一種含雨生紅球藻提取物的植物鹽及其制備方法
【專利摘要】本發(fā)明提供一種含雨生紅球藻提取物的植物鹽，包括以下重量份的原料：雨生紅球藻提取物2~4份，鹽地堿蓬植物鹽6~8份，所述雨生紅球藻提取物，蛋白質(zhì)含量為21.2~26.1%，蝦青素含量2.7~3.2%，所述鹽地堿蓬植物鹽，黃酮含量為2.6~2.7mg/g，Ca含量為2600~2700mg/kg；本發(fā)明還提供所述含雨生紅球藻提取物的植物鹽的制備方法，包括超聲波提取步驟。本發(fā)明制備的含雨生紅球藻提取物的植物鹽，具有抑制豬油脂質(zhì)過氧化的能力，能夠殺死B16、THP?1、Hacat 和A549癌細(xì)胞，對癌細(xì)胞的增殖有一定的抑制作用。
【專利說明】
一種含雨生紅球藻提取物的植物鹽及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明涉及一種含雨生紅球藻提取物的植物鹽及其制備方法，屬于植物鹽提取工 藝技術(shù)領(lǐng)域。
【背景技術(shù)】
[0002] 雨生紅球藻又被叫做湖生紅球藻或湖生血球藻，是一種普遍存在的綠藻，屬于團(tuán) 藻目，紅球藻科。我們現(xiàn)在知道這種藻在適宜它生長的條件下廣泛存在于自然界中。大量研 究表明雨生紅球藻對蝦青素的積累速率和生產(chǎn)總量較其它綠藻高，而且雨生紅球藻所含蝦 青素及其酯類的配比（約70%的單酯，25%的雙酯及5%的單體)與水產(chǎn)養(yǎng)殖動物自身配比極為 相似，這是通過化學(xué)合成和利用紅發(fā)夫酵母等提取的蝦青素所不具備的優(yōu)勢.此外，雨生紅 球藻中蝦青素的結(jié)構(gòu)以3S-3 'S型為主，與鮭魚等水產(chǎn)生物體內(nèi)蝦青素結(jié)構(gòu)基本一致;而紅 發(fā)夫酵母中蝦青素結(jié)構(gòu)則為3R-3 R型. 食鹽的食用是人類進(jìn)步的重要階梯，長期以來人類依靠海水曬鹽及井鹽、巖鹽開采等 方法制造食鹽，滿足自身需求。但人類長期食用的鹽類基本上是無機物，只能滿足人體自身 對無機鹽的需求，難以適應(yīng)由于生活水平提升造成的人類對多種功能食物的需求，特別是 目前市場上食鹽基本為氯化鈉，過高的Na+攝入對人體的血壓、血脂等均有明顯的負(fù)面影 響。
[0003] 基于以上情況，目前印度率先在世界上利用海蓬子生產(chǎn)出植物鹽，據(jù)報道，這種植 物鹽富含鉀、鈣、鎂、鐵等微量元素，加工過程中無需添加任何化學(xué)物質(zhì)，因此堪稱"天然營 養(yǎng)鹽"。
[0004] 鹽地堿蓬是一年生草本積鹽植物，植物學(xué)分類為藜科(chenopodiaceae)堿蓬屬 (suaeda forsk. exscop)，主要生長于海濱、湖邊、荒漠等處的鹽堿荒地，是一種典型的鹽堿 地指示植物，在渤海沿岸及新疆、內(nèi)蒙等地的鹽堿地區(qū)有著廣泛的分布。我國共有堿蓬屬植 物20種及1個變種，常見種為灰綠堿蓬（suaeda. glanca bunge)和鹽地堿蓬（S. salsa(L.) Pall)，產(chǎn)量最大的是灰綠堿蓬。目前對堿蓬屬植物的研究主要集中在灰綠堿蓬、鹽地堿蓬 及翅堿蓬。
[0005] 鹽地堿蓬是世界上含鹽量最高的草本植物之一，全鹽量高達(dá)4.54%。在陰離子中， Cl-占全鹽的47.14%，在陽離子中，Mg2+占全鹽的20.04%，此外脂肪、蛋白質(zhì)外，礦物質(zhì)、微 量元素和維生素的含量豐富，適于進(jìn)行植物鹽生產(chǎn)開發(fā)，但目前相關(guān)部門尚未對這一問題 給予充分重視。如天津渤海沿岸地區(qū)大部分為高鹽堿度的灘涂及濕地，極易適合堿蓬的生 長。長期以來，這些堿蓬自生自滅，一直沒有引起人們的足夠重視。
[0006] 現(xiàn)有技術(shù)存在以下缺陷： (1) 現(xiàn)有植物鹽，抑制豬油脂質(zhì)過氧化的能力作用不明顯； (2) 現(xiàn)有植物鹽，對B16(小鼠黑色素瘤細(xì)胞)癌細(xì)胞殺死作用不明顯； (3) 現(xiàn)有植物鹽，對THP-I(前骨髓性白血病細(xì)胞)癌細(xì)胞殺死作用不明顯； (4) 現(xiàn)有植物鹽，對Hacat(人角化細(xì)胞的腫瘤樣細(xì)胞)癌細(xì)胞殺死作用不明顯； (5) 現(xiàn)有植物鹽，對A549(人肺腺癌細(xì)胞)癌細(xì)胞殺死作用不明顯； (6) 現(xiàn)有植物鹽的制備方法中，雨生紅球藻提取物中提取的蝦青素得率低。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0007] 本發(fā)明為解決以上技術(shù)問題，提供一種含雨生紅球藻提取物的植物鹽及其制備方 法，以實現(xiàn)以下發(fā)明目的： (1)本發(fā)明制備的含雨生紅球藻提取物的植物鹽，具有抑制豬油脂質(zhì)過氧化的能力。
[0008] (2)本發(fā)明制備的含雨生紅球藻提取物的植物鹽，能夠殺死B16(小鼠黑色素瘤細(xì) 胞)癌細(xì)胞，對癌細(xì)胞的增殖有一定的抑制作用。
[0009] (3)本發(fā)明制備的含雨生紅球藻提取物的植物鹽，能夠殺死THP-I (前骨髓性白血 病細(xì)胞），對癌細(xì)胞的增殖有一定的抑制作用。
[0010] (4)本發(fā)明制備的含雨生紅球藻提取物的植物鹽，能夠殺死HacaU人角化細(xì)胞的 腫瘤樣細(xì)胞)癌細(xì)胞，對癌細(xì)胞的增殖有一定的抑制作用。
[0011] (5)本發(fā)明制備的含雨生紅球藻提取物的植物鹽，能夠殺死A549(人肺腺癌細(xì)胞）， 對癌細(xì)胞的增殖有一定的抑制作用。
[0012] (6)本發(fā)明含雨生紅球藻提取物的植物鹽制備方法，雨生紅球藻提取物的制備方 法中，蝦青素得率高。
[0013]為解決以上技術(shù)問題，本發(fā)明采用的技術(shù)方案如下： 一種含雨生紅球藻提取物的植物鹽，所述植物鹽，原料包括雨生紅球藻提取物和鹽地 堿蓬植物鹽。
[0014] 以下是對上述技術(shù)方案的進(jìn)一步改進(jìn)： 所述植物鹽，包括以下重量份的原料：雨生紅球藻提取物2~4份，鹽地堿蓬植物鹽6~8 份。
[0015] 所述雨生紅球藻提取物，蛋白質(zhì)含量為21.2~26.1%，蝦青素含量2.7~3.2%。
[0016] 所述鹽地堿蓬植物鹽，黃酮含量為2 · 6~2 · 7mg/g，Ca含量為2600~2700mg/kg。
[0017] -種含雨生紅球藻提取物的植物鹽的制備方法，所述雨生紅球藻提取物的制備包 括超聲波提取步驟，所述超聲波提取步驟，提取頻率為30~50 KHZ。
[0018] 所述雨生紅球藻提取物的制備包括超聲波提取步驟，所述超聲波提取步驟，提取 功率為60~80W。
[0019] 所述雨生紅球藻提取物的制備包括超聲波提取步驟，所述超聲波提取步驟，聲波 提取時間5~13min。
[0020] 所述雨生紅球藻提取物的制備還包括稀堿破壁步驟，所述稀堿溶液的濃度為0.04 ~0.3mol/L，浸泡時間為16~20 h。
[0021] 所述雨生紅球藻提取物的制備還包括層析步驟，所述層析步驟，洗脫液濃度為40~ 90%，所述洗脫液為低級的醇、酮、酯的一種或幾種以任意比例組合的水溶液。
[0022] 所述雨生紅球藻提取物的制備還包括干燥步驟，所述干燥步驟，干燥時間為9~ 16h，冷凍溫度為-38~-52°C，干燥室真空壓力為0~15pa。
[0023] 采用以上技術(shù)方案，本發(fā)明的有益效果為： (1)本發(fā)明制備的含雨生紅球藻提取物的植物鹽，具有抑制豬油脂質(zhì)過氧化的能力，連 續(xù)7天測定添加有本發(fā)明含荔枝核提取物的植物鹽的豬油的POV值，空白豬油在75°C促氧化 條件下，經(jīng)過5天的時間，POV值已經(jīng)達(dá)到了 15.9me〇/kg，對比之下，添加有含荔枝核提取物 的植物鹽豬油的POV值5天的POV值在13.6~13.9meo/kg，比空白豬油的低。
[0024] (2)本發(fā)明制備的含雨生紅球藻提取物的植物鹽，能夠殺死B16(小鼠黑色素瘤細(xì) 胞)癌細(xì)胞，具有抑制癌細(xì)胞增殖的作用，用含雨生紅球藻提取物的植物鹽處理癌細(xì)胞株培 養(yǎng)液2周，B16的死細(xì)胞比例為18.8~21.8%，對照組為0.12%。
[0025] (3)本發(fā)明制備的含雨生紅球藻提取物的植物鹽，能夠殺死THP-I (前骨髓性白血 病細(xì)胞），具有抑制癌細(xì)胞增殖的作用，用含雨生紅球藻提取物的植物鹽處理癌細(xì)胞株培養(yǎng) 液2周，THP-I死細(xì)胞比例為20.8~23.5%，對照組為0.26%。
[0026] (4)本發(fā)明制備的含雨生紅球藻提取物的植物鹽，能夠殺死HacaU人角化細(xì)胞的 腫瘤樣細(xì)胞)癌細(xì)胞，具有抑制癌細(xì)胞增殖的作用，用含雨生紅球藻提取物的植物鹽處理癌 細(xì)胞株培養(yǎng)液2周，Hacat死細(xì)胞比例為13.1~17.9%，對照組為0.08%。
[0027] (5)本發(fā)明制備的含雨生紅球藻提取物的植物鹽，能夠殺死A549(人肺腺癌細(xì)胞）， 具有抑制癌細(xì)胞增殖的作用，用含雨生紅球藻提取物的植物鹽處理癌細(xì)胞株培養(yǎng)液2周， A549死細(xì)胞比例為22.8~28.5%，對照組為0.11%。
[0028] (6)本發(fā)明含雨生紅球藻提取物的植物鹽制備方法，雨生紅球藻提取物的制備方 法中，奸青素得率尚，得率為3.3~3.5%。
【具體實施方式】
[0029] 以下對本發(fā)明的優(yōu)選實施例進(jìn)行說明，應(yīng)當(dāng)理解，此處所描述的優(yōu)選實施例僅用 于說明和解釋本發(fā)明，并不用于限定本發(fā)明。
[0030] 實施例1 一種含雨生紅球藻提取物的植物鹽 以重量份計，包括以下原料組分： 雨生紅球藻提取物4份、鹽地堿蓬植物鹽6份。
[0031] 所述雨生紅球藻提取物，蛋白質(zhì)含量為21.2~26.1%，蝦青素含量2.7~3.2%，EPA含 量為5.2~5.5%，其中，EPA含量為EPA在總脂肪酸中所占的百分含量。
[0032] 所述鹽地堿蓬植物鹽，鈉含量為15.20~15.30%;鉀含量為3.4~3.5%;黃酮含量為 2 · 6~2 · 7mg/g; Ca 含量為 2600~2700mg/kg; Fe 含量為690~700mg/kg。
[0033]實施例2-種含雨生紅球藻提取物的植物鹽 以重量份計，包括以下原料組分： 雨生紅球藻提取物3份、鹽地堿蓬植物鹽7份。
[0034] 所述雨生紅球藻提取物，蛋白質(zhì)含量為21.2~26.1%，蝦青素含量2.7~3.2%，EPA含 量為5.2~5.5%，其中，EPA含量為EPA在總脂肪酸中所占的百分含量。
[0035] 所述鹽地堿蓬植物鹽，鈉含量為15.20~15.30%;鉀含量為3.4~3.5%;黃酮含量為 2 · 6~2 · 7mg/g; Ca 含量為 2600~2700mg/kg; Fe 含量為690~700mg/kg。
[0036]實施例3-種含雨生紅球藻提取物的植物鹽 以重量份計，包括以下原料組分： 雨生紅球藻提取物2份、鹽地堿蓬植物鹽8份。
[0037]所述雨生紅球藻提取物，蛋白質(zhì)含量為21.2~26.1%，蝦青素含量2.7~3.2%，EPA含 量為5.2~5.5%，其中，EPA含量為EPA在總脂肪酸中所占的百分含量。
[0038] 所述鹽地堿蓬植物鹽，鈉含量為15.20~15.30%;鉀含量為3.4~3.5%;黃酮含量為 2 · 6~2 · 7mg/g; Ca 含量為 2600~2700mg/kg; Fe 含量為690~700mg/kg。
[0039] 實施例4 一種雨生紅球藻提取物的制備方法 包括以下步驟： (1)原料粉碎 將原料雨生紅球藻去泥沙和表面雜質(zhì)后放置于烘箱中在50°C下烘焙8h， 用氣流式超微粉碎機粉碎，得到雨生紅球藻超微粉； 氣流式超微粉碎機工作壓力為0.5~l.OMPa、系統(tǒng)風(fēng)量為3m3/min，分級機轉(zhuǎn)速1500~ 3000r/min，加料速度 10kg/h。
[0040] (2)稀堿破壁 將雨生紅球藻超微粉進(jìn)行稀堿處理； 所述稀堿處理是指將雨生紅球藻超微粉放入稀堿溶液中浸泡，然后過濾烘干。
[0041] 所述稀堿浸泡的浸泡時間為16~20 h; 所述稀堿溶液的濃度為〇. 04~0.3mol/L; 所述稀堿為石灰水溶液。
[0042] (3)超聲波提?。?將經(jīng)過稀堿處理的雨生紅球藻超微粉置于水浴中，將超聲波探頭插入水浴，在30KHz、 6〇rf進(jìn)行超聲波提取5min，提取的同時進(jìn)行攪拌，然后按照上述工藝參數(shù)重復(fù)提取5次，得 提取液。
[0043] (4)層析 將所述PH為4~5的提取液過處理好的聚酰胺樹脂柱，所述聚酰胺樹脂柱的柱體積 300mL;以600mL水，用鹽酸調(diào)pH為3后，進(jìn)行洗脫除雜，除雜流速為300mL/hr; 然后用40~90%的洗脫液洗脫，洗脫流速300mL/hr; 收集洗脫液并在60~80 °C，壓強為0.08~0.1 MPa下減壓濃縮至含水量小于等于5%; 所述洗脫液為低級的醇、酮、酯的一種或幾種以任意比例組合的水溶液； (5)真空干燥 將上述洗脫液用濾膜進(jìn)行超濾，收集超濾后得到的濾出液，即得雨生紅球藻提取物濃 縮液； 經(jīng)過真空冷凍干燥，得雨生紅球藻提取物； 其中，所述的超濾選截留分子量為40~120KD的超濾膜； 所述真空冷凍干燥，冷凍干燥時間為9~16h，冷凍溫度為-38~-52°C，干燥室真空壓力 為0~15pa; 真空冷凍干燥后，所述雨生紅球藻提取物含量水小于2%。
[0044] 下述實施例5~實施例10是對實施例4所述雨生紅球藻提取物制備方法的優(yōu)化，即： 采用實施例4的雨生紅球藻提取物的制備方法，只改變(3)超聲波提取步驟，對提取頻率、提 取功率和超聲波提取時間做多因素分析，采用常規(guī)方法對提取的雨生紅球藻提取物進(jìn)行各 項具體物質(zhì)的含量進(jìn)行測定。
[0045] 表1提取頻率、提取功率和超聲波提取時間的多因素分析(實施例5~實施例10 )
由上述多因素分析試驗可知，實施例7~實施例8是優(yōu)選實施例，即提取頻率為41~45 KHZ、提取功率為74~77W和超聲波提取時間11~13min。
[0046] 實施例11 一種含雨生紅球藻提取物的植物鹽的制備方法 包括以下步驟： 一、雨生紅球藻提取物的制備 采用實施例4的雨生紅球藻提取物的制備方法，只改變(3)層析步驟，改變提取頻率、提 取功率和超聲波提取時間三個因素，改變?yōu)樘崛☆l率為41~45 KHZ、提取功率為74~77W和超 聲波提取時間11~13min，得雨生紅球藻提取物。
[0047] 二、鹽地堿蓬植物鹽的提取 (1)超聲波水浸提 A、 將堿蓬粉與水按照1:5~10的質(zhì)量比混勻，加入堿液調(diào)節(jié)pH為8~10以提取出蛋白質(zhì) 組分，在50~60 °C下提取40~50min，提取完成后離心分離，取濕殘渣； B、 向上述濕殘渣中加入濕殘渣質(zhì)量3~10倍的蒸餾水，加酸調(diào)節(jié)至pH為4~8,制得水溶 性提取液； C、 將上述提取液置于超聲波提取器中，超聲波功率為150~200w，提取時間為1-30min； D、 提取完畢后離心分離，取上清液，濃縮至原體積的1/4~1/3,得濃縮液。
[0048] (2)酶解工藝 將上清液用無機堿調(diào)pH為6.5~7.5，在50 °C~60°C下，加入中性蛋白酶，酶解反應(yīng)2h~ 6h; 所述的堿蓬粉與中性蛋白酶的質(zhì)量比為1: 〇. 〇〇 1~1: 〇. 〇 1; 再降溫至30 °C~40 °C，用無機堿調(diào)pH為7.5~8.5，加入堿性蛋白酶，酶解反應(yīng)2h~6h， 得酶解液； 所述的堿蓬粉與堿性蛋白酶的質(zhì)量比為1:0.0 O1~1:0.01; 酶解后經(jīng)脫色、脫重金屬、過濾和干燥步驟后，得到鹽地堿蓬植物鹽。
[0049] 三、稱量 按照配方稱量雨生紅球藻提取物和鹽地堿蓬植物鹽。
[0050] 四、混合 將稱取好的雨生紅球藻提取物和鹽地堿蓬植物鹽攪拌、混合均勻，制成混合粉末，得含 雨生紅球藻提取物的植物鹽。
[0051 ]應(yīng)用效果： 1、本發(fā)明含雨生紅球藻提取物的植物鹽對豬油POV值測定試驗及效果 本發(fā)明的發(fā)明人用實施例1~實施例3所得的含雨生紅球藻提取物的植物鹽添加到豬油 中，其中，本發(fā)明的含雨生紅球藻提取物的植物鹽的質(zhì)量百分含量為0.15%，測定豬油的POV 值，并以未添加本發(fā)明含雨生紅球藻提取物的植物鹽的空白豬油作對比，實驗結(jié)果如表3。 [0052] 弄3 POV倌賄時間的奪化結(jié)里（80Γ)
從表3可知，添加有實施例1~實施例3組的含雨生紅球藻提取物的植物鹽豬油的POV值 比空白豬油低，空白豬油在80°C促氧化條件下，經(jīng)過5天的時間，POV值已經(jīng)達(dá)到了 15.9meo/ kg，對比之下，添加有0.2%的實施例1~實施例3的含雨生紅球藻提取物的植物鹽豬油的POV 值5天的POV值在13.6~13.9meo/kg，比空白豬油的低，即添加有實施例1~實施例3的含雨生 紅球藻提取物的植物鹽豬油具有抑制豬油脂質(zhì)過氧化的能力。
[0053]、本發(fā)明含雨生紅球藻提取物的植物鹽抑制癌細(xì)胞的試驗及效果 按常規(guī)方法培養(yǎng)附著性癌細(xì)胞株，分成4組，對照組和實施例1~實施例3組。實施例1組~ 實施例3組在培養(yǎng)液中添加本發(fā)明實施例1~實施例3所述含雨生紅球藻提取物的植物鹽，添 加量為〇.7mg/ ml，對照組不作處理。培養(yǎng)2周后，用常規(guī)方法測定活細(xì)胞數(shù)，并與對照組比 較，計算培養(yǎng)2周后的死細(xì)胞比例。實驗處理數(shù)據(jù)如表4所示。
[0054]表4抑制癌細(xì)胞試驗的死細(xì)胞比例
除非另有說明，本發(fā)明中所采用的百分?jǐn)?shù)均為重量百分?jǐn)?shù)，本發(fā)明所述的比例，均為質(zhì) 量比例。
[0055]最后應(yīng)說明的是：以上所述僅為本發(fā)明的優(yōu)選實施例而已，并不用于限制本發(fā)明， 盡管參照前述實施例對本發(fā)明進(jìn)行了詳細(xì)的說明，對于本領(lǐng)域的技術(shù)人員來說，其依然可 以對前述各實施例所記載的技術(shù)方案進(jìn)行修改，或者對其中部分技術(shù)特征進(jìn)行等同替換。 凡在本發(fā)明的精神和原則之內(nèi)，所作的任何修改、等同替換、改進(jìn)等，均應(yīng)包含在本發(fā)明的 保護(hù)范圍之內(nèi)。
【主權(quán)項】
1. 一種含雨生紅球藻提取物的植物鹽，其特征在于，所述植物鹽，原料包括雨生紅球藻 提取物和鹽地堿蓬植物鹽。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種含雨生紅球藻提取物的植物鹽，其特征在于，包括以下重 量份的原料:雨生紅球藻提取物2~4份，鹽地堿蓬植物鹽6~8份。3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種含雨生紅球藻提取物的植物鹽，其特征在于，所述雨生紅 球藻提取物，蛋白質(zhì)含量為21.2~26.1%，蝦青素含量2.7~3.2%。4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種含雨生紅球藻提取物的植物鹽，其特征在于，所述鹽地堿 蓬植物鹽，黃酮含量為2 · 6~2 · 7mg/g，Ca含量為2600~2700mg/kg。5. -種含雨生紅球藻提取物的植物鹽的制備方法，其特征在于，所述雨生紅球藻提取 物的制備包括超聲波提取步驟，所述超聲波提取步驟，提取頻率為30~50 KHZ。6. 根據(jù)權(quán)利要求5所述的一種含雨生紅球藻提取物的植物鹽的制備方法，其特征在于， 所述雨生紅球藻提取物的制備包括超聲波提取步驟，所述超聲波提取步驟，提取功率為60~ 8017. 根據(jù)權(quán)利要求5所述的一種含雨生紅球藻提取物的植物鹽的制備方法，其特征在于， 所述雨生紅球藻提取物的制備包括超聲波提取步驟，所述超聲波提取步驟，聲波提取時間5 ~13min〇8. 根據(jù)權(quán)利要求5所述的一種含雨生紅球藻提取物的植物鹽的制備方法，其特征在于， 所述雨生紅球藻提取物的制備還包括稀堿破壁步驟，所述稀堿溶液的濃度為0.0 4~ 0.3mol/L，浸泡時間為16~20 h。9. 根據(jù)權(quán)利要求5所述的一種含雨生紅球藻提取物的植物鹽的制備方法，其特征在于， 所述雨生紅球藻提取物的制備還包括層析步驟，所述層析步驟，洗脫液濃度為40~90%，所 述洗脫液為低級的醇、酮、酯的一種或幾種以任意比例組合的水溶液。10. 根據(jù)權(quán)利要求5所述的一種含雨生紅球藻提取物的植物鹽的制備方法，其特征在 于，所述雨生紅球藻提取物的制備還包括干燥步驟，所述干燥步驟，干燥時間為9~16h，冷凍 溫度為-38~-52°C，干燥室真空壓力為0~15pa。
【文檔編號】A23L33/105GK105962285SQ201610294010
【公開日】2016年9月28日
【申請日】2016年5月3日
【發(fā)明人】王勝
【申請人】王勝