專利名稱：一種精漿α-糖苷酶活性定量檢測試劑盒及應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于生物醫(yī)學檢驗測定技術(shù)領(lǐng)域，涉及一種體外診斷用試劑盒及其應(yīng)用， 具體地說是一種精漿α-糖苷酶活性定量檢測試劑盒及其應(yīng)用。
背景技術(shù)：
附睪是精子輸送、成熟、貯存的場所，附睪分泌功能的下降會對精子的活性和功能產(chǎn)生不良影響。目前，用以檢測附睪分泌功能的指標有甘油磷酸膽堿、左旋肉堿以及α-糖苷酶(α -糖苷酶)。研究表明，與左旋肉堿和甘油磷酸膽堿相比，在輸精管結(jié)扎和確診為生殖道梗阻的患者中，α -糖苷酶對附睪分泌功能的檢測更加特異和靈敏，被認為是附睪分泌功能的標志酶和特異性酶。在輸精管結(jié)扎、梗阻、切除或先天性精囊缺如、發(fā)良不良的患者中，α-糖苷酶活性顯著降低；另外，在不完全射精或射精過頻以及附睪炎、附睪分泌功能紊亂的患者中，該酶活性也呈現(xiàn)下降現(xiàn)象。相反，α-糖苷酶活性越高，則精子與透明帶結(jié)合能力越強，宮腔內(nèi)人工授精成功的可能性越大。精漿α-糖苷酶結(jié)合其它指標如精漿果糖、精子染色等的檢測，還可實現(xiàn)梗阻性無精子癥患者的梗阻部位定位，分泌型或排泄型無精癥的鑒別、附睪水平上局部梗阻的判斷等，被認為是一種快速、敏感、無創(chuàng)傷性的檢測方法。目前，精漿α -糖苷酶(a -GLUC)活性定量檢測的方法主要是化學比色法，該法多為手工或半自動操作，加樣程序多，操作步驟復雜，試劑和樣品混勻一定的時間后，通過分光光度計逐一比色測定，再根據(jù)公式計算出結(jié)果，不但耗時耗力，而且人為誤差也比較大。現(xiàn)在，臨床生化檢驗基本上都實現(xiàn)了自動化分析。全自動生化儀就是將原始手工操作過程中的取樣、混勻、溫育、檢測、結(jié)果計算、判斷、顯示和打印結(jié)果及清洗等步驟全部或者部分自動運行，由于其測量速度快、準確性高、消耗試劑量小，現(xiàn)已在各級醫(yī)院、防疫站、計劃生育服務(wù)站等得到了廣泛應(yīng)用，配合使用可大大提高常規(guī)生化檢驗的效率和收益。 遺憾的是，截止到目前，無論是國外還是國內(nèi)，對于精漿α -糖苷酶項目的檢測，除了早期的科研成果外，尚沒有一種可與全自動生化儀相配套的、商品化的檢測試劑盒問世，因此， 建立一種與全自動生化儀相配套使用的精漿α-糖苷酶活性定量檢測試劑盒及檢測方法就顯得尤為迫切和重要。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于克服現(xiàn)有技術(shù)的不足，填補市場上的空缺，提供一種與全自動生化儀相配套使用的精漿α-糖苷酶活性定量檢測試劑盒。本發(fā)明的另一目的在于提供所述精漿α -糖苷酶活性定量檢測試劑盒在檢測精漿α-糖苷酶活性中的應(yīng)用。為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明采用了如下的技術(shù)方案一種精漿α -糖苷酶活性定量檢測試劑盒，包括Rl試劑和R2試劑，其中Rl試劑包括以下含量的組份:90-110mmol/L pH6. 8-7. 0緩沖液、1. 0-3. 0U/L葡萄糖氧化酶、
31. 0-2. 5U/L過氧化物酶和0. 01-0. 防腐劑；R2試劑包括以下含量的組份90-110mmol/ LpH6. 8-7. 0 緩沖液、100-115mmol/L 生色劑、70-100mmol/L 麥芽糖、0. 2-1. Ommol/L 4-氨基安替比林和0.01-0. 防腐劑；其中，所述生色劑為苯酚、2，4_ 二氯酚、3，5-二氯-2-羥基苯磺酸鈉或4-氨基-3-甲基苯甲酸；所述緩沖液為磷酸鹽緩沖液或Tris緩沖液；所述防腐劑為硫柳汞、慶大霉素或ftx)Clin系列防腐劑中任意一種。所述的精漿α -糖苷酶活性定量檢測試劑盒在檢測精漿α _糖苷酶活性中的應(yīng)用。其中，利用精漿α -糖苷酶活性定量檢測試劑盒監(jiān)測檢測精漿α -糖苷酶活性，包括如下步驟1)樣品制備新鮮精液液化后通過3000 5000rpm離心10 20min，所獲得的上
清液即是；2)在全自動生化儀上輸入基本參數(shù)如下檢測項目α-GLUC；樣品試劑比1 60;試劑比例R1 R2 = 1 4 ；檢測方法速率法；定標方法因子法；主波長500-520nm ；輔波長600-700nm；反應(yīng)方向上升；反應(yīng)時間140-270秒；檢測時間90-120秒；3)定標操作采用因子法定標，直接輸入理論因子F值即可；F值的計算公式如下
權(quán)利要求
1.一種精漿α-糖苷酶活性定量檢測試劑盒，其特征在于，包括Rl試劑和R2試劑，其中Rl試劑包括以下含量的組份:90-110mmol/L ρΗ6· 8-7. 0緩沖液、1. 0-3. 0U/L葡萄糖氧化酶、1. 0-2. 5U/L過氧化物酶和0. 01-0. 1 %防腐劑；R2試劑包括以下含量的組份:90-110mmol/L ρΗ6· 8-7. 0 緩沖液、100-115mmol/L 生色劑、70-IOOmmol/L 麥芽糖、 0. 2-1. Ommol/L 4-氨基安替比林禾口 0. 01-0. 防腐劑；其中，所述生色劑為苯酚、2，4- 二氯酚、3，5- 二氯-2-羥基苯磺酸鈉或4-氨基-3-甲基苯甲酸；所述緩沖液為磷酸鹽緩沖液或Tris緩沖液；所述防腐劑為硫柳汞、慶大霉素或ftx)Clin系列防腐劑中任意一種。
2.權(quán)利要求1所述的精漿α-糖苷酶活性定量檢測試劑盒在檢測精漿α-糖苷酶活性中的應(yīng)用。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的應(yīng)用，其特征在于包括如下步驟1)樣品制備新鮮精液液化后通過3000 5000rpm離心10 20min，所獲得的上清液即是；2)在全自動生化儀上輸入基本參數(shù)如下 檢測項目α -GLUC ；樣品試劑比1 60; 試劑比例R1 R2 = 1 4 ； 檢測方法速率法； 定標方法因子法； 主波長500-520nm ； 輔波長600-700nm ； 反應(yīng)方向上升； 反應(yīng)時間140-270秒； 檢測時間90-120秒；3)定標操作采用因子法定標，直接輸入理論因子F值即可； F值的計算公式如下理論因子 F= 103)<VtX 1000 ε χ LxVs其中，IO3為mmol至μ mol的轉(zhuǎn)化系數(shù)；Vt為反應(yīng)液總體積；ε為醌亞胺的理論摩爾消光系數(shù)即13. 78XlO3 ;L為比色皿光徑(Icm) ；Vs為樣品體積;4)樣本檢測將制備好的精漿樣本和Rl試劑、R2試劑放在全自動生化儀的相應(yīng)位置上，全自動生化儀根據(jù)理論因子得出樣本中α-糖苷酶的活性酶活性單位U定義在上述反應(yīng)條件下，每分鐘催化1 μ mol麥芽糖分解所需的酶量為一個酶活性單位；精漿中α-糖苷酶活性(U/L) = Δ A/minX F 其中，ΔΑ/min即每分鐘吸光度的變化率，F(xiàn)值為已知。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種精漿α-糖苷酶活性定量檢測試劑盒，包括R1試劑和R2試劑；R1試劑包括以下含量的組份90-110mmol/L pH6.8-7.0緩沖液、1.0-3.0U/L葡萄糖氧化酶、1.0-2.5U/L過氧化物酶和0.01-0.1％防腐劑；R2試劑包括以下含量的組份90-110mmol/L pH6.8-7.0緩沖液、100-115mmol/L生色劑、70-100mmol/L麥芽糖、0.2-1.0mmol/L 4-氨基安替比林和0.01-0.1％防腐劑。本發(fā)明還公開了該精漿α-糖苷酶活性定量檢測試劑盒在測定精漿α-糖苷酶活性中的應(yīng)用。本發(fā)明僅采用2種液體試劑，試劑種類和用量都減少了許多；采用速率法檢測，樣本不需預(yù)稀釋，縮短了反應(yīng)時間；與全自動生化儀配套使用，簡化了步驟，節(jié)省了試劑，降低了人為誤差，自動化、規(guī)模化的檢測，在提高檢測結(jié)果準確性和可靠性的同時，大大提高了檢測效率。
文檔編號C12Q1/26GK102277410SQ201110233989
公開日2011年12月14日 申請日期2011年8月16日 優(yōu)先權(quán)日2011年8月16日
發(fā)明者陸金春, 陳曉慧, 高建 申請人:南京欣迪生物藥業(yè)工程有限責任公司