專利名稱：水解大豆蛋白產(chǎn)生外啡肽的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及水解蛋白產(chǎn)生特定肽類的方法。
背景技術(shù)：
近年來對食物來源的生物活性肽研究發(fā)展很快，由于大豆資源豐富，是一種比 較廉價、易得的蛋白原料，因此對大豆肽的研究、開發(fā)和生產(chǎn)更是異常活躍。隨著大豆 深加工產(chǎn)品開發(fā)的不斷深入，大豆肽作為一種新的大豆制品受到了廣泛關(guān)注，以大豆多 肽為原料的功能食品也不斷被開發(fā)出來，成為食品研究領(lǐng)域的一個熱點。但從總體來 看，對于大豆肽研究開發(fā)多偏重于其功能特性及應(yīng)用方面的研究，而對大豆肽的食品安 全問題卻研究較少，幾乎空白。 外啡肽具有較為廣泛的源，甚至是肉類和波菜的蛋白片段當中也存在具有阿片
配體活性的肽類。外啡肽隱藏在如乳蛋白、小麥谷蛋白、大米白蛋白、玉米蛋白、大麥
醇溶蛋白、a-大豆蛋白、牛血清蛋白和血紅蛋白等食物蛋白分子序列的片段中，可通
過適當?shù)拿附庾饔冕尫懦鰜怼６壳八夥椒▋H針對肽鏈長度要求而設(shè)計的，并沒有對
肽鏈末端的氨基酸殘基而制定，因此制得的肽類產(chǎn)品只強調(diào)其具有大豆的營養(yǎng)價值及易
被人體吸收，而其是否有阿片肽，有哪種阿片肽，是否還具有其他生理功能及安全性隱 串

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明是為了解決采用現(xiàn)有的方法水解大豆蛋白忽略了阿片肽所具有的生理功 能和安全隱患的問題，而提供水解大豆蛋白產(chǎn)生外啡肽的方法。 本發(fā)明第一種水解大豆蛋白產(chǎn)生外啡肽的方法按照如下方法進行采用胰蛋白 酶/堿性酶(Alcalase)，在pH值為8.0、溫度為55。C、酶與底物濃度比為1 : 3的條件下 酶解5h。 本發(fā)明第二種水解大豆蛋白產(chǎn)生外啡肽的方法按照如下方法進行采用胰蛋白 酶/中性酶(Neutras)，在pH值為7.5、溫度為55。C、酶與底物濃度比為2 : 1的條件下酶 解5h。 本發(fā)明第三種水解大豆蛋白產(chǎn)生外啡肽的方法按照如下方法進行采用胰堿性 酶/中性酶(Alcalase/Neutras)，在pH值為7.5、溫度為55。C、酶與底物濃度比為3 : l的 條件下酶解5h。本發(fā)明第四種水解大豆蛋白產(chǎn)生外啡肽的方法按照如下方法進行酸性蛋白酶/ 胃蛋白蛋酶，在pH值為2.5、溫度為37t:、酶與底物濃度比為2 : l的條件下酶解5h。
本發(fā)明四種方法均具有以下優(yōu)點1、本發(fā)明首次提出了大豆蛋白在酶同步水解 后產(chǎn)生大豆外啡肽的概念，確定了同步水解產(chǎn)生外啡肽的條件及產(chǎn)生量；2、同步水解產(chǎn) 生外啡肽方法的確定為大豆蛋白的后加工的安全性、大豆肽食品的發(fā)展奠定了基礎(chǔ)；3、 本發(fā)明的水解方法專門針對產(chǎn)品存在目標外啡肽——P -酪啡肽而設(shè)計的，使蛋白肽產(chǎn)品具有更強的生理功能，P-酪啡肽具有阿片樣活性，能夠明顯提高外周胰島素和胃泌素的 分泌，對胰高血糖素的分泌也有促進作用；P-酪啡肽能與在胃腸道和中樞神經(jīng)中存在與 攝食相關(guān)的前體結(jié)合后經(jīng)神經(jīng)傳導(dǎo)作用于攝食中樞，從而影響攝食行為；可以調(diào)節(jié)消化 道運動。


圖1為具體實施方式
一水解產(chǎn)物的液相色譜圖，
圖2為具體實施方式
二水解產(chǎn)物的液相色譜圖，
圖3為具體實施方式
三水解產(chǎn)物的液相色譜圖，
圖4為具體實施方式
四水解產(chǎn)物的液相色譜圖，
圖5為小鼠輸精管模型裝置。 其中，圖5中1表示張力換能器，2表示導(dǎo)電線，3表示剌激器，4表示螺絲夾， 5表示鉑電極，6表示熱水入口， 7表示麥氏浴槽，8表示導(dǎo)氣管，9表示熱水出口， 10表 示腸或輸精管，一表示通氧氣或空氣的方向
具體實施例方式
本發(fā)明技術(shù)方案不局限于以下所列舉具體實施方式
，還包括各具體實施方式
間 的任意組合。
具體實施方式
一 本實施方式水解大豆蛋白產(chǎn)生外啡肽的方法按照如下方法進 行采用胰蛋白酶/堿性酶，在pH值為8.0、溫度為55t:、酶與底物濃度比為l : 3的 條件下酶解5h。 本實施方式中胰蛋白酶的最佳用量為8000U/g，堿性酶的最佳用量為6000U/g。
本實施方式水解大豆蛋白產(chǎn)生外啡肽的方法水解大豆蛋白產(chǎn)生外啡肽為拮抗 劑，平均肽鏈長度7.85。 本實施方式的水解產(chǎn)物的液相色譜圖如圖1所示，從圖1中可以看出本實施方式 的水解大豆蛋白產(chǎn)生外啡肽為拮抗劑。
具體實施方式
二 本實施方式水解大豆蛋白產(chǎn)生外啡肽的方法按照如下方法進 行采用胰蛋白酶/中性酶，在pH值為7.5、溫度為55t:、酶與底物濃度比為2 : l的 條件下酶解5h。 本實施方式中胰蛋白酶的最佳用量為8000U/g，中性酶的最佳用量為6000U/g。
本實施方式水解大豆蛋白產(chǎn)生外啡肽的方法水解大豆蛋白，產(chǎn)生外啡肽為激動 劑，目標外啡肽百分含量0.007275%，平均肽鏈長度7.85。 本實施方式的水解產(chǎn)物的液相色譜圖如圖2所示，從圖2中可以看出本實施方式 的水解大豆蛋白產(chǎn)生外啡肽為激動劑。
具體實施方式
三本實施方式水解大豆蛋白產(chǎn)生外啡肽的方法按照如下方法進 行采用胰堿性酶/中性酶(Alcalase/Neutras)，在pH值為7.5、溫度為55。C、酶與底物濃 度比為3 : 1的條件下酶解5h。 本實施方式中堿性酶的最佳用量為6000U/g，中性酶的最佳用量為6000U/g。
本實施方式水解大豆蛋白產(chǎn)生外啡肽的方法水解大豆蛋白，產(chǎn)生外啡肽為激動劑，目標外啡肽百分含量0.01228%，平均肽鏈長度6.68。 本實施方式的水解產(chǎn)物的液相色譜圖如圖3所示，從圖3中可以看出本實施方式 的水解大豆蛋白產(chǎn)生外啡肽為激動劑。
具體實施方式
四本實施方式水解大豆蛋白產(chǎn)生外啡肽的方法按照如下方法進 行酸性蛋白酶/胃蛋白蛋酶，在pH值為2.5、溫度為37t:、酶與底物濃度比為2 : l的 條件下酶解5h。 本實施方式中酸性蛋白酶的最佳用量為8000U/g，胃蛋白蛋酶的最佳用量為 4000U/g。 本實施方式水解大豆蛋白產(chǎn)生外啡肽的方法水解大豆蛋白，產(chǎn)生外啡肽為激動 劑，目標外啡肽百分含量0.083065%，平均肽鏈長度5.91。 本實施方式的水解產(chǎn)物的液相色譜圖如圖4所示，從圖4中可以看出本實施方式 的水解大豆蛋白產(chǎn)生外啡肽為激動劑。 將具體實施方式
一至四的水解產(chǎn)物采用小鼠輸精管模型進行驗證，驗證裝置如 圖5所示，驗證所用藥劑及濃度為納絡(luò)酮的濃度為5mg/ml，樣品的濃度為200mg/mL ; 反應(yīng)器(放置輸精管的玻璃容器)體積為20ml，改變加入的樣品體積，即為改變加入的樣 品的量。小鼠輸精管試驗結(jié)果及處理如表l所示，表l中n二5， x士s， l號樣品為具體 實施方式一的水解產(chǎn)物，2號樣品為具體實施方式
二的水解產(chǎn)物，3號樣品為具體實施方 式三的水解產(chǎn)物，4號樣品為具體實施方式
四的水解產(chǎn)物，收縮活動通過等張換能器用記 錄儀記錄，以記錄儀電訊號(電壓mV =靈敏度/mV/cmX收縮高度/cm)的變化記錄收縮 反應(yīng)，結(jié)果以均數(shù)±標準差(x士s)表示，選用受試藥物4 5個不同的濃度，測定其抑 制電剌激標本收縮的百分率和樣品半數(shù)抑制劑量IC50值。在樣品濃度確定下，改變樣品 加入體積即相當改變樣品的加入量。如果加入樣品后小鼠輸精管既沒有表現(xiàn)有收縮也沒 有舒張跡象，說明這類樣品既沒有阿片活性，也沒有拮抗活性，表明這類樣品不產(chǎn)生外 啡肽。 表l小鼠輸精管試驗結(jié)果及處理表
豐i^樣ii加入量(以體積表樣品，數(shù)抑制劍納絡(luò)兩加納絡(luò) l逆轉(zhuǎn)效應(yīng)阿片為激動
P 園示/jiL)量iC50/進g/mL入教(以體瓶還足
抽抗劑
l1030 50700,685 土 0.152*有拮抗齊u
250100 i502000.785 土 0,023*50 腦0.426 土 0駕*有激動劑
350，00 1502000.724 土 0,348*50 1000.415 土 0.381*有激動劑
450100 150200O細土 O,靜50 腦0.435 土 0,020*激動翁 * : P < 0.05 ; " : P < 0.01 從表l中的數(shù)據(jù)可以看出，具體實施方式
一的水解產(chǎn)生外啡肽為拮抗劑，具體 實施方式二至四水解產(chǎn)生外啡肽為激動劑。
權(quán)利要求
水解大豆蛋白產(chǎn)生外啡肽的方法，其特征在于水解大豆蛋白產(chǎn)生外啡肽的方法按照如下方法進行采用胰蛋白酶/堿性酶，在pH值為8.0、溫度為55℃、酶與底物濃度比為1∶3的條件下酶解5h。
2. 水解大豆蛋白產(chǎn)生外啡肽的方法，其特征在于水解大豆蛋白產(chǎn)生外啡肽的方法按 照如下方法進行采用胰蛋白酶/中性酶，在pH值為7.5、溫度為55t:、酶與底物濃度 比為2 : 1的條件下酶解5h。
3. 水解大豆蛋白產(chǎn)生外啡肽的方法，其特征在于水解大豆蛋白產(chǎn)生外啡肽的方法按 照如下方法進行采用胰堿性酶/中性酶，在pH值為7.5、溫度為55t:、酶與底物濃度 比為3 : 1的條件下酶解5h。
4. 水解大豆蛋白產(chǎn)生外啡肽的方法，其特征在于水解大豆蛋白產(chǎn)生外啡肽的方法按 照如下方法進行酸性蛋白酶/胃蛋白蛋酶，在pH值為2.5、溫度為37t:、酶與底物濃 度比為2 : 1的條件下酶解5h。
全文摘要
水解大豆蛋白產(chǎn)生外啡肽的方法，它涉及了水解蛋白產(chǎn)生特定肽類的方法。本發(fā)明解決了采用現(xiàn)有的方法水解大豆蛋白忽略了阿片肽所具有的生理功能和安全隱患的問題。本發(fā)明四種方法分別采用胰蛋白酶/堿性酶、胰蛋白酶/中性酶、胰堿性酶/中性酶及酸性蛋白酶/胃蛋白蛋酶，在相應(yīng)的條件下進行。本發(fā)明四種水解方法確定了同步水解大豆蛋白產(chǎn)生外啡肽的條件及產(chǎn)生量，同步水解產(chǎn)生外啡肽方法的確定為大豆蛋白的后加工的安全性、大豆肽食品的發(fā)展奠定了基礎(chǔ)。
文檔編號C12P21/06GK101691596SQ20091007305
公開日2010年4月7日 申請日期2009年10月15日 優(yōu)先權(quán)日2009年10月15日
發(fā)明者孫冰玉, 石彥國, 胡春林 申請人:哈爾濱商業(yè)大學