專利名稱：蘿卜霜霉病抗性基因緊密連鎖的分子標(biāo)記的制作方法
蘿卜霜霉病抗性基因緊密連鎖的分子標(biāo)記技術(shù)領(lǐng)域
本發(fā)明屬于作物遺傳育種領(lǐng)域，涉及蘿卜霜霉病抗性基因緊密連鎖的分子標(biāo)記。
技術(shù)背景
蘿卜(Raphanus sativus L.)又名萊菔,是一種重要十字花科根菜類蔬菜作物,我國蘿卜種質(zhì)資源豐富，栽培歷史悠久；蘿卜主要以膨大的肉質(zhì)直根供食用，具有較高的營養(yǎng)價(jià)值和食療功效，深受人們喜愛(汪隆植與何啟偉主編，中國蘿卜，北京科學(xué)技術(shù)文獻(xiàn)出版社，2005)。
霜霉病(downy mildew)是蘿卜生產(chǎn)上一種危害性很大的病害，該病病原菌是鞭毛菌亞門卵菌綱霜霉屬的一種專性活體寄生菌，該病在世界各地均有分布。近幾年，蘿卜霜霉病的病害發(fā)生嚴(yán)重，尤其是在溫度適宜、潮濕的環(huán)境下更易發(fā)生，南方適溫高濕的環(huán)境為霜霉菌的生活提供了適宜條件，春季保護(hù)地栽培更是蘿卜霜霉病的高發(fā)季節(jié)。蘿卜霜霉病發(fā)病部位多為植株葉片、莖部、根部、種株花器官及種莢，在蘿卜整個(gè)生長時(shí)期(子葉期至采種期)都容易發(fā)生，對蘿卜的品質(zhì)、產(chǎn)量以及良種繁育等造成了嚴(yán)重影響。
分子標(biāo)記技術(shù)已經(jīng)被廣泛應(yīng)用于蔬菜作物遺傳育種研究中。成功進(jìn)行重要性狀基因緊密連鎖的分子標(biāo)記鑒定，在品種選育過程中可以跟蹤、檢測特定性狀基因，有效減少或免除傳統(tǒng)育種中繁雜的性狀鑒定工作，還可以通過標(biāo)記輔助選擇，把多個(gè)抗病等重要性狀功能基因聚合到同一優(yōu)良品系中。相關(guān)序列擴(kuò)增多態(tài)性(sequence related amplified polymorphism, SRAP)是一種新型的基于PCR的遺傳標(biāo)記系統(tǒng),具有簡單、高效、重復(fù)性高等優(yōu)點(diǎn)(Li G&Quiros CF. Sequence-related amplified polymorph ism (SRAP), a new marker system based on a simple PCR reaction:its application to mapping and gene tagging in Brassica. Theoretical and Applied Genetics，2001，103:455-461 )。目前， SRAP已成功應(yīng)用于作物的品種鑒定、遺傳連鎖圖譜構(gòu)建以及性狀遺傳標(biāo)記分析工作中。
混合分離分析(Bulked SegregantAnalysis, BSA)策略是快速獲得與目標(biāo)性狀基因緊密連鎖分子標(biāo)記的有效方法，尤其是對于尚無遺傳連鎖圖或連鎖圖飽和程度較低的植物(Michelmore RffjParan I, Kesseli RV. Identification of markers linked to disease resistance genes by bulked segregant analysis:A rapid method to detect markers in specific genomic regions by using segregating populations. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1991，88:9828-9832)。在分離群體中選擇目標(biāo)性狀極端差異的植株構(gòu)建兩個(gè)DNA 池(bulk)，在兩個(gè)基因池間表現(xiàn)出多態(tài)性的DNA標(biāo)記，有可能與目標(biāo)基因連鎖。目前，利用 BSA策略已經(jīng)標(biāo)記和定位了許多重要的質(zhì)量性狀基因，如萵苣抗霜霉病基因、水稻抗癭蠓基因以及抗稻瘟病基因等(方宣鈞，吳為人，唐紀(jì)良.作物DNA標(biāo)記輔助育種.北京科學(xué)出版社，2001)。
抗病育種是現(xiàn)代作物遺傳育種領(lǐng)域重要的研究方向，選育抗病品種是當(dāng)前控制作物病害最經(jīng)濟(jì)、最有效的途徑?？共∑贩N培育過程中，抗性鑒定是關(guān)鍵環(huán)節(jié)之一。蘿卜霜霉病菌為專性寄生真菌，蘿卜霜霉病抗性鑒定評價(jià)涉及到病菌收集、活體保存、接種、植株管理、病情調(diào)查等多個(gè)步驟，傳統(tǒng)接種鑒定不僅費(fèi)時(shí)，而且受接種孢子液濃度、接種環(huán)境條件等因素影響，嚴(yán)重影響了植株抗性鑒定結(jié)果準(zhǔn)確性與抗性選擇效率。通過篩選與蘿卜霜霉病抗性基因緊密連鎖的分子標(biāo)記，在苗期就可利用標(biāo)記進(jìn)行霜霉病抗性鑒定，一般廣2 天即可獲得結(jié)果，而且不受環(huán)境條件的影響，結(jié)果快速、準(zhǔn)確。這種基于分子標(biāo)記的基因型選擇(標(biāo)記輔助選擇)克服了許多基于表型選擇方法的缺點(diǎn)，可以明顯提高目標(biāo)性狀選擇效率，顯著縮短育種年限，加快抗病新品種培育進(jìn)程。發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于針對現(xiàn)有技術(shù)的上述不足，提供一種蘿卜霜霉病抗性基因緊密連鎖的分子標(biāo)記。
本發(fā)明的另一目的是提供該分子標(biāo)記的引物。
本發(fā)明的又一目的是提供該分子標(biāo)記的應(yīng)用。
本發(fā)明的目的可通過如下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)
—種蘿卜霜霉病抗性基因緊密連鎖的分子標(biāo)記Em9/ga2437(!,所述的分子標(biāo)記Em9/ ga2437Q由序列如SEQ ID NO. I所示的正向引物Em9和序列如SEQ ID NO. 2所示的反向引物 ga24通過PCR擴(kuò)增具有霜霉病抗性的蘿卜基因組DNA得到，所述的具有霜霉病抗性的蘿卜選自抗病親本‘NAU-dhp08’。
與蘿卜霜霉病抗病基因緊密連鎖的分子標(biāo)記,所述的SRAP分子標(biāo)記Em9/ga2437(l, 其是用下述方法得到的
(I)選取高代自交系抗病親本‘NAU_dhp08’(朱長志，等.利用種子蛋白SDS — PAGE技術(shù)進(jìn)行抗熱蘿卜種質(zhì)鑒定.中國蔬菜，2010(8):21-25)，和高代自交系感病親本‘秋田半節(jié)青’(周志國，等.不同蘿卜品種游離小孢子的誘導(dǎo)及培養(yǎng)體系優(yōu)化研究.西北植物學(xué)報(bào)，2007，27(1):33-38)，田間授粉有性雜交產(chǎn)生F1, F1自交產(chǎn)生匕，同時(shí)F1回交產(chǎn)生BC 群體；
(2)采用人工接種方法對F2單株進(jìn)行抗病、感病鑒定，統(tǒng)計(jì)抗、感分離情況；
(3)采用CTAB法提取蘿卜抗病親本自交系‘NAU_dhp08’和感病親本‘秋田半節(jié)青'F1及F2單株基因組DNA;
(4)采用 BSA (Bulked SegregantAnalysis)法,在 F2 中選取 10 株高抗和 10 株高感單株，將其基因組DNA分別進(jìn)行等量混合，構(gòu)建抗池Bk和感池Bs ；
(5)米用SRAP分子標(biāo)記方法進(jìn)行蘿卜霜霉病抗性分子標(biāo)記的篩選。首先利用未本和抗、感池(Bulk)基因組DNA進(jìn)行SRAP引物的篩選，接著將篩選出的多態(tài)性引物在組成抗感池的20個(gè)單株基因組DNA中進(jìn)一步驗(yàn)證，最后在F2單株中利用驗(yàn)證的多態(tài)性引物進(jìn)行 PCR擴(kuò)增，對單株進(jìn)行標(biāo)記基因型分析，統(tǒng)計(jì)多態(tài)性引物產(chǎn)生標(biāo)記條帶的分離情況；
(6)根據(jù)F2單株標(biāo)記基因型分析，結(jié)合人工接種鑒定結(jié)果，采用JoinMap3. O生物軟件進(jìn)行遺傳連鎖分析，設(shè)置LOD最小值為3. O,采用kosambi函數(shù)計(jì)算遺傳距離，發(fā)現(xiàn)SRAP引物Em9/ga24組合產(chǎn)生大小為370bp的Em9/ga2437(l標(biāo)記與蘿卜霜霉病抗性基因緊密連鎖，遺傳距離為2. 3cM。產(chǎn)生標(biāo)記Em9/ga2437Q的SRAP引物為Em9 (正向引物) 5’ GACTGCGTACGAATTCTA3’，ga24 (反向引物)5’ TTTTGGGACTGATAGCATTC3’。
SRAP-PCR 反應(yīng)體系為(IOyL) 1XPCR buffer, 3. OmM Mg2+, O. 20mM dNTPs,O. 5U Taq DNA聚合酶，每個(gè)引物O. 30 μ M和模板DNAlOng。反應(yīng)程序?yàn)?4 °C 3min ; 94°C 60s, 35°C 60s, 72°C 90s, 5 個(gè)循環(huán)；94°C 60s, 50°C 60s, 72°C 90s, 33 個(gè)循環(huán)；72°C延伸 7min。PCR擴(kuò)增產(chǎn)物檢測在8%的非變性聚丙烯酰胺凝膠(丙烯酰胺(Acr):甲叉雙丙烯酰胺 (Bis)(質(zhì)量比)=29:1)上進(jìn)行，電極緩沖液為I X TBE，恒定電壓150V，凝膠染色采用硝酸銀染色。
本發(fā)明所述的蘿卜霜霉病抗性基因緊密連鎖的分子標(biāo)記Em9/ga2437Q的引物組合 Em9/ga24，正向引物Em9序列如SEQ ID NO. I所示，反向引物ga24序列如SEQ ID NO. 2 PJf/Jn ο
本發(fā)明所述的蘿卜霜霉病抗性基因緊密連鎖的分子標(biāo)記Em9/ga2437(l的檢測方法， 包含如下步驟
(I)以被檢測的蘿卜基因組DNA為模板，以權(quán)利要求2所述的引物組合Em9/ga24 進(jìn)行PCR擴(kuò)增；
(2)能夠擴(kuò)增出370bp特異條帶的，說明存在蘿卜霜霉病抗性基因緊密連鎖的分子標(biāo)記Em9/ga2437(l ;未擴(kuò)增出370bp特異條帶的，說明不存在蘿卜霜霉病抗性基因緊密連鎖的分子標(biāo)記Em9/ga2 4370。
其中，所述的PCR 擴(kuò)增，其反應(yīng)體系lXPCRbuffer，3. OmM Mg2+,O. 20mM dNTPs, O. 5U Taq DNA聚合酶，每個(gè)引物O. 30 μ M和模板DNAlOng，總體系10 μ L ;反應(yīng)程序?yàn)?940C 3min ；94°C 60s, 35°C 60s, 72°C 90s, 5 個(gè)循環(huán)；94°C 60s, 50°C 60s, 72°C 90s, 33 個(gè)循環(huán)； 72°C延伸7min ;擴(kuò)增產(chǎn)物檢測在8%的非變性聚丙烯酰胺凝膠(丙烯酰胺(Acr):甲叉雙丙烯酰胺(Bis)(質(zhì)量比)=29:1)上進(jìn)行，電極緩沖液為150伏，凝膠采用硝酸銀染色。
本發(fā)明所述的分子標(biāo)記Em9/ga2437(l在蘿卜霜霉病抗性鑒定或抗性基因檢測中的應(yīng)用。
一種蘿卜霜霉病抗性基因鑒定的方法，包括使用本發(fā)明所述的分子標(biāo)記Em9/ ga24370的步驟。
本發(fā)明所述的分子標(biāo)記Em9/ga2437(!在蘿卜輔助育種中的應(yīng)用。
一種蘿卜輔助育種方法，包括檢測本發(fā)明所述的分子標(biāo)記的步驟。
有益效果
霜霉病是蘿卜生產(chǎn)上一種重要病害，嚴(yán)重影響了蘿卜的產(chǎn)量與品質(zhì)。本發(fā)明涉及蘿卜霜霉病抗性基因緊密連鎖的分子標(biāo)記方法，目的是針對傳統(tǒng)的蘿卜霜霉病抗性育種過程中抗性鑒定程序繁瑣、結(jié)果易受環(huán)境條件影響等缺點(diǎn)，通過遺傳分析篩選出蘿卜霜霉病抗性基因緊密連鎖的分子標(biāo)記，以用于快速、準(zhǔn)確鑒定材料霜霉病抗性，大大提高蘿卜抗霜霉病品種的選擇效率，加快蘿卜高抗霜霉病新品種選育進(jìn)程。其主要優(yōu)點(diǎn)是
(I)分子標(biāo)記穩(wěn)定準(zhǔn)確。獲得的蘿卜抗霜霉病基因緊密連鎖的SRAP標(biāo)記是基于 PCR的DNA分子標(biāo)記。該DNA標(biāo)記穩(wěn)定、簡便，利用該DNA標(biāo)記可快速、準(zhǔn)確鑒定出蘿卜霜霉病抗性基因存在與否，標(biāo)記輔助選擇不受植株生長階段與環(huán)境條件的影響。
(2)顯著提高蘿卜霜霉病抗性選擇效率。常規(guī)蘿卜霜霉病抗性育種過程中，抗性鑒定步驟繁瑣，工作量大，鑒定結(jié)果易受環(huán)境條件影響，費(fèi)時(shí)費(fèi)工。通過利用蘿卜霜霉病抗性基因緊密連鎖的分子標(biāo)記，可以有效克服傳統(tǒng)的霜霉病抗性接種鑒定結(jié)果易受環(huán)境影響的5局限；而且可以在苗期鑒定蘿卜材料霜霉病抗性，一般1-2天即可獲得結(jié)果，大大縮短了蘿卜霜霉病抗性鑒定時(shí)間，明顯提高蘿卜霜霉病抗性選擇效率，顯著加快蘿卜霜霉病抗性品種選育進(jìn)程。


圖I :在親本及抗感池中篩選蘿卜霜霉病抗病基因緊密連鎖標(biāo)記Em9/ga2437Q的電泳圖
P1 :抗病親本NAU_dhp08 ；P2 :感病親本‘秋田半節(jié)青’ ；BE :抗病池；BS :感病池；箭頭代表的是親本間及抗感池間的特異標(biāo)記。
圖2 :在F2群體中檢測蘿卜霜霉病抗性標(biāo)記Em9/ga2437(l的SRAP電泳圖譜
M100bp DNAladder (分子量標(biāo)準(zhǔn))；R :有特異帶的F2抗病單株；S :沒有特異帶的 F2感病單株。箭頭代表的是抗感單株間的特異標(biāo)記。
具體實(shí)施方式
實(shí)施例I
I篩選蘿卜抗感材料，構(gòu)建蘿卜霜霉病抗性遺傳研究群體
選取經(jīng)多年田間自然鑒定的高代自交系抗病親本‘NAU_dhp08’和高代自交系感病親本‘秋田半節(jié)青’，有性雜交產(chǎn)生F1, F1自交產(chǎn)生F2，同時(shí)F1回交產(chǎn)生BC。
2單株霜霉病抗性鑒定
將采回的蘿卜霜霉病葉表面著生的霉層及其附著物用自來水沖洗干凈，再用蒸餾水沖洗，放置于黑暗條件下20°C保濕(RH=95%，將病葉放在培養(yǎng)皿中，葉片上下鋪上濕潤的吸水紙或?yàn)V紙)24h，用濕棉球?qū)⑿庐a(chǎn)生的孢子囊輕輕剝落于蒸餾水中制成懸浮液，通過顯微鏡觀察其孢子的形態(tài)，并用血球計(jì)數(shù)板計(jì)算其孢子濃度，最后稀釋至I X IO5個(gè)孢子/mL， 最后加入標(biāo)定體積的O. 1%的吐溫20，即制備成接種液。在幼苗4葉期采用噴霧法單葉接種，接種量為150-200 μ L/株，接種后黑暗保濕24h后(用黑色PE袋罩住)，轉(zhuǎn)移至自然條件下管理，I周后調(diào)查各單株發(fā)病情況，利用卡方測驗(yàn)分析霜霉病抗性遺傳規(guī)律，分析發(fā)現(xiàn)正反交F1群體全部顯示抗性，其與抗性親本回交產(chǎn)生的BC后代單株60株全部為抗病，與感病親本回交產(chǎn)生的BC后代單株為抗病29株，感病31株，X 2檢驗(yàn)其分離比例符合1:1 ;同時(shí)對F2群體中238個(gè)單株進(jìn)行編號，鑒定結(jié)果顯示抗病有179株，感病有59株，X 2檢驗(yàn)其符合3:1分離比，符合單顯性基因遺傳模式。
3采用改良的CTAB法提取蘿卜基因組DNA (Liu L，Guo W，Zhu X，Zhang T.Inheritance and fine mapping of fertility-restoration for cytoplasmic male sterility in Gossypium hirsutum L. Theor Appl Genet, 2003，106:461-469),分別提取蘿卜抗病親本‘NAU-dhp08’和感病親本‘秋田半節(jié)青’及F2單株基因組DNA。
4抗感池(Bulk)的構(gòu)建
米用BSA (Bulked SegregantAnalysis)法，在F2中各取10個(gè)高抗單株和10個(gè)高感單株的基因組DNA，進(jìn)行等量混合，構(gòu)建抗池(Bk)和感池(Bs)用于SRAP引物的多態(tài)性篩選。在親本及抗感池中篩選蘿卜霜霉病抗病基因緊密連鎖標(biāo)記Em9/ga2437(l的電泳圖見圖I。
5米用SRAP標(biāo)記技術(shù)進(jìn)行分析
(I) SRAP標(biāo)記PCR反應(yīng)
反應(yīng)體系為蘿卜基因組 DNA (lOng/μ L) l.OyL, 10XPCR Bufferl. O μ L, MgCl2(25mM)l. 2μ L,dNTP (10mM)0. 2 μ L，每個(gè)引物(10 μ Μ)各 O. 3 μ L，Taq DNA 聚合酶(5U/μ L)O. I μ L, ddH205. 9 μ L,總體系 10 μ L。
反應(yīng)程序?yàn)?4 0C 3min ；94 °C 60s, 35 °C 60s, 72 °C 90s，5 個(gè)循環(huán)；94 °C 60s,50°C 60s, 72°C 90s，33 個(gè)循環(huán);72°C延伸 7min。
(2)擴(kuò)增產(chǎn)物電泳檢測
取擴(kuò)增產(chǎn)物2.5 μ L，于8%的非變性聚丙烯胺凝膠(Acr:Bic (質(zhì)量比)=29:1)電泳，電極緩沖液為I X 150V，具體步驟
I)洗凈玻璃板，晾干后裝板，保證玻璃板不漏膠；
2)8%的非變性聚丙烯酰胺凝膠的制備(45mL)
30%Acr:Bis(JiliM 比 29:1) 11.97mL5χΤΒΕ 9mLddH20 23.45mLTEMED 36μ 10%AP 0.54mL
3)凝膠溶液配好后，均勻的倒入兩塊玻璃板中間，將梳子垂直插入膠中(注意防止灌膠過程中產(chǎn)生氣泡)，讓其充分凝固；
4)待膠凝固好后裝電泳槽，倒入IXTBE電極緩沖液，于90V穩(wěn)壓下預(yù)電泳15 30min;
5)擴(kuò)增產(chǎn)物加3 μ L溴酚藍(lán)緩沖液，混勻，每加樣孔上樣量3. 5 μ L ;
6) 150V穩(wěn)壓下電泳2. 5h左右；
7)電泳完畢后將玻璃板從電泳槽中取出，剝下凝膠；
8)固定固定液(10%乙醇，O. 5%乙酸)固定15 20min，蒸餾水洗I 2次；
9)染色銀染液(O. 2%AgN03)，銀染15 20min，蒸餾水快速洗2次；
10)顯色顯色液(I. 5%Na0H, O. 4%甲醛溶液，O. 002%Na2S203)，顯至條帶清晰；
11)記錄結(jié)果并照相。
(3)實(shí)驗(yàn)結(jié)果記錄
利用SRAP引物Em9/ga24引物組合在抗病后代單株中能觀察到一條分子量370bp的特異條帶Em9/ga2437CI(圖2),多次重復(fù),均能穩(wěn)定出現(xiàn),而在感病單株中卻沒有此條帶。 說明該特異條帶與蘿卜霜霉病抗性相關(guān)。
Em9/ga24 引物序列為Em9 5’GACTGCGTACGAATTCTA3’ (SEQ ID NO. I)
ga24 5’ TTTTGGGACTGATAGCATTC3’ (SEQ ID NO. 2)
6蘿卜霜霉病抗性基因的SRAP標(biāo)記鑒定
以引物Em9/ga24對雜交后代238個(gè)單株進(jìn)行擴(kuò)增，結(jié)果179個(gè)抗病單株存在特異條帶；2個(gè)單株能夠擴(kuò)增出此特異條帶，但表現(xiàn)為感病，這種表型與標(biāo)記基因型差異推測是由于染色體交換引起的；其余57個(gè)感病單株沒有擴(kuò)增出此特異條帶。進(jìn)一步表明此SRAP
標(biāo)記Em9/ga2437(l與蘿卜霜霉病抗性基因緊密連鎖，可以成功應(yīng)用于蘿卜種質(zhì)材料霜霉病抗性鑒定。
權(quán)利要求
1.一種蘿卜霜霉病抗性基因緊密連鎖的分子標(biāo)記Em9/ga2437(l，其特征在于所述的分子標(biāo)記Em9/ga24370由序列如SEQ ID NO. I所示的正向引物Em9和序列如SEQ ID NO. 2所示的反向引物ga24通過PCR擴(kuò)增具有霜霉病抗性的蘿卜基因組DNA得到，所述的具有霜霉病抗性的蘿卜選自抗病親本‘NAU-dhp08’。
2.權(quán)利要求I所述的蘿卜霜霉病抗性基因緊密連鎖的分子標(biāo)記Em9/ga2437(l的引物組合Em9/ga24,其特征在于正向引物Em9序列如SEQ ID NO. I所示，反向引物ga24序列如SEQID NO. 2 所示。
3.權(quán)利要求I所述的蘿卜霜霉病抗性基因緊密連鎖的分子標(biāo)記Em9/ga2437(l的檢測方法，其特征在于包含如下步驟 Cl)以被檢測的蘿卜基因組DNA為模板，以權(quán)利要求2所述的引物組合Em9/ga24進(jìn)行PCR擴(kuò)增； (2)能夠擴(kuò)增出370bp特異條帶的，說明存在蘿卜霜霉病抗性基因緊密連鎖的分子標(biāo)記Em9/ga2437(l ;未擴(kuò)增出370bp特異條帶的，說明不存在蘿卜霜霉病抗性基因緊密連鎖的分子標(biāo)記 Em9/ga2437(l。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的檢測方法，其特征在于所述的PCR擴(kuò)增，其反應(yīng)體系IXPCR buffer, 3. OmM Mg2+, O. 20mM dNTPs,0. 5U Taq DNA 聚合酶，每個(gè)引物 0· 30 μ M 和模板 DNAlOng，總體系 10 μ L ;反應(yīng)程序?yàn)?4°C 3min ；94°C 60s, 35°C 60s, 72°C 90s，5 個(gè)循環(huán)；94°C 60s, 50°C 60s, 72°C 90s，33個(gè)循環(huán)；72°C延伸7min ;擴(kuò)增產(chǎn)物檢測在8%的非變性聚丙烯酰胺凝膠上進(jìn)行，電極緩沖液為I X150伏，凝膠采用硝酸銀染色。
5.權(quán)利要求I所述的分子標(biāo)記Em9/ga2437(l在蘿卜霜霉病種質(zhì)材料抗性鑒定或抗性基因檢測中的應(yīng)用。
6.一種蘿卜霜霉病抗性鑒定的方法，其特征在于包括使用權(quán)利要求I所述的分子標(biāo)記Em9/ga2437(l 的步驟。
7.權(quán)利要求I所述的分子標(biāo)記Em9/ga2437(!在蘿卜霜霉病抗性標(biāo)記輔助育種中的應(yīng)用。
8.一種蘿卜霜霉病抗性標(biāo)記輔助育種方法，包括檢測權(quán)利要求I所述的分子標(biāo)記的步驟。
全文摘要
本發(fā)明屬于作物遺傳育種領(lǐng)域，公開了蘿卜霜霉病抗性基因緊密連鎖的分子標(biāo)記。本發(fā)明采用SRAP分子標(biāo)記方法對高抗霜霉病蘿卜親本(NAU-dhp08)、高感霜霉病蘿卜親本(秋田半節(jié)青)，以及抗、感親本雜交配制的F2群體單株進(jìn)行標(biāo)記基因型分析，通過對F2單株抗性表型與標(biāo)記基因型連鎖分析，鑒定出370bp緊密連鎖的抗性標(biāo)記Em9/ga24370，抗性位點(diǎn)與標(biāo)記間遺傳距離為2.3cM。通過本發(fā)明提供的分子標(biāo)記方法可用于蘿卜霜霉病抗性育種中標(biāo)記輔助選擇，快速準(zhǔn)確鑒定蘿卜植株霜霉病抗性，克服了常規(guī)抗性鑒定方法工作量大、周期長、結(jié)果易受環(huán)境影響等局限，可以明顯提高抗性基因型選擇效率，加快蘿卜高抗霜霉病新品種選育進(jìn)程。
文檔編號C12Q1/68GK102978207SQ20121052807
公開日2013年3月20日 申請日期2012年12月11日 優(yōu)先權(quán)日2012年12月11日
發(fā)明者柳李旺, 徐良, 蔣秋瑋, 武劍, 龔義勤, 高相敏 申請人:南京農(nóng)業(yè)大學(xué)