類(lèi)胚體形成用培養(yǎng)容器的制造方法
【專(zhuān)利摘要】根據(jù)本發(fā)明，提供能夠以更高的水平高效率地形成質(zhì)量高的類(lèi)胚體的類(lèi)胚體形成用培養(yǎng)容器。本發(fā)明涉及一種類(lèi)胚體形成用培養(yǎng)容器，其具有2個(gè)以上的孔，其特征在于：上述孔具有垂直方向的截面為大致U字形狀的底部和大致圓形的開(kāi)口部，并且，上述底部?jī)?nèi)表面的至少曲面部分為細(xì)胞低粘附性的，并且上述底部?jī)?nèi)表面的曲率半徑（R'）為1.0mm以上3.5mm以下，上述細(xì)胞低粘附性的表面通過(guò)使用水溶性樹(shù)脂的細(xì)胞低粘附化處理或細(xì)胞非粘附化處理而形成。
【專(zhuān)利說(shuō)明】類(lèi)胚體形成用培養(yǎng)容器
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001 ] 本發(fā)明涉及類(lèi)胚體形成用培養(yǎng)容器。
[0002]本申請(qǐng)基于2011年3月30日在日本申請(qǐng)的特愿2011-76621號(hào)主張優(yōu)先權(quán)，在此援用其內(nèi)容。
【背景技術(shù)】
[0003]胚胎干細(xì)胞(embryonic stem cell:ES細(xì)胞)是通過(guò)將胚泡的內(nèi)部細(xì)胞塊接種在飼養(yǎng)細(xì)胞上、并添加白血病抑制因子(leukemia inhibitory factor:LIF)進(jìn)行培養(yǎng)而得到的。
[0004]維持未分化狀態(tài)無(wú)限增殖的ES細(xì)胞具有分化成各種各樣的組織細(xì)胞的多能性，因此，在使用通過(guò)分化得到的組織的移植治療、所謂的再生醫(yī)療的領(lǐng)域中成為各種研究的對(duì)象。
[0005]為了將ES細(xì)胞分化誘導(dǎo)成各種各樣的組織，最廣泛使用的是形成被稱(chēng)為類(lèi)胚體(embryoid body:EB體)的偽胚胎的方法，EB體的形成是在體外(in vitro)的ES細(xì)胞的分化誘導(dǎo)的第一步。另外，EB體的 形成需要將ES細(xì)胞以不粘附于培養(yǎng)容器的浮游狀態(tài)培養(yǎng)，在使用通常的培養(yǎng)容器的粘附培養(yǎng)中，不形成EB體，進(jìn)行粘附、伸展，開(kāi)始非特異性的分化。
[0006]為了以浮游狀態(tài)培養(yǎng)ES細(xì)胞,最廣泛使用的是被稱(chēng)為懸滴培養(yǎng)(hanging dropculture)的方法。懸滴培養(yǎng)正如其名，是在以水滴狀垂下的培養(yǎng)液中培養(yǎng)細(xì)胞的方法。即，向多孔板的孔中添加礦物油和緩沖液，在多孔板的蓋的與各孔上重疊的位置，點(diǎn)上包含ES細(xì)胞的培養(yǎng)懸濁液使其成為液滴，蓋上多孔板進(jìn)行培養(yǎng)。但是，在懸滴法中，存在EB體形成的成功率低、不能進(jìn)行顯微鏡觀察、一次能夠形成的EB體的量少、操作繁瑣等問(wèn)題。
[0007]在專(zhuān)利文獻(xiàn)I中，為了解決這些問(wèn)題，提出了類(lèi)胚體形成用培養(yǎng)容器的制造方法、通過(guò)上述制造方法制造的類(lèi)胚體形成用培養(yǎng)容器、和該容器的用途，其中，上述類(lèi)胚體形成用培養(yǎng)容器的制造方法的特征在于，包括:使水溶性樹(shù)脂覆蓋在培養(yǎng)容器內(nèi)表面形成水溶性覆蓋層的水溶性樹(shù)脂覆蓋層形成工序；和在上述工序后，使上述水溶性覆蓋層固化而改性為非水溶性固化膜層的非水溶性固化膜改性工序。
[0008]現(xiàn)有技術(shù)文獻(xiàn)
[0009]專(zhuān)利文獻(xiàn)
[0010]專(zhuān)利文獻(xiàn)1:日本特開(kāi)2008-178367號(hào)公報(bào)。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0011]發(fā)明要解決的技術(shù)問(wèn)題
[0012]然而，專(zhuān)利文獻(xiàn)I中記載的技術(shù)，從由ES細(xì)胞高效率地形成質(zhì)量高的類(lèi)胚體的觀點(diǎn)出發(fā)，仍有改善的余地。
[0013]因此，本發(fā)明的目的是提供能夠以更高的水平高效率地形成質(zhì)量高的類(lèi)胚體的類(lèi)胚體形成用培養(yǎng)容器。
[0014]用于解決技術(shù)問(wèn)題的手段
[0015]因此，本發(fā)明的發(fā)明人潛心研究，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，在具有2個(gè)以上的孔的培養(yǎng)容器中，通過(guò)將各孔的內(nèi)表面使用水溶性樹(shù)脂進(jìn)行細(xì)胞低粘附化處理或細(xì)胞非粘附化處理、并且形成為規(guī)定的形狀，能夠生成細(xì)胞凝集塊溶劑，其結(jié)果能夠?qū)崿F(xiàn)上述目的，從而完成了本發(fā)明。
[0016]S卩，上述目的可通過(guò)下述(I)?(4)中記載的本發(fā)明來(lái)實(shí)現(xiàn)。
[0017](I) 一種類(lèi)胚體形成用培養(yǎng)容器，其具有2個(gè)以上的孔，其特征在于:
[0018]上述孔具有垂直方向的截面為大致U字形狀的底部和大致圓形的開(kāi)口部，并且，上述底部?jī)?nèi)表面的至少曲面部分為細(xì)胞低粘附性的，并且上述底部?jī)?nèi)表面的曲率半徑(R’ )為1.0mm以上3.5mm以下，
[0019]上述細(xì)胞低粘附性的表面通過(guò)使用水溶性樹(shù)脂的細(xì)胞低粘附化處理或細(xì)胞非粘附化處理而形成。
[0020](2)如(I)中記載的類(lèi)胚體形成用培養(yǎng)容器，其特征在于，上述水溶性樹(shù)脂為由下述式(Ia)或(Ib)表示的化合物: [0021]
【權(quán)利要求】
1.一種類(lèi)胚體形成用培養(yǎng)容器，其具有2個(gè)以上的孔，其特征在于: 所述孔具有垂直方向的截面為大致U字形狀的底部和大致圓形的開(kāi)口部，并且，所述底部?jī)?nèi)表面的至少曲面部分為細(xì)胞低粘附性的，并且所述底部?jī)?nèi)表面的曲率半徑R’為1.0mm以上3.5mm以下， 所述細(xì)胞低粘附性的表面通過(guò)使用水溶性樹(shù)脂的細(xì)胞低粘附化處理或細(xì)胞非粘附化處理而形成。
2.如權(quán)利要求1所述的類(lèi)胚體形成用培養(yǎng)容器，其特征在于: 所述水溶性樹(shù)脂為由下述式(Ia)或(Ib)表示的化合物:
3.如權(quán)利要求1或2所述的類(lèi)胚體形成用培養(yǎng)容器，其特征在于: 在所述孔的最下部表面，內(nèi)設(shè)有至少一個(gè)具有細(xì)胞低粘附性的表面的凹陷。
4.如權(quán)利要求1?3中任一項(xiàng)所述的類(lèi)胚體形成用培養(yǎng)容器，其特征在于:所述各孔的內(nèi)表 面整體為細(xì)胞低粘附性的。
【文檔編號(hào)】C12M3/00GK103443264SQ201280014035
【公開(kāi)日】2013年12月11日 申請(qǐng)日期:2012年3月28日 優(yōu)先權(quán)日:2011年3月30日
【發(fā)明者】佐倉(cāng)武司, 塚田亮平 申請(qǐng)人:住友電木株式會(huì)社