專利名稱：利用孕婦外周血建立胎兒dna文庫的方法
技術領域：
本發(fā)明屬于分子生物學技術領域，具體涉及一種利用孕婦外周血建立胎兒DNA文 庫的方法。
背景技術：
新生兒中有少部分存在先天性遺傳病或出生缺陷，給社會和家庭帶來巨大的經(jīng)濟 和精神負擔。2007年中國有1564萬新生兒出生，其中出生缺陷率超過1%。出生缺陷是影 響我國全民健康水平和人口素質(zhì)的重要問題。國家“十一五”規(guī)劃綱要將生殖健康相關技 術列為科技發(fā)展優(yōu)先主題；2006-2020年國家中長期規(guī)劃也將“出生缺陷防治”作為重點領 域和優(yōu)先主題。我國每年約出生80 120萬缺陷嬰兒；造成經(jīng)濟損失約10億元人民幣。 遺傳病是新生兒缺陷的最主要原因之一，而且許多先天性出生缺陷往往缺乏有效的治療方 法，因此早期診斷和預防是目前降低出生缺陷的最有效措施。遺傳缺陷的種類多，成因復雜。比如，其中由拷貝數(shù)的變化導致遺傳缺陷的疾病包 括21號染色體三體綜合癥(唐氏綜合癥)，18號染色體三體綜合癥(愛德華綜合癥)；13 號染色體三體綜合癥(Patau綜合征)等。其中由DNA甲基化或三核苷酸重復突變導致遺 傳缺陷的疾病包括X染色體易損綜合癥(Fragile X)。其中由基因多態(tài)性導致遺傳缺陷的 疾病包括年齡相關性黃斑變性，假性剝脫綜合征和阿爾茲海默病。目前認為，對孕婦進行胎兒基因或染色體診斷是降低畸形兒出生率最為有效的辦 法之一。現(xiàn)在世界上進行這類診斷通常是在孕期第16到18周間進行的，辦法一是通過子 宮穿刺羊膜腔，從羊水中獲取胚胎細胞，二是提取胎盤組織進行活體檢查，但這兩種辦法都 比較復雜，且都是采用介入式方法進行，對孕婦和胎兒有可能引起一定的損傷，甚至有時會 引發(fā)宮內(nèi)感染、羊膜破裂、流產(chǎn)、胎兒畸形或死亡等。由于其潛在的風險，此類診斷臨床上一 般只針對高齡孕婦和有家族畸形遺傳史的孕婦進行，其排查和檢測的范圍小，因此，也難以 對整個新生兒先天性遺傳病或出生缺陷的產(chǎn)前診斷做出足夠的貢獻。目前，開發(fā)新的方便、安全的胎兒基因或染色體診斷技術是國內(nèi)外相關領域的熱 點領域。比如從外周血中獲取或富集胚胎細胞用于胎兒遺傳診斷近年來取得了一定的進 展。如法國國家衛(wèi)生與醫(yī)學研究所(INSERM)的科學家利用胚胎細胞比母體血液細胞大的 特點，嘗試從孕婦的血液中分離出胚胎細胞，然后再通過分析母體和父體基因的遺傳特性， 進行細胞篩選。對13名孕期為11到12周的 孕婦進行的診斷實驗表明，這種細胞篩選法是 可行的，母體血液化驗法在理論上可以替代羊膜腔穿刺術和胎盤活組織檢查。但是其檢查 不同胎兒畸形癥狀時的敏感性、可靠性還有待確認，且由于胚胎細胞數(shù)量少，對于檢驗仍然 存在較大的困難。本領域需要提供更方便、安全的非介入性胎兒基因或染色體診斷相關技術。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明要解決的技術問題是提供一種安全、便捷、非介入式的自動化的可在芯片上直接完成的胎兒基因文庫的建立方法。本發(fā)明解決該技術問題采用的技術方案是提供一種利用孕婦外周血建立胎兒的 DNA文庫的方法。本發(fā)明方法包括以下步驟a、從孕婦的外周血液中提取DNA ；b、對DNA進行末端修復獲得具有磷酸化平末端的DNA片段；c、在DNA片段3’端先添加互補的“A”堿基；d、使用接頭序列修飾DNA片段的末端；e、擴增得到DNA文庫。其中，上述方法步驟a從孕婦的外周血中提取DNA，提取量在1 5ng。優(yōu)選使用 Qiagen公司的spin column進行。所述的孕婦外周血包括靜脈血、動脈血或指尖采集的血 液均可。其中，上述方法步驟b通過使用T4DNA聚合酶、大腸桿菌DNA多聚酶I大片段 (Klenow片段)和多核苷酸激酶T4，使DNA片段成磷酸化的平末端。其中，上述方法步驟c是在步驟b獲得的DNA片段的3’端使用3’到5’外切酶活 性缺失了的Klenow片段添加互補的“A”堿基，以便得到3’端加上了單個“T”堿基突出端 的磷酸化的DNA片段的平末端。其中，上述方法步驟d是測序用接頭序列與DNA片段的兩端進行連接修飾；所述接 頭序列為接頭序列1接頭序列Ia :5，ACACTCTTTCCCTAC ACGACGCTCTTCCGATCT 3，SEQ ID No 1，接頭序列Ib :3，TGTGAGAAAGGGATG TGCTGCGAGAAGGCTAGp 5，(按 5，端到 3，端為5，pGATCGGAAGAGCGTCGT GTAGGGAAAGAGTGT 3，，即 SEQ ID No 2,5'端的“P”表示5’端磷酸化)，接頭序列2接頭序列2a :5，pGATCGGAAGAGCTCGTATG CCGTCTTCTGCTTG 3，SEQ ID No 3接頭序列2b :3，TCTAGCCTTCTCGAGCATAC GGCAGAAGACGAAC 5，。(按 5，端到 3，端為5，CAAGCAGAAGACGG CATACGAGCTCTTCCGATCT 3，BP SEQ ID
No 4)其中，上述方法步驟d是用PCR方法擴增接頭序列修飾后的DNA片段，制得DNA文 庫；所述的PCR擴增的引物對的序列為PCR 引物序歹Ij 1(SEQ ID No 5)5， AATGATACGGCGACCACCGA GATCTACACTCTTTCCCTAC ACGACGCTCTTCCGATCT 3’ ；PCR引物序列2:3’ TCTAGCCTTCTCGAGCATAC GGCAGAAGACGAAC 5，。(按 5，端至Ij 3，端為5，CAAGCAGAAGACGG CATACGAGCTCTTCCGATCT 3，，即 SEQ ID
No 6)。其中，上述方法中使用的孕婦的外周血為最早9孕周的外周血。如9孕周或9 到12孕周。
本發(fā)明還提供了上述方法所制備的胎兒DNA文庫。本發(fā)明另外還提供了一種胎兒基因組序列分析的方法。該方法實是使用上述的方 法所制備的胎兒DNA文庫進行測序分析，且測序引物序列為(SEQ ID No 7)5， ACACTCTTTCCCTAC ACGACGCTCTTCCGATCT 3，。本發(fā)明的有益效果在于本發(fā)明方法能夠快速、高效地從孕婦的外周血中建立離 體的DNA文庫，并能實現(xiàn)自動化的建立過程，盡量避免人工操作可能帶來的的錯誤和污染。 該文庫中含有胎兒的基因組序列，并且每個DNA片段的兩端連接有測序引物和連接接頭， 能夠方便地進行快速準確地測序，從而能準確地獲得胎兒基因組序列數(shù)據(jù)，從而用于胎兒 的先天性遺傳病或出生缺陷。使用本發(fā)明方法，能早在妊娠9周，就利用孕婦血液循環(huán)中游 離的DNA來建立胎兒的有效DNA文庫，大為減輕后繼處理帶來的風險。建立的DNA文庫能使 用測序儀很快產(chǎn)生測序分析得到檢測報告，經(jīng)試驗證明，檢測21號染色體三體綜合征，13 三體綜合征，18三體綜合征等可以同時完成。且結果準確，無假陽性和無假陰性。并且檢測 可以用于少量的離體外周血液樣本，大大減輕了孕婦的痛苦和風險，具有很好的應用前景。


圖1為本發(fā)明方法的流程簡圖。圖2為本發(fā)明方法中加上接頭序列后的DNA片段的結構示意圖，同時示意表示接 頭序列、測序引物及PCR引物間的關系。圖3為構建的文庫中的各個片段的結構以及接頭序列、測序引物及PCR引物間圖4為使用對使用本發(fā)明方法建立的7個胎兒樣本DNA文庫進行的測序診斷結 果?？v坐標表示為Z值；橫坐標表示為1號 第22號染色體，以及X染色體。每個橫坐標 的染色體號段內(nèi)，從左到右依次為1 7號樣本的結果。第1、2、3、4、5號樣本為T21 (21號 染色體三倍體，此時軟件顯示的Z-值大于6)的情況，即會患有唐氏綜合癥。第6、7號的胎 兒樣本的檢測結果表明基因組是正常的整倍體；
具體實施例方式以下通過具體實施方式
，對本發(fā)明進行具體的說明。可自動化制備“孕婦血液中自由流動的胎兒DNA文庫”的創(chuàng)新技術是在以前利用 柱子制備DNA文庫技術上的改進技術，或者叫做“芯片實驗室技術”。本發(fā)明開發(fā)了一項“芯片實驗室”技術，該技術實現(xiàn)了 DNA文庫制備的自動化。與 現(xiàn)有技術相比，本發(fā)明技術的優(yōu)越性在于1.無需Meven Quake博士曾報道和利用過的 凝膠電泳及膠回收步驟(參考文獻Fan et al, Proc Natl Acad Sci U S A. 20080ctober 21 ； 105 (42) :16266-16271).凝膠電泳和膠回收步驟不僅易造成樣品交叉污染，而且耗 時費力，整個過程不能實現(xiàn)自動化。2.由Dermis Lo和Rossa Chiu研究小組報道的利 用柱子制備 DNA 文庫的技術(Proc Natl Acad Sci U S A. 2008December 23 ；105(51) 20458-20463.)，雖可避免由凝膠電泳和膠回收方法導致的樣品交叉污染，但其仍然耗時費 力，而且也不能自動化。然而，本發(fā)明的“芯片實驗室”技術是應用芯片中的分離通道制備所有的DNA文 庫，該步驟可完全自動化完成。與現(xiàn)有技術相比，本發(fā)明中所使用的技術的優(yōu)越性在于1.不需要凝膠電泳和膠回收步驟，因此避免了樣品交叉污染的可能性。2.由于從血漿DNA 提取到序列數(shù)據(jù)庫制備的整個過程都是可在芯片上完成，只需一鍵操作，因此以本發(fā)明DNA 文庫制備方法為基礎的“芯片實驗室”技術具有非常高的通量。如采用以前的方法，一個人 一天可處理4-8個文庫。而利用自動化的“芯片實驗室”，每臺儀器一天至少可處理20-40 個文庫。如有10臺儀器，那么每天可處理200-400個文庫，大大提高了處理效率和減少了 獲得檢測結果的時間。結合可用于分析Illumina測序儀HKeq2000測序結果的統(tǒng)計學軟件。因此，就可 以構成一套完整的從孕婦血中進行無創(chuàng)傷檢測唐氏綜合征的軟硬件綜合系統(tǒng)，這在實際應 用中有很好的應用前景。更難能可貴的是，能早在第9孕周就獲得準確的檢測結果，具有重 要的意義。以下是“基于芯片實驗室和下一代測序技術的無創(chuàng)傷檢測唐氏綜合征”的流程第一步從孕婦血液中提取DNA(1 5納克)上樣于“芯片實驗室”，制備測序用文庫。第二步上樣于“下一代測序儀”(Illumina測序儀)，進行DNA測序分析。第三步對測序結果進行統(tǒng)計學分析，得到胎兒診斷結果是否患唐氏綜合征。本發(fā)明要關注的主要是關鍵的第一步，及即準確快速、無污染且能自動化地建立 測序用文庫的方法。設備貝克曼公司(Beckman Coulter, Inc.)芯片實驗室SPRI-TE Instrumentcatalog #A50100, SPRIworks Fragment Library Kit I catalog # A84803。實施例一使用本發(fā)明方法建立基因文庫一、DNA 的獲取從孕婦的離體外周血液中提取的DNA片段。獲取孕婦的離體外周血漿，使用試劑盒QIAamp DNA Midi reagent set(Qiagen，德 國，catlog # 51183)提取血漿中的游離DNA，方法是使用該試劑盒中的血液和體液處理方 法(〃 blood and body fluid" protocol)。DNA 的純化過程使用 the QIAamp DNA Blood Mini Kit試劑盒自動進行在QIAcube (QiaRen 9001292)上進行，此步驟可通過這些試劑盒 自動完成。二、末端修復從孕婦的血液中提取的DNA是雙鏈DNA片段，這些片段是平端的，或含有3或5’ 突出端。這一步是通過T4DNA聚合酶，大腸桿菌DNA多聚酶I大片段(Klenow片段)，和多 核苷酸激酶T4，使突出端磷酸化成平末端。3’到5’外切酶活性去除3’突出端，聚合酶活 性填充5’突出端。Sambrook等(1989)對這一步過程做了更詳細的解釋。重要的是這種方 法采用了大腸桿菌DNA多聚酶I大片段(Klenow片段)，而不是用步驟三使用的缺失了 3’ 到5’外切酶活性的Klenow片段。材料從血漿DNA 中提取 DNA (DNA 1 至 5ng，30 μ 1 水)。T4DNA連接酶緩沖液與IOmM ΑΤΡ。dNTPs 的混合物(IOmM)。T4DNA 聚合酶(3 單位 / μ 1)。
Klenow 片段(5 單位 / μ 1)。Τ4ΡΝΚ (Τ4多核苷酸激酶，10單位/ μ 1)，QIAquick PCR擴增純化試劑盒OiIAGEN 公司，目錄編號#28104)。程序1、以1 5的比例，用水稀釋lU/ul濃度的DNA偶合聚合酶。2、準備以下反應的組合IOng 血漿 DNA 的 DNA30 μ 1/K10 μ 1含IOmM ATP的T4DNA連接酶緩沖液5 μ 1含IOmM dNTPs的T4DNA連接酶緩沖液2 μ 1T4DNA 聚合酶1 μ 1Klenow 片段(稀釋為 lU/ul)1 μ 1Τ4ΡΝΚ1 μ 1_共有50 μ 13、在PCR儀保持30分鐘，溫度20 V。4、純化——按照MinElute PCR純化試劑盒和方法，用QIAquick MinElute柱進行 純化，用34 μ 1的洗脫緩沖液EB(Elution Buffer)洗脫。三、具有加了 “A”堿基的3’端的DNA片段的獲取接頭序列需要連接到在3’端加上了單個“T”堿基突出端的磷酸化的DNA片段的 平末端。要進行這一連接，需要先在第一步獲得的DNA模板片段的3’端先添加互補的“A” 堿基。而這需要使用缺失了 3’到5’外切酶活性的Klenow片段來完成。材料第二步獲得的DNACM μ 1)Klenow 緩沖液(IOX)dATP (ImM)Klenow片段(缺失3’到5’外切酶活性)(5單位/ μ 1)PCR 儀MinElute PCR純化試劑盒(QIAGEN天根公司，目錄編號#28004)。這一步使用的是Qiaquick MinElute柱，而不是普通的Qiaquick柱。程序1、準備以下反應的體系從第1 步的 DNA34 μ 1Klenow 緩沖液5μ 1dATP10 μ 1Klenow片段(缺失3’到5’外切酶活性)1 μ 1_共有50 μ 12、在37°C孵育30分鐘。
3、純化——按照MinElute PCR純化試劑盒和方法，用QIAquick MinElute柱進行 純化，用
0100]10 μ 1的洗脫緩沖液洗脫。
0101]四、接頭與DNA片段的兩端進行連接
0102]連接反應需要接頭序列
0103]接頭序列1
0104]接頭序列Ia 5，ACACTCTTTCCCTAC ACGACGCTCTTCCGATCT3，
0105]接頭序列Ib 3，TGTGAGAAAGGGATG TGCTGCGAGAAGGCTAGp 5，
0106]接頭序列2
0107]接頭序列2a 5，pGATCGGAAGAGCTCGTATG CCGTCTTCTGCTTG 3，
0108]接頭序列2b 3，TCTAGCCTTCTCGAGCATAC GGCAGAAGACGAAC 5，
0109]另外還需要PCR用的引物序列以及DNA測序所使用的引物序列
0110]PCR引物序列1:
0111]5， AATGATACGGCGACCACCGA GATCTACACTCTTTCCCTAC ACGACGCTCTTCCGATCT 3'
0112]PCR引物序列2:
0113]3' TCTAGCCTTCTCGAGCATAC GGCAGAAGACGAAC 5'
0114]ij ；!5弓L·歹[J (Genomic DNA Sequencing Primer),
0115]5， ACACTCTTTCCCTAC ACGACGCTCTTCCGATCT 3，
0116]接頭序列、PCR引物、測序引物之間的關系及在文庫構建中的作用可直觀的參見圖 和圖3
0117]材料
0118]第三步處理后的DNA(10 μ 1)；
0119]DNA連接酶緩沖液QX)；
0120]接頭序列1和2等比混合物；
0121]DNA連接酶(1單位/μ 1)
0122]QIAquick PCR擴增純化試劑盒OiIAGEN公司，目錄編號#28104)
0123]其中購自Illumina的接頭序列混合使用前用1 10比例稀釋，以適應本方法中 較小量的DNA。
0124]
0125]
0126]
0127]
0128]
0129]
0130]
0131]
0132]
0133]
程序
1、準備以下反應的體系 第三步的處理后的DNA DNA連接酶緩沖液 接頭序列混合物(1 10稀釋) DNA連接酶
10 μ 1 15μ 1 1 μ 1
4μ 1
共有30 μ 1
2、室溫，孵育15分鐘。
3、純化——按照MinElutePCR純化試劑盒和其說明書的方法，用QIAquick
MinElute柱進行純化，用30 μ 1的洗脫緩沖液EB洗脫。
五、將修飾后的DNA片段與PCR擴增接頭序列進行將接頭序列修飾的DNA 23/30 μ 1添加到PCR儀進行擴增制備文庫。使用15次 PCR循環(huán)以確保凝膠純化步驟有足夠的產(chǎn)量。材料用MinElute PCR純化試劑盒OiIAGEN公司，目錄編號#28004)第四步處理后的DNA (30 μ 1)。水。試劑盒含的2 X PCR擴增用Master混合物。PCR引物序列15， AATGATACGGCGACCACCGA GATCTACACTCTTTCCCTAC ACGACGCTCTTCCGATCT 3'；PCR引物序列23’ TCTAGCCTTCTCGAGCATAC GGCAGAAGACGAAC 5，。PCR 儀。程序1、準備以下PCR反應的體系DNA23 μ 1Phusion DNA 聚合酶25 μ 1PCR 引物 1Ιμ PCR 引物 21 μ 1_共有50 μ 12、按以下方法進行PCR技術擴增30 秒至 98 °C;然后[98°C，10秒；65°C，30 秒；72°C，30 秒]個循環(huán)；然后5 分鐘，72 °C;然后將產(chǎn)物保存于4°C。3、純化——按照MinElute PCR純化試劑盒和其說明書的方法，用QIAquick MinElute柱進行產(chǎn)物的純化，用10 μ 1的洗脫緩沖液EB洗脫。制備得到DNA文庫，保存待用。用上述的構建文庫的方法，結合可用于分析Illumina測序儀Hikq2000測序結果 的統(tǒng)計學軟件，就可以構成一套完整的從孕婦血中進行無創(chuàng)傷檢測唐氏綜合征的軟硬件綜 合系統(tǒng)，這在實際應用中有很好的應用前景。以下是“基于芯片實驗室和下一代測序技術的無創(chuàng)傷檢測唐氏綜合征”的流程第一步從孕婦血液中提取DNA (1 5ng)上樣于“芯片實驗室”，制備測序用文庫。第二步上樣于“下一代測序儀”(Illumina測序儀)，進行DNA測序分析。第三步對測序結果進行統(tǒng)計學分析，得到胎兒診斷結果是否患唐氏綜合征。本發(fā)明要關注的主要是關鍵的第一步，及即準確快速、無污染且能自動化地建立 測序用文庫的方法。實施例二使用本發(fā)明方法建立的基因文庫測序進行產(chǎn)前診斷試驗方法
獲取7個孕婦的9孕周的離體血漿(為保護孕婦及胎兒的隱私，孕婦的私人信 息不便給出)，利用實施例一的方法在貝克曼公司(Beckman Coulter, Inc.)的芯片實驗 室上構建各個胎兒的DNA文庫，然后將DNA文庫上樣于Illumina測序儀，使用測序引物 5，ACACTCTTTCCCTAC ACGACGCTCTTCCGATCT3，進行DNA測序分析，獲得測序的統(tǒng)計分析結果， 即序列分析統(tǒng)計軟件得出的每個DNA文庫的對應各染色體(包括第1號 第22號染色體， 以及X染色體)的Z值。試驗結果測序?qū)嶒灲Y果見圖4，圖4可見各個樣本的各條染色體的Z-值 (Z-score)，第6、7號的胎兒樣本的檢測結果表明基因組是正常的整倍體；而第1、2、3、4、5 號樣本為T21(21號染色體三倍體，此時軟件顯示的Z-值大于6)的情況，即會患有唐氏綜合癥。經(jīng)過胎兒出生后進行驗證，表明上述的關于21號染色體的分析結果是完全正確 的。
權利要求
1.一種利用孕婦外周血建立胎兒的DNA文庫的方法，其特征在于包括以下步驟a、從孕婦的外周血液中提取DNA；b、對DNA進行末端修復獲得具有磷酸化平末端的DNA片段；C、在DNA片段3，端先添加互補的“A”堿基；d、使用接頭序列修飾DNA片段的末端；e、擴增得到DNA文庫。
2.根據(jù)權利要求1所述的利用孕婦外周血建立胎兒的DNA文庫的方法，其特征在于 所述步驟a從孕婦的外周血中提取DNA提取量在1 5ng。
3.根據(jù)權利要求1所述的利用孕婦外周血建立胎兒的DNA文庫的方法，其特征在于 所述步驟b通過使用T4DNA聚合酶、大腸桿菌DNA多聚酶I大片段(Klenow片段)和多核 苷酸激酶T4，使DNA片段成磷酸化的平末端。3.根據(jù)權利要求1所述的利用孕婦外周血建立胎兒的DNA文庫的方法，其特征在于所 述步驟c是在步驟b獲得的DNA片段的3’端使用3’到5’外切酶活性缺失的Klenow片段 添加互補的“A”堿基，以得到3’端加上了單個“T”堿基突出端的磷酸化的DNA片段的平末 端。
4.根據(jù)權利要求1所述的利用孕婦外周血建立胎兒的DNA文庫的方法，其特征在于 所述步驟d是測序用接頭序列與DNA片段的兩端進行連接；接頭序列為接頭序列1 接頭序列 Ia :5，ACACTCTTTCCCTAC ACGACGCTCTTCCGATCT 3，接頭序列 Ib :3’ TGTGAGAAAGGGATG TGCTGCGAGAAGGCTAGp 5’ ；接頭序列2 接頭序列 2a :5，pGATCGGAAGAGCTCGTATG CCGTCTTCTGCTTG 3，接頭序列 2b :3，TCTAGCCTTCTCGAGCATAC GGCAGAAGACGAAC 5，。
5.根據(jù)權利要求1所述的利用孕婦外周血建立胎兒的DNA文庫的方法，其特征在于 所述步驟d是用PCR方法擴增接頭序列修飾后的DNA片段，制得DNA文庫；所述的PCR擴增 的引物對的序列為PCR引物序列15' AATGATACGGCGACCACCGA GATCTACACTCTTTCCCTAC ACGACGCTCTTCCGATCT 3'PCR引物序列23’ TCTAGCCTTCTCGAGCATAC GGCAGAAGACGAAC 5’。
6.利用權利要求1 5任一項所述的方法所制備的胎兒DNA文庫。
7.胎兒基因組序列分析的方法，其特征在于使用權利要求1 5任一項所述的方法 所制備的胎兒DNA文庫進行測序分析，且測序引物序列為`5， ACACTCTTTCCCTAC ACGACGCTCTTCCGATCT 3，。
全文摘要
本發(fā)明屬于分子生物學技術領域，具體涉及用孕婦外周血建立胎兒DNA文庫的方法。本發(fā)明要解決的技術問題是提供一種安全、便捷、非介入式的胎兒基因文庫的建立方法。本發(fā)明技術方案是提供一種利用孕婦外周血建立胎兒的DNA文庫的方法a、從孕婦的血液中提取DNA(1～5ng)，b、對DNA進行末端修復獲得具有磷酸化平末端的DNA片段；c、在DNA片段3′端先添加互補的“A”堿基；d、使用接頭序列修飾DNA片段的末端；e、擴增得到DNA文庫。使用本發(fā)明方法，能早在妊娠9周，就利用母體血液循環(huán)中游離的DNA來建立胎兒的有效DNA文庫，用于產(chǎn)前診斷，尤其可以直接地用于自動化的芯片檢測系統(tǒng)使用，具有很好的應用前景。
文檔編號C12Q1/68GK102127818SQ201010589408
公開日2011年7月20日 申請日期2010年12月15日 優(yōu)先權日2010年12月15日
發(fā)明者張康, 高遠 申請人:張康