專利名稱：健康查體糞便致病菌檢測(cè)篩選增菌培養(yǎng)液的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種健康查體糞便致病菌檢測(cè)篩選增菌培養(yǎng)液，其主要成分 是胰蛋白胨、乳糖、枸櫞酸鈉、去氧膽酸鈉、膽鹽、硫酸鋁鉀、磷酸氫二鉀、磷酸二氫鉀、水楊 苷、土溫-80、Triton X-100、甘氨酸、氯化鈉、十二烷基硫酸鈉、蒸餾水制備而成；用于對(duì)健 康人的糞便樣品中攜帶致病菌的檢驗(yàn)。從業(yè)人員健康體檢中，肝炎、痢疾、傷寒、肺結(jié)核、皮 膚病(簡(jiǎn)稱“五病”)，傷寒、痢疾桿菌的檢出率明顯低，分析其原因，除了就業(yè)人群的帶菌率 可能處于一個(gè)很低的水平之外，也與檢驗(yàn)方法有關(guān)，一方面采便方法影響了檢驗(yàn)結(jié)果，由于 多數(shù)人有早晨排便的習(xí)慣，上午查體的肛拭采到的糞便較少；另外培養(yǎng)方法也有一定的影 響，如果不進(jìn)行增菌培養(yǎng)而直接將大便標(biāo)本劃碟培養(yǎng)，可能由于正常的腸道菌生長(zhǎng)能力強(qiáng)， 將致病菌掩蓋，也可以造成假陰性。如威海市監(jiān)測(cè)到的2例副傷寒帶菌者，第一次未增菌培 養(yǎng)結(jié)果陰性，重復(fù)增菌后培養(yǎng)結(jié)果才顯示陽(yáng)性，證實(shí)為帶菌者，為此完善檢驗(yàn)方法，避免造 成漏檢是相當(dāng)必要的。而任何一個(gè)糞便樣品的增菌培養(yǎng)的實(shí)驗(yàn)，都必須有可靠的培養(yǎng)基，而 培養(yǎng)基是人工配制的適合微生物生長(zhǎng)繁殖或積累代謝產(chǎn)物的營(yíng)養(yǎng)基質(zhì)，就營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)而言， 一般不外乎碳源、氮源、無機(jī)鹽、生長(zhǎng)因子及水等幾大類。在配制培養(yǎng)基時(shí)，根據(jù)各類微生物 的特點(diǎn)，就可以配制出適合不同種類微生物生長(zhǎng)發(fā)育所需要的培養(yǎng)基。培養(yǎng)基除了滿足微 生物所必需營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)外，還要求有一定的酸堿度和滲透壓。各類微生物對(duì)營(yíng)養(yǎng)的要求不盡 相同，因而培養(yǎng)基的種類繁多。培養(yǎng)基的制備程序方法，可因其種類不同而各異，即使同一 種配方的培養(yǎng)基，因工藝和使用方法不同，也會(huì)有不同的效果。實(shí)驗(yàn)工作者一直希望能有一 種能克服上述不足的新培養(yǎng)基，專用于健康查體糞便致病菌檢測(cè)篩選的增菌液。該培養(yǎng)液 可將數(shù)份健康查體者的糞便進(jìn)行致病菌篩選檢測(cè)。
背景技術(shù)本發(fā)明的目的在于提供一種健康查體糞便致病菌檢測(cè)篩選增菌液，該培 養(yǎng)基營(yíng)養(yǎng)豐富，適宜腸道菌的測(cè)定；用于樣品增菌培養(yǎng)，可將數(shù)份健康查體者的糞便進(jìn)行致 病菌篩選檢測(cè)。也可用于中和樣品增菌培養(yǎng)。配制簡(jiǎn)單、選擇性強(qiáng)，與傳統(tǒng)培養(yǎng)基比較，檢 出率高，污染小，臨床應(yīng)用效果滿意.大大提高檢測(cè)陽(yáng)性率，試驗(yàn)方法簡(jiǎn)單、時(shí)間短、準(zhǔn)確性
尚ο發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的要點(diǎn)在于選擇合適的組分，并進(jìn)行合理混配，經(jīng)加溫、溶解、混 合、冷卻、分裝、高溫滅菌等工藝而成一種十二烷基硫酸鈉中和增菌肉湯。本發(fā)明選擇的培養(yǎng)基配方如下(克/每升蒸餾水)胰蛋白胨20. 0-22.0;乳糖 5. 0-5. 5 ；磷酸氫二鉀2. 70-2. 75 ；磷酸二氫鉀2. 70-2. 75 ；枸櫞酸鈉0. 4-0. 5 ；去氧膽酸鈉 0. 04-0. 06 ；水楊苷 0. 5-0. 6 ；土溫-801. 0-1. 2 ；Triton X-1001. 0-1. 2 ；膽鹽 0. 2-0. 4 ；硫 酸鋁鉀0. 2-0. 3 ；甘氨酸0. 5-0. 6 ；氯化鈉5. 0-5. 5 ；十二烷基硫酸鈉0. 1-0. 2 ；蒸餾水至 IOOOmL0胰蛋白胨對(duì)接種少量大腸菌群可刺激其生長(zhǎng)和產(chǎn)氣。需氧芽孢桿菌則全被抑制， 可直接用于吲哚試驗(yàn)，做吲哚試驗(yàn)時(shí)，應(yīng)預(yù)先加入少量乙醚并震搖后，再加上一層吲哚試 齊U，不在震搖，視二液接觸面有無紫紅色出現(xiàn)，若不加乙醚，則易形成持久的乳化而干擾吲 哚試驗(yàn)，這是因存在十二烷基硫酸鈉的關(guān)系。本培養(yǎng)基含有枸櫞酸鈉和去氧膽酸鈉，對(duì)革蘭氏陰性菌有抑制作用，大腸桿菌，綠膿桿菌及變形桿菌，在接種6小時(shí)內(nèi)生長(zhǎng)緩慢，而痢疾桿菌可相對(duì)地得到增殖.。膽鹽可抑制大多數(shù)革蘭氏陰性桿菌，而對(duì)傷寒桿菌無抑制作用或抑制力很??；硫酸鋁鉀可激活傷寒 桿菌活性，使生長(zhǎng)數(shù)量大大增加十二烷基硫酸鈉中和增菌肉湯，原材料易得，制作方便，基 礎(chǔ)成分加入營(yíng)養(yǎng)豐富的牛肉浸粉、酵母浸膏粉，酵母浸膏粉主要為微生物生長(zhǎng)繁殖提供可 溶性含氮物質(zhì)、核酸降解物、維生素及無機(jī)鹽類等，以補(bǔ)充蛋白胨營(yíng)養(yǎng)成分的不足部分。水楊苷、土溫-80、Triton X_100、甘氨酸中和樣品中磺胺類藥物及消毒劑的抑菌 作用；十二烷基硫酸鈉破壞樣品中存在的四環(huán)素、金霉素、新霉素、多黏菌素及鏈霉素的抑 菌作用。本發(fā)明產(chǎn)品的制備方法是1)、各成分按比例混合于水中，加熱溶解，矯正pH至7. 8，分裝于試管中，每管 IOmL, 121°C 15min高壓滅菌備用。2)、質(zhì)控菌株為產(chǎn)氣大腸桿菌(ATCC13048)、大腸埃希菌(ATCC25922)、鼠傷寒沙 門菌(ATCC14028)、金黃色葡萄球菌(ATCC25923)與相應(yīng)合格對(duì)照培養(yǎng)基平行進(jìn)行細(xì)菌生 長(zhǎng)的靈敏度試驗(yàn)，應(yīng)符合要求。本發(fā)明具有以下優(yōu)點(diǎn)(1)健康查體糞便致病菌檢測(cè)篩選增菌液，營(yíng)養(yǎng)豐富、配制 簡(jiǎn)單；(2)選擇性強(qiáng)、檢出率高、污染小，可將數(shù)份健康查體者的糞便進(jìn)行致病菌篩選檢測(cè)， 臨床應(yīng)用效果滿意；(3)大大提高檢測(cè)陽(yáng)性率，方法簡(jiǎn)單、時(shí)間短、準(zhǔn)確性高。(4)靈敏度高、 特異性強(qiáng)、穩(wěn)定性好。
具體實(shí)施方式
下面結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步的詳細(xì)說明按照下表所列數(shù)據(jù)(克、ml/每升蒸餾水)及其所述步驟進(jìn)行配置配方一胰蛋白胨20. 0-22. 0 ；乳糖5. 0-5. 5 ；磷酸氫二鉀2. 70-2. 75 ；磷酸二氫鉀 2. 70-2. 75 ；枸櫞酸鈉 0. 4-0. 5 ；去氧膽酸鈉 0. 04-0. 06 ；水楊苷 0. 5-0. 6 ；土溫-801. 0-1. 2 ； TritonX-1001. 0-1. 2 ；膽鹽 0. 2-0. 4 ；硫酸鋁鉀 0. 2-0. 3 ；甘氨酸 0. 5-0. 6 ；氯化鈉 5. 0-5. 5 ； 十二烷基硫酸鈉0. 1-0. 2 ；蒸餾水至1000mL。配方二胰蛋白胨21. 0-22. 0 ；乳糖5. 2-5. 5 ；磷酸氫二鉀2. 73-2. 75 ；磷酸二氫 鉀2. 72-2. 75 ；枸櫞酸鈉0. 42-0. 5 ；去氧膽酸鈉0. 05-0. 06 ；水楊苷0. 55-0. 6 ； 土 溫-801. 1-1. 2 ；TritonX-1001. 1-1. 2 ；膽鹽 0. 3-0. 4 ；硫酸鋁鉀 0. 25-0. 3 ；甘氨酸 0. 55-0. 6 ；氯化鈉5. 2-5. 5 ；十二烷基硫酸鈉0. 15-0. 2 ；蒸餾水至IOOOmL0配方三胰蛋白胨20. 0-21. 0 ；乳糖5. 0-5. 3 ；磷酸氫二鉀2. 70-2. 73 ；磷酸二氫 鉀2. 70-2. 74 ；枸櫞酸鈉0. 4-0. 45 ；去氧膽酸鈉0. 04-0. 05 ；水楊苷0. 5-0. 55 ； 土 溫-801. 0-1. 1 ；TritonX-1001. 0-1. 1 ；膽鹽 0. 2-0. 3 ；硫酸鋁鉀 0. 2-0. 25 ；甘氨酸 0. 5-0. 55 ；氯化鈉5. 0-5. 3 ；十二烷基硫酸鈉0. 1-0. 15 ；蒸餾水至IOOOmL0
權(quán)利要求
本發(fā)明涉及一種健康查體糞便致病菌檢測(cè)篩選增菌培養(yǎng)液，其特征在于具有如下配方(克/每升蒸餾水)胰蛋白胨20.0-22.0；乳糖5.0-5.5；磷酸氫二鉀2.70-2.75；磷酸二氫鉀2.70-2.75；枸櫞酸鈉0.4-0.5；去氧膽酸鈉0.04-0.06；水楊苷0.5-0.6；土溫-801.0-1.2；Triton X-1001.0-1.2；膽鹽0.2-0.4；硫酸鋁鉀0.2-0.3；甘氨酸0.5-0.6；氯化鈉5.0-5.5；十二烷基硫酸鈉0.1-0.2；蒸餾水至1000mL。
2.—種權(quán)利要求1所述健康查體糞便致病菌檢測(cè)篩選增菌培養(yǎng)液的制備方法，其特征 在于具有如下的步驟1)、各成分按比例混合于水中，加熱溶解，矯正PH至7.8，分裝于試管中，每管10mL， 121°C 15min高壓滅菌備用；2)、質(zhì)控菌株為產(chǎn)氣大腸桿菌(ATCC13048)、大腸埃希菌(ATCC25922)、鼠傷寒沙門菌 (ATCC14028)、金黃色葡萄球菌(ATCC25923)與相應(yīng)合格對(duì)照培養(yǎng)基平行進(jìn)行細(xì)菌生長(zhǎng)的 靈敏度試驗(yàn)，應(yīng)符合要求。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種健康查體糞便致病菌檢測(cè)篩選增菌培養(yǎng)液，用于對(duì)健康人的糞便樣品中攜帶致病菌的檢驗(yàn)。該培養(yǎng)液可將數(shù)份健康查體者的糞便進(jìn)行致病菌篩選檢測(cè)。該增菌培養(yǎng)液配制簡(jiǎn)單、選擇性強(qiáng)，與傳統(tǒng)培養(yǎng)基比較，檢出率高，污染小，臨床應(yīng)用效果滿意，大大提高檢測(cè)陽(yáng)性率，試驗(yàn)方法簡(jiǎn)單、時(shí)間短、準(zhǔn)確性高。
文檔編號(hào)C12Q1/04GK101824460SQ20091011886
公開日2010年9月8日 申請(qǐng)日期2009年3月4日 優(yōu)先權(quán)日2009年3月4日
發(fā)明者王洪林 申請(qǐng)人:王洪林