專利名稱：癌癥發(fā)生或轉(zhuǎn)移的診斷試劑的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于生物技術(shù)領(lǐng)域；更具體地，本發(fā)明涉及癌癥發(fā)生或轉(zhuǎn)移的診斷試劑。
背景技術(shù)：
肺癌是世界上最常見(jiàn)的惡性腫瘤之一，其發(fā)病和致死率近年有明顯上升趨勢(shì)，由于肺癌的高轉(zhuǎn)移性，絕大多數(shù)臨床上確診的肺癌患者通常已是晚期，往往出現(xiàn)了腫瘤轉(zhuǎn)移以及擴(kuò)散，手術(shù)治療的可能性極低。因此早期發(fā)現(xiàn)、早期治療至關(guān)重要。近年來(lái)，隨著分子生物學(xué)、免疫學(xué)及生物化學(xué)等相關(guān)學(xué)科的飛速發(fā)展，血清中腫瘤標(biāo)記物檢測(cè)逐漸用于腫瘤早期診斷、評(píng)估預(yù)后及觀察療效、復(fù)發(fā)及轉(zhuǎn)移等方面。與肺癌相關(guān)的腫瘤標(biāo)志物的檢測(cè)對(duì)肺癌的早期診斷具有重要的臨床意義。轉(zhuǎn)移是目前導(dǎo)致癌癥患者死亡的最主要原因，研究表明超過(guò)90%的癌癥患者死于腫瘤的轉(zhuǎn)移和擴(kuò)散。癌癥轉(zhuǎn)移不是腫瘤細(xì)胞的獨(dú)奏，而是一個(gè)涉及與腫瘤細(xì)胞和腫瘤間質(zhì)包括細(xì)胞外基質(zhì)(ECM)親密互動(dòng)的過(guò)程。細(xì)胞外基質(zhì)的改造和重建，可以調(diào)節(jié)細(xì)胞與細(xì)胞以及細(xì)胞和胞外基質(zhì)的相互作用，進(jìn)而導(dǎo)致細(xì)胞所處的微環(huán)境改變和細(xì)胞自身行為變化， 是腫瘤轉(zhuǎn)移過(guò)程中的一個(gè)很重要的事件。因此參與細(xì)胞外基質(zhì)重建的酶越來(lái)越受到廣泛關(guān)注，它們?cè)诜伟┑陌l(fā)生發(fā)展過(guò)程中起著至關(guān)重要的作用，也極有可能為肺癌的轉(zhuǎn)移治療提供診斷標(biāo)記和分子靶點(diǎn)。賴氨酸氧化酶(LOX)是膠原纖維通過(guò)共價(jià)交聯(lián)取得穩(wěn)定性和發(fā)育成熟的關(guān)鍵酶， 可以賦予細(xì)胞外基質(zhì)適宜的強(qiáng)度和彈性，這對(duì)于維持結(jié)締組織的韌性起到了至關(guān)重要的作用。LOX作為一個(gè)胺基氧化酶，對(duì)胞外基質(zhì)中的最重要的組分膠原蛋白和彈性蛋白進(jìn)行交聯(lián)，其前蛋白原(pr印roLOX)為48KD，在其N-端含有21個(gè)氨基酸的信號(hào)肽，經(jīng)高爾基體糖基化修飾后被分泌到胞外，為50KD的前蛋白，再經(jīng)過(guò)骨形態(tài)發(fā)生蛋白-I(BMP-I)的剪切產(chǎn)生32KD的具催化活性的酶和18KD的前肽(L0X-PP)，介導(dǎo)膠原和彈性蛋白的交聯(lián)。此外，LOX還參與細(xì)胞運(yùn)動(dòng)、信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)和基因表達(dá)調(diào)控等許多至關(guān)重要的生物學(xué)過(guò)程。盡管以往本領(lǐng)域?qū)τ贚OX與腫瘤相關(guān)性有一定的研究，然而前期均是針對(duì)于LOX 在腫瘤中表達(dá)量的研究。例如，生物芯片分析的數(shù)據(jù)顯示多種腫瘤細(xì)胞株以及人腫瘤組織包括肺癌和乳腺癌具有 LOX 的高表達(dá)(Kirschmann, D. A.，E. A. Seftor, et al. (2002) · “ A molecular role for lysyl oxidase in breast cancer invasion. " Cancer Res 62(15) :4478-83 ；Kirschmann, D. A. ， Ε.A.Seftor, et al. (1999). “ Differentially expressed genes associated with the metastatic phenotype in breast cancer. “ Breast Cancer Res Treat 55(2) :127-36)。然而，也有研究指出在部分腫瘤如支氣管肺癌、膀胱癌以及漿液性卵巢癌中LOX及其家族成員呈下調(diào)表達(dá)(Hough， C. D. , C. A. Sherman-Baust, et al. (2000). “ Large-scale serial analysis of gene expression reveals genes differentially expressed in ovarian cancer. “ Cancer Res 60(22) :6281-7 ；Woznick, A. R. ， A. L. Braddock, et al. (2005). “ Lysyl oxidaseexpression in bronchogenic carcinoma. “ Am J Surg 189(3) :297-301 ；ffu, G. , Ζ. Guo, et al. (2007). " LOXLl and L0XL4 are epigenetically silenced and can inhibit ras/extracellular signal-regulated kinase signaling pathway in human bladder cancer. “ Cancer Res 67(9) :4123-9)。可見(jiàn)，不同腫瘤的細(xì)胞起源不同、分化程度不同而導(dǎo)致了 LOX的差異表達(dá)。因此，對(duì)于LOX的腫瘤相關(guān)性不可一概而論，還需要針對(duì)不同的腫瘤進(jìn)行有針對(duì)性地區(qū)別研究。此外，本領(lǐng)域人員均了解，單單研究蛋白表達(dá)量的高低并不能代表其蛋白生物活性的高低。而目前現(xiàn)有技術(shù)的研究均限于蛋白的組織表達(dá)層面，依賴于組織標(biāo)本或細(xì)胞系， 臨床應(yīng)用具有一定限制；還沒(méi)有針對(duì)LOX酶活性高低與腫瘤相關(guān)性進(jìn)行研究。更沒(méi)有針對(duì) LOX酶活性高低與肺癌及其臨床分期進(jìn)行相關(guān)性研究。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的另一目的在于提供肺癌發(fā)生或轉(zhuǎn)移的診斷試劑。在本發(fā)明的第一方面，提供一種賴氨酸氧化酶(LOX)用作檢測(cè)癌癥的血清標(biāo)志物的用途。在一個(gè)優(yōu)選例中，所述的癌癥是肺癌。在另一優(yōu)選例中，所述的賴氨酸氧化酶(LOX)用作肺癌臨床分期的血清標(biāo)志物。在另一優(yōu)選例中，所述的用作檢測(cè)癌癥的血清標(biāo)志物是檢測(cè)血清中賴氨酸氧化酶的活性。較佳地，檢測(cè)血清中賴氨酸氧化酶的活性是否提高。在本發(fā)明的另一方面，提供一種試劑組合，所述的組合含有安普萊紅(Amplex red)，二氨基戊烷，過(guò)氧化氫酶，賴氨酸氧化酶專一性抑制劑。在一個(gè)優(yōu)選例中，所述的試劑組合還含有選自下組的一種或多種試劑尿素，四硼酸鈉。在另一優(yōu)選例中，當(dāng)所述試劑混合時(shí)，安普萊紅、二氨基戊烷、尿素和四硼酸鈉按照摩爾比是1 (150-250) (20000-30000) (500-1500)；較佳地是 1 200 24000 1000。在另一優(yōu)選例中，當(dāng)所述試劑混合時(shí)，尿素終濃度1.2士0. IM ；四硼酸鈉終濃度 0. 05 士 0. 005M ；安普萊紅終濃度50 士 5 μ M ；二氨基戊烷終濃度10 士 ImM。在另一優(yōu)選例中，當(dāng)所述試劑混合時(shí)，過(guò)氧化氫酶終濃度0. 1 士0. 01U/ml。在另一優(yōu)選例中，當(dāng)所述試劑混合時(shí)，賴氨酸氧化酶專一性抑制劑終濃度 500 + 50 μ M0在另一優(yōu)選例中，所述的二氨基戊烷是1，5_ 二氨基戊烷；或所述的過(guò)氧化氫酶是辣根過(guò)氧化物酶；或所述的賴氨酸氧化酶專一性抑制劑是氨基丙腈(BAPN)。在本發(fā)明的另一方面，提供所述的試劑組合在制備診斷癌癥的試劑盒中的用途。在一個(gè)優(yōu)選例中，所述的癌癥是肺癌。在本發(fā)明的另一方面，提供一種試劑盒，含有所述的試劑組合。在本發(fā)明的另一方面，提供一種(體外非診斷性地)測(cè)定賴氨酸氧化酶活性的方法，包括(1)將所述的試劑組合中安普萊紅；二氨基戊烷，過(guò)氧化氫酶混合，形成混合液1 ；
(2)將所述的試劑組合中安普萊紅；二氨基戊烷，過(guò)氧化氫酶，賴氨酸氧化酶專一性抑制劑混合，形成混合液2 ；(3)分別檢測(cè)混合液1和混合液2的混合液的酶活，混合液1的酶活減去混合液2 的酶活的結(jié)果即是賴氨酸氧化酶的酶活。在另一優(yōu)選例中，通過(guò)激發(fā)波長(zhǎng)560nm和發(fā)射波長(zhǎng)590nm檢測(cè)兩種混合液的熒光值，從而確定酶活。在本發(fā)明的另一方面，提供一種確定癌癥或癌癥易感性的方法，包括檢測(cè)待測(cè)對(duì)象血清中的賴氨酸氧化酶的酶活；若待測(cè)對(duì)象血清中的賴氨酸氧化酶的酶活顯著高于(如高20% ；較佳地高40% ； 更佳地高60% )正常人群血清中的賴氨酸氧化酶的酶活；則該待測(cè)對(duì)象是癌癥患者或癌癥易感性患者。在一個(gè)優(yōu)選例中，所述的癌癥是肺癌。本發(fā)明的其它方面由于本文的公開(kāi)內(nèi)容，對(duì)本領(lǐng)域的技術(shù)人員而言是顯而易見(jiàn)的。


圖1顯示了正常對(duì)照和腫瘤患者血清中LOX的活性比較。
具體實(shí)施例方式本發(fā)明人經(jīng)過(guò)深入的研究，首次將賴氨酸氧化酶(LOX)的活性情況與癌癥(特別是肺癌)的發(fā)生、發(fā)展、轉(zhuǎn)移、分期相關(guān)聯(lián)。從而第一次將檢測(cè)LOX活性的試劑應(yīng)用于制備診斷癌癥的試劑盒；第一次將檢測(cè)LOX活性的方法應(yīng)用于診斷癌癥。LOX活性與癌癥相關(guān)本領(lǐng)域人員均了解，盡管蛋白在組織中的表達(dá)量檢測(cè)可以反映疾病的發(fā)生或發(fā)展?fàn)顩r，然而要獲得組織切片或細(xì)胞樣本，必需要獲得受試者的身體組織，這在臨床上并非上一個(gè)簡(jiǎn)單的過(guò)程；并且，獲得的身體組織樣品后，還需要通過(guò)Western Blot、免疫組化等方法進(jìn)行檢測(cè)，操作復(fù)雜不易控制，從而一定程度限制了這方面的臨床應(yīng)用。而如果可以通過(guò)檢測(cè)體液樣本，如血清、唾液等來(lái)實(shí)現(xiàn)檢測(cè)，則取樣過(guò)程的復(fù)雜程度大大降低。此外，單單研究蛋白表達(dá)量的高低并不能代表其蛋白生物活性的高低，而從研究蛋白的生物活性高低來(lái)判斷疾病的嚴(yán)重程度或易感性則更加準(zhǔn)確和直觀。本發(fā)明首次在肺癌患者中對(duì)血清LOX水平進(jìn)行了檢測(cè)，取材方便、操作簡(jiǎn)單、便于復(fù)查，患者易于接受，并可以通過(guò)動(dòng)態(tài)觀察指標(biāo)變化判斷療效，評(píng)估預(yù)后，指導(dǎo)治療。通過(guò)檢測(cè)肺癌患者血清中的LOX活性，本發(fā)明人發(fā)現(xiàn)，與正常人相比肺癌患者血清中的LOX活性顯著增高，說(shuō)明LOX是肺癌發(fā)生的早期事件。而且，與早期的肺癌患者相比， 晚期轉(zhuǎn)移的病人血清中LOX的活性也顯著增高。同樣，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組高于無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組。以上均說(shuō)明血清中LOX的活性與 M分期、轉(zhuǎn)移正相關(guān)。提示LOX可以作為臨床上肺癌診斷和預(yù)后的重要生物學(xué)標(biāo)記物之一。這些發(fā)現(xiàn)為肺癌在臨床上的診斷或治療提供了理論基礎(chǔ)和新的藥靶和策略。血清LOX活性對(duì)肺癌的診斷、轉(zhuǎn)移復(fù)發(fā)的監(jiān)測(cè)有比較重要的臨床意義。
因此，基于本發(fā)明人的新發(fā)現(xiàn)，提供了一種LOX的用途，用于作為癌癥的血清標(biāo)志物。較佳地，所述的癌癥是肺癌。更佳地，所述的LOX用于作為肺癌臨床分期的血清標(biāo)志物。也即可以利用LOX蛋白(i)進(jìn)行癌癥的分型、鑒別診斷、和/或易感性分析； (ii)評(píng)估相關(guān)人群的癌癥治療藥物、藥物療效、預(yù)后，以及選擇合適的治療方法；(iii)早期評(píng)估相關(guān)人群癌癥患病風(fēng)險(xiǎn)，早期監(jiān)測(cè)早期預(yù)防。通過(guò)收集人肺癌臨床樣本進(jìn)行血清中LOX活性的檢測(cè)，還可以分析LOX的活性與肺癌發(fā)生發(fā)展以及轉(zhuǎn)移的相關(guān)性，并為肺癌的轉(zhuǎn)移治療提供新的診斷標(biāo)記和分子靶點(diǎn)。LOX活性檢測(cè)關(guān)于LOX活性檢測(cè)，主要原理是對(duì)LOX在催化膠原共價(jià)交聯(lián)過(guò)程中會(huì)產(chǎn)生的H2A 進(jìn)行測(cè)定來(lái)間接反映LOX的活性。早期的研究主要應(yīng)用了氚標(biāo)記法和高香草酸熒光檢測(cè)法兩種檢測(cè)方法。前者用氚標(biāo)記前膠原蛋白底物中的賴氨酸，經(jīng)賴氨酸氧化酶LOX催化膠原共價(jià)交聯(lián)，在此過(guò)程中釋放氚標(biāo)記的H2O2，然后采用專門設(shè)計(jì)的真空蒸餾裝置收集氚標(biāo)記的H2O2，再用液體閃爍光譜定量。這種方法的優(yōu)點(diǎn)為敏感性和特異性高，但需要特制的裝備，還涉及到放射性元素帶來(lái)的安全問(wèn)題(Bedell-Hogan，D.，P. Trackman，et al. (1993). “ Oxidation, cross-linking, and insolubilization of recombinant tropoelastin by purified lysyl oxidase. " J Biol Chem 268(14) :10345-50)。而高香草酸熒光檢測(cè)法基于H2O2和高香草酸能在辣根過(guò)氧化物酶的催化下按1 1的摩爾數(shù)之比發(fā)生氧化反應(yīng)，產(chǎn)生的熒光物質(zhì)在317nm激發(fā)光作用下產(chǎn)生熒光，通過(guò)測(cè)定在421nm處的熒光強(qiáng)度間接測(cè)定H2A的含量。該方法相對(duì)簡(jiǎn)單易行，但由于該熒光物質(zhì)的光譜學(xué)特性決定了在檢測(cè)生物樣本的過(guò)程中很難避免自體熒光干擾，導(dǎo)致其敏感性較低(Trackman，P. C.，C. G. hski，et al. (1981). “ Development of a peroxidase-coupled fluorometric assay for lysyl oxidase. " Anal Biochem 113 (2) 336-42)。本發(fā)明采用安普萊紅(Amplex red)熒光法檢測(cè)LOX的濃度。利用Amplex red 和H2O2在辣根過(guò)氧化物酶的催化下按1 1的摩爾數(shù)之比發(fā)生氧化反應(yīng)，產(chǎn)生熒光物質(zhì)試鹵靈。試鹵靈在560nm激發(fā)光作用下產(chǎn)生熒光，通過(guò)檢測(cè)發(fā)射波長(zhǎng)590nm的熒光值對(duì)H2A 進(jìn)行定量，間接反映培養(yǎng)基中LOX的濃度。試鹵靈的光學(xué)特性很好地避免了生物學(xué)樣本譬如細(xì)胞培養(yǎng)上清中自發(fā)熒光所帶來(lái)的干擾，靈敏度較高香草酸熒光檢測(cè)法高。氨基丙腈(BAPN)作為L(zhǎng)OX的特異性抑制劑，在體系中加入適量的BAPN可以完全抑制其中LOX的活性，此時(shí)用熒光分光光度儀記錄到的熒光值就是體系中除LOX以外其它物質(zhì)產(chǎn)生的熒光值。扣除這部分熒光值就是樣品中LOX的熒光值。試劑組合本發(fā)明還提供了一種試劑組合，所述的試劑組合含有安普萊紅；二氨基戊烷，過(guò)氧化氫酶，賴氨酸氧化酶專一性抑制劑(優(yōu)選ΒΑΡΝ)。所述的二氨基戊烷可以與LOX發(fā)生反應(yīng)，被LOX氧化生成過(guò)氧化氫；所述的過(guò)氧化氫在過(guò)氧化氫酶催化的條件下可以與Amplex red發(fā)生反應(yīng)生成熒光信號(hào)物質(zhì)(試鹵靈)， 從而可通過(guò)檢測(cè)熒光信號(hào)物質(zhì)來(lái)定性或定量地確定LOX的酶活。由于二氨基戊烷與LOX的反應(yīng)是非特異性的，也可能與其它種類的酶發(fā)生反應(yīng)。 因此，較佳地，設(shè)置另一組試驗(yàn)，其中加入LOX活性抑制劑來(lái)抑制LOX的活性。從而，通過(guò)將不加入LOX活性抑制劑的試驗(yàn)組的酶活測(cè)定結(jié)果減去加入LOX活性抑制劑組的酶活測(cè)定結(jié)果來(lái)得到準(zhǔn)確的LOX活性測(cè)定結(jié)果。在進(jìn)行反應(yīng)時(shí)，還可加入一些使LOX酶穩(wěn)定的物質(zhì)。較佳地，所述的試劑組合還含有選自下組的一種或多種試劑尿素，四硼酸鈉。所述試劑的加入可以使得LOX更穩(wěn)定，而使得LOX以外的其它酶不穩(wěn)定；并且，還提供了一個(gè)良好的化學(xué)環(huán)境，使得LOX蛋白保持較為松散的結(jié)構(gòu)，從而更有利于化學(xué)反應(yīng)的進(jìn)行。較佳地，當(dāng)所述試劑混合用于反應(yīng)時(shí)，Amplex red、二氨基戊烷、尿素和四硼酸鈉按照摩爾比是1 (150-250) (20000-30000) (500-1500)；較佳地是 1 200 24000 1000。較佳地，當(dāng)所述試劑混合時(shí)，尿素終濃度1. 2士0. IM ；四硼酸鈉終濃度 0. 05 士0. 005M. ；Amplex red 終濃度 50 士 5 μ M ；二氨基戊烷終濃度 10 士 ImM。較佳地，當(dāng)所述試劑混合時(shí)，過(guò)氧化氫酶終濃度0. 1 士0. 01U/ml。較佳地，當(dāng)所述試劑混合時(shí)，賴氨酸氧化酶專一性抑制劑終濃度500士50 μ Μ。本發(fā)明還提供了所述試劑組合的應(yīng)用，用于制備診斷癌癥(特別是肺癌)的試劑
品.ο以上的試劑組合可以分別置于容器中，或按照適當(dāng)配比混合后，置于容器中，從而制成一種試劑盒。所述的試劑盒用于診斷癌癥，特別是肺癌。較佳地，所述的試劑盒中還包含有使用說(shuō)明書(shū)。下面結(jié)合具體實(shí)施例，進(jìn)一步闡述本發(fā)明。應(yīng)理解，這些實(shí)施例僅用于說(shuō)明本發(fā)明而不用于限制本發(fā)明的范圍。下列實(shí)施例中未注明具體條件的實(shí)驗(yàn)方法，通常按照常規(guī)條件如 Sambrook 等人，分子克隆實(shí)驗(yàn)室指南(New York Co Id Spring Harbor Laboratory Press, 1989)中所述的條件，或按照制造廠商所建議的條件。除非另外說(shuō)明，否則百分比和份數(shù)按重量計(jì)算。除非另行定義，文中所使用的所有專業(yè)與科學(xué)用語(yǔ)與本領(lǐng)域熟練人員所熟悉的意義相同。此外，任何與所記載內(nèi)容相似或均等的方法及材料皆可應(yīng)用于本發(fā)明中。文中所述的較佳實(shí)施方法與材料僅作示范之用。I.材料和方法血清樣本的收集在獲得了當(dāng)?shù)貍惱砦瘑T會(huì)的批準(zhǔn)和患者知情同意的前提下，本發(fā)明人在2007年7 月至2009年3月間從上海復(fù)旦大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院收集了 1 例肺癌患者的血清，對(duì)照組觀例由該院健康查體中心提供，其性別、年齡與肺癌組差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。將血液樣本收集在促凝管中，室溫下2小時(shí)內(nèi)凝血，4000轉(zhuǎn)5分鐘取上清分裝凍存在-80°C待測(cè)。所有參與這項(xiàng)研究的患者均為初步診斷為肺癌，前期沒(méi)有接受任何化療或放療。本發(fā)明人還收集到了患者的一些臨床基本資料，包括性別，吸煙史，既往病史和臨床病理學(xué)分型和病理分期。Amplex red熒光法檢測(cè)LOX的濃度本發(fā)明人將收集到的肺癌病人血清取出20 μ 1，加入熒光試劑(1.2Μ尿素，0.05Μ 四硼酸鈉(pH 8. 2),0.川/1111辣根過(guò)氧化物酶，5(^11 Amplex red和IOmM 1，5_ 二氨基戊烷 (diaminopentane))，組成總體積為2ml的溶液，分為各Iml的2等份。其中1等份為A組， 即LOX樣本組溶液；對(duì)應(yīng)的另一等份為B組，并在其中加入500 μ M ΒΑΡΝ，然后將Α、Β兩組溶液均放入37°C金屬浴中孵育30min后置于冰上，立即用熒光分光光度儀以激發(fā)波長(zhǎng)560nm 和發(fā)射波長(zhǎng)590nm檢測(cè)其熒光值。用A組溶液的熒光值分別減去對(duì)應(yīng)的B組溶液的熒光值， 即為血清樣品中中LOX的熒光值。統(tǒng)計(jì)學(xué)分析本發(fā)明人利用SPSS軟件對(duì)收集的臨床資料和對(duì)應(yīng)血清中LOX的熒光值進(jìn)行了統(tǒng)計(jì)分析。所有數(shù)據(jù)采用均數(shù)士標(biāo)準(zhǔn)差表示，組間比較采用t檢驗(yàn)和單因素方差分析，確定 P<0. 05為差異有顯著性。II.實(shí)施例自2007年7月至2009年3月，本發(fā)明人對(duì)1 位臨床上初次診斷為非小細(xì)胞肺癌病人的血清樣本中LOX的活性進(jìn)行了檢測(cè)，并與觀名正常健康人作比較(見(jiàn)圖1)，發(fā)現(xiàn)肺癌患者血清中LOX的活性顯著地高于正常人組(P = 0. 0067)，提示LOX活性檢測(cè)可以作為肺癌的早期發(fā)現(xiàn)和早期診斷的一種方法，LOX可以作為血清學(xué)標(biāo)記。通過(guò)T檢驗(yàn)和單因素方差分析不同臨床病理特征的肺癌患者血清中LOX的活性， 發(fā)現(xiàn)LOX的活性與腫瘤的轉(zhuǎn)移密切相關(guān)(P = 0. 015)。晚期或是已經(jīng)發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)移的病人血清中LOX的活性普遍升高(P = 0. 014)。而在具有不同臨床分期、組織學(xué)分型、性別以及吸煙史的病人中LOX的活性沒(méi)有顯著的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，見(jiàn)表1。表1.肺癌患者血清中LOX的活性
權(quán)利要求
1.一種賴氨酸氧化酶用作檢測(cè)癌癥的血清標(biāo)志物的用途。
2.如權(quán)利要求1所述的用途，其特征在于，所述的癌癥是肺癌。
3.如權(quán)利要求2所述的用途，其特征在于，用作肺癌臨床分期的血清標(biāo)志物。
4.如權(quán)利要求1所述的用途，其特征在于，所述的用作檢測(cè)癌癥的血清標(biāo)志物是檢測(cè)血清中賴氨酸氧化酶的活性。
5.一種試劑組合，所述的組合含有安普萊紅，二氨基戊烷，過(guò)氧化氫酶，賴氨酸氧化酶專一性抑制劑。
6.如權(quán)利要求5所述的試劑組合，其特征在于，還含有選自下組的一種或多種試劑 尿素，四硼酸鈉。
7.如權(quán)利要求5或6所述的試劑組合，其特征在于，所述的二氨基戊烷是1，5-二氨基戊烷；或所述的過(guò)氧化氫酶是辣根過(guò)氧化物酶；或所述的賴氨酸氧化酶專一性抑制劑是β -氨基丙月青。
8.權(quán)利要求5-7任一所述的試劑組合在制備診斷癌癥的試劑盒中的用途。
9.如權(quán)利要求8所述的用途，其特征在于，所述的癌癥是肺癌。
10.一種試劑盒，含有權(quán)利要求5-7任一所述的試劑組合。
11.一種測(cè)定賴氨酸氧化酶活性的方法，包括(1)將權(quán)利要求5的試劑組合中安普萊紅；二氨基戊烷，過(guò)氧化氫酶混合，形成混合液1 ；(2)將權(quán)利要求5的試劑組合中安普萊紅；二氨基戊烷，過(guò)氧化氫酶，賴氨酸氧化酶專一性抑制劑混合，形成混合液2 ；(3)分別檢測(cè)混合液1和混合液2的混合液的酶活，混合液1的酶活減去混合液2的酶活的結(jié)果即是賴氨酸氧化酶的酶活。
12.一種確定癌癥或癌癥易感性的方法，包括 檢測(cè)待測(cè)對(duì)象血清中的賴氨酸氧化酶的酶活；若待測(cè)對(duì)象血清中的賴氨酸氧化酶的酶活顯著高正常人群血清中的賴氨酸氧化酶的酶活；則該待測(cè)對(duì)象是癌癥患者或癌癥易感性患者。
全文摘要
本發(fā)明涉及癌癥發(fā)生或轉(zhuǎn)移的診斷試劑。提供了一種賴氨酸氧化酶(LOX)的用途，用于作為癌癥的血清標(biāo)志物；還提供了一種檢測(cè)賴氨酸氧化酶活性的試劑組合及其在診斷癌癥方面的用途；還提供了基于所述試劑組合的試劑盒。本發(fā)明第一次將檢測(cè)LOX活性的方法應(yīng)用于診斷癌癥(如肺癌)，第一次將檢測(cè)LOX活性的試劑應(yīng)用于制備診斷癌癥的試劑盒，從而為癌癥的臨床檢測(cè)提供了更為簡(jiǎn)易的途徑。
文檔編號(hào)C12Q1/28GK102296104SQ20101020839
公開(kāi)日2011年12月28日 申請(qǐng)日期2010年6月24日 優(yōu)先權(quán)日2010年6月24日
發(fā)明者季紅斌, 葛高翔 申請(qǐng)人:中國(guó)科學(xué)院上海生命科學(xué)研究院