專利名稱：用于制定菌落總數(shù)定量曲線的標(biāo)準樣本的制備方法，該定量曲線的制作方法及其應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及用于制定定量曲線的標(biāo)準樣本的制備方法，該定量曲線的制作方法及其應(yīng)用，特別適用于液體樣本中菌落總數(shù)的定量檢測。
背景技術(shù)：
常規(guī)的菌落總數(shù)計數(shù)方法主要包括菌落總數(shù)Petrifilm 測試片法、國標(biāo)GB4789. 2-2010《中華人民共和國國家標(biāo)準-食品安全國家標(biāo)準_食品微生物學(xué)檢驗_菌落總數(shù)測定》中提到的平板計數(shù)法。這些檢測方法耗時較長，工作量大，不利于菌落總數(shù)的快速檢測。目前，開發(fā)出許多利用微生物生長過程中酸堿度變化快速檢測菌落總數(shù)的檢測方法。如實時光電微生物快速檢測系統(tǒng)，通過向培養(yǎng)中的樣本加入酸堿指示劑、并利用比色法監(jiān)測其pH值的變化，當(dāng)pH值達到某一閾值時記錄檢出時間，由檢出時間對照定量曲線判斷樣品中菌落總數(shù)。實時光電微生物快速檢測系統(tǒng)易操作且耗時較短，僅需6-10小時就可得出檢測結(jié)果，其中，定量曲線的制作是準確定量的關(guān)鍵所在。定量曲線制作過程中用到標(biāo)準樣本，用目前的方法制備的標(biāo)準樣本都存在樣本背景不一致的問題，影響定量曲線的準確性，在最終用于菌落總數(shù)的測定時造成不必要的誤差。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供用于制定菌落總數(shù)定量曲線的標(biāo)準樣本的制備方法，使得制備得到的標(biāo)準樣本之間的背景值一致。本發(fā)明的又一目的是提供制作菌落總數(shù)定量曲線的方法，其中標(biāo)準樣本的制備方法使得制備得到的標(biāo)準樣本的背景值一致，可提高菌落總數(shù)定量曲線的準確性。本發(fā)明的另一個目的是提供菌落總數(shù)定量曲線在檢測液體樣本中菌落總數(shù)中的應(yīng)用，提高液體樣本中菌落總數(shù)檢測的準確性。本發(fā)明提供了用于制定菌落總數(shù)定量曲線的標(biāo)準樣本的制備方法，包括以下步驟取不含菌的樣本，調(diào)節(jié)pH至6. 7±0. 2，制成無菌樣本；向每毫升無菌樣本中加入彡IO4CFU且彡IO9CFU的活化的標(biāo)準菌株，并調(diào)節(jié)pH至6. 7±0. 2，獲得富菌樣本；將富菌樣本用無菌樣本進行十倍遞減稀釋，待稀釋后的富菌樣本的理論菌濃度值< 200CFU/毫升時，停止稀釋，制成富菌樣本的十倍遞減系列稀釋液，即為標(biāo)準樣本。本發(fā)明還提供了菌落總數(shù)定量曲線的制作方法，包括以下步驟根據(jù)上述的標(biāo)準樣本的制備方法制備標(biāo)準樣本，標(biāo)準樣本的樣本總數(shù)> 50個；分別將標(biāo)準樣本按相同的每毫升培養(yǎng)基接種量接種到基礎(chǔ)培養(yǎng)基中進行培養(yǎng)，并監(jiān)測接種了標(biāo)準樣本的基礎(chǔ)培養(yǎng)基的PH值的變化，待pH值達到設(shè)定閾值時，記錄標(biāo)準樣本的檢出時間；分別利用菌落總數(shù)平板計數(shù)法對標(biāo)準樣本中的菌落總數(shù)進行計數(shù)，得出每毫升標(biāo)準樣本中菌落總數(shù)；根據(jù)標(biāo)準樣本的檢出時間和每毫升標(biāo)準樣本中菌落總數(shù)的常用對數(shù)值繪制菌落總數(shù)定量曲線。
本發(fā)明又提供了如上所述的菌落總數(shù)定量曲線在檢測液體樣本中菌落總數(shù)中的應(yīng)用，包括以下步驟取與無菌樣本為同種產(chǎn)品的液體樣本，調(diào)節(jié)PH至6. 7±0. 2，制成液體樣本的待檢測液；將待檢測液按上述每毫升培養(yǎng)基接種量接種到基礎(chǔ)培養(yǎng)基中進行培養(yǎng)，并監(jiān)測接種了待檢測液的基礎(chǔ)培養(yǎng)基的PH值的變化，待pH值達到上述設(shè)定閾值時，記錄待檢測液的檢出時間；用待檢測液的檢出時間對照菌落總數(shù)定量曲線，得出每毫升待檢測液中菌落總數(shù)的常用對數(shù)值，并計算每毫升液體樣本中的菌落總數(shù)。在菌落總數(shù)定量曲線在檢測液體樣本中菌落總數(shù)中的應(yīng)用的一種示意性實施方式中，接種時的每毫升培養(yǎng)基接種量為O. 2毫升。在菌落總數(shù)定量曲線在檢測液體樣本中菌落總數(shù)中的應(yīng)用的一種示意性實施方式中，培養(yǎng)的溫度為35°c。在菌落總數(shù)定量曲線在檢測液體樣本中菌落總數(shù)中的應(yīng)用的一種示意性實施方式中，通過比色法監(jiān)測pH值的變化。 在菌落總數(shù)定量曲線在檢測液體樣本中菌落總數(shù)中的應(yīng)用的一種示意性實施方式中，pH值的設(shè)定閾值為5.8。本發(fā)明的標(biāo)準樣本制備方法中，通過制備具有相同背景的無菌樣本和富菌樣本，并將富菌樣本用無菌樣本進行稀釋，制成富菌樣本的十倍遞減系列稀釋液，制成標(biāo)準樣本，使得標(biāo)準樣本的背景值一致。本發(fā)明的制作菌落總數(shù)定量曲線的方法中，利用前述標(biāo)準樣本制備方法制備的標(biāo)準樣本，使得制作的菌落總數(shù)定量曲線能更準確地反映檢出時間與實際菌落量之間的線性關(guān)系，提高了菌落總數(shù)定量檢測時的準確性。本發(fā)明的菌落總數(shù)定量曲線在檢測液體樣本中菌落總數(shù)中的應(yīng)用，使用與液體樣本為同種產(chǎn)品的無菌樣本、通過特定的方法制定菌落總數(shù)定量曲線，用于液體樣本中菌落總數(shù)的檢測，使得檢測結(jié)果更為準確。


以下附圖僅對本發(fā)明做示意性說明和解釋，并不限定本發(fā)明的范圍。圖I是本發(fā)明實施例3生成的用于檢測冰淇淋中菌落總數(shù)的菌落總數(shù)定量曲線。圖2是本發(fā)明實施例4生成的用于檢測液體奶中菌落總數(shù)的菌落總數(shù)定量曲線。
具體實施例方式為了對發(fā)明的技術(shù)特征、目的和效果有更加清楚的理解，現(xiàn)對照

本發(fā)明的具體實施方式
。實施例I :一種標(biāo)準樣本的制備方法。I、溶液試劑。活化的標(biāo)準菌株取弗氏檸檬酸桿菌(ATCC43864)，接種于滅菌的營養(yǎng)肉湯中，于36. 5°C恒溫振蕩培養(yǎng)箱中培養(yǎng)18-24小時，計數(shù)后備用。2、操作步驟。I)取不含菌的融化冰淇淋，調(diào)節(jié)pH至6. 7±0. 2，制成無菌樣本。為了檢測的方便，可根據(jù)樣本的濃稠度，用滅菌的生理鹽水對不含菌的融化冰淇淋進行一定比例的稀釋，再調(diào)節(jié)pH至6. 7 ± O. 2，制成無菌樣本。2)取9份無菌樣本分別加入如下表所示一定量的標(biāo)準菌株，并調(diào)節(jié)pH至6. 7 ±0.2，獲得9份富菌樣本。
權(quán)利要求
1.用于制定菌落總數(shù)定量曲線的標(biāo)準樣本的制備方法，其特征在于，包括以下步驟 取不含菌的樣本，調(diào)節(jié)pH至6. 7±0. 2，制成無菌樣本； 向每毫升所述無菌樣本中加入> IO4CFU且彡IO9CFU的活化的標(biāo)準菌株，并調(diào)節(jié)pH至6. 7±0. 2，獲得富菌樣本；和 將所述富菌樣本用所述無菌樣本進行十倍遞減稀釋，待稀釋后的所述富菌樣本的理論菌濃度值< 200CFU/毫升時，停止所述稀釋，制成所述富菌樣本的十倍遞減系列稀釋液，即為標(biāo)準樣本。
2.菌落總數(shù)定量曲線的制作方法，其特征在于，包括以下步驟 根據(jù)權(quán)利要求I所述的標(biāo)準樣本制備方法制備所述標(biāo)準樣本，所述標(biāo)準樣本的樣本總數(shù)彡50個； 分別將所述標(biāo)準樣本按相同的每毫升培養(yǎng)基接種量接種到基礎(chǔ)培養(yǎng)基中進行培養(yǎng)，并監(jiān)測接種了所述標(biāo)準樣本的所述基礎(chǔ)培養(yǎng)基的PH值的變化，待所述pH值達到設(shè)定閾值時，記錄所述標(biāo)準樣本的檢出時間； 分別利用菌落總數(shù)平板計數(shù)法對所述標(biāo)準樣本中的菌落總數(shù)進行計數(shù)，得出每毫升所述標(biāo)準樣本中菌落總數(shù)；和 根據(jù)所述標(biāo)準樣本的所述檢出時間和所述每毫升所述標(biāo)準樣本中菌落總數(shù)的常用對數(shù)值繪制菌落總數(shù)定量曲線。
3.如權(quán)利要求2所述的菌落總數(shù)定量曲線在檢測液體樣本中菌落總數(shù)中的應(yīng)用，包括以下步驟 取與所述無菌樣本為同種產(chǎn)品的液體樣本，調(diào)節(jié)PH至6. 7±0. 2，制成所述液體樣本的待檢測液； 將所述待檢測液按所述每毫升培養(yǎng)基接種量接種到所述基礎(chǔ)培養(yǎng)基中進行培養(yǎng)，并監(jiān)測接種了所述待檢測液的所述基礎(chǔ)培養(yǎng)基的PH值的變化，待pH值達到所述設(shè)定閾值時，記錄所述待檢測液的檢出時間； 用所述待檢測液的所述檢出時間對照所述菌落總數(shù)定量曲線，得出每毫升所述待檢測液中菌落總數(shù)的常用對數(shù)值，并計算每毫升所述液體樣本中的菌落總數(shù)。
4.如權(quán)利要求3所述菌落總數(shù)定量曲線在檢測液體樣本中菌落總數(shù)中的應(yīng)用，其中，所述接種時的所述每暈升培養(yǎng)基接種量為O. 2暈升。
5.如權(quán)利要求3所述菌落總數(shù)定量曲線在檢測液體樣本中菌落總數(shù)中的應(yīng)用，其中，所述培養(yǎng)的溫度為35°C。
6.如權(quán)利要求3所述菌落總數(shù)定量曲線在檢測液體樣本中菌落總數(shù)中的應(yīng)用，其中，通過比色法監(jiān)測所述pH值的變化。
7.如權(quán)利要求3所述菌落總數(shù)定量曲線在檢測液體樣本中菌落總數(shù)中的應(yīng)用，其中，所述PH值的所述設(shè)定閾值為5. 8。
全文摘要
本發(fā)明涉及用于制定菌落總數(shù)定量曲線的標(biāo)準樣本的制備方法，該定量曲線的制作方法及其應(yīng)用。首先取與待測的液體樣本為同種產(chǎn)品的不含菌的樣本，并調(diào)節(jié)pH值，制成無菌樣本；再向無菌樣本中加入標(biāo)準菌株，并調(diào)節(jié)pH值，制得富菌樣本，用無菌樣本將富菌樣本進行十倍遞減稀釋，制得標(biāo)準樣本。將標(biāo)準樣本進行培養(yǎng)，檢測其pH值達到某一閾值時的檢出時間。同時用平板法檢測標(biāo)準樣本中的菌落總數(shù)。根據(jù)檢出時間和平板法檢測結(jié)果繪制菌落總數(shù)定量曲線。取液體樣本并調(diào)節(jié)pH值，制成待檢測液，并用上述方法得到檢出時間，再對照菌落總數(shù)定量曲線得到液體樣本的菌落總數(shù)。由于本方法平衡了樣本之間的背景值，因此提高了檢測的準確性。
文檔編號C12R1/07GK102952843SQ20111024363
公開日2013年3月6日 申請日期2011年8月24日 優(yōu)先權(quán)日2011年8月24日
發(fā)明者薛志清, 喻東威, 李梅, 趙源, 劉曉川, 劉志楠, 杜麗, 李海礁, 劉衛(wèi)星 申請人:內(nèi)蒙古蒙牛乳業(yè)(集團)股份有限公司