專利名稱：一種定標(biāo)測定5’-核苷酸酶活性的方法及其配用的試劑盒和其用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于醫(yī)學(xué)檢驗測定技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種定標(biāo)測定5'-核苷酸酶的方法及其配用的試劑盒和其用途。
背景技術(shù)：
現(xiàn)有技術(shù)中用Trinder氏法定量測定5'-核苷酸酶活性在臨床化學(xué)檢驗上較為普遍，但是，Trinder氏法缺點在于沒能使用一種公認(rèn)的標(biāo)準(zhǔn)法測定的5'-核苷酸酶標(biāo)準(zhǔn)品，從而造成測試精確度下降、不同實驗室應(yīng)用不同生化分析儀引起的儀器誤差，此外還是5'-核苷酸酶正常參考范圍數(shù)據(jù)混亂、不可比擬性的主要原因。 5'-核苷酸酶脫氫酶法應(yīng)用5'-核苷酸酶解5'-次黃嘌呤核苷酸生成次黃嘌呤核苷和氨，氨和a -酮戊二酸以及還原性輔酶在谷氨酸脫脫氫酶的作用下反應(yīng)生成谷氨酸及輔酶，在340nm處檢測NADH的消耗速率來測定5'-核苷酸酶活性通過制定氨標(biāo)準(zhǔn)曲線，可定量5'-核苷酸酶活性，5'-核苷酸酶活性定義為在5'-核苷酸酶脫氫酶法條件下37°C每分鐘產(chǎn)生一個P mol氨所需5'-核苷酸酶的量，其原理反應(yīng)方程式如下
5'-核苷酸酶5'-次黃嘌呤核苷酸+水--^次黃嘌呤核苷+氨
谷氨酸脫氫酶
氨+ a —酮戊二酸+還原性輔酶I 二鈉鹽--^谷氨酸+輔酶 但是5' _核苷酸酶脫氫酶法可定量測定5' _核苷酸酶活性，但此法易受外源性氨的干擾，不適于臨床生化檢驗。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是針對現(xiàn)有技術(shù)的現(xiàn)狀，而提供一種在Trinder氏法中加入5'-核苷酸酶標(biāo)準(zhǔn)品，用5'-核苷酸酶脫氫酶法確定5'-核苷酸酶標(biāo)準(zhǔn)品的活性，再應(yīng)用Trinder氏法以5'-核苷酸酶標(biāo)準(zhǔn)品的活性為參照，定量測定生物樣本中5'-核苷酸酶活性，從而保證精確度高，測定速度快，且減少了儀器誤差以及增強(qiáng)了 5'-核苷酸酶正常參考范圍數(shù)據(jù)的可比性的定標(biāo)測定5'-核苷酸酶活性的方法。 本發(fā)明的另一個目的是提供用以實現(xiàn)定標(biāo)測定5'-核苷酸酶活性的方法的配用的試劑盒。 本發(fā)明的第三個目的是一種定標(biāo)測定5'-核苷酸酶活性的方法配用的試劑盒的用途，主要是用于提供5'-核苷酸酶的活性測定用于急性肝損傷及殘留病變的診斷以及協(xié)助慢性肝病及肝纖維化的診斷。 本發(fā)明解決上述技術(shù)問題所采用的技術(shù)方案為一種定標(biāo)測定5'-核苷酸酶活性的方法，其特征是包括以下步驟 步驟一是確定5' _核苷酸酶標(biāo)準(zhǔn)品的活性； 步驟二是再通過5' _核苷酸酶、嘌呤核苷酸化酶、黃嘌呤氧化酶及過氧化物酶酶 解生成醌化合物； 步驟三是以連續(xù)監(jiān)測醌化合物在546nm處吸光度的上升速率結(jié)合標(biāo)準(zhǔn)品的活性 為參照，定量測定生物樣本中5'-核苷酸酶的活性。
采取的措施還包括 在上述的一種定標(biāo)測定5'-核苷酸酶活性的方法中，所述的步驟一中具體操作為 將5'-核苷酸酶樣本與試劑RI同時加入，并孵育180秒，然后加入試劑RII，在340nm處連 續(xù)120秒定量測定吸光度，并用不同濃度氨代替底物5'-次黃嘌呤核苷酸，按上述方法在 340nm處用測試儀定量測定吸光度，以此畫出標(biāo)準(zhǔn)曲線，有5'-核苷酸酶標(biāo)準(zhǔn)品的吸光度從 標(biāo)準(zhǔn)曲線上求出對應(yīng)的氨濃度，并將其除以反應(yīng)時間既得出5'-核苷酸酶標(biāo)準(zhǔn)品活性。
在上述的一種定標(biāo)測定5'-核苷酸酶活性的方法中，所述的試劑RI包括lOmol/ L的5'-次黃嘌呤核苷酸、0. 015mol/L的a_酮戊二酸、0. 30X 10—3mol/L的還原型輔酶I 二 鈉鹽以及0. 10mol/L的且pH值為7. 20的磷酸緩沖液，所述的試劑RII為200U/ml的谷氨 酸脫脫氫酶。 在上述的一種定標(biāo)測定5'-核苷酸酶活性的方法中，所述的5'-核苷酸酶樣本為 8iiL，試齊U I為150iiL，試劑II為75iiL，5' _核苷酸酶樣本與試劑I同時加入，在第180 秒加入試劑II，且溫度反應(yīng)溫度控制37°C。 在上述的一種定標(biāo)測定5'-核苷酸酶活性的方法中，所述的波長的主波長為 560nmnm，副波長為700nm。 在上述的一種定標(biāo)測定5'-核苷酸酶活性的方法中，所述的步驟三中的計算按以 下公式進(jìn)行計算 測試時間段每分鐘平均吸光度的變化(A A/min)，
(△Ayrain + AA2/min +...............AAt/min)△ A/min =-
t A A/min代表測試時間第lmin吸光度變化率
A A2/min代表測試時間第2min吸光度變化
............................................. A At/min代表測試時間第tmin吸光度變化率
t為測試時間 樣本5'-核苷酸酶活性=(A Ax/ A Ac) X Ec 其中AAX =樣本A A/min AAC =標(biāo)準(zhǔn)品AA/min Ec = 5'-核苷酸酶標(biāo)準(zhǔn)品的活性。 —種定標(biāo)測定5' _核苷酸酶活性的方法配用的試劑盒，所述的試劑盒由以下成分 組成包括試劑Rl、試劑R2、5'-核苷酸酶標(biāo)準(zhǔn)品、5'-核苷酸酶質(zhì)控血清以及533測試/ 盒，所述的試劑Rl包括80mol/L的甘氨酸緩沖液、2mol/L的N-乙基_N_ (3-磺丙基)-3-甲基苯胺鈉鹽、0. 5KU/L的嘌呤核苷磷酸化酶、0. 8KU/L的黃嘌呤氧化酶以及0. 6KU/L的過氧化物酶，所述的試劑R2包括1Omol/L的5'-次黃嘌呤核苷酸以及2mol/L的4-氨基安替比林，所述的5'-核苷酸酶標(biāo)準(zhǔn)品為人源基因重組蛋白，5'-核苷酸酶異常血清為人源基因重組蛋白和人血清。 在上述的一種定標(biāo)測定5'-核苷酸酶活性的方法及其配用的試劑盒中，所述的試劑盒包含試劑R1為80ml/l瓶X2，試劑R2為80ml/l瓶，5'-核苷酸酶標(biāo)準(zhǔn)品lml/1瓶，5' _核苷酸酶異常血清2ml/1瓶。 —種定標(biāo)測定5'-核苷酸酶活性的方法及其配用的試劑盒的用途中，該測定用于原發(fā)性和轉(zhuǎn)移性肝癌、膽道癌、胰腺癌、膽道阻塞、膽管炎、急、慢性肝炎、肝硬化、藥物性肝損傷等疾病的診斷。 在上述的一種定標(biāo)測定5'-核苷酸酶活性的方法及其配用的試劑盒的用途中，所
依據(jù)的原理反應(yīng)方程式如下
5'-核苷酸酶
5' -次黃嘌呤核苷酸+水--^次黃嘌呤核苷+氨
嘌呤核苷磷酸化酶次黃嘌呤核苷+磷酸鹽--^次黃嘌呤+核糖-1-磷酸
黃嘌呤氧化酶次黃嘌呤+水+氧氣--^過氧化氫+尿酸
過氧化物酶
過氧化氫+4-氨基安替比林+N-乙基-N- (3-磺丙基)-3-甲基苯胺鈉鹽--^醌化合
物+水。 與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的優(yōu)點在于用5' _核苷酸酶脫氫酶法確定5' _核苷酸酶標(biāo)準(zhǔn)品的活性，再應(yīng)用Trinder氏法以5'-核苷酸酶標(biāo)準(zhǔn)品的活性為參照，定量測定生物樣本中5'-核苷酸酶活性，本發(fā)明解決了 Trinder氏法的缺陷，提高了測試精確度、減少了儀器誤差和增強(qiáng)了 5'-核苷酸酶正常參考范圍數(shù)據(jù)的可比性，也方便了通過測定5'-核苷酸酶的活性用于判斷該測定用于原發(fā)性和轉(zhuǎn)移性肝癌、膽道癌、胰腺癌、膽道阻塞、膽管炎、急、慢性肝炎、肝硬化、藥物性肝損傷等疾病的診斷，適合在醫(yī)院中進(jìn)行推廣使用。
具體實施例方式
以下是本發(fā)明的具體實施例，對本發(fā)明的技術(shù)方案作進(jìn)一步的描述，但本發(fā)明并不限于這些實施例。 1、5'-核苷酸酶標(biāo)準(zhǔn)品和其活性的確定 (1) 5'-核苷酸酶標(biāo)準(zhǔn)品活性0-100U/L人源基因重組5'-核苷酸酶
(2) 5' _核苷酸酶標(biāo)準(zhǔn)品活性的確定
試劑組成
試劑RI :包括10mol/L的5' _次黃嘌呤核苷酸、0. 015mol/L的a-酮戊二酸、
0. 30 X 10—3mol/L的還原型輔酶I 二鈉鹽、以及0. 10mol/L的且pH值為7. 20的磷酸緩沖液； 試劑RII :為200U/ml的谷氨酸脫脫氫酶。 生物樣本0-100U/L人源基因重組5'-核苷酸酶 試驗參數(shù)及操作步驟 樣本8ii L，試劑I150ii L，試劑1175 ii L ; 反應(yīng)溫度37。C 空白時間開始第-60秒，結(jié)束第-10秒
反應(yīng)時間開始第180S，結(jié)束第300S
波長主波長560nm 副波長700nm
測試儀貝克曼LX20全自動生化分析儀 5'-核苷酸酶活性(U/L)定義為在5'-核苷酸酶脫氫酶法條件下37t:每分鐘產(chǎn) 生一個Pmol氨所需5' _核苷酸酶的量，參照5'-核苷酸酶脫氫酶法，具體操作為將Si!L 的5'-核苷酸酶樣本與150 L的試劑RI同時加入，并孵育180秒，然后加入20 L的試劑 RII，在340nm處連續(xù)120秒定量測定吸光度，并用不同濃度氨代替底物5'-次黃嘌呤核苷 酸，按上述方法在340nm處用測試儀定量測定吸光度，以此畫出標(biāo)準(zhǔn)曲線，有5'-核苷酸酶 標(biāo)準(zhǔn)品的吸光度從標(biāo)準(zhǔn)曲線上求出對應(yīng)的氨濃度，并將其除以反應(yīng)時間既得出5'-核苷酸 酶標(biāo)準(zhǔn)品活性(U/L)。 測定用的試劑盒中，試劑盒由以下成分組成包括試劑R180ml/l瓶X2、試劑 R280ml/1瓶、5'-核苷酸酶標(biāo)準(zhǔn)品lml/1瓶、5'-核苷酸酶異常血清2ml/1瓶以及533測試
/ iWr.， 試劑R1 :包括80mol/L的甘氨酸緩沖液、2mol/L的N_乙基_N_ (3-磺丙基)_3_甲 基苯胺鈉鹽、0. 5KU/L的嘌呤核苷磷酸化酶、0. 8KU/L的黃嘌呤氧化酶以及0. 6KU/L的過氧 化物酶； 試劑R2 :包括1Omol/L的5'-次黃嘌呤核苷酸以及2mol/L的4_氨基安替比林以 及； 5' _核苷酸酶標(biāo)準(zhǔn)品人源基因重組蛋白； 5' _核苷酸酶異常血清人源基因重組蛋白和人血清。
試劑配置 5' _核苷酸酶試劑為液體試劑，可直接上機(jī)使用。 5' _核苷酸酶標(biāo)準(zhǔn)品和5' _核苷酸酶質(zhì)控血清是凍干品，需要用一定蒸餾水溶解 方可使用。 試劑的穩(wěn)定與貯存期 試劑3(TC下可避光保存一周，室溫18 19"下一月，2 8"—年，嚴(yán)禁冷凍。溶 化后的5'-核苷酸酶質(zhì)控血清3(TC下可至少保存二周，2 『C或冷凍保存期更長。
試驗參數(shù)與操作步驟
溫度 37 °C 波長 546nm
比色杯光徑 1. 0cm
測試方法速率法反應(yīng)方向正予孵育0. 005ml樣品+0. 18mlRl (或依比例混勻)予孵育時間5分鐘啟動反應(yīng)加0. 09ml R2 (或依比例混勻)樣品/試劑1 : 54延遲時間8分鐘測試時間2分鐘空白參照水總反應(yīng)時間10分鐘測試儀HITACHI 7100全自動生化分析儀
2、樣本5，-核苷酸酶活性的測定參照Trinder氏法用5'-核苷酸酶標(biāo)準(zhǔn)品的活性為參照，定量測定生物樣本中的5'-核苷酸酶活性，應(yīng)用5'-核苷酸酶偶聯(lián)嘌呤核苷磷酸化酶，黃嘌呤氧化酶和過氧化物
酶反應(yīng)連續(xù)檢測法，5'-核苷酸酶酶解腺苷脫氨產(chǎn)生次黃苷；再通過偶聯(lián)嘌呤核苷磷酸化酶的作用，生成次黃嘌呤；后者在黃嘌呤氧化酶氧化下生成尿酸和過氧化氫，最后在過氧化物酶的作用下過氧化氫再與N-乙基-N- (3-磺丙基)-3-甲基苯胺鈉鹽以及4-氨基安替比林(4-AA)反應(yīng)，生成紫紅色的有色醌化合物，并通過動態(tài)測量有色醌546nm處吸光度上升的速度來測算5'-核苷酸酶的活性，一個單位5'-核苷酸酶活性(U/L)定義為在條件37t:下每分鐘將1 P mol5'-次黃嘌呤核苷酸酶解成為次黃嘌呤核苷，所依據(jù)的原理是
5' -核苷酸酶
5'-次黃嘌呤核苷酸+水--^次黃嘌呤核苷+氨
嘌呤核苷磷酸化酶次黃嘌呤核苷+磷酸鹽--^次黃嘌呤+核糖-1-磷酸
黃嘌呤氧化酶次黃嘌呤+水+氧氣--^過氧化氫+尿酸
過氧化物酶
過氧化氫+4-氨基安替比林+N-乙基-N- (3-磺丙基)-3-甲基苯胺鈉鹽--^
醌化合物+水。
(2. 3)計算 測試時間段每分鐘平均吸光度的變化(A A/min)，
(AA!/min + AAs/min +...............AAt/min)△ A/min =-
t A A乂min代表測試時間第lmin吸光度變化率
A A2/min代表測試時間第2min吸光度變化率 ............................................. A At/min代表測試時間第tmin吸光度變化率
t為測試時間 樣本5'-核苷酸酶活性=(A Ax/ A Ac) X Ec 其中AAX =樣本AA/min AAc =標(biāo)準(zhǔn)品AA/min Ec = 5'-核苷酸酶標(biāo)準(zhǔn)品的活性 注意事項 1.試劑和樣品用量可因儀器不同，按比例增減。 2.若樣品5' _核苷酸酶> 100U/L，須用生理鹽水稀釋樣品，結(jié)果乘以稀釋倍數(shù)。
3.如保存不當(dāng)，試劑發(fā)現(xiàn)有渾濁時，應(yīng)棄用。
試劑性能 線性范圍:0 100U/L, (r2 > 0. 995) 精密度批內(nèi)CV《6. 0% ;批間CV《10. 0% ;特異性血清、30mg/d膽紅素、200mg/dl血紅蛋白、500mg/dl甘油三酯和4mg/dl
抗壞血酸對本法無干擾。 靈敏度試劑檢測下限《2. OU/L 參考值 正常人血清5'-核苷酸酶活性參考值范圍在0 11U/L，根據(jù)自身實驗條件自行 訂定正常人血清5'-核苷酸酶活性范圍。 依據(jù)上面的原理5' _核苷酸酶活性的測定具有多種用途，5'-核苷酸酶將腺苷脫 氨產(chǎn)生次黃苷和氨，5'-核苷酸酶廣泛存在人體各組織中，尤以小腸、肝、脾最多，血液細(xì)胞 內(nèi)酶活性為血清中的40 70陪，故測定時應(yīng)避免溶血。血清5'-核苷酸酶的正常參考值為 0 11U/L。 5'-核苷酸酶異常增高見于 1、5'-核苷酸酶活性增高常見于原發(fā)性和轉(zhuǎn)移性肝癌、膽道癌、胰腺癌、膽道阻塞、 膽管炎、急、慢性肝炎、肝硬化、藥物性肝損傷，其活性增高可達(dá)2 6倍，且與病情嚴(yán)重程度 呈正相關(guān)。 2、5'-核苷酸酶是診斷肝腫瘤非常靈敏的酶學(xué)指標(biāo)。在病變早期，當(dāng)肝功能、肝掃 描和有關(guān)肝病檢查陰性時本酶活性已明顯增高，對于AFP陰性病例，其與AFP互補(bǔ)診斷肝癌 的陽性率可達(dá)94%。 3、特異性高，能協(xié)助判斷堿性磷酸酶(ALP)增設(shè)是肝膽系統(tǒng)疾病，還是骨髓系統(tǒng) 疾病(如骨癌、骨肉瘤、骨轉(zhuǎn)移癌、佝僂病等)，ALP在肝膽系統(tǒng)疾病和骨骼系統(tǒng)疾病時均可 增高。除5-NT除肝膽系統(tǒng)疾病增高外，骨骼系統(tǒng)疾病一般均不升高。 4、有助于鑒別診斷肝細(xì)胞性黃疸和阻塞性黃疸，后者5'-核苷酸酶明顯高于前 者。 5、5'-核苷酸酶已作為肝功能常規(guī)項目檢查進(jìn)入臨床，將能使臨床醫(yī)生更全面地 了解患者肝臟情況，提高其臨床應(yīng)用價值。 本發(fā)明的優(yōu)點在于用5'-核苷酸酶脫氫酶法確定5'-核苷酸酶標(biāo)準(zhǔn)品的活性，再應(yīng)用Trinder氏法以5'-核苷酸酶標(biāo)準(zhǔn)品的活性為參照，定量測定生物樣本中5'-核苷酸酶活性，本發(fā)明解決了 Trinder氏法的缺陷，提高了測試精確度、減少了儀器誤差和增強(qiáng)了5'-核苷酸酶正常參考范圍數(shù)據(jù)的可比性，也方便了通過測定5'-核苷酸酶的活性用于判斷該測定用于原發(fā)性和轉(zhuǎn)移性肝癌、膽道癌、胰腺癌、膽道阻塞、膽管炎、急、慢性肝炎、肝硬化、藥物性肝損傷等疾病的診斷等，適合在醫(yī)院中進(jìn)行推廣使用。 本文中所描述的具體實施例僅僅是對本發(fā)明精神作舉例說明。本發(fā)明所屬技術(shù)領(lǐng)域的技術(shù)人員可以對所描述的具體實施例做各種各樣的修改或補(bǔ)充或采用類似的方式替代，但并不會偏離本發(fā)明的精神所定義的范圍。
權(quán)利要求
一種定標(biāo)測定5’-核苷酸酶活性的方法，其特征是包括以下步驟步驟一是確定5’-核苷酸酶標(biāo)準(zhǔn)品的活性；步驟二是再通過5’-核苷酸酶、嘌呤核苷酸化酶、黃嘌呤氧化酶及過氧化物酶酶解生成醌化合物；步驟三是以連續(xù)監(jiān)測醌化合物在546nm處吸光度的上升速率結(jié)合標(biāo)準(zhǔn)品的活性為參照，定量測定生物樣本中5’-核苷酸酶的活性。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種定標(biāo)測定5'-核苷酸酶活性的方法，其特征是所述的 步驟一中具體操作為將5'-核苷酸酶樣本與試劑RI同時加入，并孵育180秒，然后加入試 劑RII，在340nm處連續(xù)120秒定量測定吸光度，并用不同濃度氨代替底物5'-次黃嘌呤核 苷酸，按上述方法在340nm處用測試儀定量測定吸光度，以此畫出標(biāo)準(zhǔn)曲線，有5'-核苷酸 酶標(biāo)準(zhǔn)品的吸光度從標(biāo)準(zhǔn)曲線上求出對應(yīng)的氨濃度，并將其除以反應(yīng)時間既得出5'-核苷 酸酶標(biāo)準(zhǔn)品活性。
3. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種定標(biāo)測定5'-核苷酸酶活性的方法，其特征是所述的 試劑RI包括10mol/L的5'-次黃嘌呤核苷酸、0. 015mol/L的a-酮戊二酸、0. 30X 10—3mol/ L的還原型輔酶I 二鈉鹽以及0. 10mol/L的且pH值為7. 20的磷酸緩沖液，所述的試劑RII 為200U/ml的谷氨酸脫脫氫酶。
4. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的一種定標(biāo)測定5'-核苷酸酶活性的方法，其特征是所述的 5'-核苷酸酶樣本為8iiL，試劑I為150iiL，試劑II為75iiL，5'-核苷酸酶樣本與試劑I 同時加入，在第180秒加入試劑II，且溫度反應(yīng)溫度控制37°C。
5. 根據(jù)權(quán)利要求4所述的定標(biāo)測定5'-核苷酸酶活性的方法，其特征是所述的波長 的主波長為560nm nm，副波長為700nm。
6. 根據(jù)權(quán)利要求5所述的一種定標(biāo)測定5'-核苷酸酶活性的方法，其特征是所述的 步驟三中的計算按以下公式進(jìn)行計算測試時間段每分鐘平均吸光度的變化(AA/min)，<formula>formula see original document page 2</formula>AA乂min代表測試時間第lmin吸光度變化率 AA2/min代表測試時間第2min吸光度變化率AAt/min代表測試時間第tmin吸光度變化率 t為測試時間樣本5'_核苷酸酶活性=(AAx/AAe)XEc其中AAX =樣本A A/minA Ac =標(biāo)準(zhǔn)品A A/minEc = 5'-核苷酸酶標(biāo)準(zhǔn)品的活性。
7. —種定標(biāo)測定5'-核苷酸酶活性的方法配用的試劑盒，其特征是所述的試劑盒由 以下成分組成包括試劑RI 、試劑R2、5'-核苷酸酶標(biāo)準(zhǔn)品、5'-核苷酸酶質(zhì)控血清以及533 測試/盒，所述的試劑RI包括80mol/L的甘氨酸緩沖液、2mol/L的N_乙基_N_(3-磺丙基)-3-甲基苯胺鈉鹽、0. 5KU/L的嘌呤核苷磷酸化酶、0. 8KU/L的黃嘌呤氧化酶以及0. 6KU/ L的過氧化物酶，所述的試劑R2包括1Omol/L的5'-次黃嘌呤核苷酸以及2mol/L的4-氨 基安替比林，所述的5'-核苷酸酶標(biāo)準(zhǔn)品為人源基因重組蛋白，5'-核苷酸酶異常血清為人 源基因重組蛋白和人血清。
8. 根據(jù)權(quán)利要求7所述的一種定標(biāo)測定5'-核苷酸酶活性的方法配用的試劑盒，其特 征是所述的試劑盒包含試劑Rl為80ml/l瓶X2，試劑R2為80ml/l瓶，5'-核苷酸酶標(biāo) 準(zhǔn)品lml/1瓶，5'-核苷酸酶異常血清2ml/1瓶。
9. 一種定標(biāo)測定5'-核苷酸酶活性的方法配用的試劑盒的用途，其特征是該測定用 于原發(fā)性和轉(zhuǎn)移性肝癌、膽道癌、胰腺癌、膽道阻塞、膽管炎、急、慢性肝炎、肝硬化、藥物性 肝損傷等疾病的診斷。
10. 根據(jù)權(quán)利要求9所述的一種定標(biāo)測定5'-核苷酸酶活性的方法配用的試劑盒的用途，其特征是所依據(jù)的原理反應(yīng)方程式如下<formula>formula see original document page 3</formula>
全文摘要
本發(fā)明提供了一種定標(biāo)測定5’-核苷酸酶的方法及其配用的試劑盒和其用途，本發(fā)明用5’-核苷酸酶脫脫氫酶法檢測試劑盒確定5’-核苷酸酶標(biāo)準(zhǔn)品的活性，再應(yīng)用Trinder氏法以標(biāo)準(zhǔn)品的活性為參照，定量測定生物樣本中5’-核苷酸酶的活性。本發(fā)明優(yōu)點在于解決了Trinder氏法的缺陷，提高了精確度，減少了儀器誤差以及增強(qiáng)了5’-核苷酸酶正常參考范圍數(shù)據(jù)的可比性且通過測定5’-核苷酸酶的活性用于原發(fā)性和轉(zhuǎn)移性肝癌、膽道癌、胰腺癌、膽道阻塞、膽管炎、急、慢性肝炎、肝硬化、藥物性肝損傷等疾病的診斷等，適合在醫(yī)院中進(jìn)行推廣使用。
文檔編號C12Q1/42GK101709325SQ200910155639
公開日2010年5月19日 申請日期2009年12月24日 優(yōu)先權(quán)日2009年12月24日
發(fā)明者張聞 申請人:張聞