專利名稱：含有成膠束表面活性劑的棘白菌素藥物制劑的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及含有棘白菌素化合物的藥物制劑，特別是摻入成膠束表面活性劑來增強穩(wěn)定性和水溶性。
背景技術(shù)：
藥物的胃腸外(ip)制劑可以通過肌內(nèi)注射(im)、靜脈注射(iv)或皮下注射方法對病人給藥。為特定藥物開發(fā)的制劑要取決于多種因素。例如，本領(lǐng)域中眾所周知制劑應(yīng)當是水溶性的和穩(wěn)定的。如果冷凍干燥的話，制劑應(yīng)當能形成良好形態(tài)的餅狀物并可以輕易地重構(gòu)(通常在不到1分鐘內(nèi))。最后，制劑應(yīng)當具有可接受的外觀和用普遍承認的安全賦形劑制備。
設(shè)計制劑時，穩(wěn)定性是一個重要的考慮因素，尤其是對于胃腸外應(yīng)用。出于現(xiàn)實的原因，制劑必須有可能儲存至少2年。因此，常常希望將制劑冷凍干燥以得到更好的保存期并在室溫下儲存。
棘白菌素化合物的不穩(wěn)定性和較差的水溶性(＜0.1mg/ml)使得它們特別難以制劑。迄今所檢驗的大多數(shù)制劑的保存期都小于1年。通常需要兩年或更長時間的保存期。所以，含有棘白菌素化合物的制劑可能需要冷凍干燥以達到所需的穩(wěn)定性。
棘白菌素化合物較差的水溶性對配制含有棘白菌素活性物質(zhì)的胃腸外制劑提出了更大的挑戰(zhàn)。配制這類化合物的一個方法是通過加入能增強藥物溶解性的表面活性劑。但是，本領(lǐng)域中眾所周知，使用高于某個濃度的表面活性劑常常會限制制劑冷凍干燥的能力。一般凍干制劑的表面活性劑濃度小于5重量％。根據(jù)對含有表面活性劑的凍干藥物制劑的市場調(diào)查，表面活性劑在凍干產(chǎn)品中的濃度通常小于5重量％。參見Carpenter等，《藥物研究》14(8)，969-975，1977至1997，醫(yī)師案頭參考資料(Physicians’DeskReference)，第50版，Medical Economics公司，NJ(1996)。人們普遍相信，具有更高濃度表面活性劑的制劑不可能形成具有所需特性的凍干產(chǎn)品。具體地說，表面活性劑的存在導(dǎo)致凍干的餅狀物“崩解”，使得在管形瓶的底部出現(xiàn)殘余物而不再是良好形態(tài)的餅狀物。該殘余物通常是不太穩(wěn)定的，難以重構(gòu)并且不可再生。
由于棘白菌素化合物較差的水溶性，通常需要2-4％(重量/體積)的表面活性劑才能使棘白菌素化合物在溶液中達到可接受的濃度。如上所討論的那樣，這種濃度的表面活性劑會阻礙冷凍干燥。因此，需要能改善棘白菌素化合物在水中的溶解性而又允許冷凍干燥以獲得最佳穩(wěn)定性的制劑。
發(fā)明概述申請人已發(fā)現(xiàn)了一組表面活性劑，它們能在較高的濃度下增溶棘白菌素化合物并出人意料地保持了冷凍干燥該制劑的能力。在本發(fā)明的一個實施方案中，提供了一種胃腸外藥物制劑，它包含(i)棘白菌素(echinocandin)化合物(或其藥學(xué)上可接受的鹽)、(ii)藥學(xué)上可接受的成膠束表面活性劑(例如聚山梨醇酯、卵磷脂、膽汁鹽、聚氧乙烯蓖麻油及其混合物)、和(iii)無毒的含水溶劑。該藥物溶液制劑可以可任選地含有一種或多種穩(wěn)定劑、張度劑(tonicityagent)和/或緩沖劑。棘白菌素與表面活性劑的重量比為約1∶1.75至約1∶25(更優(yōu)選比例為約1∶2至約1∶3)，且該棘白菌素化合物以大于或等于lmg/ml的量存在。表面活性劑通常以大于1％重量/體積的量存在。
在本發(fā)明的一個實施方案中，提供了一種凍干藥物制劑，它包含(i)棘白菌素化合物(或其藥學(xué)上可接受的鹽)、(ii)藥學(xué)上可接受的成膠束表面活性劑(例如聚山梨醇酯、卵磷脂、膽汁鹽、聚氧乙烯蓖麻油及其混合物)、和(iii)增量劑(bulking agent)。成膠束表面活性劑在該凍干產(chǎn)品中以大于5％重量的量存在，且棘白菌素與表面活性劑的比例為約1∶1.75至約1∶25(優(yōu)選比例為約1∶2至約1∶3)。該藥物凍干制劑可以任選地含有一種或多種穩(wěn)定劑和/或緩沖劑。還提供了用該凍干制劑制備的胃腸外藥物制劑。
在本發(fā)明的又一個實施方案中，提供了制備胃腸外制劑的方法，該方法包括將棘白菌素化合物(或棘白菌素/糖類復(fù)合物)與藥學(xué)上可接受的成膠束表面活性劑在含水溶劑中混合。
在本發(fā)明的另一個實施方案中，提供了制備凍干制劑的方法，它包括以下順序的幾個步驟(i)將棘白菌素化合物(或棘白菌素/糖類復(fù)合物)在藥學(xué)上可接受的成膠束表面活性劑的存在下溶解到含水溶劑中，其中表面活性劑以大于1％重量/體積的量存在；(ii)無菌過濾該溶液；和(iii)冷凍干燥該溶液。通常，在冷凍干燥該溶液前加入增量劑。任選地，可以在步驟(iii)之前加入一種或多種緩沖劑、穩(wěn)定劑、張度劑、或其組合。
還提供了另一種制備凍干制劑的方法，它包括(i)將無毒含水溶劑緩沖至pH4.0到5.0之間，以形成緩沖溶液；(ii)向該緩沖的溶液中加入藥學(xué)上可接受的成膠束表面活性劑；(iii)將步驟(ii)得到的溶液冷卻至溫度在5至15℃之間(優(yōu)選在7℃到10℃之間)，以形成冷卻的溶液；(iv)向該冷卻溶液中加入一種淤漿，包含棘白菌素化合物或棘白菌素/糖類復(fù)合物和第二種無毒含水溶劑；(v)無菌過濾從步驟(iv)得到的所述溶液；和(vi)冷凍干燥從步驟(v)得到的所述溶液。在步驟(v)之前可以任選地加入一種或多種增量劑、穩(wěn)定劑和/或張度劑。
在本發(fā)明的另一個實施方案中，提供了一種胃腸外藥品，該藥品是通過以下步驟制備的(i)將棘白菌素化合物(或棘白菌素/糖類復(fù)合物)在藥學(xué)上可接受的成膠束表面活性劑的存在下溶解到含水溶劑中形成溶液，其中表面活性劑以大于1％重量/體積的量存在；(ii)無菌過濾該溶液；和(iii)冷凍干燥在管形瓶中的該溶液，其中棘白菌素與表面活性劑的重量比為約1∶1.75至約1∶25。當準備使用時，向該管形瓶中加入無毒含水溶劑。
在本發(fā)明的又一個實施方案中，提供了治療需要這種治療的哺乳動物的抗真菌感染的方法，它包括對該哺乳動物給藥上述胃腸外制劑或通過將藥學(xué)上可接受的含水溶劑加入到上述某一種凍干制劑中而制得的胃腸外制劑。
除非另有說明，否則本文中描述的量和百分數(shù)均為重量單位。
術(shù)語“棘白菌素”指的是具有下列通式結(jié)構(gòu)的化合物 其中R是烷基、鏈烯基、炔基、芳基、雜芳基、或其組合；R1、R2、R3、R6、R7和R10獨立地為羥基或氫；R4是氫、甲基或-CH2C(O)NH2；R5和R11獨立地為甲基或氫；R8是-OH、-OPO3H2、-OPO3HCH3、-OPO2HCH3、或-OSO3H；R9是-H、-OH或-OSO3H。
除非另有說明，否則術(shù)語“烷基”指的是含有1至30個碳原子的通式為CnH2n+1的烴基。烷基可以是直鏈、支鏈、環(huán)狀或多環(huán)的。烷基可以是取代或未取代的。類似地，烷氧基或鏈烷酸酯的烷基部分具有與上面相同的定義。
術(shù)語“鏈烯基”指的是含有至少一個碳-碳雙鍵的無環(huán)烴。烯烴基可以是直鏈、支鏈、環(huán)狀或多環(huán)的。烯烴基可以是取代或未取代的。
術(shù)語“炔基”指的是含有至少一個碳-碳三鍵的無環(huán)烴。炔基可以是直鏈或支鏈的。炔基可以是取代或未取代的。
術(shù)語“芳基”指的是具有單環(huán)(例如苯基)或稠環(huán)系統(tǒng)(例如萘、蒽、菲等)的芳香基。芳基可以是取代或未取代的。取代芳基包括一個芳族部分的鏈(例如聯(lián)苯、三聯(lián)苯、苯基萘亞甲基等)。
術(shù)語“雜芳基”指的是在芳環(huán)系統(tǒng)中含有至少一個雜原子的芳香基(例如吡咯、吡啶、吲哚、噻吩、呋喃、苯并呋喃、咪唑、嘧啶、嘌呤、苯并咪唑、喹啉等)。該芳香基可以由單環(huán)或稠環(huán)系統(tǒng)組成。雜芳基可以是取代或未取代的。
在有機化學(xué)領(lǐng)域內(nèi)，特別是在有機生物化學(xué)領(lǐng)域內(nèi)，普遍認為化合物的重要的取代是容許或者甚至是有用的。在本發(fā)明中，例如，允許取代基的術(shù)語烷基是典型的烷基，諸如甲基、乙基、異丙基、異丁基、叔丁基、己基、異辛基、十二烷基、十八?；?。術(shù)語基團明確地構(gòu)想并允許在本領(lǐng)域中常見的烷基上取代，諸如羥基、鹵素、烷氧基、羰基、酮基、酯、carbamato等，也包括未取代的烷基。但是，本領(lǐng)域技術(shù)人員普遍理解，所選擇的取代基不應(yīng)對化合物的藥理學(xué)特性產(chǎn)生不利影響或者不利地干擾藥物的使用。對于上面所定義的任何基團來說都合適的取代基包括烷基、鏈烯基、炔基、芳基、鹵素、羥基、烷氧基、芳氧基、巰基、烷硫基、芳硫基、一-和二烷基氨基、季銨鹽、氨基烷氧基、羥基烷基氨基、氨基烷硫基、氨基甲?；?、羰基、羧基、乙醇酰基、甘氨酰基、肼基、脒基、及其組合。
“棘白菌素/糖類復(fù)合物”指的是當棘白菌素在糖類的存在下從溶劑中重結(jié)晶時在棘白菌素化合物和糖類間形成的結(jié)晶復(fù)合物(Complex)。對棘白菌素/糖類復(fù)合物的更詳細的描述可以見Larew等于1999年3月3日提交的題為“棘白菌素/糖類復(fù)合物”。
“糖類”指的是由式Cn(H2O)n代表的多元醇的醛或酮衍生物(例如葡萄糖，C6(H2O)6；蔗糖，C12(H2O)11)。糖類包括具有相對小分子的化合物，諸如簡單糖(例如單糖、二糖等)，以及大分子(聚合)物質(zhì)，諸如淀粉、糖原和纖維素多糖。糖是具有普遍組成(CH2O)n的糖類(saccharides)及其簡單衍生物。盡管簡單的單體糖(葡萄糖)描述為多羥基醛或酮，例如HOCH2-(CHOH)4-CHO為己醛糖(例如葡萄糖)或者HOCH2-(CHOH)3-CO-CH2OH為2-酮糖(例如果糖)，但結(jié)構(gòu)通常寫成5(呋喃糖)或6(吡喃糖)元環(huán)的環(huán)醚，例如 術(shù)語“成膠束表面活性劑”指的是能自發(fā)并可逆地形成水溶性聚集體的兩親物質(zhì)。關(guān)于膠束形成和成膠束表面活性劑的清單的更詳細的描述參見Attwood等的《表面活性劑系統(tǒng)，它們的化學(xué)、藥學(xué)和生物學(xué)》，Chapman & Hall(1983)。氧化丙烯和氧化乙烯的嵌段共聚物在本發(fā)明的制劑中不能很好地工作；因此，這些嵌段共聚物不被考慮在成膠束表面活性劑的含義內(nèi)。
術(shù)語“藥學(xué)上可接受的”當在本文中用作形容詞時，意思是對接受者基本上無毒和基本上無害的。
詳細描述用于本發(fā)明的環(huán)肽可以通過培養(yǎng)不同的微生物來制備。屬于棘白菌素環(huán)肽族的合適的天然產(chǎn)物原料包括棘白菌素B、棘白菌素C、棘白菌素D、刺孢曲菌素Aγ、牟倫多菌素、孢子真菌素(Sporiofungin)A、肺炎菌素(Pneumocandin)A0、WF11899A和肺炎菌素B0。一般說來，環(huán)肽可以描繪為在氨基酸之一上帶有?；被沫h(huán)六肽核。天然產(chǎn)環(huán)肽上的氨基一般用脂肪酸基?；纬呻x開核的側(cè)鏈。天然產(chǎn)?；膶嵗▉営王；?linoleoyl)(棘白菌素B、C和D)、棕櫚酰(刺孢曲菌素Aγ和WF11899A)、硬脂酰、12-甲基肉豆蔻酰(牟倫多菌素)、10，12-二甲基肉豆蔻酰(孢子真菌素A和肺炎菌素A0)等等。
半合成衍生物可以通過將脂肪酸側(cè)鏈從環(huán)肽核上除去而生成游離氨基(即沒有側(cè)?；鵆(O)R)來制備。該游離胺然后用合適的?；匦迈；?。例如，棘白菌素B核用某些非天然產(chǎn)的側(cè)鏈部分重新?；玫搅嗽S多抗真菌劑。參見，即美國專利4,293,489。本領(lǐng)域技術(shù)人員將領(lǐng)會到N-?；鶄?cè)鏈包括本領(lǐng)域中已知的各種各樣的側(cè)鏈部分。合適的側(cè)鏈部分包括取代和未取代的烷基、鏈烯基、炔基、芳基、雜芳基及其結(jié)合物。優(yōu)選該側(cè)鏈含有直鏈的剛性區(qū)段和柔性的烷基區(qū)段，以最大化抗真菌效價。優(yōu)選的?；鶄?cè)鏈的典型實例包括具有下列結(jié)構(gòu)的R基 或 其中A、B、C和D獨立地為氫、C1-C12烷基、C2-C12炔基、C1-C12烷氧基、C1-C12烷硫基、鹵素、或-O-(CH2)m-[O-(CH2)n]p-O-(C1-C12烷基)或-O-(CH2)q-X-E；m是2、3或4；n是2、3或4；p是0或1；q是2、3或4；X是吡咯烷子基(pyrrolidino)、哌啶子基或哌嗪子基(piperazino)；而E是氫、C1-C12烷基、C3-C12環(huán)烷基、芐基或C3-C12環(huán)烷基甲基。
如上所述，此處描述的環(huán)肽可以通過如本領(lǐng)域中所述將已知微生物發(fā)酵來制備。隨后的脫酰作用一般使用脫酰酶通過本領(lǐng)域中所述的已知材料和方法酶促進行。
例如，美國專利3,293,482描述了其中R4、R5和R11為甲基、R9為氫、R1、R2、R3、R6、R7、R8和R10各自為羥基的式I環(huán)肽的脫酰和制備。美國專利4,299,763描述了其中R4、R5和R11為甲基、R2為羥基、R7和R9為氫、R1、R3、R6、R8和R10各自為羥基的式I環(huán)肽的脫酰和制備。美國專利3,978,210描述了刺孢曲菌素的制備。美國專利4,304,716描述了其中R5為-CH2C(O)NH2、R11為甲基、R4和R9為氫、R1、R2、R3、R6、R7、R8和R10各自為羥基且?guī)в腥〈鵕的?；鶠槿舛罐Ⅴ５氖絀環(huán)肽的脫酰和制備。
其中R2和R7各自為氫的環(huán)肽可以通過讓相應(yīng)的化合物(其中R2和R7各自為羥基；鳥氨酸α氨基可以是游離氨基或?；?在-5℃到70℃之間的溫度下在合適的溶劑中經(jīng)受強酸和還原劑來制備。合適的強酸包括三氯乙酸、三氟乙酸或三氟化硼醚合物。優(yōu)選的強酸是三氟乙酸。合適的還原劑包括氰基硼氫化鈉或三乙基硅烷。優(yōu)選的還原劑是三乙基硅烷。合適的溶劑包括二氯甲烷、氯仿或乙酸，優(yōu)選二氯甲烷。強酸的存在量為約2至60mol/mol反應(yīng)物，而還原劑的存在量為約2至60mol/mol反應(yīng)物。酸還原過程選擇性地除去縮醛胺(R2)和芐基(R7)的羥基。
鳥氨酸單元上的α-氨基的酰化可以用本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的各種方式來完成。例如，氨基可以通過與適當取代的酰鹵反應(yīng)而酰化，優(yōu)選在酸清除劑諸如叔胺(例如三乙胺)的存在下進行。該反應(yīng)一般在約-20℃至25℃之間的溫度下進行。合適的反應(yīng)溶劑包括極性質(zhì)子惰性溶劑，諸如二噁烷或二甲基甲酰胺。溶劑選擇不是決定性的，只要所用的溶劑對進行中的反應(yīng)是惰性的且反應(yīng)物能充分溶解以完成所需反應(yīng)即可。
氨基還可以通過在偶聯(lián)劑的存在下與適當取代的羧酸反應(yīng)來酰化。合適的偶聯(lián)劑包括二環(huán)己基碳化二亞胺(DCC)、N，N’-羰基二咪唑、雙(2-氧代-3-噁唑烷基)次膦酰氯(BOP-Cl)、N-乙氧羰基-2-乙氧基-1，2-二氫喹啉(EEDQ)、苯并三唑-1-基氧-三吡咯烷六氟磷酸鏻(PyBOP)以及類似物質(zhì)。
另外，氨基還可以用羧酸的活性酯來?；T如對?；交?、2，4，5-三氯苯基、羥基苯并三唑水合物(HOBTH2O)、五氟苯酚和N-羥基琥珀酰亞胺羧酸酯。優(yōu)選的?；?，4，5-三氯苯基和HOBT羧酸酯。該反應(yīng)一般在約0℃至30℃的溫度下在質(zhì)子惰性溶劑中進行1-65小時。當該反應(yīng)在約15℃至30℃的溫度下進行時通常在約24至48小時后完成。合適的溶劑包括四氫呋喃和二甲基甲酰胺或其混合物。氨基通常以相對活性酯等摩爾比例存在或者有稍微過量的氨基。
R-COOH前體酸通過水解式R-CN的腈或式R-COO(C1-C4烷基)的酯來制備。腈和酯中間體可以使用本領(lǐng)域中的已知方法制備。例如，其中R為烷氧基芳基部分的腈和酯中間體可以使用方法A或方法B制備。
方法A將1當量的烷基溴、烷基碘或?qū)妆交撬狨ゼ尤氲酱嬖谟?00-300ml乙腈(CH3CN)中的含有1當量堿諸如叔丁醇鉀或碳酸鉀(K2CO3)和1當量羥基芳基化合物的混合物中。該反應(yīng)混合物回流6小時，然后真空濃縮得到殘余物，將其溶于Et2O/2N NaOH混合物。將所產(chǎn)生的各層分離，有機層用硫酸鎂(MgSO4)干燥，過濾并干燥得到烷氧基芳基產(chǎn)物。
方法B 將二乙基偶氮二羧酸酯(1當量)滴加到存在于200-300ml THF中的含有羥基芳基化合物(1當量)、烷基醇(1當量)和三苯基膦(1當量)的混合物中。17小時后，真空除去溶劑得到殘余物，將其溶于Et2O。所得混合物用2N NaOH溶液洗滌、用MgSO4干燥、過濾并濃縮得到產(chǎn)物，然后將其從Et2O/戊烷混合物中結(jié)晶，或者如果該產(chǎn)物含有叔胺的話，形成鹽酸鹽并從甲醇(MeOH)/EtOAc混合物中結(jié)晶。其中R為炔基芳基的腈和酯中間體可以使用方法C制備。
方法C 將含有Et2O(2當量)、二氯化鈀(0.05當量)、三苯基膦(0.1當量)、碘化亞銅(0.025當量)和炔烴(1當量)的混合物在氮氣(N2)下加入到1當量的存在于CH3CN中的芳基溴化物，碘化物或三氟甲磺酸酯中(600ml/0.1mol芳基反應(yīng)物)。將所得混合物回流17小時，然后真空除去溶劑得到殘余物，其在300ml Et2O中混合成漿狀后過濾。濾液用1N HCl溶液洗滌、用MgSO4干燥、過濾并干燥后得到產(chǎn)物。其中R為三聯(lián)苯部分的酯中間體可以使用方法D制備。
方法D1.形成硼酸(boronic acid)反應(yīng)物將丁基鋰(1.2當量)加入到1當量的存在于THF中的冷(-78℃)芳基鹵中。15分鐘后，加入三異丙基硼酸酯(2當量)。10分鐘后，將該反應(yīng)混合物加熱至室溫并通過加入水(H2O)使反應(yīng)終止，接著加入1N HCl。將所產(chǎn)生的各層分離，有機層真空濃縮得到固體，其通過過濾收集并用己烷洗滌。
2.形成三聯(lián)苯基酯將四(三苯基膦)鈀(0.03當量)加入到存在于N2-凈化甲苯中的含有芳基二羥基甲硼烷(1當量)、K2CO3(1.5當量)和4-碘代苯甲酸甲酯(1當量)(或碘代苯甲酸的三氯苯基酯)的混合物中。將該反應(yīng)混合物回流7小時，然后傾析除去K2CO3并真空干燥得到殘余物。該殘余物在CH3CN中研磨并過濾得到產(chǎn)物。上述芳基腈和酯可以使用方法E或方法F通過水解轉(zhuǎn)化為相應(yīng)的羧酸。
方法E將芳基腈溶于乙醇(EtOH)和過量的50％NaOH溶液并回流2小時。將水加入該反應(yīng)混合物中直到固體沉淀出來。該固體通過過濾收集，加入到二噁烷/6N HCl混合物中，并將所得混合物回流17小時。當該反應(yīng)基本上完成后，羧酸產(chǎn)物通過加入H2O而結(jié)晶，然后通過過濾收集并真空干燥。
方法F 將過量的2N NaOH加入存在于MeOH中的芳基酯中，所得溶液回流5小時，然后通過加入過量HCl酸化。將水加入該反應(yīng)混合物中直到固體(羧酸)沉淀。該羧酸通過過濾收集并真空干燥。該羧酸可以使用下面的方法G轉(zhuǎn)化為相應(yīng)的2，4，5-三氯苯基酯。該活性酯然后用于酰化氨基核。
方法G 將存在于CH2Cl2中的含有芳基羧酸(1當量)、2，4，5-三氯苯酚(1當量)和DCC(1當量)的混合物攪拌17小時，然后過濾。濾液濃縮得到殘余物，將其溶于Et2O、過濾、然后加入戊烷直到結(jié)晶開始。該結(jié)晶通過過濾收集并真空干燥。另外，羧酸可以通過使用方法H轉(zhuǎn)化為相應(yīng)的羥基苯并三唑酯而活化。
方法H 芳基羧酸(1當量)和稍微過量的N-甲磺酸酯取代的羥基苯并三唑(1.2當量)在N2下在稍微過量的堿諸如三乙胺(Et3N)(1.3當量)的存在下在DMF中發(fā)生反應(yīng)。當反應(yīng)完全時，混合物用甲苯稀釋并用H2O洗滌。有機部分用H2O稀釋，然后使用用于轉(zhuǎn)移物質(zhì)的叔丁基甲基醚(MTBE)過濾。所得固體用MTBE洗滌，然后真空干燥。
棘白菌素化合物可以是分離并使用其本身，或者可以是其藥學(xué)上可接受的鹽或水合物的形式，或者作為棘白菌素/糖類復(fù)合物。術(shù)語“藥學(xué)上可接受的鹽”是指從無機和有機酸衍生的無毒酸加成鹽。合適的鹽衍生物包括鹵化物、硫氰酸鹽、硫酸鹽、硫酸氫鹽、亞硫酸鹽、重亞硫酸鹽、芳基磺酸鹽、烷基硫酸鹽、膦酸鹽、磷酸一氫鹽、磷酸二氫鹽、偏磷酸鹽、焦膦酸鹽、鏈烷酸鹽、環(huán)烷基鏈烷酸鹽、芳基鏈烷酸鹽、己二酸鹽、藻酸鹽、門冬氨酸鹽、苯甲酸鹽、延胡索酸鹽、葡糖庚酸鹽、甘油磷酸鹽、乳酸鹽、馬來酸鹽、煙酸鹽、草酸鹽、棕櫚酸鹽、果膠酸鹽、苦味酸鹽、新戊酸鹽、琥珀酸鹽、酒石酸鹽、檸檬酸鹽、樟腦酸鹽、樟腦磺酸鹽、二葡萄糖酸鹽、三氟乙酸鹽，等等。
“棘白菌素/糖類復(fù)合物”指的是當棘白菌素在糖類的存在下從溶劑中重結(jié)晶時在棘白菌素化合物和糖類(或糖)間形成的結(jié)晶復(fù)合物。對棘白菌素/糖類復(fù)合物的更詳細的描述可以見Larew等于1999年3月3日提交的題為“棘白菌素/糖類復(fù)合物”，且其引入在此作為參考。復(fù)合物使用標準結(jié)晶操作諸如一般是為了通過重結(jié)晶來純化化合物而進行的那些操作來形成。將棘白菌素物質(zhì)和糖類在抬高的溫度(大約45-60℃，優(yōu)選小于55℃)下溶于溶劑。該溶液然后緩慢地冷卻直到結(jié)晶開始?？梢约尤刖ХN(諸如以前結(jié)晶的復(fù)合物或不溶性糖)來引發(fā)結(jié)晶。合適的溶劑包括對于進行中的足以使反應(yīng)物溶解的反應(yīng)來說是惰性的任何一種溶劑或溶劑混合物，這些溶劑提供了一個完成所需的糖類和棘白菌素化合物間的復(fù)合作用的介質(zhì)，諸如質(zhì)子溶劑或酮溶劑包括甲醇、乙醇、芐醇，以及芐醇與諸如下列溶劑的混合物甲醇、乙醇、正丙醇、異丙醇、正丁醇、2-丁醇、叔丁醇、2-戊醇、2-甲基-1-丙醇、MEK、丙酮、乙酸乙酯、甲苯、乙腈、氟苯、二氯甲烷、硝基甲烷、或環(huán)酮諸如環(huán)戊酮和環(huán)己酮。優(yōu)選的溶劑包括甲醇、乙醇、芐醇、以及芐醇與甲乙酮、乙酸乙酯和乙腈的混合物。
合適的糖類包括阿東糖醇、阿拉伯糖、阿拉伯糖醇、抗壞血酸、殼多糖、D-纖維素二糖(D-ellubiose)、2-脫氧-D-核糖、半乳糖醇、(S)-(+)-赤蘚酮糖、果糖、巖藻糖、半乳糖、葡萄糖、肌醇、乳糖、乳果糖、來蘇糖、麥芽糖醇、麥芽糖、麥芽三糖、甘露糖醇、甘露糖、松三糖、蜜二糖、微晶纖維素、異麥芽酮糖(palatinose)、季戊四醇、棉子糖、鼠李糖、核糖、山梨糖醇、山梨糖、淀粉、蔗糖、海藻糖、木糖醇、木糖及其水合物。合適的糖類還包括上列化合物的D和L旋光對映體以及α和β端基異構(gòu)體。優(yōu)選的糖類是簡單糖(例如單糖和二糖)。
棘白菌素化合物可以在冷凍干燥之前以大于或等于1mg/ml的濃度存在于本發(fā)明的制劑中。通常，棘白菌素化合物的存在量范圍是從約1mg/ml至約50mg/ml，優(yōu)選濃度范圍是從約1mg/ml至約40mg/ml，更優(yōu)選從約1mg/ml至約30mg/ml，首選從約8mg/ml至約12mg/ml。
本發(fā)明制劑含有成膠束表面活性劑，它是具有能增加非水溶性藥物在水中的溶解性的疏水和親水單元或基團的藥學(xué)上可接受的兩親賦形劑。HLB值為10-18對于增溶棘白菌素化合物通常是最有利的。表面活性劑以棘白菌素對表面活性劑的重量比為約1∶1.75至約1∶25的量存在于制劑中，更優(yōu)選比例為約1∶2至約1∶3。加入到制劑中的表面活性劑的上限可以由其在藥物應(yīng)用中的毒性來限制；因此，上限可以根據(jù)所選用的特定表面活性劑而變化。合適的表面活性劑包括聚山梨醇酯(例如聚山梨醇酯80，聚山梨醇酯40，聚山梨醇酯20)、聚氧乙烯蓖麻油衍生物(例如可從BASF購得的ChemophorsTM(聚氧乙烯(polyoxyl)35蓖麻油、聚氧乙烯40氫化蓖麻油、和聚氧乙烯60氫化蓖麻油))、聚氧乙烯硬脂酸酯(例如可從BASF購得的SolutolTMHS 15(macrogol-660-羥基硬脂酸酯))、脫水山梨糖醇三油酸酯、膽汁鹽(例如膽酸、脫氧膽酸及其鹽(例如脫氧膽酸鈉或?；敲撗跄懰徕c))、卵磷脂，等等。優(yōu)選的表面活性劑包括聚山梨醇酯80、聚山梨醇酯40、聚山梨醇酯20、和具有降低的組胺作用的聚氧乙烯羥基硬脂酸酯(例如SolutolTMHS 15)。不能很好地起增溶作用的表面活性劑包括某些泊咯沙姆類(poloxamers)物質(zhì)，它們是氧化丙烯和氧化乙烯的嵌段共聚物。
“聚山梨醇酯”指的是具有以下通式結(jié)構(gòu)的物質(zhì) 其中x+y+w+z等于5至20間的整數(shù)。
當x+y+w+z＝20時上述結(jié)構(gòu)代表商品吐溫(Tween)TM20、40和80(可從ICI Americas股份有限公司，Wilmington，DL購得)。
“卵磷脂”是指具有以下通式結(jié)構(gòu)的物質(zhì) R一般是硬脂酸、棕櫚酸或油酸的殘基。
“膽汁鹽”是指具有以下通式結(jié)構(gòu)的物質(zhì) 其中R3、R7和R12為-OH、-H或-SO3-基團，R24是-OH或-CO2-、-C(O)NH(CH2)nSO3-或-C(O)NH(CH2)nCO2-的堿金屬鹽，而n等于1至4間的整數(shù)。
典型溶液制劑包括棘白菌素化合物和成膠束表面活性劑。申請人已觀察到，摻入成膠束表面活性劑不僅最優(yōu)化了棘白菌素化合物的增溶作用，而且增強了溶液的穩(wěn)定性。制劑可以任選地包括一種或多種緩沖劑、穩(wěn)定劑和/或張度劑。如果制劑為溶液形式，則還存在溶劑。溶劑通常在被認為能對哺乳動物安全地胃腸外給藥(GRAS)的溶劑的基礎(chǔ)上加以選擇。一般，安全溶劑是無毒的含水溶劑，諸如水和其他可溶于水或可與水混溶的無毒溶劑。合適的溶劑包括水、乙醇、丙二醇、聚乙二醇(例如PEG400，PEG300)等等及其混合物。優(yōu)選的溶劑是水。
典型的凍干制劑包括棘白菌素化合物、藥學(xué)上可接受的成膠束表面活性劑、增量劑和/或穩(wěn)定劑。該制劑可以任選地包括一種或多種緩沖劑。申請人已觀察到加入成膠束表面活性劑不僅最優(yōu)化了凍干制劑在無毒含水溶劑中的重建，而且為凍干物質(zhì)提供了增強的穩(wěn)定性。
溶液和凍干制劑都可任選地含有穩(wěn)定劑。穩(wěn)定劑通常以約0.5％至約40％(wgt./vol.)的濃度存在，更優(yōu)選濃度范圍是從約1％至約6％。術(shù)語“穩(wěn)定劑”是指能增強制劑中活性成分的化學(xué)和物理穩(wěn)定性的藥學(xué)上可接受的賦形劑。合適的穩(wěn)定劑包括多元醇(例如聚乙二醇和聚丙二醇以及糖類諸如蔗糖、海藻糖、果糖、乳糖和甘露糖醇)、氨基酸和表面活性劑諸如聚山梨醇酯和膽汁鹽。優(yōu)選的用于凍干制劑的穩(wěn)定劑包括甘露糖醇、蔗糖、海藻糖、果糖、乳糖及其組合。在溶液中，首選的穩(wěn)定劑是膽汁鹽、聚乙二醇和丙二醇。
溶液和凍干制劑還都可任選地含有緩沖劑。緩沖劑以從約0.03％至約5.0％(wgt./vol.)范圍內(nèi)的濃度存在，更優(yōu)選濃度范圍是從約0.1％至約1.0％。術(shù)語“緩沖劑”是指能將溶液的pH保持在緩沖系統(tǒng)特異的具體范圍之內(nèi)的藥學(xué)上可接受的賦形劑。合適的pH范圍是pH3.0-7.0。優(yōu)選pH范圍是4.0-5.5，更優(yōu)選4.0-5.0。合適的緩沖劑包括乙酸鹽、檸檬酸鹽、磷酸鹽、酒石酸鹽、乳酸鹽、琥珀酸鹽、氨基酸等。優(yōu)選的用于溶液制劑的緩沖劑包括乙酸鹽、檸檬酸鹽、酒石酸鹽、磷酸鹽及其組合。對于凍干制劑來說，優(yōu)選的緩沖劑是酒石酸。
溶液制劑可以任選地含有一種或多種張度劑。張度劑一般以從約1至約100mg/ml范圍內(nèi)的濃度存在，更優(yōu)選濃度范圍是從約9至約50mg/ml。術(shù)語“張度劑”是指使溶液與血液相容的藥學(xué)上可接受的賦形劑。在注射用制劑中需要張度劑。合適的張度劑包括甘油、乳糖、甘露糖醇、葡萄糖、氯化鈉、硫酸鈉、山梨糖醇等。優(yōu)選的張度劑包括甘露糖醇、山梨糖醇、乳糖、氯化鈉及其組合。
當凍干時，制劑可以任選地含有增量劑。增量劑在制劑中以從約2％至約10％(wgt./vol.)范圍內(nèi)的濃度存在，更優(yōu)選濃度范圍從約3％至約6％。術(shù)語“增量劑”是指將大體積物質(zhì)(bulk)加入制劑中使得隨冷凍干燥得到良好形態(tài)的餅狀物的藥學(xué)上可接受的賦形劑。合適的增量劑包括甘露糖醇、甘氨酸、乳糖、蔗糖、海藻糖、葡聚糖、羥乙基淀粉、菲可(ficoll)和明膠。優(yōu)選的增量劑包括甘露糖醇、蔗糖、海藻糖、乳糖及其組合。
制劑可以使用常規(guī)溶解和混合方法加以制備。例如，將大塊藥物物質(zhì)(例如棘白菌素化合物或棘白菌素/糖類復(fù)合物)在藥學(xué)上可接受的成膠束表面活性劑和可選的一種或多種增量劑、緩沖劑、穩(wěn)定劑和/或張度劑的存在下溶于無毒含水溶劑。所得溶液然后無菌過濾并優(yōu)選凍干得到所需制劑。在冷凍干燥之前，表面活性劑一般以每體積溶液大于1％重量的量存在。
另一方面，藥物溶液可以通過形成緩沖至約3.0至7.0(優(yōu)選4.0至5.5，更優(yōu)選約4.0至5.0)的緩沖水溶液來制備。所用的緩沖劑可以是先前所描述的任何一種緩沖劑。然后將成膠束表面活性劑加入到該緩沖溶液中并將溶液冷卻至約5℃至15℃(優(yōu)選約7℃至10℃)。將棘白菌素化合物或棘白菌素/糖類復(fù)合物在無毒含水溶劑(可以與緩沖溶液中所用的溶劑相同或不同)中的淤漿加入到該含有表面活性劑的冷卻溶液中。在冷凍干燥之前可以向溶液中加入一種或多種增量劑、穩(wěn)定劑和/或張度劑。所得溶液然后用另外的溶劑稀釋、過濾并凍干得到所需制劑。
合適的冷凍干燥方法記載于Nail等人的《藥物劑型中的冷凍干燥原理與實踐》第2版，Marcel Dekker公司，NY，第163-233頁(1993)。制劑優(yōu)選在管形瓶中冷凍干燥，然后它可儲存直至使用。向管形瓶中加入無毒含水溶劑使凍干物質(zhì)溶解形成可用于胃腸外治療應(yīng)用的溶液。本領(lǐng)域技術(shù)人員將領(lǐng)會含水溶劑包括這類應(yīng)用中常用的其他普通溶液(例如鹽水溶液、葡萄糖溶液等)。
通常，凍干制劑含有增量劑，而非凍干制劑含有一種或多種張度劑。在應(yīng)用中，制劑一般要稀釋或重構(gòu)(如果是凍干的話)，并且如果需要，在給藥前進一步稀釋。對于凍干產(chǎn)物的重構(gòu)指示的實例是將10ml注射用水(WFI)加入管形瓶中并輕微振動使溶解。一般重構(gòu)時間小于1分鐘。然后所得溶液在給藥前進一步稀釋于靜脈滴注溶液諸如在水中的葡萄糖5％(D5W)。
活性成分一般配制成藥物劑型，以使藥物的劑量容易控制并為病人提供雅致而又容易處理的產(chǎn)品。制劑可以包含從0.1％至60重量％的活性成分，更通常為約10％至約30重量％。
本文中所用的術(shù)語“單劑”或“單位劑量”指的是含有計算出可產(chǎn)生所需治療作用的預(yù)定量活性成分的物理分散單元。當單劑胃腸外給藥時，一般將其制成裝在安瓿(或管形瓶)中的定量單位形式。
給藥劑量可以根據(jù)病人的生理特點、病人癥狀的嚴重程度以及用于給藥的方式等加以變化。對于給藥病人的具體劑量通常通過主治醫(yī)師的判斷來確定。
合適的載體、稀釋劑和賦形劑是本領(lǐng)域中眾所周知的，包括諸如糖類、蠟、水溶性和/或膨脹性聚合物、親水或疏水物質(zhì)、明膠、油、溶劑、水等物質(zhì)。所用的特定載體、稀釋劑或賦形劑將取決于活性成分的應(yīng)用方式和目的。制劑還可包括潤濕劑、潤滑劑、乳化劑、懸浮劑、防腐劑、甜味劑、增香劑、矯味劑及其結(jié)合物。
藥物組合物可以使用各種方法給藥。合適的方法包括注射。所用的特定治療方法將取決于所針對的感染類型。
棘白菌素和半合成棘白菌素化合物已表明能顯示出抗真菌和抗寄生物活性，諸如抑制各種感染性真菌的生長，包括念珠菌(即白色念珠菌、近平滑念珠菌、克魯斯氏念珠菌、光滑念珠菌、熱帶念珠菌或葡萄牙念珠菌)；球擬酵母(即光滑球擬酵母)；曲霉(即煙曲霉)；組織胞漿菌(即莢膜組織胞漿菌)；隱球菌(即新型隱球菌)；芽生菌(即皮炎芽生菌)；鐮刀菌；毛癬菌，Pseudallescheriaboydii，粗球孢菌，申克氏孢子絲菌，等等。
這種類型的化合物還可抑制主要引起免疫抑制個體發(fā)生機會感染的某些生物體的生長，諸如抑制AIDS和其他無免疫應(yīng)答病人體內(nèi)卡氏肺囊蟲(肺囊蟲性肺炎(PCP)的病因生物)的生長。棘白菌素型化合物可抑制的其他原生動物包括瘧原蟲、利什曼原蟲、錐蟲、隱孢子蟲、等孢子球蟲、無孢子球蟲(Cyclospora spp.)、毛滴蟲、微孢子蟲，等等。
所以，本發(fā)明的制劑可以用于對抗全身性真菌感染或皮膚真菌感染。因此，本發(fā)明的方法和制劑可以用于制備用于此處描述的治療應(yīng)用的藥物。例如，真菌活性(優(yōu)選白色念珠菌或煙曲霉活性)或寄生物活性可以通過使由本發(fā)明制備的藥物制劑分別與真菌或寄生物接觸而得以抑制。術(shù)語“接觸”包括本發(fā)明化合物與寄生物或真菌結(jié)合或會合、或者表面碰觸或相互接觸。該術(shù)語不表明對過程的任何進一步限制，諸如利用抑制的機理。方法規(guī)定為包括通過化合物和它們的固有抗寄生物和抗真菌性能的作用來抑制寄生物和真菌的活性。
還提供了治療真菌感染的方法，該方法包括對需要這種治療的宿主給藥有效量的本發(fā)明的藥物制劑。優(yōu)選的方法包括治療白色念珠菌或煙曲霉感染。術(shù)語“有效量”是指能夠抑制真菌活性的活性化合物的量。給藥劑量將根據(jù)諸如象感染的性質(zhì)和嚴重度、宿主的年齡和一般健康狀況以及宿主對抗真菌劑的耐受性等因素進行變化。特定給藥方案同樣也可按照這些因素加以改變。藥物可以每日單劑或一日多劑給藥。給藥可以持續(xù)約2-3天至約2-3周或更長時間。一般每日劑量(以單劑或多劑給藥)含有從約0.01mg/kg至100mg/kg(體重)劑量水平的活性化合物。優(yōu)選的每日劑量通常為約0.1mg/kg至60mg/kg，更優(yōu)選為約2.5mg/kg至40mg/kg。
提供以下實施例是為了闡述而不是限制本發(fā)明。本文中提到的所有參考文獻都結(jié)合在此作為參考。
實施例用于舉例說明本發(fā)明制劑的棘白菌素化合物按照下列制備中所述加以制備。具體而言，以下順序描述了具有下列結(jié)構(gòu)的抗真菌化 本領(lǐng)域技術(shù)人員將理解，以下只是說明性的實施例，可用作抗真菌劑的其他半合成棘白菌素化合物可以使用類似方法或早先在說明書中提及的參考文獻中描述的方法來合成。除非另有說明，否則在以下的制備中所用的材料從Aldrich化學(xué)公司(Milwaukee，Wisconsin)購得。
化合物的制備制備4-溴-4’-戊氧基聯(lián)苯1(a)將無水K2CO3(416g，3mol)加入4-溴-4’-羥基聯(lián)苯(300g，1.2mol)、1-碘代戊烷(234ml，1.79mol)和2-丁酮(600ml)的混合物中。該反應(yīng)混合物回流44小時，直到TLC(85∶15己烷/EtOAc)顯示溴代醇已完全消耗。將該混合物冷卻至約30℃，用CH2Cl2(600ml)稀釋，然后過濾。濾液用H2O洗滌兩次，用飽和NaCl水溶液洗滌兩次，用無水Na2SO4干燥，過濾，然后減壓干燥得到固體。該固體通過過濾分離，用總量為2L的冰冷的庚烷反復(fù)洗滌以除去所有碘代戊烷的痕跡，然后在高真空下干燥過夜。收率340g(88％)白色粉末。
另一種方法制備4-溴-4’-戊氧基聯(lián)苯1(a)將4-溴-4’-羥基聯(lián)苯(12.5g，50.2mmol)加入NaOH(2.28g，97％純度，55.2mmol)的去離子水溶液(150ml)中，接著加入1-碘代戊烷(11.9g，60.2mmol)和溴化四丁銨(0.82g，2.51mmol)。該混合物在90℃下攪拌3.75小時，直到固體溶解。然后，隨著反應(yīng)繼續(xù)進行，所需產(chǎn)物開始沉淀出來。將該混合物緩慢冷卻，然后過濾得到固體，其用去離子水洗滌，直到濾液的pH呈中性，然后在30℃下在真空烘箱中干燥16小時。
收率15.41g(96％)的5a.Rf0.5(97∶3己烷/EtOAc)。1H NMRδ0.93(t，3H，J＝6.9Hz)；1.41(m，4H)；1.79(m.2H)；3.97(t，2H，J＝6.6Hz)；6.98(m.2H)；7.23(m，6H).13C NMRδ14.03；22.43；28.22；28.98；68.12；114.91；120.71；127.93；128.27；131.77；132.24；139.82；159.03.MS(FAB+)m/z 320.IR(CHCl3)2960，2936，2874，1608，1518，1485，1475cm-1.對C17H19BrO的分析計算值C，63.96；H.6.00；Br，25.0；實測值C，64.10；H.5.97；Br，25.28.
制備4-硼酸(boronic acid)-4’-戊氧基聯(lián)苯2(a)在N2下，向化合物1(a)(100g，0.31mol)在叔丁基甲基醚(MTBE)(1L)中的冷(-20℃)混合物中緩慢滴加正丁基鋰(150ml 2.5M己烷溶液，0.37mol)，同時保持內(nèi)部溫度在-19℃至-18℃之間。所得混合物在-17℃和-16℃之間攪拌3.5小時，產(chǎn)生淡黃綠色溶液。將該溶液冷卻至-78℃并用100ml無水THF稀釋，產(chǎn)生白色沉淀。然后，在氮氣下在1.5小時內(nèi)滴加三異丙基硼酸酯(145ml，0.62mol)在MTBE(200ml)中的冷(-78℃)溶液，同時保持反應(yīng)溫度在-78℃和-74℃之間。所得反應(yīng)混合物在-78℃下攪拌1.5小時，然后使在1小時內(nèi)升至-50℃，此時除去冷卻浴，將該混合物攪拌過夜(16-21小時)，產(chǎn)生白色沉淀。該混合物用2M HCl(1000ml)用力振搖5分鐘，然后將所產(chǎn)生的各層分離，有機層減壓干燥得到殘余物。該殘余物用MTBE(100ml)稀釋，接著用庚烷(800ml)稀釋得到白色粉末，其通過吸濾分離并用庚烷(300ml)洗滌3次。
收率88g(98％)Rf0.45(95∶5 CH2Cl2/MeOH).1H NMRδ0.92(m.3H)；1.41(m，4H)；1.80(m，2H)；4.00(m，2H)；6.99(m，2H)；7.45-7.63(m，3H)；7.67(m，2H)；8.24(d.1H，J＝8.3Hz).13C NMR14.01；22.26；28.03；28.77；39.61；39.89；40.17；40.45；67.82；114.77；125.32；127.83；132.93；134.84；141.88；158.71.MS(FD-)m/z284.IR(CHCl3)2959.2952，2874，1606，1526，1500cm-1.
制備化合物3(a) 甲苯(174ml)和丙醇溶液(20ml)通過對溶液施加20-30秒真空后用N2清洗而脫氣3次。2M Na2CO3溶液也進行脫氣。將甲苯/丙醇溶液(97ml)加入4-碘代苯甲酸甲酯(14.12g，53.9mmol)和化合物2(a)(15.0g，52.8mmol)的混合物中，接著加入經(jīng)過脫氣的2M Na2CO3水溶液(29ml，58.0mmol)。所得混合物在正壓N2下脫氣2次，每次20-30秒，接著加入醋酸鈀(II)(0.24g，1.1mmol)和三苯基膦(0.84g，3.2mmol)，然后再脫氣兩次。之后該反應(yīng)混合物在N2下回流5小時，產(chǎn)生淡黃色混合物。將該混合物冷卻至23℃使形成沉淀，其通過過濾收集，順序用甲苯(123ml)、2∶1 MTBE/EtOAc(143ml)、去離子水(123ml)和2∶1 MTBE/EtOAc(42ml)洗滌，然后在35℃下在真空烘箱中干燥16小時。收率18.7g(94％)。Rf0.48(苯)。
1H NMRδ0.93(t，3H，J＝6.80Hz)；1.42(m，4H)；1.81(m，2H)；3.95(s，3H)；4.00(t，2H，J＝6.48Hz)；6.97(d，2H，J＝8.52Hz)；7.55(d，2H，J＝8.52Hz)；7.66(m，6H)，8.10(d，2H，J＝8.20Hz).MS(FD+)m/z 374.IR(KBr)2938，1723cm-1.對C25H26O3的分析計算值C，80.18；H.7.00；實測值C，79.91；H.6.94.制備化合物4(a) 化合物3(a)(80g，0.21mol)、5M KOH(160ml)和溴化十六烷基三甲銨(4.8g，0.013mol)在二甲苯(800ml)中的混合物回流3小時，然后冷卻至10℃并過濾得到白色固體。該固體用H2O洗滌3次(每次500ml)以除去催化劑和大多數(shù)堿。所得物質(zhì)用DME(500ml)處理。加入6M HCl(100ml)將該溶液的pH調(diào)節(jié)至pH。所得混合物回流30分鐘，同時定期檢查pH以確保其維持酸性，然后冷卻并過濾。所得固體依次用MTBE(400ml)和水(4×400ml)洗滌，直到洗滌物用石蕊檢驗為中性。收率76g(98％收率)。
1HNMR δ0.89(t，3H，J＝6.82Hz)，1.38(m，4H)，1.73(m，2H)，3.96(t，2H，J＝6.3Hz)，6.95(d，2H，J＝8.56Hz)，7.57(d，2H，J＝8.54Hz)，7.64-7.74(m，6H)，8.00(d，2H，J＝8.21Hz)，8.09(s，1H).MS(FD+)m/z360.IR(KBr)2958，2937，2872，1688cm-1.對C24H24O3的分析計算值C，79.97；H.6.71；實測值C，80.50；H.6.77.
制備化合物4(a)的HOBT酯A.形HOBT甲磺酸酯向羥基苯并三唑水合物(200g，1.48mol)在無水CH2Cl2(1.5L)中的冷(0℃)混合物中緩慢加入無水Et3N(268ml，1.92mol)，同時保持溫度在0-10℃，接著加入甲磺酰氯(126ml，1.63mol)，同時保持溫度在0-5℃。所得混合物在0℃下攪拌3小時，并依次用冷水(2×1.2L)和鹽水(1.2L)洗滌。將合并后的有機萃取液減壓濃縮得到固體。該固體從CH2Cl2(100ml)和庚烷(1L)中重結(jié)晶。結(jié)晶通過吸濾收集并用總量為1L的庚烷反復(fù)洗滌，然后在高真空(0.5mmHg)下干燥過夜。收率245g(78％)。Rf0.55(1∶1己烷/CH2Cl2)。
1H NMRδ3.58(s，3H)，7.46(t，1H，J＝7.60Hz)，7.60(d.1H.J＝8.28Hz).7.65(d，1H，J＝8.56Hz).7.68(d，1H，J＝8.20Hz)，8.05(d，1H.J＝8.41Hz).
B.形成HOBT酯化合物4(a)(50g，0.14mol)和上述A部分中所述的物質(zhì)(36g，0.17mol)在DMF(650ml)中的混合物在N2下滴加Et3N(25ml，0.18mol)進行處理。所得混合物在室溫下攪拌4小時，直到根據(jù)TLC(95∶5CH2Cl2/MeOH)測定所有的酸都已消耗完。當所有的酸都消耗完時，一部分反應(yīng)混合物(～3管滴)當用3ml 1∶1的CH2Cl2/THF稀釋時產(chǎn)生澄清的均勻溶液。該反應(yīng)混合物然后用甲苯(500ml)稀釋，用水(500ml)洗滌。有機層(含有固體產(chǎn)物)用水(500ml)稀釋并使用轉(zhuǎn)移用的MTBE過濾。該固體用MTBE(2×400ml)沖洗并真空干燥得到白綠色片狀粉末物質(zhì)。注意該物質(zhì)可以溶于THF并過濾除去任何殘余的金屬污物。收率61g(92％)。Rf0.68(1∶1 CH2Cl2/己烷)。1HNMRδ0.93(t，3H，J＝7.0Hz)，1.42(m，4H)，1.81(m，2H)，4.00(t，2H，J＝6.53Hz)，6.99(d，2H，J＝8.6Hz)，7.42-7.59(m，5H)，7.71(dd，4H，J＝13.91Hz，8.40Hz)，7.86(d，2H，J＝8.30Hz)，8.11(d，1H，J＝8.31Hz)，8.35(d，2H，J＝8.33Hz).13C NMRδ14.03，22.44，28.18，28.94，40.10，40.37，68.11，108.45，110.11，114.95，118.71，120.48，123.04，124.94，124.99，127.00，127.23，127.51，127.73，128.06，128.82，128.86，131.35，132.30，137.15，141.43，143.54，147.85，159.15，162.73.MS(FD+)m/z 477.IR(CHCl3)2960，2936，2874，1783，1606cm-1.對C30H27N3O3的分析計算值C，75.45；H，5.70；N，8.80；實測值C，75.69；H，5.58；N，8.92.制備抗真菌化合物6(a)在整個過程中使用去離子水。化合物5(a)(11g，23mmol)和化合物6(a)的核(其中R為氫-HPLC檢驗純度為92％，19.25g，22.2mmol)在無水DMF(275ml)中的混合物在N2下攪拌4小時(直到HPLC顯示環(huán)肽原料已完全消耗)。該混合物通過硅藻土床過濾，濾液在35℃下減壓濃縮得到可以攪動的糊狀物。將該糊狀物倒入MTBE(500ml)使細粉末沉淀，其通過真空過濾收集并干燥得到27g粗物質(zhì)。該物質(zhì)用乳缽和研棒碾碎成粉末，用甲苯(200ml)使其成漿狀5分鐘，吸濾(緩慢過濾)，用MTBE(100ml)沖洗，然后真空干燥得到黃色固體。收率23g(HPLC顯示純度為95％，保留時間＝7.79分鐘)。
另一方面，可以使用過量的環(huán)狀核(1.1當量)進行轉(zhuǎn)化。當根據(jù)HPLC顯示反應(yīng)基本上完全時，將粗物質(zhì)(10g粉末)分批加入到用力攪拌著的9∶1丙酮/水混合物(60ml)中。將硅藻土(2.5g，預(yù)先用9∶1丙酮/水混合物洗滌)加入到所得懸浮液中。攪拌2分鐘后，該混合物通過硅藻土床(預(yù)先用9∶1丙酮/水洗滌)過濾，餅狀物用9∶1丙酮/水(10ml)沖洗兩次。將濾液倒入裝有去離子水(200ml)的燒杯中，同時使該混合物輕微旋轉(zhuǎn)導(dǎo)致沉淀形成。該沉淀通過吸濾收集，用H2O(4×25ml)沖洗，然后在室溫下真空干燥。收率6.81g(HPLC顯示純度為97％)。
該產(chǎn)物使用制備HPLC色譜法進一步純化。Rf0.29(80∶20 CHCl3/MeOH).MS(FAB+)C58H74N7O7的m/z，計算值1140.5141；實測值1140.5103.IR(KBr)3365，2934，1632，1518cm-1.
藥物制劑下列實施例闡述了本發(fā)明的制劑及它們的制備方法。這些實施例不打算以任何方式限制本發(fā)明的范圍并且不應(yīng)作這樣的解釋。
下列制劑用方法A、方法B或方法C加以制備?；衔?(a)的用量通過計算出實驗所需的理論效價并用該值除以化合物“原態(tài)(as-is)”HPLC效價來確定。
方法A將50ml 0.1M檸檬酸鹽緩沖儲備溶液的pH調(diào)節(jié)至pH4后，加入2.5g聚山梨醇酯80，將所得混合物混合直至溶解，接著加入1g制備的6(a)化合物(效價)。將所得混合物混合直至溶解，接著加入3g甘露糖醇(增量劑)和2g海藻糖(穩(wěn)定劑)。所得混合物再次混合直至溶解。所得溶液在容量瓶中用水稀釋至100ml。將該溶液的3ml樣品轉(zhuǎn)移到管形瓶中，然后在冷凍干燥機中凍干。
方法B使用1N氫氧化鈉溶液將0.3005g醋酸的50ml水溶液的pH調(diào)節(jié)至pH4.0。一邊混合一邊加入2.5g聚山梨醇酯80和5.0g甘露糖醇(增量劑)，將所得混合物混合直至溶解，接著加入1g化合物6(a)(效價)。所得混合物再次混合直至溶解。所得溶液在容量瓶中用水稀釋至100ml，過濾，然后填充到管形瓶中。這些管形瓶可以在冷凍干燥機中凍干或者在5℃下儲存。
方法C使用10％氫氧化鈉溶液將0.113g酒石酸(tartaric)的50ml水溶液的pH調(diào)節(jié)至pH4.3。一邊混合一邊加入2.5g聚山梨醇酯80并混合直至溶解。將該溶液的溫度降低到5-15℃，接著加入在水中形成淤漿的1g化合物6(a)(效價)。所得混合物再次進行混合直至溶解，接著加入1.0g果糖(穩(wěn)定劑)和5.0g甘露糖醇(增量劑)。所得混合物再次混合直至溶解。所得溶液在容量瓶中用水稀釋至100ml，過濾，然后填充到管形瓶中。這些管形瓶可以在冷凍干燥機中凍干或者在5℃下儲存。
下列制劑實施例1-27基本上按照上述方法A和B進行制備。符號“-”表示指定的成分從制劑中刪除。在表1和隨后的各表中，所有重量均為克(g)；濃度([])為mg/ml；CA代表檸檬酸；Y代表是；N代表否；Man代表甘露糖醇；Tre代表海藻糖；Col.代表崩壞的餅狀物(collapse cake)；C代表檸檬酸鹽；BA代表增量劑；B代表緩沖劑；PEG是聚乙二醇；PPG是聚丙二醇；SA代表穩(wěn)定劑；Ace是醋酸鹽；Poly 80是聚山梨醇酯80；Com是化合物；Suc是蔗糖；His是組氨酸；Sur是表面活性劑；Lac是乳糖；Fru是果糖；TA是酒石酸；AA是乙酸。
表1
通過目測法測定溶解性研究溶解性研究在室溫下通過將5ml測試溶液(存在于水中的表面活性劑，任選地含有增量劑、緩沖劑或穩(wěn)定劑)和50mg化合物6(a)加入到玻璃試管中進行。將試管振蕩過夜并檢驗過量的固體。取出含有過量固體的試管用于分析。向不含過量固體的試管中再加入50mg化合物6(a)，所得混合物再次進行振蕩。重復(fù)該過程，直到在試管中觀測到過量固體。所有樣品靜置1小時，除去上清液，過濾并進行反向HPLC分析，以測定每ml溶液中化合物6(a)的效價。
表2
溶液和凍干制劑的穩(wěn)定性通過利用反向HPLC在于40℃下儲存的起始、2周和4周時監(jiān)測制劑樣品的相關(guān)物質(zhì)增加百分數(shù)來進行評估。
表3
表權(quán)利要求
1.一種胃腸外藥物制劑，它包含(i)棘白菌素化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽；(ii)藥學(xué)上可接受的成膠束表面活性劑；和(iii)無毒含水溶劑，其中所述表面活性劑在所述制劑中以棘白菌素化合物對成膠束表面活性劑的重量比為約1∶1.75至約1∶25的量存在，且所述棘白菌素化合物以大于或等于1mg/ml的量存在。
2.權(quán)利要求1的制劑，其中所述棘白菌素化合物由下列結(jié)構(gòu)表示 其中R是烷基、鏈烯基、炔基、芳基、雜芳基、或其組合；R1、R2、R3、R6、R7和R10獨立地為羥基或氫；R4是氫、甲基或-CH2C(O)NH2；R5和R11獨立地為甲基或氫；R8是-OH、-OPO3H2、-OPO3HCH3、-OPO2HCH3、或-OSO3H；R9是-H、-OH或-OSO3H；及其藥學(xué)上可接受的鹽。
3.權(quán)利要求2的制劑，其中R4、R5和R11各自為甲基；R2和R7獨立地為氫或羥基；R1、R3、R6和R10各自為羥基；R8為-OH、-OPO3HCH3或-OPO2HCH3；R是亞油?；⒆貦磅?、硬脂酰、肉豆蔻酰、12-甲基肉豆蔻酰、10，12-二甲基肉豆蔻酰、或具有下列通式結(jié)構(gòu)的基團 或 其中A、B、C和D獨立地為氫、C1-C12烷基、C2-C12炔基、C1-C12烷氧基、C1-C12烷硫基、鹵素、或-O-(CH2)m-[O-(CH2)n]p-O-(C1-C12烷基)或-O-(CH2)q-X-E；m是2、3或4；n是2、3或4；p是0或1；q是2、3或4；X是吡咯烷子基、哌啶子基或哌嗪子基；E是氫、C1-C12烷基、C3-C12環(huán)烷基、芐基或C3-C12環(huán)烷基甲基。
4.權(quán)利要求3的制劑，其中R2和R7各自為羥基；R8為羥基；和
5.權(quán)利要求1的制劑，其中所述成膠束表面活性劑選自下列成員聚山梨醇酯、聚氧乙烯蓖麻油衍生物、聚氧乙烯硬脂酸酯、脫水山梨糖醇三油酸酯、膽汁鹽、卵磷脂及其組合。
6.權(quán)利要求1的制劑，其中所述棘白菌素化合物以從約1mg/ml至約50mg/ml的量存在。
7.權(quán)利要求6的制劑，其中所述棘白菌素化合物以從約1至約30mg/ml的量存在。
8.權(quán)利要求1的制劑，其中所述表面活性劑由下列結(jié)構(gòu)式表示 其中x+y+z+w等于5至20間的整數(shù)。
9.權(quán)利要求1的制劑，其中所述表面活性劑以大于1％重量/體積的量存在。
10.權(quán)利要求1的制劑，其中所述棘白菌素與表面活性劑的重量比為約1∶2至約1∶3。
11.權(quán)利要求1的制劑，其中所述溶劑選自下列成員水、乙醇、丙二醇、聚乙二醇及其混合物。
12.權(quán)利要求1的制劑，它進一步包含穩(wěn)定劑。
13.權(quán)利要求12的制劑，其中所述穩(wěn)定劑以從約0.5％至約10％重量/體積的量存在。
14.權(quán)利要求12的制劑，其中所述穩(wěn)定劑以從約1％至約6％重量/體積的量存在。
15.權(quán)利要求12的制劑，其中所述穩(wěn)定劑選自下列成員甘露糖醇、組氨酸、賴氨酸、甘氨酸、蔗糖、果糖、海藻糖、乳糖及其混合物。
16.權(quán)利要求1的制劑，它進一步包含緩沖劑。
17.權(quán)利要求16的制劑，其中所述緩沖劑選自下列成員乙酸鹽、檸檬酸鹽、酒石酸鹽、乳酸鹽、琥珀酸鹽和磷酸鹽以及氨基酸。
18.權(quán)利要求1的制劑，它進一步包含張度劑。
19.權(quán)利要求18的制劑，其中所述張度劑選自下列成員甘油、乳糖、甘露糖醇、葡萄糖、氯化鈉、硫酸鈉和山梨糖醇。
20.權(quán)利要求18的制劑，其中所述張度劑以從約1至約100mg/ml的量存在。
21.權(quán)利要求18的制劑，其中所述張度劑以從約9至約50mg/ml的量存在。
22.一種凍干制劑，它包含(i)棘白菌素化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽；(ii)藥學(xué)上可接受的成膠束表面活性劑；和(iii)增量劑，其中所述成膠束表面活性劑在所述凍干制劑中以大于5％重量的量存在。
23.權(quán)利要求22的制劑，其中所述增量劑選自下列成員甘露糖醇、蔗糖、海藻糖、乳糖及其混合物。
24.權(quán)利要求22的制劑，其中所述棘白菌素化合物由下列結(jié)構(gòu)表示 其中R是烷基、鏈烯基、炔基、芳基、雜芳基、或其組合；R1、R2、R3、R6、R7和R10獨立地為羥基或氫；R4是氫、甲基或-CH2C(O)NH2；R5和R11獨立地為甲基或氫；R8是-OH、-OPO3H2、-OPO3HCH3、-OPO2HCH3、或-OSO3H；R9是-H、-OH或-OSO3H；及其藥學(xué)上可接受的鹽。
25.權(quán)利要求24的制劑，其中R4、R5和R11各自為甲基；R2和R7獨立地為氫或羥基；R1、R3、R6和R10各自為羥基；R8為-OH、-OPO3HCH3或-OPO2HCH3；R是亞油?；?、棕櫚酰、硬脂酰、肉豆蔻酰、12-甲基肉豆蔻酰、10，12-二甲基肉豆蔻酰、或具有下列通式結(jié)構(gòu)的基團 或 其中A、B、C和D獨立地為氫、C1-C12烷基、C2-C12炔基、C1-C12烷氧基、C1-C12烷硫基、鹵素、或-O-(CH2)m-[O-(CH2)n]p-O-(C1-C12烷基)或-O-(CH2)q-X-E；m是2、3或4；n是2、3或4；p是0或1；q是2、3或4；X是吡咯烷子基、哌啶子基或哌嗪子基；E是氫、C1-C12烷基、C3-C12環(huán)烷基、芐基或C3-C12環(huán)烷基甲基。
26.權(quán)利要求25的制劑，其中R2和R7各自為羥基；R8為羥基；和
27.權(quán)利要求22的制劑，其中所述成膠束表面活性劑選自下列成員聚山梨醇酯、聚氧乙烯蓖麻油衍生物、聚氧乙烯硬脂酸酯、脫水山梨糖醇三油酸酯、膽汁鹽、卵磷脂及其組合。
28.權(quán)利要求22的制劑，其中所述表面活性劑由下列結(jié)構(gòu)式表示 其中x+y+z+w等于5至20間的整數(shù)。
29.權(quán)利要求22的制劑，其中所述表面活性劑在所述制劑中以棘白菌素對表面活性劑的重量比為約1∶1.75至約1∶25的量存在。
30.權(quán)利要求29的制劑，其中所述棘白菌素與表面活性劑的重量比為約1∶2至約1∶3。
31.一種胃腸外制劑，它包含權(quán)利要求22的凍干制劑和含水溶劑。
32.權(quán)利要求31的制劑，它進一步包括穩(wěn)定劑。
33.權(quán)利要求32的制劑，其中所述穩(wěn)定劑選自下列成員甘露糖醇、組氨酸、賴氨酸、甘氨酸、果糖、蔗糖、海藻糖、乳糖及其混合物。
34.權(quán)利要求31的制劑，其中所述表面活性劑在所述制劑中以棘白菌素對表面活性劑的重量比為約1∶1.75至約1∶25的量存在。
35.權(quán)利要求31的制劑，它進一步包含緩沖劑。
36.權(quán)利要求35的制劑，其中所述緩沖劑選自下列成員乙酸鹽、酒石酸鹽、檸檬酸鹽、磷酸鹽和氨基酸。
37.一種制備胃腸外制劑的方法，它包括將棘白菌素化合物或含有所述棘白菌素化合物的棘白菌素/糖類復(fù)合物和藥學(xué)上可接受的成膠束表面活性劑在含水溶劑中混合的步驟，其中所述成膠束表面活性劑在所述制劑中以棘白菌素化合物對表面活性劑的重量比為約1∶1.75至約1∶25的量存在，且所述棘白菌素化合物以大于或等于1mg/ml的量存在。
38.權(quán)利要求37的方法，其中所述棘白菌素化合物以從約1mg/ml至約50mg/ml的量存在。
39.權(quán)利要求37的方法，其中所述棘白菌素化合物以從約1mg/ml至約30mg/ml的量存在。
40.一種制備凍干制劑的方法，它包括以下順序的幾個步驟(i)將棘白菌素化合物或含有所述棘白菌素化合物的棘白菌素/糖類復(fù)合物在藥學(xué)上可接受的成膠束表面活性劑的存在下溶解到含水溶劑中形成溶液，其中表面活性劑以大于1％重量/溶液體積的量存在；(ii)無菌過濾所述溶液；和(iii)冷凍干燥所述溶液。
41.權(quán)利要求40的方法，它進一步包括在步驟(ii)之前加入一種或多種增量劑、緩沖劑、穩(wěn)定劑、張度劑、或其組合的步驟。
42.權(quán)利要求40的方法，其中所述成膠束表面活性劑選自下列成員聚山梨醇酯、聚氧乙烯蓖麻油衍生物、聚氧乙烯硬脂酸酯、脫水山梨糖醇三油酸酯、膽汁鹽、卵磷脂及其組合。
43.一種制備凍干制劑的方法，它包括以下步驟(i)將無毒含水溶劑緩沖至pH4.0到5.5之間，以形成緩沖的溶液；(ii)向所述緩沖的溶液中加入藥學(xué)上可接受的成膠束表面活性劑；(iii)將步驟(ii)得到的溶液冷卻至溫度在5至15℃之間形成冷卻的溶液；(iv)向所述冷卻的溶液中加入包含棘白菌素化合物或棘白菌素/糖類復(fù)合物和第二種無毒含水溶劑的淤漿；(v)無菌過濾從步驟(iv)得到的所述溶液；和(vi)冷凍干燥從步驟(v)得到的所述溶液。
44.權(quán)利要求43的方法，其中步驟(iii)中所述的溫度為約7℃至約10℃。
45.權(quán)利要求43的方法，它進一步包括在步驟(v)之前加入一種或多種增量劑、穩(wěn)定劑、張度劑、或其組合的步驟。
46.一種胃腸外制劑，它包括含水溶劑和利用權(quán)利要求43的方法制備的凍干制劑。
47.一種胃腸外藥品，該藥品是通過以下步驟制備的(i)將棘白菌素化合物或含有所述棘白菌素化合物的棘白菌素/糖類復(fù)合物在藥學(xué)上可接受的成膠束表面活性劑的存在下溶解到含水溶劑中形成溶液，其中所述表面活性劑以大于1％重量/溶液體積的量存在；(ii)無菌過濾所述溶液；和(iii)冷凍干燥在管形瓶中的從步驟(ii)得到的所述溶液。
48.權(quán)利要求47的藥品，其中所述藥品的制備進一步包括在步驟(iii)之后向所述管形瓶中加入無毒含水溶劑。
49.權(quán)利要求47的藥品，其中棘白菌素化合物與表面活性劑的重量比為約1∶1.75至約1∶25。
50.一種治療有這種需要的哺乳動物的抗真菌感染的方法，它包括對所述哺乳動物給藥權(quán)利要求1的胃腸外制劑的步驟。
51.一種治療有這種需要的哺乳動物的抗真菌感染的方法，它包括對所述哺乳動物給藥權(quán)利要求31的胃腸外制劑的步驟。
52.一種治療有這種需要的哺乳動物的抗真菌感染的方法，它包括對所述哺乳動物給藥權(quán)利要求46的胃腸外制劑的步驟。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種藥物制劑,它包含存在于無毒含水溶劑中的棘白菌素化合物或棘白菌素/糖類復(fù)合物和藥學(xué)上可接受的成膠束表面活性劑,這使得棘白菌素化合物的增溶作用得到最優(yōu)化且保持了冷凍干燥溶液的能力。溶液和凍干制劑都具有增加的穩(wěn)定性?？梢韵蛑苿┲腥芜x地加入增量劑、張度劑、緩沖劑和/或穩(wěn)定劑來進一步增強制劑的穩(wěn)定性。
文檔編號A61P31/10GK1345229SQ00805696
公開日2002年4月17日 申請日期2000年3月2日 優(yōu)先權(quán)日1999年3月3日
發(fā)明者N·米爾頓, K·P·默德, J·L·薩巴特斯克, S·A·思維塔納 申請人:伊萊利利公司