專利名稱：一株海洋真菌產(chǎn)黃青霉及其在制備抗腫瘤藥物中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一株具有抗腫瘤活性的海洋真菌——產(chǎn)黃青霉(Penicilliumchrysogenum) MNP07010101 及其應(yīng)用。
背景技術(shù)：
海洋真菌是海洋微生物的一個重要分支，由于它們獨特的生活環(huán)境以及生態(tài)系統(tǒng)，不僅確保其在極端環(huán)境中生存，而且提供了在陸生微生物中沒有的代謝產(chǎn)物的生產(chǎn)能力，因而是多種多樣新穎化合物和藥物的極好資源。海洋來源真菌產(chǎn)生的代謝產(chǎn)物主要為生物堿、肽類、聚酮類、留體和萜類等類型的化合物，其中很多具有顯著的抗腫瘤、抗細(xì)菌、抗真菌、抗蟲、抑制微藻生長等生物活性，在醫(yī)藥與農(nóng)藥研發(fā)、環(huán)境保護(hù)等領(lǐng)域具有重要的基礎(chǔ)研究意義，也顯示了從海洋微生物中尋找藥理活性物質(zhì)的光輝前景。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明目的是提供一株具有抗腫瘤活性的海洋真菌菌株——產(chǎn)黃青霉(Penicillium chrysogenum) MNP07010101,及其在制備抗腫瘤藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明采用的技術(shù)方案是:一株具有抗腫瘤活性的海洋真菌-產(chǎn)黃青霉(Penicillium chrysogenum)
MNP07010101，保藏于中國典型培養(yǎng)物保藏中心，地址:中國，武漢，武漢大學(xué)，郵編430072，保藏編號:CCTCC No:M 2012317，保藏日期2012年8月28日。該菌株的菌落特征如下:涂布或劃線接種于PDA平板培養(yǎng)基上生長迅速，28°C培養(yǎng)48 h后，長至直徑21-25mm，邊緣菌絲體白色，質(zhì)地絨狀，藍(lán)綠色，菌落反面成淺黃褐色；該菌株的菌體生長特征如下:在液體培養(yǎng)基中，28°C培養(yǎng)48 h后呈顆粒狀貼壁生長。本發(fā)明所述產(chǎn)黃青霉(Penicillium chrysogenum) MNP07010101由浙江省東海海域采集的海水中分離和篩選得到。菌株的篩選純化方法為:將采集的海水運(yùn)用稀釋涂布法涂于平板培養(yǎng)基上，28°C培養(yǎng)至菌落數(shù)量不再增加，挑取單菌落至斜面培養(yǎng)基上。28°C培養(yǎng)2d，以菌株形態(tài)特征區(qū)別進(jìn)行挑選，即得該菌株，并對該菌株進(jìn)行菌種鑒定。所述的平板培養(yǎng)基和斜面培養(yǎng)基的組成相同，組成為:土豆15(T350g/L，葡萄糖10 30g/L，瓊脂15 35g/L，溶劑為水，ρΗ7.2 8.0。本發(fā)明經(jīng)篩選獲得的產(chǎn)黃青霉(Penicillium chrysogenum) MNP07010101,涂布或劃線接種在平板培養(yǎng)基上生長迅速，28°C培養(yǎng)48 h后，長至直徑21-25mm，邊緣菌絲體白色，質(zhì)地絨狀，藍(lán)綠色，菌落反面成淺黃褐色。將該菌株的16sRNA部分核苷酸序列與美國國立生物信息中心(National Centerfor Biotechnology Information USA, NCBI)的基因庫中的微生物16sRNA序列比對,確認(rèn)其為產(chǎn)黃青霉(Penicillium chrysogenum)。該菌株的16s rRNA的部分核苷酸序列如下:CTTCCGTAGGTGAACCTGCGGAAGGATCATTACCGAGTGAGGGCCCTCTGGGTCCAACCTCCCACCCGTGTTTATTTTACCTTGTTGCTTCGGCGGGCCCGCCTTAACTGGCCGCCGGGGGGCTTACGCCCCCGGGCCCGCGCCCG
權(quán)利要求
1.一株具有抗腫瘤活性的海洋真菌-產(chǎn)黃青霉(Penicillium chrysogenum)MNP07010101，保藏于中國典型培養(yǎng)物保藏中心，地址:中國，武漢，武漢大學(xué)，郵編430072，保藏編號:CCTCC No:M 2012317，保藏日期2012年8月28日。
2.如權(quán)利要求1所述的產(chǎn)黃青霉MNP07010101，其特征在于其16srRNA的部分核苷酸序列如下:
3.權(quán)利要求1所述的產(chǎn)黃青霉MNP07010101在制備抗腫瘤藥物中的應(yīng)用。
4.如權(quán)利要求3所述的應(yīng)用，其特征在于所述抗腫瘤藥物為治療肝癌、神經(jīng)癌或淋巴癌的藥物。
5.如權(quán)利要求3或4所述的應(yīng)用，其特征在于所述產(chǎn)黃青霉MNP07010101提取物用于制備抗腫瘤藥物。
6.如權(quán)利要求5所述的應(yīng)用，其特征在于所述提取物為乙酸乙酯提取物，由如下方法制得:產(chǎn)黃青霉MNP07010101接種至液體發(fā)酵培養(yǎng)基，于25 35°C、150 250 r/min振蕩條件下培養(yǎng)14 30天，得到發(fā)酵液，發(fā)酵液經(jīng)細(xì)胞破碎、分離除去菌體，用乙酸乙酯萃取，萃取液濃縮揮干得浸膏，浸膏上HP-20大孔樹脂層析過柱，以甲醇:水體積比為2:8^10:0為洗脫液進(jìn)行梯度洗脫，收集甲醇體積濃度60%以上的洗脫液，旋蒸濃縮揮干，即得所述乙酸乙酯提取物；所述液體發(fā)酵培養(yǎng)基組成為:麥芽浸粉3.(Γ7.0g/L，麥芽糖1.5^2.0g/L，葡萄糖.3.0 7.0 g/L，酵母浸粉0.8 1.5 g/L，溶劑為水:人工海水體積比1:0.25 4.0的混合液，ρΗ7.2 8.0。
全文摘要
本發(fā)明提供了一株具有抗腫瘤活性的海洋真菌——產(chǎn)黃青霉(Penicillium chrysogenum)MNP07010101及其應(yīng)用。該菌株保藏于中國典型培養(yǎng)物保藏中心，保藏編號CCTCC NoM 2012317，保藏日期2012年8月28日。本發(fā)明的有益效果主要體現(xiàn)在(1)本發(fā)明的海洋真菌菌株營養(yǎng)要求簡單、容易培養(yǎng)；(2)該菌株的代謝產(chǎn)物具有抗腫瘤活性；(3)該菌株的次級代謝產(chǎn)物的抗腫瘤活性高，其培養(yǎng)所得的發(fā)酵液總浸膏對HepG2、PC12細(xì)胞和U937細(xì)胞有一定的抗腫瘤活性，對其總浸膏進(jìn)行過HP-20大孔樹脂柱處理，收集得到的小極性段落對HepG2、PC12、U937細(xì)胞抑制活性在濃度200μg/ml時抑制率最高可達(dá)90%以上，具有很強(qiáng)的抗腫瘤活性。
文檔編號C12N1/14GK103074233SQ20121057408
公開日2013年5月1日 申請日期2012年12月25日 優(yōu)先權(quán)日2012年12月25日
發(fā)明者王鴻, 楊雪萍, 趙美蓉, 易喻, 梅建鳳, 應(yīng)國清 申請人:浙江工業(yè)大學(xué)