一種提高液體復合酶穩(wěn)定性的方法
【專利摘要】本發(fā)明屬于生物【技術(shù)領域】，具體提供了一種提高液體復合酶穩(wěn)定性的方法。該方法首先將69～72份酸性果膠酶與28～31份普魯蘭多糖（重量比）攪拌，然后再加入抗壞血酸鈉以及脫氫乙酸，繼續(xù)攪拌，得到酸性果膠酶混合液；然后將50-56份酸性蛋白酶與32-35份聚葡萄糖和12-15份海藻酸鈉（重量比）攪拌，然后再加入抗壞血酸鈉以及脫氫乙酸，繼續(xù)攪拌，得到酸性蛋白酶混合液；最后將酸性果膠酶混合液和酸性蛋白酶混合液按重量比為1：1進行混勻，立即在30-40r/min轉(zhuǎn)速下攪拌30-60min，得到終產(chǎn)品酸性果膠酶和酸性蛋白酶的液體復合酶。本發(fā)明提供的方法，可以使酸性果膠酶和酸性蛋白酶的液體復合酶在長期儲存時或者同時使用時各自的酶活力不受影響，降低成本。
【專利說明】一種提高液體復合酶穩(wěn)定性的方法
【技術(shù)領域】
[0001]本發(fā)明屬于生物【技術(shù)領域】，具體涉及一種提高液體復合酶穩(wěn)定性的方法。
【背景技術(shù)】
[0002]酸性蛋白酶是一種催化蛋白質(zhì)中肽鍵水解的酶類，而酸性果膠酶和酸性蛋白酶本質(zhì)上均為蛋白質(zhì)，所以將酸性果膠酶和酸性蛋白酶復合在一起時，酸性蛋白酶本身會發(fā)生自溶現(xiàn)象，同時酸性蛋白酶也會降解酸性果膠酶，造成酸性果膠酶和酸性蛋白酶的酶活力急速下降。酸性果膠酶和酸性蛋白酶的復合酶在25°C下保存14天，即可造成酸性果膠酶和酸性蛋白酶的平均酶活力損失在87%以上。
[0003]另外，酸性蛋白酶降解蛋白質(zhì)這一特性也造成了其使用過程中不能和酸性果膠酶同時使用，否則會很大程度上降低酸性果膠酶和酸性蛋白酶本身的應用效果。為了保證在使用過程中的應用效果，現(xiàn)行辦法是將酸性蛋白酶與酸性果膠酶分開儲存和使用，這就造成了儲存和運輸成本的增加，而且二者分開使用也造成了使用成本的增加。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明要解決的技術(shù)問題是克服現(xiàn)有技術(shù)的缺陷，提供一種提高液體復合酶穩(wěn)定性的方法。
[0005]為了解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明提供了如下的技術(shù)方案:
[0006]本發(fā)明一種提高液體復合酶穩(wěn)定性的方法，包括以下步驟:
[0007](I)將69~72份酸性果膠酶與28~31份普魯蘭多糖(重量比)在30_40r/min轉(zhuǎn)速下攪拌20-30min，然后再加入占酸性果膠酶和普魯蘭多糖總重量0.1%。的抗壞血酸鈉以及0.25%。的脫氫乙酸，繼續(xù)在30-40r/min轉(zhuǎn)速下攪拌30_60min，得到酸性果膠酶混合液；
[0008](2)將50-56份酸性蛋白酶與32_35份聚葡萄糖和12_15份海藻酸鈉(重量比)在30-40r/min轉(zhuǎn)速下攪拌20_30min,然后再加入占酸性蛋白酶、聚葡萄糖和海藻酸鈉總重量
0.1%。的抗壞血酸鈉以及0.25%。的脫氫乙酸，繼續(xù)在30-40r/min轉(zhuǎn)速下攪拌30_60min，得到酸性蛋白酶混合液；
[0009] (3)將步驟(I)所得酸性果膠酶混合液和步驟(2)所得酸性蛋白酶混合液按重量比為1:1進行混勻，立即在30-40r/min轉(zhuǎn)速下攪拌30_60min，得到終產(chǎn)品酸性果膠酶和酸性蛋白酶的液體復合酶。
[0010]優(yōu)選地，在步驟(I)中，所述酸性果膠酶為70份，所述普魯蘭多糖為30份。
[0011]優(yōu)選地，在步驟(2)中，所述酸性蛋白酶為53份，所述聚葡萄糖為33份，所述海藻酸鈉為14份。
[0012]當酸性果膠酶混合液中普魯蘭多糖含量達到14%以上時，普魯蘭多糖可與酸性果膠酶的蛋白質(zhì)分子形成完全可逆的三維空間結(jié)構(gòu)，使酸性果膠酶的蛋白質(zhì)分子得到抑制和鈍化，形成了酸性果膠酶的鈍化平衡體系，從而達到酸性果膠酶在此環(huán)境中暫時失去活性，從而保存酶活力的目的。[0013]在工業(yè)生產(chǎn)(例如釀造果汁、果酒)過程中，酸性果膠酶的添加量一般為反應底物的1-5%。，這樣就使普魯蘭多糖的含量遠遠小于14%，又因為之前形成的是完全可逆的三維空間結(jié)構(gòu)，因而當普魯蘭多糖的含量遠遠小于14%時，會完全釋放出酸性果膠酶，從而不會影響酸性果膠酶的應用效果。
[0014]酶參與催化降解作用的主要方式是通過酶分子的活性部位完成的，酶分子的活性部位被覆蓋包裹后，酶就會掩蔽其催化降解的能力。當酸性蛋白酶中海藻酸鈉含量超過6%時，酸性蛋白酶的活性部位就會被海藻酸鈉完全覆蓋包裹，從而使酸性蛋白酶暫時性失去催化降解作用。使用過程中致使海藻酸鈉含量小于6%時就會破壞海藻酸鈉覆蓋包裹作用，從而釋放出酸性蛋白酶的活性部位。這樣即達到了限制酸性蛋白酶的自溶和降解復合酶中其他酶的作用，又不會影響到使用效果。
[0015]聚葡萄糖是酸性蛋白酶的抑制鈍化劑，當聚葡萄糖含量超過16%時就會和酸性蛋白酶的蛋白質(zhì)分子形成穩(wěn)定結(jié)構(gòu)，從而保證酸性蛋白酶的穩(wěn)定性。使用過程中破壞聚葡萄糖和酸性蛋白酶形成的穩(wěn)定結(jié)構(gòu)就會使酸性蛋白酶完全釋放出來。
[0016]當復合酶溶液中添加0.1%。的抗壞血酸鈉時，可以降低復合酶中溶解氧對酶分子的氧化破壞。
[0017]復合酶溶液中添加0.25%。的脫氫乙酸，既可以調(diào)節(jié)復合酶溶液pH值，又可以達到防腐抑菌的作用。
[0018]本發(fā)明所達到的有益效果是:
[0019](1)采用本發(fā)明的方法，可以使液體復合酶中酸性果膠酶和酸性蛋白酶活力在25-35°C條件下6個月內(nèi)保持95%以上，可以使液體復合酶中酸性果膠酶和酸性蛋白酶活力在25-35°C條件下12個月內(nèi)保持在88%以上，并且使用過程中不會降低酸性果膠酶和酸性蛋白酶對果膠和蛋白質(zhì)的降解率。
[0020](2)在工業(yè)生產(chǎn)(例如釀造果汁、果酒)過程中，當同時使用酸性果膠酶和酸性蛋白酶時，可以有效地避免酸性蛋白酶降解酸性果膠酶，保證酸性果膠酶的酶活力不會受到影響。
【具體實施方式】
[0021]以下對本發(fā)明的優(yōu)選實施例進行說明，應當理解，此處所描述的優(yōu)選實施例僅用于說明和解釋本發(fā)明，并不用于限定本發(fā)明。
[0022]實施例1
[0023](I)將690kg酸性果膠酶與310kg普魯蘭多糖在30r/min轉(zhuǎn)速下攪拌20min,然后再加入0.1kg的抗壞血酸鈉和0.25kg的脫氫乙酸,繼續(xù)在30r/min轉(zhuǎn)速下攪拌30min。得到酸性果膠酶混合液。
[0024](2)將560kg酸性蛋白酶與320kg聚葡萄糖和120kg海藻酸鈉在30r/min轉(zhuǎn)速下攪拌20min,然后再加入0.1kg的抗壞血酸鈉和0.25kg的脫氫乙酸,繼續(xù)在30r/min轉(zhuǎn)速下攪拌30min。得到酸性蛋白酶混合液。
[0025](3)將(I)步所得酸性果膠酶混合液IOOOkg和(2)步所得酸性蛋白酶混合液IOOOkg進行混勻，即在30r/min轉(zhuǎn)速下攪拌30min。得到終產(chǎn)品酸性果膠酶和酸性蛋白酶的液體復合酶(標記為復合酶I號樣)。[0026]實施例2
[0027](I)將700kg酸性果膠酶與300kg普魯蘭多糖在40r/min轉(zhuǎn)速下攪拌30min，然后再加入0.1kg的抗壞血酸鈉和0.25kg的脫氫乙酸,繼續(xù)在40r/min轉(zhuǎn)速下攪拌60min。得到酸性果膠酶混合液。
[0028](2)將500kg酸性蛋白酶與350kg聚葡萄糖和150kg海藻酸鈉在40r/min轉(zhuǎn)速下攪拌30min,然后再加入0.1kg的抗壞血酸鈉和0.25kg的脫氫乙酸,繼續(xù)在40r/min轉(zhuǎn)速下攪拌60min。得到酸性蛋白酶混合液。
[0029](3)將(I)步所得酸性果膠酶混合液IOOOkg和(2)步所得酸性蛋白酶混合液IOOOkg進行混勻，即在40r/min轉(zhuǎn)速下攪拌60min。得到終產(chǎn)品酸性果膠酶和酸性蛋白酶的液體復合酶(標記為復合酶2號樣)。[0030]實施例3
[0031](I)將720kg酸性果膠酶與280kg普魯蘭多糖在40r/min轉(zhuǎn)速下攪拌30min，然后再加入0.1kg的抗壞血酸鈉和0.25kg的脫氫乙酸,繼續(xù)在40r/min轉(zhuǎn)速下攪拌60min。得到酸性果膠酶混合液。
[0032](2)將530kg酸性蛋白酶與330kg聚葡萄糖和140kg海藻酸鈉在30r/min轉(zhuǎn)速下攪拌20min,然后再加入0.1kg的抗壞血酸鈉和0.25kg的脫氫乙酸,繼續(xù)在30r/min轉(zhuǎn)速下攪拌30min。得到酸性蛋白酶混合液。
[0033](3)將(I)步所得酸性果膠酶混合液IOOOkg和(2)步所得酸性蛋白酶混合液IOOOkg進行混勻，即在40r/min轉(zhuǎn)速下攪拌60min。得到終產(chǎn)品酸性果膠酶和酸性蛋白酶的液體復合酶(標記為復合酶3號樣)。
[0034]實施例4
[0035](I)將690kg酸性果膠酶與310kg普魯蘭多糖在30r/min轉(zhuǎn)速下攪拌20min,然后再加入0.1kg的抗壞血酸鈉和0.25kg的脫氫乙酸,繼續(xù)在30r/min轉(zhuǎn)速下攪拌30min。得到酸性果膠酶混合液。
[0036](2)將500kg酸性蛋白酶與350kg聚葡萄糖和150kg海藻酸鈉在40r/min轉(zhuǎn)速下攪拌30min,然后再加入0.1kg的抗壞血酸鈉和0.25kg的脫氫乙酸,繼續(xù)在40r/min轉(zhuǎn)速下攪拌60min。得到酸性蛋白酶混合液。
[0037](3)將(I)步所得酸性果膠酶混合液IOOOkg和(2)步所得酸性蛋白酶混合液IOOOkg進行混勻，即在40r/min轉(zhuǎn)速下攪拌60min。得到終產(chǎn)品酸性果膠酶和酸性蛋白酶的液體復合酶(標記為復合酶4號樣)
[0038]對比例I
[0039](I)將IOOkg酸性果膠酶和IOOkg酸性蛋白酶在40r/min轉(zhuǎn)速下攪拌30min,得到酸性果膠酶和酸性蛋白酶的液體復合酶(標記為對比例I復合酶樣)。
[0040]對比例2
[0041](I)在IOOml各含5%果膠和蛋白質(zhì)溶液中添加0.5ml酸性果膠酶,常溫下處理30mino
[0042](2)將步驟(I)處理后液體中再添加0.5ml酸性蛋白酶，常溫下處理30min，檢測剩余果膠和蛋白質(zhì)的量。
[0043]實施例與對比例檢測結(jié)果如下:[0044](I)將實施例與對比例I制得的復合酶分別取樣保存在25°C和35°C條件下，每隔一段時間對酶活力進行檢測。
[0045]表1在25°C條件下復合酶的酶活力保存率
[0046]
【權(quán)利要求】
1.一種提高液體復合酶穩(wěn)定性的方法，其特征在于，包括以下步驟: (1)將69~72份酸性果膠酶與28~31份普魯蘭多糖(重量比)在30_40r/min轉(zhuǎn)速下攪拌20-30min，然后再加入占酸性果膠酶和普魯蘭多糖總重量0.1%。的抗壞血酸鈉以及0.25%。的脫氫乙酸，繼續(xù)在30-40r/min轉(zhuǎn)速下攪拌30_60min，得到酸性果膠酶混合液； (2)將50-56份酸性蛋白酶與32-35份聚葡萄糖和12-15份海藻酸鈉(重量比)在30-40r/min轉(zhuǎn)速下攪拌20_30min,然后再加入占酸性蛋白酶、聚葡萄糖和海藻酸鈉總重量0.1%。的抗壞血酸鈉以及0.25%。的脫氫乙酸，繼續(xù)在30-40r/min轉(zhuǎn)速下攪拌30_60min，得到酸性蛋白酶混合液； (3)將步驟(I)所得酸性果膠酶混合液和步驟(2)所得酸性蛋白酶混合液按重量比為1:1進行混勻，立即在30-40r/min轉(zhuǎn)速下攪拌30_60min，得到終產(chǎn)品酸性果膠酶和酸性蛋白酶的液體復合酶。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種提高液體復合酶穩(wěn)定性的方法，其特征在于，在步驟(I)中，所述酸性果膠酶為70份，所述普魯蘭多糖為30份。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種提高液體復合酶穩(wěn)定性的方法，其特征在于，在步驟(2)中，所述酸性蛋白酶為53份，所述聚葡萄糖為33份，所述海藻酸鈉為14份。
【文檔編號】C12N9/26GK103468666SQ201310438814
【公開日】2013年12月25日 申請日期:2013年9月24日 優(yōu)先權(quán)日:2013年9月24日
【發(fā)明者】劉寶龍, 吳鵬, 宋宵因, 趙路, 趙巖 申請人:蘇州昆藍生物科技有限公司