一種土沉香的種胚苗莖段離體快速繁殖方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種土沉香的種胚苗莖段離體快速繁殖方法，包括如下步驟：將土沉香種子置于9010型旋風(fēng)式微型高速樣品粉碎機(jī)粉碎1min，重復(fù)3次，鏡檢；將鏡檢合格的土沉香種子用雙氧水原液液泡30-60min后，用無菌水沖洗，用無菌濾紙吸干水份，無菌條件下分離種胚并進(jìn)行培養(yǎng)，獲得無菌種胚苗；切取種胚苗莖段，誘導(dǎo)腋芽成苗，再以該成苗的莖段繼續(xù)增殖，10～12代擴(kuò)大繁殖莖段苗數(shù)量。本發(fā)明通過旋風(fēng)粉碎法進(jìn)行破壁，降低成本的同時(shí)，可以規(guī)?；\(yùn)作，通過雙氧水殺菌，促進(jìn)了種子的發(fā)芽，同時(shí)利用MS、IBA2.0mg/L、NAA0.2mg/L溶液，增強(qiáng)了生根的幾率，而椰殼基質(zhì)的添加，提高了成活率。
【專利說明】一種土沉香的種胚苗莖段離體快速繁殖方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種土沉香的種胚苗莖段離體快速繁殖方法。
【背景技術(shù)】
[0002]土沉香又名牙香樹、蜜香樹，為瑞香科常綠喬木，漸危種。一般生于海拔400米以下，在海南可達(dá)1000米。多生于山地雨林或半常綠季雨林中，是中國(guó)特有而珍貴的藥用植物。近年(2013年)由于常被采取供藥用，損傷林木極為嚴(yán)重，僅有零星散生的殘存植株，為中國(guó)國(guó)家II級(jí)重點(diǎn)保護(hù)野生植物，因此研制一種土沉香快速繁殖方法迫在眉急。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0003]本發(fā)明的目的在于提供一種土沉香的種胚苗莖段離體快速繁殖方法，通過旋風(fēng)粉碎法進(jìn)行破壁，降低成本的同時(shí)，可以規(guī)模化運(yùn)作，通過雙氧水殺菌，促進(jìn)了種子的發(fā)芽，同時(shí)利用MS、IBA2.0mg/L、NAA0.2mg/L溶液，增強(qiáng)了生根的幾率，而椰殼基質(zhì)的添加，提高了成活率。
[0004]本發(fā)明的目的可以通過以下技術(shù)方案來實(shí)現(xiàn):
[0005]一種土沉香的種胚苗莖段離體快速繁殖方法，包括如下步驟:
[0006]S1、將土沉香種子置于9010型旋風(fēng)式微型高速樣品粉碎機(jī)粉碎lmin，重復(fù)3次，鏡檢；
[0007]S2、將鏡檢合格的土沉香種子用雙氧水原液液泡30_60min后，用無菌水沖洗，用無菌濾紙吸干水份，無菌條件下分離種胚并進(jìn)行培養(yǎng)，獲得無菌種胚苗；
[0008]S3、切取種胚苗莖段，誘導(dǎo)腋芽成苗，再以該成苗的莖段繼續(xù)增殖，10~12代擴(kuò)大
繁殖莖段苗數(shù)量；
[0009]S4、利用MS、IBA2.0mg/L、NAA0.2mg/L溶液調(diào)節(jié)土沉香莖段苗的生理與誘導(dǎo)生根，以獲得生根苗；
[0010]S5、生根苗先后經(jīng)溫室煉苗、室外移栽，得到成活的土沉香苗。
[0011]S2步驟中所述種胚培養(yǎng)是將種胚接種于1/2MS+NAA5.0mg/L培養(yǎng)基，培養(yǎng)2天后移至1/2MS+體積百分比10~15%椰子水的培養(yǎng)基上培養(yǎng)，其中培養(yǎng)條件為:白天光照8~15h，光強(qiáng) 2000 ~25001ux，溫度 25±1°C。
[0012]S3步驟中所述誘導(dǎo)腋芽成苗是將長(zhǎng)成的種胚苗莖段按照2個(gè)節(jié)剪成一段，添加有椰殼基質(zhì)的1/2MS+NAA5.0mg/L培養(yǎng)基的培養(yǎng)基上培養(yǎng)，培養(yǎng)條件為:光照3000Lux、光照時(shí)間 12 ~14h、溫度 25±1°C。
[0013]S5步驟中所述溫室煉苗是將生根苗置于自然光下鍛煉，光照由遮光90%逐步增強(qiáng)，15天時(shí)增強(qiáng)至遮光60 %，此時(shí)往培養(yǎng)基上加入自來水，24h后取出生根苗移栽。
[0014] 本發(fā)明在土沉香組織培養(yǎng)技術(shù)的研究過程中，通過以少量土沉香種子為材料，無菌條件下分離種胚培養(yǎng)，獲得無菌種胚苗；然后切取土沉香種胚苗莖段，誘導(dǎo)腋芽成苗，多次繼代擴(kuò)大繁殖種苗數(shù)量；通過調(diào)節(jié)土沉香的生理狀態(tài)，促進(jìn)土沉香莖段基部形成層的產(chǎn)生，促進(jìn)細(xì)胞分化，誘導(dǎo)生根，突破了土沉香組織培養(yǎng)瓶頸技術(shù)；通過栽培附生植物，提高了土沉香苗的移栽成活率,從而完成土沉香組織培養(yǎng)的全部生產(chǎn)技術(shù)路線。
【具體實(shí)施方式】
[0015]為了使本發(fā)明的目的及優(yōu)點(diǎn)更加清楚明白，以下結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明進(jìn)行進(jìn)一步詳細(xì)說明。應(yīng)當(dāng)理解，此處所描述的具體實(shí)施例僅僅用以解釋本發(fā)明，并不用于限定本發(fā)明。
[0016]實(shí)施例1
[0017]一種土沉香的種胚苗莖段離體快速繁殖方法，包括如下步驟:
[0018]S1、將土沉香種子置于9010型旋風(fēng)式微型高速樣品粉碎機(jī)粉碎lmin，重復(fù)3次，鏡檢；
[0019]S2、將鏡檢合格的土沉香種子用雙氧水原液液泡30min后，用無菌水沖洗，用無菌濾紙吸干水份，無菌條件下分離種胚，將種胚接種于1/2MS+NAA5.0mg/L培養(yǎng)基，培養(yǎng)2天后移至1/2MS+體積百分比12%椰子水的培養(yǎng)基上培養(yǎng)，其中培養(yǎng)條件為:白天光照10h，光強(qiáng)2000lux，溫度25°C，獲得無菌種胚苗；
[0020]S3、將長(zhǎng)成的種胚苗莖段按照2個(gè)節(jié)剪成一段，添加有椰殼基質(zhì)的1/2MS+NAA5.0mg/L培養(yǎng)基的培養(yǎng)基上培養(yǎng)，培養(yǎng)條件為:光照3000Lux、光照時(shí)間13h、溫度25°C，再以該成苗的莖段繼續(xù)增殖，10~12代擴(kuò)大繁殖莖段苗數(shù)量； [0021]S4、利用MS、IBA2.0mg/L、NAA0.2mg/L溶液調(diào)節(jié)土沉香莖段苗的生理與誘導(dǎo)生根，以獲得生根苗；
[0022]S5、生根苗將生根苗置于自然光下鍛煉，光照由遮光90%逐步增強(qiáng)，15天時(shí)增強(qiáng)至遮光60%，此時(shí)往培養(yǎng)基上加入自來水，24h后取出生根苗移栽置室外，得到成活的土沉香苗。
[0023]實(shí)施例2
[0024]一種土沉香的種胚苗莖段離體快速繁殖方法，包括如下步驟:
[0025]S1、將土沉香種子置于9010型旋風(fēng)式微型高速樣品粉碎機(jī)粉碎lmin，重復(fù)3次，鏡檢；
[0026]S2、將鏡檢合格的土沉香種子用雙氧水原液液泡45min后，用無菌水沖洗，用無菌濾紙吸干水份，無菌條件下分離種胚，將種胚接種于1/2MS+NAA5.0mg/L培養(yǎng)基，培養(yǎng)2天后移至1/2MS+體積百分比10%椰子水的培養(yǎng)基上培養(yǎng)，其中培養(yǎng)條件為:白天光照10h，光強(qiáng)2000lux，溫度24°C，獲得無菌種胚苗；
[0027]S3、將長(zhǎng)成的種胚苗莖段按照2個(gè)節(jié)剪成一段，添加有椰殼基質(zhì)的1/2MS+NAA5.0mg/L培養(yǎng)基的培養(yǎng)基上培養(yǎng)，培養(yǎng)條件為:光照3000Lux、光照時(shí)間13h、溫度24°C，再以該成苗的莖段繼續(xù)增殖，10代擴(kuò)大繁殖莖段苗數(shù)量；
[0028]S4、利用MS、IBA2.0mg/L、NAA0.2mg/L溶液調(diào)節(jié)土沉香莖段苗的生理與誘導(dǎo)生根，以獲得生根苗；
[0029]S5、生根苗將生根苗置于自然光下鍛煉，光照由遮光90%逐步增強(qiáng)，15天時(shí)增強(qiáng)至遮光60%，此時(shí)往培養(yǎng)基上加入自來水，24h后取出生根苗移栽置室外，得到成活的土沉香苗。[0030]以上所述僅是本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方式，應(yīng)當(dāng)指出，對(duì)于本【技術(shù)領(lǐng)域】的普通技術(shù)人員 來說，在不脫離本發(fā)明原理的前提下，還可以作出若干改進(jìn)和潤(rùn)飾，這些改進(jìn)和潤(rùn)飾也應(yīng)視為本發(fā)明的保護(hù)范圍。
【權(quán)利要求】
1.一種土沉香的種胚苗莖段離體快速繁殖方法，其特征在于，包括如下步驟: 51、將土沉香種子置于9010型旋風(fēng)式微型高速樣品粉碎機(jī)粉碎lmin，重復(fù)3次，鏡檢； 52、將鏡檢合格的土沉香種子用雙氧水原液液泡30-60min后，用無菌水沖洗，用無菌濾紙吸干水份，無菌條件下分離種胚并進(jìn)行培養(yǎng)，獲得無菌種胚苗； 53、切取種胚苗莖段，誘導(dǎo)腋芽成苗，再以該成苗的莖段繼續(xù)增殖，10~12代擴(kuò)大繁殖莖段苗數(shù)量； 54、利用MS、IBA2.0mg/L, NAA0.2mg/L溶液調(diào)節(jié)土沉香莖段苗的生理與誘導(dǎo)生根，以獲得生根苗； 55、生根苗先后經(jīng)溫室煉苗、室外移栽，得到成活的土沉香苗。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種土沉香的種胚苗莖段離體快速繁殖方法，其特征在于，S2步驟中所述種胚培養(yǎng)是將種胚接種于1/2MS+NAA5.0mg/L培養(yǎng)基，培養(yǎng)2天后移至1/2MS+體積百分比10~15%椰子水的培養(yǎng)基上培養(yǎng)，其中培養(yǎng)條件為:白天光照8~15h，光強(qiáng) 2000 ~25001ux，溫度 25±1°C。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種土沉香的種胚苗莖段離體快速繁殖方法，其特征在于，S3步驟中所述誘導(dǎo)腋芽成苗是將長(zhǎng)成的種胚苗莖段按照2個(gè)節(jié)剪成一段，添加有椰殼基質(zhì)的1/2MS+NAA5.0mg/L培養(yǎng)基的培養(yǎng)基上培養(yǎng)，培養(yǎng)條件為:光照3000Lux、光照時(shí)間12~14h、溫度 25 ± I。。。
4.根據(jù)權(quán)利要求 1所述的一種土沉香的種胚苗莖段離體快速繁殖方法，其特征在于，S5步驟中所述溫室煉苗是將生根苗置于自然光下鍛煉，光照由遮光90%逐步增強(qiáng)，15天時(shí)增強(qiáng)至遮光60%，此時(shí)往培養(yǎng)基上加入自來水，24h后取出生根苗移栽。
【文檔編號(hào)】A01H4/00GK104026007SQ201410207202
【公開日】2014年9月10日 申請(qǐng)日期:2014年5月16日 優(yōu)先權(quán)日:2014年5月16日
【發(fā)明者】張幫其, 韋盛軍, 周建民, 潘建山 申請(qǐng)人:廣西襟聯(lián)農(nóng)林科技有限公司