳基或取代的芳基、鹵素、硝基、亞硝基、醛、羧酸、酰胺、酯或硫酸鹽取代或不取代，Ra、Rb和Rc相同或不同，并且各自為氫、鹵素、硝基、亞硝基、低級(jí)烷基、低級(jí)烷氧基、低級(jí)烷氧基烷基、或環(huán)烷基或環(huán)烷基烷氧基、或芳基或雜芳基、或在一個(gè)或多個(gè)位置以低級(jí)烷基、芳基或取代的芳基、低級(jí)烷氧基、低級(jí)烷氧基烷基、或環(huán)烷基或環(huán)烷基烷氧基取代的芳基或雜芳基，這里每個(gè)環(huán)烷基基團(tuán)具有3-7個(gè)環(huán)原子，其中該環(huán)原子中至多兩個(gè)是或不是選自硫、氧和氮的雜原子，并且其中烷基、芳基或環(huán)烷基基團(tuán)均可被鹵素、低級(jí)烷基或低級(jí)烷氧基、芳基或取代的芳基、鹵素、硝基、亞硝基、醛、羧酸、酰胺、酯或硫酸鹽取代或不取代，或者其中Ra，Rb和Rc可被芳族的、脂肪族的、雜芳族的、雜脂肪族的環(huán)結(jié)構(gòu)或其取代方式連接。
本發(fā)明還提供了嘌呤衍生物的組合化學(xué)品文庫(kù)。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方式中，通過(guò)嘌呤環(huán)的C6位的氨化將6-氯嘌呤轉(zhuǎn)化為腺嘌呤衍生物；本發(fā)明將這些文庫(kù)叫做“N6庫(kù)”。在另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方式中，在嘌呤環(huán)的N9位衍生為未取代的腺嘌呤或6-氯嘌呤；本發(fā)明將這些文庫(kù)叫做“N9庫(kù)”。還有一個(gè)實(shí)施方式中，使C6和N9位均被衍生，用胺或取代的氨基使C6位氨化；本發(fā)明將這些文庫(kù)叫做“N6/N9庫(kù)”。
在N6或N9庫(kù)的制備中，在各個(gè)“罐”或反應(yīng)混合物中將起始嘌呤環(huán)結(jié)構(gòu)與多種胺或取代的胺(對(duì)于N6庫(kù))或鹵化物(對(duì)于N9庫(kù))中的每一個(gè)反應(yīng)。因此這些庫(kù)是以起始原料之間的各個(gè)反應(yīng)產(chǎn)物的集合形式出現(xiàn)。對(duì)于N6/N9庫(kù)，最優(yōu)選首先衍生N9位、然后在C6位反應(yīng)。在這些庫(kù)中，典型的是使用單一鹵化物(導(dǎo)致N9位的均勻取代)和多種胺(優(yōu)選2-5種胺，最優(yōu)選3種不同的胺)進(jìn)行反應(yīng)。由此產(chǎn)生化合物的一種混合物。另外，根據(jù)本發(fā)明的方法可生產(chǎn)區(qū)域異構(gòu)體(包括N1、N3、和N7異構(gòu)體)。典型的是，也可產(chǎn)生缺少嘌呤起始原料的反應(yīng)混合物、以監(jiān)測(cè)鹵化物與不同胺之間的反應(yīng)。
基于對(duì)腺嘌呤DNA甲基轉(zhuǎn)移酶的推定活性部位的理解，本發(fā)明還提供了稱謂“合理設(shè)計(jì)”的腺嘌呤DNA甲基轉(zhuǎn)移酶抑制劑，如圖1所示。正如圖中所示，這種酶在DNA鏈中具有對(duì)腺嘌呤殘基的結(jié)合位點(diǎn)，和S-腺苷蛋氨酸結(jié)合位點(diǎn)，這提供了所示的供體甲基基團(tuán)。所謂的“合理設(shè)計(jì)”抑制劑在酶的結(jié)合位點(diǎn)模仿分子的構(gòu)型，如圖2所示。這些化合物通常包括一種腺嘌呤殘基，它含有或不含5’-磷酸鹽基團(tuán)，通過(guò)亞甲基橋與高半胱氨酸部分共價(jià)連接。
本發(fā)明還提供了這樣的一類腺嘌呤DNA甲基轉(zhuǎn)移酶抑制劑，它們是硼酸衍生物、優(yōu)選二苯基或取代的二苯基硼酸的衍生物、最優(yōu)選其二苯基或取代的二苯基硼酸烷基胺酯。在優(yōu)選的實(shí)施方式中，本發(fā)明提供了包括二-(對(duì)氟苯基)硼酸8-羥基喹啉(quiniline)酯、二-(對(duì)-氯苯基)硼酸8-羥基喹啉酯、二苯基硼酸8-羥基喹啉酯、二-(對(duì)-氟苯基)硼酸乙醇胺酯、和二-(對(duì)-氯苯基)硼酸乙醇胺酯。
本發(fā)明還提供了使用固相化學(xué)方法合成的腺嘌呤DNA甲基轉(zhuǎn)移酶抑制劑，最優(yōu)選使用包括本文所提供的用于在嘌呤環(huán)的C6或N9位取代的殘基(例如胺或鹵化物)的樹(shù)脂。在優(yōu)選的實(shí)施方式中，提供了這些樹(shù)脂、由此利用共價(jià)鍵將取代基與樹(shù)脂共價(jià)結(jié)合，這種共價(jià)鍵可被特定裂解以便在完成固相合成后從樹(shù)脂中釋放該化合物。優(yōu)選的是，該取代基存在于含活性基團(tuán)的樹(shù)脂上，例如胺或鹵化物，易受與樹(shù)脂接觸的嘌呤的影響。反應(yīng)后，該嘌呤通過(guò)取代基與樹(shù)脂連接，然后可逐步處理反應(yīng)產(chǎn)物并采用本領(lǐng)域眾所周知的方法從樹(shù)脂中去除。參見(jiàn)，例如Bunin，1998，《組合索引》(THECOMBINATORIAL INDEX)，學(xué)院出版社。
在某些情況下，本發(fā)明化合物可包含一個(gè)或多個(gè)的不對(duì)稱的碳原子，因此這些化合物可以不同的立體異構(gòu)形式存在。例如這些化合物可以是外消旋物或旋光體形式。在這些情況下，單一的對(duì)映體即旋光活性形式可通過(guò)不對(duì)稱合成或通過(guò)外消旋物的拆分而獲得。例如可采用常規(guī)方法如在拆分試劑存在下的結(jié)晶作用或使用如手性HPLC柱的色譜法完成外消旋物的拆分。
有利的是，采用上述樹(shù)脂的固相化學(xué)方法可測(cè)定取代基是否具有手性或與抗菌活性有關(guān)的立體定向性。在這些實(shí)施方式中，使用旋光類如氨基酸的外消旋物混合物制備各種化合物用于篩選。由于發(fā)現(xiàn)了所得到的化合物具有腺嘌呤DNA甲基轉(zhuǎn)移酶抑制活性，每個(gè)立體異構(gòu)體的旋光純制劑可用于制備相應(yīng)的腺嘌呤DNA甲基轉(zhuǎn)移酶抑制化合物的旋光純異構(gòu)體，以確定異構(gòu)體之間的生物活性是否有任何不同。這種方法較可供選擇的將外消旋混合物分離成立體異構(gòu)體成分的其它方法有效。
根據(jù)本發(fā)明不論推定的腺嘌呤DNA甲基轉(zhuǎn)移酶是如何制備的，對(duì)該化合物都分析其腺嘌呤和胞嘧啶特異性DNA甲基轉(zhuǎn)移酶活性。敏感細(xì)菌(已知表達(dá)一種腺嘌呤DNA甲基轉(zhuǎn)移酶)在抑制化合物存在和不存在的情況下均生長(zhǎng)，并且測(cè)定了在該化合物存在下的生長(zhǎng)抑制的程度與不存在該化合物的生長(zhǎng)比較。根據(jù)國(guó)際申請(qǐng)公開(kāi)No.W098/12206、通過(guò)使用半甲基化DNA、氚化S-腺苷蛋氨酸(C3H3)和純化腺嘌呤DNA甲基轉(zhuǎn)移酶的濾膜結(jié)合放射性檢測(cè)證實(shí)了每個(gè)生長(zhǎng)抑制化合物的作用機(jī)制(即，腺嘌呤DNA甲基轉(zhuǎn)移酶的抑制)。
本發(fā)明化合物可以互變異構(gòu)體溶液的形式存在。當(dāng)對(duì)一種互變異構(gòu)體形式給出了結(jié)構(gòu)和名稱時(shí)，則其它互變異構(gòu)體形式也包括在本發(fā)明中。本發(fā)明的代表性化合物包括、但不限于本文所公開(kāi)的化合物及其藥學(xué)上可接受的酸加成鹽和堿加成鹽。另外，如果得到了酸加成鹽形式的本發(fā)明化合物，則可通過(guò)堿化該酸式鹽溶液獲得游離堿。反之，如果產(chǎn)物是游離堿，則可根據(jù)從堿化合物中制備酸加成鹽的常規(guī)方法、通過(guò)將游離堿溶解在適當(dāng)?shù)挠袡C(jī)溶劑中并用酸處理該溶液而生產(chǎn)加成鹽，尤其是藥學(xué)上可接受的加成鹽。
本發(fā)明也包括本發(fā)明化合物的?；绑w藥物。本領(lǐng)域熟練技術(shù)人員都會(huì)清楚各種不同的合成方法可用于制備無(wú)毒性的本發(fā)明化合物的藥學(xué)上可接受的加成鹽和酰化前體藥物。
本發(fā)明中的“烷基”、“低級(jí)烷基”和“C1-C6烷基”意指具有1-6個(gè)碳原子的直鏈或支鏈烷基，例如甲基、乙基、丙基、異丙基、正丁基、仲丁基、叔丁基、戊基、2-戊基、異戊基、新戊基、己基、2-己基、3-己基和3-甲基戊基。
本發(fā)明中的“烷氧基”、“低級(jí)烷氧基”和“C1-C6烷氧基”意指具有1-6個(gè)碳原子的直鏈或支鏈烷基，例如甲氧基、乙氧基、丙氧基、異丙氧基、正丁氧基、仲丁氧基、叔丁氧基、戊氧基、2-戊基、異戊氧基、新戊氧基、己氧基、2-己氧基、3-己氧基和3-甲基戊氧基。
本發(fā)明中的術(shù)語(yǔ)“鹵素”意指氟、氯、溴和碘。
本發(fā)明中的“環(huán)烷基”、例如C3-C7環(huán)烷基意指具有3-7個(gè)碳原子的環(huán)烷基，例如環(huán)丙基、環(huán)丁基、環(huán)戊基、環(huán)己基和環(huán)庚基。在C3-C7環(huán)烷基基團(tuán)中，優(yōu)選在C5-C7環(huán)烷基基團(tuán)中，形成環(huán)的一個(gè)或兩個(gè)碳原子可用諸如硫、氧或氮的雜原子任選代替。這些基團(tuán)例如有哌啶基、哌嗪基、嗎啉基、吡咯烷基、咪唑烷基、噁唑烷基、氮雜全氫庚因基、氧氮雜全氫庚因基、氧雜庚環(huán)基、氧氮雜全氫因基、和氧二氮雜全氫因基。具有一個(gè)被氮或氧代替的原子數(shù)的C3和C4環(huán)烷基基團(tuán)包括氮雜環(huán)丙烯基、氮雜環(huán)丁烷基、氧雜環(huán)丁烷基、和環(huán)氧乙烷基。
“芳基”意指具有單環(huán)(例如苯基)、多環(huán)(例如二苯基)、或多稠合環(huán)的芳族碳環(huán)基團(tuán)，其中至少一個(gè)是芳族的(例如1，2，3，4-四氫萘基、萘基、蒽基、或菲基)，它可用例如鹵素、低級(jí)烷基、低級(jí)烷氧基、低級(jí)烷基硫代、三氟甲基、低級(jí)酰氧基、芳基、雜芳基、和羥基任選單、二或三取代。優(yōu)選的芳基包括苯基和萘基，其中每一個(gè)都如本文所述任選取代。
“雜芳基”意指一種或多種含有至少一個(gè)至四個(gè)選自氮、氧或硫的雜原子的5原、6原或7原環(huán)芳環(huán)體系。這些雜芳基基團(tuán)包括，例如噻吩基、呋喃基、噻唑基、咪唑基、(異)噁唑基、吡啶基、嘧啶基、(異)喹啉基、萘啶基、苯并咪唑基、苯并噁唑基。優(yōu)選的雜芳基為噻唑基、嘧啶基(優(yōu)選嘧啶-2-基)、和吡啶基。其它優(yōu)選的雜芳基包括1-咪唑基、2-噻吩基、1-，或2-喹啉基、或2-異喹啉基、1-，或2-四氫異喹啉基、2-或3-呋喃基和2-四氫呋喃基。
從本文的組合庫(kù)、固相合成、“合理的”藥物設(shè)計(jì)、或常規(guī)合成中的任一種方法均提供了本發(fā)明的細(xì)菌生長(zhǎng)抑制的、腺嘌呤DNA甲基轉(zhuǎn)移酶抑制化合物。組合庫(kù)的構(gòu)建根據(jù)本領(lǐng)域熟練技術(shù)人員所知道的方法制備組合庫(kù)。對(duì)于單取代庫(kù)(N6和N9)，將各個(gè)取代基用于單獨(dú)的反應(yīng)混合物中以制備本文所述的每個(gè)嘌呤衍生物。另一方面，在組合庫(kù)(本文為N6/N9)中，典型的是將一個(gè)位置(尤其是N9)與特定的取代基反應(yīng)，然后將多個(gè)取代基(最優(yōu)選3個(gè))的混合物用于衍生其它反應(yīng)位置(尤其是C6)。
在適合于經(jīng)濟(jì)地產(chǎn)生足夠的試驗(yàn)用產(chǎn)物的規(guī)模下進(jìn)行該反應(yīng)。優(yōu)選的是，這些反應(yīng)并行進(jìn)行，例如使用96-孔平皿、每一孔具有足夠小的體積(100-500μL)以使所需的試劑量最小。使用此類型的反應(yīng)容器也有利于平行處理和分析，包括這類方法的自動(dòng)改型。
a.N6庫(kù)將下列條件用于合成在N-6位取代的腺嘌呤類似物。在一種反應(yīng)示意圖中，將6-氯嘌呤在85℃與伯胺或仲胺的三乙胺和正丁醇溶液反應(yīng)過(guò)夜。或者，將這些試劑在85℃在碳酸鉀和二甲基甲酰胺的溶液中反應(yīng)過(guò)夜。此合成過(guò)程如反應(yīng)示意圖1所述。反應(yīng)示意圖1 R”和R為低級(jí)烷基、雜原子取代的低級(jí)烷基、芳基、雜芳基或取代的芳基或雜芳基，例如下列化合物。在此反應(yīng)中可使用任何伯胺或仲胺。這些反應(yīng)中用伯胺或仲胺的優(yōu)選方案如下組胺二鹽酸鹽去甲新福林鹽酸鹽1，2-二氨基丙烷5-氨基-1，3，3-三甲基環(huán)己烷甲基胺3-異丙氧基丙基胺二苯基硼酸、乙醇胺酯2-(2-氨基乙基氨基)-乙醇四氫糠胺5-甲基色胺鹽酸鹽3，3-二苯基丙胺1-(3-氨基丙基)-2-吡咯烷酮(pyrrolidinone)2-(2-氨基乙基)-1-甲基吡咯烷2-(氨基甲基)苯并咪唑二氫-氯水合物2，2，2-三氟乙胺鹽酸鹽L-肌肽(R)-(-)-1-氨基-2-丙醇2-(1-環(huán)己烯基)乙胺4-(三氟甲基)芐胺2，5-二氯戊胺鹽酸鹽(+/-)-4-氨基-3-羥基丁酸N，N-二甲基1，2-乙二胺3，3-二甲基丁基胺1，4-二氨基-2-丁酮二鹽酸鹽氨基甲基苯甲酸氨基羥基甲基丙二醇2-(氨基乙基)吡啶氨基丁醇金剛胺氨基己酸N-芐基乙醇胺乙基-6-氨基丁酸酯鹽酸鹽1，2-乙二胺2-環(huán)己-1-烯基乙胺這些胺產(chǎn)生不同的區(qū)域異構(gòu)體，即，對(duì)于一些化合物，可將胺加在不同取向的6-氯嘌呤的C6位上，依此含這種胺的反應(yīng)部分與C6共價(jià)結(jié)合。然而，這些區(qū)域異構(gòu)體的出現(xiàn)不是有害的，因?yàn)樗鼉H僅增加了庫(kù)中候選化合物的數(shù)目。
b.N9庫(kù)使用下列反應(yīng)示意圖制備N(xiāo)9庫(kù)。我們發(fā)現(xiàn)了反應(yīng)示意圖2的途徑2不產(chǎn)生含所有有機(jī)鹵化物(RivX or R4X)的產(chǎn)物，發(fā)現(xiàn)另一可能途徑B形成了所試驗(yàn)的全部有機(jī)鹵化物的產(chǎn)物。在每一可選擇的途徑中，將有機(jī)鹵化物與嘌呤(或者腺嘌呤或者6-氯嘌呤)在45℃下在碳酸鉀和二甲基甲酰胺中反應(yīng)過(guò)夜。但是，在途徑B中，通過(guò)在85℃下將首次反應(yīng)的產(chǎn)物與氫氧化銨反應(yīng)過(guò)夜、使N9-衍生的6-氯嘌呤轉(zhuǎn)化為N9-衍生的腺嘌呤。在相同的反應(yīng)混合物中順序進(jìn)行這兩種反應(yīng)。反應(yīng)示意圖2 Riv為低級(jí)烷基、雜原子取代的低級(jí)烷基、芳基、雜芳基或取代的芳基或雜芳基，例如下列化合物。
通過(guò)HPLC分析途徑B的產(chǎn)物、發(fā)現(xiàn)它是N-9和N-7取代的腺嘌呤類似物的混合物；在某些反應(yīng)混合物中也可以是N-1和N-3取代的類似物。如上所討論的，這些副產(chǎn)物的優(yōu)點(diǎn)在于它們的存在只是增加了庫(kù)中的候選分子數(shù)目。
任何有機(jī)鹵化物都可用于此反應(yīng)中。用于這些反應(yīng)中的優(yōu)選有機(jī)鹵化物如下甲基4-碘丁酸酯1-溴-3-苯基丙烷肉桂基溴化物2-氯乙基膦酸乙基2-(2-氯乙酰氨基)-4-噻唑-醋酸鹽4-(2-氯乙基)嗎啉鹽酸鹽(2-溴乙基)三甲基溴化銨4-氯苯基2-溴乙基醚N-(3-溴丙基)鄰苯二甲酰亞胺(pthalimide)異氰酸2-氯乙基酯2-氯-N，N-二甲基乙酰乙酰胺3-氯-2-羥丙基異丁烯酸酯2-溴-2’-羥基-5’-硝基乙酰苯胺3-(2-溴乙基)吲哚5-氯-2-戊酮乙烯酮縮醇2-氯乙基乙基硫化物3-氯-N-羥基-2，2-二甲基-丙酰胺L-1-對(duì)-甲苯磺?；被?2-苯乙基氯甲基酮2-(2-溴乙基)-1，3-二氧戊環(huán)乙基2-(溴甲基)丙烯酸酯2-(2-(2-氯乙氧基)乙氧基)乙醇(3-氯丙基)三甲氧硅烷氯霉素4-(氯甲基)苯甲酸溴乙胺鹽酸鹽表溴醇碘戊烷芐基溴化物c.N6/N9組合庫(kù)已研究發(fā)現(xiàn)上面關(guān)于N6和N9庫(kù)的反應(yīng)示意圖，反應(yīng)示意圖3 使用反應(yīng)示意圖2的途徑B的變式制備了在C6氨基和N9位上有取代基的組合庫(kù)。
于45℃下將6-氯嘌呤與上述有機(jī)鹵化物在二甲基甲酰胺的碳酸鉀溶液中反應(yīng)過(guò)夜。此后，將伯胺或仲胺加入反應(yīng)混合物中(雖然示意圖描述了伯胺、伯或仲胺用于反應(yīng)示意圖3)并通過(guò)在85℃反應(yīng)過(guò)夜制備化合物(7)。在此變式中，伯胺或仲胺在該反應(yīng)中取代了反應(yīng)示意圖2的途徑B所示的氫氧化銨。
任何有機(jī)鹵化物都可用于此反應(yīng)的第一個(gè)步驟。用于這些反應(yīng)中的優(yōu)選有機(jī)鹵化物如下甲基4-碘丁酸酯1-溴-3-苯基丙烷肉桂基溴化物2-氯乙基膦酸乙基2-(2-氯乙酰氨基)-4-噻唑-醋酸鹽4-(2-氯乙基)嗎啉鹽酸鹽(2-溴乙基)三甲基溴化銨4-氯苯基2-溴乙基醚N-(3-溴丙基)鄰苯二甲酰亞胺(pthalimide)2-氯乙基異氰酸酯2-氯-N，N-二甲基乙酰乙酰胺3-氯-2-羥丙基異丁烯酸酯2-溴-2’-羥基-5’-硝基乙酰苯胺3-(2-溴乙基)吲哚5-氯-2-戊酮乙烯酮縮醇2-氯乙基乙基硫化物3-氯-N-羥基-2，2-二甲基-丙酰胺L-1-對(duì)-甲苯磺?；被?2-苯乙基氯甲基酮2-(2-溴乙基)-1，3-二氧戊環(huán)乙基2-(溴甲基)丙烯酸酯2-(2-(2-氯乙氧基)乙氧基)乙醇(3-氯丙基)三甲氧硅烷氯霉素4-(氯甲基)苯甲酸溴乙胺鹽酸鹽表溴醇碘戊烷芐基溴化物任何伯胺或仲胺都可用于該反應(yīng)的第二個(gè)步驟。用于這些反應(yīng)中的優(yōu)選伯胺或仲胺如下組胺二鹽酸鹽去甲新福林鹽酸鹽1，2-二氨基丙烷5-氨基-1，3，3-三甲基環(huán)己烷甲基胺3-異丙氧基丙基胺二苯基硼酸、乙醇胺酯2-(2-氨基乙基氨基)-乙醇四氫糠基胺5-甲基色胺鹽酸鹽3，3-二苯基丙胺1-(3-氨基丙基)-2-吡咯烷酮(pyrrolidinone)2-(2-氨基乙基)-1-甲基吡咯烷2-(氨基甲基)苯并咪唑二氫-氯脫水物2，2，2-三氟乙胺鹽酸鹽L-肌肽(R)-(-)-1-氨基-2-丙醇2-(1-環(huán)己烯基)乙胺4-(三氟甲基)芐胺2，5-二氯戊胺鹽酸鹽(+/-)-4-氨基-3-羥基丁酸N，N-二甲基1，2-乙二胺3，3-二甲基丁基胺1，4-二氨基-2-丁酮二鹽酸鹽氨基甲基苯甲酸氨基羥基甲基丙二醇2-(氨基乙基)吡啶氨基丁醇金剛胺氨基己酸N-芐基乙醇胺乙基-6-氨基丁酸酯鹽酸鹽1，2-乙二胺2-環(huán)己-1-烯基乙胺使用任何鹵化物和任何胺組合均可重復(fù)這種化學(xué)過(guò)程得到該類型的任何腺嘌呤類似物。
正如對(duì)于反應(yīng)示意圖1和2，某些N6胺產(chǎn)生不同的區(qū)域異構(gòu)體，通過(guò)與有機(jī)鹵化物反應(yīng)可在N1、N3和N7位以及N9位產(chǎn)生取代的嘌呤。
為了在合理時(shí)間內(nèi)得到完全的組合庫(kù)，在96孔平皿中在某一時(shí)刻使用80孔進(jìn)行該化學(xué)過(guò)程(1-10列，A-H排)。在每一排將單一鹵化物加入反應(yīng)混合物中，反應(yīng)示意圖3所示的第一部分反應(yīng)如上所述進(jìn)行過(guò)夜。然后將幾組三種不同胺加入1-7列每一列的每個(gè)孔中；將8、9和10列的孔中制備為僅含一種胺，尤其是對(duì)于那些有與反應(yīng)混合物中的任何其它的胺反應(yīng)趨向的類型。第二部分反應(yīng)進(jìn)行過(guò)夜。結(jié)果，大多數(shù)孔含有化合物的混合物，每一孔包括一組嘌呤衍生物、其中特定的取代基在N9位、三個(gè)不同取代的氨基之一在C6位。根據(jù)每個(gè)氨基與N9衍生的6-氯嘌呤的反應(yīng)性，可認(rèn)為某些反應(yīng)混合物缺少C6取代基中的一個(gè)、兩個(gè)或所有三個(gè)。另外，該反應(yīng)混合物含有這些產(chǎn)物的不同區(qū)域異構(gòu)體。最終，胺的組合直接與鹵化物而不與6-氯嘌呤反應(yīng)是可能的。測(cè)試了作為抗菌混合物的每個(gè)反應(yīng)混合物中的這些產(chǎn)物，特別是腺嘌呤DNA甲基轉(zhuǎn)移酶抑制活性。將具有陽(yáng)性結(jié)果的混合物分離以確定對(duì)該結(jié)果有意義的化合物。組合庫(kù)的篩選用體內(nèi)和體外方法篩選按上述制備的每個(gè)庫(kù)的反應(yīng)產(chǎn)物。
體內(nèi)篩選方法包括測(cè)定表達(dá)細(xì)胞生長(zhǎng)所必需的腺嘌呤DNA甲基轉(zhuǎn)移酶的細(xì)菌細(xì)胞生長(zhǎng)的抑制作用。這些篩選方法最好不只用一種細(xì)菌、以確定具有最廣譜的抗菌活性的首要候選物。在某些實(shí)施方式中，首先篩選抗革蘭氏陽(yáng)性菌和革蘭氏陰性菌的樣品的推定抑制劑；新月柄桿菌和枯草芽孢桿菌是優(yōu)選的例子。用于檢測(cè)體內(nèi)腺嘌呤DNA甲基轉(zhuǎn)移酶活性的另外優(yōu)選的細(xì)菌種類包括幽門(mén)螺桿菌、根癌土壤桿菌、流產(chǎn)布魯氏菌和炭疽芽孢桿菌。
在這些測(cè)定中，將細(xì)菌培養(yǎng)物例如莖菌屬在適當(dāng)?shù)募?xì)菌培養(yǎng)基例如蛋白胨酵母膏(PYE)培養(yǎng)基(DIFCO)中生長(zhǎng)過(guò)夜至飽和。將此培養(yǎng)物的等份稀釋至600nm(OD600)時(shí)的光密度約為0.05的濃度。這種測(cè)定在96孔微量滴定板中進(jìn)行，尤其是使用在這些板中制備的庫(kù)。使用這些微量滴定板，將稀釋的細(xì)菌培養(yǎng)物的等份量(100-500μL)置于96孔的該滴定板的88孔中；剩余的8孔用作陰性(無(wú)細(xì)菌)對(duì)照。8個(gè)孔用作陽(yáng)性(未加入試驗(yàn)化合物)對(duì)照。對(duì)于庫(kù)篩選，可將146μL征細(xì)菌等分試樣用于每個(gè)孔中、每孔加有4μL組合庫(kù)樣品。
將庫(kù)化合物的不同混合物加入每塊板的剩余80孔的每個(gè)孔中，細(xì)胞在37℃生長(zhǎng)24小時(shí)。使用微板讀數(shù)器間隔監(jiān)測(cè)細(xì)菌的細(xì)胞生長(zhǎng)以監(jiān)測(cè)細(xì)胞生長(zhǎng)；可通過(guò)測(cè)定OD630監(jiān)測(cè)細(xì)胞生長(zhǎng)。將含生長(zhǎng)慢于對(duì)照孔的細(xì)胞的孔用于確定相應(yīng)的組合庫(kù)反應(yīng)混合物，然后合成并逐個(gè)測(cè)試以測(cè)定抑制化合物的特性。
采用這些方法，確定在＜100pM的估計(jì)濃度下抑制細(xì)菌的細(xì)胞生長(zhǎng)的候選化合物。從這些庫(kù)確定的候選化合物包括6-N-(二苯基硼酸酯)-乙基-腺嘌呤、6-N-(二苯基硼酸酯)-乙基-9-(2-(4-嗎啉基)-乙基)-腺嘌呤、6-N-(二苯基硼酸酯)-乙基-9-(3-(N-鄰苯二甲酰)-氨基丙基)-腺嘌呤、6-N-(二苯基硼酸酯)-乙基-9-(2-(2-(2-羥基乙氧基)乙氧基)乙基)-腺嘌呤、和6-N-(二苯基硼酸酯)-乙基-9-(乙基-2-丙烯酸酯)-甲基-腺嘌呤。
體外測(cè)定是直接在本發(fā)明的組合庫(kù)的反應(yīng)混合物上、或上述體內(nèi)篩選測(cè)定中所確定的候選化合物上進(jìn)行。這是兩種類型的測(cè)定，使用來(lái)自新月柄桿菌和枯草芽孢桿菌的純化CcrM甲基轉(zhuǎn)移酶、或使用市售的細(xì)菌的dam甲基酶和dcm甲基酶的制劑。在這些測(cè)定中，用含有推定的抑制劑和甲基轉(zhuǎn)移酶的組合庫(kù)樣品在30℃下培養(yǎng)合成的半甲基化45/50 DNA底物(如在Berdis等，1998，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 952874-2879中所公開(kāi)的)，通過(guò)加入3H-標(biāo)記的S-腺苷蛋氨酸(其中放射性同位素標(biāo)記包括轉(zhuǎn)移的甲基)引發(fā)甲基轉(zhuǎn)移酶反應(yīng)。通過(guò)比較加入對(duì)照組中的放射性標(biāo)記的數(shù)量檢測(cè)抑制，對(duì)照組的反應(yīng)是在有或沒(méi)有組合庫(kù)樣品的情況下進(jìn)行的；抑制劑導(dǎo)致聚集在DE81濾器上并通過(guò)液體閃爍放射性測(cè)量的甲基化的、3H-標(biāo)記DNA的數(shù)量減少。
采用這種測(cè)定，檢測(cè)到來(lái)自N6庫(kù)的四種另外的化合物在約500μM的估計(jì)濃度時(shí)可完全抑制體外DNA甲基化。這些化合物(具有如下所示結(jié)構(gòu))是腺嘌呤的核糖形式，該腺嘌呤含有二苯基硼酸乙醇胺酯或與腺嘌呤環(huán)的C6氨基共價(jià)連接的3，3-二苯基異丙基 進(jìn)一步分析了來(lái)自N-6腺嘌呤庫(kù)的由上面所示結(jié)構(gòu)合成的一種反應(yīng)混合物并發(fā)現(xiàn)在＜50μM時(shí)抑制細(xì)胞生長(zhǎng)。測(cè)定了該化合物的Ki約為1μM(假定孔中的最大理論濃度)，該化合物具有下列結(jié)構(gòu) 采用這種測(cè)定法測(cè)試了從N-9腺嘌呤庫(kù)選擇的反應(yīng)混合物對(duì)腺嘌呤DNA甲基轉(zhuǎn)移酶活性的抑制。發(fā)現(xiàn)在合成中所得到的、具有被3-乙基吲哚或2-乙基-1，3-二氧戊環(huán)取代的N9的化合物(具有如下結(jié)構(gòu))在500μM時(shí)是腺嘌呤DNA甲基轉(zhuǎn)移酶活性的抑制劑 用dcm甲基轉(zhuǎn)移酶的體外測(cè)定基本上按所述的使用來(lái)自嗜血桿菌(Hemophilus hemolyticus)(New England Biolabs，Beverly，MA)的市售甲基轉(zhuǎn)移酶和pUC18 DNA作為底物來(lái)進(jìn)行；也可用其它市售dcm甲基轉(zhuǎn)移酶例如來(lái)自藤黃節(jié)桿菌、解淀粉芽孢桿菌H、埃及嗜血桿菌(Hemophilus aegyptius)、副流感嗜血桿菌、或摩拉克氏菌屬類來(lái)進(jìn)行這種測(cè)定。在這些測(cè)定中，通過(guò)檢測(cè)dcm甲基轉(zhuǎn)移酶很少或無(wú)抑制作用證實(shí)了腺嘌呤特異性，因此在有或沒(méi)有組合庫(kù)混合物或推定腺嘌呤特異性抑制劑的情況下，聚集在DE81濾器上的并通過(guò)液體閃爍放射性測(cè)量的甲基化3H-標(biāo)記的DNA的數(shù)量是相同的。
或者，用dam甲基酶(例如來(lái)自大腸埃希氏桿菌)進(jìn)行測(cè)定，其中的抑制作用是通過(guò)聚集在DE81濾器上的并通過(guò)液體閃爍放射性測(cè)量的甲基化3H-標(biāo)記的DNA的數(shù)量減少來(lái)證實(shí)的?！昂侠碓O(shè)計(jì)”的腺嘌呤DNA甲基酶抑制劑的合成a.活性部位類似物腺嘌呤DNA甲基轉(zhuǎn)移酶的“合理設(shè)計(jì)”是根據(jù)這樣的假設(shè)，即該酶的活性部位包含被修飾的腺嘌呤部分以及S-腺苷蛋氨酸甲基供體的特異性結(jié)合部位，如圖2所示。優(yōu)選的是在甲基轉(zhuǎn)移酶的活性部位內(nèi)的化合物，并且特別優(yōu)選模仿推定的“過(guò)渡態(tài)”的分子，該過(guò)渡態(tài)產(chǎn)生酶的甲基轉(zhuǎn)移活性。制備了四種這種過(guò)渡態(tài)類似物并體外測(cè)定腺嘌呤DNA甲基轉(zhuǎn)移酶活性。
合理設(shè)計(jì)的化合物具有以下結(jié)構(gòu) 1 R1＝OH R2＝H2 R1＝H R2＝H3 R1＝OH R2＝PO34 R1＝H R2＝PO3并用反應(yīng)示意圖6合成該化合物，如下所示。反應(yīng)示意圖6 如上所述測(cè)定這些化合物的腺嘌呤DNA甲基轉(zhuǎn)移酶活性。發(fā)現(xiàn)這些化合物可抑制具有表1所示的Ki的CcrM。由數(shù)據(jù)的Dixon圖計(jì)算化合物2和4的Ki，對(duì)于化合物3該數(shù)據(jù)在抑制劑濃度為0-150μM時(shí)測(cè)定的、對(duì)于化合物4是在0-80μM時(shí)測(cè)定的。由IC50估計(jì)化合物1和2的Ki。
表I化合物1-4的Ki 腺嘌呤DNA甲基轉(zhuǎn)移酶抑制劑的固相合成使用本領(lǐng)域公知的固相合成法也可有效地合成本發(fā)明的腺嘌呤DNA甲基轉(zhuǎn)移酶抑制劑，參見(jiàn)Bunin，ibid。
在優(yōu)選的實(shí)施方式中，通過(guò)使用較大量的用于篩選的庫(kù)化合物，固相合成補(bǔ)充了本文所述的組合庫(kù)合成。這種合成方法具有另外的優(yōu)點(diǎn)，即易于操作且易于純化，因?yàn)樗鼈兺ㄟ^(guò)可被特異性裂解的化學(xué)上不穩(wěn)定的基團(tuán)與樹(shù)脂連接。例如，從具有相對(duì)低(mM范圍)的抑制活性的N6庫(kù)鑒定化合物(8) 運(yùn)用這些結(jié)果，用固相化學(xué)方法修飾抑制劑(8)及其相關(guān)類似物(9)開(kāi)發(fā)了第二代庫(kù)。例如，從終端胺和從N-9位能衍生化合物(8)產(chǎn)生抑制劑，該抑制劑被設(shè)計(jì)為分別與S-腺苷蛋氨酸(SAM)和DNA結(jié)合部位相互作用。將這些衍生物制備為可靶向甲基轉(zhuǎn)移酶活性部位的任何部分N9位的修飾對(duì)腺嘌呤結(jié)合部位具有特異性、而C6胺的修飾對(duì)SAM部位具特異性。
用反應(yīng)示意圖4舉例說(shuō)明進(jìn)行固相化學(xué)過(guò)程反應(yīng)示意圖4 這些實(shí)驗(yàn)使用了市售的甲氧基苯基甲酸基樹(shù)脂進(jìn)行被保護(hù)的二胺(11)的還原氨化，其中Rv為氫或CO2P”(這里P’和P”為保護(hù)基團(tuán))。該反應(yīng)產(chǎn)生了仲胺(12)。加入6-氯嘌呤產(chǎn)生了與樹(shù)脂結(jié)合的腺嘌呤加合物(13)，這使得剩余的功能基團(tuán)在樹(shù)脂上衍生。根據(jù)本領(lǐng)域已知的方法可從樹(shù)脂中除去這些加合物，例如用濃縮形式或5％二氯甲烷溶液的三氟醋酸處理。
反應(yīng)示意圖4舉例說(shuō)明了一種實(shí)施方式，其中氨基取代基包含一個(gè)手性中心(即，它以一對(duì)立體異構(gòu)體的形式存在)。然而，這些立體異構(gòu)體中僅有一個(gè)可能具有生物活性。為了避免不得不分離本發(fā)明化合物的非對(duì)映體形式，可以使用下列反應(yīng)示意圖5反應(yīng)示意圖5 這種合成法可用于檢測(cè)化合物中的腺嘌呤DNA甲基轉(zhuǎn)移酶抑制活性，該化合物包括手性中心的一種外消旋混合物(如天門(mén)冬氨酸(16)中所存在的)；用商用純D-或L-天門(mén)冬氨酸可重復(fù)這種合成而得到本方法中光學(xué)純的方式，該方法中一種立體異構(gòu)體較其它方法具有明顯多的活性。如反應(yīng)示意圖5所示，用氯甲酸芐酯處理D，L-天門(mén)冬氨酸得到N-羧基芐基保護(hù)的天門(mén)冬氨酸(17)。然后用低聚甲醛將α-羧酸保護(hù)為噁唑烷酮(18)。使用二苯基磷?；B氮化物、在剩余的β-羧酸上進(jìn)行庫(kù)爾提斯重排得到異氰酸酯(19)。這些反應(yīng)包括本領(lǐng)域已知的合成方法；從此以后該化學(xué)過(guò)程是新的。使用三甲基甲硅烷基乙醇(20)截留該異氰酸酯(19)得到Teoc(三甲基甲硅烷基乙氧羰基)保護(hù)的胺(21)。用甲醇鈉使噁唑烷酮開(kāi)環(huán)得到甲酯(22)。然后使用三氟醋酸除去Teoc保護(hù)基團(tuán)得到單保護(hù)的二胺(23)。
已經(jīng)將化合物(23)和(11)(其中Rv＝H，P’＝CBz)分別用于合成樹(shù)脂結(jié)合的腺嘌呤類似物(13)，Rv＝COMe，P’＝CBz，和(13)，Rv＝H，P’＝CBz。本發(fā)明化合物的用途本發(fā)明還提供了本文所公開(kāi)的化合物用作藥物組合物的實(shí)施方式?？梢园幢緛?lái)已知的方法制備本發(fā)明的藥物組合物，例如，通過(guò)常規(guī)的混合、溶解、制粒、制糖衣丸、磨細(xì)、乳化、制膠囊、包埋、或冷凍干燥的方法。
因此可以按常規(guī)方法、用一種或多種生理學(xué)上可接受的載體配制用于本發(fā)明的藥物組合物，其中的載體包括在活性化合物加工成制劑時(shí)便于使用的賦形劑和輔助劑。合適的制劑是根據(jù)所選擇的給藥途徑而定的。
無(wú)毒性的藥用鹽包括酸鹽，其中的酸例如鹽酸、磷酸、氫溴酸、硫酸、亞磺酸、甲酸、甲苯磺酸、甲磺酸、硝酸、苯甲酸、檸檬酸、酒石酸、馬來(lái)酸、氫碘酸、鏈烷酸如醋酸、HOOC-(CH2)n-CH3(其中n為0-4)，等等。無(wú)毒性的藥用堿加成鹽包括堿鹽，其中的堿例如鈉、鉀、鈣、銨等等。本領(lǐng)域熟練技術(shù)人員都知道許多無(wú)毒性的藥學(xué)上可接受的加成鹽。
用于注射的，可以將本發(fā)明化合物配制成適當(dāng)?shù)乃芤?，例如生理性上相容的緩沖液如Hanks溶液、Ringer溶液或生理鹽水緩沖液。對(duì)于經(jīng)粘膜的和經(jīng)皮的給藥，在制劑中使用適合于滲透屏障的滲透劑。這些滲透劑是本領(lǐng)域通常已知的。
用于口服給藥的，通過(guò)將活性化合物與本領(lǐng)域眾所周知的藥學(xué)上可接受的載體結(jié)合可很容易地制備這些化合物。這些載體可使本發(fā)明化合物配制成片劑、丸劑、糖錠劑、膠囊、液體、凝膠、糖漿劑、泥漿劑、懸浮液等，用于被治療患者的口服消化。用固體賦形劑可得到口服用的藥物制劑，如需要，在加入適合的輔助劑后，可研磨產(chǎn)生的混合物、并處理混合物顆粒，得到片劑或糖錠劑心層。適合的賦形劑，尤其是充填劑例如糖、包括乳糖、蔗糖、甘露糖醇、或山梨糖醇；纖維素制劑例如玉米淀粉、小麥淀粉、大米淀粉、馬鈴薯淀粉、明膠、黃芪膠、甲基纖維素、羥丙基甲基纖維素、羧甲基纖維素鈉、和/或聚乙烯吡咯烷酮(PVP)。如果需要，可加入崩解劑，例如交聯(lián)聚乙烯吡咯烷酮、瓊脂或藻酸或其鹽例如藻酸鈉。
用適當(dāng)?shù)陌卵b備糖錠劑。出于此目的，可以使用濃縮糖溶液，該溶液可含或不含阿拉伯膠、滑石、聚乙烯吡咯烷酮、卡波母膠、聚乙二醇、和/或二氧化鈦、漆液、以及適當(dāng)?shù)挠袡C(jī)溶劑和溶劑混合物?？梢詫⑷玖匣蛏丶尤肫瑒┗蛱清V劑包衣中用于鑒別或表明活性化合物劑量的不同組合。
可以口服使用的藥物制劑包括由明膠制成的推合的膠囊、以及由明膠和增塑劑如甘油或山梨糖醇制成的封閉軟膠囊。推合的膠囊可含有活性成分和填充劑例如乳糖、粘合劑例如淀粉、和/或潤(rùn)滑劑例如滑石或硬脂酸鎂、以及任選的穩(wěn)定劑。在軟膠囊中，可以將活性化合物溶解或懸浮在適當(dāng)?shù)囊后w中，該液體例如脂肪油、液體石蠟、或液體聚乙二醇。另外，可以加入穩(wěn)定劑。所有用于口服給藥的制劑應(yīng)該是適合于該給藥方法的劑量形式。對(duì)于頰部的給藥，該組合物可采用按常規(guī)方法配制的片劑或錠劑形式。
對(duì)于吸入給藥，本發(fā)明使用的化合物是以從加壓袋或霧化器產(chǎn)生的氣溶膠噴霧形式可方便地釋放，同時(shí)使用適當(dāng)?shù)耐七M(jìn)劑，例如二氯二氟甲烷、三氯氟甲烷、二氯四氟乙烷、二氧化碳或其它適合的氣體。在加壓氣溶膠中，可通過(guò)提供一個(gè)釋放計(jì)量數(shù)量的活門(mén)來(lái)確定劑量單位?？梢詫⒂糜谖肫骰虼等肫髦械哪z囊和明膠藥筒制備成含有該化合物和適當(dāng)?shù)姆勰┗|(zhì)如乳糖或淀粉的混合粉末。
可以將這些化合物配制成用于通過(guò)注射的非腸道給藥制劑，例如通過(guò)大丸劑注射或連續(xù)輸入。注射用制劑可以是單位劑型形式，例如，置于安瓿或多劑量容器中，同時(shí)加入防腐劑。這些組合物可采用這類形式，例如油性或含水載體中的懸浮液、溶液或乳狀液形式，并且可含有調(diào)配劑例如懸浮劑、穩(wěn)定劑和/或分散劑。
非腸道給藥的藥學(xué)制劑包括水溶性形式的活性化合物的水溶液。另外，可以將活性化合物的懸浮液制備成適當(dāng)?shù)挠托宰⑸鋺腋∫?。適合的親油性溶劑或載體包括脂肪油如芝麻油、或合成脂肪酸酯如油酸乙酯或甘油三酯、或脂質(zhì)體。含水注射懸浮液可含有增加懸浮液粘度的物質(zhì)，例如羧甲基纖維素鈉、山梨糖醇、或葡聚糖。可選擇地，該懸浮液也可含有適當(dāng)?shù)姆€(wěn)定劑或增加化合物溶解度的試劑以使該制劑為高度濃縮溶液?；蛘?，使用前，活性成分可以是與適當(dāng)?shù)妮d體構(gòu)成的粉末形式，該載體例如無(wú)菌無(wú)致熱物水。也可將這些化合物配制成直腸用制劑形式，例如栓劑或保留性灌腸劑，例如含有常規(guī)栓劑基質(zhì)如可可脂或其它甘油酯。
除了前面所述的制劑外，也可將這些化合物配制成儲(chǔ)存制劑。這類長(zhǎng)效性制劑可通過(guò)植入法(例如皮下或肌內(nèi))或通過(guò)肌內(nèi)注射給藥。因此，例如可將這類化合物與適當(dāng)?shù)木酆衔锘蚴杷镔|(zhì)(例如作為可接受的油中的乳液)或離子交換樹(shù)脂一起配制，或用作少量可溶的衍生物，例如少量可溶的鹽。
用于本發(fā)明疏水的化合物的藥用載體是一種助溶劑體系，該體系包括芐基醇、非極性表面活性劑、水可混溶的有機(jī)聚合物、和含水相。該助溶劑體系可以是VPD助溶劑體系。VPD是一種3％w/v芐基醇、8％w/v非極性表面活性劑聚山梨酯80和65％w/v聚乙二醇300的溶液，以無(wú)水乙醇的體積為基礎(chǔ)。該VPD助溶劑體系(VPD5W)由用5％葡萄糖水溶液1∶1稀釋的VPD組成。這種助溶劑可很好地溶解疏水化合物，并且在系統(tǒng)給藥時(shí)本身產(chǎn)生的毒性低。自然，在不破壞助溶劑的溶解度和毒性的情況下，可以顯著改變助溶劑的比例。而且，可以改變助溶劑成分的特性例如，可以用其它低毒性非極性表面活性劑代替聚山梨酯80；也可以改變聚乙二醇部分的多少；其它生物相容性聚合物可以代替聚乙二醇，例如聚乙烯基吡咯烷酮；其它糖或多糖可取代葡萄糖。
或者，可使用其它用于疏水藥用化合物的傳遞體系。脂質(zhì)體和乳狀液是眾所周知的用于疏水藥物的傳遞賦形劑或載體的例子。也可使用某些有機(jī)溶劑例如二甲基亞砜，盡管通常其代價(jià)是毒性更大。另外，可以用一種持續(xù)釋放體系傳遞這些化合物，例如含該治療劑的固體疏水聚合物的半滲透基質(zhì)。已經(jīng)確立了各種持續(xù)釋放物質(zhì)、并且它們是本領(lǐng)域熟練技術(shù)人員所公知的。持續(xù)釋放膠囊可根據(jù)化合物的化學(xué)特性釋放該化合物數(shù)周至100天。根據(jù)治療試劑的化學(xué)特性和生物學(xué)穩(wěn)定性，可以采用另外措施使蛋白質(zhì)和核酸穩(wěn)定。
該藥物組合物也可含有適當(dāng)?shù)墓腆w或凝膠相載體或賦形劑。這些載體或賦形劑的例子包括但不限于碳酸鈣、磷酸鈣、各種糖、淀粉、纖維素衍生物、明膠和聚合物如聚乙二醇。
本發(fā)明化合物可以是藥學(xué)上相容的抗衡離子的鹽形式。可以用許多酸形成藥學(xué)上相容的鹽，這些酸包括但不限于鹽酸、硫酸、醋酸、乳酸、酒石酸、蘋(píng)果酸、琥珀酸、磷酸、氫溴酸、亞磺酸、甲酸、甲苯磺酸、甲烷磺酸、硝酸、苯甲酸、檸檬酸、酒石酸、馬來(lái)酸、氫碘酸、鏈烷酸如醋酸、HOOC-(CH2)n-CH3(其中n為0-4)，等等。鹽趨向于更易溶于相應(yīng)的游離堿形式的含水溶劑或其它質(zhì)子溶劑中。無(wú)毒性藥用堿加成鹽包括諸如鈉、鉀、鈣、銨等堿的鹽。本領(lǐng)域熟練技術(shù)人員都知道許多無(wú)毒性的藥學(xué)上可接受的加成鹽。
本發(fā)明化合物的藥物組合物可通過(guò)各種方法配制和給藥，包括全身的、局部的或表面的給藥。在“Remington’s藥物科學(xué)”Mack出版公司，Easton，PA中可找到配制和給藥的技術(shù)?？梢赃x擇給藥方式使傳遞至身體各所需靶部位達(dá)到最大化。適合的給藥途徑可以是例如口服的、直腸的、經(jīng)粘膜的、經(jīng)皮的、或腸內(nèi)的給藥；非腸道傳遞包括肌內(nèi)的、皮下的、髓內(nèi)的注射，以及鞘內(nèi)的、直接心室內(nèi)的、靜脈內(nèi)的、腹膜內(nèi)的、鼻內(nèi)的、或眼內(nèi)的注射。
或者，可以以局部而不是全身的方式給藥，例如，通過(guò)將化合物直接注射至特定組織，通常以儲(chǔ)存或持續(xù)釋放制劑的形式。
適用于本發(fā)明的藥物組合物包括以下組合物，其中含有有效量的活性成分以達(dá)到其預(yù)期的目的。更具體的是，治療上有效量是指有效預(yù)防受治療的患者現(xiàn)有癥狀的發(fā)展或緩解該癥狀的劑量。有效量的確定在本領(lǐng)域熟練技術(shù)人員的能力范圍內(nèi)，尤其是可根據(jù)本文所提供的詳細(xì)說(shuō)明來(lái)確定。
如本文所公開(kāi)的，對(duì)于用于本發(fā)明方法中的任何化合物，最初可從細(xì)胞培養(yǎng)測(cè)定估計(jì)治療上的有效量。例如，可在動(dòng)物模型中配制一種劑量以達(dá)到循環(huán)濃度范圍，該范圍包括在細(xì)胞培養(yǎng)物中所測(cè)定的EC50(增加50％的有效量)，即，所試驗(yàn)的化合物達(dá)到最大抑制細(xì)菌的細(xì)胞生長(zhǎng)的半數(shù)時(shí)的濃度。該制劑可用于更準(zhǔn)確地確定用于人的劑量。
但是，我們知道任何特殊患者的特定劑量水平是根據(jù)各種因素來(lái)確定的，包括所用特定化合物的活性、年齡、體重、一般健康狀態(tài)、性別、飲食、給藥時(shí)間、給藥途徑、和排泄速度、藥物組合、進(jìn)行治療的特定疾病的嚴(yán)重度、以及處方醫(yī)師的判斷。
對(duì)于對(duì)非人動(dòng)物的給藥，也可將該藥物或含該藥物的藥物組合物加入動(dòng)物飼料或飲水中。配制含預(yù)定劑量藥物的動(dòng)物飼料和飲水產(chǎn)品是很方便的，因此動(dòng)物可在飲食的同時(shí)攝入適當(dāng)量的藥物。大約在被動(dòng)物消耗之前，立即將含藥物的預(yù)混合物加入飼料或飲水中也是很方便的。
本發(fā)明優(yōu)選的化合物具有某些藥理學(xué)特性。這些特性包括但不限于口服生物可利用率、低毒性、低血清蛋白結(jié)合和理想的體外和體內(nèi)半衰期?？梢赃M(jìn)行試驗(yàn)以預(yù)知理想的藥理學(xué)特性。用于估計(jì)生物可利用率的試驗(yàn)包括經(jīng)過(guò)人腸細(xì)胞單層(包括Caco-2細(xì)胞單層)的運(yùn)輸。可從白蛋白結(jié)合試驗(yàn)預(yù)知血清蛋白結(jié)合。這些試驗(yàn)在OR2vcova等(1996，J.Chroma.B 6771-27)的評(píng)論中有描述?；衔锇胨テ谂c化合物的劑量頻數(shù)成反比。從Kuhnz和Gieschen(藥物代謝和布置，(1998)volume 26，第1120-1127頁(yè))所述的微粒體的半衰期的測(cè)定可預(yù)知化合物的體外半衰期。
這些化合物毒性和療效可以根據(jù)細(xì)胞培養(yǎng)物或?qū)嶒?yàn)動(dòng)物中的標(biāo)準(zhǔn)藥學(xué)方法確定，例如，確定LD50(50％的致死量)和ED50(50％有效治療量)。毒性作用和治療作用之間的劑量比例為治療指數(shù)，可將其表示為L(zhǎng)D50與ED50的比例。優(yōu)選具有高的治療指數(shù)的化合物。從這些細(xì)胞培養(yǎng)測(cè)定和動(dòng)物研究所得到的數(shù)據(jù)可用于配制用于人的劑量范圍。這些化合物的劑量?jī)?yōu)選在循環(huán)濃度范圍內(nèi)，它包括很少毒性或沒(méi)有毒性的ED50。根據(jù)所用的劑型和采用的給藥途徑、該劑量可在此范圍內(nèi)改變。各個(gè)醫(yī)師根據(jù)患者的病情可選擇準(zhǔn)確的制劑、給藥途徑和劑量(參見(jiàn)例如Fingl等，1975，在“治療的藥理學(xué)基礎(chǔ)”，Ch.1，p.1)。
劑量和用藥時(shí)間間隔可以逐個(gè)調(diào)節(jié)以便使活性部分的血漿足以保持細(xì)菌的細(xì)胞生長(zhǎng)抑制作用的水平。用于全身給藥的可耐受劑量為100-2000mg/天。根據(jù)患者的體表面積確定的有用劑量范圍為50-910mg/m2/天。有用的平均血漿水平應(yīng)保持在0.1-1000μM。在局部給藥或選擇性吸收的情況下，化合物的有效局部濃度與血漿濃度無(wú)關(guān)。
本發(fā)明化合物是感染植物、動(dòng)物和人的細(xì)菌中的細(xì)胞處理過(guò)程的調(diào)節(jié)劑。本發(fā)明的腺嘌呤DNA甲基轉(zhuǎn)移酶抑制化合物的藥物組合物可用作抗生素治療動(dòng)物和人的疾病，包括但不限于放線菌病、炭疽、菌痢、肉毒中毒、布魯氏菌病、蜂窩織炎、霍亂、結(jié)膜炎、膀胱炎、白喉、細(xì)菌性心內(nèi)膜炎、會(huì)厭炎、胃腸炎、鼻疽、淋病、Legionnaire氏病、鉤端螺旋體病、細(xì)菌性腦膜炎、鼠疫、細(xì)菌性肺炎、產(chǎn)后的敗血癥、風(fēng)濕熱、巖石山斑點(diǎn)熱(RockyMountain spotted fever)、猩紅熱、鏈球菌咽炎、梅毒、破傷風(fēng)、兔熱病、傷寒熱、斑疹傷寒和百日咳。
在本申請(qǐng)說(shuō)明書(shū)中的所有文章和參考資料包括專利，均作為參考文獻(xiàn)引用。
下列實(shí)施例是為了舉例說(shuō)明而不是要限定本發(fā)明的范圍。本發(fā)明并不限定于所舉例的實(shí)施方式范圍內(nèi)，該實(shí)施方式旨在作為本發(fā)明個(gè)別的舉例說(shuō)明。實(shí)際上，除本文所示和所述之外的本發(fā)明的各種改變，對(duì)于本領(lǐng)域熟練技術(shù)人員來(lái)說(shuō)都可從說(shuō)明書(shū)和附圖中顯而易見(jiàn)。當(dāng)然這些改變應(yīng)在所附的權(quán)利要求的范圍內(nèi)。
實(shí)施例1溶液相化學(xué)庫(kù)的制備在96孔微滴定板中按如下方法制備上述溶液相組合庫(kù)。
在1-7列的每個(gè)孔中加入K2CO3(7-10mg)、然后加入DMF(140μL)和6-氯嘌呤(30μL 0.5M DMF溶液)。在每一排中加入鹵化物(15μL 1M DMF溶液)，該鹵化物選自本文所公開(kāi)的鹵化物名單。
在8-10列的每個(gè)孔中加入K2CO3(3-5mg)、然后加入DMF(180μL)和6-氯嘌呤(10μL的0.5M DMF溶液)。在每一排中加入鹵化物(5μL的1M DMF溶液)，該鹵化物選自本文所公開(kāi)的鹵化物名單。
將微滴定板加熱至45℃并反應(yīng)過(guò)夜。將反應(yīng)物冷卻至室溫、并按如下進(jìn)行第二次合成反應(yīng)。
在1-7列的每個(gè)孔中加入3種不同的胺(每孔5μL的1M DMF溶液)，此胺選自本文所公開(kāi)的胺的名單。
在8-10列的每個(gè)孔中加入一種胺(每孔5μL的1M DMF溶液)，此胺選自本文所公開(kāi)的胺的名單。
將微滴定板加熱至85℃并反應(yīng)過(guò)夜。將反應(yīng)物冷卻至室溫，分別收集每一孔并將溶液的最終體積調(diào)節(jié)為300μL(代替丟失的溶劑以蒸發(fā))。
然后用本文所公開(kāi)的體內(nèi)細(xì)菌生長(zhǎng)測(cè)定法對(duì)這些反應(yīng)中所產(chǎn)生的化合物進(jìn)行測(cè)試。
實(shí)施例2腺嘌呤DNA甲基轉(zhuǎn)移酶抑制劑的制備篩選本發(fā)明組合庫(kù)的腺嘌呤DNA甲基轉(zhuǎn)移酶上述的抑制活性。根據(jù)下列反應(yīng)示意圖，將具有甲基轉(zhuǎn)移酶抑制活性和含有與二苯基硼酸乙醇胺酯共價(jià)連接的C6氨基的化合物用作制備相關(guān)類似物的基本化合物 條件i)R-X，DMF，K2CO3，45-95℃；ii)Pb2BOCH2CH2NH2，DMF，K2CO3，90-95℃具體說(shuō)，于室溫和氬氣下將6-氯嘌呤(1)溶解在干DMF(約0.3mmol/mL)中。加入碳酸鉀(K2CO3；2-3當(dāng)量)、然后加入1當(dāng)量烷基鹵化物(R-X)。將反應(yīng)物加熱至45度或95度(如果鹵化物在較低溫度下不反應(yīng))并攪拌18小時(shí)。此時(shí)間后，進(jìn)行薄層色譜法(用二氯甲烷中的2％-5％甲醇作溶劑)并證實(shí)在反應(yīng)混合物中很少或沒(méi)有剩余的起始物質(zhì)。將該反應(yīng)物冷卻至室溫、通過(guò)過(guò)濾除去固體并用干二甲基甲酰胺(DMF)洗滌。得到濾液、并在真空除去任何剩余的DMF得到油狀的粗制品。通過(guò)硅膠上的柱色譜法(用二氯甲烷中的2％-5％甲醇作溶劑)純化該產(chǎn)品。在組合的N-9和N-7區(qū)域異構(gòu)體洗脫為混合物之前，將N-9區(qū)域異構(gòu)體洗脫為純的部分?；旌虾琋-9異構(gòu)體的部分并在真空除去溶劑得到儲(chǔ)藏時(shí)固化的固體或油狀中間產(chǎn)物2b-2e。
按如下制備終化合物。于室溫和氬氣下將6-綠嘌呤(1)或9-烷基-6-氯嘌呤(2b-2e)溶解在干DMF(0.03-0.5mmol/mL)中。加入碳酸鉀(K2CO3；2-3當(dāng)量)、然后加入1當(dāng)量二苯基硼酸乙醇胺酯。將反應(yīng)物加熱至90-95℃并攪拌18小時(shí)。使該混合物冷卻至室溫并如上所述通過(guò)過(guò)濾除去固體。用1H-NMR、13C-NMR、和兩維NMR分光鏡法如HMQC和HMBC確定這些化合物的結(jié)構(gòu)。
或者，于室溫在氬氣下將6-氯嘌呤(1)或N-9烷基-6-氯嘌呤(2b-2e)溶解在1-丁醇(0.1mmol/mL)中。加入3當(dāng)量二異丙基乙胺，然后加入1.2當(dāng)量烷基鹵化物。將此反應(yīng)混合物加熱至110℃并攪拌18小時(shí)。然后將該反應(yīng)物冷卻至室溫并在真空除去溶劑。通過(guò)硅膠上的柱色譜法(用2％-5％甲醇的二氯甲烷溶液作溶劑)純化殘余物。收集產(chǎn)物部分并在真空除去溶劑而留下白色固體。
本領(lǐng)域人員都知道起始物質(zhì)二苯基硼酸乙醇胺酯的結(jié)構(gòu)是環(huán)狀的，硼是四面體的結(jié)構(gòu)。因此抑制本發(fā)明化合物的腺嘌呤DNA甲基轉(zhuǎn)移酶的環(huán)狀和線性類似物可有利于開(kāi)發(fā)另外的抑制化合物。 對(duì)于體內(nèi)測(cè)定，將含剩余的DMF或二甲基亞砜(DMSO)的未純化制劑稀釋至16.7mM并直接用作粗混合物。使用各種細(xì)菌種類基本上按上述進(jìn)行細(xì)菌的細(xì)胞生長(zhǎng)抑制的體內(nèi)測(cè)定。在這些測(cè)定中化合物(3a)-(3e)顯示下列結(jié)果新月柄桿菌化合物3a-IC50＜25μM化合物3b-IC50＜25μM化合物3c-IC50＜25μM化合物3d-IC50＜25μM化合物3e-IC50＜25μM流產(chǎn)布魯氏菌化合物3a-12小時(shí)后幾乎全部細(xì)胞死亡-100μM化合物3b-12小時(shí)后全部細(xì)胞死亡-100μM化合物3c-從開(kāi)始細(xì)胞生長(zhǎng)被抑制-100μM化合物3d-從開(kāi)始細(xì)胞生長(zhǎng)被抑制-100μM化合物3e-從開(kāi)始細(xì)胞生長(zhǎng)被抑制-100μM幽門(mén)螺桿菌化合物3a-IC50＜25μM化合物3b-IC50＜25μM化合物3c-IC50在25-100μM之間化合物3d-IC50在25-100μM之間化合物3e-IC50＝25μM根癌土壤桿菌化合物3a-IC50＞100μM化合物3b-IC50＝25μM化合物3c-IC50＝25μM化合物3d-IC50＜＜25μM化合物3e-IC50＜＜25Mm枯草芽孢桿菌化合物3a-IC50在10-50μM之間化合物3b-IC50在1-10μM之間化合物3c-IC50在1-10μM之間化合物3d-IC50在10-50μM之間化合物3e-未測(cè)另外，使用體外腺嘌呤DNA甲基轉(zhuǎn)移酶抑制測(cè)定法得到下列結(jié)果CcrM化合物3a-在100μM時(shí)全部抑制化合物3b-在100μM時(shí)全部抑制化合物3c-在100μM時(shí)全部抑制化合物3d-在100μM時(shí)全部抑制化合物3e-在100μM時(shí)全部抑制dam甲基酶(大腸桿菌)化合物3a-在100μM時(shí)全部抑制化合物3b-在100μM時(shí)全部抑制化合物3c-在100μM時(shí)全部抑制化合物3d-在100μM時(shí)全部抑制化合物3e-在100μM時(shí)全部抑制dcm甲基轉(zhuǎn)移酶(HhaI)化合物3a-在500μM時(shí)根本無(wú)抑制化合物3b-在500μM時(shí)根本無(wú)抑制化合物3c-在500μM時(shí)根本無(wú)抑制化合物3d-在500μM時(shí)根本無(wú)抑制化合物3e-在500μM時(shí)根本無(wú)抑制這些結(jié)果證實(shí)了化合物(3a)-(3e)是腺嘌呤特異性DNA甲基轉(zhuǎn)移酶、沒(méi)有可檢測(cè)的dcm交叉反應(yīng)性。
實(shí)施例3腺嘌呤DNA甲基轉(zhuǎn)移酶抑制劑的制備通過(guò)優(yōu)化上述組合庫(kù)篩選期間所發(fā)現(xiàn)的先導(dǎo)物而開(kāi)發(fā)了另外的腺嘌呤DNA甲基轉(zhuǎn)移酶抑制劑。1.6-(2-二苯基甲基環(huán)戊基氨基)嘌呤(化合物73)將6-氯嘌呤與正丁醇和2當(dāng)量二異丙基乙胺(N(iPr)2Et)中的S-(-)-2-(二苯基甲基)-吡咯烷混合。將反應(yīng)加熱至105℃并令其反應(yīng)24小時(shí)。在真空下從反應(yīng)混合物除去溶劑、并通過(guò)硅膠色譜法純化粗制品。2.6-(2-二苯基羥基甲基環(huán)戊基氨基)嘌呤(化合物71)將6-氯嘌呤在正丁醇和2當(dāng)量N(iPr)2Et中的R-(+)-α，α-二苯基-2-吡咯烷甲醇混合。將反應(yīng)加熱至95℃并令其反應(yīng)24小時(shí)。在真空下從反應(yīng)混合物除去溶劑、并通過(guò)硅膠色譜法純化粗制品。 3.2-二苯基吡咯(化合物76)將2-吡咯烷酮(pyrrolidinone)與苯中的二甲基硫酸鹽混合并回流3小時(shí)。在包括蒸餾的純化后，在室溫下將所得到的2-甲基亞氨基酯吡咯烷在干醚中與過(guò)量的苯氧化鋰(PhLi)混合18小時(shí)得到標(biāo)題化合物。 4.6-氨基-4(2-二苯基硼酸酯)乙基氨基嘧啶(化合物III168)用阮內(nèi)鎳(RaNi)的氨水溶液處理4-氨基-6-羥基-2-硫代嘧啶并加熱回流2小時(shí)。純化得到4-氨基-6-羥基嘧啶，將它與氯氧化磷和N，N-二乙基苯胺混合、加熱回流4小時(shí)得到4-氨基-6-氯嘧啶。將該產(chǎn)物與二異丙基乙胺的甲苯溶液中的二異丙基硼酸乙醇酯混合、并加熱回流過(guò)夜產(chǎn)生標(biāo)題化合物。 5.4-氨基-5(2-二苯基硼酸酯乙基亞氨基酯)咪唑(化合物III170)將4-氨基-5-咪唑羧酰胺鹽酸鹽在氯氧化磷中加熱回流3.5小時(shí)，純化后得到4-氨基-5-腈咪唑。將此產(chǎn)物再懸浮在HCl飽和的乙醇中過(guò)夜并純化得到4-氨基-5-乙基亞氨基酯咪唑鹽酸鹽。將此鹽酸鹽與四氫呋喃(THF)中的二苯基硼酸乙醇胺酯混合過(guò)夜得到標(biāo)題化合物。 實(shí)施例4第二代庫(kù)根據(jù)下列化合物制備兩種“第二代庫(kù)” 從母化合物78按如下所示構(gòu)建第一個(gè)第二代庫(kù)(“庫(kù)A”)。在加熱器-搖動(dòng)器中在25℃將化合物78與甲醇中的1當(dāng)量醛(或酮)混合。重復(fù)反應(yīng)。反應(yīng)1小時(shí)后，加入BH3-樹(shù)脂并將混合物反應(yīng)過(guò)夜。在一組反應(yīng)中加入第二當(dāng)量的下列一種醛環(huán)己烷羧乙醛；3-糠醛；1-甲基-2-吡咯羧乙醛；氫化肉桂醛；4-吡啶羧乙醛；2-苯基丙?；?proprion)乙醛；苯乙醛；間-茴香醛；庚醛；3-硝基苯甲醛；3-苯基丁醛；3-吡啶基乙醛N-氧化物；ethyl leveulinate；乙基-2-乙基乙酰丙酮；乙基-4-丁酸乙酰酯；丙酰(proprionyl)醋酸乙酯；乙基2-芐基乙酰丙酮；1-苯基-2-戊酮；1-乙酯基-4-哌啶酮；N-丙酮基鄰苯二甲酰亞胺；2-氟苯基丙酮；4-(3-氧丁基)醋酸苯酯。
然后使整個(gè)板反應(yīng)24小時(shí)。所產(chǎn)生的化合物或者是單烷基化的(R＝H，R’＝烷基、芳基)、或者是二烷基化的(R＝R’＝烷基或芳基)。
在三甲基鋁(AlMe3)存在下在二氯甲烷中于50℃下將母化合物III142與用于構(gòu)建N6庫(kù)且如上所述的胺反應(yīng)過(guò)夜來(lái)構(gòu)建其它的第二代庫(kù)(“庫(kù)B”)。通過(guò)蒸發(fā)除去溶劑，將殘余物溶解在乙腈中、并用三甲基甲硅烷基碘化物處理過(guò)夜。通過(guò)加入甲醇、蒸發(fā)溶劑、將殘余物分配在醚和水/醋酸(7∶3)之間并萃取產(chǎn)物成含水層，逐步完成反應(yīng)。
第二代庫(kù)A 第二代庫(kù)B 實(shí)施例5基于二苯基硼酸酯的化合物根據(jù)上述結(jié)果，本發(fā)明的數(shù)個(gè)腺嘌呤DNA甲基轉(zhuǎn)移酶抑制劑中的一個(gè)共同成分是二苯基硼酸酯。因此，按如下制備數(shù)個(gè)基于該酯的另外的化合物。這些化合物具有如下結(jié)構(gòu) 這些化合物的一般合成如反應(yīng)示意圖7所示。1.硼酸的合成(化合物8).
在氬氣下將二氯硼烷二甲基硫化物復(fù)合體(0.5-2mL)溶解在四氫呋喃或二醚中、并冷卻至-78℃。將在四氫呋喃、二乙醚、環(huán)己烷或這些溶劑的混合物中的適當(dāng)?shù)谋交窭旁噭?2摩爾當(dāng)量)逐滴加入冷的反應(yīng)物中。令該反應(yīng)物加溫至室溫并攪拌過(guò)夜。在反應(yīng)物中加入二乙醚并通過(guò)緩慢加入1N鹽酸使反應(yīng)物水解。分離各層并用飽和含水NaCI洗滌有機(jī)層。將有機(jī)層經(jīng)硫酸鎂(MgSO4)干燥、過(guò)濾、并在真空下除去溶劑得到澄清油狀的粗制品。將標(biāo)題化合物的這種粗制劑直接用于合成的下一階段。反應(yīng)示意圖7 其中反應(yīng)條件為i)四氫呋喃(THF)或乙醚(Et2O)，-78℃至室溫過(guò)夜；ii)EtOH，8-羥基喹啉，室溫；iii)EtOH，2-氨基乙醇，室溫。
每個(gè)苯環(huán)上X可代表5個(gè)以下取代基，它們可各自為氫、低級(jí)烷基、芳基或取代的芳基、低級(jí)烷氧基、低級(jí)烷氧基烷基、或環(huán)烷基或環(huán)烷基烷氧基，這里每個(gè)環(huán)烷基基團(tuán)具有3-7個(gè)原子數(shù)，環(huán)烷基原子數(shù)中有兩個(gè)可以任選是選自氧和氮的雜原子，并且烷基、芳基或環(huán)烷基基團(tuán)的任何原子可被鹵素、低級(jí)烷基或低級(jí)烷氧基、芳基或取代的芳基、鹵素、硝基、亞硝基、醛、羧酸、酯、酰胺、或硫酸鹽任選取代。2.硼酸8-羥基喹啉酯(化合物9)的合成將粗制硼酸(8)溶解在0.05-5mL乙醇中并用乙醇中1-2當(dāng)量的1M 8-羥基喹啉處理。將從溶液中沉淀出的產(chǎn)物或溶液濃縮并進(jìn)行結(jié)晶，一旦固體形成、則通過(guò)過(guò)濾收集產(chǎn)物并用乙醇洗滌。3.硼酸乙醇胺酯(化合物10)的合成將粗制硼酸(8)溶解在0.05-5mL乙醇中并用乙醇中1-2當(dāng)量的1M乙醇胺處理。將從溶液中沉淀出的產(chǎn)物或溶液濃縮并進(jìn)行結(jié)晶，一旦固體形成、則通過(guò)過(guò)濾收集產(chǎn)物并用乙醇洗滌。
使用本發(fā)明的體內(nèi)測(cè)定法、用新月柄桿菌對(duì)如上所述制備的化合物(1)-(5)進(jìn)行測(cè)試，對(duì)化合物(1)、(2)、(4)和(5)已經(jīng)測(cè)試了其對(duì)枯草芽孢桿菌的細(xì)胞生長(zhǎng)抑制作用。IC50值如下表II所示。
表II

這些化合物具有優(yōu)越的物理特性，并且被分離為能適應(yīng)大規(guī)模生產(chǎn)的純的穩(wěn)定的固體。本發(fā)明的腺嘌呤DNA甲基轉(zhuǎn)移酶抑制劑的另外的特殊實(shí)施方式包括具有下列這些附加特征的相關(guān)化合物1)在苯環(huán)上、在鄰位、間位和對(duì)位中任一位或其組合上含有不同取代基的類似物，包括稠環(huán)和取代的稠環(huán)；2)在一個(gè)或兩個(gè)苯基基團(tuán)上具有各種環(huán)大小、取代的雜環(huán)、稠雜環(huán)和取代稠雜環(huán)的芳雜環(huán)的類似物；3)利用上述1)和2)的芳族體系的組合、具有兩個(gè)與硼原子結(jié)合的不相同芳環(huán)的類似物；4)用在任何可能位置含不同的取代基的喹啉(9)制備的類似物、或者包括在任何可能位置含一個(gè)或多個(gè)雜原子的稠雜芳環(huán)或在任何可能位置含一個(gè)或多個(gè)雜原子且在任何可能位置含不同取代基的稠雜芳環(huán)的結(jié)構(gòu)類似物；以及5)在(10)的2-氨基乙醇的亞乙基的C-1和C-2位中的任一或兩者上具有取代基的類似物。
應(yīng)該認(rèn)識(shí)到前面的說(shuō)明書(shū)著重公開(kāi)了本發(fā)明的某些特定實(shí)施方式及對(duì)其所做的等同改變或替換都是在所附權(quán)利要求書(shū)所述的構(gòu)思和范圍內(nèi)。
權(quán)利要求
1.下式的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽， 其中R1、R2和R3相同或不同，并且各自為氫、低級(jí)烷基、芳基或取代的芳基、低級(jí)烷氧基、低級(jí)烷氧烷基、或環(huán)烷基或環(huán)烷基烷氧基，其中每個(gè)環(huán)烷基基團(tuán)具有3-7個(gè)環(huán)原子，其中該環(huán)原子中至多兩個(gè)是或不是選自氧和氮的雜原子，且其中每個(gè)烷基、芳基或環(huán)烷基基團(tuán)均可被氫、低級(jí)烷基或低級(jí)烷氧基、芳基或取代的芳基取代或不取代，并且其中R3可以是核糖、脫氧核糖或其磷酸化衍生物，其中R1，R2，和R3不都是氫，且其中當(dāng)R3是核糖、脫氧核糖或其磷酸化衍生物，R1或R2之一不是氫。
2.根據(jù)權(quán)利要求1的化合物，其中R1和R2相同或不同并且各自為氫、組胺二鹽酸鹽、去甲苯福林鹽酸鹽、1，2-二氨基丙烷、5-氨基-1，3，3-三甲基環(huán)己烷甲基-胺、3-異丙氧基丙基胺、二苯基硼酸、乙醇胺酯、2-(2-氨基乙基氨基)-乙醇、四氫糠胺、5-甲基色胺鹽酸鹽、3，3-二苯基丙基胺、1-(3-氨基丙基)-2-吡咯烷酮、2-(2-氨基乙基)-1-甲基吡咯烷、2-(氨基甲基)苯并咪唑二氫-氯化水合物、2，2，2-三氟乙胺鹽酸鹽、L-肌肽、(R)-(-)-1-氨基-2-丙醇、2-(1-環(huán)己烯基)乙胺、4-(三氟甲基)芐胺、2，5-二氯戊胺鹽酸鹽、(+/-)-4-氨基-3-羥丁酸、N，N-二甲基1，2-乙二胺、3，3-二甲基丁胺、1，4-二氨基-2-丁酮二鹽酸鹽、氨基甲基苯甲酸、氨基羥基甲基丙二醇、2-(氨基乙基)吡啶、氨基丁醇、金剛胺、氨基己酸、N-芐基乙醇胺、乙基-6-氨基丁酸鹽鹽酸鹽、1，2-乙二胺、或2-環(huán)己-1-烯基乙胺。
3.根據(jù)權(quán)利要求1的化合物，其中R3為甲基4-碘丁酸酯、1-溴-3-苯基丙烷、肉桂基溴化物、2-氯乙基膦酸、乙基2-(2-氯乙酰氨基)-4-噻唑-醋酸鹽、4-(2-氯乙基)嗎啉鹽酸鹽、(2-溴乙基)三甲基溴化銨、4-氯苯基2-溴乙醚、N-(3-溴丙基)鄰苯二甲酰亞胺、異氰酸2-氯乙酯、2-氯-N，N-二甲基乙酰乙酰胺、3-氯-2-羥基丙基異丁烯酸酯、2-溴-2’-羥基-5’-硝基乙酰苯胺、3-(2-溴乙基)吲哚、5-氯-2-戊酮乙烯酮縮醇、2-氯乙基乙基硫化物、3-氯-N-羥基-2，2-二甲基-丙酰胺、L-1-對(duì)-甲苯磺?；被?2-苯乙基氯甲基酮、2-(2-溴乙基)-1，3-二氧戊環(huán)、乙基2-(溴甲基)丙烯酸酯、2-(2-(2-氯乙氧基)乙氧基)乙醇、(3-氯丙基)三甲氧基硅烷、氯霉素、4-(氯甲基)苯甲酸、溴乙胺鹽酸鹽、表溴醇、碘戊烷、或苯甲基溴化物。
4.根據(jù)權(quán)利要求1的化合物，其中R1為H，R2為(2-二苯基硼酸酯)乙基或二苯基丙基，且R3為H、2-(4-嗎啉基)-乙基、3-(N-鄰苯二甲酰)-氨基丙基、2-(2-(2-羥基乙氧基)乙氧基)乙基、或乙基-2-(丙烯酸酯)-甲基。
5.根據(jù)權(quán)利要求1的化合物，其中R1為H，R2為(S-高胱氨酸基)甲基，R3為核糖、5’-磷酰基核糖、脫氧核糖或5’-磷酰基脫氧核糖。
6.根據(jù)權(quán)利要求1的化合物，其中R3為H，R1和R2一起為2-(二苯基甲基)環(huán)戊基或2-(二苯基羥基甲基)環(huán)戊基。
7.根據(jù)權(quán)利要求1的化合物，其中R1為H，R2為丙氨?；』ァ?-烷基酮-2-氨基乙基、2-氨基乙基或單-或二取代的2-氨基乙基、R3為2-(4-嗎啉基)-乙基。
8.根據(jù)權(quán)利要求1的化合物，其中R1和R2相同或不同，并且各自為氫、組胺二鹽酸鹽、去甲苯福林鹽酸鹽、1，2-二氨基丙烷、5-氨基-1，3，3-三甲基環(huán)己烷甲基-胺、3-異丙氧基丙基胺、二苯基硼酸、乙醇胺酯、2-(2-氨基乙基氨基)-乙醇、四氫糠基胺、5-甲基色胺鹽酸鹽、3，3-二苯基丙基胺、1-(3-氨基丙基)-2-吡咯烷酮、2-(2-氨基氨基乙基)-1-甲基吡咯烷、2-(氨基甲基)苯并咪唑二氫-氯化水合物、2，2，2-三氟乙胺鹽酸鹽、L-肌肽、(R)-(-)-1-氨基-2-丙醇、2-(1-環(huán)己烯基)乙胺、4-(三氟甲基)芐胺、2，5-二氯戊胺鹽酸鹽、(+/-)-4-氨基-3-羥丁酸、N，N-二甲基1，2-乙二胺、3，3-二甲基丁胺、1，4-二氨基-2-丁酮二鹽酸鹽、氨基甲基苯甲酸、氨基羥基甲基丙二醇、2-(氨基乙基)吡啶、氨基丁醇、金剛胺、氨基己酸、N-芐基乙醇胺、乙基-6-氨基丁酸鹽鹽酸鹽、1，2-乙二胺、或2-環(huán)己-1-烯基乙胺，R3為甲基4-碘丁酸酯、1-溴-3-苯丙烷、肉桂基溴化物、2-氯乙基膦酸、乙基2-(2-氯乙酰胺基)-4-噻唑-醋酸鹽、4-(2-氯乙基)嗎啉鹽酸鹽、(2-溴乙基)三甲基溴化銨、4-氯苯基2-溴乙醚、N-(3-溴丙基)苯鄰二甲酰亞胺，異氰酸2-氯乙基酯、2-氯-N，N-二甲基乙酰乙酰胺、3-氯-2-羥丙基甲基丙烯酸酯、2-溴基-2’-羥基-5’-硝基乙酰苯胺、3-(2-溴乙基)吲哚、5-氯-2-戊酮乙烯酮縮醇、2-氯乙基乙基硫化物、3-氯-N-羥基-2，2-二甲基-丙酰胺、L-1-對(duì)-甲苯磺?；被?2-苯乙基氯甲基酮、2-(2-溴乙基)-1，3-二氧戊環(huán)、乙基2-(溴甲基)丙烯酸酯、2-(2-(2-氯乙氧基)乙氧基)乙醇、(3-氯丙基)三甲氧基硅烷、氯霉素、4-(氯甲基)苯甲酸、溴乙胺鹽酸鹽、表溴醇、碘戊烷、或苯甲基溴化物。
9.根據(jù)權(quán)利要求1的化合物，選自6-N-(二苯基硼酸酯)-乙基-腺嘌呤、6-N-(二苯基硼酸酯)-乙基-9-(2-(4-嗎啉基)-乙基)-腺嘌呤、6-N-(二苯基硼酸酯)-乙基-9-(3-(N-鄰苯二甲酰)-氨基丙基)-腺嘌呤、6-N-(二苯基硼酸酯)-乙基-9-(2-(2-(2-羥基乙氧基)乙氧基)乙基)-腺嘌呤、和6-N-(二苯基硼酸酯)-乙基-9-(乙基-2-丙烯酸酯)-甲基-腺嘌呤。
10.一種藥物組合物，含有權(quán)利要求1的化合物和至少一種藥學(xué)上可接受的載體或賦形劑的組合。
11.一種治療與表達(dá)腺嘌呤DNA甲基轉(zhuǎn)移酶的致病菌感染相關(guān)的疾病或失調(diào)的方法，該方法包括給需要這種治療的患者服用治療上有效量的權(quán)利要求1的化合物。
12.根據(jù)權(quán)利要求11的方法，其中與該疾病或失調(diào)相關(guān)的感染致病菌為金黃色葡萄球菌、腐生葡萄球菌、釀膿鏈球菌、無(wú)乳鏈球菌、肺炎鏈球菌、炭疽芽孢桿菌、白喉棒桿菌、產(chǎn)氣莢膜梭菌、肉毒梭菌、破傷風(fēng)梭菌、淋病奈瑟氏球菌、腦膜炎奈瑟氏球菌、銅綠假單胞菌、侵肺軍團(tuán)菌、大腸埃希氏菌、鼠疫耶爾森氏菌、流感嗜血桿菌、幽門(mén)螺桿菌、胚胎彎曲桿菌、霍亂弧菌、副溶血弧菌、蒼白密螺旋體、衣氏放線菌、普氏立克次氏體、立氏立克次氏體、砂眼衣原體、鸚鵡熱衣原體、流產(chǎn)布魯氏菌或根癌土壤桿菌。
13.下式的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽， 其中Ra、Rb和Rc相同或不同，并且各自為氫、鹵素、硝基、亞硝基、低級(jí)烷基、芳基或取代的芳基、低級(jí)烷氧基、低級(jí)烷氧基烷基、或環(huán)烷基或環(huán)烷基烷氧基，這里每個(gè)環(huán)烷基基團(tuán)具有3-7個(gè)環(huán)原子，其中該環(huán)烷基的環(huán)原子中至多兩個(gè)是或不是選自硫、氧和氮的雜原子，并且其中每個(gè)烷基、芳基或環(huán)烷基基團(tuán)均可被鹵素、低級(jí)烷基或低級(jí)烷氧基、芳基或取代的芳基、鹵素、硝基、亞硝基、醛、羧酸、酰胺、酯或硫酸鹽取代或不取代，或者其中Ra，Rb和Rc可被芳族的、脂肪族的、雜芳族的、雜脂肪族的環(huán)結(jié)構(gòu)或其取代方式連接，并且其中Ar1和Ar2可以相同或不同，并且各自為芳基或在一個(gè)或多個(gè)位置以鹵素、硝基、亞硝基、低級(jí)烷基、芳基或取代的芳基、低級(jí)烷氧基、低級(jí)烷氧基烷基、或環(huán)烷基或環(huán)烷基烷氧基取代的芳基，其中每個(gè)環(huán)烷基基團(tuán)具有3-7個(gè)環(huán)原子，其中該環(huán)中至多兩個(gè)是或不是選自硫、氧和氮的雜原子，且其中每個(gè)烷基、芳基或環(huán)烷基基團(tuán)均可被鹵素、低級(jí)烷基或低級(jí)烷氧基、芳基或取代的芳基、鹵素、硝基、亞硝基、醛、羧酸、酰胺、酯或硫酸鹽取代或不取代，且其中鍵1和鍵2各自為單鍵或雙鍵。
14.根據(jù)權(quán)利要求14的化合物，選自二-(對(duì)氟苯基)硼酸8-羥基喹啉酯、二-(對(duì)-氯苯基)硼酸8-羥基喹啉酯、二苯基硼酸8-羥基喹啉酯、二-(對(duì)-氟苯基)硼酸乙醇胺酯、和二-(對(duì)-氯苯基)硼酸乙醇胺酯。
15.一種藥物組合物，含有權(quán)利要求1的化合物和至少一種藥學(xué)上可接受的載體或賦形劑的組合。
16.一種治療與表達(dá)腺嘌呤DNA甲基轉(zhuǎn)移酶的致病菌感染相關(guān)的疾病或失調(diào)的方法，該方法包括給需要這種治療的患者服用治療上有效量的權(quán)利要求1的化合物。
17.根據(jù)權(quán)利要求11的方法，其中與該疾病或失調(diào)相關(guān)的感染致病菌為金黃色葡萄球菌、腐生葡萄球菌、釀膿鏈球菌、無(wú)乳鏈球菌、肺炎鏈球菌、炭疽芽孢桿菌、白喉棒桿菌、產(chǎn)氣莢膜梭菌、肉毒梭菌、破傷風(fēng)梭菌、淋病奈瑟氏球菌、腦膜炎奈瑟氏球菌、銅綠假單胞菌、侵肺軍團(tuán)菌、大腸埃希氏菌、鼠疫耶爾森氏菌、流感嗜血桿菌、幽門(mén)螺桿菌、胚胎彎曲桿菌、霍亂弧菌、副溶血弧菌、蒼白密螺旋體、衣氏放線菌、普氏立克次氏體、立氏立克次氏體、砂眼衣原體、鸚鵡熱衣原體、流產(chǎn)布魯氏菌或根癌土壤桿菌。
18.一種組合庫(kù)，含有權(quán)利要求1的多種化合物。
19.一種組合庫(kù)，含有權(quán)利要求13的多種化合物。
20.一種封裝的藥物組合物，含有裝在容器中的權(quán)利要求10的藥物組合物和使用該組合物治療患者中與致病菌感染相關(guān)的疾病或失調(diào)的說(shuō)明書(shū)。
全文摘要
本發(fā)明涉及一類廣譜抗生素,它們是細(xì)菌性腺嘌呤DNA甲基轉(zhuǎn)移酶的抑制劑。
文檔編號(hào)A61K31/7076GK1370170SQ00809844
公開(kāi)日2002年9月18日 申請(qǐng)日期2000年5月25日 優(yōu)先權(quán)日1999年5月25日
發(fā)明者斯蒂芬·J·本科維克, 露西爾·夏皮羅, 斯蒂芬·J·貝克, 達(dá)夫尼·C·沃農(nóng), 馬克·沃爾 申請(qǐng)人:賓夕法尼亞州研究基金會(huì)