两个人的电影免费视频_国产精品久久久久久久久成人_97视频在线观看播放_久久这里只有精品777_亚洲熟女少妇二三区_4438x8成人网亚洲av_内谢国产内射夫妻免费视频_人妻精品久久久久中国字幕

Prv、pcv-2、ppv多重pcr檢測試劑盒的制作方法

文檔序號(hào):605063閱讀:385來源:國知局
專利名稱:Prv、pcv-2、ppv多重pcr檢測試劑盒的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域
本發(fā)明涉及ー種試劑盒,尤其是ー種PRV、PCV-2、PPV多重PCR檢測試劑盒。
背景技術(shù)
隨著規(guī)模化養(yǎng)豬的不斷發(fā)展,當(dāng)前豬偽狂犬病病毒(PRV)、豬圓環(huán)病毒(PCV-2)、豬細(xì)小病毒(PPV)造成的繁殖障礙較為嚴(yán)重,并常常發(fā)生混合感染,給養(yǎng)豬業(yè)造成了巨大的經(jīng)濟(jì)損失。PRV、PCV-2和PPV的混合感染,僅根據(jù)臨床癥狀較難進(jìn)行鑒別診斷,而且PRV基因缺失疫苗的大規(guī)模應(yīng)用,使野毒感染和疫苗接種的區(qū)分十分必要。目前,主要的檢測方式有病毒分離鑒定、瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)、微量血清中和試驗(yàn)、ELISA、PCR方法,而針對(duì)PRV基因缺失疫苗有g(shù)E-ELISA以區(qū)分野毒感染和疫苗接種。然而常規(guī)的診斷方法很難將此癥狀相似的疾病同時(shí)加以區(qū)別,而且常規(guī)的病原學(xué)和血清學(xué)檢測方法,又存在操作繁雜、費(fèi)時(shí)費(fèi)力、敏感性低等不足。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供ー種PRV、PCV-2、PPV多重PCR檢測試劑盒,它可以同時(shí)檢測出豬偽狂犬病病毒、豬圓環(huán)病毒及豬細(xì)小病毒,特異性和敏感性高、檢測時(shí)間短、檢測成本低。本發(fā)明是這樣實(shí)現(xiàn)的PRV、PCV-2、PPV多重PCR檢測試劑盒,它包括40 μ L等體積混合的PRV引物、PCV-2引物及PPV引物,PRV引物、PCV-2引物及PPV引物的濃度均為10 μ Μ,緩沖液600 μ L,陰性對(duì)照20 μ L,PCR酶250 μ L,超純水170yL,50yL的MarkerDL2000以及陽性對(duì)照20 μ L ;PRV引物的目的基因?yàn)間E,PRV引物的上游引物的序列號(hào)為PRV-1 :5’ - CCCACGCACGAGGACTAC - 3’,PRV引物的下游引物的序列號(hào)為PRV-2 :5’-GGGCGGGACATCAACAGG - 3’,片段大小為288bp ;PCV-2引物的目的基因?yàn)?RF2,PCV-2弓丨物的上游引物序列號(hào)為PCV-1:5’ - GGATTGTATGGCGGGAGG - 3’、PCV-2引物的下游引物的序列號(hào)為PCV-2 :5’ - AGGAGGCGTTACCGAAGGAG - 3’,片段大小為419bp ;PPV引物的目的基因?yàn)閂P2,PPV引物的上游引物的序列號(hào)為PPV-I :5’ -GGGAGGGCTTGGTTAGAATC-3’、PPV引物的下游引物的序列號(hào)為PPV-2 :5’ - TTGTTTGCCATGAGTGAGTT - 3’,片段大小為681bp。緩沖液為50mM的Tris-HcL及150mM的NaCL的混合溶液。陰性對(duì)照為超純水。陽性對(duì)照為重組pMD18-T-HBV-S質(zhì)粒。PCR 酶的組成包括 IOmM 的 Tris_HcL、50mM 的 KCL、1. 5mM 的 MgCL2 以及 O. 05U 的Poymerase/uL。PRV引物的上游引物為PRV-1,下游引物為PRV-2、PCV-2弓丨物及PPV引物 為了驗(yàn)證本發(fā)明的效果進(jìn)行了如下實(shí)驗(yàn)
I材料與方法
I.I病毒和細(xì)菌PRV閩-I株、PCV-2、PPV強(qiáng)毒株7909、CFSV石門系強(qiáng)毒株Fl 14、PRRSV美洲株CH-Ia株均由山東濱州畜牧獸醫(yī)研究院贈(zèng)送;PRV CgE基因缺失Bartha-k61株)購自山東綠都生物科技有限公司;大腸桿菌為本研究室保存。1.2主要試劑
Goldview、Tris 緩沖液、EDTA、DL2000、7 DNA Polymerase (5U/^L)及相應(yīng)IOXTai7Buffer^dNTP等購自寶生物(大連)工程有限公司;TIANamp病毒基因組DNA/RNA提取試劑盒購自天根生化科技有限公司;引物由寶生物(大連)工程有限公司合成。1.3引物設(shè)計(jì)
根據(jù)GenBank中登錄的(PRV) ) gE、PCV-2 0RF2和PPV VP2基因組序列,應(yīng)用DNAStar軟件,設(shè)計(jì)了 3對(duì)引物,用于擴(kuò)增PRV、PCV-2、PPV目的基因片段,引物的序列(見表I )。
權(quán)利要求
1.一種PRV、PCV-2、PPV多重PCR檢測試劑盒,其特征在于它包括40 ii L等體積混合的PRV引物、PCV-2弓丨物及PPV引物,PRV引物、PCV-2弓丨物及PPV弓丨物的濃度均為10 y M,緩沖液600 u L,陰性對(duì)照20 u L,PCR酶250 u L,超純水170 y L,50 y L的 Marker DL2000以及陽性對(duì)照20 y L ;PRV引物的目的基因?yàn)間E,PRV引物的上游引物的序列號(hào)為PRV-I :5’ - CCCACGCACGAGGACTAC - 3’,PRV引物的下游引物的序列號(hào)為PRV-2 5’ - GGGCGGGACATCAACAGG - 3’,片段大小為 288bp ;PCV-2 引物的目的基因?yàn)?ORF2,PCV_2引物的上游引物序列號(hào)為PCV-1 :5 ’ - GGATTGTATGGCGGGAGG - 3 ’、PCV-2引物的下游引物的序列號(hào)為PCV-2 :5’ - AGGAGGCGTTACCGAAGGAG - 3’,片段大小為419bp ;PPV引物的目的基因?yàn)閂P2,PPV引物的上游引物的序列號(hào)為PPV-I :5’ - GGGAGGGCTTGGTTAGAATC - 3’、PPV引物的下游引物的序列號(hào)為PPV-2 :5 ’ - TTGTTTGCCATGAGTGAGTT - 3 ’,片段大小為681bp。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的PRV、PCV-2、PPV多重PCR檢測試劑盒,其特征在于緩沖液為50mM的Tris-HcL及150mM的NaCL的混合溶液。
3.根據(jù)權(quán)利要求I所述的PRV、PCV-2、PPV多重PCR檢測試劑盒,其特征在于陰性對(duì)照為超純水。
4.根據(jù)權(quán)利要求I所述的PRV、PCV-2、PPV多重PCR檢測試劑盒,其特征在于陽性對(duì)照為重組PMD18-T-HBV-S質(zhì)粒。
5.根據(jù)權(quán)利要求I所述的PRV、PCV-2、PPV多重PCR檢測試劑盒,其特征在于PCR酶的組成包括 IOmM 的 Tris-HcL、50mM 的 KCL、1. 5mM 的 MgCL2 以及 0. 05U 的 Poymerase/uL。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種PRV、PCV-2、PPV多重PCR檢測試劑盒,它包括40μL等體積混合的PRV引物、PCV-2引物及PPV引物,PRV引物、PCV-2引物及PPV引物的濃度均為10μM,緩沖液600μL,陰性對(duì)照20μL,PCR酶250μL,超純水170μL,50μL的MarkerDL2000以及陽性對(duì)照20μL。本發(fā)明針對(duì)PRV、PCV-2和PPV存在于同一反應(yīng)體系的情況設(shè)計(jì)了3種引物,采用這3種引物制成的試劑盒,使用該試劑盒能同時(shí)檢測出豬偽狂犬病病毒、豬圓環(huán)病毒及豬細(xì)小病毒,而且特異性和敏感性高、檢測時(shí)間短、檢測成本低,為豬傳染病的防制提供科學(xué)依據(jù)。
文檔編號(hào)C12R1/93GK102676698SQ201210153439
公開日2012年9月19日 申請(qǐng)日期2012年5月17日 優(yōu)先權(quán)日2012年5月17日
發(fā)明者余波, 冉懋韜, 徐景峨, 李干洲, 王璇, 艾玉萍, 譚詩文 申請(qǐng)人:貴州省畜牧獸醫(yī)研究所
網(wǎng)友詢問留言 已有0條留言
  • 還沒有人留言評(píng)論。精彩留言會(huì)獲得點(diǎn)贊!
1
扶余县| 肇庆市| 诸城市| 汕尾市| 平阳县| 嘉鱼县| 化隆| 宁河县| 卢龙县| 巴里| 泾川县| 和政县| 桐柏县| 汤阴县| 仁化县| 墨江| 绥阳县| 兴隆县| 青田县| 漳浦县| 澄江县| 巴南区| 南和县| 镇远县| 克东县| 洪泽县| 大田县| 大足县| 宜都市| 闵行区| 武冈市| 宾川县| 治多县| 定边县| 克什克腾旗| 怀柔区| 高青县| 唐山市| 青铜峡市| 临汾市| 沙湾县|