專利名稱：利用木糖發(fā)酵產(chǎn)生乙醇的絲狀真菌及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明的屬于環(huán)境生物技術(shù)應(yīng)用領(lǐng)域，具體涉及一種真菌及其制備方法。
(二)
背景技術(shù)：
世界能源危機(jī)的出現(xiàn)以及人們環(huán)保意識(shí)的增強(qiáng)，生物質(zhì)能源已受到極大關(guān)注。 燃料乙醇由于它的污染小，具有環(huán)境友好性的特點(diǎn)，成為新型燃料資源有望取代日益減 少的化石能源(如石油和煤炭)。傳統(tǒng)乙醇發(fā)酵原料為玉米等糧食作物，糧食短缺的今天 這一生產(chǎn)方式受到極大的限制。木質(zhì)纖維素物質(zhì)(如農(nóng)作物廢棄物、木屑、薯渣等)是世 界上最為豐富的生物質(zhì)資源，由纖維素、半纖維素和木質(zhì)素組成，其水解產(chǎn)物主要是是 葡萄糖和木糖。釀酒酵母能發(fā)酵葡萄糖但不能發(fā)酵木糖產(chǎn)生乙醇。80年代以來，眾多的 學(xué)者進(jìn)行了木糖菌種的篩選以及菌種遺傳工程改造研究，木糖發(fā)酵微生物主要集中在畢 氏酵母(Pichia)，假絲酵母(Candida)和管囊酵母(Pachysolen)三個(gè)屬，構(gòu)建基因重組菌常 用的宿主菌種有釀酒酵母(S.cerevisiae)、運(yùn)動(dòng)發(fā)酵單胞菌(Zymomonas mobilis)和大腸桿菌 (E.coli)，對(duì)絲狀真菌的木糖發(fā)酵研究的很少。
(三)

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種原料成本低，而且培養(yǎng)方式為靜止培養(yǎng)(半好氧狀 態(tài))省去了攪拌工序，減少了工藝成本，從而降低了生產(chǎn)成本的利用木糖發(fā)酵產(chǎn)生乙醇的 絲狀真菌及其制備方法。 本發(fā)明的微生物尖孢鐮刀菌Fusarium xysporam CS-28是于2009年03月16 日保藏于"中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心"，保藏登記號(hào)為CCTCC: M209040，命名 為尖孢鐮刀菌CS-28(Fusarium xysporum CS-28)的菌株，屬于真菌界(Fungi)，子囊菌 門(Ascimycota)， 盤菌亞門(Pezizomycotina)， 糞殼菌纟岡(Sordariomycetes)， 肉座菌目 (Hypocreales)，有絲分裂真菌肉座菌禾斗(Mitosporic Hypocreales)，鐮刀菌屬(Fusarium)。
針對(duì)目前能夠利用木糖發(fā)酵菌種少，乙醇產(chǎn)率不高的現(xiàn)狀，本發(fā)明從自然界中 篩選到一株絲狀真菌發(fā)酵木糖產(chǎn)乙醇的菌株，對(duì)其進(jìn)行了形態(tài)學(xué)和分子生物學(xué)鑒定，同 時(shí)對(duì)其發(fā)酵條件進(jìn)行了優(yōu)化，是一株利用木糖發(fā)酵產(chǎn)生乙醇絲狀真菌。其形態(tài)學(xué)特性
為 結(jié)合圖1、圖2，該菌株在PDA培養(yǎng)基上培養(yǎng)2d后菌落直徑超過2.5cm， 7d達(dá) 8-9cm;在室溫(25tO下，菌絲生長(zhǎng)良好，棉絮狀至絨毛狀，最初白色，逐漸中央粉色， 后期轉(zhuǎn)變?yōu)樽仙囵B(yǎng)基反面深紫色；結(jié)合圖3、圖4，菌絲染色后顯微鏡觀察結(jié)果，菌 絲有隔、分枝、透明；分生孢子紡錘-鐮刀形，兩端漸變窄，基部無腳孢，有隔，有大小 兩種類型分生孢子，小型分生孢子數(shù)量較多，從菌絲的側(cè)生而單出的瓶狀小梗上長(zhǎng)出或 從分生孢子梗上長(zhǎng)出，不呈鏈生而是假頭狀著生；橢圓形，紡錘形，卵形，逗點(diǎn)形；大 型分生孢子時(shí)常較少，產(chǎn)于粘孢團(tuán)中或從分孢子梗上長(zhǎng)出；鐮刀形，紡錘形；頂端細(xì)胞 窄細(xì)。
經(jīng)分子生物學(xué)鑒定尖孢鐮刀菌Fusarium xysporum CS-28的18s rDNA轉(zhuǎn)錄間區(qū) (Internaltranscribedspacer， ITS)的序列結(jié)果 1 TGATATGCTT AAGTTCAGCG GGTATTCCTA CCTGATCCGA GGTCAACATT CAGAAGTTGG 61 GGGTTTAACG GCTTGGCCGC GCCGCGTTCC AGTTGCGAGG GTTTTACTAC TACGCAATGG 121 AGGCTGCAGC GAGACCGCCA CTAGATTTCG GGGCCGGCTT GCCGCAAGGG CTCGCCGATC 181 CCCAACACCA AACCCGAGGG CTTGAGGGTT GAAATGACGC TCGAACAGGC ATGCCCGCCA 241 GAATACTGGC GGGCGCAATG TGCGTTCAAA GATTCGATGA TTCACTGAAT TCTGCAATTC 301 ACATTACTTA TCGCATTTTG CTGCGTTCTT CATCGATGCC AGAACCAAGA GATCCGTTGT 361 TGAAAGTTTT GATTTATTTA TGGTTTTACT CAGAAGTTAC ATATAGAAAC AGAGTTTAGG 421 GGTCCTCTGG CGGGCCGTCC CGTTTTACCG GGAGCGGGCT GATCCGCCGA GGCAACAAGT 481 GGTATGTTCA CAGGGGTTTG GGAGTTGTAA ACTCGGTAAT GATCCCTCCG CAGGT 生長(zhǎng)特性菌體對(duì)培養(yǎng)基的要求不高，在PDA培養(yǎng)基上pH自然即可生長(zhǎng)，培
養(yǎng)溫度在20-30°C。 代謝特征 l)不同碳源的利用情況 菌株能以木糖、果糖、葡萄糖、半乳糖、麥芽糖、蔗糖、玉米秸稈、淀粉、羧 甲基纖維素鈉、木糖醇、甘露醇作為碳源進(jìn)行發(fā)酵產(chǎn)生乙醇。菌種對(duì)蔗糖、葡萄糖、淀 粉、半乳糖的酒精發(fā)酵能力最強(qiáng)，對(duì)乳糖的發(fā)酵能力最弱。鐮刀菌對(duì)12種碳源均有不同 程度的酒精發(fā)酵能力，其碳源應(yīng)用譜廣泛，有望成為工業(yè)發(fā)酵待選菌種。
2)菌體對(duì)氮源利用情況 分別選用酵母提取物，蛋白胨，豆面，玉米粉，豆餅水，豆粕，尿， (NH4)2S04， KN03， NH4N03， NaN03， NH4AC作為氮源，以木糖作為碳源進(jìn)行發(fā)酵試
驗(yàn)，結(jié)果見圖6:不同氮源對(duì)尖孢鐮刀菌發(fā)酵產(chǎn)乙醇的試驗(yàn)結(jié)果顯示有機(jī)氮源比無機(jī)
氮源產(chǎn)乙醇的量高。在有機(jī)氮源中黃豆面的產(chǎn)乙醇量為4.28ml/L，與yeast extract(酵母 提取物)(4.25ml/l)的發(fā)酵效果持平，考慮到發(fā)酵成本，以下的發(fā)酵試驗(yàn)中采用黃豆面作為 氮源。在無機(jī)氮源中，硝態(tài)氮比銨態(tài)氮效果好，其中NaN03的發(fā)酵效率最高，達(dá)到了 2.61ml/L。 從圖6中還可以看出木糖發(fā)酵時(shí)間在第6天時(shí)乙醇含量最好，到第7天時(shí)開始 下降。 發(fā)酵特性結(jié)合圖7，
1)初始pH值對(duì)發(fā)酵的影響初始pH值對(duì)發(fā)酵的影響很大，初始pH值分別設(shè) 為5.4， 5.6， 5.8， 6.0， 6.2，隨著pH值得升高乙醇產(chǎn)量呈上升趨勢(shì)，pH 6.0時(shí)乙醇產(chǎn)量 最高為5.51ml/l，隨后又急劇下降。 2)結(jié)合圖8，溫度對(duì)發(fā)酵的影響溫度對(duì)乙醇發(fā)酵的影響極大，溫度過高會(huì)增加 乙醇的蒸發(fā)，溫度過低影響菌體生長(zhǎng)，從而影響乙醇產(chǎn)量，試驗(yàn)結(jié)果表明溫度為3(TC 乙醇產(chǎn)量最高。各種培養(yǎng)基 斜面保存培養(yǎng)基每升培養(yǎng)液含木糖20g，瓊脂20g，酵母提取物10g，蛋白胨 5g， pH自然； 活化液體培養(yǎng)基每升培養(yǎng)液含木糖10g，馬鈴薯200g， pH值自然； 活化固體培養(yǎng)基每升培養(yǎng)液含木糖10g，馬鈴薯200g，瓊脂20g， pH值自
然；種子培養(yǎng)基每L培養(yǎng)液含木糖10g， CaCl20.1g， MgSO40.2g， KH2P04 2g，氮
源依試驗(yàn)而定 發(fā)酵培養(yǎng)基每L培養(yǎng)液含CaCl2 O.lg， MgSO4 0.2g， KH2P04 2g，碳源和氮源
依試驗(yàn)而定。
方法 培養(yǎng)方法從斜面培養(yǎng)基中挑起少量菌絲與活化固體培養(yǎng)基中，3(TC培養(yǎng)7 天，用無菌水洗下孢子，按1 X 106個(gè)孢子每升接種于裝有20ml種子培養(yǎng)液的100ml搖瓶 中，30°C 200rpm培養(yǎng)2天。 發(fā)酵方法10X的接種量接種于裝有50ml發(fā)酵培養(yǎng)基的100ml搖瓶在中，靜止 培養(yǎng)數(shù)天，進(jìn)行乙醇含量的測(cè)定。
本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)和效果有 本發(fā)明的絲狀真菌能直接利用木糖發(fā)酵產(chǎn)生乙醇，屬于環(huán)境生物技術(shù)應(yīng)用領(lǐng) 域，特別對(duì)纖維素水解后的可發(fā)酵糖類的充分利用提高良好途徑。本發(fā)明的絲狀真菌尖 孢鐮刀菌以木糖為原料進(jìn)行發(fā)酵產(chǎn)生乙醇，最好的氮源是酵母提取物，但本發(fā)明的最好 氮源選擇與其乙醇產(chǎn)量相當(dāng)?shù)狞S豆面，大大降低了原料成本，而且培養(yǎng)方式為靜止培養(yǎng) (半好氧狀態(tài))省去了攪拌工序，減少了工藝成本，從而降低了生產(chǎn)成本。
同時(shí)本發(fā)明的菌種具有產(chǎn)生纖維素酶，半纖維素酶，淀粉酶等多種酶系的特 點(diǎn)，能利用玉米秸稈，淀粉以及羧甲基纖維素鈉為碳源進(jìn)行發(fā)酵，能夠?qū)崿F(xiàn)同時(shí)糖化和 發(fā)酵過程。它不僅能發(fā)酵纖維素等聚合物，還能同時(shí)多種單糖(如葡萄糖，半乳糖等)， 只利用單一菌種即可實(shí)現(xiàn)降解纖維素發(fā)酵生產(chǎn)乙醇的目的。通過進(jìn)一步的產(chǎn)酶條件優(yōu)化 可提高對(duì)秸稈的利用率，為早日實(shí)現(xiàn)利用纖維素木質(zhì)原料進(jìn)行能源轉(zhuǎn)化提高新的菌種。


圖1-圖2為尖孢鐮刀菌在PDA培養(yǎng)基中生長(zhǎng)7天的菌落形態(tài)示意圖；
圖3-圖4為孢子形態(tài)的顯微觀察示意圖；
圖5為不同碳源對(duì)尖孢鐮刀菌發(fā)酵影響示意圖；
圖6為不同氮源對(duì)尖孢鐮刀菌發(fā)酵的影響示意圖；
圖7為初始pH值對(duì)發(fā)酵的影響示意5
圖8為溫度對(duì)發(fā)酵的影響示意圖。 具體實(shí)施例方式
下面結(jié)合具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步的說明
實(shí)施例1 :本實(shí)施例采用種子培養(yǎng)基每L培養(yǎng)液含木糖10g，黃豆面10g， NaN03 2g， CaCl2 O.lg， MgS04 0.2g， KH2P04 2g， pH值6.0 ;發(fā)酵培養(yǎng)基每L培養(yǎng)液含木糖20g，黃豆面10g， NaN03 2g， CaCl2 O.lg， MgS04 0.2g， KH2P04 2g， pH值6.0 ; 培養(yǎng)方法從斜面培養(yǎng)基中挑起少量菌絲與活化固體培養(yǎng)基中，3(TC培養(yǎng)7 天，用無菌水洗下孢子，按1 X 106個(gè)孢子每升接種于裝有20ml種子培養(yǎng)液的100ml搖瓶 中，30°C 200rpm培養(yǎng)2天。 發(fā)酵方法10%的接種量接種于裝有50ml發(fā)酵培養(yǎng)基的100ml搖瓶在中，靜止 培養(yǎng)6天，進(jìn)行乙醇含量的測(cè)定。 應(yīng)用上述的培養(yǎng)基和方法進(jìn)行木糖發(fā)酵試驗(yàn)，在2%的木糖發(fā)酵培養(yǎng)基中，乙醇
的最大濃度為5.89g/L，產(chǎn)量為0.295g/g，達(dá)到理論產(chǎn)量(0.51g/g)的57.84%。 實(shí)施例2 : 土樣采自哈爾濱平房區(qū)堆積兩年的玉米秸稈，E.coli T叩IO為發(fā)明人
實(shí)驗(yàn)室保存。
試劑TaqDNA聚合酶、pMD-18T載體試劑盒為寶生物工程(大連)有限公司產(chǎn)品；膠 回收試劑盒為上海華舜生物公司，引物合成和測(cè)序由上海生工生物技術(shù)有限公司完成； 木糖購自美國(guó)Sigma公司；其它試劑均為國(guó)產(chǎn)分析純?cè)噭?
培養(yǎng)基初篩培養(yǎng)基(PXA):馬鈴薯200g/L，木糖20g/L，瓊脂20g/L， pH值6.0。
復(fù)篩培養(yǎng)基木糖1%，酵母粉0.4%，蛋白胨0.2%， (NH4)2SO40.6%， KH2P04 0.1%， MgS04 7H2O0.1%， CaCl20.5%。
方法菌種分離篩選 取lg采集的土樣溶于10mL無菌水中3(TC振蕩lh，經(jīng)適當(dāng)稀釋后，涂布于PXA 平板上，3(TC恒溫培養(yǎng)48h;挑取生長(zhǎng)較快菌落，經(jīng)多次分離純化，獲得的絲狀真菌純 培養(yǎng)物保存。 純化后的單菌落經(jīng)復(fù)篩選培養(yǎng)基進(jìn)行杜氏管發(fā)酵試驗(yàn)進(jìn)一步篩選，最后利用發(fā) 酵培養(yǎng)基進(jìn)行乙醇含量的測(cè)定，挑選出乙醇含量最高的菌株作為下一步研究對(duì)象。
形態(tài)學(xué)鑒定參考《真菌鑒定手冊(cè)》。 18SrDNA弓|物Tl : 5' -TCC GTA GGT GAA CCT GCG G-3'
14:5' -TCC TCC GCT TAT TGA TAT GC-3' PCR反應(yīng)體系所有PCR反應(yīng)均在20iiL標(biāo)準(zhǔn)反應(yīng)體系中進(jìn)行，其中含2yL Buffer緩沖液，1.6ii 2.5mMdNTPs，每一引物均為luL(10mM)， 0.125uLTaq酶，1 P L模 板DNA，加無菌超純水至20iiL，于PCR儀上按94t:預(yù)變性5min，然后按94"C、 30s， 56°C、 30s， 72°C、 lmin，循環(huán)32次，最后72。C延伸10min。
65/6頁 結(jié)果菌株在PDA培養(yǎng)基上培養(yǎng)4d后菌落直徑超過2.5cm， 10d達(dá)6 7cm ; 在室溫(26t:)下，菌絲生長(zhǎng)良好，棉絮狀至絨毛狀，最初白色，逐漸中央粉色，后期轉(zhuǎn) 變?yōu)樽仙?，培養(yǎng)基反面深紫色；菌絲有隔，分枝，透明，直徑1.5 3.5ym，產(chǎn)生。
有大小分生包子小型分生孢子數(shù)量較多，從菌絲的側(cè)生而單出的瓶狀小梗上 長(zhǎng)出或從分生孢子梗上長(zhǎng)出，不呈鏈生而是假頭狀著生；橢圓形、紡錘形、卵形、逗點(diǎn) 形；具0 1隔，透明，光滑；大型分生孢子時(shí)常較少，產(chǎn)于粘孢團(tuán)中或從分生孢子梗 上長(zhǎng)出；鐮刀形、紡錘形；頂端細(xì)胞窄細(xì)，稍尖；孢壁??；大多3分隔，少為5分隔。 厚垣孢子生于菌絲中間或頂部，單生或串生，球形至卵形，光滑，直徑5 10iim，在菌 絲上形成較稀疏。鑒定結(jié)果為尖孢鐮刀菌。 序列表尖孢鐮刀菌Fusarium xysporumCS-28的18s rDNA轉(zhuǎn)錄間區(qū) (Internaltranscribedspacer， ITS)的序列結(jié)果 1 TGATATGCTT AAGTTCAGCG GGTATTCCTA CCTGATCCGA GGTCAACATT CAGAAGTTGG 61 GGGTTTAACG GCTTGGCCGC GCCGCGTTCC AGTTGCGAGG GTTTTACTAC TACGCAATGG 121 AGGCTGCAGC GAGACCGCCA CTAGATTTCG GGGCCGGCTT GCCGCAAGGG CTCGCCGATC 181 CCCAACACCA AACCCGAGGG CTTGAGGGTT GAAATGACGC TCGAACAGGC ATGCCCGCCA 241 GAATACTGGC GGGCGCAATG TGCGTTCAAA GATTCGATGA TTCACTGAAT TCTGCAATTC 301 ACATTACTTA TCGCATTTTG CTGCGTTCTT CATCGATGCC AGAACCAAGA GATCCGTTGT 361 TGAAAGTTTT GATTTATTTA TGGTTTTACT CAGAAGTTAC ATATAGAAAC AGAGTTTAGG 421 GGTCCTCTGG CGGGCCGTCC CGTTTTACCG GGAGCGGGCT GATCCGCCGA GGCAACAAGT481 GGTATGTTCA CAGGGGTTTG GGAGTTGTAA ACTCGGTAAT
GATCCCTCCG CAGGT 序列表樣例 <110>哈爾濱工業(yè)大學(xué) <120>利用木糖發(fā)酵產(chǎn)生乙醇的絲狀真菌及其制備方法
<160>1
<210>1
<211>536
<212>DNA <213>FusariumxysporamCS-28
<400>TGATATGCTT AAGTTCAGCG GGTATTCCTA CCTGATCCGA GGTCAACATTCAGAAGTTGG 1 GGGTTTAACG GCTTGGCCGC GCCGCGTTCC AGTTGCGAGG GTTTTACTAC TACGCAATGG 61 AGGCTGCAGC GAGACCGCCA CTAGATTTCG GGGCCGGCTT GCCGCAAGGG CTCGCCGATC 121 CCCAACACCA AACCCGAGGG CTTGAGGGTT GAAATGACGC TCGAACAGGC ATGCCCGCCA 181 GAATACTGGC GGGCGCAATG TGCGTTCAAA GATTCGATGA TTCACTGAAT TCTGCAATTC 241 ACATTACTTA TCGCATTTTG CTGCGTTCTT CATCGATGCC AGAACCAAGA GATCCGTTGT 301 TGAAAGTTTT GATTTATTTA TGGTTTTACT CAGAAGTTAC ATATAGAAAC AGAGTTTAGG 361
GGCAACAAGT 421 GGTATGTTCA CAGGGGTTTG GGAGTTGTAA ACTCGGTAAT GATCCCTCCG CAGGT 48權(quán)利要求
一種利用木糖發(fā)酵產(chǎn)生乙醇的絲狀真菌，其特征在于所述的絲狀真菌是于2009年03月16日保藏于“中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心”，保藏登記號(hào)為CCTCCM209040，命名為尖孢鐮刀菌CS-28(Fusarium xysporum CS-28)的菌株。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的利用木糖發(fā)酵產(chǎn)生乙醇的絲狀真菌，其特征在于所述的尖孢 鐮刀菌Fusariumxysporum CS-28的18srDNA轉(zhuǎn)錄間區(qū)為TGATATGCTT AAGTTCAGCG GGTATTCCTA CCTGATCCGA GGTCAACATT CAGAAGTTGG 1GGGTTTAACG GCTTGGCCGC GCCGCGTTCC AGTTGCGAGG GTTTTACTAC TACGCAATGG 61AGGCTGCAGC GAGACCGCCA CTAGATTTCG GGGCCGGCTT GCCGCAAGGG CTCGCCGATC 121CCCAACACCA AACCCGAGGG CTTGAGGGTT GAAATGACGC TCGAACAGGC ATGCCCGCCA 181GAATACTGGC GGGCGCAATG TGCGTTCAAA GATTCGATGA TTCACTGAAT TCTGCAATTC 241ACATTACTTA TCGCATTTTG CTGCGTTCTT CATCGATGCC AGAACCAAGA GATCCGTTGT 301TGAAAGTTTT GATTTATTTA TGGTTTTACT CAGAAGTTAC ATATAGAAAC AGAGTTTAGG 361GGTCCTCTGG CGGGCCGTCC CGTTTTACCG GGAGCGGGCT GATCCGCCGA GGCAACAAGT 421GGTATGTTCA CAGGGGTTTG GGAGTTGTAA ACTCGGTAAT GATCCCTCCG CAGGT 481。
3. —種制備根據(jù)權(quán)利要求1所述的利用木糖發(fā)酵產(chǎn)生乙醇的絲狀真菌的制備方法，其 特征在于它包括以下步驟(1) 種子培養(yǎng)基每L培養(yǎng)液含木糖10g，黃豆面10g， NaN03 2g， CaCl2 O.lg， MgS04 0.2g， KH2P04 2g， pH值6.0 ;(2) 發(fā)酵培養(yǎng)基每L培養(yǎng)液含木糖加g，黃豆面10g， NaNO"g， CaCl20.1g， MgS04 0.2g， KH2P04 2g， pH值6.0 ;(3) 培養(yǎng)方法從斜面培養(yǎng)基中挑起少量菌絲與活化固體培養(yǎng)基中，3(TC培養(yǎng)7天， 用無菌水洗下孢子，按1X106個(gè)孢子每升接種于裝有20ml種子培養(yǎng)液的100ml搖瓶中， 30°C 200rpm培養(yǎng)2天。(4) 發(fā)酵方法10X的接種量接種于裝有50ml發(fā)酵培養(yǎng)基的100ml搖瓶在中，靜止培 養(yǎng)6天，進(jìn)行乙醇含量的測(cè)定；(5) 應(yīng)用上述的培養(yǎng)基和方法進(jìn)行木糖發(fā)酵試驗(yàn)，在2%的木糖發(fā)酵培養(yǎng)基中，乙醇 的最大濃度為5.89g/L，得到菌株，產(chǎn)量為0.295g/g。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種利用木糖發(fā)酵產(chǎn)生乙醇的絲狀真菌及其制備方法，本發(fā)明的微生物尖孢鐮刀菌Fusarium xysporum CS-28是于2009年03月11日保藏于“中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心”，保藏登記號(hào)為CCTCCM209040，命名為尖孢鐮刀菌CS-28(Fusarium xysporumCS-28)的菌株。本發(fā)明的絲狀真菌能直接利用木糖發(fā)酵產(chǎn)生乙醇，特別對(duì)纖維素水解后的可發(fā)酵糖類的充分利用提高良好途徑。本發(fā)明的絲狀真菌尖孢鐮刀菌以木糖為原料進(jìn)行發(fā)酵產(chǎn)生乙醇，最好的氮源是酵母提取物，但本發(fā)明的最好氮源選擇與其乙醇產(chǎn)量相當(dāng)?shù)狞S豆面，大大降低了原料成本，而且培養(yǎng)方式為靜止培養(yǎng)(半好氧狀態(tài))省去了攪拌工序，減少了工藝成本，從而降低了生產(chǎn)成本。
文檔編號(hào)C12R1/77GK101691539SQ200910071929
公開日2010年4月7日 申請(qǐng)日期2009年4月30日 優(yōu)先權(quán)日2009年4月30日
發(fā)明者楊謙, 范金霞 申請(qǐng)人:哈爾濱工業(yè)大學(xué)