一種用于凍存固體培養(yǎng)絲狀真菌的空心罩的制作方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本實(shí)用新型屬于菌種保藏技術(shù)研究領(lǐng)域，具體涉及一種用于凍存固體培養(yǎng)絲狀真 菌的空心罩及凍存方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 絲狀真菌是重要的微生物菌種資源，許多類群的絲狀真菌是科研或生產(chǎn)用菌株， 對人類生產(chǎn)生活產(chǎn)生了重要影響，具有較大的社會(huì)經(jīng)濟(jì)價(jià)值。對絲狀真菌菌種資源的保藏 不僅保護(hù)了生物多樣性，更為人類研究和利用這些菌種起到了重要作用。目前，微生物的保 藏主要有以下四種方法：（1)液氮超低溫保藏法，該法同時(shí)適用于液體培養(yǎng)物和固體培養(yǎng) 物的保藏；（2)冷凍干燥保藏法，該法雖適用于液體和固體培養(yǎng)物的保藏，但兩類培養(yǎng)物均 需先制備成符合保藏要求的菌懸液；（3)-80°C低溫凍結(jié)保藏法，該法的操作同液氮超低溫 保藏法類似，僅是保藏條件（主要是溫度）不同；(4)定期移植保藏法，該法多用于固體培 養(yǎng)物的短期保藏，需定期對菌種復(fù)蘇和再保藏，費(fèi)時(shí)費(fèi)力。其中，液氮超低溫保藏法和-80°C 低溫凍結(jié)保藏法因操作簡易且保藏時(shí)間較長被廣泛應(yīng)用于各類微生物的保藏。
[0003] 用于保藏的絲狀真菌多采用固體培養(yǎng)方式，主要因?yàn)楣腆w培養(yǎng)易于真菌生長特 性的觀察，便于發(fā)現(xiàn)污染，從而提高保藏的質(zhì)量。目前，進(jìn)行固體培養(yǎng)絲狀真菌的保藏均 是劃取或挑取菌塊，或是制備成菌懸液然后進(jìn)行凍存。PRO-LAB DIAGNOSTICS公司開發(fā)的 MICR0BANK凍存系統(tǒng)《用于固體培養(yǎng)絲狀真菌的凍存時(shí)也是按照上述操作，需要先將劃取 的菌塊或菌懸液加入凍存溶液中，然后再加入有孔珠子進(jìn)行混勻，細(xì)胞附著于有孔珠子內(nèi) 部和外部的表面。這類凍存方法均存在一定的缺陷和局限性，主要是因?yàn)椋孩賱澣』蛱羧〉?菌塊用于菌種保藏時(shí)，菌塊攜帶的培養(yǎng)基存在于凍存液中，進(jìn)行菌種復(fù)蘇時(shí)會(huì)將這些培養(yǎng) 基帶入新的培養(yǎng)基中，對有特殊要求的菌種培養(yǎng)會(huì)產(chǎn)生不利影響；②固體培養(yǎng)的絲狀真菌 在制備菌懸液時(shí)污染風(fēng)險(xiǎn)較大，易導(dǎo)致保藏失敗。
[0004] 目前關(guān)于絲狀真菌的凍存方法已有報(bào)道，但經(jīng)文獻(xiàn)檢索，未發(fā)現(xiàn)與本實(shí)用新型內(nèi) 容相類同的公開文獻(xiàn)報(bào)道。 【實(shí)用新型內(nèi)容】
[0005] 本實(shí)用新型的目的在于改進(jìn)現(xiàn)有技術(shù)之不足，提供一種用于凍存固體培養(yǎng)絲狀真 菌的空心罩及使用該空心罩的操作方便、成本低廉且能夠滿足特殊培養(yǎng)要求的固體培養(yǎng)絲 狀真菌的凍存方法，為絲狀真菌的保藏提供技術(shù)支持。
[0006] 本實(shí)用新型第一方面涉及一種用于凍存固體培養(yǎng)絲狀真菌的空心罩3,其底部34 為一平面且其內(nèi)部具有與所述底部34連通的空心33。
[0007] 在本實(shí)用新型優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述空心罩3為半球狀空心罩、圓臺(tái)狀空心罩、 圓柱狀空心罩、圓錐狀空心罩或長方體狀空心罩。
[0008] 在本實(shí)用新型優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述空心罩3的罩面32上布有棘刺31。該棘刺 31的形狀不受限制，直立狀、彎曲狀或多枝杈狀均可。
[0009] 在本實(shí)用新型優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述棘刺31的長度為lmm-4mm。
[0010] 在本實(shí)用新型優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述空心罩3的直徑在3mm~6mm之間。
[0011] 在本實(shí)用新型優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述空心罩3由樹脂材料制成。
[0012] 本實(shí)用新型第二方面涉及一種用于固體培養(yǎng)絲狀真菌的凍存方法，該方法包括下 述步驟：
[0013] a.制備固體培養(yǎng)基平板并接種待保藏絲狀真菌；
[0014] b.滅菌處理根據(jù)本實(shí)用新型第一方面所述的空心罩；
[0015] c.將所述空心罩底部向下置于待保藏絲狀真菌接種點(diǎn)周圍的固體培養(yǎng)基表面；
[0016] d.培養(yǎng)所述待保藏絲狀真菌，至絲狀真菌生長覆蓋所述空心罩的罩面或所述空心 罩罩面上的棘刺，得到長有所述待保藏絲狀真菌的空心罩；
[0017] e.將上述長有所述待保藏絲狀真菌的空心罩3轉(zhuǎn)移至凍存溶液中，混勻后將所述 待保藏絲狀真菌菌種凍存。
[0018] 其中，該凍存方法中涉及的固體培養(yǎng)基平板制備、滅菌、菌種接種、菌種培養(yǎng)、菌種 凍存等均采用本技術(shù)領(lǐng)域常規(guī)操作，本文不再贅述。
[0019] 在本實(shí)用新型優(yōu)選的實(shí)施方案中，在上述步驟c中，所述空心罩與所述待保藏絲 狀真菌接種點(diǎn)的距離為0. 3cm~I. 0cm。
[0020] 在本實(shí)用新型優(yōu)選的實(shí)施方案中，步驟e中轉(zhuǎn)移的所述長有所述待保藏絲狀真菌 的空心罩的數(shù)量為4-6個(gè)。
[0021] 當(dāng)凍存的絲狀真菌需要進(jìn)行復(fù)蘇時(shí)，按照常規(guī)操作復(fù)蘇菌種后直接取出所述空心 罩接種至相應(yīng)的培養(yǎng)基即可。
[0022] 與現(xiàn)有技術(shù)相比，本實(shí)用新型的有益效果在于：
[0023] 1、本實(shí)用新型的用于凍存固體培養(yǎng)絲狀真菌的所述空心罩3的罩面32上布滿的 棘刺31既能夠起到附著菌絲的作用，又能起到轉(zhuǎn)移菌絲的作用，可直接用于菌種的液體凍 存，不需要?jiǎng)澣』蛱羧【鷫K以及制備菌懸液等操作，有效避免了凍存時(shí)菌塊對固體培養(yǎng)基 的攜帶和制備菌懸液可能帶來的污染。
[0024] 2、本實(shí)用新型的用于凍存固體培養(yǎng)絲狀真菌的所述空心罩3由樹脂材料制成，可 以直接進(jìn)行高溫滅菌，且可以反復(fù)使用，環(huán)保價(jià)廉。
[0025] 3、本實(shí)用新型的凍存方法具有操作方便、成本低廉且能夠滿足特殊培養(yǎng)要求的優(yōu) 點(diǎn)，為絲狀真菌的保藏提供技術(shù)支持。
【附圖說明】
[0026] 圖1為本實(shí)用新型的用于凍存固體培養(yǎng)絲狀真菌的空心罩的結(jié)構(gòu)示意圖。
[0027] 圖2為絲狀真菌在固體培養(yǎng)基上與所述空心罩共培養(yǎng)的示意圖。
[0028] 其中，各附圖標(biāo)記具有以下含義：
[0029] 1-固體培養(yǎng)基；2-待保藏絲狀真菌接種點(diǎn)；3-空心罩；4-平板；31-棘刺；32-罩 面；33-空心；34-底部。
【具體實(shí)施方式】
[0030] 以下結(jié)合附圖和具體實(shí)施例進(jìn)一步說明本實(shí)用新型的內(nèi)容，但不應(yīng)理解為對本實(shí) 用新型的限制。在不背離本實(shí)用新型精神和實(shí)質(zhì)的情況下，對本實(shí)用新型方法、步驟或條件 所作的修改或替換，均屬于本實(shí)用新型的范圍。
[0031] 實(shí)施例1 :黃曲霉的凍存
[0032] 1.配制沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基，高溫高壓滅菌后在超凈工作臺(tái)內(nèi)倒入適量上述培 養(yǎng)基至無菌平板中，待其自然冷卻，得到沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基固體平板；
[0033] 2.從凍存管或固體培養(yǎng)基平板上接種黃曲霉至所述沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基固體 平板上；
[0034] 3.用鑷子將滅菌后的所述空心罩放置于黃曲霉接種點(diǎn)的周圍，得到共培養(yǎng)平 板（如圖2所示）；其中所述空心罩直徑4_，所述空心罩與所述黃曲霉接種點(diǎn)的距離為 1.0 cm ;其中，所使用的空心罩3如圖1所示，其為半球狀空心罩，其由樹脂材料制成，其底部 34為一平面且其內(nèi)部具有與所述底部34連通的空心33,其罩面32上布有棘刺31。
[0035] 4.將所述共培養(yǎng)平板放置于26°C恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)3天~5天，至菌絲生長覆蓋 至所述空心罩罩面上的棘刺，得到覆蓋有菌絲的空心罩；
[0036] 5.吸取ImL 15% (v/v)甘油凍存液加入凍存管內(nèi)，然后用無菌鑷子取4個(gè)~6個(gè) 所述覆蓋有菌絲的空心罩放入凍存液內(nèi)；
[0037] 6.蓋上所述凍存管的管蓋，輕輕混勻數(shù)次后將所述凍存管放入程序降溫盒內(nèi)，進(jìn) 行后續(xù)的凍存操作完成菌種的凍存。
[0038] 實(shí)施例2 :淡紫擬青霉的凍存
[0039] 1.配制馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基，高溫高壓滅菌后在超凈工作臺(tái)內(nèi)倒入適量上述 培養(yǎng)基至無菌平板中，待其自然冷卻，得到馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基固體平板；
[0040] 2.從凍存管或固體培養(yǎng)基平板上接種淡紫擬青霉至所述馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng) 基固體平板上；
[0041] 3.用鑷子將滅菌后的所述空心罩放置于淡紫擬青霉接種點(diǎn)的周圍，得到共培養(yǎng)平 板；其中所述空心罩直徑3mm，所述空心罩與所述淡紫擬青霉接種點(diǎn)的距離為0. 5cm ;
[0042] 4.將所述共培養(yǎng)平板放置于26°C恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)3天~5天，至菌絲生長覆蓋 至所述空心罩罩面上的棘刺空，得到覆蓋有菌絲的空心罩；
[0043] 5.將ImL 15% (v/v)甘油凍存液加入凍存管內(nèi)，然后用無菌鑷子取4個(gè)~6個(gè)所 述覆蓋有菌絲的空心罩放入凍存液內(nèi)；
[0044] 6.蓋上所述凍存管的管蓋，輕輕混勻數(shù)次后將所述凍存管放入程序降溫盒內(nèi)，進(jìn) 行后續(xù)的凍存操作完成菌種的凍存。
[0045] 其中，本實(shí)用新型實(shí)施例中涉及的黃曲霉（Aspergillus flavus)和淡紫擬青霉 (Paecilomyces Iilacinus)為常見的絲狀真菌，能夠從國內(nèi)外的菌種保藏機(jī)構(gòu)購買得到。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種用于凍存固體培養(yǎng)絲狀真菌的空心罩（3)，其特征在于，其底部（34)為一平面 且其內(nèi)部具有與所述底部（34)連通的空心（33)。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的空心罩，其特征在于，其為半球狀空心罩、圓臺(tái)狀空心罩、圓 柱狀空心罩、圓錐狀空心罩或長方體狀空心罩。3. 根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的空心罩，其特征在于，所述空心罩的罩面（32)上布有棘 刺（31)〇4. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的空心罩，其特征在于，所述棘刺（31)的長度為lmm-4mm。5. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的空心罩，其特征在于，所述空心罩（3)的直徑在3mm~6mm之 間。
【專利摘要】本實(shí)用新型涉及一種用于凍存固體培養(yǎng)絲狀真菌的空心罩及凍存方法，屬菌種保藏技術(shù)研究領(lǐng)域。本實(shí)用新型是在現(xiàn)有固體培養(yǎng)絲狀真菌的凍存方法基礎(chǔ)上的改進(jìn)。改進(jìn)點(diǎn)在于：采用直徑大小在3mm～6mm之間、罩面布滿棘刺的空心罩與待保藏絲狀真菌在固體培養(yǎng)基表面共培養(yǎng)，至絲狀真菌生長覆蓋空心罩的罩面，將覆蓋待保藏絲狀真菌的空心罩移至凍存液中完成菌種凍存。本實(shí)用新型的罩面布滿棘刺的空心罩按常規(guī)方法用樹脂材料制成。本實(shí)用新型的有益效果在于：有效避免了菌塊對固體培養(yǎng)基的攜帶和制備菌懸液可能帶來的污染，具有操作方便，成本低廉，且能夠滿足特殊培養(yǎng)要求的優(yōu)點(diǎn)，為絲狀真菌的保藏提供技術(shù)支持。
【IPC分類】C12M1/00, C12N1/14
【公開號】CN204918558
【申請?zhí)枴緾N201520531639
【發(fā)明人】米其利, 李雪梅, 桂永發(fā), 管瑩, 朱洲海, 夭建華, 樓牧夢, 高茜, 陳建華
【申請人】云南中煙工業(yè)有限責(zé)任公司
【公開日】2015年12月30日
【申請日】2015年7月21日