一種副豬嗜血桿菌高密度發(fā)酵培養(yǎng)基的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及微生物培養(yǎng)基【技術(shù)領(lǐng)域】，更具體的講是一種副豬嗜血桿菌高密度發(fā)酵培養(yǎng)基的制備方法，其由下述組分及配比，按照重量/體積計，谷氨酰胺2-6g/L、酵母膏15-35g/L、氯化鈉5-10g/L、碳酸鈣0.01-0.05g/L、硫酸鎂0.01-0.05g/L、胰蛋白胨1-10g/L、磷酸氫二鉀0.5-10g/L，按體積比計：0.001-0.01NAD和10-20%的牛血清，余量為水，滅菌前培養(yǎng)基的PH為7.0-7.2，本發(fā)明的有益效果是：該培養(yǎng)基通過補充各種微生物所需營養(yǎng)成分，并通過碳酸鈣有效控制培養(yǎng)基中pH，并通過谷氨酰胺提供碳源以及小部分氮，有利于副豬嗜血桿菌的快速成長。
【專利說明】一種副豬嗜血桿菌高密度發(fā)酵培養(yǎng)基
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及微生物培養(yǎng)基【技術(shù)領(lǐng)域】，更具體的講是一種副豬嗜血桿菌高密度發(fā)酵培養(yǎng)基的制備方法。
【背景技術(shù)】
[0002]豬副嗜血桿菌病又稱多發(fā)性纖維素性漿膜炎和關(guān)節(jié)炎，也稱格拉澤氏病。是由豬副嗜血桿菌引起。這種細菌在環(huán)境中普遍存在，世界各地都有，甚至是健康的豬群當中也能發(fā)現(xiàn)。對于采用無特定病原或用藥早起斷奶技術(shù)而沒有豬副嗜血桿菌污染的豬群，初次感染到這種細菌時后果會相當嚴重。
[0003]而副豬嗜血桿菌:屬革蘭氏陰性短小桿菌，形態(tài)多變，有15個以上血清型，其中血清型5、4、13最為常見(占70%以上)。該菌生長時嚴格需要煙酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD或V因子)，不需要X因子(血紅素或其它卟啉類物質(zhì))，在血液培養(yǎng)基和巧克力培養(yǎng)基上生長，菌落小而透明，在血液培養(yǎng)基上無溶血現(xiàn)象；在葡萄球菌菌臺周圍生長良好，形成衛(wèi)星現(xiàn)象。一般條件下難以分離和培養(yǎng)，尤其是應(yīng)用抗生素治療過病豬的病料，因而給本病的診斷帶來困難；據(jù)報道:豬副嗜血桿菌的真實發(fā)病率可能為實際確診的10倍之多。
[0004]目前針對副豬嗜血桿菌的培養(yǎng)存在諸多問題，比如營養(yǎng)需求高，pH要求嚴格，培養(yǎng)密度低等，而目前常用的培養(yǎng)基為TSB培養(yǎng)基，但是并不能滿足大規(guī)模的培養(yǎng)，這是現(xiàn)有技術(shù)中的不足。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]本發(fā)明的發(fā)明目的在于針對現(xiàn)有技術(shù)中的不足，提供一種副豬嗜血桿菌高密度發(fā)酵培養(yǎng)基，該培養(yǎng)基通過補充各種微生物所需營養(yǎng)成分，并通過碳酸鈣有效控制培養(yǎng)基中PH，并通過谷氨酰胺提供碳源以及小部分氮，有利于副豬嗜血桿菌的快速成長。
[0006]本發(fā)明是通過以下技術(shù)方案實現(xiàn)的:
一種副豬嗜血桿菌高密度發(fā)酵培養(yǎng)基，由下述組分及配比，按照重量/體積計，谷氨酰胺 2-6g/L、酵母膏 15-35 g/L、氯化鈉 5-10 g/L、碳酸鈣 0.01-0.05 g/L、硫酸鎂 0.01-0.05g/L、胰蛋白胨l-10g/L、磷酸氫二鉀0.5-10 g/L，按體積比計:0.001-0.01NAD和10-20%的牛血清，余量為水，滅菌前培養(yǎng)基的PH為7.0-7.2。
[0007]優(yōu)選的，上述培養(yǎng)基由下述組分及配比，按照重量/體積計，谷氨酰胺3_5g/L、酵母膏20-30 g/L、氯化鈉6-8 g/L、碳酸鈣0.01-0.02 g/L、硫酸鎂0.01-0.02 g/L、胰蛋白胨2-8g/L、磷酸氫二鉀1.3-8.7 g/L，按體積比計:0.005-0.008%NAD和12-18%的牛血清，余量為水，滅菌前培養(yǎng)基的PH為7.0-7.2。
[0008]優(yōu)選的，上述培養(yǎng)基由下述組分及配比，按照重量/體積計，谷氨酰胺4g/L、酵母膏25 g/L、氯化鈉78/1、碳酸鈣0.015 g/L、硫酸鎂0.015g/L、胰蛋白胨5g/L、磷酸氫二鉀5.5g/L，按體積比計:0.006%NAD和16%的牛血清，余量為水，滅菌前培養(yǎng)基的PH為7.0-7.2。[0009]上述的一種副豬嗜血桿菌高密度發(fā)酵培養(yǎng)基的制備方法，包括如下步驟:
(1)取酵母膏15-35 g/L、氯化鈉 5-10 g/L、碳酸鈣 0.01-0.05 g/L、硫酸鎂 0.01-0.05g/L、胰蛋白胨l-10g/L、磷酸氫二鉀0.5-10 g/L用蒸懼水定容至1000ml ,調(diào)節(jié)pH為7.0-7.2，在120°C高溫蒸汽下滅菌20-30min;
(2)取谷氨酰胺2-6g/L與0.001-0.01NAD和10-20%的牛血清混合后與100°C下滅菌30min;
(3)將步驟(1)和步驟(2)所得滅菌后溶液混合既得。
[0010]本發(fā)明的有益效果是:該培養(yǎng)基通過補充各種微生物所需營養(yǎng)成分，并通過碳酸鈣有效控制培養(yǎng)基中pH，并通過谷氨酰胺提供碳源以及小部分氮，有利于副豬嗜血桿菌的快速成長。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0011]圖1為實施例3副豬嗜血桿菌生長曲線。
【具體實施方式】
[0012]下面結(jié)合附圖和具體實施例對本發(fā)明做進一步說明，以便本領(lǐng)域技術(shù)人員可以更好的了解本發(fā)明，但并不因此限制本發(fā)明。
[0013]實施例1
一種副豬嗜血桿菌高密度發(fā)酵培養(yǎng)基，由下述組分及配比，按照重量/體積計，谷氨酰胺2g/L、酵母膏15g/L、氯化鈉5 g/L、碳酸鈣0.01g/L、硫酸鎂0.01g/L、胰蛋白胨lg/L、磷酸氫二鉀0.5g/L，按體積比計:0.001NAD和10%的牛血清，余量為水，滅菌前培養(yǎng)基的PH為
7.0。
[0014]實施例2
一種副豬嗜血桿菌高密度發(fā)酵培養(yǎng)基，由下述組分及配比，按照重量/體積計，谷氨酰6g/L、酵母膏35 g/L、氯化鈉10 g/L、碳酸鈣0.05 g/L、硫酸鎂0.05 g/L、胰蛋白胨10g/L、磷酸氫二鉀10 g/L,按體積比計:0.01NAD和20%的牛血清，余量為水，滅菌前培養(yǎng)基的PH為 7.2。
[0015]實施例3
培養(yǎng)基由下述組分及配比，按照重量/體積計，谷氨酰胺3-5g/L、酵母膏20-30 g/L、氯化鈉6-8 g/L、碳酸鈣0.01-0.02 g/L、硫酸鎂0.01-0.02 g/L、胰蛋白胨2_8g/L、磷酸氫二鉀1.3-8.7 g/L，按體積比計:0.005-0.008%NAD和12-18%的牛血清，余量為水，滅菌前培養(yǎng)基的PH為7.0。
[0016]實施例4
一種副豬嗜血桿菌高密度發(fā)酵培養(yǎng)基，由下述組分及配比，按照重量/體積計，谷氨酰胺3g/L、酵母膏20 g/L、氯化鈉6 8/1、碳酸鈣0.028/1、硫酸鎂0.02 g/L、胰蛋白胨3g/L、磷酸氫二鉀2.35 g/L,·按體積比計:0.006NAD和13%的牛血清，余量為水，滅菌前培養(yǎng)基的PH 為 7.0。
[0017]實施例5
一種副豬嗜血桿菌高密度發(fā)酵培養(yǎng)基，由下述組分及配比，按照重量/體積計，谷氨酰胺4g/L、酵母膏30 g/L、氯化鈉8 8/1、碳酸鈣0.018/1、硫酸鎂0.02 g/L、胰蛋白胨8g/L、磷酸氫二鉀8.7 g/L，按體積比計:0.008NAD和18%的牛血清，余量為水，滅菌前培養(yǎng)基的PH為 7.2。
[0018]副豬嗜血桿菌3L發(fā)酵罐實驗，并用TSB培養(yǎng)基對比。
【權(quán)利要求】
1.一種副豬嗜血桿菌高密度發(fā)酵培養(yǎng)基，由下述組分及配比，按照重量/體積計，谷氨酰胺 2-6g/L、酵母膏 15-35 g/L、氯化鈉 5-10 g/L、碳酸鈣 0.01-0.05 g/L、硫酸鎂 0.01-0.05g/L、胰蛋白胨l-10g/L、磷酸氫二鉀0.5-10 g/L，按體積比計:0.001-0.01NAD和10-20%的牛血清，余量為水，滅菌前培養(yǎng)基的PH為7.0-7.2。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種副豬嗜血桿菌高密度發(fā)酵培養(yǎng)基，其特征在于:所述培養(yǎng)基由下述組分及配比，按照重量/體積計，谷氨酰胺3-5g/L、酵母膏20-30 g/L、氯化鈉6-8 g/L、碳酸鈣0.01-0.02 g/L、硫酸鎂0.01-0.02 g/L、胰蛋白胨2_8g/L、磷酸氫二鉀1.3-8.7 g/L,按體積比計:0.005-0.008%NAD和12-18%的牛血清，余量為水，滅菌前培養(yǎng)基的 PH 為 7.0-7.2。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種副豬嗜血桿菌高密度發(fā)酵培養(yǎng)基，其特征在于:所述培養(yǎng)基由下述組分及配比，按照重量/體積計，谷氨酰胺4g/L、酵母膏25 g/L、氯化鈉7g/L、碳酸鈣0.015 g/L、硫酸鎂0.015g/L、胰蛋白胨5g/L、磷酸氫二鉀5.5g/L，按體積比計:0.006%NAD和16%的牛血清，余量為水，滅菌前培養(yǎng)基的PH為7.0-7.2。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種副豬嗜血桿菌高密度發(fā)酵培養(yǎng)基的制備方法，包括如下步驟: (1)取酵母膏15-35 g/L、氯化鈉 5-10 g/L、碳酸鈣 0.01-0.05 g/L、硫酸鎂 0.01-0.05g/L、胰蛋白胨l-10g/L、磷酸氫二鉀0.5-10 g/L用蒸懼水定容至1000ml ,調(diào)節(jié)pH為`7.0-7.2，在120°C高溫蒸汽下滅菌20-30min; (2)取谷氨酰胺2-6g/L與0.001-0.01NAD和10-20%的牛血清混合后與100°C下滅菌30min;` (3)將步驟(1)和步驟(2)所得滅菌后溶液混合既得。
【文檔編號】C12R1/21GK103667160SQ201310742743
【公開日】2014年3月26日 申請日期:2013年12月30日 優(yōu)先權(quán)日:2013年12月30日
【發(fā)明者】陳申秒, 徐海軍, 馬景霞, 吳雪莉, 王楠 申請人:山東濱州博萊威生物技術(shù)有限公司