專利名稱：一種蘇云金芽胞桿菌糖苷發(fā)酵培養(yǎng)基的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及一種微生物培養(yǎng)基，具體涉及一種蘇云金芽胞桿菌糖苷發(fā)酵培養(yǎng)基，屬于生物農藥技術領域。
背景技術：
隨著化學農藥副作用的日益顯著，采用微生物農藥途徑綜合治理病蟲害越來越受到人們的重視。蘇云金芽胞桿菌{Bacillus是一種革蘭氏陽性細菌,其主要特性在于生長形成芽胞的過程中在胞囊內同時伴隨形成殺蟲晶體蛋白(InsecticidalCrystal Proteins, ICPs),該晶體蛋白作為毒殺昆蟲的主要活性物 質。由于Bt殺蟲劑對鱗翅目、雙翅目、膜翅目等多種昆蟲及動植物寄生線蟲有較強的毒殺作用，且具有對人和家畜無毒、不污染環(huán)境、不易產生抗藥性等優(yōu)點，因而在全球農、林、衛(wèi)生害蟲防治中被廣泛應用。目前蘇云金芽胞桿菌的發(fā)酵主要考慮從常見的碳源、氮源、礦物離子等的配比上優(yōu)化配方，在對產量的提高上仍有局限。因此，如何在優(yōu)化碳氮源培養(yǎng)基的基礎上進一步提高發(fā)酵產量是Bt發(fā)酵的研究熱點。苷類(glycosides)是糖或糖的衍生物與另一非糖物質通過糖的端基碳原子連接而成的一類化合物，又稱為配糖體，具有廣泛的生物活性。熊果苷屬于葡萄糖苷(Glucoside)，是一類糖苷類化合物，經水解產生葡萄糖和苷元。熊果苷是源于綠色植物的天然活性物質，具有很強的滲透作用，能迅速滲入細胞，加速黑色素的分解與排泄，而對細胞不產生毒害性、刺激性、致敏性等副作用，因而應用于高級美白化妝品，同時它能迅速修復受損細胞，使細胞愈合快，迅速消除紅腫，因而被用于作為新型燒燙傷藥的主要成分；透明質酸鈉是一種大分子多糖，其獨特的分子結構和理化性質具有多種重要的生理功能，如調節(jié)通透性，調節(jié)蛋白質、水電解質擴散及運轉，促進創(chuàng)傷愈合，并有特殊的保水作用，對細胞和細胞器起潤滑與滋養(yǎng)作用，同時提供細胞代謝的微環(huán)境；山梨醇是一種用途廣泛的化工原料，在食品、日化、醫(yī)藥等行業(yè)都有極為廣泛的應用，有一定的生理活性，能防止類胡蘿卜素、脂肪及蛋白質等變性。Bt在發(fā)酵后期存在營養(yǎng)受限和次級代謝產物等負面影響，導致生長受抑制。因此，利用這些組分快速滲透、防氧化、調節(jié)物質轉運和細胞修復等作用，開發(fā)可在原有基礎培養(yǎng)基的發(fā)酵產量上進一步提高Bt產量的發(fā)酵體系具有實際研究意義。

發(fā)明內容
本發(fā)明的目的在于提供一種蘇云金芽胞桿菌糖苷發(fā)酵培養(yǎng)基，提高蘇云金芽胞桿菌的發(fā)酵產量。本發(fā)明目的通過以下方法實現
本發(fā)明的一種蘇云金芽胞桿菌糖苷發(fā)酵培養(yǎng)基，其特征在于由LB、α -熊果苷、透明質酸鈉和山梨醇組成，所述α-熊果苷、透明質酸鈉和山梨醇的含量分別為5. O -35.0 g、0.2-1.2 g、3.0 -21.0 g。α-熊果苷、透明質酸鈉、山梨醇、胰蛋白胨、酵母粉、氯化鈉為固體，化學純。所述LB為Luria-Bertani培養(yǎng)基,配方為胰蛋白胨10.0 g、酵母粉5.0 g、氯化鈉 10. O g，水至 I. O L, pH 7. 0-7. 2。將上述蘇云金芽胞桿菌糖苷發(fā)酵培養(yǎng)基滅菌后接入蘇云金芽胞桿菌營養(yǎng)期細胞，接種量1.0%-2. 0% (v/v)，培養(yǎng)溫度28-30°C，轉速120-150 rpm，發(fā)酵時間10 -15 h，即可發(fā)酵成蘇云金芽胞桿菌液態(tài)懸浮劑。本發(fā)明的技術原理及其優(yōu)點是該發(fā)酵培養(yǎng)基組分中α -熊果苷的糖苷類結構可分解生成葡萄糖和苷元，在蘇云金芽胞桿菌培養(yǎng)中作為代謝補給營養(yǎng)成分，并且α -熊果苷具有細胞修復作用，促進蘇云金芽胞桿菌生長和細胞保護；利用透明質酸鈉調節(jié)蘇云金芽胞桿菌細胞膜通透性，調節(jié)蛋白質、水電解質擴散和運轉，并與山梨醇共同提供蘇云金芽胞桿菌細胞代謝的微環(huán)境。因此，與使用基礎培養(yǎng)基發(fā)酵制成的蘇云金芽胞桿菌液體產品制劑的含菌量相比，本發(fā)明的液態(tài)培養(yǎng)基發(fā)酵制成的蘇云金芽胞桿菌液體制劑中含菌量顯著增多，同時產品在形態(tài)和使用上無明顯差異。
具體實施例方式下面結合實施例對本發(fā)明做進一步的闡述?！け景l(fā)明的蘇云金芽胞桿菌糖苷發(fā)酵培養(yǎng)基由LB、α-熊果苷、透明質酸鈉和山梨醇組成，各原料配比試驗結果如表I所示。根據單組分對蘇云金芽胞桿菌發(fā)酵的影響，分別測定10組試驗產品的含菌量。表I蘇云金芽胞桿菌糖苷發(fā)酵培養(yǎng)基及發(fā)酵效果
權利要求
1.一種蘇云金芽胞桿菌糖苷發(fā)酵培養(yǎng)基，其特征在于由LB、α -熊果苷、透明質酸鈉和山梨醇組成，所述α-熊果苷、透明質酸鈉和山梨醇的含量分別為5.0 -35.0 g、0.2 -1.2g>3. O -21.0 g;LB為Luria-Bertani培養(yǎng)基，配方為胰蛋白胨10.0 g、酵母粉5.0 g、氯化鈉 10.0 8，水至1.0 L，pH 7. 0-7. 2。
2.根據權利要求I所述的一種蘇云金芽胞桿菌液態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)基，其特征在于所述α-熊果苷、透明質酸鈉和山梨醇的含量分別為10.0 g、0. 2 8和6.0 g。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種蘇云金芽胞桿菌糖苷發(fā)酵培養(yǎng)基，由LB、α-熊果苷、透明質酸鈉和山梨醇組成，所述α-熊果苷、透明質酸鈉和山梨醇的含量分別為5.0g-35.0g、0.2g-1.2g、3.0g-21.0g；LB配方為胰蛋白胨10.0g、酵母粉5.0g、氯化鈉10.0g，水至1.0L，pH7.0-7.2。由于α-熊果苷的糖苷類結構可分解生成葡萄糖和苷元，在蘇云金芽胞桿菌培養(yǎng)中作為代謝補給營養(yǎng)成分，并且α-熊果苷具有細胞修復作用，促進蘇云金芽胞桿菌生長和細胞保護；透明質酸鈉可調節(jié)蘇云金芽胞桿菌細胞膜通透性，調節(jié)蛋白質、水電解質擴散和運轉，并與山梨醇共同提供蘇云金芽胞桿菌細胞代謝的微環(huán)境。本發(fā)明的液態(tài)培養(yǎng)基發(fā)酵制成的蘇云金芽胞桿菌液體制劑中含菌量顯著增多，同時產品在形態(tài)和使用上無明顯差異。
文檔編號C12R1/07GK102796683SQ20121027803
公開日2012年11月28日 申請日期2012年8月7日 優(yōu)先權日2012年8月7日
發(fā)明者張靈玲, 許雷, 關雄, 張永嶸 申請人:福建農林大學