專利名稱：鹽發(fā)酵天然產(chǎn)物的方法以及由此制備的發(fā)酵提取物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種鹽發(fā)酵天然產(chǎn)物的方法以及由此制備的發(fā)酵提取物，并且更具體 地，涉及發(fā)酵包括草藥和谷物在內(nèi)的至少一種天然產(chǎn)物的方法，該方法包括向所述天然產(chǎn) 物中加入預(yù)定量的鹽；使該鹽腌的材料自然地發(fā)酵；以及用一種溶劑提取該發(fā)酵的材料， 本發(fā)明還涉及由此制備的發(fā)酵提取物。相應(yīng)地，本發(fā)明的方法可以阻止所述天然產(chǎn)物中多 種對人體有害的細菌的生長，包括腐敗細菌(putrefactive bacteria)、大腸桿菌(E. coli) 和厭氧菌(anaerobic bacteria)，并且還可以防止所述天然產(chǎn)物產(chǎn)生不好的氣味。根據(jù)本 發(fā)明的方法制備的發(fā)酵提取物具有較小的副作用，比通過常規(guī)的發(fā)酵方法制備的發(fā)酵提取 物更安全。
背景技術(shù)：
近來，隨著對傳統(tǒng)發(fā)酵食物的興趣的增加，開發(fā)了使用發(fā)酵技術(shù)制備多種提取物 的方法。相應(yīng)地，開發(fā)了使用發(fā)酵的草藥提取物生產(chǎn)的功能性食品、功能性化妝品產(chǎn)品等 等，它們比未加工的草藥具有更好的性能。在現(xiàn)有技術(shù)中，采用由微生物發(fā)酵草藥的方法。例如韓國注冊專利No. 10-0319377 中公開了使用胚牙乳桿菌(Lactobacillus plantarum)ATCCl 1542發(fā)酵植物和草藥汁的 方法。并且，韓國注冊專利No. 10-0465261中公開了 一種方法，該方法包括從含有黃芪 (Astragalus)和枸杞(Lycium Chinense)果實的草藥混合物中制備草藥提取物，向該提取 物中加入保加利亞乳桿菌(Lactobacillus bulgaricus)培養(yǎng)物，然后培養(yǎng)所述提取物。隨著近來追求健康生活方式的趨勢，對于使用天然發(fā)酵方法而不使用人工因素進 行草藥發(fā)酵的方法的需要日益增加，并且對于使用發(fā)酵的草藥制成的產(chǎn)品的需要持續(xù)增 力口。然而，由于存在由大腸桿菌、厭氧菌等這些對人體有害的細菌所引起的腐敗和污染的風(fēng) 險，在實際產(chǎn)品中很難應(yīng)用這些天然發(fā)酵方法。為了解決此種問題，開發(fā)了在發(fā)酵之前進行 滅菌的方法，例如煮沸的方法。然而，在此情況下，活性成分會由于加熱而降解。因此，需要 開發(fā)一種使用非滅菌方法的發(fā)酵方法。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是為了找到一種能夠克服現(xiàn)有技術(shù)的發(fā)酵方法中存在的上述問題 的天然發(fā)酵方法，并且，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，通過使用包括用鹽腌天然產(chǎn)物(例如草藥)以及發(fā)酵該 鹽腌天然產(chǎn)物的發(fā)酵方法，可以解決常規(guī)的天然發(fā)酵方法中存在的腐敗和污染的風(fēng)險，從 而完成了本發(fā)明。因此，本發(fā)明的一個目的是提供使天然產(chǎn)物發(fā)酵的方法，該方法可以防止天然產(chǎn) 物的腐敗和污染，并提供由此制備的發(fā)酵提取物。為了達到上述目的，本發(fā)明提供使至少一種天然產(chǎn)物發(fā)酵的方法，所述天然產(chǎn)物 包括草藥和谷物，該方法包括以下步驟(1)向所述天然產(chǎn)物中加入預(yù)定量的鹽，并使該鹽 腌的天然產(chǎn)物自然地進行長期的發(fā)酵；以及(2)用水或有機溶劑提取所述發(fā)酵的天然產(chǎn)物，由此得到鹽發(fā)酵的提取物。本發(fā)明還提供一種通過上述方法獲得的鹽發(fā)酵的提取物。根據(jù)本發(fā)明的鹽發(fā)酵天然產(chǎn)物的方法是一種非滅菌的方法，可以防止所述天然產(chǎn)物中的活性成分的降解，并防止由對人體有害的大腸桿菌或厭氧菌引起的降解和污染。由 上述方法制備的發(fā)酵提取物可以用作健康食品和皮膚外用制劑的活性成分。


圖1為顯示各測試樣品的揮發(fā)性鹽基氮(volatile basic nitrogen)含量的測試 結(jié)果的圖表。圖2為顯示各測試樣品的DPPH氧化抑制作用的測量結(jié)果的圖表。圖3顯示在存在曬制鹽條件下培養(yǎng)大腸桿菌ATCC 8739、綠膿桿菌(Pseudomonas aeruginosa) ATCC 9027 和金黃色葡萄球菌(Staphylococcus aureus) ATCC 6538 的過程中 是否產(chǎn)生清晰的抑菌圈的測定結(jié)果，以檢測鹽對有害微生物生長的影響。圖4為顯示對實施例1和對比例1中提取前的發(fā)酵材料的觀察結(jié)果的一組圖片。
具體實施例方式在下文中，將進一步詳細描述本發(fā)明。本發(fā)明涉及使至少一種天然產(chǎn)物發(fā)酵的方法，所述天然產(chǎn)物包括草藥和谷物，所 述方法包括以下步驟(1)向所述天然產(chǎn)物中加入預(yù)定量的鹽，并使該鹽腌的天然產(chǎn)物自 然地進行長期的發(fā)酵；以及(2)用水或有機溶劑提取所述發(fā)酵的天然產(chǎn)物，由此得到鹽發(fā) 酵的提取物。在本發(fā)明方法的步驟(1)中使用的鹽的優(yōu)選實例包括精制氯化鈉、曬制鹽、巖鹽 和竹鹽，并且以所述發(fā)酵的天然產(chǎn)物的總重量為基準，在步驟(1)中使用的鹽的濃度優(yōu)選 為10-30重量％。如果鹽的含量低于10重量％，則難以獲得所需的鹽腌效果，且如果該含 量高于30重量％，所使用的鹽的量的增加并不能帶來鹽腌效果的顯著增加。本發(fā)明的發(fā)酵過程可以在4-40°C的溫度之間進行，時間范圍為30天到1年，優(yōu)選 6個月到1年，從而使發(fā)酵充分進行。如果所述發(fā)酵的溫度低于4°C，對有用的微生物的生 長不利，且如果所述發(fā)酵溫度高于40°C，微生物將過度生長而對草藥的性能產(chǎn)生不利影響。并且，可以應(yīng)用本發(fā)明的發(fā)酵方法的天然產(chǎn)物的實例包括(但不限于)草藥，包括 香澄果(Citrus junos fruit)、黃苗(Astragalus)、紅花(safflower)、當(dāng)歸(angelica)、 姜(ginger)、結(jié)梗(Platycodon grandiflorum)禾口拘fit果(Poncirus trifoliata fruit)； 和谷物，包括大豆、稻、大麥和小麥。根據(jù)本發(fā)明的方法的步驟(2)中使用的有機溶劑可以是選自由純水、甲醇、乙醇、 丙三醇、乙酸乙酯、丁二醇、丙二醇、二氯甲烷和己烷所組成的組中的一種或者兩種或兩種 以上的混合物。步驟(2)中所述提取物的提取過程優(yōu)選在10-80°C的溫度之間進行6-24小 時。如果提取的溫度和提取的時間不在上述特定范圍內(nèi)，該提取的效率會降低，或者提取物 的組成會改變。在根據(jù)本發(fā)明的方法的步驟(2)完成之后，可以將所述提取物在室溫下用冷水進 行提取，根據(jù)現(xiàn)有技術(shù)中已知的常規(guī)方法進行加熱和過濾，由此獲得液相材料?？蛇x擇地，還可以進行溶劑蒸發(fā)、噴霧干燥或凍干，由此制備所述天然產(chǎn)物的鹽發(fā)酵的提取物。根據(jù)本發(fā)明的鹽發(fā)酵的提取物不受限于任何特定應(yīng)用，并可以用于例如健康食品添加劑、化妝品組合物和藥物組合物。在下文中，將通過實施例和測試實施例并參照附圖來進一步詳細說明本發(fā)明。這 些實施例僅用于理解本發(fā)明公開內(nèi)容，并不限制本發(fā)明的范圍。應(yīng)當(dāng)理解，本領(lǐng)域技術(shù)人員 可以在不偏離本發(fā)明所附權(quán)利要求書的主旨和范圍的前提下，對本發(fā)明進行通常熟知的變 更、取代和插入。測試實施例1 確定鹽發(fā)酵的提取物的最佳鹽濃度的測試I將Ikg洗凈的香橙果分別與0-40重量％的不同鹽濃度的鹽溶液混合，并置于陶瓷 容器中。然后，使各混合物在4°C發(fā)酵30天。隨后，向其中加入5L的80%乙醇水溶液，在 回流條件下將各個所獲得的溶液提取三次，然后在15°C沉降1天。然后，將各溶液通過濾 布過濾并離心分離成殘渣和濾液。各個分離的濾液在減壓條件下濃縮，由此獲得提取物樣 品。為了確定最佳鹽濃度，分析各樣品的揮發(fā)性鹽基氮(VBN)含量。對揮發(fā)性鹽基氮的測 定，使得可以通過測定由蛋白質(zhì)降解產(chǎn)生的并引起不好的味道和氣味的揮發(fā)性鹽基氮的量 來了解食物的腐敗程度，并且可以評估由海產(chǎn)品(例如魚)腐敗所導(dǎo)致的不好的氣味產(chǎn)生 的程度。為此目的，將約5g的各所述提取物置于離心管中，加入25mL蒸餾水和5mL的20% TCA。將得到的各溶液以3000rpm離心20分鐘。將各上清液過濾，然后通過添加2%的TCA 調(diào)節(jié)體積至50mL，由此獲得測試樣品。將ImL硼酸吸收液置于Conway裝置的內(nèi)腔中，將ImL 飽和1(20)3和Iml各樣品置于外腔中，然后立即蓋上腔蓋并以夾子固定。將所述Conway裝 置前/后和左/右傾斜，同時旋轉(zhuǎn)，以使所述樣品和所述飽和K2CO3溶液在外腔中很好的混 合。將外腔的混合物在30°C靜置2小時，以0. IN的HCl滴定，并測量所述混合物的VBN含 量。測量結(jié)果在圖1中顯示。由圖1的結(jié)果可以看出，當(dāng)所述鹽濃度低于10重量％時，由于發(fā)酵提取物的腐敗 而使VBN含量增加，而當(dāng)所述鹽濃度高于10重量％時，可以維持合適的VBN含量，由此所述 發(fā)酵提取物可以保持不腐敗。測試實施例2 確定鹽發(fā)酵的提取物的最佳鹽濃度的測試II (DPPH測試)為了確定鹽發(fā)酵的提取物的最佳鹽濃度，以與測試實施例1中相同的方 法，測量了含有0-40重量％鹽濃度的提取物的DPPH(1，1-二苯基-2-苦基苯胼，1， l-diphenyl-2-picryl hydrazyl))氧化抑制作用。即通過測量由有機自由基DPPH的還原 (由于抗氧化劑的氧化作用)引起的吸光度的改變來評價所述提取物的抗氧化活性。測量 由于各提取物的DPPH氧化抑制引起的吸光度減少的程度，并與對照組進行比較，然后將顯 示的吸光度比對照組吸光度低50%的濃度評定為有效抗氧化濃度。將190 μ L的100 μ M的DPPH乙醇溶液與10 μ L對照樣品以及多種鹽濃度的提取 物樣品分別混合，以制備反應(yīng)溶液。使各反應(yīng)溶液在37。C反應(yīng)30分鐘，并在540nm測量吸 光度。用一種廣泛使用的合成抗氧化劑Trolox作為對照樣品。各材料的DPPH分析的結(jié)果 在圖2中顯示。在圖2中，IC5tl表示由于添加樣品使吸光度減少到50%時的樣品濃度。從圖2中的結(jié)果可以看出，具有低于10重量％的鹽濃度的提取物樣品沒有顯示顯 著的抗氧化作用，而具有高于10重量％的鹽濃度的提取物樣品顯示出顯著增強的抗氧化 作用。然而，在具有高于30重量％的鹽濃度的提取物樣品中，抗氧化作用隨鹽濃度增加的比例是減少的，而不是增加的。基于這些結(jié)果，根據(jù)本發(fā)明的鹽發(fā)酵的提取物的制備過程中 的最佳鹽濃度確定為10-30重量％。實施例1 香橙果的鹽發(fā)酵的提取物的制備
將Ikg洗凈的香橙果與10重量％的鹽濃度的鹽溶液混合，并置于陶瓷容器中。然 后，使該混合物在4°C發(fā)酵約30天。隨后，向其中加入5L的80%的乙醇水溶液，在回流條 件下將所獲得的溶液提取三次，然后在15°C沉降1天。將沉降的溶液通過濾布過濾并離心 分離成殘渣和濾液，并將分離的濾液在減壓條件下濃縮。將該濃縮的濾液懸浮于水中，用IL 的醚萃取該懸浮液5次，以除去色素，并用500mL的1- 丁醇萃取水相3次。將得到的全部 的1-丁醇層在減壓條件下濃縮以獲得1-丁醇提取物，然后將該提取物溶解于少量甲醇中。 將該溶液加入到大量的乙酸乙酯中，將產(chǎn)生的沉淀物干燥，由此獲得200g的香橙果的鹽發(fā) 酵的提取物。實施例2 枸橘果的鹽發(fā)酵的提取物的制備準備Ikg干燥的枸橘果，以與實施例1中所描述的相同方法提取，由此獲得150g 枸橘果的鹽發(fā)酵的提取物。對比例1 香橙果的發(fā)酵提取物的制備將Ikg洗凈的香橙果與去離子水混合，并置于陶瓷容器中。然后使該混合物在4°C 發(fā)酵約30天。隨后，向其中加入5L的80%的乙醇水溶液，在回流條件下將所獲得的溶液提 取三次，然后在15°C沉降1天。將沉降的溶液通過濾布過濾并離心分離成殘渣和濾液，并 將分離的濾液在減壓條件下濃縮。將該濃縮的濾液懸浮于水中，用IL的醚萃取該懸浮液5 次，以除去色素，并用500mL的1- 丁醇萃取水相3次。將得到的全部的1_ 丁醇層在減壓條 件下濃縮以獲得1-丁醇提取物，然后將該提取物溶解于少量甲醇中。將該溶液加入到大量 的乙酸乙酯中，將產(chǎn)生的沉淀物干燥，由此獲得170g的香橙果的發(fā)酵提取物。對比例2 枸橘果的發(fā)酵提取物的制備準備Ikg干燥的枸橘果，以與對比例1中所描述的相同方法提取，由此獲得195g 枸橘果的發(fā)酵提取物。測試實施例3 測試抑制有害細菌的產(chǎn)生將李氏瓊脂(Letheen agar)倒入Schale皿中并在其中凝固以形成基本培養(yǎng) 基。然后，將各預(yù)培養(yǎng)的大腸桿菌ATCC 8739、綠膿桿菌ATCC 9027和金黃色葡萄球菌ATCC 6538在維持約40°C的李氏瓊脂中稀釋成細胞濃度為IO5個細胞/g，將各稀釋液傾倒在所述 基本培養(yǎng)基上，并在上面凝固。在無菌紙片上應(yīng)用約各0.02mL具有10%、20%和30%鹽濃 度的曬制鹽溶液，然后置于有細菌細胞散布其上的培養(yǎng)基上。接著，在室溫下使各曬制鹽溶 液充分擴散24小時，然后將該培養(yǎng)基在32°C培育最佳的時間。然后，觀察在Schale皿上是 否形成清晰的抑菌圈，結(jié)果在圖3中顯示。從圖3的結(jié)果可以看出，鹽抑制有害微生物的生長。另外，圖4顯示對提取前實施例1和對比例1的發(fā)酵產(chǎn)物的觀察結(jié)果。從中可以 看出，實施例1的發(fā)酵產(chǎn)物保持了明顯的香橙果的黃色，但是對比例1的發(fā)酵產(chǎn)物由于真菌 的生長而變?yōu)榫G色。此外，在實施例1的香橙果的鹽發(fā)酵產(chǎn)物中，保持了香橙果的特征性香 味，但是對比例1的普通發(fā)酵產(chǎn)物腐壞而具有不好的氣味。測試實施例4 鹽發(fā)酵的提取物的皮膚刺激的評價
將媒介物(vehicle)和實施例1和2以及對比例1和2中制備的各提取物應(yīng)用于 新西蘭白兔的皮膚，每天兩次，共4天。應(yīng)用后，累加紅斑和焦痂形成的得分以及水腫的得 分，以確定各測試樣品的累積刺激指數(shù)。根據(jù)下表1中顯示的標準來評價累積刺激指數(shù)，評 價結(jié)果在下表2中顯示。根據(jù)廣泛頻繁使用的德賴茲(Draize)皮膚刺激指數(shù)(P. I. I)來確 定表2中顯示的刺激指數(shù)(Draize，J. H.，食品、藥品和化妝品中化學(xué)制品的安全性評價)。表權(quán)利要求
一種發(fā)酵至少一種天然產(chǎn)物的方法，所述天然產(chǎn)物包括草藥和谷物，該方法包括以下步驟(1)向所述天然產(chǎn)物中加入預(yù)定量的鹽，并使該鹽腌的天然產(chǎn)物自然地進行長期的發(fā)酵；以及(2)用水或有機溶劑提取發(fā)酵的天然產(chǎn)物，由此得到鹽發(fā)酵的提取物。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中，所述草藥包括選自由香橙果、黃芪、紅花、當(dāng)歸、 姜、桔梗和枸橘果所組成的組中的至少一種。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中，所述谷物包括選自由大豆、稻、大麥和小麥所組 成的組中的至少一種。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中，在步驟(1)中使用的所述鹽為選自由精制氯化 鈉、曬制鹽、巖鹽和竹鹽所組成的組中的至少一種。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中，以所述發(fā)酵的天然產(chǎn)物的總重量為基準，在步驟 (1)中使用的所述鹽的用量為10-30重量％。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中，步驟(2)中使用的所述有機溶劑為選自由甲醇、 乙醇、丙三醇、乙酸乙酯、丁二醇、丙二醇、二氯甲烷和己烷所組成的組中的一種或者兩種或 兩種以上的混合物。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中，在步驟(1)中，所述鹽腌的天然產(chǎn)物在4-40°C發(fā) 酵30天到1年的時間。
8.一種由權(quán)利要求1-7中任意一項所述的方法制備的鹽發(fā)酵的提取物。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種鹽發(fā)酵天然產(chǎn)物的方法以及由此制備的發(fā)酵提取物。該方法包括向至少一種天然產(chǎn)物中加入預(yù)定量的鹽，所述天然產(chǎn)物包括草藥和谷物；使該鹽腌的材料自然地發(fā)酵；以及用溶劑提取該發(fā)酵的鹽腌材料。相應(yīng)地，本發(fā)明的方法可以去除不好的氣味，并且阻止多種對人體有害的細菌的生長，包括腐敗細菌、大腸桿菌和厭氧菌。根據(jù)本發(fā)明的方法制備的發(fā)酵提取物具有極小的副作用，比通過常規(guī)的發(fā)酵方法制備的發(fā)酵提取物更安全。
文檔編號A23L1/105GK101959426SQ200980106765
公開日2011年1月26日 申請日期2009年2月27日 優(yōu)先權(quán)日2008年2月29日
發(fā)明者徐景姬, 樸惠胤, 樸葰星, 李真锳, 郭一榮, 金德熙, 金漢坤, 金銀珠 申請人:株式會社太平洋