常溫保存核酸的采集容器的制造方法
【專利摘要】本發(fā)明是一種血液采集容器，特別是一種常溫保存核酸的采集容器，其包括采集管和膠塞，膠塞密封在采集管的管口上，膠塞的外面設有保護帽，采集管內(nèi)設置有添加劑，所述添加劑由血液抗凝劑及其緩沖液、防腐固定劑、核酸酶抑制劑、代謝抑制劑及細胞膜穩(wěn)定劑混合而成。本發(fā)明可以使采集的樣本在常溫條件下保持初始狀態(tài)7-14天甚至更長時間而不腐敗，所以不會影響檢驗結果；本采集容器可用于在災難、戰(zhàn)爭時及艱苦地區(qū)的血液樣本的采集、儲存、運輸，還可用于科學實驗中其他組織、細胞等樣本的采集、儲存和運輸，還可用于其他臨床檢驗項目；本發(fā)明降低了樣本采集后的儲存條件，從而降低了工作人員勞動量，提高了工作效率。
【專利說明】常溫保存核酸的采集容器
【技術領域】
[0001]本發(fā)明是一種血液采集容器，特別是一種常溫保存核酸的采集容器。
【背景技術】
[0002]目前，分子生物學的發(fā)展日新月異，基因工程學是分子生物學最重要的一個學科，其已廣泛的應用到臨床檢驗醫(yī)學、基因靶向治療、生物制藥、農(nóng)業(yè)育種和法醫(yī)鑒定等許多方面。基因工程學主要研究和應用的基礎對象是核酸，包括DNA和RNA兩大類。目前樣品核酸的提取已經(jīng)發(fā)展得非常成熟，但對樣品的采集、運輸和存儲條件要求比較高，尤其是RNA。因為RNA非常不穩(wěn)定，它可以迅速且顯著的降解，當樣本來自于臨床的血液時，除了出現(xiàn)RNA降解的情況，有時還會出現(xiàn)RNA被誘導，導致低豐度信息丟失或基因轉錄本出錯，因此要求樣本必須保持低溫狀態(tài)，而低溫狀態(tài)將給樣本的采集、運輸和存儲帶來許多困難。如果能在常溫下進行樣本的采集、運輸和存儲，就能完全避免這些困難，這是目前需要認真解決的技術問題。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0003]本發(fā)明的目的是為了克服現(xiàn)有核酸的采集、運輸和存儲必須在低溫狀態(tài)下進行的缺陷，發(fā)明一種用于在常溫狀態(tài)下采集樣本并在一定時間內(nèi)保持樣本初始狀態(tài)而不影響檢查結果的常溫保存核酸的采集容器。
[0004]本發(fā)明的目的是按如下的方式來實現(xiàn)的:所述常溫保存核酸的采集容器，包括采集管和膠塞，膠塞密封在采集管的管口上，膠塞的外面設有保護帽，采集管內(nèi)設置有添加劑，所述添加劑由血液抗凝劑及其緩沖液、防腐固定劑、核酸酶抑制劑、代謝抑制劑及細胞膜穩(wěn)定劑混合而成。
[0005]所述采集管是用玻璃或塑料制作；玻璃為硅硼玻璃或石英玻璃；塑料為聚對苯二甲酸乙二醇酯(PET)、聚對苯二甲酸丁二醇酯(PBT)或聚萘二甲酸乙二醇酯(PEN)。
[0006]所述膠塞是用橡膠制作，橡膠為丁基橡膠。
[0007]所述膠塞可以用鋁塑膜替代。
[0008]所述血液抗凝劑為乙二胺四乙酸鹽、檸檬酸鹽、肝素鹽、血液保存液，所述緩沖液為檸檬酸鈉緩沖液；所述防腐固定劑為乙內(nèi)酰脲、2-溴-2-硝基丙烷-1，3- 二醇、雙咪唑烷基脲、季銨鹽、酒精、甲醛及其衍生物、咪唑烷基脲、二羥甲基脲、惡唑烷或羥甲基甘氨酸鈉；所述核酸酶抑制劑為焦碳酸二乙酯、乙醇、金精三羧酸(ΑΤΑ)、甲酰胺、氧釩核糖核苷復合物、硅藻土、乙二胺四乙酸(EDTA)及其鹽、蛋白酶K、肝素、羥胺氧銅離子、膨潤土、硫酸銨、二硫蘇糖醇(DTT)、β-巰基乙醇、半胱氨酸或二硫赤蘚糖醇；所述代謝抑制劑磷酸二羥丙酮、1，3_ 二磷酸甘油酸、甘露糖、甘油醛、氟化鈉、甘油醛3-磷酸、丁酮、磷酸烯醇式丙酮酸、丙酮酸或甘油； 所述細胞膜穩(wěn)定劑為甘氨酸及其同系物或衍生物、絲氨酸、絡氨酸、天冬酰胺，天冬氨酸、半胱氨酸或谷氨酰胺；其中:血液抗凝劑乙二胺四乙酸鹽按1.5-2.2mg/lml血液添加，肝素鹽按15酶活性單位/Iml血液添加，檸檬酸鹽和檸檬酸鈉緩沖液配置濃度2%-6%，且按檸檬酸鹽或檸檬酸鈉緩沖液與血液為1: 6-1: 11的比例添加，血液保存(保養(yǎng))液與血液體積比按1: 5-1: 10的比例添加；所述防腐固定劑添加量按抗凝劑配制量的4% -50%比例添加；所述核酸酶抑制劑按抗凝劑配制量的1% -10%添加比例；所述代謝抑制劑按抗凝劑配制量的0.5% -5%比例添加；所述細胞膜穩(wěn)定劑按抗凝劑配制量2% -8%比例添加。
[0009]本發(fā)明的積極效果如下:本發(fā)明可以使采集的樣本在常溫條件下保持初始狀態(tài)7-14天甚至更長時間而不腐敗，所以不會影響檢驗結果；本采集容器可用于在災難、戰(zhàn)爭時及艱苦地區(qū)的血液樣本的采集、儲存和運輸，還可用于科學實驗中其他組織、細胞等樣本的采集、儲存和運輸，還可用于其他臨床檢驗項目；本發(fā)明降低了樣本采集后的儲存條件，從而降低了工作人員勞動量，提高了工作效率。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0010]圖1是本發(fā)明結構圖
[0011]圖中:I采集管2膠塞3保護帽
[0012]4添加劑
【具體實施方式】
[0013]如圖1所示，所述常溫保存核酸的采集容器，包括采集管I和膠塞2，膠塞2密封在采集管I的管口上，膠塞2的外面設有保護帽3，采集管I內(nèi)設置有添加劑4，所述添加劑4由血液抗凝劑及其緩沖液、防腐固定劑、核酸酶抑制劑、代謝抑制劑及細胞膜穩(wěn)定劑混合而成。
[0014]所述采集管I是用玻璃或塑料制作；玻璃為硅硼玻璃或石英玻璃；塑料為聚對苯二甲酸乙二醇酯(PET)、聚對苯二甲酸丁二醇酯(PBT)或聚萘二甲酸乙二醇酯(PEN)。
[0015]所述膠塞2是用橡膠制作，橡膠為丁基橡膠。
[0016]所述膠塞2可以用鋁塑膜替代。
[0017]配制添加劑時，首先將添加劑稱重后加入燒杯，再加入溶劑水，用磁力攪拌機攪拌均勻，然后按添加劑的配制總量和添加比例計算其他添加劑的量，然后混合攪拌均勻，裝入試劑瓶密封保存即可。
[0018]添加劑是按如下的方式來配制:所述血液抗凝劑添加量按預置真空量和添加的體積配制抗凝劑濃度(參看行業(yè)標準YY0314-2007)，即乙二胺四乙酸鹽(EDTA)按1.5-2.2mg/lml血液添加，例如:制作2ml真空的采集管，試劑添加量20微升/管，按1.8mg/lml血液，則需要配置18%濃度的抗凝劑，假如配制500ml，則需要加入EDTA鹽90g ；假如試劑添加量30微升/管，按1.8mg/lml血液，則需要配置12%濃度的抗凝劑，同樣配制500ml，則需要加入EDTA鹽60g);肝素鹽按15酶活性單位/Iml血液(參看行業(yè)標準YY0314-2007，例如:制作3ml肝素做抗凝劑的采集管，需要加45酶活性單位的肝素，如果肝素效價150酶活性單位/mg，試劑添加量20微升/管，則需要配置1.5%濃度的抗凝劑)；梓檬酸鹽和檸檬酸鈉緩沖液按檸檬酸鹽或檸檬酸鈉與血液為1: 6-1: 11的比例添加，優(yōu)選I: 9，其中檸檬酸鹽和檸檬酸鈉緩沖液中，檸檬酸鈉加量配置濃度2%-6%，(例如:制作4.5ml檸檬酸鈉做抗凝劑的采集管，配制3.2%檸檬酸鈉溶液，按1: 9的比例添加，即制作4.5ml檸檬酸鈉采集管，需要加入0.5ml的檸檬酸鈉溶液)；血液保存(保養(yǎng))液與血液體積比按1: 5-1: 10的比例添加。所述防腐固定劑添加量按抗凝劑配制量的4%-50%比例添加；所述核酸酶抑制劑按抗凝劑配制量的1% -10%添加比例；所述代謝抑制劑按抗凝劑配制量的0.5% -5%比例添加；所述細胞膜穩(wěn)定劑按抗凝劑配制量2% -8%比例添加。
[0019]制作真空采集管時，按抽血量計算添加劑的添加量，然后抽真空即可。
[0020]在第一實施中，血液抗凝劑為乙二胺四乙酸鹽(EDTAK2)，防腐固定劑為雙咪唑烷基脲，核酸酶抑制劑為金精三羧酸，代謝抑制劑為甘油醛，細胞膜穩(wěn)定劑為甘氨酸，用含有上述添加劑的采血管采集受試者血液5ml并常溫放置，然后于第3天和第7天涂片觀察血球變化情況，發(fā)現(xiàn)血球保存完好，沒有可見紅、白細胞碎片，證明血漿DNA和RNA沒有受到因白細胞破裂引起體DNA的污染和干擾；隨后進行QPCR測試血漿核酸變化，測試證明放置3天和7天的結果，與抽血后即刻測試的結果沒有顯著性差異。所以證明，加入此種混合添加劑能在常溫下保持血漿中DNA和RNA的含量和白細胞、紅細胞完整性，表明本血液采集容器在以在常溫下作為血液核酸提取樣本使用。
[0021]在第二實施中，血液抗凝劑為乙二胺四乙酸鹽(EDTAK3)，防腐固定劑為二羥甲基脲，核酸酶抑制劑為金精三羧酸，代謝抑制劑為甘油醛，細胞膜穩(wěn)定劑為天冬氨酸，用含有上述添加劑的采血管采集受試者血液各5ml并常溫放置，然后于第3天和第7天涂片觀察血球變化情況，發(fā)現(xiàn)血球保存完好，沒有可見紅、白細胞碎片，證明血漿DNA和RNA沒有受到因白細胞破裂引起體DNA的污染和干擾。隨后進行QPCR測試血漿核酸變化，測試證明，放置3天和7天的結果，與抽血后即刻測試的結果沒有顯著性差異。所以證明，加入此種混合添加劑能在常溫保持血漿中DNA和RNA的含量和白細胞、紅細胞完整性，表明本血液采集容器可以在常溫下作為血液核酸提取樣本使用。
[0022]本發(fā)明經(jīng)測試，證明其完全適合于在常溫下作為血液核酸提取樣本使用。
【權利要求】
1.一種常溫保存核酸的采集容器，其特征在于:包括采集管和膠塞，膠塞密封在采集管的管口上，膠塞的外面設有保護帽，采集管內(nèi)設置有添加劑，所述添加劑由血液抗凝劑及其緩沖液、防腐固定劑、核酸酶抑制劑、代謝抑制劑及細胞膜穩(wěn)定劑混合而成。
2.根據(jù)權利要求1所述的常溫保存核酸的采集容器，其特征在于:所述采集管是用玻璃或塑料制作；玻璃為硅硼玻璃或石英玻璃；塑料為聚對苯二甲酸乙二醇酯、聚對苯二甲酸丁二醇酯或聚萘二甲酸乙二醇酯。
3.根據(jù)權利要求1所述的常溫保存核酸的采集容器，其特征在于:所述膠塞是用橡膠制作，橡膠為丁基橡膠。
4.根據(jù)權利要求1所述的常溫保存核酸的采集容器，其特征在于:所述膠塞可以用鋁塑膜替代。
5.根據(jù)權利要求1所述的常 溫保存核酸的采集容器，其特征在于:所述血液抗凝劑為乙二胺四乙酸鹽、檸檬酸鹽、肝素鹽、血液保存液；所述緩沖液為檸檬酸鈉緩沖液；所述防腐固定劑為乙內(nèi)酰脲、2-溴-2-硝基丙烷-1，3- 二醇、雙咪唑烷基脲、季銨鹽、酒精、甲醛及其衍生物、咪唑烷基脲、二羥甲基脲、惡唑烷或羥甲基甘氨酸鈉；所述核酸酶抑制劑為焦碳酸二乙酯、乙醇、金精三羧酸、甲酰胺、氧釩核糖核苷復合物、硅藻土、乙二胺四乙酸及其鹽、蛋白酶K、肝素、羥胺氧銅離子、膨潤土、硫酸銨、二硫蘇糖醇、β-巰基乙醇、半胱氨酸或二硫赤蘚糖醇；所述代謝抑制劑磷酸二羥丙酮、1，3_ 二磷酸甘油酸、甘露糖、甘油醛、氟化鈉、甘油醛3-磷酸、丁酮、磷酸烯醇式丙酮酸、丙酮酸或甘油；所述細胞膜穩(wěn)定劑為甘氨酸及其同系物或衍生物、絲氨酸、絡氨酸、天冬酰胺，天冬氨酸、半胱氨酸或谷氨酰胺；其中:血液抗凝劑乙二胺四乙酸鹽按1.5-2.2mg/lml血液添加,肝素鹽按15酶活性單位/Iml血液添加，檸檬酸鹽和檸檬酸鈉緩沖液配置濃度2% _6%，且按檸檬酸鹽或檸檬酸鈉緩沖液與血液為1: 6-1: 11的比例添加，血液保存液與血液體積比按1: 5-1: 10的比例添加；所述防腐固定劑添加量按抗凝劑配制量的4% -50%比例添加；所述核酸酶抑制劑按抗凝劑配制量的1% -10%添加比例；所述代謝抑制劑按抗凝劑配制量的0.5% -5%比例添加；所述細胞膜穩(wěn)定劑按抗凝劑配制量2% -8%比例添加。
【文檔編號】C12M1/24GK103789202SQ201410036576
【公開日】2014年5月14日 申請日期:2014年1月26日 優(yōu)先權日:2014年1月26日
【發(fā)明者】付士明 申請人:付士明