一種產(chǎn)黃青霉菌育種的驗(yàn)證方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種產(chǎn)黃青霉菌菌種選育用培養(yǎng)基，該培養(yǎng)基分為種子培養(yǎng)基和發(fā)酵培養(yǎng)基兩部分，其主要成分有葡萄糖漿、玉米漿、甘油、碳酸鈣和微量元素等。該培養(yǎng)基成本低，發(fā)酵效價高，表現(xiàn)穩(wěn)定，為產(chǎn)黃青霉菌的育種驗(yàn)證提供了一個良好的培養(yǎng)體系。降低了育種工作的成本，增加了育種工作的效率。
【專利說明】一種產(chǎn)黃青霉菌育種的驗(yàn)證方法
[0001]摘要
本發(fā)明涉及一種產(chǎn)黃青霉菌育種的驗(yàn)證方法，具體是，將通過誘變或者篩選純化的菌株接種到種子培養(yǎng)基中，在搖床上培養(yǎng)55飛O個小時，然后移種到發(fā)酵培養(yǎng)基中，在搖床培養(yǎng)6~7天，結(jié)束發(fā)酵過程，測量發(fā)酵液的效價，來評價誘變或純化育種的菌株優(yōu)劣。該方法為工業(yè)發(fā)酵純化育種的驗(yàn)證提供了一個穩(wěn)定的有效地平臺。該方法所用設(shè)備簡單，操作簡便易行，很有利于工業(yè)發(fā)酵篩選菌株時推廣使用。
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0002]本發(fā)明屬于產(chǎn)黃青霉菌工業(yè)發(fā)酵生產(chǎn)中驗(yàn)證誘變育種和純化篩選的菌株優(yōu)劣的方法，對于驗(yàn)證所獲得的新菌株的優(yōu)劣提供一個評價的平臺?！颈尘凹夹g(shù)】
[0003][0003]青霉素是人類提純的大規(guī)模用于臨床的第一種抗生素，是世界各國需求量最大的抗生素。由于青霉素(略)級代謝的產(chǎn)物，發(fā)酵的生化反應(yīng)過程機(jī)理復(fù)雜，表現(xiàn)出的動態(tài)行為復(fù)雜多變，具有非線性和不確定性。
[0004]在青霉素發(fā)酵生產(chǎn)過程中，選育優(yōu)良的種子一直是提高產(chǎn)量和質(zhì)量的有力保證。在通過各種誘變育種、基因構(gòu)建改造選育或者純化篩選育種的過程中，一個穩(wěn)定的驗(yàn)證區(qū)分所獲得的新菌株的平臺就成了迫切需要解決的問題。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]本發(fā)明的目的就是為產(chǎn)黃青霉育種過程中提供一個穩(wěn)定的驗(yàn)證平臺，更有效的區(qū)分新獲得的菌株的優(yōu)劣。
[0006]本發(fā)明的技術(shù)方案是:將通過誘變或純化篩選得到的新菌株接種到IOml種子培養(yǎng)基中，在搖床上25°C，搖床180轉(zhuǎn)/分鐘，培養(yǎng)56飛O小時，再移種到裝有30ml培養(yǎng)基的250ml搖瓶中。在搖床上，前兩天溫度控制在26°C，后4飛天溫度控制在25°C ;搖床轉(zhuǎn)速前兩天控制在170-180轉(zhuǎn)/分鐘，隨后調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)速到180-190轉(zhuǎn)/分鐘，兩天后再將轉(zhuǎn)速調(diào)節(jié)到190-200轉(zhuǎn)/分鐘，直至發(fā)酵結(jié)束。每天補(bǔ)加2ml濃度為30%的苯乙酸滅菌溶液。培養(yǎng)6~7天后，測發(fā)酵液青霉素的效價，效價在3.(T3.2X104IU/ml以上的即為優(yōu)良高產(chǎn)菌株。在此數(shù)值以下的為劣等菌株。本發(fā)明所用培養(yǎng)基為:
種子培養(yǎng)基(% ):蔗糖2，玉米漿6.7，碳酸鈣0.5，ρΗ5.8
發(fā)酵培養(yǎng)基(％):乳糖13，玉米漿3，甘油1.5，碳酸鈣1，硫酸鈉0.5，磷酸二氫鉀0.3，硫酸鎂0.005%,硫酸銅0.002%，磷酸二氫鉀0.03，硫酸亞鐵0.0015，ρΗ5.9。
[0007]本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn):
工藝簡單易操作，平臺穩(wěn)定，不易造成誤判而錯過獲得新菌株的機(jī)會。適用范圍比較廣，幾乎所有產(chǎn)黃青霉的育種的驗(yàn)證均可以采用此方法。
[0008]【具體實(shí)施方式】:
實(shí)施例1:
將通過誘變得到的新菌株10株編號為f 10，分別接種到IOml種子培養(yǎng)基中，在搖床上25°C，搖床180轉(zhuǎn)/分鐘，培養(yǎng)56小時。將培養(yǎng)好的種子液分別移種到裝有30ml培養(yǎng)基的250ml搖瓶中。在搖床上，前兩天溫度控制在26°C，后4天溫度控制在25°C ;搖床轉(zhuǎn)速前兩天控制在170轉(zhuǎn)/分鐘，隨后調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)速到180轉(zhuǎn)/分鐘，兩天后再將轉(zhuǎn)速調(diào)節(jié)到190轉(zhuǎn)/分鐘，直至發(fā)酵結(jié)束。每天補(bǔ)加2ml濃度為30%的苯乙酸滅菌溶液。培養(yǎng)6天后，測發(fā)酵液青霉素的效價，I~10號效價分別為:2.8X104IU/ml，2.5X 104IU/ml, 2.9X 104IU/ml, 2.7X 104IU/ml，3.1 X 104IU/ml，2.3 X 104IU/ml，2.9 X 104IU/ml，2.lX104IU/ml,
3.2X104IU/ml,3.4X 104IU/ml，5 號、9 號和 10 號效價在 3.0X104IU/ml 以上，即為優(yōu)良高產(chǎn)菌株，可做進(jìn)一步驗(yàn)證。
[0009] 實(shí)施例2:
將通過純化育種得到的新菌株10株編號為f 10，分別接種到IOml種子培養(yǎng)基中，在搖床上25°C，搖床180轉(zhuǎn)/分鐘，培養(yǎng)60小時。將培養(yǎng)好的種子液分別移種到裝有30ml培養(yǎng)基的250ml搖瓶中。在搖床上，前兩天溫度控制在26°C，后5天溫度控制在25°C ;搖床轉(zhuǎn)速前兩天控制在180轉(zhuǎn)/分鐘，隨后調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)速到190轉(zhuǎn)/分鐘，兩天后再將轉(zhuǎn)速調(diào)節(jié)到200轉(zhuǎn)/分鐘，直至發(fā)酵結(jié)束。每天補(bǔ)加2ml濃度為30%的苯乙酸滅菌溶液。培養(yǎng)7天后，測發(fā)酵液青霉素的效價，！~10號效價分別為:3.1 X 104IU/ml, 3.0X 104IU/ml, 3.0X IO4IU/ml,3.1X 104IU/ml，3.2 X 104IU/ml，2.9 X 104IU/ml，3.4 X 104IU/ml，3.1X 104IU/ml,3.3X 104IU/ml,3.0X 1 04IU/ml，7號和9號效價在3.2X 104IU/ml以上，即為優(yōu)良高產(chǎn)菌株。
【權(quán)利要求】
1.一種產(chǎn)黃青霉菌育種的驗(yàn)證方法，其特征在于:將通過誘變或純化篩選得到的新菌株接種到種子培養(yǎng)基中，在搖床上培養(yǎng)55飛O個小時，然后移種到發(fā)酵培養(yǎng)基中，在搖床培養(yǎng)6~7天，結(jié)束發(fā)酵過程，測量發(fā)酵液的效價，來評價誘變或純化育種的菌株優(yōu)劣。
2.如權(quán)利要求1所述的一種產(chǎn)黃青霉菌育種的驗(yàn)證方法，其特征在于:種子培養(yǎng)階段是在搖床上，溫度保持25 °C，轉(zhuǎn)速控制180轉(zhuǎn)/分鐘，培養(yǎng)55飛O個小時。
3.如權(quán)利要求1所述的一種產(chǎn)黃青霉菌育種的驗(yàn)證方法，其特征在于:發(fā)酵階段是在搖床上，溫度控制25~26 °C，轉(zhuǎn)速控制在170-200轉(zhuǎn)/分鐘，培養(yǎng)6~7天。
4.如權(quán)利要求3所述的溫度控制，其特征是在前兩天控制在26°C，后4飛天控制在25。。。
5.如權(quán)利要求3所述的轉(zhuǎn)速控制，其特征是在前兩天控制在170-180轉(zhuǎn)/分鐘，隨后調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)速到180-190轉(zhuǎn)/分鐘，兩天后再將轉(zhuǎn)速調(diào)節(jié)到190-200轉(zhuǎn)/分鐘，直至發(fā)酵結(jié)束。
6.一種產(chǎn)黃青霉菌育種的驗(yàn)證方法，其特征在于:所測發(fā)酵液的效價在3.0~3.2X104IU/ml以上的為優(yōu)良菌株，在3.0~3.2X 104IU/ml以下的為淘汰菌株。
7.如權(quán)利要求f3所述的一種產(chǎn)黃青霉菌育種的驗(yàn)證方法，適用于基因構(gòu)建改造育種、誘變育種和純化篩選育種的菌`株優(yōu)劣的驗(yàn)證。
【文檔編號】C12Q1/04GK103834717SQ201210471744
【公開日】2014年6月4日 申請日期:2012年11月21日 優(yōu)先權(quán)日:2012年11月21日
【發(fā)明者】黃振寶 申請人:青島恒潤源通果蔬專業(yè)合作社