一種利用冷凍濃縮方式脫除花生粕蛋白肽色素的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明設(shè)及一種多膚提純方法，具體設(shè)及一種利用冷凍濃縮方式脫除花生巧蛋白 膚色素的方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 多膚一般指由多個(gè)氨基酸用膚鍵互相連接構(gòu)成的長(zhǎng)鏈物質(zhì)，是蛋白質(zhì)水解的中間 產(chǎn)物，不僅具有優(yōu)良的吸收機(jī)制，同時(shí)也具有蛋白質(zhì)或氨基酸所沒有的生理功能，如抗氧化 和降高血壓等特性。
[0003] 近年來發(fā)現(xiàn)，幾乎所有生命科學(xué)的重大理論，如免疫防御、生殖控制、腫瘤病變、抗 衰防老等都設(shè)及有關(guān)的活性膚。一般來說多膚在人體處于一種平衡狀態(tài)，若活性膚減少后， 人體的機(jī)能可能會(huì)發(fā)生不良變化，因此需要補(bǔ)充膚的攝入。目前多膚的制備方法主要有提 取法、合成法和水解法。直接提取法多適用于實(shí)驗(yàn)室在進(jìn)行理論研究時(shí)的定性研究手段。合 成法包括了化學(xué)合成、DNA重組和酶合成，該法產(chǎn)物純度較高，但成本高、副反應(yīng)多，難W實(shí) 現(xiàn)大規(guī)模生產(chǎn)。水解法分為化學(xué)水解法和生物酶水解法，生物酶解法因具有生產(chǎn)條件溫和， 水解過程可控，膚得率高W及安全的優(yōu)勢(shì)，逐漸取代了傳統(tǒng)的化學(xué)法，成為制備多膚的常用 方法。
[0004] 飲食上，蛋白質(zhì)主要存在于瘦肉、蛋類、豆類及魚類中。而蛋白粉作為重要的營養(yǎng) 補(bǔ)充劑其全球銷售額于2010年已經(jīng)突破180億美元大關(guān)，在膳食營養(yǎng)劑中占有重要的地 位。在我國，蛋白質(zhì)屬于緊缺物質(zhì)，主要蛋白質(zhì)原料仍然依靠進(jìn)口，如魚粉約70%需要進(jìn)口， 生產(chǎn)豆巧的大豆約70 %需要進(jìn)口，構(gòu)成蛋白質(zhì)的基本單元一一合成氨基酸50 %W上需要進(jìn) P。
[0005] 相比于糖類、油脂等其他營養(yǎng)素，蛋白質(zhì)不僅需求量巨大而且來源相對(duì)較少、提取 工藝相對(duì)復(fù)雜，因此其生產(chǎn)成本普遍較高。從來源來講，蛋白質(zhì)可W分為動(dòng)物蛋白和植物蛋 白，動(dòng)物蛋白主要來源于禽、畜、魚類和昆蟲等的肉、蛋、奶；植物蛋白主要來源于豆類、谷物 類植物中。一般說，植物蛋白和動(dòng)物蛋白主要存在氨基酸組成和數(shù)量上的不同，植物蛋白普 遍存在限制性氨基酸，導(dǎo)致了植物蛋白的營養(yǎng)不均衡性。但是植物蛋白具有來源廣泛、提取 方法簡(jiǎn)單等優(yōu)勢(shì)，可W通過人為添加限制性氨基酸來彌補(bǔ)植物蛋白的劣勢(shì)，因此合理開發(fā) 植物蛋白可W有效緩解蛋白質(zhì)供不應(yīng)求局面、降低蛋白生產(chǎn)成本。
[0006] 例如，市面上常見的乳清蛋白和酪蛋白屬于動(dòng)物蛋白，在牛奶中只占0.7%和 2. 8%，是從牛奶中分離提取出來的珍貴蛋白；植物蛋白主要為大豆蛋白、花生蛋白、玉米蛋 白和面筋蛋白等，來源廣泛且蛋白含量可W高達(dá)30~50%，主要通過堿溶酸沉提取，工藝 相對(duì)簡(jiǎn)單高效。
[0007] 花生是全球最重要的四大油料作物之一，我國50-60%的花生用于棒油，棒油后所 得花生巧為富含蛋白質(zhì)的營養(yǎng)基料，其蛋白含量高達(dá)40-50%，氨基酸組成比較合理，接近 聯(lián)合國糧農(nóng)組織（FA0)和世界衛(wèi)生組織（WHO)的推薦值。目前我國用于棒油的花生仁基本 不去衣，而花生衣中含有較多的色素，所W棒油后的花生巧呈黃褐色，導(dǎo)致利用此類花生巧 生產(chǎn)出來的多膚普遍呈深褐色，從而限制了其利用和發(fā)展。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0008] 為了克服現(xiàn)有的花生巧蛋白多膚顏色普遍偏深的缺陷，本發(fā)明的目的在于提供一 種利用冷凍濃縮方式脫除花生巧蛋白膚色素的方法，該方法采用蛋白酶和纖維素酶的聯(lián)合 作用釋放花生巧多膚，再結(jié)合冷凍法和超濾手段高效制備色澤較淺的、高品質(zhì)的花生蛋白 膚產(chǎn)品。
[0009] 本發(fā)明的目的通過下述技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)：
[0010] 一種利用冷凍濃縮方式脫除花生巧蛋白膚色素的方法，包括W下步驟：
[0011] (1)花生巧酶解產(chǎn)物的制備：按重量取1份花生巧和5-10份去離子水?dāng)埌杌旌希?并過膠體磨得到花生巧漿液；然后加入蛋白酶和纖維素酶，在50~60°C的條件下進(jìn)行酶 解，當(dāng)水解度達(dá)到20-25%時(shí)，滅酶，離屯、分離，收集上清液得到花生巧酶解產(chǎn)物；
[0012] (2)蛋白膚色素的脫除：真空濃縮花生巧酶解產(chǎn)物至固形物含量為30-50%，在低 溫條件下靜置冷凍，花生巧酶解產(chǎn)物自然分層，去除表面色素層，取下部蛋白層解凍，再通 過膜通量為10000化的超濾膜，收集透過液，進(jìn)行噴霧干燥，得到色澤較淺的高品質(zhì)花生巧 蛋白膚廣品；
[0013] 步驟（1)所述花生巧為油脂含量不超過10%的高溫壓棒和/或溶劑提油后的帶衣 花生餅/巧；
[0014] 步驟（1)所述的蛋白酶為W下的一種：
[0015] A、為中性蛋白酶、木瓜蛋白酶、復(fù)合蛋白酶、Alcalase2.化或堿性蛋白酶中的一 種W上，酶解體系初始抑值為6. 0~8. 0 ;
[0016] B、為胃蛋白酶，酶解體系初始抑值為2. 0~4. 0 ;
[0017] C、所述的蛋白酶由米曲霉發(fā)酵產(chǎn)生；
[0018] 蛋白酶總添加量為花生巧質(zhì)量的0. 5~1. 5% ;
[0019] 所述的纖維素酶為食品級(jí)纖維素酶或復(fù)合植物水解酶，添加量為花生巧質(zhì)量的 1.0-2.0% ；
[0020] 步驟似所述的低溫為-18°CW下；所述的冷凍是冷凍24小時(shí)W上；
[0021] 步驟（2)所述超濾流量不超過70血/min,進(jìn)口壓力不超過lOpsi，出口壓力不超過 7psi;
[0022] 本發(fā)明所述的離屯、采用常溫離屯、，一般為5000-8000r/min保持15-30min。
[0023] 本發(fā)明相對(duì)于現(xiàn)有技術(shù)具有如下的優(yōu)點(diǎn)及效果：
[0024] (1)本發(fā)明通過現(xiàn)代生物酶解技術(shù)降解花生巧蛋白，通過對(duì)水解酶具體選擇和水 解的控制，實(shí)現(xiàn)可控酶解，提高原料利用率，降低生產(chǎn)成本，最大程度釋放花生巧中的多膚 組分。
[0025] (2)本發(fā)明采用靜置冷凍法和超濾法聯(lián)合作用，可W高效去除花生蛋白膚產(chǎn)品中 色素，在高效分離提純花生巧多膚的同時(shí)，也廉價(jià)獲得濃縮的花生衣色素。
[00%] (3)本發(fā)明工藝操作簡(jiǎn)單、生產(chǎn)成本低、沒有任何污染、蛋白回收率高，所得蛋白多 膚類物質(zhì)，可廣泛應(yīng)用于食品領(lǐng)域中。
【具體實(shí)施方式】
[0027] 下面結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步詳細(xì)的描述，但本發(fā)明的實(shí)施方式不限于此。
[0028] 實(shí)施例中的有關(guān)試驗(yàn)指標(biāo)測(cè)定方法如下：
[0029] 粗蛋白的測(cè)定：
[0030] 凱氏定氮法測(cè)定/GB5009. 5-85。
[0031] 游離氨態(tài)氮含量的測(cè)定：
[0032] 采用甲醒電位滴定法測(cè)定樣品的游離氨態(tài)氮含量，W蒸饋水為空白對(duì)照，取0. 5g 樣品，加入蒸饋水至80g，W0.Imol/L的化OH滴定至抑8. 2,加入10血甲醒，繼續(xù)滴定至 pH9.2,得空白對(duì)照組和樣品加入甲醒后消耗的化0H體積V。及Vi。產(chǎn)物的游離氨態(tài)氮含 量為：
[0033] 游離氨態(tài)氮含量=(Vi-Vo)XO. 7
[0034] 膚含量的測(cè)定：
[0035]取2ml酶解液（蛋白含量約20mg/ml)，加入等體積的10 %的TCA溶液，混合均勻 后靜置30min，然后4000r/min條件下離屯、lOmin，取上清液分別測(cè)定總氮含量和游離氨氮 含量。則膚含量為：
[0036] 膚含量=(酸溶蛋白含量-游離氨基酸）/總蛋白含量X100% (GB/T22492-2008)
[0037] 總黃酬的測(cè)定： 陽03引用濃度為0.Imol/L的化0H溶液配制Img/ml的蛋白樣品溶液，充分振蕩混勻，lOOOOg離屯、15min，于328皿處測(cè)定吸光度（總多酪）。多酪含量蘆下當(dāng)量/100樣 品"為單位，通過W蘆下為標(biāo)樣的標(biāo)準(zhǔn)曲線進(jìn)行換算。
[0039] 0RAC的測(cè)定： W40] 0RAC反應(yīng)在75mmol/L憐酸鹽緩沖液（pH= 7.4)環(huán)境中進(jìn)行，F(xiàn)L(巧光素鋼 鹽）、AAPH(自由基產(chǎn)生劑）、標(biāo)準(zhǔn)抗氧化物質(zhì)TroloxW及待測(cè)樣品均用該緩沖液溶解和 稀釋。具體測(cè)定操作為：在96孔板各微孔中分別加入待測(cè)樣品20y1后添加緩沖溶液 20y1及化(70nmol/L)20yL在37°C下預(yù)置15min后，用多道移液器迅速在各孔中加入 AAPH(12. 8mmol/L) 140yL啟動(dòng)反應(yīng)，并將微孔板置于巧光分析儀中在37°C下W激發(fā)波長(zhǎng) 485nm，發(fā)射波長(zhǎng)528nm進(jìn)行連續(xù)測(cè)定，每2min測(cè)定一次各孔巧光強(qiáng)度，測(cè)定lOSmin，巧光 強(qiáng)度分別記為f。，fi，f2…片4。將記錄的各微孔不同時(shí)間點(diǎn)的絕對(duì)巧光強(qiáng)度數(shù)據(jù)與初始 巧光強(qiáng)度f。相比，折算成相對(duì)巧光強(qiáng)度，并根據(jù)W下公式統(tǒng)計(jì)巧光焰滅曲線下面積（AUC sample)值。
[0041] 色差值的測(cè)定： 陽0創(chuàng)定量移取2血酶解液用于測(cè)定L*，a*，b*值，W水做空白對(duì)照。S次測(cè)定取平均 值。按如下公式計(jì)算相應(yīng)參數(shù)：
[0043] 總色差A(yù)E= (AL*2+Aa*2+Ab*2) 1/2
[0044] 飽和度C