一種皺紋盤鮑高純度基因組dna樣本的提取方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種皺紋盤鮑高純度基因組DNA樣本的提取方法，其步驟如下：將取樣對(duì)象在含有1%的復(fù)方新諾明的海水中暫養(yǎng)24小時(shí)，使用過(guò)濾的清潔海水清洗皺紋盤鮑上足突出的肉刺部位，在該部位取2-4塊直徑約0.2cm的組織，放入酒精中長(zhǎng)期保存或者直接進(jìn)行DNA提取。該方法簡(jiǎn)單有效，在獲取大量DNA的同時(shí)避免外源基因的污染，實(shí)驗(yàn)顯示，該取樣方法不會(huì)對(duì)皺紋盤鮑造成傷害。
【專利說(shuō)明】一種皺紋盤鮑高純度基因組DNA樣本的提取方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種生物樣本的提取方法，具體涉及一種皺紋盤鮑高純度基因組DNA樣本的提取方法。
【背景技術(shù)】
[0002]皺紋盤鮑是名貴的海產(chǎn)貝類，被尊為“海產(chǎn)八珍”之首。因經(jīng)濟(jì)價(jià)值較高，我國(guó)皺紋盤鮑增養(yǎng)殖業(yè)不斷擴(kuò)大，養(yǎng)殖技術(shù)手段也在不斷進(jìn)步。近年來(lái)，分子標(biāo)記輔助育種技術(shù)也被引入皺紋盤鮑遺傳育種上。
[0003] 分子標(biāo)記輔助育種主要是通過(guò)標(biāo)記開發(fā)、關(guān)聯(lián)分析、基因等位等方式獲取代表優(yōu)良生產(chǎn)性狀的DNA序列標(biāo)記，以這些標(biāo)記為指針，快速篩選優(yōu)良親本，指導(dǎo)生產(chǎn)實(shí)踐。分子標(biāo)記分析的前提是獲取高純度的全基因組DNA，由于皺紋盤鮑的價(jià)格較高，且少量組織就能滿足一般實(shí)驗(yàn)分析的需求，因此殺死個(gè)體的取樣方式明顯浪費(fèi)。在繁育后代之前要完成親本個(gè)體的分子標(biāo)記特征分析，這是分子標(biāo)記輔助育種工作順利完成的先決條件。因此有必要采用活體組織取樣方式來(lái)獲取高純度的基因組DNA，進(jìn)而完成個(gè)體的分子標(biāo)記特征分析。
[0004]已有報(bào)道采用刮擦腹足等方式獲取皺紋盤鮑全基因組DNA樣本的方式，該方式雖然不對(duì)皺紋盤鮑個(gè)體造成傷害，但是該方式獲取的樣本量較少，且容易產(chǎn)生外源基因的干擾。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]為解決目前在提取皺紋盤鮑高純度基因組DNA樣本時(shí)樣本量少、且容易受到外源基因干擾的技術(shù)問(wèn)題，本發(fā)明提供一種微創(chuàng)條件下的皺紋盤鮑活體組織DNA樣本的獲取方法。
[0006]為實(shí)現(xiàn)上述技術(shù)目的，本發(fā)明采用的技術(shù)方案為:
一種皺紋盤鮑高純度基因組DNA樣本的提取方法，其特征在于，該提取方法的步驟為:將取樣皺紋盤鮑在含有1-2%的復(fù)方新諾明的12-16°C過(guò)濾海水中培育24小時(shí)，期間不投喂任何餌料，暫養(yǎng)結(jié)束后，使用清潔的海水清洗皺紋盤鮑上足突出的肉刺部位3-4遍，沖洗掉該部位的外源附著物，之后用消毒剪在上足突出的肉刺部位剪取若干塊直徑約0.1-0.3cm的肉刺組織作為DNA提取樣本；取樣后，采用IOppm的土霉素對(duì)皺紋盤鮑受傷部位進(jìn)行擦拭，然后將取樣后的皺紋盤鮑放入前述的暫養(yǎng)海水中，再次暫養(yǎng)24小時(shí)，期間不投喂任何餌料，暫養(yǎng)結(jié)束后將取樣對(duì)象進(jìn)行常規(guī)養(yǎng)殖；所取得的DNA提取樣本可以直接進(jìn)行提取基因組DNA操作，或者將樣本放入80%的酒精中固定，24小時(shí)后將保存液換成純酒精，進(jìn)行長(zhǎng)期保存。
[0007]上述用于對(duì)皺紋盤鮑上足突出肉刺部位清洗的海水經(jīng)過(guò)0.2 μ m GF/F過(guò)濾。
[0008]本方法的優(yōu)點(diǎn)是:在微創(chuàng)條件下完成皺紋盤鮑高純度基因組DNA樣本的提取，基本不會(huì)對(duì)皺紋盤鮑造成傷害。該取樣方法可以避免外源基因的影響，保證樣本能夠提取出高純度的基因組DNA。取樣后，鮑個(gè)體可以繼續(xù)生長(zhǎng)發(fā)育，并且繁育子代?！揪唧w實(shí)施方式】
[0009]下面結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明做進(jìn)一步說(shuō)明。
[0010]實(shí)施例1
高純度皺紋盤鮑基因組DNA的微創(chuàng)提取步驟包括:首先對(duì)待取樣皺紋盤鮑進(jìn)行暫養(yǎng)處理，海水溫度12-16°C，水中含有1-2%復(fù)方新諾明，時(shí)間為24小時(shí)，暫養(yǎng)期間不投喂任何餌料，用以降低其新陳代謝速率并防止細(xì)菌感染。暫養(yǎng)結(jié)束后，將皺紋盤鮑取樣個(gè)體平放在實(shí)驗(yàn)臺(tái)上，用經(jīng)過(guò)GF/F (0.2 μ m)過(guò)濾后的海水進(jìn)行沖洗，尤其對(duì)皺紋盤鮑上足突出的肉刺部分反復(fù)沖洗3-4遍，然后用消毒的眼科剪在上足的前部及后部的左右兩側(cè)突出的肉刺部位各剪取一塊直徑約0.1-0.3cm的肉刺組織作為DNA提取樣本；剪取后，用IOppm的土霉素對(duì)4個(gè)剪取部位進(jìn)行消毒。取樣后的皺紋盤鮑再次放入前述的暫養(yǎng)海水中進(jìn)行暫養(yǎng)24小時(shí)，期間不投喂任何餌料。暫養(yǎng)結(jié)束后將取樣對(duì)象進(jìn)行常規(guī)養(yǎng)殖；所取得的DNA提取樣本可以直接進(jìn)行提取基因組DNA操作，或者將樣本放入80%的酒精中固定，24小時(shí)后將保存液換成純酒精，進(jìn)行長(zhǎng)期保存。
[0011]微創(chuàng)取樣后的皺紋盤鮑個(gè)體存活情況實(shí)驗(yàn)結(jié)果:
【權(quán)利要求】
1.一種皺紋盤鮑高純度基因組DNA樣本的提取方法，其特征在于，該提取方法的步驟為:將取樣皺紋盤鮑在含有1-2%的復(fù)方新諾明的12-16°C過(guò)濾海水中培育24小時(shí)，期間不投喂任何餌料，暫養(yǎng)結(jié)束后，使用清潔的海水清洗皺紋盤鮑上足突出的肉刺部位3-4遍，沖洗掉該部位的外源附著物，之后用消毒剪在上足突出的肉刺部位剪取若干塊直徑約0.1-0.3cm的肉刺組織作為DNA提取樣本；取樣后，采用IOppm的土霉素對(duì)皺紋盤鮑受傷部位進(jìn)行擦拭，然后將取樣后的皺紋盤鮑放入前述的暫養(yǎng)海水中，再次暫養(yǎng)24小時(shí)，期間不投喂任何餌料，暫養(yǎng)結(jié)束后將取樣對(duì)象進(jìn)行常規(guī)養(yǎng)殖；所取得的DNA提取樣本可以直接進(jìn)行提取基因組DNA操作，或者將樣本放入80%的酒精中固定，24小時(shí)后將保存液換成純酒精，進(jìn)行長(zhǎng)期保存。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種皺紋盤鮑高純度基因組DNA樣本的提取方法，其特征在于:所述用于對(duì)皺紋盤鮑上 足突出肉刺部位清洗的海水經(jīng)過(guò)0.2 μ m GF/F過(guò)濾。
【文檔編號(hào)】C12N15/10GK103540586SQ201310459147
【公開日】2014年1月29日 申請(qǐng)日期:2013年10月8日 優(yōu)先權(quán)日:2013年10月8日
【發(fā)明者】李加琦, 劉曉, 方建光, 常麗榮 申請(qǐng)人:威海長(zhǎng)青海洋科技股份有限公司