混菌好氧發(fā)酵秸稈尾菜制備蛋白飼料方法
【專利摘要】本發(fā)明主要涉及混菌好氧發(fā)酵秸稈尾菜制備蛋白飼料方法。一種混菌好氧發(fā)酵秸稈尾菜制備蛋白飼料方法，其主要特點是：將秸稈、尾菜、菜粕、糠麩，均勻攪拌，使其含水量達到50—60％；加入相對于干料總量為2—6％的硫酸銨，相對于干料總量為1—4％的尿素；用1％石灰水調(diào)pH至5.5—6.5；接入相對于干料總量為8—12％由白地霉菌、乳酸菌、黑曲霉菌混合的菌液，混合菌液的重量比為白地霉菌50—70％，乳酸菌20—25％，黑曲霉菌5—10％；在溫度為28-32℃，通風(fēng)條件下發(fā)酵24-36小時，制成發(fā)酵蛋白飼料。本發(fā)明利用現(xiàn)代生物技術(shù)，優(yōu)選最佳的組合菌，生產(chǎn)工藝簡便，節(jié)省設(shè)備和能源，所需投資少。
【專利說明】混菌好氧發(fā)酵秸稈尾菜制備蛋白飼料方法

【技術(shù)領(lǐng)域】：
[0001] 本發(fā)明主要涉及一種混菌好氧發(fā)酵秸桿尾菜制備蛋白飼料方法。

【背景技術(shù)】：
[0002] 我國人口眾多，而蛋白質(zhì)嚴(yán)重缺乏，增產(chǎn)或進口魚粉又有一定的困難，這就嚴(yán)重的 影響著我國畜牧業(yè)的快速發(fā)展。大力發(fā)展?fàn)I養(yǎng)價值高，生產(chǎn)成本低的蛋白飼料，是飼料工業(yè) 發(fā)展的趨勢。我國農(nóng)產(chǎn)品下腳料如秸桿、尾菜等原料資源相當(dāng)豐富，利用這些原料生產(chǎn)畜禽 飼料，是近年來科技工作者關(guān)注的問題。但目前所報道的不夠完善，難以形成工業(yè)化生產(chǎn)， 主要問題是：
[0003] 傳統(tǒng)的厭氧發(fā)酵秸桿的處理方法是將玉米桿、麥草、豆秸、花生秧、紅薯秧、馬鈴薯 秧、稻草經(jīng)粉碎混和麩皮、豆柏、菜柏、花生柏、無機鹽，加入多種酶制劑和厭氧微生物發(fā)酵 齊IJ，經(jīng)厭氧發(fā)酵生產(chǎn)飼料。這種技術(shù)的缺點是：（1).在制備厭氧微生物發(fā)酵劑時，所需的菌 種種類多，添加的輔料多，特別是要添加價格昂貴的多種酶制劑，操作復(fù)雜，能耗和投資都 比較大。（2).厭氧發(fā)酵飼料生產(chǎn)周期長，一般需要7 - 30天，菌細胞生長繁殖緩慢，產(chǎn)品細 胞數(shù)少，蛋白含量低。（3).飼料生產(chǎn)占用的廠房面積大，生產(chǎn)周期長，能源耗費大，難以實現(xiàn) 工業(yè)化生產(chǎn)。
[0004] 尾菜是指在制備精菜時被切掉的廢菜葉和廢菜幫，約占精菜的1/3-1/2,這些廢棄 物若不經(jīng)合理處理，隨意堆積，可造成腐爛變質(zhì)，每到夏秋季蔬菜收獲季節(jié)，這些大量的腐 爛尾菜都會有蚊蠅滋生，臭氣不可聞，對環(huán)境產(chǎn)生嚴(yán)重污染?，F(xiàn)在處理尾菜的方法是將尾菜 送到價格昂貴的菜餅制作機上，通過清洗打碎壓濾工序，再將濾渣干燥制成菜餅或飼料，這 種處理方法既浪費了水資源，又流失尾菜的營養(yǎng)元素。因尾菜含水量為70-90%，其中許多 營養(yǎng)元素如維生素、糖分和礦物質(zhì)都在菜葉中，通過壓濾就將營養(yǎng)成分流失。所制備的菜餅 粉也只剩下纖維素和少量非水溶性礦物質(zhì)，同時在清洗尾菜時又需大量的水。


【發(fā)明內(nèi)容】
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[0005] 本發(fā)明的目的在于避免現(xiàn)有技術(shù)的不足之處而提供一種混菌好氧發(fā)酵秸桿尾菜 制備蛋白飼料方法。
[0006] 本發(fā)明的目的可以通過采用以下技術(shù)方案來實現(xiàn)：一種混菌好氧發(fā)酵秸桿尾菜 制備蛋白飼料方法，其主要特點是：將秸桿、尾菜、菜柏、糠麩，均勻攪拌，使其含水量達到 50- 60% ;加入相對于干料總量為2 - 6%的硫酸銨，相對于干料總量為1 一4%的尿素；用 1 %石灰水調(diào)pH至5. 5 - 6. 5 ;接入相對于干料總量為8 -12 %由白地霉菌、乳酸菌、黑曲霉 菌混合的菌液，混合菌液的重量比為白地霉菌50- 70%，乳酸菌20- 25%，黑曲霉菌5- 10% ;在溫度為28-32°C，通風(fēng)條件下發(fā)酵24-36小時，制成發(fā)酵蛋白飼料。制成的發(fā)酵產(chǎn) 品可按比例拌入畜禽混合飼料中直接飼喂，以保持其細胞活性。
[0007] 所述的混菌好氧發(fā)酵秸桿尾菜制備蛋白飼料方法，所述的白地霉菌或乳酸菌或黑 曲霉菌的菌液培養(yǎng)方法包括有：
[0008] A.斜面菌種的制備：
[0009] a.白地霉菌斜面菌種的制備：葡萄糖1 %、酵母膏1 %、蛋白胨0.5%、瓊脂粉2%、 加水加熱溶解后，用1% NaOH調(diào)pH至5. 5 - 6.5,經(jīng)115°C，20分鐘蒸汽滅菌，然后分裝于 15 X 2cm滅菌的試管，擺成斜面待凝固后備用；
[0010] b.乳酸菌斜面菌種的制備：
[0011] 番茄汁瓊脂培養(yǎng)基的制備：酵母膏1%、蛋白胨1%、番茄汁20%、CaCO3L 5%、瓊 脂粉2%、加熱溶解后，用1% NaOH調(diào)pH至5. 5 - 6.5,經(jīng)115°C，20分鐘蒸汽滅菌，然后分 裝于15 X 2cm滅菌的試管，擺成斜面待凝固后備用；
[0012] c.黑曲霉囷斜面囷種的制備：
[0013] 馬鈴薯-蔗糖瓊脂培養(yǎng)基的制備：
[0014] 馬鈴薯20%，蔗糖2%，瓊脂L 8%，加水溶解后，用1 % NaOH調(diào)pH至5. 5-6· 5,經(jīng) 115°C，20分鐘蒸汽滅菌，然后分裝于15 X 2cm滅菌的試管，擺成斜面待凝固后備用；
[0015] d.分別取上述三種母種斜面菌，在無菌操作條件下，轉(zhuǎn)種于上述制備的瓊脂斜面 培養(yǎng)基上，經(jīng)28-32 °C，24-48小時培養(yǎng)，即得斜面菌種，為一級菌種；
[0016] B.液體培養(yǎng)液的制備及液體菌種的培養(yǎng)：
[0017] e.液體培養(yǎng)液的制備：在1升新鮮豆腐漿水或啤酒糟水，或粉絲漿水或尾菜汁中， 加入麩皮1 一3g、玉米粉5- 7. 5g，（NH4) 2S041-2g，磷酸0. 5- 1毫升，用1 %石灰水調(diào)pH至 5. 5-6. 5,115°C 20分鐘蒸汽滅菌；
[0018] f.將一級菌種接種于液體培養(yǎng)液，經(jīng)28-32°C，24-48小時培養(yǎng)，其培養(yǎng)菌液為二 級菌種；
[0019] g.將二級菌種再擴大培養(yǎng)，上搖床振蕩培養(yǎng)經(jīng)28-32°C，振幅100- 150r/分鐘， 18-24小時培養(yǎng)，其菌液為三級菌種；
[0020] h.將三級菌種再擴大培養(yǎng)，上發(fā)酵罐或發(fā)酵槽，經(jīng)28_32°C通氣攪拌發(fā)酵培養(yǎng) 18-24小時，其菌液為四級菌種。
[0021] 所述的混菌好氧發(fā)酵秸桿尾菜制備蛋白飼料方法，所述的混合菌液的重量比為白 地霉菌50- 70%，乳酸菌20- 25%，黑曲霉菌5 -10%。
[0022] 所述的混菌好氧發(fā)酵秸桿尾菜制備蛋白飼料方法，還包括有發(fā)酵后的蛋白飼料經(jīng) 低溫干燥或風(fēng)干或晾干或曬干后包裝儲存。
[0023] 所述的混菌好氧發(fā)酵秸桿尾菜制備蛋白飼料方法，所述的秸桿為玉米桿、玉米芯、 麥草桿、豆秸秧、花生秧、紅薯秧、馬鈴薯秧、雜草。
[0024] 所述的混菌好氧發(fā)酵秸桿尾菜制備蛋白飼料方法，所述的尾菜包括有白菜、小白 菜、蓮花菜、菠菜、芹菜、花菜、白蘿卜、紅蘿卜、花心菜、油菜、韭菜、蔥、蒜苗、娃娃菜的任意 一種或任意組合的菜葉和菜幫。
[0025] 所述的混菌好氧發(fā)酵秸桿尾菜制備蛋白飼料方法，所述的尾菜的含水量為70- 90% ;粉碎小于10mm。
[0026] 所述的混菌好氧發(fā)酵秸桿尾菜制備蛋白飼料方法，所述的秸桿粉碎后，經(jīng)0.5- 1. 5%的硫酸進行酸化和蒸煮處理。
[0027] 所述的混菌好氧發(fā)酵秸桿尾菜制備蛋白飼料方法，其特征是所述的秸桿、尾菜、菜 柏、糖鼓的重量比為1 一3 ：2一6:1 -3 ：0. 2一1。
[0028] 本發(fā)明采用的白地霉菌是一種很粗生的營養(yǎng)價值類似產(chǎn)骯假絲酵母的微生物，能 在碳水化合物豐富的秸桿上迅速生長，細胞富含蛋白質(zhì)、脂肪、維生素和核酸?？赏?硫酸銨、尿素等非蛋白氮；而配伍菌乳酸菌和黑曲霉菌，黑曲霉菌具有很強的淀粉糖化能 力，能將秸桿中的纖維素和淀粉物質(zhì)轉(zhuǎn)化為被白地霉菌和乳酸菌吸收利用的單糖或雙糖， 這樣就能將有機物中的非氮物質(zhì)轉(zhuǎn)化為蛋白質(zhì)。乳酸菌是一類微需氧菌或厭氧菌，在秸桿 發(fā)酵開始初期就繁殖，到發(fā)酵結(jié)束后，因密封缺氧仍能繁殖，能分解秸桿原料中的糖等碳水 化合物形成乳酸，引起乳酸發(fā)酵。能產(chǎn)生一系列酶系，將秸桿中的纖維素、半纖維素和抗?fàn)I 養(yǎng)因子進行生物分解。乳酸本身既是營養(yǎng)物質(zhì)，又抑制秸桿中有害微生物生長的作用，而且 在結(jié)桿微生物發(fā)酵中，可提高結(jié)桿的適口性，營養(yǎng)性和耐儲性。三菌在同一條件下、同一發(fā) 酵時間，完成各自的發(fā)酵功能，起到菌種間的互補作用，有效地利用秸桿尾菜原料，提高飼 料的營養(yǎng)價值。
[0029] 本發(fā)明是采用液固態(tài)發(fā)酵技術(shù)，它的可行性在于液態(tài)培養(yǎng)菌種，優(yōu)點是：一是液體 培養(yǎng)液是利用食品、飲料行業(yè)產(chǎn)生的廢液和尾菜汁液如豆腐漿水，粉絲漿水，啤（白）酒糟 液，尾菜汁液加無機鹽，調(diào)整PH值，因為這些廢液營養(yǎng)豐富，適于混菌種的快速生長繁殖。 二是新鮮漿水或廢水或尾菜汁液可以不滅菌，添加無機鹽調(diào)整PH值后，可直接接入白地霉 菌、乳酸菌，黑曲霉菌進行液體發(fā)酵培養(yǎng)。這樣節(jié)省了設(shè)備和能源，三是液體培養(yǎng)菌種，菌細 胞繁殖快，菌液細胞濃度高，加入固體原料的菌量大可抵抗雜菌污染。
[0030] 本發(fā)明的有益效果是：本發(fā)明利用現(xiàn)代生物技術(shù)，優(yōu)選最佳的組合菌，利用混菌 好氧菌液固態(tài)發(fā)酵技術(shù)，對秸桿原料不經(jīng)氨化處理，將粉碎的尾菜直接拌入秸桿粉，接入菌 齊U，周期僅需18 - 24小時。發(fā)酵料可風(fēng)干、曬干或直接拌入混合飼料，飼喂畜禽。本發(fā)明產(chǎn) 品活性細胞數(shù)多達100- 200億/克，粗蛋白含量高達20- 26. 3%。
[0031] 本發(fā)明成本低,可做蛋白源配置奶牛、羊、豬、雞、鴨、魚飼料,用量可達飼料總量 的5-30%，可代替部分玉米、豆柏和魚粉，經(jīng)飼喂試驗證明，奶牛每頭每天可多增產(chǎn)牛奶 I. 73Kg，奶脂提高0. 14%，飼喂育肥豬每頭每天可多增重100克，而瘦肉率高，味香；飼喂肉 鴨除每只每天多增重10克外，鴨表現(xiàn)活潑有神，羽毛滑潤。
[0032] 本發(fā)明的飼料飼喂畜禽，一方面改善畜禽胃腸道環(huán)境和菌群結(jié)構(gòu)，以調(diào)節(jié)胃腸發(fā) 酵，減少乳酸的產(chǎn)生，提高PH值的穩(wěn)定性，促進乳酸菌，纖維素菌為主體的有益菌群繁殖及 活力提高，增加整個腸道酵母菌、乳酸菌、纖維素菌等有益菌的有效濃度，促進畜禽胃腸對 飼料的分解、合成，消化吸收利用，從而增加采食量，提高畜禽對飼料的利用率，促進生產(chǎn)性 能的發(fā)揮。
[0033] 本發(fā)明的發(fā)酵飼料作為活性的細胞前體進入畜禽胃腸道后，繁殖和生長活力增 強，能有效的抑制病原微生物的繁殖，參與病原微生物的生存競爭，排斥病原菌在胃腸粘膜 表面的附著。協(xié)助機體消除毒素及其代謝產(chǎn)物，防止毒素和廢物的吸收，增強機體免疫和抗 病能力，對防止畜禽消化系統(tǒng)疾病起到保健作用，同時對幼年畜禽可刺激胃腸發(fā)育。
[0034] 本發(fā)明的發(fā)酵飼料含有未知生長因子促進劑，能增強畜禽的生長，特別是對增加 幼年畜禽的生長發(fā)育有明顯效果。
[0035] 本發(fā)明適用飼料工業(yè)，畜牧業(yè)和禽類、魚類養(yǎng)殖業(yè)；食品、飲料、淀粉發(fā)酵工業(yè)的廢 水廢渣處理。最適合大型養(yǎng)殖場自產(chǎn)自用，獲利更多；也適用于有出口任務(wù)的豬場應(yīng)用（肉 質(zhì)滑嫩無腥味）。

【具體實施方式】：
[0036] 以下通過所示之最佳實施例作進一步詳述：
[0037] 實施例1 :經(jīng)0.5% H2SO4處理的玉米芯粉，白菜尾菜，菜柏，麩皮，其中玉米芯粉： 白菜尾菜：菜柏：麩皮的重量比為1 :3 :2 :0. 5,并加入相對于干料總量硫酸銨為4%，尿素 3%，充分混勻后，調(diào)固體發(fā)酵料含水分50%，用1 %的石灰水調(diào)pH值到5. 5,然后加入相對 于干料總量為12%的白地霉菌、乳酸菌、黑曲霉菌混合的菌液，白地霉菌、乳酸菌、黑曲霉 菌的重量比為白地霉菌65%，乳酸菌25 %，黑曲霉菌10 %。充分?jǐn)嚢杌旌暇鶆蚝螅逊糯?溫度至32°C時，鋪于地面上，厚度10cm，經(jīng)室溫32°C發(fā)酵培養(yǎng)24小時，其產(chǎn)品粗蛋白可達 21. 99%，氨基酸占粗蛋白81. 52%。
[0038] 實施例2 :經(jīng)1% H2SO4處理的麥秸粉，蓮花菜尾菜，菜柏，麩皮，其中麥秸粉：蓮花 菜尾菜：菜柏：麩皮的重量比為1 :3 :3 :1，并加入相對于干料總量硫酸銨為2%，尿素1%， 調(diào)固體發(fā)酵料含水分55 %，充分混勻后，用1 %的石灰水調(diào)pH值到6. 5,然后加入相對于干 料總量為8%的白地霉菌、乳酸菌、黑曲霉菌混合的菌液，白地霉菌、乳酸菌、黑曲霉菌的重 量比為白地霉菌70%，乳酸菌25%，黑曲霉菌5%。充分?jǐn)嚢杌旌暇鶆蚝?，堆放待溫度?30°C時，鋪于地面上，厚度10cm，經(jīng)室溫30°C發(fā)酵培養(yǎng)24小時，其產(chǎn)品粗蛋白可達20. 5%， 氣基酸占粗蛋白80. 25 %。
[0039] 實施例3 :經(jīng)I. 5% H2SO4處理的玉米桿粉，并蒸煮處理，加入芹菜尾菜、菜柏、麩皮， 其中玉米桿粉：芹菜尾菜：菜柏：麩皮的重量比為2 :4 :3 :1，并加入相對于干料總量硫酸銨 為4%、尿素3 %，調(diào)固體發(fā)酵料含水分55 %，用1 %的石灰水調(diào)pH至5. 5，然后加入相對于 干料總量為9%的白地霉菌、乳酸菌和黑曲霉菌混合的菌液，白地霉菌、乳酸菌和黑曲霉菌 的重量比為白地霉菌65 %，乳酸菌20 %，黑曲霉菌15 %，充分?jǐn)嚢杌旌暇鶆蚝?，堆放待溫?上升至35°C時，鋪于地面上，厚度10cm，經(jīng)室溫32°C發(fā)酵培養(yǎng)20小時，其產(chǎn)品粗蛋白可達 21. 58%，氨基酸占粗蛋白79. 82%。
[0040] 實施例4 :經(jīng)I. 5% H2SO4處理的玉米桿粉，并蒸煮處理，加入菠菜尾菜、菜柏、麩 皮，其中玉米桿粉：菠菜尾菜：菜柏：麩皮的重量比為2 :4 :2 :1，并加入相對于干料總量硫 酸銨為4%、尿素2 %，調(diào)固體發(fā)酵料含水分50 %，用1 %的石灰水調(diào)pH至5. 5，然后加入相 對于干料總量為10%的白地霉菌、乳酸菌和黑曲霉菌混合的菌液，白地霉菌、乳酸菌和黑曲 霉菌的重量比為白地霉菌65%，乳酸菌25%，黑曲霉菌10%，充分?jǐn)嚢杌旌暇鶆蚝?，堆放?溫度至28°C時，鋪于地面上，厚度10cm，經(jīng)室溫28°C發(fā)酵培養(yǎng)24小時，其產(chǎn)品粗蛋白可達 20. 48 %，氨基酸占粗蛋白78. 25 %。
[0041] 實施例5 :經(jīng)1% H2SO4處理的豆秸秧粉，并蒸煮處理，加入花菜尾菜、菜柏、麩皮， 其中豆秸秧粉：花菜尾菜：菜柏：麩皮的重量比為2 :4 :3 :0. 5,并加入相對于干物質(zhì)為4% 的硫酸銨，尿素3 %，充分?jǐn)嚢杈鶆蚝?，調(diào)固體發(fā)酵料含水分55 %，用1 %的石灰水調(diào)pH至 6. 0,然后加入相對于干料總量為10%的白地霉囷、乳Ife囷和黑曲霉囷混合的囷液，白地霉 菌、乳酸菌和黑曲霉菌的重量比為白地霉菌65 %，乳酸菌25 %，黑曲霉菌10 %，充分?jǐn)嚢杌?合均勻后，送發(fā)酵架上，發(fā)酵培養(yǎng)，厚度8cm，經(jīng)室溫28°C發(fā)酵培養(yǎng)18小時，其產(chǎn)品粗蛋白可 達24. 52 %，氨基酸占粗蛋白80. 66 %。
[0042] 實施例6 :經(jīng)I^H2SO4處理的豆秸秧粉，并蒸煮處理，加入小白菜尾菜、菜柏、麩皮， 其中豆秸秧粉：小白菜尾菜：菜柏：麩皮的重量比為2 :5 :3 :2,并加入相對于干物質(zhì)為4% 的硫酸銨，尿素3 %，充分?jǐn)嚢杈鶆蚝?，調(diào)固體發(fā)酵料含水分50 %，用1 %的石灰水調(diào)pH至 6. 0,然后加入相對于干料總量為11 %的白地霉囷、乳Ife囷和黑曲霉囷混合的囷液，白地霉 菌、乳酸菌和黑曲霉菌的重量比為白地霉菌70 %，乳酸菌20 %，黑曲霉菌10 %，充分?jǐn)嚢杌?合均勻后，送發(fā)酵架上，發(fā)酵培養(yǎng)，厚度8cm，經(jīng)室溫32°C發(fā)酵培養(yǎng)24小時，其產(chǎn)品粗蛋白可 達24. 72 %，氨基酸占粗蛋白78. 66 %。
[0043] 實施例7 :經(jīng)I^H2SO4處理的花生秧粉，并蒸煮處理，加入娃娃菜尾菜、菜柏、麩皮， 其中花生秧粉：娃娃菜尾菜：菜柏：米糠的重量比為2 :5 :2 :3,并加入相對于干物質(zhì)為2% 的硫酸銨，尿素1 %，充分?jǐn)嚢杈鶆蚝?，調(diào)固體發(fā)酵料含水分50 %，用1 %的石灰水調(diào)pH至 6. 0,然后加入相對于干料總量為11 %的白地霉囷、乳Ife囷和黑曲霉囷混合的囷液，白地霉 菌、乳酸菌和黑曲霉菌的重量比為白地霉菌65 %，乳酸菌25 %，黑曲霉菌10 %，充分?jǐn)嚢杌?合均勻后，送發(fā)酵架上，發(fā)酵培養(yǎng)，厚度8cm，經(jīng)室溫32°C發(fā)酵培養(yǎng)24小時，其產(chǎn)品粗蛋白可 達21. 03%，氨基酸占粗蛋白86. 62%。
[0044] 實施例8 :經(jīng)1%H2S04&理的花生秧粉，并蒸煮處理，加入白蘿卜尾菜、菜柏、麩皮， 其中花生秧粉：白蘿卜尾菜：菜柏：米糠的重量比為2 :5 :2 :2,并加入相對于干物質(zhì)為3% 的硫酸銨，尿素2 %，充分?jǐn)嚢杈鶆蚝?，調(diào)固體發(fā)酵料含水分55 %，用1 %的石灰水調(diào)pH至 6. 5,然后加入相對于干料總量為10 %的白地霉囷、乳Ife囷和黑曲霉囷混合的囷液，白地霉 菌、乳酸菌和黑曲霉菌的重量比為白地霉菌70%，乳酸菌25%，黑曲霉菌5%，充分?jǐn)嚢杌?合均勻后，送發(fā)酵架上，發(fā)酵培養(yǎng)，厚度l〇cm，經(jīng)室溫30°C發(fā)酵培養(yǎng)18小時，其產(chǎn)品粗蛋白 可達21. 13%，氨基酸占粗蛋白85.86%。
[0045] 實施例9 :紅薯秧粉、紅蘿卜尾菜、菜柏、米糠，其中紅薯秧粉：紅蘿卜尾菜：菜柏： 米糠的重量比為1 :4 :2 :1，并加入相對于干物質(zhì)為4%的硫酸銨，尿素3%，充分?jǐn)嚢杈鶆?后，調(diào)固體發(fā)酵料含水分50%，用1 %的石灰水調(diào)pH至6. 0,然后加入相對于干料總量為 10%的白地霉菌、乳酸菌和黑曲霉菌混合的菌液，白地霉菌、乳酸菌和黑曲霉菌的重量比為 白地霉菌65 %，乳酸菌25 %，黑曲霉菌10 %，充分?jǐn)嚢杌旌暇鶆蚝?，充分?jǐn)嚢杌旌暇鶆蚝螅?堆放待溫度上升至32°C時，鋪于地面發(fā)酵，厚度10cm，經(jīng)室溫28°C發(fā)酵培養(yǎng)24小時，發(fā)酵結(jié) 束后，其廣品粗蛋白可達21. 3%，氣基酸占粗蛋白81. 0%。
[0046] 實施例10 :取馬鈴薯秧粉、油菜尾菜，菜柏、麩皮，其中馬鈴薯秧粉：油菜尾菜：菜 柏：米糠的重量比為1 :2 :2 :0. 5,并加入相對于干物質(zhì)為3%的硫酸銨，尿素2%，充分?jǐn)嚢?均勻后，調(diào)固體發(fā)酵料含水分55%，用1 %的石灰水調(diào)pH至6. 0,然后加入相對于干料總量 為12%的白地霉菌、乳酸菌和黑曲霉菌混合的菌液，白地霉菌、乳酸菌和黑曲霉菌的重量 比為白地霉菌70 %，乳酸菌20 %，黑曲霉菌10 %，充分?jǐn)嚢杌旌暇鶆蚝?，充分?jǐn)嚢杌旌暇鶆?后，堆放待溫度上升至35°C時，鋪于地面發(fā)酵，厚度10cm，經(jīng)室溫32°C發(fā)酵培養(yǎng)18小時，發(fā) 酵結(jié)束后，其廣品粗蛋白可達21. 0%，氣基酸占粗蛋白81. 02%。
[0047] 實施例11 :培養(yǎng)白地霉菌、乳酸菌和黑曲霉菌混合菌液100kg。
[0048] 白地霉菌、乳酸菌和黑曲霉菌分別按下述方法培養(yǎng)。
[0049] 白地霉菌菌液培養(yǎng)70公斤：
[0050] A.斜面菌種的制備：
[0051] a.葡萄糖lg、酵母膏l(xiāng)g、蛋白胨0· 5g、瓊脂粉2g、加水IOOml后，經(jīng)115? 20分鐘 蒸汽滅菌，然后分裝于15 X 2cm滅菌的試管，每管分裝3ml，擺成斜面待凝固后備用。
[0052] b.取母種斜面菌，在無菌操作條件下，轉(zhuǎn)種于上述制備的瓊脂斜面培養(yǎng)基上，經(jīng) 28 °C，24小時培養(yǎng)，即得菌種斜面菌，一級菌種。
[0053] B.液體種子培養(yǎng)液的制備及液體菌種的培養(yǎng)：
[0054] a.液體培養(yǎng)液的制備；在1升新鮮豆腐漿水或啤酒糟水，或粉絲漿水中或尾菜汁 中，加入麩皮lg，玉米粉5g，（NH4) 2SO4Ig,磷酸0. 5毫升，用1 %的石灰水調(diào)pH至6. 0,經(jīng) 115 °C 20分鐘蒸汽滅菌。
[0055] b.挑取兩接種環(huán)一級菌種接種于IOOml液體培養(yǎng)液中，經(jīng)32°C，24小時培養(yǎng)，其培 養(yǎng)菌液為二級菌種。
[0056] c.將二級菌種IOOml接種于IOOOml液體培養(yǎng)液中，上搖床振蕩培養(yǎng)32 °C，振幅 IOOr/分鐘，18小時，其培養(yǎng)菌液為三級菌種。
[0057] d.將三級菌種IOOOml接種于10000ml液體培養(yǎng)液中，上發(fā)酵罐或發(fā)酵槽，在32°C 通氣攪拌情況下發(fā)酵培養(yǎng)24小時，其菌液為四級菌種。
[0058] e.將四級菌種7000ml接種于70000ml液體培養(yǎng)液中，上發(fā)酵罐或發(fā)酵槽，在32 °C 通氣攪拌情況下發(fā)酵培養(yǎng)24小時，其白地霉菌液為70公斤。
[0059] 乳酸菌液培養(yǎng)20公斤：
[0060] A.斜面菌種的制備：
[0061] a.酵母膏1 %、蛋白胨1 %、番茄汁20%、CaCO3L 5%、瓊脂粉2%、加熱溶解后，用 1 % NaOH調(diào)pH至5. 5 - 6. 5,經(jīng)115°C，20分鐘蒸汽滅菌，然后分裝于15 X 2cm滅菌的試管， 擺成斜面待凝固后備用；
[0062] b.取母種斜面菌，在無菌操作條件下，轉(zhuǎn)種于上述制備的番茄汁瓊脂斜面培養(yǎng)基 上，經(jīng)32°C，24小時培養(yǎng)，即得菌種斜面菌，為一級菌種。
[0063] B.液體種子培養(yǎng)液的制備及液體菌種的培養(yǎng)：
[0064] a.液體培養(yǎng)液的制備：在1升新鮮豆腐漿水或啤酒糟水，或粉絲漿水或尾菜汁 中，加入麩皮lg，玉米粉5g，（NH4) 2SO4Ig,磷酸0. 5毫升，用1 %的石灰水調(diào)pH至6. 0,經(jīng) 115 °C 20分鐘蒸汽滅菌。
[0065] b.挑取兩接種環(huán)一級菌種接種于IOOml液體培養(yǎng)液中，經(jīng)32°C，24小時培養(yǎng)，其培 養(yǎng)液為二級菌種。
[0066] c.將二級菌種IOOml接種于IOOOml液體培養(yǎng)液中，上搖床振蕩培養(yǎng)，經(jīng)28°C，24 小時，其培養(yǎng)液為三級菌種。
[0067] d.將三級菌種IOOOml接種于10000ml液體培養(yǎng)液中，上發(fā)酵罐或發(fā)酵槽，在28°C 通氣攪拌情況下發(fā)酵培養(yǎng)24小時，其菌液為四級菌種。
[0068] e.將四級菌種2000ml接種于20000ml液體培養(yǎng)液中，上發(fā)酵罐或發(fā)酵槽，在28 °C 通氣攪拌情況下發(fā)酵培養(yǎng)24小時，其乳酸菌液為20公斤。
[0069] 黑曲霉囷囷液培養(yǎng)10公斤：
[0070] A.斜面菌種的制備：
[0071] a.葡萄糖lg、酵母膏l(xiāng)g、蛋白胨0. 5g、麥芽汁lml、瓊脂粉2g、加水IOOml后，經(jīng) 115°C 20分鐘蒸汽滅菌，然后分裝于15 X 2cm滅菌的試管，每管分裝3ml，擺成斜面待凝固 后備用。
[0072] b.取母種斜面菌，在無菌操作條件下，轉(zhuǎn)種于上述制備的瓊脂斜面培養(yǎng)基上，經(jīng) 32 °C，24小時培養(yǎng)，即得菌種斜面菌，一級菌種。
[0073] B.液體種子培養(yǎng)液的制備及液體菌種的培養(yǎng)：
[0074] a.液體培養(yǎng)液的制備；在0. 5升新鮮豆腐漿水或啤酒糟水，或粉絲漿水中，加入玉 米粉3. 5g，（NH4) 2S040. 5g，磷酸0· 25毫升，用1 %的石灰水調(diào)pH至6. 0,經(jīng)115°C 20分鐘蒸 汽滅菌。
[0075] b.挑取兩接種環(huán)一級菌種接種于IOOml液體培養(yǎng)液中，經(jīng)28°C，48小時培養(yǎng)，其培 養(yǎng)菌液為二級菌種。
[0076] c.將二級菌種IOOml接種于IOOOml液體培養(yǎng)液中，上搖床振蕩培養(yǎng)28°C，振幅 IOOr/分鐘，18小時，其培養(yǎng)菌液為三級菌種。
[0077] d.將三級菌種IOOOml接種于10000ml液體培養(yǎng)液中，上發(fā)酵罐或發(fā)酵槽，在28°C 通氣攪拌情況下發(fā)酵培養(yǎng)24小時，即為10公斤黑曲霉菌菌液。
[0078] 用同樣的方法培養(yǎng)白地霉菌液65公斤，乳酸菌菌液25公斤和黑曲霉菌10公斤， 然后將菌液混合，即為固體發(fā)酵原料的混合菌液。
[0079] 本發(fā)明營養(yǎng)成份分析及有關(guān)實驗：
[0080] 1.分析樣品：本發(fā)明發(fā)酵產(chǎn)品。
[0081] 2.分析方法；見表1。
[0082] 表1菌體蛋白飼料主要成分分析方法

【權(quán)利要求】
1. 一種混菌好氧發(fā)酵秸桿尾菜制備蛋白飼料方法，其特征是：將秸桿、尾菜、菜柏、糠 麩，均勻攪拌，使其含水量達到50- 60% ;加入相對于干料總量為2 - 6%的硫酸銨，相對于 干料總量為1 一4%的尿素；用1 %石灰水調(diào)pH至5. 5 -6. 5 ;接入相對于干料總量為8- 12 %由白地霉菌、乳酸菌、黑曲霉菌混合的菌液，混合菌液的重量比為白地霉菌50- 70 %， 乳酸菌20- 25%，黑曲霉菌5 -10%;在溫度為28-32°C，通風(fēng)條件下發(fā)酵24-36小時，制成 發(fā)酵蛋白飼料。
2. 權(quán)利要求1所述的混菌好氧發(fā)酵秸桿尾菜制備蛋白飼料方法，其特征是所述的白地 霉菌或乳酸菌或黑曲霉菌的菌液培養(yǎng)方法包括有： A. 斜面菌種的制備： a. 白地霉菌斜面菌種的制備：葡萄糖1 %、酵母膏1 %、蛋白胨0.5%、瓊脂粉2%、加水 加熱溶解后，用1 % NaOH調(diào)pH至5. 5-6. 5,經(jīng)115°C，20分鐘蒸汽滅菌，然后分裝于15 X 2cm 滅菌的試管，擺成斜面待凝固后備用； b. 乳酸菌斜面菌種的制備： 番茄汁瓊脂培養(yǎng)基的制備：酵母膏1 %、蛋白胨1 %、番茄汁20%、CaC03l. 5%、瓊脂粉 2%、加熱溶解后，用1% NaOH調(diào)pH至5. 5 - 6.5,經(jīng)115°C，20分鐘蒸汽滅菌，然后分裝于 15 X 2cm滅菌的試管，擺成斜面待凝固后備用； c. 黑曲霉囷斜面囷種的制備： 馬鈴薯-蔗糖瓊脂培養(yǎng)基的制備： 馬鈴薯20%，蔗糖2%，瓊脂1.8%，加水溶解后，用1% NaOH調(diào)pH至5.5-6. 5,經(jīng) 115°C，20分鐘蒸汽滅菌，然后分裝于15 X 2cm滅菌的試管，擺成斜面待凝固后備用； d. 分別取上述三種母種斜面菌，在無菌操作條件下，轉(zhuǎn)種于上述制備的瓊脂斜面培養(yǎng) 基上，經(jīng)28-32 °C，24-48小時培養(yǎng)，即得斜面菌種，為一級菌種； B. 液體培養(yǎng)液的制備及液體菌種的培養(yǎng)： a. 液體培養(yǎng)液的制備：在1升新鮮豆腐漿水或啤酒糟水，或粉絲漿水或尾菜汁中，力口 入麩皮1 一3g、玉米粉5 -7. 5g，（NH4)2S041 -2g，磷酸0. 5- 1毫升，用1%石灰水調(diào)pH至 5. 5-6. 5,115°C 20分鐘蒸汽滅菌； b. 將一級菌種接種于液體培養(yǎng)液，經(jīng)28-32°C，24-48小時培養(yǎng)，其培養(yǎng)菌液為二級菌 種； c. 將二級菌種再擴大培養(yǎng)，上搖床振蕩培養(yǎng)經(jīng)28-32°C，振幅100- 150r/分鐘，18-24 小時培養(yǎng)，其菌液為三級菌種； d. 將三級菌種再擴大培養(yǎng)，上發(fā)酵罐或發(fā)酵槽，經(jīng)28-32°C通氣攪拌發(fā)酵培養(yǎng)18-24小 時，其菌液為四級菌種。
3. 如權(quán)利要求1或2所述的混菌好氧發(fā)酵秸桿尾菜制備蛋白飼料方法，其特征是所述 的混合菌液的重量比為白地霉菌50- 70%，乳酸菌20- 25%，黑曲霉菌5 -10%。
4. 如權(quán)利要求1或2所述的混菌好氧發(fā)酵秸桿尾菜制備蛋白飼料方法，其特征是還包 括有發(fā)酵后的蛋白飼料經(jīng)低溫干燥或風(fēng)干或晾干或曬干后包裝儲存。
5. 如權(quán)利要求1所述的混菌好氧發(fā)酵秸桿尾菜制備蛋白飼料方法，其特征是所述的秸 桿為玉米桿、玉米芯、麥草桿、豆秸秧、花生秧、紅薯秧、馬鈴薯秧、雜草。
6. 如權(quán)利要求1所述的混菌好氧發(fā)酵秸桿尾菜制備蛋白飼料方法，其特征是所述的尾 菜包括有白菜、小白菜、蓮花菜、菠菜、芹菜、花菜、白蘿卜、紅蘿卜、花心菜、油菜、韭菜、蔥、 蒜苗、娃娃菜的任意一種或任意組合的菜葉和菜幫。
7. 如權(quán)利要求1所述的混菌好氧發(fā)酵秸桿尾菜制備蛋白飼料方法，其特征是所述的尾 菜的含水量為70- 90% ;粉碎小于10mm。
8. 如權(quán)利要求1所述的混菌好氧發(fā)酵秸桿尾菜制備蛋白飼料方法，其特征是所述的秸 桿粉碎后，經(jīng)〇. 5 - 1. 5%的硫酸進行酸化和蒸煮處理。
9. 如權(quán)利要求1至7所述的混菌好氧發(fā)酵秸桿尾菜制備蛋白飼料方法，其特征是所述 的稻軒、尾菜、菜柏、糖鼓的重量比為1 一3:2 -6:1 -3 :0. 2 -1。
【文檔編號】C12R1/645GK104286400SQ201410529202
【公開日】2015年1月21日 申請日期:2014年10月9日 優(yōu)先權(quán)日:2014年10月9日
【發(fā)明者】孫榮高, 代積文, 代鳳雷, 曾學(xué)平, 高小青 申請人:甘肅長業(yè)生態(tài)生物科技有限公司