專利名稱：鏈霉菌、抗腫瘤化合物Spiro-Indimycin A-D及其制備方法和應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于エ業(yè)微生物領(lǐng)域，具體涉及ー種能夠產(chǎn)生多種抗腫瘤化合物的新的鏈霉菌(Streptomyces sp.) SCSIO 03032,以及該菌生產(chǎn)的抗腫瘤化合物Spiro-IndimycinA-D及其制備方法和應(yīng)用。
背景技術(shù)：
近年來，發(fā)現(xiàn)新型海洋放線菌資源，并從中篩選新型的活性次生代謝產(chǎn)物成為國際上海洋微生物研究的重要方向。從海洋放線菌中尋找結(jié)構(gòu)新穎、高效、低毒的代謝產(chǎn)物逐漸成為藥物尋找的新源泉。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的第一個目的是提供一種新的鏈霉菌(Streptomyces sp. ) SCSIO 03032,該菌于2011年7月18日保藏于中國典型培養(yǎng)物保藏中心(CCTCC)，地址中國武漢市武漢大學(xué)，其保藏編號為CCTCC NO M 2011258。本發(fā)明的新的鏈霉菌(Streptomyces sp. ) SCSIO 03032是從印度洋(E87° 59. 7! ,N 9° 59.3')水深3412米的海底沉積物中分離獲得的。I、形態(tài)學(xué)特征和生理生化分析鏈霉菌(Streptomyces sp. ) SCSIO 03032屬于革蘭氏陽性,好氧放線菌,基絲微黃分枝，氣絲灰白色分支井分化成卷曲的孢子鏈；孢子橢球狀(圖2)，長0. 4-0. 7 μ m，表面光滑。在PDA培養(yǎng)基上長勢較弱，在ISP5上生長有可溶性色素產(chǎn)生。接觸酶、脲酶、牛奶凝固和胴化反應(yīng)陽性，明膠液化、黑色素產(chǎn)生和氧化酶反應(yīng)陰性。能水解淀粉、纖維素、吐溫20，40，80 ;H2S產(chǎn)生和硝酸鹽還原反應(yīng)陰性；可以利用D-阿拉伯糖，D-纖維ニ糖，果糖，肌醇，丙酮酸鈉，D-棉子糖，L-鼠李糖，D-甘露醇，D-葡萄糖，D-山梨糖和木糖醇，為唯一碳源和能源生長。而不能利用D-半乳糖，D-乳糖，D-甘露糖，D-核糖，D-海藻糖和D-木糖；對甲氧嘧啶和林可霉素敏感。pH、鹽濃度和溫度的耐受范圍分別為pH 6. 0-9. 0，0-9%和15_40°C。細(xì)胞壁含有L-DAP。優(yōu)勢醌為MK-9(H6)和MK-11 ;主要脂肪酸為i-C15:0(8% ), i-C16:0(24% ),i-C16:1G(14% ), ai-C17:0(15% )和 ai_C17:1A(12% )。G+C 摩爾含量為 71.6(±0.5)%。2、分子生物學(xué)鑒定常規(guī)PCR擴增菌株SCSIO 03032的16S rDNA并測序，其序列如SEQ ID NO. I所示，而后提交到GenBank中，對16S rDNA核苷酸序列進(jìn)行BLAST分析,結(jié)果顯示,該菌株與Streptomyces specialis GW41_1564T的相似度為97 %,重新構(gòu)建該屬系統(tǒng)發(fā)育樹顯示菌株SCSIO 03032聚在該類群，說明該菌株SCSIO 03032為鏈霉菌屬。如圖I所示，通過鄰接法清晰地掲示了該菌株與ー組鏈霉菌屬物種的系統(tǒng)進(jìn)化關(guān)系，表明該菌屬于鏈霉菌屬的一種。根據(jù)以上形態(tài)學(xué)、生理學(xué)、化學(xué)等分析,其與已知最接近的菌株與Streptomycesspecialis GW41_1564T有較大的差異，且基因組雜交顯示其雜交值為23%，遠(yuǎn)低于種內(nèi)差異不不準(zhǔn)的 70% (Stackebrandt, E. & Ebers, J. Taxonomic parameters revisited tarnished gold standards. Microbiol Today. (2006). 33,152-155.);因此，綜合分析多項分類數(shù)據(jù)，鑒定此菌株為鏈霉菌屬(Streptomyces)的一個新種，命名為鏈霉菌(Streptomyces sp.) SCSIO 03032，該菌于2011年7月18日保藏于中國典型培養(yǎng)物保藏中心(CCTCC)，地址中國武漢市武漢大學(xué)，其保藏編號為CCTCC NO M 2011258。本發(fā)明的鏈霉菌(Streptomyces sp. ) SCSIO 03032能夠產(chǎn)生4種具有新穎結(jié)構(gòu)的抗腫瘤化合物 Spiro-indimycin A-D。
因此本發(fā)明的第二個目的是提供化合物Spiro-indimycin A_D,其結(jié)構(gòu)式如式(I)
所示
權(quán)利要求
1.鏈霉菌(Streptomycessp.) SCSIO 03032，其保藏編號為 CCTCC NO M 2011258。
2.化合物Spiro-IndimycinA-D,其結(jié)構(gòu)式如式(I)所示
3.權(quán)利要求2所述的化合物Spiro-indimycinA-D在制備抗腫瘤藥物中的應(yīng)用。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的應(yīng)用，其特征在于,所述的化合物Spiro-indimycinA在制備治療人急性淋巴細(xì)胞白血病藥物中的應(yīng)用。
5.根據(jù)權(quán)利要求3所述的應(yīng)用，其特征在于,所述的化合物Spiro-indimycinB在制備治療人黑色素瘤、人肺癌或人急性淋巴細(xì)胞白血病藥物中的應(yīng)用。
6.根據(jù)權(quán)利要求3所述的應(yīng)用，其特征在于,所述的化合物Spiro-indimycinC在制備治療人肝癌或人肺癌藥物中的應(yīng)用。
7.根據(jù)權(quán)利要求3所述的應(yīng)用，其特征在于,所述的化合物Spiro-indimycinD在制備治療人黑色素瘤、人肝癌或人肺癌藥物中的應(yīng)用。
8.權(quán)利要求I所述的鏈霉菌(Streptomycessp.) SCSIO 03032在用于制備化合物Spiro-indimycin A、B、C 或D 的應(yīng)用。
9.ー種化合物Spiro-indimycin A、B、C或D的制備方法,其特征在于,所述的化合物Spiro-indimycin A、B、C 或 D 是從權(quán)利要求 I 所述的鏈霉菌(Streptomyces sp.) SCSIO03032的發(fā)酵培養(yǎng)物中制備分離得到的。
10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的制備方法，其特征在于，具體步驟如下 a)制備鏈霉菌(Sti^ptomycessp.) SCSIO 03032的發(fā)酵培養(yǎng)物，將該發(fā)酵培養(yǎng)物的發(fā)酵液和菌絲體分離開，發(fā)酵液經(jīng)大孔樹脂吸附，后用丙酮洗脫大孔樹脂，洗脫液回收丙酮后剰余的水混合液用こ酸こ酯萃取，こ酸こ酯層經(jīng)蒸餾濃縮后得到浸膏A ;菌絲體先用丙酮浸提，浸取液回收丙酮后剰余的水混合液再用こ酸こ酯萃取，こ酸こ酯層經(jīng)蒸餾濃縮后得到浸膏B ； b)將浸膏A和浸膏B合并的粗提物經(jīng)硅膠柱層析，用氯仿/甲醇作為洗脫劑，從體積比100 : O O : 100進(jìn)行梯度洗脫，收集氯仿/甲醇體積比95 5梯度洗脫下來的餾分Fr. 1，后經(jīng)ODS反相中壓液相色譜，用水/甲醇作為洗脫劑，從體積比100 : O O : 100進(jìn)行梯度洗脫，收集水/甲醇體積比30 70梯度洗脫下來的餾分Fr. 1-1，再過LH-20凝膠柱，以氯仿/甲醇體積比I : I作為流動相洗脫，用薄層層析追蹤分離，收集薄層板上用氯仿/丙酮體積比為9 I作為展開劑時Rf值為0.8的餾分，即為Spiro-indimycin B，Rf值為O. 6的懼分，即為Spiro-indimycin A ;收集薄層板上用石油醚/こ酸こ酯體積比為 .40 60作為展開劑時Rf值為O. 8的懼分，即為Spiro-indimycin C ;收集薄層板上用石油 醚/こ酸こ酯體積比為50 50作為展開劑時Rf值為O. 8的餾分，即為Spiro-indimycinD0
全文摘要
本發(fā)明公開了一種鏈霉菌、抗腫瘤化合物Spiro-Indimycin A-D及其制備和應(yīng)用。鏈霉菌(Streptomyces sp.)SCSIO 03032于2011年7月18日保藏于中國典型培養(yǎng)物保藏中心(CCTCC)，地址中國武漢市武漢大學(xué)，其保藏編號為CCTCC NOM 2011258。本發(fā)明提供了一種新的鏈霉菌(Streptomyces sp.)SCSIO 03032，該菌可以生產(chǎn)結(jié)構(gòu)新穎的具有抗腫瘤活性的化合物Spiro-Indimycin A、B、C和D，化合物Spiro-Indimycin A、B、C和D除具有罕見的螺環(huán)結(jié)構(gòu)外，還對腫瘤細(xì)胞有選擇性的、高效的活性，是開發(fā)成為高效、低毒的抗腫瘤化合物理想的候選化合物。
文檔編號C12N1/20GK102643765SQ20121008753
公開日2012年8月22日 申請日期2012年3月28日 優(yōu)先權(quán)日2012年3月28日
發(fā)明者張偲, 張慶波, 張文軍, 張海波, 張長生, 李蘇梅, 田新朋, 鞠建華, 馬亮 申請人:中國科學(xué)院南海海洋研究所